JPS60204800A - デスプロリンバソプレシン拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、バンプレシン（ＶＳＰ）拮抗物質活性を有す
る新規環状ペプチドに関する。更に詳細には、これらの
新規化合物は、ｌ−Ｐｍｐ−ＶＳＰ　拮抗物質構造の７
位においてプロリン単位が欠失していることを特徴とす
る構造を有している。

発明の背景 エム・マンニングおよびダブリュウーエイチ・ソーヤ−
ら（ＭｏＭａｎｎｉｎｇ　、Ｗ、　Ｈ，Ｓａｗｙｅｒ　
ａｎｄｃｏｗｏｒｋｅｒｓ）は、抗バンプレシン活性を
有する種々の〔１−（β−メルカプト−β、β−シクロ
ペンタメチレンプロピオン酸）−４−バリンクーアルギ
ニン−バンプレシン類似物質に関する一連の雑文を発表
している。代表的なものは米国特許第４３６７２２５号
および第４３９９１２５号である。

マンニングの化合物は全て該６単位ジチオ環の第６アミ
ノ酸単位に結合したトリペプチド鎖を有し、もちろん該
化合物はノナペプチドである。本発明の化合物は、実質
的な拮抗活性を有するデスＰｒｏ７バソプレシンである
点でこれらの化合物と明確に判別できる。

米国特許第４４６９６７９号は、９−Ｇｌｙ単位が欠失
し、有効ｒ、ＨＶＳＰ拮抗活性を有するオクタペプチド
バソプレシン類似物質を開示している。

従来開示された化合物は全てパンプレンン構造の７位に
必須のプロリン状のアミノ酸単位を有する構造を有して
いる。本発明の化合物は、その構造中にかかる単位を有
さす、しかもｖｓｐ拮抗活性を保持するものである。

本明細書においては、ペプチドおよびバンプレシン化学
の分野で慣用の命名法を用いている。立体配置の特記が
ない場合は、そのアミノ酸単位はＬ一体、即ち、天然に
存在する形態である。一部の構造式では、明確にするた
めに、ＰａｐおよびＣｙｓの硫黄をかき加えである。

本明細書で使用したペプチドの略号は以下に示す通りで
ある。

Ｐａｐ　：β−メルカプト−β、β−シクロポリアルキ
レンプロピオン酸、Ｐｍｐ　：β−メルカプト−β、β
−シクロペンタメチレンプロピオン酸、Ａｂｕ：α−ア
ミノ酪酸、Ｃｂｇニジクロへキシルグリシン、Ｃｈａ：
ンクロへキンルアラニン、Ｐｂａ：α−アミ／、７ｊ：
、ニル酪酸、Ｇｌｎ：グルタミン、Ｇｌｙニゲリシン、
Ｔｙｒ：チロシン、Ｐｈ、ｅ　：フェニルアラニン、■
ａｌ：バリン、Ｉｌｅ　：イソロイシン、Ｎｌｅ：ノル
ロイシン、Ｌｅｕ：ロイシン、Ａｌａ：アラニン、Ｌｙ
ｓ　：リシン、Ａｒｇ：アルギニン、Ａｓｎ：アスパラ
ギン、Ｔｏｓ　：　トシレート、ＢＨＡ：ベンズヒドリ
ルアミン、ＤＩＥＡニジイソプロピルエチルアミン、４
、−　ＭｅＢｚｌ　：　４−メチルベンジル、ＴＦＡ：
）リフルオロ酢酸、ＤＣＣニジシクロへキシルカルボジ
イミド、ＨＢＴ：　］−ヒドロキシベンゾトリアゾール
、ＡＣＭ：アセトアミドメチＩし、ＶＳＰまたはＡＶＰ
：バソプレシン。

発明の概要 本発明のデスーＰｒｏ−ＶＳＰ化合物は、式：〔式中、
ＰはＰｌｘｅまたはＰｈｅ（４’−Ａｌｋ）；　ＸはＤ
−ｐＨｅ、　Ｄ−Ｖａｌ　、　Ｄ−Ｎｖａ、　Ｄ−Ｌｅ
ｕ、　Ｄ−１１ｅ、　Ｄ−ＰｂａｌＤ−Ｎｌ　ｅ　、　
Ｄ−Ｃｈａ　、　Ｄ−Ａｂｕ％Ｄ−Ｍｅ　ｔ、Ｄ−Ｃｈ
ｇ　、　Ｄ−Ｔｙ　ｒ　。

Ｌ−Ｔｙｒ、　Ｄ−Ｔｙｒ（Ａｌｋ）またはＬ−Ｔｙｒ
（Ａｌｋ）；　ＹはＶａｌ　、　ｌ１ｅＳＡｂｕ、　Ａ
ｌａ、　Ｃｈｇ、　Ｇｌｎ、　Ｌｙｓ　、　Ｃｈａ、Ｎ
ｌｅ。

Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＧｌｙ；ＺはＤ−Ａｒ　ｇ　、　
Ｌ−Ａｒ　ｇ　、　Ｄ−ＬｙｓまたはＬ−Ｌｙｓ；Ａは
Ｇｌ　ｙ　（ＮＨ２）　、Ｇｌ　ｙ　、　Ｃ１ｙ　（Ｎ
ＷＡＩ　ｋ　）　、０１（、ＮＨ２ＮＨＡＩ　ｋ　ｉお
よびｎは０〜２を意味する〕 で示される化合物、またはその医薬上許容される塩、プ
ロドラッグエステルまたは錯体である。

発明の詳説 式１および以後の１Ａｌｋｊ　は、所望により、Ａの窒
素またはチロシンが２位にある場合はチロシンの酸素置
換基のいずれかに結合した炭素数１〜４の低級アルギル
基を意味する。この様なアルキル置換基には、メチノペ
エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたはブチル基が
包含される。好ましいＡｌｋはメチルまたはエチル基で
ある。［ＢｚｌＪはベンジル基を意味する。

「バソプレシンコという語を用いた場合、Ｄ−アルギニ
ン、Ｄ−リシン、Ｌ−リシンまたは他のパンプレンンを
示す修飾の記載がなければ、Ｌ−アルギニンバンプレシ
ン（ＡＶＰ）を意味する。本発明のＡＶＰ誘導体が好適
である。式１で示される化合物において、ＡがＧ　ｌ　
ｙ　（１’ＪＩ（２）またはＮＨ２である構造を有する
ものも、ＶＳＰ拮抗作用に好適である。

本発明の化合物の下位群のものとして４ｉ、式中、Ｐが
Ｐｈｅ、　ＸがＤ−ＴｙｒまたはＤ−Ｔｙｒ（Ｅす、Ｙ
力〈Ｖａｌ、ＧｉｎまたはＡｂｕ、ＡかＧｌ　ｙ　ＮＨ
２またはＮＨ２、ｎ′が１およびＺがＬ−Ａｒｇまたは
Ｄ−Ａｒｇである式■で示される化合物が含まれる。

本発明の好ましい化合物は、Ｃ，１−（β−メルカプト
−β、β−ンクロペンタメチレンプロビオン酸）−２−
（０−エチル−Ｄ−チロシン）−４−バリン−７−ゾス
プロリンー８−アルギニン〕ノくツブレシン（〔Ｐｍｐ
ｌ−Ｄ−Ｉ”ｙｒ（Ｅｔ）２−Ｖａｌ４−ｄｅｓｉ’　
ｒ　ｏ７）　−ＡＶＰ　）である。

また、付加塩、エステルまたはアミドの形態のプロドラ
ッグ、および錯体等の式１の化合物の種々の誘導体も、
本発明に含まれる。該付加塩（−！、もし存在するなら
ば、末端アミノ酸基Ｇこおける、ＮＨ＋Ｃａ七モ、Ｋ七
またはＮａ　＋＋’Ｊどの医薬北許容さ４〜 れるカチオンとの塩、または、ペプチドの塩基中心（Ａ
ｒｇ単位など）における医薬り許容される塩のいずれで
もよい。酢酸塩の形態は、実施例で概略を説明する単離
精製工程によりしばしば生成するので特に有用である。

塩酸塩、臭化水素酸塩および他の強酸との塩も有用であ
る。該化合物はまた、分子内塩または末端にカルボキシ
ル基が存在する場合は双性イオンを形成する。

プロドラックは、式ｌの化合物の誘導体であって、ｉｎ
　ｖｉ’ｖｏ　で、生理的活性ｆｌｌ親会合物変るもの
である。エステルプロドラッグ形態は、例えは、アルキ
ル基が１〜８個の炭素原子を有する式■の酸の低級アル
キルエステル、または、種々のヘンシルエステルのよう
なアラルキルエステルである。式１の化合物の他の誘導
体は、当業者において自明のものである。「錯体」もし
くは「複合体」には、水和物またはアルコラードｒ、１
どの種々の溶媒和物、あるいはメリフィールド樹脂ｆＪ
どの担持または精製樹脂を伴なうものが含まれる。

