JPS5974998A - ヒト血清中の乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性の個別測定方法 - Google Patents
ヒト血清中の乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性の個別測定方法Info
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- JPS5974998A JPS5974998A JP18467382A JP18467382A JPS5974998A JP S5974998 A JPS5974998 A JP S5974998A JP 18467382 A JP18467382 A JP 18467382A JP 18467382 A JP18467382 A JP 18467382A JP S5974998 A JPS5974998 A JP S5974998A
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- isoenzymes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は乳酸脱水素酵素（Ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒ
ｏｇｅｎａｃｅ、ＥＣ１，１，１，２７以下ＬＤｆ（と
略す）の各イソ１春素を含む塗体中のイソ酵素の活性を
それぞれ個別に測星する方法に関する。詳しくは種りの
ｐＩ（における各イン酵素の安定性の差を利用してそれ
ぞれのイソ酵素活性を測定する方法に関する。
ｏｇｅｎａｃｅ、ＥＣ１，１，１，２７以下ＬＤｆ（と
略す）の各イソ１春素を含む塗体中のイソ酵素の活性を
それぞれ個別に測星する方法に関する。詳しくは種りの
ｐＩ（における各イン酵素の安定性の差を利用してそれ
ぞれのイソ酵素活性を測定する方法に関する。
Ｌ Ｉ） Ｈは次の反応を触媒する。
Ｌ−乳酸十Ｎ Ａ Ｉ）” ；＝プビルビン１賀十Ｎ
Ａ Ｄ Ｈ一般にＬ Ｉ） Ｈ＆） １分子１１よそれ
ぞれ４個のサブユニットからなる包合体（４１を体）と
して存在する。サブユニットには心萌型サブユニット（
ＩＩ）と骨烙崩型すブユニツ） （Ｍ）の２種類があり
、これら４個づ＼の組合ぜから、Ｈ４゜Ｈ，Ｍ、 Ｈ，
Ｍ、 、 ｉ（Ｍ、およびＨ４の５種・（、自のイソ酵
素が存在するが、これらイソ酵素の臓器分蒲（エフ・ポ
ルプレスキー等ニブログレス イン カルデイオバスキ
ュラ ディシーズ６巻６３頁１９６３年）は＠１図に示
すように１蔵器間で大べな差がある。したがって血清中
の各イン酵素の活性を測定することす」：臨床診ｊ新の
精度向上に役立つっ ヒト血清中のＬ ｌ） Ｈ各イン酵素の活性を測定する
場合、５種のイソ酵素間の蛋白”１丁と（−−Ｃの性状
の差、酵素化学的な差などに基づいてそれぞれのイソ酵
素を互に分随する必要があり、既に（１１ｆ々の方法が
考案されている。それらの中には電気泳動あるいケ］、
イオン交換クロマトグラフィーによって分離分画し、そ
れぞれの分画のＬ Ｄ Ｈ活性を測定する方法がある。
Ａ Ｄ Ｈ一般にＬ Ｉ） Ｈ＆） １分子１１よそれ
ぞれ４個のサブユニットからなる包合体（４１を体）と
して存在する。サブユニットには心萌型サブユニット（
ＩＩ）と骨烙崩型すブユニツ） （Ｍ）の２種類があり
、これら４個づ＼の組合ぜから、Ｈ４゜Ｈ，Ｍ、 Ｈ，
Ｍ、 、 ｉ（Ｍ、およびＨ４の５種・（、自のイソ酵
素が存在するが、これらイソ酵素の臓器分蒲（エフ・ポ
ルプレスキー等ニブログレス イン カルデイオバスキ
ュラ ディシーズ６巻６３頁１９６３年）は＠１図に示
すように１蔵器間で大べな差がある。したがって血清中
の各イン酵素の活性を測定することす」：臨床診ｊ新の
