JPS59148746A - γ―ヒドロキシアルギニンを含有する新規ジペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はγ−ヒドロキシアルギニンを含有するジペプチ
ド、その製造法およびそれを有効成分とする医薬に関す
る。

さらに詳しくは本発明は一般式（Ｉ）：Ｈ−Ｘ−（γ−
ＨＯ）Ａｒｇ　−ＯＨ（Ｉ）（式中、又はイソロイシン
、ロイシンまたはバリンである）で示されるγ−ヒドロ
キシアルギニンを含有するジペプチドに関する。化合物
（Ｉ）はアミノペプチダーゼＢ活性阻害作用を示すとと
もに、リウマチ関節炎に対する予防効果ならびに治療効
果を゛示すなど興味ある生理活性を有するものである。

γ−ヒドロキシアルギニンは異常アミノ酸であり、天然
に豊富に存在するものではないため、ｒ−ヒドロキシア
ルギニンを含有するペプチドを化学合成によって製造す
ることはいまだなされていなかった。

本発明者らは天然からえたｒ−ヒドロキシアルギニンを
原料として化学合成法によってｒ−ヒドロキシアルギニ
ンを含有するペプチドの製造を検討していたが、一般式
（■）： （式中、Ａはカルボベンゾキシ基またはｐ−メトキシベ
ンジルオキシカルボニル基、Ｂは２．４．６−ドリメチ
ルベンゼンスルホニル基、２．６−シメチルー４−メト
キシベンゼンスルホニル基またハ４−メトキシベンゼン
スルホニル基である）で示されるｒ−ヒドロキシアルギ
ニンの保護基化体を合成し、ついで該化合物（ＩＩ）と
Ｘの保護基化体とのペプチド形成反応を行ない、酸によ
り全保護基を脱離せしめ精製することによって一般式（
Ｉ）：Ｈ−Ｘ−（γ−ＨＯ）Ａｒｇ　−ＯＨ（１）（式
中、又は前記と同じ）で示されるγ−ヒドロキシアルギ
ニンを含有する新規なジペプチドかえられることを見出
し、本発明を完成するにいたった◇ −１１１にペプチドの化学合成にあたってはアミノ酸側
鎖官能基の保りが必要であるが、本発明におけるｒ−ヒ
ドロキシアルギニン含有ペプチドの製造に際しては、ｒ
−ヒドロキシアルギニンの側鎖官能基をつぎに示す方法
によって保護する。すなわち、まずα−アミノ基を常法
によりカルボベンゾキシクロリドで処理してＮａ−カル
ボベンゾキシ−ｒ−ヒドロキシアルギニンとし、ついで
２．５１！以上の２．４．６−　）リメチルベンゼンス
ルホニルクロリドと反応せしめてグアニジノ基を２．４
．６−　）リメチルベンゼンスルホニル（以下Ｍｔａと
いう）化して保護する。叙上の反応において、ｒ−ヒド
ロキシ基はα−カルボキシル基との間で閉環してで示さ
れるγ−ラクトン体となり、γ−とドロキシ基ならびに
α−カルボキシル基の保Ｑ基化も同時に完成する。

叙上のごとくしてえられるγ−ヒドロキシアルギニンの
保護基化体の化合物Ｑｌ）は全く新規な化合物であると
ともに、ｒ−ヒドロキシアルギニンを含有するペプチド
の製造において酢化合物となる重要な中間体であり、一
部保護基の除去を工夫することにより酸成分としてもま
たアミン成分としても利用できるので多数の生理活性ペ
プチドの製造に応用できる。