式１の化合物は、それぞれ６位のンスティン単位および
１位のβ−メルカプト−β、β−ンクロポリアルキレン
プロピオン酸単位（Ｐａｐ）に位置する２個のスルフヒ
ドリル基により本発明の線状オクタペプチド中間体を環
化することにより調製される。環化反応は、高希釈度で
、メルカプタンをジスルフィドに分子内酸化することが
できる穏やかな酸化剤の存在下で起こる。

Ｐａｐ−Ｘ−Ｐ−Ｙ−Ａｓｎ−Ｃｙ　５−Ｚ−Ａ　Ｐａ
ｐ−Ｘ−Ｐ−Ｙ−Ａｓｎ−Ｃｙ　５−Ｚ−Ａ１　１　１
　１ ＳＨＳＨ−ンＳ□５ （Ｉｆ）　（Ｉｌｌ） この線状オクタペプチド■（式中、Ｐ、　Ｘ、　Ｙ、　
ＺおよびＡは、式■で定義したとおり。たたし、Ｚは単
結合またはＯＨ末端でもよい。また、式■のスルフヒド
リル基（−５）ｉ）は、ＰａｐおよびＣｙｓ単位に含ま
れるものである〕の酸化は、一般に前記のようにして実
施される。例えば、過剰のアルカリ金属の７エリンアン
化塩、たとえばフェリシアン化カリウムまたはフェリン
アン化ナトリウムを、１適当な非反応性溶媒中、好まし
くは水性溶媒にとかしｆこ線状中間体と共に、約７〜７
．５の中性のｐＨで、室温またはそれ以下で、反応が実
質的に完了するまで用いる。メタノールなどの低級アル
コールを添加してもよい。線状ペプチドおよび酸化剤の
濃度は低い方が好ましく、例えば、１〜５ｇのジメルカ
プタン■を環化し、環状ジスルフィド■を得るには、酸
化剤０．０１モル濃度の数リットル水性溶液でよい。

フェリシアン化塩とほぼ同等な酸化力を有する他の穏や
かな酸化剤も閉環反応に用いることができる。酸素また
はヨウ素を用い得る。もちろん、式■の出発物質の構造
中に反応を阻害する部位がある場合、ある種の環化反応
が不適当であることは当業者に自明であろう。線状スル
フヒドリル含有出発物質は、種々のアミノ酸単位または
スルフヒドリル位に通常の保護基を有しても、有してい
なくてもよい。前者の場合、保護基は環化後に除去する
。ＡＣＭ−５Ｈ保護基の場合、保護基の除去および環化
は、両方ともヨウ素の水性メタノール中溶液を用いて行
なう。しかし、通常は、遊離の線状ペプチドを環化する
。

式１で示される望ましい環状デスプロリンペプチドは、
例えば、氷酢酸を用いて、水性酸化混合物を酸性化し、
反応混合物をイオン交換クロマトグラフィーカラム、例
えば、弱酸性アクリル樹脂カラムに付し、酸で溶出する
か、または、エビクロロヒドリンでデキストランを架橋
することにより調製したビーズ状ゲル上でゲル濾過に付
すことにより都合よく単離される。

本発明の化合物を調製する別の一連の反応において、１
個または両方の末端単位が欠失している式■で示される
中間体は、前記の様にして環化される。得られた環状ペ
プチド■を、次いで、式ＩでＺおよびＡで示される保護
アミノ酸単位と、別々に、またはジペプチドとして１ま
たは２回の反応で縮合させる。末端アミノ酸単位結合の
反応条件は、前記のペプチド分野で公知のアミド生成法
と同じであるが、特に、カルホン酸基が保護された末端
アミノ酸を、前記の如く、ジンクロヘキシルカルポジイ
ミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下
に５−Ｃｙｓと反応させる。環状骨格のアミノ酸または
末端アミノ酸単位のうちの１つに保護基があってもよく
、もし存在する場合は、該保護基は、標準的反応を用い
て除去され、本発明の生成物が得られる。反応条件は、
公知のごとく、Ｃｙｓ単位のラセミ化を最小とする様に
選択されなければならない。

遊離したまたは保護された式■で示される中間体は、同
相ペプチド合成法を用いて都合よく調製される。市販の
ベンズヒドリルアミン担体樹脂（ＢＨＲ）を、式１で示
されるアミド末端生成物（たとえは式中、ＡはＮＦ１２
またはＧｌｙ（Ｎ＋（２））を調製するのに用い、クロ
ロメチル担体樹脂（ｃｒｖｎｔ）を式■の化合物で示さ
れる酸末端生成物（例えは式中、ＡはＧｌｙまたは０Ｉ
−１）を調製するのに用いる。

式■で示される線状ペプチドのペプチド鎖は、７位また
は８位のいずれかの単位から始まって、１位の単位まで
段階的にっｆｓいていく。各単位は後記するごとくペプ
チド合成において公知のごとく、適宜に保護する。一連
の段階反応は各中間体ペプチドの単離をせすに、ベック
マン９９０１５ペプチド合成器（Ｂｅｃｋｍａｎ　９９
Ｑ　Ｂ　、ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｃｈｅ−ｓｉｚｅｒ
　）中で都合良く行なわれる。操作の詳細は後記の実施
例に示す。

樹脂に担持されたペプチド鎖に連続して添加される種々
のアミノ酸は公知の方法で保護されている。例えば、ア
ミノ基、特にα位のものについてはＢｏｃ保護基、Ｐａ
ｐおよびＣｙｓ単位のメルカプト基についてはベンジル
チオメチル、エチルカルバモイル、アクマンチル、Ｌ−
ブチル、アセトアミドメチル、トリチルまたは所望によ
り置換されたベンジル基、Ａｒｇ単位についてはニトロ
、カルボベンゾキシ、メチレン−２−スルホニルマタハ
トシル、ｆＪ′らひに、ＴｙｒまたはＬｙｓ単位につい
てはエチルオキシカルボニルまたは所望により置換され
たカルボベンゾキシ（Ｚ’）か用いられる。保護基は最
も好都合には容易に除去できるものであるべきで、スｆ
Ｓわち、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）
基については酸処理で、ベンジルまたはカルボベンゾキ
ン基についてはナトリウム／液体アンモニアまたは触媒
による水素添加で除去する。

保護された線状ペプチド中間体を、例えば、水相溶性溶
媒中アンモニア溶液を用いて、担体樹脂マトリックスか
ら分離し、次いで、ナトリウム／液体アンモニアを用い
るなどして処理し、保護基を除去する。この方法により
線状オクタペプチドのアミド誘導体が得られる。

より好都合には、アニソール等の適当ＩＳカルボニウム
イオンスカベンジャーを用いて無水弗化水素で樹脂に担
持されたペプチドを処理することにより２段階を１つに
して、式■のデスプロリンペプチド中間体を収率よく得
る。

本発明の化合物は有効なバンプレシン拮抗物質活性を有
する。バンプレシンは、腎臓中における抗利尿機構の作
用に寄与することが知られている。

これらの化合物の作用が天然の抗利尿ホルモン（ＡＤＨ
，）作用と拮抗すると、尿細管の末端部分の浸透性が増
大するため水分が排泄される。この作用機構は腎臓の上
皮細胞の細胞膜上にあるバンプレシン受容体〔■２−受
容体〕でおこると考えられる。

本発明のＡＤＨ拮抗物質の最も顕著な薬理効果は、ナア
ジドの様ｆＳ、ナトリウム排泄剤の作用よりも、の 水利原剤とじヌ「用にある・ 不適切な抗利尿ホルモン分泌症状群（ＳＩＡＤＨ）また
は好ましくない水腫に悩むいずれもの患者が本発明の化
合物の対象となる。本発明の化合物の対象となる臨床症
状の例としては、高血圧症、肝硬弯、うつ血性心不全ま
たは重傷もしくは重病により生じた外傷等が包含される
。

バンプレシン受容体部位の第２群は心臓血管系内の血圧
昇圧部位（■１−受容体）である。これらも、本発明の
化合物によりいくらか拮抗され、その結果、抗高血圧活
性が得られる。本発明の化合物を静脈内または経鼻投与
した場合の別の用途として、月経困難症がある。