精度向上に役立つっ ヒト血清中のＬ ｌ） Ｈ各イン酵素の活性を測定する
場合、５種のイソ酵素間の蛋白”１丁と（−−Ｃの性状
の差、酵素化学的な差などに基づいてそれぞれのイソ酵
素を互に分随する必要があり、既に（１１ｆ々の方法が
考案されている。それらの中には電気泳動あるいケ］、
イオン交換クロマトグラフィーによって分離分画し、そ
れぞれの分画のＬ Ｄ Ｈ活性を測定する方法がある。
しかしこれらの方法は技術的にかなりＰν雑であり、し
かも手間と時間がか＼る上に分離操作中に＜１（（視で
きない梶Ｉｔ、（の失活が起るので、［」常の臨宋検査
に実線することｅよ困ＩＩＩＰ、である。したがってヒ
ト血清中の■、Ｄ Ｈの各イン酵素の活性判定の／ζめ
の１ｉｉｉ便な方法の開発が望まれているっ 心筋型Ｌ ＩＪ ＩＩイソ酵素群は骨格プ見Ｌ Ｄ Ｈ
イソ酵素にｔよりもアルカリ性ｐＨ（／こ秒いて安定で
あり、−一の件・ｃブ１を利用することにより心筋１〜
！！イソ酵素１；イ・をｔｉｉ） Ｉ更にしかも正確に
測定できることを本発明者等はすでに・寺願昭５７−５
３３５６で開示したが、さらに研究を進めた結果、ＩＨ
々のｐｉ（でのそれぞれのイソ酵素の安定性の差から個
々のイソ酵素活性を個別に測′１ビし百することを発見
し本発明を完成した。
かも手間と時間がか＼る上に分離操作中に＜１（（視で
きない梶Ｉｔ、（の失活が起るので、［」常の臨宋検査
に実線することｅよ困ＩＩＩＰ、である。したがってヒ
ト血清中の■、Ｄ Ｈの各イン酵素の活性判定の／ζめ
の１ｉｉｉ便な方法の開発が望まれているっ 心筋型Ｌ ＩＪ ＩＩイソ酵素群は骨格プ見Ｌ Ｄ Ｈ
イソ酵素にｔよりもアルカリ性ｐＨ（／こ秒いて安定で
あり、−一の件・ｃブ１を利用することにより心筋１〜
！！イソ酵素１；イ・をｔｉｉ） Ｉ更にしかも正確に
測定できることを本発明者等はすでに・寺願昭５７−５
３３５６で開示したが、さらに研究を進めた結果、ＩＨ
々のｐｉ（でのそれぞれのイソ酵素の安定性の差から個
々のイソ酵素活性を個別に測′１ビし百することを発見
し本発明を完成した。
本発明（はヒト血清をアルカリ性領域の種々異なるｐ
ＩＴのもとで予加【１県することを特徴と１″るヒトイ
１Ｆ清中の礼酸脱水素ｔＷ素の各イソ酵素活性を１固別
に測定する方法にかんする。
ＩＴのもとで予加【１県することを特徴と１″るヒトイ
１Ｆ清中の礼酸脱水素ｔＷ素の各イソ酵素活性を１固別
に測定する方法にかんする。
この出合各イソ酵素として、−ト述の？シ４？願昭５７
−５３３５６明卸１書記ｒ＋ｉ１．の清明では酵素活性
上からも＝１だ蛋白質としても高度に精製されたものを
用いて試験したのに反し、本発明では酵素活性上は極め
−〔高度に精製されているが蛋白質としてはそれ程純度
の商〈ないものを使用しかつ精製してからあまり時間を
１６、かすに用いたがこれは実際に血清試料を用いた場
合にはより実状に則したものである。
−５３３５６明卸１書記ｒ＋ｉ１．の清明では酵素活性
上からも＝１だ蛋白質としても高度に精製されたものを
用いて試験したのに反し、本発明では酵素活性上は極め
−〔高度に精製されているが蛋白質としてはそれ程純度
の商〈ないものを使用しかつ精製してからあまり時間を
１６、かすに用いたがこれは実際に血清試料を用いた場
合にはより実状に則したものである。
さらにこのイソ酵素の違いによって意外にも本発明の方
法が前記！侍願昭５７−５３３５ （ｉの方法の場合よ
りさらに細かく各イソ酵素の個別測定ができることとな
った。
法が前記！侍願昭５７−５３３５ （ｉの方法の場合よ
りさらに細かく各イソ酵素の個別測定ができることとな
った。
これらについて参考例により詳細に説明する。
参考例１
５７、５ ｍ ｍｏｌ／ ｔのＬ−乳酸ヲ・含む異なる
ｐ Ｈの２３ （ｌ ｔｎ ｍｏｌ ／ ｔ ３−シ
クロヘキシルアミノフ゛ロパンスルホン自’２ （以”