本発明の製造法は叙上のごとき新規なγ−ヒド０キシア
ルギニン保護基化体の化合物（ＩＩ）とＸの保鋤基化体
とを反応させることによって一般式（）： ％式％（） （式中、Ｘは前記と同じ）で示される新規なジペプチド
を合成するものであるが、ペプチド形成の方法は一般に
多用されている活性エステル法、ＤＯＯ／ＨＯ８ｕ法あ
るいは酸無水物法などを利用することができる。その中
でも活性エステル法を利用するのが好ましい。すなわち
、Ｘのα−アミ７基をカルボベンゾキシ基、（４−ＯＨ
３０）カルボベンゾキシ基あるいはｔ−ブチルオキシカ
ルボニル基などで保護した一般式（匍・ （式中、２はカルボベンゾキシ基、又は前記と同じ）で
示され−るＮ−ヒドロキシサクシイミドエステル体と酸
、好ましくは２５％ＨＢｒ／酢酸で処理してα−アミン
保饅基を除去してえられる式（ｎ）ｂ：（式中、Ｍｔｓ
は前記と同じ）で示される化合物とをジメチルホルムア
ミド（以下、ＤＭｌｒという）中、室温で終夜反応させ
ることによって目的とするジペプチドの保睦基化体がえ
られる。ついで該製造法の最終工程である全保護基の脱
離反応を酸により行なうが、とくに少量のアニソールを
加えたトリフルオロメタンスルホン酸とトリフルオｔ＝
ｅ酸との等景況合物を用いて行なうのが好ましい。

叙上のごとくしてえられる粗ペプチドをＣＭ−セファデ
ックスＣ−２５を用いたイオン交換カラムクロマトグラ
フィで精製分離し、０．ＩＮアンモニアで溶出させた主
要溶出画分を集めて凍結乾燥する。かかる方法により一
般式（Ｉ）で表わされるγ−ヒドロキシアルギニン含有
ジペプチドがｒ−ヒトルキシアルギニンから収率２０〜
４０％でえられる。

るアミノペプチダーゼＢの活性を町害する作用を有する
。また化合物（Ｉ）の一つであるイソロイシル−γ−ヒ
ドロキシアルギニンはルイス系雌性ラット（８遍令）に
おいてフロイントコンプリートアジュバントにより惹起
されるアジュバント関節炎に対し１力月間の連続静脈内
投与によって一次炎症ならびに二次炎症を抑制し、さら
に治療試験においても関節腫脹を減少させる作用を有す
る。また本発明化合物は叙上の生理活性作用のみならず
免疫系を介する抗炎症剤、抗アレルギー剤、免疫療法剤
、制ガン剤などとしても有効である。

なお本発明における出発物質であるγ−ヒドロキシアル
ギニンはＭｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ
　（メタリジウム・アニソプリアエ）が産生ずるに５８
２ペプチドからｈｑ製したものである（　Ｓ、Ｋｏｎｄ
ｏら、Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｏ　６５、ｐ５５５〜
５４２　（１９８０）　）。

なお、本叫細務中の各略号は、それぞれ工ＵＰＡＣ！−
工ＵＢに基づく略号または当該分野における慣例略号で
表示したつぎに示すアミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基または試桑を示す。

（γ−１４０）Ａｒｇ　：γ−ヒドロキシアルギニン、
工ｌｅ：イソロイシン、ＬθＵ：ロイシン、Ｖａ／：バ
リン（とくに表示のないはあい、アミノ酸はＬ体である
）、２：カルボベンゾキシＪＪ、　、Ｂ　ｏ　ｃ　：　
ｔ−ブトキシカルボ＝　／ｌ／　３　、Ｍｔｓ　：２．
４．６−　）リメチルベンゼンスルホニル基、ＴＦＡ：
）リフルオロ酢７　、　ＴＦＭＳＡ：　）リフルオロメ
タンスルホン酸、Ｏ８ｕ：　Ｎ−ヒドロキシサクシイミ
ド、ＤＣＣニジシクロへキシルカルボジイミド、ＤＭＦ
！ジメチルホルムアミド、ＢｕＯＨ：ブタノール、Ａｃ
ＯＨ：酢酸、ＭｅＯＨ：メタノール、ＡｃＯ’Ｋｔ　：
酢酸エチル、Ｅ！ｔ３ＮＦ　）リエチルアミン。

