JPS59195162A - トランスホ−ミンググロスフアクタ−の検定用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、トランスホーミンググロスファクター　（Ｔ
ｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　　Ｇｒｏｗｔｈ　　Ｆａｃｔ
ｅｒ　；以下、ＴＧＦという）の検定用試薬に関する。

ＴＧＦは、ヒトおよびけつ歯動物のガン細胞でつくられ
、正常細胞に細胞形態学的に特異な変質（形質転換およ
び増殖）をさせるポリペプチドである。ヒトおよび動物
の正常細胞は、軟寒天培地においてはコロニーを形成し
ないが、これにＴＧＦを加えるとコロニー形成能を有す
るようになる。

１９７８年ジ・ゼ・トダロら（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、、７５　、４００１（１９７８）　〕により肉
腫細胞の培養」二清から始めてＴＧＦの存在が報告され
て以来、多数のＴＧＦかヒトおよびけつ歯動物の培養カ
ン細胞およびガン患者のガン組織からも発見されている
〔ロバーツ・工・ビら：Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　７７　、
３４９４　（１９８０）。」ｕ近、ティ・アル・ターシ
ックら（ＪＮＣＬ、６９，７９３（１９８２））および
ジ・ゼ・ｌ−グロら［Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、、　４
３　、４０３　（１９８３）］は、ガン患者の尿から分
子量約３００００〜３５０００の高分子型ＴＧＦを抽出
しているか詳しい物性は未だ明らかでない。

従って、ＴＧＦと類似している種々のグロスファクター
とを明瞭に識別する適切な手段がなく、またＴＧＦを判
定するに当っても、ＴＧＦの有する正常細胞のコロニー
形成能に基いて行われているにすぎないものであるが、
煩雑な操作を必要とするのみならず、定量性にも欠ける
ものであった。

式らにＴＧＦの体液、例えば血液、尿などにおける存在
、含有−鼠、消長などに関してはあまり報告されていな
い。

本発明者らは、先に、高分子型のＴＧＦは正常人尿には
存在せず、ガン患者法のみ特異的に存在すること、しか
もこのものが正常細胞に対して前述のような生物学的活
性を右するもので極めて主要な物質と考えて研究した結
果、種々のカン患者の尿を透析して無機イオンその他低
分子物を除去し、さらに必要に応じてゲル濾過した後、
次いで陽イオン交換体を用いてクロマトグラフィーまた
は／および吸着クロマトグラフィーを行ない、極めて高
純度に精製式れたＴＧＦを得ることかできた（昭和５８
年μ月６日特許出願）。きらに本発明者らは研究し続け
た結果、とのＴＧＦを用いて、ヒト以外の哺乳動物に注
射して免疫せしめ、そのＵｆＪＩ液を採取し、これより
ＴＧＦに対するヒトＴＧＦ抗体を含有する抗血清を得、
このヒ）ＴＧＦ抗体を粒径０．０５〜１０ミクロンの固
体粒子の表面に担持せしめることによりヒ）ＴＧＦとｍ
好に凝集反応することを見い出した。さらに鋭意研究し
た結果、蛋白質、例えばアルブミンやアジ化ナトリウム
を添加することにより長期間安定なヒｌ−ＴＧＦの検定
用の試薬溶液を得、またグリシンやグルタミン酸ナトリ
ウムなどのアミノ酸やグリセロール、ポリエチレングリ
コール、グルコース、シュクロースなどのポリオールを
添加して凍結乾燥してなる安定な凍結乾燥試薬か省Ｊら
ねることを知った。

本発明は、上記の知見に基いて完成されたもので、表面
にヒトＴＧＦ抗体を担持した粒径０．０５〜１０ミクロ
ンの固体粒子を含イｆすることを特徴とするヒ）ＴＧＦ
の検定用試薬である。本発明の試薬はヒトＴＧＦの検定
に用いられ、ガン検査用試桑として有用である。