Ｐｃ Ａ Ｐ Ｓと略す） Ｎ ａ ＯＨ緩衝液１．
０ ｍｅにそれぞれ精製したヒ） Ｌ ｌ） Ｈの各イ
ン酵素溶液０．１ ｍ（！を添加し、３０℃で１ｏ分間
予加渦シ２、ただちにＮ ＦＬ ＯＨで中和した１ １
５ ｍｍｏｌ ／ ＩＮＡ Ｉ）”水溶液５０７１ Ｌ
を加え同温度（３０℃）でＮＡ ｌ）添加後の１分後か
ら６０秒間の波長３４０ｍｍの吸光度の変化を測定し活
性を求めた。次に対１！く工として、Ｌ−乳酸およびＮ
Ａ Ｄ’を基質としｐ １１８．７で測定する公知の
ニス、エヌ。
ｐ Ｈの２３ （ｌ ｔｎ ｍｏｌ ／ ｔ ３−シ
クロヘキシルアミノフ゛ロパンスルホン自’２ （以”
Ｐｃ Ａ Ｐ Ｓと略す） Ｎ ａ ＯＨ緩衝液１．
０ ｍｅにそれぞれ精製したヒ） Ｌ ｌ） Ｈの各イ
ン酵素溶液０．１ ｍ（！を添加し、３０℃で１ｏ分間
予加渦シ２、ただちにＮ ＦＬ ＯＨで中和した１ １
５ ｍｍｏｌ ／ ＩＮＡ Ｉ）”水溶液５０７１ Ｌ
を加え同温度（３０℃）でＮＡ ｌ）添加後の１分後か
ら６０秒間の波長３４０ｍｍの吸光度の変化を測定し活
性を求めた。次に対１！く工として、Ｌ−乳酸およびＮ
Ａ Ｄ’を基質としｐ １１８．７で測定する公知の
ニス、エヌ。
プール等の方法（クリニカル ケミス） ＩＪ −２４
巻８２８〜８３１貞１９７８年）によって同一検体の活
性を測定しその値を１００として上記測ｔＪ１４活件の
相対活性を求めた。子の結果′／Ｘ：第２図に示す。た
ソしイソ酵素をＩ−Ｔ、。
巻８２８〜８３１貞１９７８年）によって同一検体の活
性を測定しその値を１００として上記測ｔＪ１４活件の
相対活性を求めた。子の結果′／Ｘ：第２図に示す。た
ソしイソ酵素をＩ−Ｔ、。
Ｈ、■ｆｆ、Ｈ７ＩＶ・＋２ 、ＨＭ、、Ｍ４をもって
表示−４る。
表示−４る。
参考例２
参考例１にも・いて異なるｐ Ｈを探る代りにｐ １１
を’Ａ、４．９．８，１０．２５，１０．６にそれぞれ
固ｊ％ｌし、予加温時間を１０分とする代りに１分から
１９分の異なる時１１１１予加温するほかはシ４例１と
同様に操作し相対活性を求めた。その結果をｐ Ｉ−Ｔ
９．４についてｔｉｔ、第３図に、ｐ Ｈ９，８につ
いてはｉａ ４図に、ｐ Ｈ１，０，２５についてｔよ
第５図にｐ Ｈ’ｌ （１６については第６図に示す。
を’Ａ、４．９．８，１０．２５，１０．６にそれぞれ
固ｊ％ｌし、予加温時間を１０分とする代りに１分から
１９分の異なる時１１１１予加温するほかはシ４例１と
同様に操作し相対活性を求めた。その結果をｐ Ｉ−Ｔ
９．４についてｔｉｔ、第３図に、ｐ Ｈ９，８につ
いてはｉａ ４図に、ｐ Ｈ１，０，２５についてｔよ
第５図にｐ Ｈ’ｌ （１６については第６図に示す。
殊考例１の結果よりｐ Ｈ９，４〜９．８ではＭ４が失
活して存在しないためＨ，、Ｈ，Ｍ。
活して存在しないためＨ，、Ｈ，Ｍ。
Ｈ７Ｍ、、ＪＡＭ、の活性測定ができる。同様にしてｐ
１１９．８〜１ （１，２５でけ■情、ＩＩ、Ｍ。
１１９．８〜１ （１，２５でけ■情、ＩＩ、Ｍ。
Ｈ，Ｍ、の活性測定ができ、ｐ Ｈ１（１，２５〜１０
．６ではＨ４、）１．３ Ｍの活性が測定でき、ｐ Ｉ
Ｉ １ （１，６以上ではＨ４のみの活性…Ｉ］定がで
きる。また前記プール等の方法（ｐ ｒｉ ８．７ ）
では全てのイソ酵素の活性測定ができる。以上のことか
ら次の通り各イソ酵素の飼料活性測定ができる。
．６ではＨ４、）１．３ Ｍの活性が測定でき、ｐ Ｉ
Ｉ １ （１，６以上ではＨ４のみの活性…Ｉ］定がで
きる。また前記プール等の方法（ｐ ｒｉ ８．７ ）
では全てのイソ酵素の活性測定ができる。以上のことか
ら次の通り各イソ酵素の飼料活性測定ができる。
（Ｄ Ｈ４の活性 ： Ｍ、 、 １１Ｍ、 、 Ｉ
−１，Ｍ２．１１．、 Ｍが失活する条件で測定し た１直 ■Ｈ，Ｍの活性 ： Ｍ４． ｒ（Ｍ、 、 Ｈ，Ｍ、
