JPS6021000B2 - Antibiotic AM-3696A and its manufacturing method - Google Patents
Antibiotic AM-3696A and its manufacturing methodInfo
- Publication number
- JPS6021000B2 JPS6021000B2 JP54023056A JP2305679A JPS6021000B2 JP S6021000 B2 JPS6021000 B2 JP S6021000B2 JP 54023056 A JP54023056 A JP 54023056A JP 2305679 A JP2305679 A JP 2305679A JP S6021000 B2 JPS6021000 B2 JP S6021000B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibiotic
- water
- reaction
- acetone
- ethyl acetate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規抗生物質AM−369Mおよびその製法に
関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a novel antibiotic AM-369M and a method for producing the same.
本発明はある種の放線菌株が新規抗生物質を生産すると
いう知見に基いている。本発明の目的は新規抗生物質A
M−3696Aおよびその製法を提供することにある。
本発明によって提供される抗生物質AM‐369船と命
名)は白色粉末であり、塩酸塩の状態において次の性質
を有している。The present invention is based on the finding that certain strains of actinomycetes produce novel antibiotics. The purpose of the present invention is to develop a novel antibiotic A
An object of the present invention is to provide M-3696A and a method for producing the same.
The antibiotic provided by the present invention (named AM-369) is a white powder and has the following properties in its hydrochloride form:
01元素分析(%) C 43.3〜46.6 日 4.45〜5.09 N 4.74〜5.18 0 35.4〜43.4 CI 4.08〜8.80 ‘2’分子量 マススベクトル分析では測定できなかった。01 Elemental analysis (%) C 43.3-46.6 Sun 4.45-5.09 N 4.74-5.18 0 35.4~43.4 CI 4.08-8.80 ‘2’ molecular weight It could not be measured by mass vector analysis.
ァミコン社製分子ふるい膜〆ンブランフィルタ−、UM
−2(分子量1000以下の物質が通過しうる)ので通
過率が30%であり、また同UM‐05(分子量500
以下の物質が通過しうる)での通過率が1%であること
から、分子量は500〜100項範囲にあると推定され
る。また上記‘1)の元素分析値から計算するとAM‐
369Mの組成式として、C30〜34日37〜4卵3
018〜24CII〜2またはC20〜2が24〜2卵
2011〜1丈11〜2が与えられ、これらに対応する
分子量はそれぞれ810〜886または550〜595
である。(3’融 点
230〜280午0(230午0で褐色が始まり280
つ0で黒変する)‘4’
比旋光度
〔Q〕蜜一122〜一1260(平均一124o )(
CO.5水)‘5)Rf 値
AM−369餅の塩酸塩はキ‐ゼルゲルG(西独メルク
社製シリカゲル〜t7731)を用いて作った薄層(0
.3豚)を使用する薄層クロマトグラフィーにおいて次
のRf値を示す。Famicom molecular sieve membrane membrane filter, UM
-2 (substances with a molecular weight of 1000 or less can pass through), so the passage rate is 30%, and the same UM-05 (substances with a molecular weight of 500 or less can pass through).
The molecular weight is estimated to be in the range of 500 to 100 terms, since the passage rate is 1% for the following substances (the following substances can pass through). Also, when calculated from the elemental analysis values in '1) above, AM-
As the composition formula of 369M, C30-34 days 37-4 eggs 3
018-24 CII-2 or C20-2 is given as 24-2 eggs 2011-1 length 11-2, and the corresponding molecular weights are 810-886 or 550-595, respectively.
It is. (3' melting point 230-280 pm (begins to brown at 230 pm and 280 pm)
(turns black at 0) '4' Specific rotation [Q] 122 to 1,260 (average 124o) (
C.O. 5 water) '5) Rf value AM-369 Mochi hydrochloride was prepared using a thin layer (0
.. The following Rf values are shown in thin layer chromatography using 3 pigs).
展 開 溶 媒 Rf‘a} アセ
トン、メタノール、ギ酸、水(31:1:1)
0.85‘b’酢酸エチル、ピリジン、水
(4:3:2) 0.45‘c’
n‐ブタノール、酢酸、水(1:1:1)
0.65‘d’酢酸エチル、ピリジン、アセト
ン、水(5:5:1:3) 0.65
{61 紫外線吸収スペクトル(第1図の通り)極大吸
収(血) E珍水(FH4.4) 2
82〜284600.01規定塩酸 2
81〜283540.01規定カセィソーダ
300〜30281‘71赤外線吸収スペクトル(KB
す去)(第2図の通り)
{81 溶解性
水に溶解し、ジメチルスルフオキシド‘こ鶏溶であり、
メタノール等の低級アルコールやアセトン、酢酸エチル
、ベンゼン等の有機溶媒に溶解しない。Development solvent Rf'a} Acetone, methanol, formic acid, water (31:1:1)
0.85'b' Ethyl acetate, pyridine, water (4:3:2) 0.45'c'
n-butanol, acetic acid, water (1:1:1)
0.65'd'Ethyl acetate, pyridine, acetone, water (5:5:1:3) 0.65
{61 Ultraviolet absorption spectrum (as shown in Figure 1) Maximum absorption (blood) E Chinsui (FH4.4) 2
82-284600.01N hydrochloric acid 2
81-283540.01 Regulation caustic soda
300-30281'71 infrared absorption spectrum (KB
(as shown in Figure 2)
It does not dissolve in lower alcohols such as methanol or organic solvents such as acetone, ethyl acetate, and benzene.
‘91 呈色反応
ライドン・ミス反応、アニスアルデヒド‐硫酸反応およ
び過マンガン酸カリ‐ブロモフェ/ールブル−反応に陽
性であり、アニシジン反応、ニンヒドリン反応および坂
口反応に陰性である。'91 Color Reactions Positive for Lydon-Miss reaction, anisaldehyde-sulfuric acid reaction, and potassium permanganate-bromophe/Levreux reaction, negative for anisidine reaction, ninhydrin reaction, and Sakaguchi reaction.