まず本発明のヒ）ＴＧＦ抗体を得る（Ｃ当っては、とｌ
−Ｔ　Ｇ　Ｆを入手することが必要である。このと１・
ＴＧＦは、例えば肺癌、　毛腫瘍、胃癌、咽頭癌、結腸
癌、乳癌、黒色肉腫、卵巣癌などのカン患者の尿を原料
として精製、回収することか簡便である。

これらのカン患者法からのＴＧＦの精製手段について例
示すると、集められたガン患者法は、まず低分子の不純
物を除くため、水を透析外液として透析膜の分子量カッ
ト約１．００００以下の膜を用いて透析する。次いで得
られた透析内液は、必要に応して、凍結、融解を反復し
て不純物を析出させ、遠心分離や５ミクロン程度の細孔
を有するフィルターを通して微細な不純物の粒子を除去
してもよい。苫らに必要に応して、透析内液は、バイオ
’ｙ’ｋ　（Ｂｉｏｇｅｌ　）　Ｐ−６０、Ｐ−１００
（バイオラド召二製）、セファテックス（５ｅｐｈａｄ
ｅｘ　）　Ｇ−５０（ファルマシア社製）なとのゲル濾
過剤にてゲル濾過してＴＧＦ活性を示す分画を集めても
よい。この際、ＴＧＦ活性を示す分画は、推定分子ｆｆ
１．２８０００〜３５０００　（７）位置に存在Ｌ１後
述する試験法によって識別することができる。次いて前
記の尿の透析内液またはゲル濾過にて狛めな活性分画に
ついて、イオン交換クロマトグラフィーや分子篩膜劉え
ば分子＝１ｏｏｏｏ〜２００００程度の限外ｆ１過膜に
よる分子篩処理や、吸着クロマトグラフィーの少なくと
も一つの操作またはこれらの操作を組み合せて１３〜製
されｉｔ　Ｔ　Ｇ　Ｆ油性分画か採取される。イオン交
換クロマトクラフィーは、例えばＣＭ−セファデックス
（５ｅｐｈａｄｅｘ　）（ファルマシア社製）、ｓＰ−
セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　）　（ファルマシ
ア社製）、ＣＭ−５２（ワットマン社製）、バイオ・レ
ックス（Ｂｉｏ−Ｒｅｘ　）　７０　（バイオ・ラド社
製）などの陽イオン交換体を基材としたカラムを用いて
、上記のＴＧＦ＠有液を加えて吸着せしめる。次いでド
次濃度を上昇勾配させた中性塩、好ましくは塩化ナトリ
ウムの水溶液を用いて傾斜溶出して、そのＴＧＦ活性分
画、を回収すればよい。次いで好ましくは分子量１００
００〜２００００の限外濾過膜を用いて濃縮、脱塩を行
なえばよい。さらに吸着クロマトグラフィーとしては、
例えばシンクロパック（Ｓｙｎｃｂｒｏｐａｋ　）　Ｒ
Ｐシリース（ジンクローム社製）の炭素数３〜２０のア
ルギル基のような疎水性基で修飾されたシリカゲルやＭ
ＣＩ　　Ｇｅｌ　　ＣＨ２０Ｐシリーズ（三菱化成工業
社製）、アンバーライｌ−（Ａｍ１）ｅｒｌｉｔｅ）Ｘ
　Ａ　Ｄシリーズ（アンバーライト社製）のようなポリ
スチレン系ハイポーラス吸着樹脂などの基材のカラムを
用いて、上記のＴＧＦ含有液を加えて吸着せしめる。次
いで逐次濃度を上昇勾配させた親水性中性有機溶媒、例
えばエタノール、プロピルアルコールのような低級脂肪
族アルコールまたはアセトン、アセトニトリルのような
低級脂肪族ケトンなどの水溶液を用いて傾斜溶出して、
そのＴＧＦ活性分画を回収すればよｌ／−Ｉ。このよう
にして得られるＴＧＦ活性分画は、必要に応じて凍結乾
燥などの乾燥手段にて乾燥粉末として得てもよく、この
乾燥粉末は白色で、ニンヒドリン反応陽性、分子ｆｆ１
２８０００〜３５０００（ゲルｒ過法）、５ＤＳ−電気
泳動において単一であり、酸および熱に対して安定で、
トリプシンおよびジチオスレイトール処理により失活さ
れる理化学的性質を有しており、極めて高度に精製され
たヒ）ＴＧＦである。このようにして得たヒ）ＴＧＦを
抗原として、ヒト以外の哺乳動物、例えばモルモット、
ウサギ、ラット、マウス、ヤギなどの抗体産生能のある
動物を用い、通常の方法に従って免疫した後採血して抗
体を得る。この際、抗原として用いるヒ）ＴＧＦは、前
述の如くまでに高度に精製した単一の蛋白標品であるこ
とが望捷しいが、必ずしもこれに限定されるものではな
い。また抗体を得るに当って、例えば前述のヒ）ＴＧＦ
粉末０．１〜１７ｎ９を生理食塩水０．１〜５ｍ１Ｋ溶
解し、これに同量のコンプリート・フロイント・アジュ
バント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　　Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ　　ａ
ｄｊｕｖａｎｔ　）を加え、充分乳化した後胴いる哺乳
動物、例えばウサギの皮下、戊申に注射し、１〜３週間
毎に数回同量を注射し、最終免疫の日より一定期間後採
血し、これを放置し、凝固せしめて遠心分離し、ヒ）Ｔ
ＧＦ抗体を含有する抗血清を得る。さらにこの場合に用
いる動物は抗体産生能のある動物であれば何れを用いて
もよく、大賞の抗体を得るには大型動物を用いるのが好
ましく、通常はウサギ、ヤギを用いるが、何んら限定さ
れるものではない。さらにこれらの動物から得られたヒ
ｌ−Ｔ　Ｇ　Ｆ抗体を含有する抗血清からヒ）ＴＧＦ抗
体を精製するには、通常用いられる抗体の精製手数の方
法によって行なえるもので、例えば抗血清を硫安分画し
、さらにイオン交換クロマトグラフィーあるいはゲルｐ
過によって精製するなどの方法を用いればよく、さらに
高純度に精製するには不溶化ヒ）　Ｔ　Ｇ　Ｆを用いた
アフィニティークロマトクラフィーを行なえばよい。