は失活するが）Ｉ、Ｍは失活しな い条件で（ｆｌｌ定しｔ（直から （１つで求めたＨ ４の値を差 引いた１直 Ｃ４）ＩＩ、Ｍ２の活性 ：入１４． ＨＭ３ は失
活するがＴＩ、Ｍ、ｆｃｌ：失活しないぞ６件 で測定した値からので求 めたＩＩ４ と■で求めた １１３Ｍの値を差引いた値 ［株］月Ｉ Ｍ、のン占１牛 ：心、・１４は失Ｙ占才
ろがＴＴＭ、、は失活しない条件で測定し た値から（１）で求めたＩＩ４ と■で求めたＨ 、 〜１と（３） で求めだＨ，、Ｍ ２の値を ｉ底引いたｉ直 （ｊｊ） Ｍ ４の活性 ；全てのイソ酵素の失活し
ない条件で測定した値か ら（１）で求めたＨ 、と■で 求めたＨ３Ｍと■で求め たＨ、Ｍ、と■で求めた １１Ｍ、の値を差引いた値 本発明は倹（イにをアルカリ性領域に訃ける異なるｐ
Ｈのもとて一定時間、一定温度で予加温した後、公知の
Ｌ Ｉ） Ｈ測軍法によって活性を測定し検体中の各イ
ソ酵素活性をそれぞれ飼料に測定する方法である。本発
明によればＴ） Ｈを適当に変えることにより各イソ酵
素が共存している血清のような塗体に訃いても個々のイ
ソ酵素活性が測定できる。
−１，Ｍ２．１１．、 Ｍが失活する条件で測定し た１直 ■Ｈ，Ｍの活性 ： Ｍ４． ｒ（Ｍ、 、 Ｈ，Ｍ、
は失活するが）Ｉ、Ｍは失活しな い条件で（ｆｌｌ定しｔ（直から （１つで求めたＨ ４の値を差 引いた１直 Ｃ４）ＩＩ、Ｍ２の活性 ：入１４． ＨＭ３ は失
活するがＴＩ、Ｍ、ｆｃｌ：失活しないぞ６件 で測定した値からので求 めたＩＩ４ と■で求めた １１３Ｍの値を差引いた値 ［株］月Ｉ Ｍ、のン占１牛 ：心、・１４は失Ｙ占才
ろがＴＴＭ、、は失活しない条件で測定し た値から（１）で求めたＩＩ４ と■で求めたＨ 、 〜１と（３） で求めだＨ，、Ｍ ２の値を ｉ底引いたｉ直 （ｊｊ） Ｍ ４の活性 ；全てのイソ酵素の失活し
ない条件で測定した値か ら（１）で求めたＨ 、と■で 求めたＨ３Ｍと■で求め たＨ、Ｍ、と■で求めた １１Ｍ、の値を差引いた値 本発明は倹（イにをアルカリ性領域に訃ける異なるｐ
Ｈのもとて一定時間、一定温度で予加温した後、公知の
Ｌ Ｉ） Ｈ測軍法によって活性を測定し検体中の各イ
ソ酵素活性をそれぞれ飼料に測定する方法である。本発
明によればＴ） Ｈを適当に変えることにより各イソ酵
素が共存している血清のような塗体に訃いても個々のイ
ソ酵素活性が測定できる。
本発明方法のアルカリ処理のｐ Ｈおよび緩衝液のセ１
（類は゛アルカリ性の領域であれば特に限定さｈないが
ｐ ＩＩの変化を考慮するとなるべく高い緩衝化をもつ
ものが好ましい。アルカリ処理のｔｌｉｉ！、 ｌ硯は
！侍に限定されないが現任国際生化学委岐会で活性測定
温度と］〜て准奨している３０℃前後が望ましい。また
アルカリ処理の時間＆ｉ参考例２に示したように各イソ
酵素およびｐＨによりその失活、計Ｉ用は！（′４つて
いるがいずれも１０分以上では活性の変動が少いことか
らＩ ０分以上が好ましい。本発明方ｉ’ａ １．ｔ−
ｒルカリ処ｊｌｌｊ後中４１１することなくそのヰ＼の
ｐＨで続く活性測定全することができるが、勿論アルカ
リ処理後中和しピルビン酸とＮ Ａ Ｉ） Ｈを一；ｙ
・ｉｖとする西独臨床化学会捷たＱ」、スカンジナビ
′ア臨宋ｆヒ学会によって勧告サノ１ている標準法を用
いてもよい。しかしこの方法では中和のための操作が加
わるので手間に力１１えてｒ青ｊＪ（の低ドの要因にも
なり易い。本弁明）ｊ法はこれらの叉点・かない上、自
動化もし易い。
（類は゛アルカリ性の領域であれば特に限定さｈないが
ｐ ＩＩの変化を考慮するとなるべく高い緩衝化をもつ
ものが好ましい。アルカリ処理のｔｌｉｉ！、 ｌ硯は
！侍に限定されないが現任国際生化学委岐会で活性測定
温度と］〜て准奨している３０℃前後が望ましい。また
アルカリ処理の時間＆ｉ参考例２に示したように各イソ
酵素およびｐＨによりその失活、計Ｉ用は！（′４つて