つぎに実施例およ゛ｂ試験例をあげて本発明をさらに詳
しく説明するが、本発明はかかる実施例のみ、に限定さ
れるものではない。

実施例１Ｚ−（γ−ＨＯ）Ａｒｇ　−ＯＨ合成Ｈ−（γ
−ＯＨ）Ａｒｇ−ＯＨ１ｐ　（０，００５２モル）をＮ
ａ）（Ｏｏ３（４−４２ｍ９．）水溶液７ｍｇに加え、
氷水で冷却下にｚ−ａＩ！１．４５９（０，００８モル
）　ヲ加え、ついでＮａＨＯＯ３（ｓａｏｍ、　）の水
溶液Ｆ３ｍｌを加えて激しく攪拌した。６０分後室温に
もどし、さらに２時間反応させ、析出した油状物が固化
したところで反応液をデカントで除き、水およびエーテ
ルで洗浄し、減田乾・操して無色粉末の目的物質をえた
。

数置　：　　１．２．（７０，４％）　　、ｍｐ　　：
　　１６００（分「イ　）旋光度：　［ａ］　Ｄ７　＋
１８．４°（０＝２．０．６０％凹水溶液） 薄層クロマトグラフィ（以下、Ｔ、Ｌ、Ｏという）Ｒｆ
　（ｎＢｕＯＨ：　ＡａＯＨ：　ＨｅＯ＝４　’　１　
’　２　）　−〇−５４Ｚ−（ｒ−０１（）Ａｒｇ−Ｏ
Ｈ１，２９（０，００３７モル）を４Ｎ−ＮａＯＨ３、
７ｍ　ｌ　とアセトンｉ５＋ｎｚ＋の混液に懸濁し、０
°Ｃ冷却下にＭｔｓ−０／　２．０２　　（０，００９
２５モＡ’）のアセトン溶液５ｍｌり を加えて攪拌した。３０分後室温にもどし、約４時間反
応させ、析出した沈殿をｆ別したのち反応炉液を濃縮し
・残渣を酢酸エチル溶液とし、洗浄後％８０４上で乾燥
し′た。酢酸エチルを留去し、残った粗結晶を酢酸エチ
ル−エーテルで再結晶して無色粉末の目的物質をえた。

収量：　８２０ｍｇ（４５，４％）　ｍｐ：　１６７〜
１７０°Ｃ施光度二＼〔α）　　＝−１７，２（Ｃ！＝
１．０、ＭｅＯ）（）Ｔ、Ｌ、Ｃ Ｒｆ（ＯＨＯ／３：ＭｅＯＨ：ＡＣＯＨ＝９５　：　３
　：　２　）＝０．＋５Ｒｆ　（ａＨｃ　／ｇ　：　ｐ
−ａｏ砒＝　１　４　４　）＝０．４２坂口反応（へ）
、ニンヒドリン反応（ハ）正スペクトル（ａｍ　　） １７８５（シーラクトン） ■スペクトル（ｍ／θ）　４８８（ｌｔ（＋）穆伯スタ
トル（δ値：　ｐｌ）ｍ）　、（ＩＭＩＩＯ中）２．２
０　（３Ｈ，日）、２．６０（６Ｈ，ｓ　）、４．４０
（Ｈ，ｍ　）、４．６（ＨＸｍ）、５．和（そａ、ｅ）
、７．３（５Ｈ，ａ　）元素分析値”２３Ｈ２８０６Ｎ
４Ｓとして理論値（％）：　ａ５６．５４　　Ｈ５，７
８Ｎ１１．４７実測値（支））：　０５６．６Ｄ　　Ｈ
５，８４Ｎ１１．３６再結晶用液を留去すると約８００
ｍ、の油状物が残り、Ｔ、Ｌ、Ｏ上うクトン体とともに
かなりのＺ−（７−ＨＯ）Ａｒｇ（ＭｔＢ）−ＯＨ体の
存在が認められた。そこで該油状物をピリジン５ｍｅに
溶かし、Ｍｔ、−Ｃ１２当量を加えて冷所に一晩放置す
ることによってラクトン体の油状物（約９００ｍ９）を
えた。この油状物のまま、つぎの脱保獲基（脱２）化反
応に用いることも可能であった。

