JPS596289B2

JPS596289B2 - 修飾人血漿タンパクの製法

Info

Publication number: JPS596289B2
Application number: JP52153152A
Authority: JP
Inventors: 泰生柴田
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1977-12-20
Filing date: 1977-12-20
Publication date: 1984-02-10
Also published as: JPS5486601A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は修飾した人血漿タンパクの製法に関するもので
ある。

人体の血漿タンパクは体内各組織への栄養の供給や各組
織からの老廃物、中間代謝物の除去、運搬に当っている
。

血漿タンパク中リポタンパクに着目した場合、人血漿中
の脂質はその殆んどがタンパク質と結合して所謂リポタ
ンパクの形で運ばれ、各組織で同化又は異化されている
。

リポタンパクは４．５種に類別されていて、ト１）す’
）セライト、コレステロール及びコレステロールエステ
ルの含量はそれぞれ異なるが、これらのような水に難溶
性の物質が燐脂質及びタンパク質の分子群で包まれ、人
血漿中にコロイド状に溶解している。

例えば、動脈硬化をもたらす脂質の血管壁への過剰沈着
はコレステロールが主因とされているが、コレステロー
ルはそもそも各組織での細胞膜構成成分として必要であ
り、またその残余は肝臓で異化され、人体に有用な胆汁
酸として利用されるものである。

コレステロール部分のみを除去したりボタンバクを調製
して人体に投与すれば過剰沈着部分よりコレステロール
を除去し、その運搬を円滑化し、さらに肝臓での異化を
促進することが期待できる。

本発明は以上の所見によりなされたものである。

即ち本発明による製法は、タンパク質の変性を極力防ぐ
ため、温度−１Ｏ℃以下で人血漿タンパクより９０重量
％以上のエタノールで可溶化する成分を抽出し、その可
溶部分にアルカリ水溶液を加えてそのｐＨを１０に調整
し、同時にエタノール濃度を４０〜８５重量％に稀釈し
、その不溶画分を除いた可溶画分と上記人血漿タンパク
を９０％以上エタノール抽出したとき得られた不溶部分
とを混合して修飾人血漿タンパクを得る方法である。

以上の製法により、人血漿リポタンパクを出来るだけ変
性しない条件で、そのコレステロール部分のみを除去し
た修飾人血漿タンパクが得られる。

以下本発明の製法をさらに詳しく説明すると既知の方法
で調製した人血漿リポタンパクを一１０℃以下の低温で
、９０重量％以上のエタノールと充分混合し、遠心沈澱
分離器によって上澄液Ｉと沈澱■に分離し、トリグリセ
ライド及びタンパク質を主成分とする沈澱Ｉを保有する
。

一方燐脂質、コレステロール複合体を含む上澄液Ｉにア
ルカリ水溶液を加え、ｐＨ１０以上とし、かつそのエタ
ノール濃度を４０〜８５重量％に調整して白色の沈澱を
生じさせ、遠心沈澱分離器によって上澄液■と沈澱■に
分離する。

この場合コレステロール及びコレステロールエステルは
燐脂質との複合体より解離し沈澱するのでこの沈澱■を
廃棄する。

燐脂質及び脂肪酸を主成分とする上澄液■のｐＨを６．
０〜９．０に調整し、次でこの上澄液■で沈澱Ｉを再溶
解する。

この溶液からコレステロールを除去したりボタンバクを
既知の方法（ｐＨ５，２、エタノール約２０％）で回収
する。

以上の処理により最初のりボタンバクに含まれていたア
ポタンパク（含量約２５％）、トリグリセライド（約３
５％）、燐脂質（約２０％）は殆んど回収され、コレス
テロール及びコレステロールエステル（約２０％）のみ
１／１０以下に減少する。

回収リポタンパクの収率は少（ても約６０％である。

この修飾リポタンパクをねずみに静脈注射したところ、
肪質代謝の改善が見られた。

本発明による製法は、リポタンパクに限定されるもので
なく、水に難溶性で血漿タンパクの形でのみ血中運搬可
能な他の比較的無益な中間代謝成分例えばアルブミンに
結合したビリルビン、尿酸或いはスカトール等について
も、そのタンパク結合物よりエタノール分画で該成分を
除去し、残余の部分を該成分の高能率の運搬体として利
用し得る道を開（ものである。