いるがいずれも１０分以上では活性の変動が少いことか
らＩ ０分以上が好ましい。本発明方ｉ’ａ １．ｔ−
ｒルカリ処ｊｌｌｊ後中４１１することなくそのヰ＼の
ｐＨで続く活性測定全することができるが、勿論アルカ
リ処理後中和しピルビン酸とＮ Ａ Ｉ） Ｈを一；ｙ
・ｉｖとする西独臨床化学会捷たＱ」、スカンジナビ
′ア臨宋ｆヒ学会によって勧告サノ１ている標準法を用
いてもよい。しかしこの方法では中和のための操作が加
わるので手間に力１１えてｒ青ｊＪ（の低ドの要因にも
なり易い。本弁明）ｊ法はこれらの叉点・かない上、自
動化もし易い。
ｔ’Ｆ、、に実施例によりさらに具体的に本発明を説明
する。
する。
実ノ°ｊｌｉ ｊ９１Ｊ
１・′ｌコ作（１）
５７、５ ＋ｎ ＋ｎｏｌ ／ ｔのＬ−乳酸を含むｐ
ＨＦ２．７の２３０ ｍ ｍｏｌ ／ ｔジェタノー
ルアミン−Ｈ，ＣＩ 緩１’４ ｆｌｌ １−、 Ｉ）
ｍｅにヒト血（ｆｉ ０．１ ｍｌを添加し、まず：
’、 （１℃で１０分間予加（、％し、１ｊ１：に水［
ｔ１夕化す）・リウムで中津１１シた１ 、１．５フフ
１＋ｎｏｌ ／ ｌ Ｎ Ａ Ｉ）＋水ｉ’Ｎ 液５
０ ｔｔ ｔを添加し、同温１１（（３０Ｃ）でＮ Ａ
］）＋添加１分１１からｆｉ ０４’し間の波長３４
０１圃の吸光１）℃変化を測定する。
ＨＦ２．７の２３０ ｍ ｍｏｌ ／ ｔジェタノー
ルアミン−Ｈ，ＣＩ 緩１’４ ｆｌｌ １−、 Ｉ）
ｍｅにヒト血（ｆｉ ０．１ ｍｌを添加し、まず：
’、 （１℃で１０分間予加（、％し、１ｊ１：に水［
ｔ１夕化す）・リウムで中津１１シた１ 、１．５フフ
１＋ｎｏｌ ／ ｌ Ｎ Ａ Ｉ）＋水ｉ’Ｎ 液５
０ ｔｔ ｔを添加し、同温１１（（３０Ｃ）でＮ Ａ
］）＋添加１分１１からｆｉ ０４’し間の波長３４
０１圃の吸光１）℃変化を測定する。
操作（２）
５７、５ ｍ ｍｏｌ ／ ｔのＬ−乳酸を含むｐ Ｉ
（９，４の２３０ｍｍｏｌ／／−ＣＡＰＳ−ＮａＯＨ緩
１４ｉｊ ｌ傷を用いその他は１・ψ作（１）と同様に
操作する。
（９，４の２３０ｍｍｏｌ／／−ＣＡＰＳ−ＮａＯＨ緩
１４ｉｊ ｌ傷を用いその他は１・ψ作（１）と同様に
操作する。
操作（３）
緩衝液のｐ Ｈ全９８とすもほか１１ｉ操作（２）と同
様に操作するっ ）ｌ■作（４） 緩衝液のｐ Ｈを１０．２５とするほかは操作（２）と
同様に操作する。
様に操作するっ ）ｌ■作（４） 緩衝液のｐ Ｈを１０．２５とするほかは操作（２）と
同様に操作する。
１・ψ作（５）
緩硝液のｐ Ｈを１０．６とするほかは操作（２）と同
様に操作する。
様に操作する。
以北操作（１）〜（５）によって検体の］、、 Ｉ）
Ｈ活１′（゛（直を測定しその値から次のように１．て
計算し倹１本中の４−イソ１孝素の・ｄ余＜、）１１ｉ
’ １’ Ａ０ヰづ始めに各イソｆ’１％素の１（￥：
知惜を含むｆ・（体（すなわち」［１目′シしたピトＬ
［Ｉ ＩＩイソ酵素のそれぞれ一定（ｌｏを予め強ア
ルカリ処理によって全てのり、 Ｄ Ｈを失活させ／こ
ヒト血清に添加し々ユもの）を用いその相対？古株がｐ
Ｈの変化によりどのように変化するかを操作（１）〜
（５）の堝イー１について予め、：ｌ：”、ｌべておく
。こ＼で相対活性ケ」、操作（２）〜（５）における活
性値を同−検体の操作（１）にしける活性値を１．０（
）としたときの値をもって表示する。本実施例では表１
の曲りであった。
Ｈ活１′（゛（直を測定しその値から次のように１．て
計算し倹１本中の４−イソ１孝素の・ｄ余＜、）１１ｉ
’ １’ Ａ０ヰづ始めに各イソｆ’１％素の１（￥：
知惜を含むｆ・（体（すなわち」［１目′シしたピトＬ
［Ｉ ＩＩイソ酵素のそれぞれ一定（ｌｏを予め強ア
ルカリ処理によって全てのり、 Ｄ Ｈを失活させ／こ
ヒト血清に添加し々ユもの）を用いその相対？古株がｐ
Ｈの変化によりどのように変化するかを操作（１）〜
（５）の堝イー１について予め、：ｌ：”、ｌべておく