従って本発明の化合物は水１厘の治療または水排泄のた
めに非毒性かつ有効量の選択された化合物を、好ましく
は医薬担体と組合せて適用、特に非経口投与または吸入
することにより、その様な治療を必要とする患者に対し
て用いる。活性成分の投与単位は、７０ｋＱの患者につ
き５μｇ〜１〜／ｋｑ。

好ましくは一１゛０〜２０μｆ／／ｋｑの範囲から選ぶ
。該投与単位を１日１〜５回適用する。

式■の活性成分を含有する医薬組成物は、前記の如く等
張食塩溶液の様な標準的液体担体中に溶解または懸濁さ
せ、静脈内注射、皮下注射または筋肉内注射等の非経口
投与用に適したアンプルまたは複数投与量バイアルに充
填した投与単位からなる。吹入剤層組成物も同様である
が、通常、計量アプリケータまたは吸入器で投与される
。粉末組成物も油状製剤、ゲノペ等張液製剤用緩衝液、
乳濁液またはエアゾルと共に用いられる。

天然の抗利尿ホルモンに対する括抗剤活性（抗ＡＤＨ活
性）は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏではブタまたはヒトの腎臓の
髄組織中で、またｉｎ　ｖｉｖｏでは水欠乏症のラット
で測定される。バンプレシン刺激アデニル−トサイクラ
ーゼ活性化またはバンプレシン結合活性のｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏ　分析法については、エフ・スタツセンら、ジャー
ナル・オブ・ファーマコロジイ・アンド・エクスペリメ
ンタル・セラビューティックス（Ｆ、　５ｔａｓｓｅｎ
　ｅｔ　ａト、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ａ
ｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃｓ　）　２２３　、５０〜５４（１９８２ンにより記
１１戊されてし）る。

抗畑活性の分析法は次に示す水欠乏症ラット実験法であ
る。

水欠乏症ラット・スクリーニング 実験の約１８時間前から、オスのラットにエサおよび水
を与えない。試験動物を代謝ケージに４匹ずつ入れる。

０時間口に試験群にテスト化合物を腹腔内注射により投
与し、また、同容量のビヒクルを両対照群（絶食群およ
び非絶食群）に投与する。尿の容量およびオスモル濃度
を１時間ごとに４時間測定する。実験値は、排泄された
尿のｍｅ数（累積）、排泄された電解質のミリ当量／ラ
ット、排泄された尿の７１９／ラツトおよびミリ重量オ
スモル／　ｋｇ　１−１２０のオスモル濃度として記録
する。

有意差の測定に公差テストを用いる。ＥＤ３ｏｏは尿の
オスモル濃度を３００ミリオスモル／ｋｑに低下させる
のに必要な化合物の投与量（μＱ　／ｋｑ　）と定義す
る。

第　１　表 抗ＡＤＨ活性 （ＡＩ　Ｃ１−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
タメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チ
ロシン）−４−バリン−７−ゾスプロリンー８−アルギ
ニン〕バンプレシン （ＢＩ　Ｃ１−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
タメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チ
ロシン）−４−バリン−８−アルギニン〕パンプレシン （Ｃ）〔１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタ
メチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チロ
シン）−４−バリン−７−ゾスプロリンー８−アルギニ
ン−９−デスグリシン〕バンプレシン ［０１（１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタ
メチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロ
シン）−４−α−アミン醋酸−７−デスプロリン−８−
アルギニン−９−デスグリシン〕−バソプレシン 米水欠乏症レベルから３００　ミＩＪオスモル／ｋｑ・
Ｈ２ＯまでＵＯ５ｍを減少させるに要する腹腔内投与さ
れたペプチドの評価量（μｇ／ｋｑ）実施例 つぎに実施例を挙けて本発明をさらに詳しく説明する。

実施例Ｉ Ｐｍｐ（４−ＭｅＢｚ　ｌ　）　−Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ
　）−１’ｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ　−Ｃｙｓ（４−Ｍｅ
Ｂｚｌ　）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｇｌｙ−ＢＨＡ樹脂の
固相合成法 標記の樹脂に担持されたペプチドの同相合成のために、
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−樹脂（樹脂１．１９ミリモル／ｇ）を
出発物質として用いる。これは、対称性無水物（Ｂ　ｏ
　ｃ　−Ｇ　ｌ　ｙ　）　２０をベンズヒドリルアミン
樹脂とジメチルホルムアミド中２時間反応させることに
より製造する。ベンズヒドリルアミンの塩酸塩を、次の
ようにして前処理する。

（１）塩化メチレン中に一夜慾濁する。

（２）塩化メチレンで洗浄する（４回、１分）。

（３）７％のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）
の塩化メチレン中溶液で中和する（２回、２分）。

（４）塩化メチレンで洗浄する（６回、１分）。

（５）あらかじめ乾燥したジメチルホルムアミドで洗浄
する（２回、１分）。

対称性無水物（Ｂｏ　ｃ　Ｇ　ｌ　ｙ　）２０およびそ
の樹脂形は次のようにして製造する。

Ｂｏｃ−Ｇ１．ｙＯＨ（０，３５９，２ミリモル）の１
０ｍＡ！塩化メチレン中溶液に、１ｍ／（］：：リモル
）のジシクロへキシルカルボジイミドの塩化メチレン中
溶液（１Ｍ溶液）を添加する。混合物を振とう機で１０
分間振とうし、濾過する。固体をｌ　ｍｅの塩化メチレ
ンで３回洗浄する。Ｐ液を容積が０．５　ｍｌとｆぶる
ように真空下で濃縮（室温）する。これをジメチルホル
ムアミドにとかし、ＢＨＡ樹脂に添加する。カップリン
グ完了後（１〜２時間）、樹脂をジメチルホルムアミド
で洗＃（１分、２回）し、次いで塩化メチレンで洗浄す
る（１分、４回）。

定量的ニンヒドリン試験およびアミノ酸分析を行ない、
樹脂に担持された割合を計算する。

適当に保護したアミノ酸を、ベックマンペプチド合成器
９９０Ｂを用いてＢｏｃ−Ｇｌｙ−樹脂上で連続的にカ
ップリングさせる。各カップリングに用いる方法は、Ｂ
ｏｃ−Ａｓｎ　およびＰｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ　）を除
いて次のとおりである。

（１）ＣＨ２Ｃ１２で洗浄する（３回、１分）。

（２）５０％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２中溶液で予備洗浄す
る（１回、１分）。

（３）５０％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ。中溶液で脱保護する
（３０分）。

（４）ＣＨ２Ｃ１２で洗浄する（３回、１分）。

（５）７％ＤＩＥＡ０）ＣＨ２Ｃ１２中溶液で予備洗浄
する（１回、１分）。

（６）７％ＤＩＥＡのＣＨ２Ｃｌ。中溶液で中和する（
１回、１０分）。

（７）ＣＨ２Ｃ１２で洗浄する（３回、１分）。

（８）アミノ酸（３ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２中で保ｔ
し、次いでＤＣＣ（３ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２中溶液
（０，３Ｍ　）　１０ｍｌを添加し、２時間カップリン
グする。

（９）　ＣＩ（２Ｃ１２で洗浄する（３回、１分）。

（ＩＢＥｔＯＨ／Ｃ１−１２Ｃ１２１：　１溶液で洗浄
する（３回、１分）。

０刀Ｇ（２ＣＩ２で洗浄する（３回、１分）。

Ａｓｎ部のカップリングの場合は、１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢＴｌ　６ミリモル）のジメチル
ホルムアミド中溶液（０，６Ｍ　）　１０ｎｇを用いる
。また、Ｐｍｐ　（４−Ｍｅ　Ｂ　ｚ　ｌ　）を４−ジ
メナルアミノピリジン（３ミリモル）を用いて該ペプチ
ド樹脂にカップリングする場合、乾燥ジメチルホルムア
ミドを用いる。各カンプリング反応の児了は、ニンヒド
リンテストで調べる。Ｃｙｓおよびβ−β−ペンタメチ
レン−β−メルカプトプロピオン酸（Ｐｍｐ　）部のチ
オール基を保護するのに、４−メチルベンジル基（４−
ＭｅＢｚ　ｌ　）　ヲ用いる。

得られた保護されたペプチド樹脂中間体、即ち、（Ｐｍ
ｐ（４ｆＭｅＢｚｌ　）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ　）−Ｐｂ
ｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ　−Ｃｙｓ　（４−ＭｅＢｚｌ　）
−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−Ｇｌ　ｙ−ＢＨＡ−樹脂〕を塩
化メチレンでよく洗浄し、−夜真空乾燥すると、２、Ｏ
ｇの標記生成物が得られる。この方法は、他の樹脂に担
持された線状オクタペプチドジメルカプタンを製造する
場合にも用いる。