実施例人血漿１０ｍ１に１０％デキストラン硫酸溶液５ｏｔｔ
ｌと１ＭＭｎＣ１２５００ｔｔｌを加え、３０分彼達１
００００ｒｐ、１０分間の遠心を行い、その上清に１０
％デキストラン硫酸６００μｌと１ＭＭｎＣ１２１，５
ｍｌを加え３０分彼達心（１００００ｒｐｍ、１０分間
）し、沈澱したりボタンバク約６０ｍｇを含むペースト
を得、このペーストをｐＨ６，９の燐酸ナトリウム緩衝
液１０１ｒｔｌに溶解し、次で同緩衝液に対し一夜透析
した。

得られた透析内液に一２０℃で９９．５％ノエタノール
２００ｍ１を徐々に加え約２０分径遠心分離器（１０１
００００ｒｐで１０分間処理して沈澱Ｉと上澄液Ｉに分
離し、沈澱Ｉを保有した。

一方上澄液Ｉに一２０℃で０．２Ｎの水酸化ナトリウ
ム溶液を７５ｒｕｌ加え、約２０分径遠心分離器（１５
０００ｒｐｍ）で１０分間処理して沈澱■と上澄液■に
分離し、沈澱■は廃棄した。

この上澄液■に一２０℃で０．２Ｎの塩酸４２１１Ｌ
ｌを加えてｐＨを７．０とし、この液で上記沈澱Ｉをガ
ラスホモジナイザーを用いて再溶解した。

この再溶解液に更に０．２Ｎの塩酸１０ｍ１を加えて
ｐＨ５，２とし、約２０分径遠心分離器（１００００ｒ
ｐｍ）で１０分間処理し、沈澱■を分離した。

この沈澱■を凍結乾燥することにより約３５叩の修飾リ
ポタンパクを得た。

試験例上記修飾りボタンバク３〜を０．２ｍｌの生理食塩水
に溶かし、ねずみに尾静脈注射（ねずみ全血清りボタン
バクの１／１５量相当）をした。

このねずみには予め１４Ｃ標識酢酸を３０分前に腹腔に
投与してあり修飾リポタンパクの注射６０分後（標識９
０分後）ねずみを殺し、採血脂肪代謝に最も関係する肝
臓小腸上部及び脂肪組織を採取した。

一方、同時に標識し、ただし修飾リポタンパクに代えて
生理食塩水を注射したねずみを対照として、１４Ｃ酢酸
標識の移行を見たところ、修飾した方の血清中の放射活
性は上記対照の１．０３倍、肝臓で１．４３倍、腸で１
．１９倍、脂肪組織で０．０６倍の値を得た。

これらの値から（１）肝臓でのコレステロールの胆汁酸への異化を促進
する。

（２）腸でのコレステロール合成を成る程度促進する。

（３）脂肪組織でのトリグリセライドの分解を促進する
ことが起きたと考えられる。

（１）及び（２）はコレステロール代謝回転の増大を意
味し、（３）は脂肪酸の移動を意味する。

また両者ともねずみの体内の脂肪代謝の改善と解釈でき
る。

なお、本発明方法による修飾タンパクを人体に投与した
場合の副作用については、人血漿タンパク由来のもので
あるから人体に異種抗原性はなく、また上記の処理によ
る修飾が脂質部分に限られるので、新規抗原性の出現は
可能性が少ない。

Claims

【特許請求の範囲】

１リポタンパク画分に、温度−１０℃以下で、濃度９
０重量％以上のエタノールを加えて攪拌し、その可溶化
する成分を抽出し、これを遠心分離器によって沈澱と上
澄液とに分離し、温度−１０℃以下でその上澄液にアル
カリ水溶液を加えて、そのｐＨを１０以上とし、同時に
そのエタノール濃度を４０〜８５重量％に稀釈し、生成
する沈澱を遠心分離器で分離し、得られる上澄液に酸を
加えて、そのｐＨを６．０〜９．０に調整し、これを上
記エタノール抽出の際に得られる沈澱と混合することを
特徴とする修飾人血漿タンパクの製法。