またこのヒ）ＴＧＦ抗体を担持させるに用いられる固体
粒子としては、粒径０．０５〜１０ミクロン、好ましく
は０．１〜２ミクロンの血球粒子、炭素粒子、ガラス粒
子や合成樹脂ラテックスか用いられる。特に合成樹脂ラ
テックスは粒径、比重の調製を有するポリスチレン、ア
ミ７基を有するポリスチレンや捷たはこれらの基を有す
るかまたは有しないスチレンＭｉ（４モノマーをメチル
スチレン、エチルスチレン、クロルスチレン、エチレン
、プロピレン、アクリル酸、アクリル酸メチルエステル
、アクリル酸エチルエステル、メタクリル酸、メタクリ
ル酸メチルエステル、メタクリル酸エチルエステル、ア
クリロニトリル、アクリルアミド、マレイン酸、フマル
酸、ブタジェン、クロルプレン、イソプレン、塩化ビニ
ル、塩化ビニリデン、酢酸ビニル、ビニルトルエン、ジ
ビニルベンゼンなどとの上型合体やビリビニルトルエン
、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、
月６リアクリロニトリノペボリビニルピロ１Ｊトン、ポ
リ酢酸ビニルアクリレート、塩化ビニル−アク１ル一ト
共重合性などのラテ・ンクスか挙げれる。またこの合成
樹脂ラテ・ンクスは、その表面を非イオン界面活性剤で
前処理したものであってもよい。