（ＮＨ２）の製造方法 ２．０ｇのＰｍｐ（４−ＭｅＢｚ　１　）−Ｄ−Ｔｙｒ
　（Ｅｔ　）−Ｐｈｅ　−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　（
４−ＭｅＢｚ　Ｉ　）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−Ｇｌ　ｙ
−ＢＨＡ−樹脂の２．５　ｍｌアニンール中溶液を無水
弗化水素酸４０ｍ１と０℃にて５０分間反応させる。真
空下で蒸発乾固させた後、残渣を無水エーテルで処理し
、粗ペプチドを、脱気したジメチルホルムアミド５０ｍ
１および３３％酢酸５０ｙ＋ｌで４ｅの水に抽出する。

水性希釈ジスルフヒドリルオクタペプチドを、０、ＯＩ
Ｍのフェリシアン化カリウム溶液を用いてＰＨ７，２に
て、着色状態が３０分間持続するまで環化する。酸化反
応終了後、氷酢酸を添加することにより、溶液のｐＨを
４．５に調節する。この溶液を弱酸性アクリル樹脂（Ｂ
ｉｏ　−Ｒｅｘ　７　Ｑ　）カラム（２，５Ｘ１２Ｃ＋
＋＋）にゆっくり通す。カラムをピリジン・酢酸塩緩衝
液（ピリジン／酢酸／水、３０：４：６６）で溶出させ
る。酢酸ビリジ、ン溶液を真空下で留去し、残渣を１％
酢酸から凍結乾燥すると、４２０ｔ＋＋ｙ（４０ｆＯ）
の標記の粗ペプチドが得られる。

精製 （１）向流分配法（ＣＣＤ）： 試料：２５Ｑ〃夕、ｎ−ブタノール／酢酸／水（４：１
：５）、移動相数２４０ （ａ）フラクション　１６７〜１８９；生成物８３＋Ｖ
フラクシヨン　１６０〜１６６および１９０〜１９６ｉ
１４　ノｉｌｌ／ （２）調製的ＨＰＬＣ： 試料：５Ｃ１１１ａより）　ＡＩＬｅｘ　ＯＤＳ　、　
１０　ｙｌπｘ２５ｏ＋＋５μ、流速４ｍｅ／分、水／
アセトニトリル／ＴＦＡ（６０：’４０：０．２５）’
＝等濃度、２２．０ｎｍ（２，ＯＡＵＰＳ）　、注入量
６．２５ｍｙ／　０．５　ｍｌ、２４．３　ＭＥ／の精
製サンプルが単離された。

物性値 分子式：０４８Ｈ７ＯＮ１２°１０５２分子量：１０３
８．４６ アミノ酸分析：　Ａｓｐ　（１，００）、Ｇｌ　ｙ、（
１，００）、Ｃｙｓ（０，５６）、Ｖａｌ　（０，９６
）、Ｔｙｒ　（０，７０）、Ｐｈｅ　（０，９６）およ
びＡｒｇ　（０，９６） クロマトグラフィー分析 薄層クロマトクラフィー（ＴＬＣ） 溶媒：ブタノール／酢酸／水／酢酸エチル（１：１：１
：１） Ｒ−（値：０．６４ 高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬｃ）、Ｃ−１８カ
ラム 等濃度　水／アセトニトリル／ＴＦＡ（６０：４０：０
．２５） Ｋ’４．２９ 濃度勾配法　水／アセトニトリル／　ＴＦＡ、（ｆ３　
Ｑ：２０：０．２５から５０：５０：０．２５）１０分
間維持し、その後、初期状態に戻す。

Ｋ’　６．９ 質量分析（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）＋１０３９実施例３ Ｐｍｐ−４（ＭｅＢｚｌ　）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ　）−
Ｐｈｅ−Ｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ　）−Ａ
ｒｇ（ＴＯｓ　）−Ｂｌ−ＩＡ　樹脂の固相合成法標記
の樹脂に支持されたペプチドの固相合成に関して、Ｂｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）ＢＨＡ　樹脂（樹脂１．３４ミリ
モル／９　）’ｉ出発物質として用いる。これは、３ミ
リモルのＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）を１，０ミリモル
のベンズヒドリルアミン樹脂とジメチルホルムアミド中
で２時間反応させることにより調製する。遊離塩基の形
態のベンズヒドリルアミン樹脂を、−夜塩化メチレンで
膨潤させる。これを、７％のジイソプロピルエチルアミ
ン（、ＤＩＥＡ）の塩化メチレン中溶液で１回洗浄し、
次いで１分間塩化メチレンで６回、最後に予め乾燥した
ジメチルホルムアミドで１分間２回洗浄する。１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール（ＨＢＴｌ　６ミリモル）お
よびジシクロへキシルカルボジイミド（Ｉ）ＣＧ、　３
ミリモル）を用いて振とう機に２回かけ、Ｂｏ　ｃ　−
Ａｒ　ｇ　（Ｔｏ　ｓ　）を樹脂に担持させる。定量的
ニンヒドリン試験およびアミノ酸分析を担持させた後定
期的に行ない、樹脂に担持された割合（％）を測定した
。この操作における担持された割合は５３％であった。

即ち、０．７０９　ミＩＪモル／ｇの樹脂が利用された
。

適当に保護したアミノ酸を、ベックマンペプチド合成器
９９０−Ｂを用いて、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−樹
脂に連続的にカップリングさせる。Ｂｏｃ−Ａｓｎおよ
びＰｍｐ　（４−Ｍｅ　Ｂ　ｚ　ｌ　）を除く各カップ
リングに採用した手順は次のとおりである。

（１）塩化メチレンで洗浄する（３回、１分間）。

（２）５０％のトリフルオロ酢酸の塩化メチレン中溶液
て予備洗浄する（１回、１分間）。

（Ｊ）５０％のトリフルオロ酢酸の塩化メチレン中溶液
で脱保護する（３０分）。

（４）塩化メチレンで洗浄する（３回、１分）。

（５）７％のＤＩＥＡの塩化メチレン中溶液で洗浄する
（１回、１分）。

（６）７％のＤＩＥＡの塩化メチレン中溶液で中和する
（１回、１０分）。

（７）塩化メチレンで洗浄する（３回、１分）。

（８）アミノ酸（３ミリモル）を塩化メチレン中で保護
し、次いで１０ｍ１の０．３ＭのＤＣＣ（３ミリモル）
の塩化メチレン中溶液を添加し、２時間カップリングす
る。

（９）塩化メチレンで洗浄する（３回、１分）。

００エタノール／塩化メチレン（１：１）で洗浄する（
３回、１分）。

（１υ塩化メチレンで洗浄する（３回、１分）。

Ａｓｎ部をカップリングする場合、１０ｍ１の０．６Ｍ
の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＢＴ。

６ミリモル）のジメチルホルムアミド中溶液を用いる。

４−ジメチルアミノピリジン（ＤＡＰ、３ミリモル）を
用いてＰｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ　）を該ペプチド樹脂に
カップリングさせる場合にも、乾燥ジメチルホルムアミ
ドを溶媒として用いる。各カップリング反応の完了は、
ニンヒドリン試験で調べる。

Ｃｙｓおよびペンタメチレンプロピオン酸（Ｐｍｐ　）
部のチオール基を保護するのにＰ−メチルベンジル基を
用いる。

Ａｓｎアミノ酸とカップリングした後、樹脂に担持され
たペプチドを、０．３５５　ミＩＪモルすっに三等分し
、別個に、４位でＢｏｃ−Ａｂｕ　またはＢｏｃ−Ｖａ
ｌと結合させ、連鎖を、Ｐ＋ｎｐ　（４−ＭｅＢｚ　ｌ
　）のところまで続ける。得られた保護されたペプチド
樹脂中間体、即ち、（Ｐｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ　）−Ｄ
−Ｔｙｒ（Ｅｔ　）−Ｐｂｅ　−Ｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　
（４−ＭｅＢｚｌ　）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−ＢＨＡ樹
脂〕（式中、ＹはＡｂｕまたはＶａｌを意味する）を別
々に塩化メチレンで洗浄し、−夜真空乾燥すると、各々
０．８７９　（Ｙ＝Ａｂｕ　）、０．６７　ｆ／　（Ｙ
−Ｖａｌ　）の生成物かの調製 ０．８７９のＰｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（
ＥリーＰｈｅ　−Ａｂｕ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（４−ＭｅＢ
ｚｌ　）　−Ａｒｇ（Ｔ、ｏｓ）−ＢＨＡ樹脂の２ｍｌ
アニソール中溶液を、無水弗化水素（２０ｍｌ）と０℃
にて５０分間反応させる。真空下で蒸発乾固させた後、
残渣を無水エーテルで処理し、粗ペプチドを、ジメチル
ホルムアミド５０ｍ１および３３％酢酸６０〜７Ｑ＋＋
＋Ｊで２召の水に抽出する。水で希釈したジメルカプト
へブタペプチドを、ｐＨ７，２にて０．０’１Ｍの７エ
リソアン化カリウム溶液を用Ｇ１て３０分間着色が持続
するまで環化させる。酸化反応終了後、氷酢酸を加える
ことにより溶液のｐＨを４．５に調節する。この溶液を
弱酸性のアクＩＪ　）し樹脂（Ｂｉｏ−Ｒｅｘ　７　Ｑ
　）カラム（２，５Ｘ　１３ｃｒ）ｌ）にゆっくり通す
。カラムを、ピリジン−酢酸塩緩衝液（ピリジン／氷酢
酸／水、３０：４：６６）で溶出する。ピリジン−酢酸
塩溶液を真空蒸留で除去し、残渣を１０％酢酸から凍結
乾燥させると、標記ペプチドの粗生成物１１５１１１ｇ
（３３％）か得られる。