00 塩基性物質である。00 It is a basic substance.
次にAM‐369船の生物学的性質を示す。Next, we will show the biological properties of the AM-369 vessel.
実施例において撮られたAM−369船(塩酸塩)を用
いた場合、ハートィンフュージョン裏夫培地(pH7.
0)での最小発育阻止濃度(MIC)は第1表の通りで
ある(測定は寒天稀釈法による)。第1表
試 験 菌 MI○(仏g/似)スタフイ
ロコツカス・アウレウス FDA209P12.5スタ
フイロコツカス・アウレウス FS1277(ペニシリ
ン耐性) 12.5バチルス・ズ
ブチリスPC1219 3.1バチル
ス・セレウス T 6.3サルシ
ナ・ルテア PCIIOOI O.
8ミコバクテリウム・スメグマチス ATCC6071
2.5/力ルデイア・アステロイデス KB−49
3.1クロストリジウム・パフリンゲンス ATCC3
62412.5エシエリヒア・コリ NIHU
〉100プロテウス・ブルガリス び0316
7 >100サルモネラ・テイフイムリウム K
B−20 >100シゲラ・ゾンネイ E33
>100シユードモナス・エルギノサ P
‐3 >100上記の通り抗生物質AM‐3696
Aはグラム腸性菌に対して比較的強い抗菌活性を示し、
ペニシリン耐性菌や嫌気性菌に対しても有効である。When using the AM-369 vessel (hydrochloride) taken in the example, Hartin Fusion Urao medium (pH 7.
The minimum inhibitory concentration (MIC) at 0) is shown in Table 1 (measured by the agar dilution method). Table 1 Test Bacteria MI○ (French g/similar) Staphylococcus aureus FDA209P12.5 Staphylococcus aureus FS1277 (Penicillin resistant) 12.5 Bacillus subtilis PC1219 3.1 Bacillus cereus T 6. 3 Sarcina lutea PCIIOOI O.
8 Mycobacterium smegmatis ATCC6071
2.5/Power Ludeia Asteroides KB-49
3.1 Clostridium parfringens ATCC3
62412.5 Esierhia coli NIHU
〉100 Proteus vulgaris and 0316
7 >100 Salmonella Teifuimurium K
B-20 >100 Shigella zonnei E33
>100 Pseudomonas aeruginosa P
-3 >100 Antibiotic AM-3696 as above
A shows relatively strong antibacterial activity against Gram enterobacteria,
It is also effective against penicillin-resistant bacteria and anaerobic bacteria.
本抗生物質をマウスに腹腔内投与した場合のLD則‘ま
300のo/X9以上である。また本抗生物質は細胞壁
合成阻害作用を有している。従って抗生物質AM‐36
9鮒はヒトおよび動物に対する抗菌剤および治療剤あら
ぴに試薬として有用であることが期待される。上記の理
化学的性質および生物学的性質を既知抗生物質の性質と
比較した結果、抗生物質AM‐369紬は新規物質であ
るとがわかった。When this antibiotic was intraperitoneally administered to mice, the LD rule was 300 o/X or more. This antibiotic also has a cell wall synthesis inhibiting effect. Therefore antibiotic AM-36
It is expected that carp will be useful as a reagent for antibacterial and therapeutic agents for humans and animals. As a result of comparing the above-mentioned physicochemical properties and biological properties with those of known antibiotics, it was found that the antibiotic AM-369 Tsumugi is a new substance.
すなわち、塩基性、水溶性で28仇伽付近に弱い吸収極
大を有しかつグラム陽性菌に対して有効な、類似の抗生
物質として、たとえば、エンジュラシジンA,B,Cお
よびD(特公昭45一171斑号公報)、バンコマィシ
ン(特公昭33一8450号公報)、バンコマィシンン
に類似するA−4696(持関昭47一20397号)
、同じくA‐477(特関昭49‐71196号)、同
じくアボパルシン(特開昭50一135班号)、AM−
374(持開昭48−24752号公報)、トリキュラ
ミン(袴公昭45一9234号公報)あるいはアミ/グ
リコシド類があげられる。しかしエンジュラシジンA,
B,CおよびDは、いずれも窒素含量が14%以上(A
M‐369船は4.97%)であり、またアルカリ条件
下での紫外線吸収スペクトルも250〜26瓜m付近(
AM−369Mは30瓜m付近)に吸収極大を有してい
るので、AM‐3696Aと異なる。バンコマィシンは
両性物質で、高分子(1800)である点においてAM
−3696Aと異なる。That is, similar antibiotics that are basic, water-soluble, have a weak absorption maximum around 28°C, and are effective against Gram-positive bacteria include enduracidins A, B, C, and D (Tokuko Showa). 45-171 Spot No. Publication), Vancomycin (Special Publication No. 33-18450), A-4696 (Mochiseki No. 47-20397) similar to Vancomycin
, also A-477 (Special Publication No. 49-71196), also Avoparcin (Japanese Patent Publication No. 50-135), AM-
Examples include 374 (Jikai No. 48-24752), triculamine (Hakama Kosho No. 45-9234), and amide/glycosides. However, enduracidin A,
B, C and D all have a nitrogen content of 14% or more (A
M-369 ship is 4.97%), and the ultraviolet absorption spectrum under alkaline conditions is around 250 to 26 m (4.97%).
AM-369M is different from AM-3696A because it has an absorption maximum at around 30 meters. Vancomycin is an amphoteric substance and is a polymer (1800).
-Different from 3696A.