。こ＼で相対活性ケ」、操作（２）〜（５）における活
性値を同−検体の操作（１）にしける活性値を１．０（
）としたときの値をもって表示する。本実施例では表１
の曲りであった。
授 １
・４イソ酵二）〜の相対活性とｐ ＩＩのＷし−と一盃
９−ｌは一１＠ ｌＩ４８８Ｍ １１２〜ｌｔ ＨＭｓ Ｍ４操作
（＋、１ｐＴ１８．７ １．（１０１ｆｌｏ １．０
（１１，００１，００＃ （２）ｐｌＩ Ｑ４ １．１
１ １．０４ （ン９６ ｆｌ、６１Ｊ Ｏ／７
（：Ｊ）ｐｌＩ９．８ １．２．１ １．０８ （
１，８８（ｌ Ｏ’ （４）ｐｉ（ＩＯ，２５Ｌ４
０ １．１）Ｏ（１０Ｃ１’ （５）ｐＨ１０，（ｉ
ｌ３８０ ０ ０ ０ζ）長から明らかな通り
ｊ＋ｖ４作（１） −Ｃｉｄ、 Ｌ Ｉ） ｌ（イソ酵
素の全ての活性が、操作（２）では■（４゜Ｈ，Ｍ、Ｈ
！Ｍ、、）（Ｍ、の活性が、操作（３）ではＨ４，Ｈ，
Ｍ、Ｈ，Ｍ、 の活性が、操作（４）ではＨ４，Ｈ，
Ｍ の活性が、操作（５）ではＨ４のみの活性がそれ
ぞれ一定の比で測定できる。
９−ｌは一１＠ ｌＩ４８８Ｍ １１２〜ｌｔ ＨＭｓ Ｍ４操作
（＋、１ｐＴ１８．７ １．（１０１ｆｌｏ １．０
（１１，００１，００＃ （２）ｐｌＩ Ｑ４ １．１
１ １．０４ （ン９６ ｆｌ、６１Ｊ Ｏ／７
（：Ｊ）ｐｌＩ９．８ １．２．１ １．０８ （
１，８８（ｌ Ｏ’ （４）ｐｉ（ＩＯ，２５Ｌ４
０ １．１）Ｏ（１０Ｃ１’ （５）ｐＨ１０，（ｉ
ｌ３８０ ０ ０ ０ζ）長から明らかな通り
ｊ＋ｖ４作（１） −Ｃｉｄ、 Ｌ Ｉ） ｌ（イソ酵
素の全ての活性が、操作（２）では■（４゜Ｈ，Ｍ、Ｈ
！Ｍ、、）（Ｍ、の活性が、操作（３）ではＨ４，Ｈ，
Ｍ、Ｈ，Ｍ、 の活性が、操作（４）ではＨ４，Ｈ，
Ｍ の活性が、操作（５）ではＨ４のみの活性がそれ
ぞれ一定の比で測定できる。
次に検体について行なった操作（１）〜（５）で得られ
た活性値をＡ、’−Ａ、とする。このＡ。
た活性値をＡ、’−Ａ、とする。このＡ。
〜Ａ、と上記表１から次の関係式がイ１）らね、る。
（１） Ａｅ ＝ＤＩ４：ｌ秦Ｘ１．３８（２） Ａ
４ ” ＣＨ４〕” Ｘ １．４ （１＋ＣＨｓ、
Ｍ ］” Ｘ １．０ （１（３）Ａ３＝ＣＴＩ４
）”Ｘｌ、２３−１−ＣＩＩ、Ｍ）”Ｘｌ、０８＋［：
Ｆ（、Ｍ、 ］ Ｘ０．８８ Ｃ４） Ａ２ ＝ＣＨ４）※Ｘ １．１．１ ＋ Ｃ
１１ｓへ４デ×１．０４＋［：Ｈ，Ｍ、 ：］’Ｘ０
．９（ｉ＋（ＩＩＭ、 ず（住６８（５） Ａｌ−
〔■■、：］※＋［：Ｈ，ＭＦ１〜口■、ｖｔ ：］※
＋（ＨＭ、）※＋［：Ｍ４：］” こ＼で〔〕秦はそれぞれのイソ酵素の操作（１）による
活性値を表わす。−ヒ式より［ｎ、］※〜〔Ｍ４〕※が
求められる。−１なわち式（１）より［：Ｈ４：］※
を求めこれを（２）式に代入してＣＩＩＲＭ〕※を求め
以「同様にして式（５）より〔Ｍ４］壷を求める。これ
らの値が検体中の各イン酵素の活性値となる。またこの
方法によれば必要なイソ酵素を任意に、あるいは群とし
て選んで測定することができる。
４ ” ＣＨ４〕” Ｘ １．４ （１＋ＣＨｓ、
Ｍ ］” Ｘ １．０ （１（３）Ａ３＝ＣＴＩ４
）”Ｘｌ、２３−１−ＣＩＩ、Ｍ）”Ｘｌ、０８＋［：
Ｆ（、Ｍ、 ］ Ｘ０．８８ Ｃ４） Ａ２ ＝ＣＨ４）※Ｘ １．１．１ ＋ Ｃ
１１ｓへ４デ×１．０４＋［：Ｈ，Ｍ、 ：］’Ｘ０
．９（ｉ＋（ＩＩＭ、 ず（住６８（５） Ａｌ−
〔■■、：］※＋［：Ｈ，ＭＦ１〜口■、ｖｔ ：］※
＋（ＨＭ、）※＋［：Ｍ４：］” こ＼で〔〕秦はそれぞれのイソ酵素の操作（１）による
活性値を表わす。−ヒ式より［ｎ、］※〜〔Ｍ４〕※が
求められる。−１なわち式（１）より［：Ｈ４：］※
を求めこれを（２）式に代入してＣＩＩＲＭ〕※を求め
以「同様にして式（５）より〔Ｍ４］壷を求める。これ
らの値が検体中の各イン酵素の活性値となる。またこの