この反応におけるラクトン体の縮収率は油状懸濁し、冷
却下２５％ＨＢｒ−酢酸溶液１０ｍ／　（２０当量）を
加えた。均一となった溶液を室温で約５０分間攪拌し、
反応物を減圧濃縮し、残留物は固化し、無水エーテル中
で砕きながらよく洗浄し、沈殿を戸数して淡い灰色の粉
末の目的物質をえた。

収ｌｉｔ　　’　　６００ｍｇ　（８６％）　　ｍｐ　
ｉ　１４２°（分解）旋光度：〔α）　　＝−８，０°
（ｃ＝１．０．６０％ｌｆｔ１［Ｆ水酵）Ｔ、Ｌ、０ ｎｆ（ｎ−ｎｕｏｕ：Ａｃｏｕ：Ｈ２ｏ＝４　：　１　
：　２　）　＝０．５７Ｒｆ（ａｕａｚ３：ＭｅＯＨ：
ＡＱＯＨ＝８５　：　１０　：　５　）　＝０．０５坂
口反応に）、ニンヒドリン反応（ト）正スペクトル（ｃ
＋ｎ”） ５ｍｌに溶解し、砒３Ｎ　２４０ｍｇ　（０−００２３
モル）を加え、ついでＺ−Ｉｅｅ　−Ｏｓｕ　８３４ｍ
９（０，０Ｏ２３モル）のＤＭＦ　（５ｍ／）溶液を加
えて室温で一晩反応させた。反応液を減圧濃縮し、残留
物を酢酸エチル溶液とし、１０％クエン酸および水で洗
浄したのちＭ、５Ｏ４）：で乾燥した。酢酸エチルを留
去し、残留物をエーテルで粉末とし、沖取して淡い灰色
粉末の目的物質をえた。

収量’　　９００ｍグ（６５％）　ｍｐ：１１０〜１１
１°（分解）旋光度：〔α）、　＝−１７，０°（ａ＝
１．２２、ＭｅＯＨ）Ｔ、Ｌ、０ ％　ＣａＨＯ１３’　ＡｏＯ砒−１’　４　）　＝０−
４５ｍスペクトル（ｏｎ） １７８０（シーラクトン） ■スペクトル（ｍ／ｅ） ６０ＨＭ”） 実施例５Ｈ−工１ｅ−（γ−ＨＯ）Ａｒｇ　−ＯＲの合
成０Ｆ３Ｓｏ３Ｈ６，２ｇとＴＦＡ４．７ｇおよびアニ
ソール４５０ｍｇの混液に冷却下、２−工１ｅ−（γ−
ＨＯ）Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−０Ｈ−／ａｃｔｏｎｅ５００
ｍｐ　（０，００８！＋モル）を加えて室温にもどして
約１時間攪拌した。反応液に無水エーテルを加え、析出
した油状物をエーテルで洗ったのち、少量の水に溶解し
、アンバーライトＣＧ−４００（酢酸型）樹脂５９を加
えて３０分間攪拌したのち、樹脂を炉別した。

炉液をｌＮ−ｌＮａＯＨでアルカリ性とし、しばらく放
置したのち酢酸で中和してＣＭ−セファデックス０−２
５のカラム（２，５Ｘ　１３ｃｍ）を用いてカラムクロ
マトグラフィーを行ない、０．ＩＮアンモニアで溶出さ
せ、主要溶出画分を集め、凍結乾燥して精製した。