A−4696の元素分析値(C・・・51.$%、H…
5.77%、N…5.46%)はAM‐369Mのもの
と異なる。A‐4696の紫外線吸収スペクトルは酸性
条件下で27節mに極大吸収を示し(AM‐369船は
2脇皿)、赤外線吸収スペクトルにおける1300、1
20仇〆‐1付近の吸収極大はAM‐369船に観測さ
れるが、A−4696には観測されない。A−447の
元素分析値(C…斑.06%、日・・・618%、N…
579%)はAM−369Mのものと異なる。アボパル
シンの元素分析値(C・・・52.36%、日・・・5
.77%、N…5.70%)および分子量(滋00でA
M‐369船は1000以下である)はAM−369M
のものと異なる。AM‐374の元素分析値(C・・・
51.68%、日・・・5.85%、N…7.02%)
および分子量〔(1500±300)×N〕はAM−3
696Aのものと異なる。トリキュラミンとは窒素含量
(18.42%)および分子量(2130)がAM−3
69船のものと異なる。グラム腸性菌にだけ有効なアミ
ノグリコシド類は窒素含基(10%以上)およびライド
ン・スミス反応陰性である点においてもAM−369M
と異なる。以上の通り、抗生物質AM‐369Mは既知
抗生物質と明らかに区別されるので、新規である。本発
明による抗生物質AM‐369船はシュードノカルディ
ア属に属しかつ抗生物質AM‐369M生産能力を有す
る微生物を培地に好気的に培養し、菌体内外に抗生物質
AM−369Mを箸積させ、これを回収することによっ
て製造される。実施例に記載された菌株は、本発明者が
見出した放射線菌株で、山形県西村山郡の土壌から分離
選別したもので、その菌学的性状は次の通りである。1
〕 形態学的性質
栄養菌糸は合成培地および天然培地においてともによく
発達し、そのほとんどが培地中に侵透して生育する。Elemental analysis value of A-4696 (C...51.$%, H...
5.77%, N...5.46%) is different from that of AM-369M. The ultraviolet absorption spectrum of A-4696 shows a maximum absorption at 27 m under acidic conditions (AM-369 ship has 2 side dishes), and the infrared absorption spectrum shows maximum absorption at 27 m.
The absorption maximum near 20-1 is observed on the AM-369 ship, but not on the A-4696. Elemental analysis values of A-447 (C... Spot .06%, Day... 618%, N...
579%) is different from that of AM-369M. Elemental analysis value of avoparsin (C...52.36%, Day...5
.. 77%, N...5.70%) and molecular weight (A at
M-369 ships are less than 1000) are AM-369M
different from that of Elemental analysis value of AM-374 (C...
51.68%, Japanese...5.85%, N...7.02%)
and molecular weight [(1500±300)×N] is AM-3
Different from 696A. Triculamine has nitrogen content (18.42%) and molecular weight (2130) of AM-3.
It is different from that of the 69th ship. Aminoglycosides that are effective only against Gram enterobacteria include AM-369M in terms of nitrogen-containing groups (more than 10%) and negative Lydon-Smith reaction.
different from. As mentioned above, the antibiotic AM-369M is novel because it is clearly distinguished from known antibiotics. The antibiotic AM-369 vessel according to the present invention cultivates microorganisms belonging to the genus Pseudonocardia and capable of producing the antibiotic AM-369M in a medium aerobically, and deposits the antibiotic AM-369M inside and outside the bacterial cells. , produced by collecting this. The bacterial strain described in the Examples is a radiobacterial strain discovered by the present inventor and was isolated and selected from soil in Nishimurayama District, Yamagata Prefecture, and its mycological properties are as follows. 1
] Morphological properties Vegetative hyphae develop well in both synthetic and natural media, and most of them grow by penetrating the media.
この形態はジグザグ状である。気菌糸はグルコース・ベ
プトン葵夫培地等の合成培地や天然塔地に豊富に着生し
、その色調は白色ないし灰白色を基調とするが、一部の
合成培地では灰青色を呈する。顕微で観察すると、1び
固以上の長い胞子鎖が不規則に分岐し、その先端は直線
状である。電子顕微鏡下では、その胞子は1.1〜3.
7×0.4rm程度の大小の円柱状である。またいわゆ
るブラストポアを形成する過程で見られるアクロベタル
バッディングが認められる。胞子の表面は平滑である。
菌核、胞子菱および遊走子は見出されない。〔口〕 各
種塔地での性状(第2表)
イービー・シヤーリングら(lnt・J.Syst.舷
cteriolへ 16巻、313頁、1966年)の
方法に従い、それに公知の培地および実験方法を併せて
使用した。This form is zigzag-like. Aerial mycelium grows abundantly on synthetic media such as glucose-beptone Aio medium and on natural turquoise, and its color is primarily white or grayish-white, but on some synthetic media it takes on a grayish-blue color. When observed under a microscope, the long spore chains (more than one spore size) are irregularly branched, and their tips are straight. Under an electron microscope, the spores are 1.1 to 3.
It has a cylindrical shape with a size of about 7×0.4rm. Also, acrobetal budding, which is seen in the process of forming so-called blastopores, is observed. The surface of the spore is smooth.
No sclerotia, sporophytes and zoospores are found. [Mouth] Properties of various tower sites (Table 2) According to the method of Evie Shearing et al. (To lnt. I used it.