方法によれば必要なイソ酵素を任意に、あるいは群とし
て選んで測定することができる。
本発明方法の２２力果について試験例により説明する。
試嘲例
各イソ（１１テ素の精製したものを実施例の操作（１）
により測定し、その活性値が１１４は６５ｍＵ／ ｍｅ
、 ＩＩ ３へ！１は８５ ＋＋＋Ｕ ／ ｍｅ 、
Ｈ２Ｍ ２は６３ｍＵ ／ ｍＡ 、 ＨＭ ｇ
は７４ ｍＵ ／ ｍｌおよびＭ４ｉＪ−７３ｍＵ ／
ｍｅのものを含む酵素試料を実ｂｆｑ例と同様に調製
し操作（１）〜（５）により活性１１１を測定した結果
、ＡＨＩ３６０ｍＵ／ｍ／、 Ａ２ Ｉ２ ７ ８
ｎ＋ Ｕ ／ ｍｅ 、 Δ ３ ＝
２ ３ ３ ｍ Ｕ ／ ｍｌ、Ａ４ ＝
ｉ、 ７ ９７１１Ｕ／ ＋ｎｅ、 Ａ５
−９ ２ｔｎＵ／ｍｅが得られた。
により測定し、その活性値が１１４は６５ｍＵ／ ｍｅ
、 ＩＩ ３へ！１は８５ ＋＋＋Ｕ ／ ｍｅ 、
Ｈ２Ｍ ２は６３ｍＵ ／ ｍＡ 、 ＨＭ ｇ
は７４ ｍＵ ／ ｍｌおよびＭ４ｉＪ−７３ｍＵ ／
ｍｅのものを含む酵素試料を実ｂｆｑ例と同様に調製
し操作（１）〜（５）により活性１１１を測定した結果
、ＡＨＩ３６０ｍＵ／ｍ／、 Ａ２ Ｉ２ ７ ８
ｎ＋ Ｕ ／ ｍｅ 、 Δ ３ ＝
２ ３ ３ ｍ Ｕ ／ ｍｌ、Ａ４ ＝
ｉ、 ７ ９７１１Ｕ／ ＋ｎｅ、 Ａ５
−９ ２ｔｎＵ／ｍｅが得られた。
これを実Ｍ［ｉ例の計５Ｊ式にあてはめると、Ｈ４＝＝
６ ’５ ＋ｎＵ／ｍｅ、 Ｈ３Ｍ＝８５＋ｎＵ／ｍｌ
、Ｈｔ Ｍ ｔ Ｉ６７ ｍ Ｕ ／ ｍｌ、、 ＩＩ
Ｍ 、＝ ７ ５ ｍ Ｕ ／ｍ／！、Ｍ、Ｉ６５ ＋
＋ｔ Ｕ ／ ｍｅが作出されたつこれらの活性値は試
料調製のとき実際に用いた各イソ酵素の瞬に近似してお
り本発明方法の有効性を示しているっ 以−ト述べたように本発明方法はヒト血清をアルカリ処
理という極めて簡単な操作でヒト血清中に共存するＬ
Ｄ Ｈ各イン酵素のそれぞれの活ｉ牛を個別に求めるこ
とができる。しかし診断上必要がないものについては省
略干ることができる。たとえばＨ４のみの活性を知りた
いときは操作（５）のみを行なえばよいっまた心筋こう
そくにおいてば１１４ 、と＋１３Ｍとの比が問題とな
るのでこの場合は操作（４）および（５）を行なえばよ
い。また白血病におい−ＣはＨ２Ｍ２の上昇が問題とな
るがこの場合は操作（３） 、 Ｃ４） ％−よび（５
） を行ｆｒ、工ばＨ２Ｍ２を求めることができる。さ
らに本発明方法は自動分計ロモ器に容易に適用できる等
日常臨床検査に適した極めて有用な測定法である。
６ ’５ ＋ｎＵ／ｍｅ、 Ｈ３Ｍ＝８５＋ｎＵ／ｍｌ
、Ｈｔ Ｍ ｔ Ｉ６７ ｍ Ｕ ／ ｍｌ、、 ＩＩ
Ｍ 、＝ ７ ５ ｍ Ｕ ／ｍ／！、Ｍ、Ｉ６５ ＋
＋ｔ Ｕ ／ ｍｅが作出されたつこれらの活性値は試
料調製のとき実際に用いた各イソ酵素の瞬に近似してお
り本発明方法の有効性を示しているっ 以−ト述べたように本発明方法はヒト血清をアルカリ処
理という極めて簡単な操作でヒト血清中に共存するＬ
Ｄ Ｈ各イン酵素のそれぞれの活ｉ牛を個別に求めるこ
とができる。しかし診断上必要がないものについては省
略干ることができる。たとえばＨ４のみの活性を知りた
いときは操作（５）のみを行なえばよいっまた心筋こう
そくにおいてば１１４ 、と＋１３Ｍとの比が問題とな
るのでこの場合は操作（４）および（５）を行なえばよ
い。また白血病におい−ＣはＨ２Ｍ２の上昇が問題とな
るがこの場合は操作（３） 、 Ｃ４） ％−よび（５
） を行ｆｒ、工ばＨ２Ｍ２を求めることができる。さ
らに本発明方法は自動分計ロモ器に容易に適用できる等
日常臨床検査に適した極めて有用な測定法である。
第１図υｊ： ｌ、 り ＴＩの各イソ酵素の１藏器に
おける分４１ｉを示すグラフ、第２図はＬ Ｄ Ｈの各
イノ酵素の相対活性値と異なるｐ Ｈとの関係を示すグ
ラフ、第３図〜第６図は各イン酵素の相り１活性値と固