収量：　１４０ｍｐ（５６％） 旋光度：〔α）１＝−５，７°（ｏ−１，１、Ｈｅ０Ｔ
、Ｌ、０ Ｒｆ（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ２０＝４　：　１　
：　２　）　＝０．３０ＲｆＣｊ−ｋｎ１４０Ｈ’　ｎ
−ＰｒＯＨ＝７　’　１５）　＝０−０５坂口反応（ト
）、ニンヒドリン反応（ト）アミノ酸分析値（モル比） 工ｌｅ　：　０．９０、（γ−Ｈ０）　ｕｇ　：　１．
００実施例６　　　Ｈ−Ｖａｐ−（γ−ＨＯ）　Ａｒ（
＜　−ＯＨの合成Ｈ−（γ−ＨＯ）Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−
０Ｈ−／’ａｃｔｏｎｅ−）ＩＢｒ　６０８ｍｐ　（０
，００１４モル）をＤＭＦ　３ｍ／に浴用’Ｉ’　シ、
Ｅｔ３Ｎ　１４１ｍｇ（０，００１４モル）を加えつい
でＢｏｃ−Ｖａ４−Ｏ８ｕ　４４０ｍｇ（０，００１４
モル）のＤＭＦ　Ｈ液（５ｍ４　）を加えて室温で一晩
反応させた。反応液を減圧濃縮し、酢酸エチル溶液とし
て１０％クエン酸および水などで洗浄したのちＭｇ５０
４１．で乾燥した。酢酸エチルを留去し、残留物をエー
テルで粉末とし戸数した。えられたＢｏａ−Ｖａ／−（
γ−ＨＯ）Ａｒｇ、（Ｍｔｅ）−０Ｈ−／ａｃｔｏｎｅ
体５６０ｍｇ　＜７２．６％）を０Ｆ３ＳＯ３Ｈ−ＴＦ
Ａ−アニソール中に加えて全保設基を除去し、実施例５
と同様にＣ！Ｍ−８ｅｐｈａｄｅｘＯ−２５によるカラ
ムクロマトグラフィを行ない、主要画分を集め、凍結乾
燥して精製した。

収量ｉ　１５０ｍｇ（５７，０１％） 旋光度：〔α］　　＝−１１，０８°（ａ　＝　０．６
９５、Ｈ２Ｏ）Ｔ、Ｌ、０ Ｒｆ（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈｇ０＝４　：　１　
：　２　）＝０．２０坂口反応（ト）、ニンヒドリン反
応（ト）アミノ酸分析値（モル比） Ｖａ／　：　１．１９、（γ−ＨＯ）Ａｒｇ：１．００
実施例７　　１−Ｌｅｕ−（γ−Ｈｏ）Ａｒｇ−ＯＨの
合成Ｈ−（γ−ＨＯ）Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−０Ｈ−ｅａａ
ｔｏｎｅ−ＨＢｒ　５４６ｍｇ　（０，００１２５モル
）をＤＭＦ中、ＢＯＣ−Ｌ（ｌｕ−Ｏ８ｕ　４１０ｍ９
（０，００１２５モル）と−晩反応させ、灰色粉末とし
てＢｏａ−Ｌｅｕ−（７−ＨＯ）Ａｒｇ（Ｍｔｅ　）−
０Ｈ−ｐａｃｔｏｎｅ５５０ｍｇ（７６％）をえた。つ
いでＣＦ３５０３Ｈ−′ｒＦＡ−アニソールの溶液中に
加え１．室温で１時間反応させて全保調基を除去した。