精製 （１）分配カラム、セファデックスＧ−２５：試料：１
１５＋＋１１／、ｎ−ブタノール／酢酸／水（４：１：
５）　、７２．６　ノ〃ｇ （２）ゲル濾過、Ｇ−１５，０，２Ｍ　酢酸：　６０．
５ｍｆ／（３）調製的ＨＰＬＣ： 試料：　３５．０＋Ｉｌ＆（（２）より）、ＡＩＬｅｘ
　ＯＤＳ、ｌ　Ｑｍ７１１ｘ　２５ｃｍ　、　５μ、流
速４ｍｌ／分、水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸
（６０：４０：０．２５％）、等濃度、２２９ｎｍ（２
，０ＡＵＰＳ）、注入量４．１４７＃ｇ１５００μβ、
標記ペプチドの精製物２８　ＨＥ／が得られた。

物性値 分子式：０４５Ｈ６５Ｎ１１°９５２ 分子量：９６７．４８ アミノ酸分析：　ＡＳｐ（１，００）、Ａｂｕ　＋Ｃｙ
　ｓ　（１，３５）、Ｔｙｒ　（０，７４）、Ｐｈｅ　
（０，９３）、Ａｒｇ　（０，８２）ペプチド含量：６
５．６％ クロマトグラフィー分析値： 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ） 溶媒　Ｒ（値 ブタノール／酢酸／水／酢酸　０．６３エチル（１：１
：１：１） ブタノール／酢酸／水（４：１：５）０．５１高圧液体
クロマトグラフィ＝（Ｈｌ）ＬＣ）０−”８７５″　え
。

等濃度　０．０５１Ｊン酸二水素カリウ　４．７ム／ア
セトニトリル（６０：４０） 濃度勾配法　０．０５リン酸二水素力　−５．２リウム
／アセトニトリル（８０：２０ から５０：５０） 質量分析（ＦＡＢ）：（ＭセＨ）　９６８（Ｍ−Ｈ）　
９６６ の調製 実施例３で得られたＰｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ　）−Ｄ−
Ｔｙｒ（Ｅｔ）□ −Ｐｈｅ−Ｖａ　ｌ　−Ａｓ　ｎ−Ｃｙ　ｓ　（４−Ｍ
ｅＢｚ　ｌ　）−Ａｒ　ｇ　（Ｔｏ　ｓ　）−Ｂｌ−Ｉ
Ａ樹脂ｏ、６７ｙの２ｍｅアニソール中溶液溶液無水弗
□ ：　化水素（２Ｑｍｅ）と０℃にて５０分間反応させる
。

前記実施例と同様にして、標記ペプチドの粗生成物８０
ｇ（２３％）を得る。

精製 （１）分配カラム、セファデックス、Ｇ−２５：試料：
　８Ｑ　ＴＪｇ／、ｎ−ブタノール／酢酸／水（４：１
：５）、７５．７■ （２）調製的ＨＰＬＣ： 試料：、　４２．７２’ｌ＆（（１）より）、Ａｌｔｅ
ｘＯＤＳ、１０闘×２５ａｎ１５ｔｔ、流速４ｙｔｌ／
分、水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸（６０：　
４０　：　０．２５％）、等濃度、２２９ｎｍ（２，０
ＡＵＦＳ）、注入量４．７　ｍｇ　７５００μ召、標記
ペプチドの精製サンプル３６．８〜を得る。

物性値： 分子式：０４６Ｈ６７Ｎ１１°９５２ 分子量：９８１．４４ 酸 アミノ分析：　Ａｓｐ　（１，０６）、ＣＹＳ（０，３
７）、Ｖａｌ（△ １．００　）、Ｔ３’ｒ（０，６５）、Ｐｈｅ　（０，
９１）、Ａｒｇ　（１，００）ペプチド含！：８７．５
５％ クロマトグラフィー分析値： 溶　媒　Ｒ（値 薄層クロマトクラ　ｎ−フタノール／酢０．６フイー（
ＴＬＣ）　酸／水／酢酸エチル（１：１：１：１） ｎ−ブタノール／酢　０．５１６ 酸／水（４：１：５） （上方） 高圧液体クロマト　Ｃ−１８カラム　Ｋ′グラフィー（
Ｈｌ）ＬＣ） 等濃度、０．０５　１Ｊン酸二水素カリウム　６．２５
／アセトニトリル（６０：４０） 濃度勾配法、０．０５　１Ｊン酸二水素力ＩＪ　１６．
０ウム／アセトニトリル（８０：２０から５０：５０） ＦＡＢ：　（Ｍ＋Ｈ）　９８２ （Ｍ−Ｈ）　９８０ 実施例５ の調製 前記の様にして、０．７２ミリモル／ｇのアミン／樹脂
（窒素分析）（Ｂｏｃ−Ｇｌｙと結合した場合０．４６
ミリモル／９Ｃアミノ酸分析））より、自動ペプチド合
成器、ベックマン９９０Ｂを用いて得られる、保護した
ペプチド樹脂、Ｐｍｐ　−Ｔｙ　ｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｎ
−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｙ−ＢＨＡ樹脂を
、２〜３ｍｌのアニソールの存在下で２０ｍ／の無水弗
化水素と０℃にて１時間反応させる。弗化水素を真空下
にて蒸発乾固させた後、残渣を無水ジエチルエーテルで
処理し、粗ペプチドを、ジメチルホルムアミド１００ｄ
および４０％酢酸１００ＩＩＩｌで３．５ｅの脱気した
水（予めｐＨ４，５に調整）に抽出する。

この水性溶液で希釈したジスルフヒドリルオクタペプチ
ドを、ｐＨ７，２にて０．ＯＩＭのフェリシアン化カリ
ウム溶液を用いて３０分間着色が持続されるまで、酸化
的環化に付す。酸化反応終了後、氷酢酸を用いて溶液の
ｐＨを４．５に調節する。この溶液を弱酸性のアクリル
樹脂（Ｂｉｏ　−Ｒｅｘ−７０）カラム（２，５ｘ　ｌ
　Ｑａｎ　）にゆっくり通す。カラムをピリジン−酢酸
塩緩衝液（ピリジン／酢酸／水、３０：４：６６）で溶
出させる。ピリジン−酢酸塩溶液を真空下にて除去し、
残渣を１０％酢酸から凍結乾燥させると、標記ペプチド
の粗生成物５６０ＪＱ／　（８３，７３％）が得られる
。

精製 （１）回流分配法（ＣＣＤ）： 試料：　５６０”ｌ！ｆ、　ｎ−ブタ／−ル／酢酸／水
（４：１：５）、移動相数２４０ （ａ）チューブ１３６〜１５０；収量１１５．７５■（
ｂ）チューブ１２８〜１３５＋−１５１〜１６０；１２
４．８７＋＃（ｃｌ＋−Ｌ　−７’　１２１〜１２７　
＋−１６１〜２００　；１２２．００＋ＩＩ＆物性値 分子式”４６１（６５Ｎ１３°１１５２％式％ ） ） ） ペプチド含量：８７．０４％（アミノ酸分析）８５．２
３％（窒素分析） クロマトグラフィー分析値 溶　媒　Ｒｆ値 薄層クロマトグラ　ブタノール／酢ｅ／　０．５３フイ
ー（ＴＬｃ）　水／酢酸エチル（１：１：１：１） ブタノール／酢酸／　０．５７ 水／ピリジン （１５：３　：３　：　１０） 高圧液体クロマト　ａ：ｏ、１％ＴＦＡｂ：ＣＨ３ＣＮ
グラフィー（ＨＰＬＣ） 等濃度　７５ａ　：２５ｂ　ｋ’＝３．７３濃度勾配法
　８０ａ：２０ｂからｓｏａ：５ｏｂ（３０分間）　ｋ
’−３，９３ 高速原子衝撃試験（ＦＡＩ３）：　ＣＭ＋Ｈ）＋１０４
０（１０４０（１０３８ １，０ミリモル／ｇのアミン／樹脂（窒素分析）（Ｂｏ
　ｃ　−Ａｒ　ｇ　（Ｔｏ　ｓ　）とあわせて０．７３
２ミリモル／ｇ（アミノ酸分析））から、前記と同様に
して、手動振とう機を用いて得られた保護したペプチド
樹脂、Ｐｍｐ−Ｔｙｒ−１’ｉｌｅ　−Ｇｌ　ｙ−Ａｓ
ｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−ＢＨＡ樹脂２．１０１ｉ’を、３
．　Ｏｒａｇのアニソールの存在下で３０ｍ１の無水弗
化水素と０℃にて６０分間反応させる。