色調は標準色表としてカラー1ハーモニー.マニュアル
第4版(コンテナ一・コーポレーション・オブ・アメリ
カ・シカゴ、195粋王)を用いて決定し、色票名とと
もに括弧内にそのコードを併せて記した。以下は特記し
ない限り、270、2週間目の各塔地上における観察結
果である。第 2 表ISP:インターナショナル・ス
トレブトミセス・プロジェクト選定の培地〔m〕 生物
学的性質
‘11 メラニン色素の形成
【ィ} チロシン寒天 陰性仰 べ
プトン・イースト鉄寒天 陰性Nグルコース・ベ
プトン・ゼラチン塔地・穿刺(270)
陰性A トリプシン・イースト液 陰性{2
1 チロシナーゼ反応 陰性{31
硫化水素生産館 陰性【4’硝酸銀
の還元(グルコース・硝酸塩渚地)
陽性■ スターチの加水分解
腸性{6}ゼラチンの液化(グルコース・ベプトン・ゼ
ラチン培地) 陽性‘71脱脂乳
の凝固(270) 陽性【81 脱脂乳べ
プトン化(270) 腸性【91 セルロース
の分解 陰性00 生育温度範囲(℃)
20〜36(11)炭素源の利用性(プリ
ドハム・ゴットリープ寒天塔地)よく利用する:
D‐グルコース,L‐アラピノース,D−マンニトール
、シユクロース,i‐イノシトール,ラフイノース、D
−キシロース,メリビオース,サリシン,フルクトース
やや利用する:
L−ラムノース
〔W〕 細胞の化学分析
細胞壁の組成:
ジアミノピメリン酸はメソ型でグリシンを有せず、アラ
ビノースを有する。The color tone is Color 1 Harmony as a standard color table. The color was determined using the 4th edition of the manual (Container 1, Corporation of America, Chicago, 195 Ikioh), and the code was written in parentheses along with the color chart name. Unless otherwise specified, the following are the observation results on each tower's ground during the second week of 270. Table 2 ISP: Media selected by the International Strebtomyces Project [m] Biological properties '11 Melanin pigment formation Tyrosine agar Negative Beptone Yeast Iron agar Negative N-glucose Beptone Gelatin・Puncture (270)
Negative A Trypsin/yeast solution Negative {2
1 Tyrosinase reaction negative {31
Hydrogen sulfide production hall Negative [4' Reduction of silver nitrate (glucose/nitrate beach)
Positive■ Hydrolysis of starch
Enteric {6} Liquefaction of gelatin (glucose-veptone-gelatin medium) Positive '71 Coagulation of skim milk (270) Positive [81 Beptonization of skim milk (270) Enteric [91 Decomposition of cellulose Negative 00 Growth temperature range ( ℃)
20-36 (11) Utilization of carbon sources (Pridham-Gottlieb agar tower) Commonly used: D-glucose, L-arapinose, D-mannitol, sucrose, i-inositol, raffinose, D
-Xylose, melibiose, salicin, fructose Some use: L-rhamnose [W] Chemical analysis of cells Composition of cell wall: Diaminopimelic acid is in the meso form, does not have glycine, and has arabinose.
ガラクトースを有する。Contains galactose.
全菌体の糖組成:
アラビノース,ガラクトース,リポース,グルコースを
有する。Sugar composition of whole bacterial cell: Contains arabinose, galactose, lipose, and glucose.
従って、レシェバリェ(Inter.J.System
.Bact.、2悌塗、435〜443頁、197位王
)の分類に従って本菌の細胞壁組成(Cellwall
type)はN型で、全菌体の糠組成(Wholece
llsugdrpatern)はA型となる。Therefore, Rechevalle (Inter.J.System
.. Bact. The cell wall composition of this bacterium (Cellwall
type) is N type, and the bran composition of the whole bacterial body (Wholece
llsugdrpattern) becomes type A.
本菌は細胞壁組成と全菌体の糖組成がNA型であること
から、ミコバクテリウム属、ノカルディア属、シュード
ノカルデイア属、サーモモノスポーラ属、ミクロポリス
ポーラ属のいずれかに属するものと考えられる。This bacterium belongs to the genus Mycobacterium, Nocardia, Pseudonocardia, Thermomonospora, or Micropolyspora, as the cell wall composition and sugar composition of the entire bacterial body are NA type. it is conceivable that.
しかしながら、その形態において、栄養菌糸がジグザグ
状を呈し、気菌糸はlq固以上の長い胞子を有し、その
胞子はブラストポアを形成することも特徴とするから、
シュードノカルディア属(Arch.Microbio
lへ 2虎等、373〜414頁、1957年)に属す
ると考えるのが合理的である。さて、従来シュードノカ
ルディア属に属する函種としては、シユードノカルデイ
ア・スピノザ(Inter.J.System.母ct
.、21巻、29〜43頁、1971年)、シュードノ
カルデイア・サーモフイ−ラ(Inter.J.Sys
tem.舷ct.、21巻、29〜43頁、1971年
)、シュードノカルディア・フアスティデイオーサ(米
国特許明細書4031206号、1977年)の3種が
知られている。しかし本菌株の前述の性質を、これらの
公知菌種に関する文献あるいは標準菌株と比較すると、
シユードノカルディア・スピノザは、その生育温度範囲
が20〜30qo(本菌株は20〜3げ0)で、胞子の
大きさが2.5〜4.5×0.4〜1.0一m(本菌株
は1.1〜37×0.4仏m)胞子の表面がとげ状(本
菌株は平滑)である点から本菌株と区別され、次にシュ
ードノカルディア・サーモフィーラは、その生育温度範
囲は28〜60℃であり、胞子の大きさは2.5×1.
5〜1.8〃mで、オートミール寒天塔地には生育しな
い点において、本菌株と区別され、またシュードノカル
ディア・フアスティデイオーサは、その胞子の大きさは
9〜10×1.0山mであり、イースト麦芽寒天塔地、
スターチ無機塩塔地、栄養寒天培地等では盛り上がって
生育し、気菌糸は着生しないか、または着生しても非常
に乏しく白色である点において、本菌株と区別される。
このように本菌株は、公知のシユードノカルディア属の
3菌種と区別される新しい菌種に属すると認められるの
で、シュードノカルディア・アズレアと命名された。た
だし本菌株は、シユードノカルデイア・エスピ−AM‐
3696の名称で工業技術院微生物技術研究所に寄託(
徴工研菌第4738号)されている。上記菌株の変異株
も本発明の方法に使用することができる。However, in its morphology, the vegetative hyphae have a zigzag shape, the aerial hyphae have spores longer than 1q, and the spores are also characterized by the formation of blastopores.