定されたｐ Ｈでの予加温時間との関係を示すグラフで
ある。 第１図 ］ ］ コ− ］ ］ □ Ｍ４ Ｈ４ −Ｂ１ 風 −１し１月へ −プ艮飢Ｊ４（ −リ１膝筋 −ヴｆ 月ｊヘ 一 月乎１７＆ −月巾
おける分４１ｉを示すグラフ、第２図はＬ Ｄ Ｈの各
イノ酵素の相対活性値と異なるｐ Ｈとの関係を示すグ
ラフ、第３図〜第６図は各イン酵素の相り１活性値と固
定されたｐ Ｈでの予加温時間との関係を示すグラフで
ある。 第１図 ］ ］ コ− ］ ］ □ Ｍ４ Ｈ４ −Ｂ１ 風 −１し１月へ −プ艮飢Ｊ４（ −リ１膝筋 −ヴｆ 月ｊヘ 一 月乎１７＆ −月巾
Claims (1)
- ヒト血清を一アルカリ性１ｉ１４域の種々光なるｐＨの
もとて予加（ハすることを特徴とするヒト血／１ｆ中の
乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性を貼別に測定する方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18467382A JPS5974998A (ja) | 1982-10-22 | 1982-10-22 | ヒト血清中の乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性の個別測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18467382A JPS5974998A (ja) | 1982-10-22 | 1982-10-22 | ヒト血清中の乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性の個別測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5974998A true JPS5974998A (ja) | 1984-04-27 |
| JPH0220240B2 JPH0220240B2 (ja) | 1990-05-08 |
Family
ID=16157351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18467382A Granted JPS5974998A (ja) | 1982-10-22 | 1982-10-22 | ヒト血清中の乳酸脱水素酵素の各イソ酵素活性の個別測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5974998A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4961382A (ja) * | 1972-06-09 | 1974-06-14 | ||
| JPS6028280A (ja) * | 1983-07-26 | 1985-02-13 | Oki Electric Ind Co Ltd | Ｌｅｄプリンタ−素子の製造方法 |
-
1982
- 1982-10-22 JP JP18467382A patent/JPS5974998A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4961382A (ja) * | 1972-06-09 | 1974-06-14 | ||
| JPS6028280A (ja) * | 1983-07-26 | 1985-02-13 | Oki Electric Ind Co Ltd | Ｌｅｄプリンタ−素子の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0220240B2 (ja) | 1990-05-08 |
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