標記ペプチドの粗生成物の収量：　３５０ＪｎｆｌＣ４
Ｂ、６７％）精製 （１）向流分配法（ＣＣＤ）： 試料：　３５０’ｌ！ｙ、　ｎ−ブタノール／酢酸／水
（４：１：５）、移動相数２４０ （ａ）フラクション１３２〜１５４；収１ａ　１２２．
４３１１１ｆ／（ｂ）フラクション１２６Ｎ１３１モ１
５５〜１７０　；　７５．４３＋＋＋、ｙ（２）ゲル濾
過： Ｑ、２Ｍ、　ＨＯＡＣ１前記（１）（ａｌの生成物３５
　ｍｇを使用 （ａｌ　２７．７３　Ｉ〕ｒｇ精製物 （ｂｌ　５１．５５　）ｔｔｇ 物性値 分子式”４４１４６２Ｎ１２°１０５２％式％ ） ） ペプチド含ｆｉｔニア２．８％（アミノ酸分析）８５’
、５２％（窒素分析） クロマトグラフィー分析値 溶　媒　Ｒｆ値 薄層クロマトグラ　ブタノール／酢酸／水　０．７１フ
イー（−ＴＬＣ）’　／酢酸エチル（１：１：１゛１）
　よ／ ブタノール／酢酸／ピ　０，４８ リジン（１５：３：３：１０） 高圧液体クロマド グ７７（（ＨＰＬＣ）　ａ：ｏ、１％　ＴＦＡ　ｂ：ｃ
Ｈ３ＣＮ等濃度　７０ａ：３０ｂ　ｋ’−１，４＃反勾
配法　８０ａ：２０ｂから５０ａ：５０ｂ（１５分間）
　ｋ’−５，０７ 高速原子衝撃試験（ＦＡＢ）：（Ｍ−１−Ｈ）＋９８３
（Ｍ−１（）　９８１ 実施例７ Ｐｍｐ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｐｂｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ
−Ａｒｇ（ＮＨ２）の製法 実施例１の方法により調製したＰｍｐ　（４−ＭｅＢｚ
　ｌ　）−Ｄ−Ｔｙｒ−（Ｂｒ−Ｚ）　−Ｐｈｅ−Ｖａ
ｌ　−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ）−Ａｒｇ　（
Ｔｏ　ｓ　）−樹脂４．０ｇの４．５ｍ１．ｇ留アニソ
ール中溶液を、無水特化水素（４０ゴ）で０℃にて１時
間処理する。真空下で蒸発乾固した後、残渣を無水エー
テルで処理し、抽出すると、１．３０ｇの粗ペプチドが
得られる。得られた脱保護したヘプタペプチドを、０、
ＱＩＭの７エリンアン化カリウムを用いてｐＨ７〜７．
５にて、前記の如＜３０分間色か持続するまで環化する
。前記のようにして標記化合物を単離精製する。

実施例８ ＮＨＣ３Ｈ７）の製造 前記の様にして調製した（　Ｐｍｐ　’　−Ｄ−Ｔｙ　
ｒ　（Ｅす２−Ｖａ　ｌ４−ｄｅ　ｓ　’Ｐｒｏ７ｄｅ
　ｓＧｌ　ｙ９）　ＡＶＩ’　Ｑ、　ｌミリモ／ｌ／お
よび０．１ミリモルのｎ−プロピルアミンの２０ｒｕｌ
ジメチルホルムアミド中混合液を２３　ＩＩＩ　（０，
’１１ミリモル）のＤＣＱよび１４＃Ｉ＆（０，１１ミ
リモル）のＨＢＴで室温にて２時間反応させる。揮発性
成分を蒸発させると生成物残渣が得られる。生成物を、
（１）Ｇ　−，１０−セファデックス」―でケル濾過し
、０．２Ｎｌ￥１：酸で溶出させる、（２）０．０５％
トリフルオロ酢酸の３９％アセトニトリル水溶液中溶液
を用いた高圧液体クロマトグラフィー、および再ひ（３
）ゲル渥過を用いて精製すると標記の精製ペプチドを得
る。

実施例９ の製造 実施例１の方法により調製した４、２９　（１，５ｍＭ
）の１−Ｐｍｐ（４−ＭｅＢｚｌ　）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｒ−Ｚ）−Ｐｈｅ　−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（ｊ−Ｍ
ｅＢｚｌ）　−Ａｒｇ’（Ｔｏｓ）−Ｇｌｙ　樹脂の４
５ｍ１蒸留アニソール中溶液を、無水弗化水素（４０ｍ
＋＋）で０℃にて１時間処理する。真空下で蒸発乾固し
た後、残渣を無水エーテルで処理し、抽出すると１．３
３ｇの粗ペプチドか得られる。得られた脱保護されたオ
クタペプチドを、前記実施例２と同様に、’ｏ、　ｏ　
Ｉ　Ｍのフェリンアン化カリウム溶液を用いてｐＨ７〜
７．５にて色が３０分間持続するまで環化する。前記と
同様にして標記化合物を単離精−する。

（ＮＨＣ３Ｈ７）の製造 前記と同様にして調製した０１ミリモルの（Ｐｍｐｌ−
Ｄ−Ｔ’ｙｒ（ＥＥ）２−Ｖａｌ４−ｄｅｓＰｒｏＺＧ
ｌｙ）ＡＶＰ　および０．１−：　ＩＪモモルｎ−プロ
ピルアミンの２０ｍ１ジメチルホルムアミド中混合液を
２３〜（０，１１ミリモル）のＤＣＣおよび１４１確（
０，１１ミリモル）のＨＢＴと室温にて２時間反応させ
る。揮発性成分を蒸発させると浦状残渣が得られる。こ
の生成物を（１）ゲル濾過（Ｇ−１０−セファデックス
、溶出液ｉｏ、２Ｎ酢酸）、（２）高圧液体クロマトグ
ラフィー（０，（１５％ＴＦＡの３９％アセトニトリル
水溶液中溶液使用）、および再び（３ノゲルｐ過を用い
て精製すると標記ペプチドの精製物が得られる。

製造および実施例２の化合物を製造するためのその使用 ４．８７９　（１５ミリモル）のＢｏｃ　Ｃｙｓ（４Ｍ
ｅＢｚｌ　）を３０ｍ１．のエタノールにとかし、１０
罰の氷を添加する。次いで炭酸水素セシウムの水性溶液
でｐＨを７．１に調整する。

混合物を製綱し、残渣に５０ｍ１のトルエンを加え３回
蒸発させる。この残渣を、減圧上室温にて一夜静置する
。

該塩を３５ｍ１のジメチルホルムアミドに溶かし、５ｇ
の市販のクロロメチルフェニル樹脂を添加する。混合物
を５３℃にてアルゴン雰囲気下で一夜撹拌する。

混合物を濾過し、樹脂をジメチルホルムアミド（６０ｍ
ｌ、５回）、ＤＭ、Ｆ／水（９：１．６０ｒａｌ。

５回）、ＤＭＦ　（６０ｍｌ、５回）およびエタノール
（６０ｍｌ、６回）で洗浄する。次いでこれを減圧下、
室温にて２日間乾燥する。

ペプチド鎖を、前記のベックマン合成器で、Ａｓｎ、Ｖ
ａｌ　、　Ｐｈｅ　、　Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ　）のＢｏ
ｃ誘導体、およびＳ−（４−ＭｅＢｚ　ｌ　）　Ｐｍｐ
誘導体を用いてつないでいく。