Pseudonocardia (Arch. Microbio
It is reasonable to think that it belongs to 2 Tora et al., pp. 373-414, 1957). Now, the conventional box species belonging to the genus Pseudonocardia is Pseudonocardia spinoza (Inter.J.System.mother ct
.. , vol. 21, pp. 29-43, 1971), Pseudonochaldeia thermophila (Inter. J. Sys
tem. Gender ct. 21, pp. 29-43, 1971) and Pseudonocardia fastidiosa (US Pat. No. 4,031,206, 1977). However, when comparing the above-mentioned properties of this strain with literature on these known bacterial species or standard strains,
The growth temperature range of Pseudonocardia spinoza is 20 to 30 qo (this strain is 20 to 3 qo), and the spore size is 2.5 to 4.5 x 0.4 to 1.01 m. (This strain is 1.1 to 37 x 0.4 French m) It is distinguished from this strain by the fact that the surface of the spores is thorn-like (this strain is smooth). The temperature range is 28-60°C, and the spore size is 2.5 x 1.
Pseudonocardia fastidiosa is distinguished from this strain in that it does not grow on oatmeal agar and has a spore size of 9 to 10 x 1.0 m. It is mountain m, yeast malt agar tower place,
It is distinguished from this strain in that it grows in bulges on starch inorganic salt substrates, nutrient agar media, etc., and aerial mycelium does not attach, or even if it attaches, it is very sparse and white in color.
This strain was thus recognized to belong to a new bacterial species that is distinct from the three known species of the genus Pseudonocardia, and was therefore named Pseudonocardia azurea. However, this strain is Syudonochaldeia sp.
Deposited with the Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology under the name 3696 (
Recruitment Research Institute No. 4738). Mutant strains of the above-mentioned strains can also be used in the method of the invention.
その他本抗生物質生産能力を有するシュードノカルディ
ア属に属する菌株も使用することができる。培地として
は、炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄
養物を程よく含有する合成培地または天然塔地を使用す
ることができる。Other strains belonging to the genus Pseudonocardia that have the ability to produce the present antibiotic can also be used. As the medium, a synthetic medium or a natural medium containing an appropriate amount of carbon source, nitrogen source, inorganic substances, and other nutrients as necessary can be used.
培地に使用される炭素源、窒素源は使用菌株の利用可能
なものならいずれの種類でも良い。すなわち炭素源とし
ては、たとえばグルコース、グリセロール、フラクトー
ス、マルトース、マンニツト、キシロース、ガラクトー
ス、ラクトース、リボース、澱粉またはその加水分解物
等の種々の炭水化物が使用できる。その濃度は通常、培
地に対して0.1%〜5%(グルコース換算)が好まし
い。またグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種
有機酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種ア
ミノ酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコー
ル類やノルマルパラフィン等の各種の非芳香族系炭化水
素、あるいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用
可能である。窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム等の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニ
ウム塩類、尿素、ベプトン、NZ−アミン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母エキス、コーンスチープリカ−、
カゼイン加水分解物、フィッシュミールあるいはその消
化物、大豆粉あるいはその消化物、脱脂大豆あるいはそ
の消化物、蟻加水分解物等の含窒素有機物質、さらには
グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ酸が
使用可能である。無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグ
ネシウム、食塩等、さらに微童の重金属塩が使用される
。The carbon source and nitrogen source used in the culture medium may be any type that can be used by the strain used. That is, various carbohydrates such as glucose, glycerol, fructose, maltose, mannite, xylose, galactose, lactose, ribose, starch or its hydrolyzate can be used as the carbon source. The concentration is usually preferably 0.1% to 5% (in terms of glucose) based on the medium. In addition, various organic acids such as gluconic acid, pyruvic acid, lactic acid, and acetic acid, various amino acids such as glycine, glutamic acid, and alanine, alcohols such as methanol and ethanol, and various non-aromatic hydrocarbons such as normal paraffin, Various vegetable or animal fats and oils can also be used. Examples of nitrogen sources include ammonium salts of various inorganic or organic acids such as ammonia, ammonium chloride, ammonium phosphate, ammonium sulfate, and ammonium nitrate, urea, beptone, NZ-amine, meat extract,
Yeast extract, dried yeast extract, corn steep liquor,
Nitrogen-containing organic substances such as casein hydrolyzate, fish meal or its digested product, soybean flour or its digested product, defatted soybean or its digested product, ant hydrolyzate, and various amino acids such as glycine, glutamic acid, and alanine are used. It is possible. As the inorganic substance, various phosphates, magnesium sulfate, common salt, etc., and also some heavy metal salts are used.
また栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は天然物を含む培地を使用する
場合にはとくに添加を必要としない場合がある。Furthermore, when using a mutant strain that exhibits auxotrophy, it is of course necessary to add substances to the medium that satisfy its nutritional needs, but this kind of nutrients should not be added especially when using a medium containing natural substances. It may not be necessary.
醗酵は振遼培養、または通気蝿梓深部培養等の好気的条
件下で行なう。Fermentation is carried out under aerobic conditions such as Zhen Liao culture or aerated deep culture.