特に好マしくは、スチレン、クロルスチレン、アクリル
酸、ビニルトルエン、メック１ｊル酸メチルエステルの
重合捷たは共重合体である。

次いでこのような固体粒子の表面にヒｌ−Ｔ　Ｇ　Ｆ抗
体を担持芒ぜるには１．Ｈ５〜１０、好１しくは　Ｈ６
，５〜９の０．００５〜０．２Ｍ緩南液、例えはリン酸
緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液、ピペス緩衝液
や生理食塩水、水などを媒体として用いる。また担持せ
しめるに当っては、例えば濃度０．０５〜１０％（重量
）の固体粒子の浮遊液と濃度０．００．０１〜２％（Ｎ
量）のヒトＴＧＦ抗体含有液とを１０〜５０℃で３０分
〜２０時間混合攪拌しなから接触させることにより行な
われる。

このようにして表面にヒトＴＧＦ抗体を担持した固体粒
子が得られるもので、これは遠心分離または洗浄して非
吸着物を除去して回収すればよい。

次いでこの表面にヒトＴＧＦ抗体を担持した固体粒子を
感作粒子としてそのまま用いるか、さらにこれを各種動
物アルブミンやグロブリンなとの不活性蛋白質、あるい
は正常モルモット血清、正常ウサギ血清、好ましくは抗
ヒｌ−Ｔ　Ｇ　Ｆ抗体を作製した同種の正常動物の血清
を用いてその固体粒子の表ｉｆ＋’ｉにおける未結合の
担持部位を封せしめて感作粒子として用いることか好ま
しい。

次いでこのようにして得られた表面にヒ）　１’　ＧＦ
抗体を担持した粒径０．０５〜１０ミクロンの固体粒子
、好ましくは合成樹脂ラテックスである感作粒子は、例
えば０．００５〜０．２Ｍの、Ｈ７〜９の緩衝液、例え
ばリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液、ビペ
ス緩衝液などを媒体として０．５〜２（重量）％の濃度
に調製されて試薬として供される。さらにこの試薬には
、非特異的吸着−１：たは自然凝集を防止するために蛋
白質であるアルブミン、例えば牛血清アルブミンを０．
０Ｊ−０，２（重職）％添加しておくことか好ましく、
さらに防＋ｙ４剤と１−てアシ化ナトリウムを０．０２
〜０．２（重量）％を添加せしめることか好外しい。ま
たこれに塩化すトリウムなど中性塩を０．９（重量）％
程度添加してもよい。さらにまたこのようにして調整さ
れた試薬溶液は、グリシンやグルクミン酸→−トリウム
などのアミノ酸やグリセロール、ボ１）エチレングリコ
ール、グルコース、シェフロースなとのポリオールを１
〜５（重量）％添加して凍結乾・操せしめることにより
安定な凍結乾燥試薬として得られる。さらにこの凍結乾
燥試薬は、ヒトＴＧＦの検定に当っては、１Ｔｈｉｆ記
の如くの緩衝液をＪｌＴｉいて０．５〜２（重量）％の
濃度に調整して試薬として供すればよい０ −まブこヒｌ−Ｔ　Ｇ　Ｆの検定に当っては、１：ず一
定濃度に調整されて供された表面にと）ＴＧＦ抗体を′
ＪＩ′ｉ持Ｌ　フコ０．０５〜］０ミクロンの固体粒子
を含有する試薬を、通常０．０１〜．２献を川Ｖ）、こ
ノ１と検定ずべき被検液、例えば血液や尿の適宜逐次希
釈液を０．０１〜２ｍｌとを添加して通常３７°Ｃで５
分〜２時間反応せしめる。また被検液の希釈液とＬでは
、通常　Ｈ６〜９．０．０５〜０，５Ｍの緩割１夜か用
いられ、さらに必要に応して蛋白質、例え６ば牛血清ア
ルブミン０．Ｏ］〜０２（重量）％、アシ化すトリウム
０．０１〜０．２（重量）％、中性塩、例えば塩化ナト
リウム０．９（重量）％添ＪＪＩＩ　してもよい。この
ようにして反応せしめることにより、被検液あるいは希
釈液のＴＧＦの量に相応して凝集反応を生ずるもので、
この凝集反応をスライド板上にて肉眼判定するか、また
は用いた固体粒子の凝集による濁度の変化を可視光、近
赤外光やレーザーなとの光学的測定装置によって測定し
、次いで標準曲線から検定すればよい。