樹脂をとりだし手動振とう機にいれる。

該ペプチド樹脂０．８６＆を１．５ｍＡ！のアニソール
で処理し、１５ｍ／の弗化水素中Ｏ℃にて６０分間撹拌
する。次いで弗化水素をアスピレータ−での減圧■０℃
にて除去する。

残渣を次いで２５ｍ１のエーテル（廃棄）で３回洗浄し
、ペプチドをジメチルホルムアミドおよび３０％酢酸（
１０＋ｘｌ、４回）で溶出させる。この溶液を２４の脱
気した水に添加し、水酸化アンモニウムでｐＨを７．０
に調節する。０．　ＯＩ　Ｍのフエリシアン化カリウム
３５ｍ６を徐々に添加する。

次いで酢酸でｐＨを４．５に調節し、混合液を２５ｇ（
湿潤重量）の弱塩基性イオン交換樹脂（Ａｇ−３Ｘ４１
Ｒ−４５）とともζこ３０分間撹拌する。１回濁液を濾
過し、樹脂を４００　ｍ、ｌの３０％酢酸で２回洗浄す
る。

次いでＰ液を０１８フラツンユカラム（７Ｘ１６刷）に
付す。次にカラムを水で洗浄しく４００ｍ１．３回）、
ペプチドをアセトニトリル／′水／ＴＦＡ（５０：　５
０　：　０．２５　）でｒ６出させる。フラクション３
０および３６を合し、濃縮し、凍結乾燥すると標記のＣ
ｙ　ｓ　（ＯＨ）が遊離した環状中間体が得られる。

クリセロール中Ｆ　Ａ　Ｂマススペクトル：８２７（Ｍ
４−Ｈ）　、８２５（Ｍ−１−１）−ＣＹＳ　２　Ｑ　
ｒｑを当量のＡｒｇ−Ｇｌ　ｙ（Ｎｌ−１２）　、１−
１ｃＩ　とＤＣＣおよびＨＢＴの存在下にジメチルホル
ムアミド中で反応させると実施例２の化合物が得られる
。同様にして、ＣｙｓをＡｒ　ｇ　（ＨＣＩ　）　（Ｏ
Ｍｅ　）と反応させ、エステルを穏やかに加水分解する
と、実施例４の化合物の親化合物である酸が得られる。

所望により、この化合物をカリウム塩として単離する。

実施例１２ 実施例１および２のペプチド合成で、２単位のＡ　ｒ　
ｇ　Ｇ　Ｉｙ　（Ｎ１（２）を得る。

実施例１および２において、８位のＬ−Ａｒｇ（が得ら
れる。

実施例１および２のペプチド合成器での連続反応におい
て、３単位のアミノ酸をＢｏｃ−Ｌ−Ｐ’ｈｅ　（４−
Ｍｅ）に、４単位をＢｏｃＬ−Ｎｌｅ　に２きかえると
、れる。

４単位を１（ＢＴを用いて保護していｐいＧｌｎと］ Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｙ（ＮＨ２）　が得られる。

実施例１および２の反応において２単位でＢｏｃ−１）
−Ｐｂａ、４単位でＢｏｃ−Ｃｂｇ　におきかえると、
か得られる。

実施例１および２において、Ｐｍｐをβ−（５−ベンジ
ルメルカプト−β、β−ンクロテトラメチレン）プロピ
オン酸におきかえると、Ｔｍｐ’　−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ
）２誘導体か得られる。

実施例１３ 実施例３および４のペプチド合成において、２（Ｎ１−
１２）ト得られる。

実施例４において、ＣＭ　’Ｒ樹脂を用いて７単位をＤ
ＩＡｒｇ（Ｔｏｓ）におきかえると、Ｐｍｐ−Ｄ−Ｔｙ
ｒ　（Ｅｔ）実施例３のペプチド合成器での連続反応に
おいて、３単位のアミノ酸をＢｏｃ、−Ｌ−Ｐｈｅ　（
４−Ｍｅ　）に、４単位をＢｏｃ−Ｎｌｅでおきかえる
と、Ｐ＋ｎｐ　−Ｄ＝−ｆｙ　ｒ　（得られる。

実施例３の４単位のアミノ酸をＢｏｃ−Ｎｖｌでおき実
施例３の反応において、２単位をＢｏ　ｃ　−１）−Ｐ
　ｂａ実施例３において、前記の如（ＣＭＲを用いて７
単位をＬ−Ｌｙ　ｓ　（Ｂｏｃ　）におきかえると、Ｐ
ｍｐ−Ｄ−ｍ−−］ Ｔｙｒ（Ｅリ−ｐＨｅ−Ｖａ　ｌ　−Ａｓ　ｎ−Ｃｙ　
ｓ　−Ｌ−Ｌｙ　ｓ　（ＯＨ）が得られる。

ＮＨ２）か得られる。

実施例３において、Ｐｍｐをβ−（Ｓ−ベンジルメルカ
プト−β、β−ンクロテトラメチレン）プロピオン酸（
Ｔｍｐ）におきかえると、Ｔｍｐ　１−Ｄ−Ｔｙ　ｒ　
（同様にして、Ｐｍｐ　−Ｄ−Ｔｙ　ｒ　（Ｅ　ｔ　）
　−Ｐｌｌｅ　−Ｖａ　ｌ　−Ａｓ　ｎ物性値 分子式：Ｃ４６Ｈ６７Ｎ１１０９Ｓ２ 分子量：９８１．４４ アミノ酸分析：　Ａｓｐ（１，００）、Ｃｙｓ　（０，
４）、Ｖａｌ（１，０１）、Ｔｙｒ　（０，６２）、Ｐ
ｈｅ（１，０９）、Ａｒｇ（１，１２）クロマトグラフ
ィー分析値 溶　媒　Ｒ（値 薄層クロマトグラフ　１：１：１：１　０．６９９イー
（ＴＬＣ）　４　：　１　：５　０．４９高圧液体りＣ
１７）グ　０．１％ＴＦＡ／Ｃ１（３ＣＮ系ラフイー（
ＨＰＬＣ）　ｋ’１８．１１等濃度　７．５６ 濃度勾配法　１８．１１ ブタ　ｋｂ　４．４Ｘ１０　”Ｍ フタ　ｋ・　１．２Ｘ１０９Ｍ ヒ　ト　ｋ　・　４．０ｘｌＯ’Ｍ ラットＥＤ３ｏｏ２７．６１ＪＩｇ／ｋＱＦＡＢ　マス
スペクトル：（Ｍ七１−ｉ）モ　９８２同様にして、ｉ
’ｍｐ−Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ　）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａ
ｓｎ物性値 分子式：Ｃ４６Ｈ６７Ｎ９０９Ｓ２ 分子量：９５３．４３２ アミノ酸分析：　Ａｓｐ（１，００）、Ｃ’ｙＳ（０，
４３）、Ｖａｌ（０，９８）、Ｔｙｒ（０，５５）、Ｐ
ｈｅ（０，９８）、Ｌｙｓ（１，０１）溶　媒　Ｒ（値 薄層クロマトグラフ　（１：１：ｉ：１）　０．６３４
イー（ＴＬＣ）　（４：１：５）　０．３５７に圧液体
り０７トグー、、（０，１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）ラフ
イー（ＨＰＬＣ） 等濃度　ｋ’　３．９３ 濃度勾配法　ｋ’１１．９３ ９ ブタ　５．８Ｘ１０　Ｍ ヒ　ト　３．９Ｘ１０−９ ＥＤ３ｏｏラット６５，６　およ び６４．７ ＦＡＢ　マススペクトル：　（Ｍ−）−Ｈ）　９５４分
子式”４６Ｈ６６”１０°１０５２ 分子量：９８２．５ アミノ酸分析：　Ａ、ｓｐ　（１，００）、ＣｙＳ（０
，２７）、Ｖａｔ（０，９５）、Ｔ’）’　ｒ　（０，
５０）、Ｐｈｅ　（０，９９）、Ａｒ　ｇ　（１，０７
）ペプチド含ｍニア４．９３％（アミノ酸分析）溶　媒
　Ｒ４値 薄層クロマトグラフ　（１：１：１：１）　０．６イー
（ＴＬＣ）　（４：１　：５）　０．３高圧液体クロマ
ドグ　（０，１％ＴＦＡ／Ｃ１−１３ＣＮ）ラフイー（
ＨＰＬＣ） 等濃度　１′ｆ５・９７ 濃度勾配法　ｋ’−１４，７４ ＦＡＢ　マススペクトル：（Ｍモｎ）’　９８３（Ｍ−
１−１）−９８１ 実施例１４ 非経口投与単位組成物。