培養温度は通常、20〜4000である。培養期間は通
常1〜8日で、菌体内外に著童の抗生物質AM−369
船が生成蓄積する。培養終了後に培養物より抗生物質A
M‐369船をたとえば次の方法で採取する。培養物を
遠心分離により炉液と沈殿物とに分離する。炉液からは
活性炭、多孔性合成樹脂、イオン交換樹脂等に吸着させ
、溶出させることにより抽出する。沈殿物からは含水ア
セトンや含水メタノール等の有機溶媒で抽出する。抽出
物を適宜、濃縮乾圃することによりAM−369Mの粗
粉末を得る。粗粉末はさらに、水溶性物質の精製におい
て通常用いられる公知の方法、たとえばイオン交モ敷樹
脂、シリカゲル等の吸着剤、あるいはゲル炉過剤などに
よる各種クロマトグラフィー法、濃縮法、塩析法などを
適宜組み合わせることにより精製される。その1例とし
て、カーボキシメチルセルロース(日十型)を用い、溶
出溶液としてギ酸アンモニウム溶液を用いる直線濃度勾
配溶世法によるカラムクロマトグラフィー法があげられ
る。これらの精製方法で得られる活性画分を濃縮乾岡す
ることにより抗生物質AM−369Mの粉末を得ること
ができる。本発明において、AM‐3696の検出定量
は、AM‐369麓に感受性を示す微生物(例、スタフ
イロコツカス・アウレウスFDA20解、バチルス・ス
プチIJスPC1219またはサルシナ・ルテアPCI
IOOI)を被険菌として用いる生物学的方法または呈
色反応を利用する化学的方法いよって行なったが、この
種の方法は周知である。The culture temperature is usually 20-4000C. The culture period is usually 1 to 8 days, and the antibiotic AM-369 is present inside and outside the bacterial cells.
Ships generate and accumulate. Antibiotic A from the culture after completion of culture
For example, the M-369 ship is collected using the following method. The culture is separated into fermentation liquid and precipitate by centrifugation. It is extracted from the furnace liquid by adsorbing it onto activated carbon, porous synthetic resin, ion exchange resin, etc. and eluting it. The precipitate is extracted with an organic solvent such as aqueous acetone or aqueous methanol. A crude powder of AM-369M is obtained by appropriately concentrating and drying the extract. The coarse powder can be further processed by known methods commonly used in the purification of water-soluble substances, such as various chromatography methods using adsorbents such as ion exchange resin and silica gel, or gel filters, concentration methods, salting-out methods, etc. It is purified by appropriately combining. One example is a column chromatography method using carboxymethyl cellulose (Nichiju type) and a linear concentration gradient melting method using an ammonium formate solution as an elution solution. Powder of antibiotic AM-369M can be obtained by concentrating and drying the active fraction obtained by these purification methods. In the present invention, the detection and quantification of AM-3696 is performed using microorganisms that are susceptible to AM-369 (e.g., Staphylococcus aureus FDA20, Bacillus spusi IJS PC1219, or Sarcina lutea PCI).
A biological method using IOOI) as a target bacterium or a chemical method using a color reaction were used, and these types of methods are well known.
実施例
シュード/カルディア・Sp.AM‐3696株(徴工
研菌第47斑号:NRRLI1412)の斜面培養から
1白金耳を500の‘の種塔地(グリセリン2.0%、
大豆粉2.0%、塩0.3%、pH7.0)を入れた2
そ客の三角フラスコに接種し、270で2日間振盤培養
して種培養を得た。Example Pseudo/Cardia Sp. One platinum loop from a slant culture of AM-3696 strain (NRRLI1412) was inoculated with 500' of seed stock (glycerin 2.0%,
2 containing 2.0% soy flour, 0.3% salt, pH 7.0)
The customer's Erlenmeyer flask was inoculated and cultured on a shaker at 270℃ for 2 days to obtain a seed culture.
この種培養を100その醗酵塔地〔デキスリン(2.0
%)、大豆粉(1.0%)、酵母エキス(0.3%)、
KH2P04(0.1%)、K2HP04(0.1%)
、M鷹S04・7は0(0.1%);pH7.0〕を入
れた200そ客タンクファーメンターに2%宛接種し、
270で4自問通気縄柊培養(通気量50夕/min、
鍵梓20仇.p.m.)を行なった。培養液を遠心分離
して菌体その他の沈澱物を除去した上清液180そに、
あらかじめ脱気した活性炭90雌を加えて30分間燭拝
した。その後活性炭を炉別し、水洗し、0.01規定硫
酸を含む60%アセトンで溶出し、溶出液の活性画分を
合わせて濃縮した。濃縮液を水酸化バリウムで中和し、
生成した沈殿物を炉耳Uした。炉液を弱酸性陽イオン交
換樹脂アンバーライト瓜C−50(日十型)のカラム(
3そ)に通落し、カラムを水洗し、0.1規定塩酸で溶
出し、活性画分を合わせて苛性ソーダで中和した。中和
した溶液を活性炭のカラム(1800の‘)に通塔し、
水洗後0.01規定塩酸を含む60%アセトンで溶出し
て活性画分を合わせて濃縮した。濃縮液に弱塩基性陰イ
オン交換樹脂アンバーライトIR‐45(OH‐型)を
加えて中和し、樹脂を淀別後、炉液を凍結乾燥してAM
−369針の粗粉末2雌を得た。この粗粉末1礎を10
0肌【の水に溶解し、活性炭を充填したカラム(300
の‘)に通塔し、カラムを水洗後10%ピリジン溶液6
00の【、0.1規定塩酸600の‘、0.01規定塩
酸200私を順次カラムに通塔し、いずれの場合もカラ
ムの通過液は捨てた。This seed culture was added to the fermentation tower site [Dexrin (2.0
%), soy flour (1.0%), yeast extract (0.3%),
KH2P04 (0.1%), K2HP04 (0.1%)
, Mtaka S04.7 is 0 (0.1%); pH 7.0] was inoculated to 2% in a 200 tank fermenter.
270 and 4 self-aerated rope culture (aeration rate 50 evenings/min,
Key Azusa 20 enemies. p. m. ) was carried out. 180% supernatant liquid obtained by centrifuging the culture solution to remove bacterial bodies and other precipitates;
90 pieces of activated carbon, which had been degassed in advance, was added and lit for 30 minutes. Thereafter, the activated carbon was separated in a furnace, washed with water, and eluted with 60% acetone containing 0.01N sulfuric acid, and the active fractions of the eluate were combined and concentrated. Neutralize the concentrate with barium hydroxide,
The generated precipitate was poured into a furnace. The furnace solution was passed through a column (
The column was washed with water, eluted with 0.1N hydrochloric acid, and the active fractions were combined and neutralized with caustic soda. Pass the neutralized solution through an activated carbon column (1800'),
After washing with water, it was eluted with 60% acetone containing 0.01N hydrochloric acid, and the active fractions were combined and concentrated. Weakly basic anion exchange resin Amberlite IR-45 (OH-type) is added to the concentrated solution to neutralize it, and after the resin is filtered out, the furnace solution is freeze-dried to produce AM.