以上の通り、本発明の表面にヒトＴＧＦ抗体を担持した
粒径０１０５〜１０ミクロンの固体粒子を含有するヒト
ＴＧＦの倹定用試薬は、新規なもので、被検液中のＴＧ
Ｆを簡便に検定できるものであり、カンの判定に有用な
試薬であるＱ次いで本発明の実施例および参考例を挙げ
て具体的に述べるか、本発明は何んらこれらによって限
定されるものではない。

実施例１ （１）抗ヒトＴＧＦ血清の作成 ＴＧＦ（後述参考例１によって製造したＴＧＦ）０．５
ｍ９を生理食塩水０．５ｍｌに溶−解し、これに同丹十
のコンプリート・フロイント・アジュバント（Ｃｏｍｐ
ｌｅｔｅ　　Ｆｒｅｕｎｃｌ’ｓ　　Ａｄｊｕｖａｎｔ
　）を加え、充分乳化混合した後、家ウサギの四肢指の
戊申、および背中の皮下数ケ所に注射した。２週問おき
に同量の乳剤を６回皮下注射し、最終の免疫より１０Ｅ
Ｉ後にその全面を採取し、６０分間室温に放置し凝固せ
しめた後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行ない
ヒトＴＧＦ抗体含治抗ＩＩ′ｌ［涜を得ブこ。

（２）　　ヒ）ＴＧＦ抗体感作ラテックスの製法址ずヒ
ｌ−Ｔ　Ｇ　Ｆ抗体含有抗血清を常法に従い硫安分画を
行ないγ−クロプリン画分を得た。次いでＤＥＡＥ−セ
ルロースを用いたイオン交換クロマトを行ないＩｇＧ画
分を得、その５　ｍ”／を１００ｍＭリン酸１１８ｊ液
（ＰＨ８，０）　５　ｍｌ（Ｉｃ溶仰「シ、これに２（
重量）％のボリスチレンラテ・ノクス（漬水化学社製、
粒径０．２２μｍ）５ｙｎｌを加えて混合シ、３７℃で
３時間攪拌した。１２，０００　ｒｐｍで遠心分離を行
ないラテックスを集め、生理食塩水で充分洗滌後、１％
ＦＦ、宮家ウサギ血清を含有する］、００ｍＭリン酸緩
衝液（、Ｈ８，Ｏ）　Ｋ懸濁し、室ｒｊＡで２時間攪拌
した。次いで、上記と同様に洗滌操作を行なった後、Ｏ
６］（重量）％牛血清アルフミン（ＢＳＡ　）−、、０
，１（重用）％アジ化ナトリウム、０．９（重用、）％
ＮａＣｌ含有の１０ｍＭリン酸緩衝液２５　ｍｌニ＠濁
シ、ヒトＴＧＦ抗体感作ポリスチレンラテックス試薬を
得た。

＋３）ＴＧＦの検定 ＴＧＦを０．２５（重Ｍ）％Ｂ　ｓ４　、０．１　（重
量）％アジ化ナトリウム、０．９（重量）％ＮａＣＩ　
を含有する１ＱｍＭリン酸緩衝液（、Ｈ７，４）で、］
　ｍｌあたり１０μｇ　、　Ｊμｇ　、　］　００ｎｇ
　、　１０ｎｇ　、　ｌｎｇと調製し標準ＴＧＦ液とし
た。標準ＴＧＦ液１００μ４を反応用スライド板上に滴
下し、これにヒトＴＧＦ抗体感作ラテックス試薬２０μ
βづつ滴下した。