１０μｇの実施例２の環状ペプチドの滅菌乾燥粉末を含
有する非経口注射用調製物を以下のようにして調製する
。１０μｇのペプチドアミドを２０■のマンニトールの
水性溶／＆１　ｒｒｄ）にとかす。該溶液を滅菌条件下
に濾過し、２罰のアンプルにつめ、凍結乾燥する。この
粉末を、水腫を患っていて、抗−ＡＤＨ作用機序を許容
し得る患者に筋肉内または静脈内注射のいずれかをする
前に復元する。

必要に応じて注射を毎日１〜５回繰返すか、または静脈
点滴を行なう。本発明の他のペプチドも、同様にして製
造し、使用する。

経鼻投与甲立組成物 実施例５の生成物のような本発明の環状ペプチドの微粉
末３０ｇを、７５２ηのベンジルアルコールと、１．３
９５９の沈殿防止剤、例えは、市販の高級脂肪酸の半合
成グリセリド混合物との混合物に盾、濁させる。懸濁液
は計量バルブを有する１０１Ｈのエアゾル容器に入れ、
エアゾル推進薬を加える。

この内容物は１００単位投与量からなり、これを水ｊ厘
患者に１日につき１〜６回鼻回内腔内投与なう。

特計出ｊＪ［１人　スミスクライン・ベックマン・ニー
ポソイション

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）デスプロリンバンプレシン桔抗物質。 （２）式： 〔式中、ＰはＰｈｅまたはＰｈｅ　（４’　−Ａｌ　ｋ
   　）、ＸはＤ−ＰｈｅＳＤ−Ｖａｌ、Ｄ−ＮｖａｌＤ−
   Ｌｅｕ、　Ｄ−１１ｅ１Ｄ−Ｐｂａ。 Ｄ−Ｎｌｅ、　Ｄ−Ｃｈａ、　Ｄ−Ａｂｕ、　Ｄ−Ｍｅ
   ｔ％Ｄ−Ｃｈｇ、　ＤまたはＬ−Ｔｙｒ、あるいはＤま
   たはＬ−Ｔｙ　ｒ　（Ａｌ　ｋ　）、ＹはＶａｌ　、　
   １１　ｅ、　Ａｂｕ、　Ａｌ　ａ、　ＣｈｇｌＧＩｎ、
   　Ｌｙｓ　、　Ｃｂａ、Ｎｌｅ。 Ｐｈｅ　、　ＬｅｕまたはＧｌ　ｙ　、”　ＺはＤ−Ａ
   ｒｇ、　Ｌ−Ａｒｇ、　Ｄ−ＵｙｓまたはＬ−Ｌｙｓ、
   ＡはＧ　ｌ　ｙ　（ＮＨ２）、Ｇａｙ、Ｇｕｙ（Ａｌｋ
   ）、ＯＨ，ＮＨ２またはＮＨＡｌｋ、Ａｌｋは炭素数１
   〜４の低級アルキル、ｎは０〜２を意味する〕で示され
   るポリペプチド、その医薬上許容される塩、プロドラッ
   グエステルまたは複合体。 （３Ｊ　ＡがＮ［］２である前記第（１）項の化合物。 （４）Ｃ，１−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
   タメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チ
   ロシン）−４−バリン−７−ゾスプロリンー８−アルギ
   ニン〕パップレシンである前記第（１）項の化合物。 （５）　Ｃｌ　−（β−メルカプト−β、β−シクロペ
   ンタメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−
   チロシン）−４−バリン−７−ゾスプロリン＝８−アル
   ギニン−９−デスグリシン〕バンプレンンである前記第
   （１）項の化合物。 （６）ＣＩ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタ
   メチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロ
   シン）−４−α−アミノ酪酸−７−デスプロリン−８−
   アルギニン−９−デスグリシン〕バンプレシンである前
   記第（１）項の化合物。 （７）Ｃ１−ＣＩ−メルカフトーβ、β−シクロペンタ
   メチレンプロピオン酸）−２−チロシン−４−グルタミ
   ン−７−ゾスプロリンー８−アルギニン〕バンプレシン
   である前記第（１）項の化合物。 （８）ＣＩ−（β−メルカフトーβ、β−シクロペンタ
   メチレンプロピオン酸）−２−チロシン−４−グルタミ
   ン−７−デスプロリン−８−アルギニン−９−デスグリ
   シン〕パンプレンンである前記第（１ン項の化合物。 （９）前記第（１）項から第（８）項の化合物および医
   薬担体からなることを特徴とするバンプレシン拮抗剤医
   薬組成物。 ＧＯ所望により保護された式： 〔式中、ＰはＰｈｅまたはＰｈ、ｅ　（４’−Ａｌ　ｋ
   　）、ＸはＤ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｖａｌ　、Ｄ−Ｎｖａ、
   　Ｄ−Ｌｅｕ、　Ｄ−１１ｅ、　Ｄ−Ｐｂａ　。 Ｄ−Ｎｌ　ｅ　、　Ｄ−Ｃｈａ　、　Ｄ−Ａｂｕ　、　
   Ｄ−Ｍｅ　ｔ　、　Ｄ−Ｃｈｇ　、　Ｄ−Ｔｙ　ｒ　。 Ｌ−ｆｙｒ、　Ｄ−Ｔｙｒ（Ａｌｋ）またはＬ−Ｔｙ　
   ｒ　（Ａｌ　ｋ　）、ＹはＶａｌ　、　Ｉｌｅ、　Ａｂ
   ｕＳＡｌａ、　Ｃｈｇ、　Ｌｙｓ、　Ｃｈａ、　Ｎｌｅ
   、Ｐｈｅ。 Ｇｉｎ、ＬｅｕまたはＧｌｙ、ＺはＤ−Ａｒ　ｇ　、　
   Ｌ−Ａｒ　ｇ　、　Ｄ−Ｌｙｓ　、　Ｌ−Ｌｙｓ　、単
   結合または末端０ｆ−Ｉ％Ａはｃｔｙ（ＮＨ２）　、Ｇ
   　ｌ　ｙ　、　Ｇ　ｌ　ｙ　（ＮＦＩ　Ａｌ　ｋ　）　
   、ＯＦ（１１’１ＦＩ２またはＮＨ＜Ａｌｋ）、Ａｌｋ
   は炭素数１〜４の低級アルキル、ＱｌおよびＱ２はそれ
   ぞれ水素または置換可能な基、Ｐａｐはβ位にＳＱｌが
   結合し、アルキレン鎖中に５〜７個のメチレン単位を有
   するβ、β−シクロアルキレンプロピオン酸を意味する
   〕 で示される化合物を環化し、要すれば、次いで、適宜の
   順序で、 （ａ）保護基の除去、 （ｂｌ該Ｃｙ　ｓ　（ＯＨ）　６または、もし存在する
   ならば、Ｚ　（ＯＨ）　７化合物と酸保護またはアミド
   のいずれかの形態のジペプチドＺ−Ａあるいはアミノ酸
   ＡまたはＺとの反応、または （Ｃｌその医薬を許容される塩またはプロドラッグの形
   成 を行なうことを特徴とする式（１）： 〔式中、ＰはＰｈｅまたはＰｈｅ（４’−Ａｌｋ）、Ｘ
   はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｎｖａ、Ｄ−Ｌｅｕ、
   Ｄ−１１ｅ、Ｄ−１’ｂａ。 Ｄ−Ｎｌ　ｅ　、　Ｄ−ＣｈａｌＤ−ＡｂｕＳＤ−Ｍｅ
   ｔ　、　Ｄ−ＣｈｇｌＤ−ＴｙｒｌＬ−Ｔｙ　ｒ　、　
   Ｄ−Ｔｙ　ｒ　（Ａｌ　ｋ　）またはＬ−Ｔｙ　ｒ　（
   Ａｌ　ｋ　）、ＹはＶａｔ、Ｉｌｅ、ＡｂｕｌＡｌａ、
   Ｃｈｇ、Ｌｙｓ、Ｃｈａ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ。 Ｇｌｎ％ＬｅｕまたはＧｌｙｌＺはＤ−Ａｒｇ、　Ｌ−
   ＡｒｇｌＤ　−ＬｙｓまたはＬ−Ｌｙｓ、、ＡはＧｌ　
   ｙ　（Ｎｌ−１２）　、Ｇｌ　ｙ　、　Ｇｌ　ｙ　（Ｎ
   Ｈ−Ａｌ　ｋ）　、　ＯＨ，ＮＨ２またはＮＨ（Ａｌｋ
   ）、Ａｌｋは炭素数１〜４の低級アルキル、ｎは１〜２
   を意味する〕で示される化合物、あるいはその医薬上許
   容される塩またはプロドラッグの製法。