- Two females of coarse powder with 369 needles were obtained. 10 pieces of this coarse powder
Column (300ml) dissolved in water and packed with activated carbon
After washing the column with water, add 10% pyridine solution 6
00, 0.1N hydrochloric acid, 600, and 0.01N hydrochloric acid, 200, were sequentially passed through the column, and in each case, the liquid that passed through the column was discarded.
次に0.01規定塩酸を含む50%アセトン溶液で溶出
し、活性画分を合わせて濃縮し、アンバーライト瓜‐4
5(OH‐型)を添加して中和後、樹脂を炉別した。炉
液にセルロース粉末アビセル(商品名)傘を加えて濃綾
乾固した。ァピセル(40g)をn‐ブタノールに懸濁
してカラムに充填し、この上部に上記の鶴のアビセルを
n‐ブタノールに懸濁して負荷した。このカラム(11
0泌)からn‐ブタノー、酢酸、水(5:1:2)から
なる溶出液で溶出し、画分(各1.88cc)のうち4
1〜60番を集めて濃縮し、濃縮液を苛性ソーダで中和
した。中和後、活性炭カラム(20の‘)に通塔し、水
洗後0.01規定塩酸を含む50%アセトン溶液で溶出
し、活性画分を集めて濃縮し、アンバーライトm−45
(OH−型)で中和後、樹脂を炉別し、炉液を凍結乾燥
してAM−3696Aの粉末(塩酸塩)150倣を得た
。これを水5Mに熔解させ、0.5規定苛性ソーダでP
H7.5に調節し、弱酸性陽イオン交換セルロースカー
ボキシメチルセルロース(ワットマン社製)(日十型)
のカラム(180の【)に通塔し、カラムを水洗後、水
(750の【)および0.5モルギ酸アンモニウム(7
50の‘)からなる溶出溶液で直線濃度勾配溶出法によ
り溶出し、画分(各7の‘)の147〜17の蚤を集め
た。集めた活性画分を活性炭カラム(10の‘)に通※
し、水洗後、0.01規定塩酸を含む50%アセトン溶
液で溶出し、活性画分を集めて濃縮し、アンバーライト
IR‐45(OH‐型)で中和後、樹脂を炉別し、炉液
を凍結乾燥してAM‐3696Aの粉末(塩酸塩)41
のoを得た。このものの性質は本明細書第4頁1行目か
ら第7頁1行目までに記載した通りであった。Next, it was eluted with a 50% acetone solution containing 0.01N hydrochloric acid, and the active fractions were combined and concentrated.
After neutralization by adding 5 (OH-type), the resin was separated by furnace. Cellulose powder Avicel (trade name) was added to the furnace solution, and the mixture was dried to dryness. Apicel (40 g) was suspended in n-butanol and packed into a column, and the above-mentioned Tsuru Avicel suspended in n-butanol was loaded onto the top of the column. This column (11
4 of the fractions (1.88 cc each) were eluted with an eluent consisting of n-butano, acetic acid, and water (5:1:2).
Nos. 1 to 60 were collected and concentrated, and the concentrated solution was neutralized with caustic soda. After neutralization, the column was passed through an activated carbon column (20'), washed with water, eluted with a 50% acetone solution containing 0.01 N hydrochloric acid, and the active fraction was collected and concentrated.
After neutralization with (OH-type), the resin was separated in a furnace, and the furnace liquid was freeze-dried to obtain 150 samples of AM-3696A powder (hydrochloride). Dissolve this in 5M water and phosphorize with 0.5N caustic soda.
Adjusted to H7.5, weakly acidic cation-exchanged cellulose carboxymethylcellulose (manufactured by Whatman) (Nichiju type)
After washing the column with water, water (750 [)] and 0.5 molar ammonium formate (7
It was eluted by linear gradient elution with an elution solution consisting of 50') and 147 to 17 fleas of each fraction (7') were collected. Pass the collected active fraction through an activated carbon column (10')*
After washing with water, it was eluted with a 50% acetone solution containing 0.01N hydrochloric acid, the active fraction was collected and concentrated, and after neutralization with Amberlite IR-45 (OH-type), the resin was separated in a furnace. Freeze-dry the furnace liquid to obtain AM-3696A powder (hydrochloride) 41
I got the o. The properties of this product were as described from page 4, line 1 to page 7, line 1 of this specification.