スライド板をゆるやかに揺動し、肉眼でその凝集像を検
定した。

井、３分以内に極めて強い凝集 ＋：３分以内に起こる明らか々凝集 ±°１０分以内に起こる明らかな凝集 −３０分以後も凝集しない 実り色１列２ 実施例］−＋３＋で得たヒ）ＴＧＦ抗体感作ラテうクス
試蘂を、０，１（重量）％ＢＳＡ、０．１（重り炎）％
アジ化ナトリウム、０．９（重量）％ＮａＣｌ　含有１
０ｍＭリン酸緩１ｉＪｉＫ＋、　（ｐ　Ｈ７，４）で２
倍に希釈した液を１ｍｌと標準ＴＧＦ液１−を、３７℃
の恒温ジャケット利きの回転子を備えたセル（光路長１
０１１１ｍ　）に入れ、直ちに９５０ｎｍの吸光度（０
，Ｄ、）を測定し、毎分６’　００回転の速さで攪拌を
つづけ、次いで１０分後のＯ，Ｄ、を測定した。

号明細書に記載の方法によってＴＧＦを製造し、これを
用いてもよい。

参考例１ 肺癌患者尿］］００ｍ１を０．０１Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ８，０）に対し分子殴カット１０．０００の透析膜（
三光純共社製）を用いて４°Ｃで２昼夜透析を１うなっ
た。透析内液は１２．０００ｇにて６０分間遠心分離し
、沈澱を除く。ＳＰ−セファデックス（ファルマシャ社
製）をカラム（４，５Ｃｍ　Ｘ　３３Ｃｍ）に詰め、０
．０］、Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ８，０）で平衡化した後
、上記透析内液を流下し、有効成分を吸着きせた後、同
緩衝液で充分洗浄し１ついで同量１！ｉ液中、塩化ナト
リウム０．０］、Ｍ〜１．５Ｍの［頃斜溶出を行なった
。（流速２２．．５　ｍＡ／時、温度４℃、塩化す）　
ＩＪウム傾斜濃度緩衝液４．８１使用）ＴＧＦは同緩衝
液中、塩化ナトリウム濃度０．６〜１．０Ｍの位置に溶
出され、活性分画６２．Ｏｍｊを得た。

本活性分画は後記のＴＧＦ活性試験法において、５μβ
で正常細胞は変質されコロニーを形成した。

本活性分画全量をダイヤフロー分子篩膜Ｐ　Ｍ−Ｉ　Ｑ
（アミコン、ファーイースト、リミツテツド社製（日本
））を用いて脱塩、濃縮をくり返し、１．２記とし、こ
れにトリフロロ酢酸を加えて０．０５％トリフロロ酢酸
溶液とした。

アルキル基（Ｃ１ｇ）を結合させたシリカゲルを担体ト
するシンクロバックＲＰ＝−Ｐ（ジンクローム社製）を
カラム（４，１ｃｍＸ２５０ｃｍ）に詰め０．０５％ト
リフロロ酢酸で平衡化し、とのカラム１本に上記ＴＧＦ
、トリフロロ酢酸溶液の１／３を流し吸着後０．０５％
トリフロロ酢酸水で洗浄した後、固液中Ｏ〜９０％アセ
トニトリルの傾斜溶出を行ないアセトニ）　ＩＪル濃濃
度５腺〜７５式れる活性分画をとる。以との操作を３回
行ない前記の分子篩膜による濃縮調整液全損を処理しＴ
ＧＦ活性分画７．９ｍｌを分取した。本分画を凍結乾燥
後、再び３．０ｍｌの生理食塩水に溶解し、この溶液を
ＴＧＦ試験法にかけ０．４μｌで正常細胞は変質されコ
ロニー形成能を示した。

第　　８　表 ＴＧＦ活性試験法 （ＴＧＦの軟寒天培地培養試験法） 材料 ＋１）ＮＲＫ−細胞（株４９Ｆ） （２）５％牛脂児血清及び１％非不可欠アミノ酸添加ダ
ルベツコ変法ＭＥＭ培地 （３）精製寒天（　Ｄｉｆｃｏ　　社製　Ｎｏｂｌｅ　
　ＳｐｅｃｉａｌＡｇａｒ　　） （４）直径６０駄のベトリー皿 操作 ０４５％寒天含有の（１）の培地をぺｈ　ＩＪ−皿一枚
に５ｍｌずつ註加して下層培地とする。この上（てＮＲ
Ｋ細胞］　Ｘ　］　０”個／ｄを含む０．３％寒天含有
培地をベトす皿一枚に２ｍｌずつ層積し上層培地とし。

このＪ：０．５Ｔｎｌの食塩水に溶解した滅相を加え，
炭酢カスインキュベーター中に３７℃で培養する、］　
４　ＩＥＩ後（て培養器から取り出し，４０倍のケンビ
鏡でペトリ皿りの２扉２視野を１０ケ所を無作為にえら
ぴ，細胞数１０個以上よりなるコロニーの数をかぞえそ
の総数を特徴とする 特許出願人　東洋醸造株式会社 日本ケミカルリサーチ株式会社 代理人　弁理士　行内　ヰｆ 手続ネ市正書　（自発） 昭和５８年　６月１３日 １、事件の表示　昭和５８年特許願第７０／１０６月２
、発明の名称 １〜ランスホーミンググロスフアクターの検定用試薬 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　静岡県両方郡大仁町三福 代表者　　高　　１）　哲　　男 ４、代理人 ６、補正の対象 明ｍ占の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容　別紙の通り 補正の内容 明細書の発明の詳細な説明の欄中、 第２頁、上から７行目、［Ｆａｃｔｅｌ’　Ｊを１−Ｆ
ａｃｔｏｒ　Ｊと訂正しまず。

同頁、上より９行目と、下より２行目のｌ−＆ｔつｆａ
Ｊを１−げつ歯」と訂正しまず。

第４頁上から１〜２行目、「主要」を１−］口要」と訂
正します。

第５頁の上から４行目、［基とＴ　ｊを「基Ｆて」と旧
正し、同頁下））日ろ９行目の１−　毛腫延１嚇−−□
□−□―−一□□−−一−１□−−−ｕ雫酔−―−１を
［絨毛腫瘍」とｉ］正しまず。

第８頁、下から４行目、「前述の如くまでに」を１前述
の如くにまで」と訂正しまツ、。

同第９頁、上より５行目、「皮下、戊申」を「皮−ト、
皮肉」と訂正し、同上より９行目「何から」を［何ら］
と訂正します。

第１１頁、上から４行目、「共重合ｕ」とあるのを「共
重合体」ど訂正します。

第１５頁、上から８行目、「戊申」を１皮内」とｂ丁正
しまず。

第１８頁、下から９行目の［ｉｏ、０ＯＯＪを「１０，
０００」と訂正し、同上から７行目［１なお、同頁のド
から５行目、「ファルマシャ社」は「ファルマシア社」
とムＩ正しよ７＋”。

第２１頁の上から９行目の１食塩水」を「生理食塩水」
と訂正し、同頁、下から４行目、「成慎」を「成績」と
訂正します。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋１＋　　表面にヒトトランスホーミンググロスファク
   ター抗体を担持した粒径０．０５〜１０ミクロンの固体
   粒子を含有することを特徴とするヒトトランスポーミン
   ググロスファクターの検定用試薬。 （２）固体粒子か、合成樹脂ラテックスである特許請求
   の範囲第１項記載の試薬。 （３）　　全般に対して、表面にヒトトランスホーミン
   ググロスファクター抗体を相持した粒径０．０５〜１０
   ミクロンの合成樹脂ラテックス０．５〜２（重置）％、
   蛋白質０，０１〜０．２（重量″）％、アジ化ナトリウ
   ム０．０２〜０．２（重量）％を含有して々る特許請求
   の範囲第１項記載の試薬。 （４）アミノ酸またはポリオール化合物１〜５（載の試
   薬。 （５）凍結乾燥した試薬である特許請求の範囲第４項記
   載の試薬。