第1図は抗生物質AM‐369秘の精製粉末(塩酸塩)
の紫外線吸収スペクトルを示し、第2図は赤外線吸収ス
ペクトル(KBす去)を示す。
鰭1四多2図Figure 1 shows the antibiotic AM-369 secret purified powder (hydrochloride)
Figure 2 shows the infrared absorption spectrum (KB subtracted). Fins 1, 2, 2
Claims (1)
学的性質を有することを特徴とする抗生物質AM−36
96A。 (イ) 元素分析 C 43.5% H 4.46% N 4.97% (ロ) 融点 230〜280℃ (ハ) 比旋光度 〔α〕^2^8_D−122〜−1
26°(平均−124°)(c0.5、水) (ニ) 紫外線吸収スペクトル 第1図の通り (ホ) 赤外線吸収スペクトル 第2図の通り (ヘ) Rf値 西独メルク社製シリカゲルG(Art7731)を用
て作成した薄層(0.3mm)を用いたクロマトグラフ
イーにおいて次のRf値を示す。 展開溶媒 Rf アセトン・メタノール・ギ酸・水 (3:1:1:1) 0.85 酢酸エチル・ピリジン・水 (4:3:2) 0.45 n−ブタノール・酢酸・水 (1:1:1) 0.65 酢酸エチル・ピリジン・アセトン・ 水(5:5:1:3) 0.65 (ト) 溶剤に対する溶解性 水に溶解し、ジメチルスルフオキシドに難溶であり、
メタノール等の低級アルコールやアセトン、酢酸エチル
、ベンゼン等の有機溶媒に溶解しない。 (チ) 呈色反応 ライドン・スミス反応、アニスアルデヒド−硫酸反応
および過マンガン酸カリ−ブロモフエノールブル−反応
に陽性であり、アニシジン反応、ニンヒドリン反応およ
び坂口反応に陰性である。 (リ) その他 塩基性物質である。 2 シユードノカルデイア属に属しかつ抗生物質AM−
3696A生産能力を有する微生物を培地に好気的に培
養することによつて、抗生物質AM−3696Aを菌体
内外に著積させ、これを回収することを特徴とする抗生
物質AM−3696Aの製造方法。[Claims] 1. Antibiotic AM-36, which is a white powder in the form of hydrochloride and is characterized by having the following physical and chemical properties:
96A. (a) Elemental analysis C 43.5% H 4.46% N 4.97% (b) Melting point 230-280°C (c) Specific optical rotation [α]^2^8_D-122--1
26° (average -124°) (c0.5, water) (d) Ultraviolet absorption spectrum As shown in Figure 1 (E) Infrared absorption spectrum As shown in Figure 2 (F) Rf value Silica gel G manufactured by Merck & Co., West Germany (Art 7731) ) shows the following Rf values in chromatography using a thin layer (0.3 mm) prepared using: Developing solvent Rf Acetone/methanol/formic acid/water (3:1:1:1) 0.85 Ethyl acetate/pyridine/water (4:3:2) 0.45 n-butanol/acetic acid/water (1:1: 1) 0.65 Ethyl acetate/pyridine/acetone/water (5:5:1:3) 0.65 (g) Solubility in solvents Soluble in water, sparingly soluble in dimethyl sulfoxide,
It does not dissolve in lower alcohols such as methanol or organic solvents such as acetone, ethyl acetate, and benzene. (H) Color reaction Positive for Lydon-Smith reaction, anisaldehyde-sulfuric acid reaction, and potassium permanganate-bromophenol blue reaction, and negative for anisidine reaction, ninhydrin reaction, and Sakaguchi reaction. (li) Others It is a basic substance. 2. Belongs to the genus Pseudonochaldeia and is an antibiotic AM-
Production of antibiotic AM-3696A, which comprises aerobically cultivating a microorganism capable of producing 3696A in a medium, thereby accumulating the antibiotic AM-3696A inside and outside the bacterial body, and recovering the accumulated antibiotic AM-3696A. Method.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP54023056A JPS6021000B2 (en) | 1979-02-28 | 1979-02-28 | Antibiotic AM-3696A and its manufacturing method |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP54023056A JPS6021000B2 (en) | 1979-02-28 | 1979-02-28 | Antibiotic AM-3696A and its manufacturing method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS55115894A JPS55115894A (en) | 1980-09-06 |
JPS6021000B2 true JPS6021000B2 (en) | 1985-05-24 |
Family
ID=12099776
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP54023056A Expired JPS6021000B2 (en) | 1979-02-28 | 1979-02-28 | Antibiotic AM-3696A and its manufacturing method |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6021000B2 (en) |
-
1979
- 1979-02-28 JP JP54023056A patent/JPS6021000B2/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS55115894A (en) | 1980-09-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS61268187A (en) | Novel antibiotic substance sk-1071 and production thereof | |
US4495358A (en) | Antibiotic pyrrolomycin E | |
US3940479A (en) | Novel antibiotic BN-109 substance, its production and use | |
US4014860A (en) | Plasminostreptin (enzyme inhibitor) and method for producing it from streptomyces | |
FR2517697A1 (en) | NOVEL ANTIBIOTIC AMINOGLYCOSIDES CALLED SACCHAROCINES AND THEIR PRODUCTION | |
JPS6021000B2 (en) | Antibiotic AM-3696A and its manufacturing method | |
JPS58152496A (en) | Production of valienamine and validamine | |
JPS6010720B2 (en) | Production method of antibiotic C-15003 P-4 | |
JPH022589B2 (en) | ||
JPH0669380B2 (en) | Method for producing valienamine and validamine | |
US4027014A (en) | Antibiotic BN-130 substances and the production thereof | |
US4169889A (en) | Antibiotic bn-200 substance and process for production thereof | |
JP2592468B2 (en) | Benanomycins A and B, novel antibiotics and their production | |
JP2966859B2 (en) | Novel bioactive substance dioctatin and method for producing the same | |
US4393047A (en) | Antibiotic cytophagin and a process for producing the same | |
JPS5831196B2 (en) | SF-1771 Bushitsuno Seizouhou | |
JPS5823077B2 (en) | Antibiotic AM-3603 and its manufacturing method | |
JP4235298B2 (en) | Antibiotic pareic acid A and its production method | |
US3933790A (en) | Phosphorylxylostasin | |
NO822016L (en) | NEW ANTIBIOTIC EFFECTIVE RELATIONSHIPS, PROCEDURE FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS PHARMACEUTICALS | |
US3974273A (en) | Compound NA-337 and a process for producing the same by fermentation | |
JPS61199797A (en) | New adechlorine and its preparation | |
JPS6322799B2 (en) | ||
JPS6052799B2 (en) | Antibiotic AM-3696B and its manufacturing method | |
JPH05331181A (en) | Farnesyltransferase-inhibitory substance oh-4652 and its production |