実施例５と同様にＯＭ−セファデックスＣ−２５のカラ
ムクロマトグラフィにより溶出させ、主要画分を集め、
凍結乾燥して精製した。

収量：　１９０ｍｇ（５０，２％） 旋光度Ｃａ１ｌ　＝−８，５２°（０＝０．５７５、Ｈ
２Ｏ）Ｔ、Ｌ、０ Ｒｆ（ｎ−ＢｕＯＨ：　ＡｃＯＨ’　％Ｏ＝４　’　１
　’　２　）　＝０．４０坂口反応（ト）、ニンヒドリ
ン反応（ホ）アミノ酸分析値（モル比） Ｌｅｕ　：　１．３０、（γ−ＨＯ）Ａｒｇ　：　１　
、ＤＯ試験例 （１）アミノペプチダーゼＢ活性＋（ｌｌ害作用ラット
肝臓ホモジネート６５００Ｘり上清を＃素錠とし・アル
ギニル−β−ナフチルアミドを基質としてアミノベブチ
グーゼＢ活性１６１害作用を調へた。結果を第１表に示
す。

第　　　　１　　　　表 ＩＣ５゜：５０％阻害濃度 第１表から明らかなように本発明の化合物は明瞭なアミ
ノペプチダーゼＢ活性３Ｆｌ害作用を示した。

（２）リウマチ関節炎に対する効果 ルイス系雌性ラット（８週令）を使用し、フロイントコ
ンプリートアジュバントによって惹起されるアジュバン
ト関節炎に対する抑制作用によってリウマチ関節炎に対
する効果を調べた。

予防実験では、ｌ１ｅ（γ−ＨＯ）Ａｒｇｏ、１〜１．
０ｍＶ／ｋｐ／Ｅｌの１力月間連続静脈内投ｑ６によっ
て第１次炎症を２０〜４０％、第２次炎症を４０〜５０
％抑制した。治療実験においても関節）ＩＩ！′Ｉ脹を
０　、１〜１　、０ｍｇ／に９／日の一カ月間連続静脈
内投与によって２０〜５０％減少させた。斜上のごとく
本発明の化合物は明瞭なアジュバント関節炎に対する抑
制作用を示した。

特許出願人　科研製薬株式会社 守山市小島町９３５番地の１５ ０発　明　者　西克之 守山市今市町２６繻地の８ ０発　明°者　近藤師家治 仙台市国見三丁目４３番１１号

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １一般式（Ｉ）： Ｈ−Ｘ−（ｒ−ＨＯ）Ａｒｇ−ＯＨ（Ｉ）（式中、又は
   イソロイシン、ロイシンまたはバリンである）で示され
   、異常アミノ酸であるγ−ヒドロキシアルギニンを含有
   することを特徴とするジペプチド。 ２一般式（■）： ＮＮＨ−Ｂ （式中、Ａはカルボベンゾキシ基またはｐ−メトキシベ
   ンジルオキシカルボニル基、Ｂは２、４．６−　）リメ
   チルベンゼンスルホニル基、４−メトキシベンゼンスル
   ホニル基または２．６−シメチルー４−メトキシベンゼ
   ンスルホニル基である）で示されるγ−ヒドロキシアル
   ギニン保護基化体とイソロイシン、ロイシンまｔ、＝　
   ハバリンの保抑基化体とを反応させることを特徴とする
   一般式（１）： ％式％（１） （式中、Ｘはイソロイシン、ロイシンまたはバリンであ
   る）で示され、異常アミノ酸であるγ−ヒドロキシアル
   ギニンを含有するジペプチドの製造法。 ６一般式（Ｉ）： Ｈ−Ｘ−（７−ＨＯ）Ａｒｇ−岨　　　　　　　（１）
   （式中、Ｘはインロイシン、ロイシンまたはバリンであ
   る）で示されるジペプチドを有効成分とするアミノペプ
   チダーゼＢ活性阻害剤。 ４一般式（１）： Ｈ−Ｘ−（γ−ＨＯ）　Ａｒｇ　−ＯＨ（１）（式中、
   Ｘはイソロイシン、ロイシンまたはバリンである）で示
   されるジペプチドを有効成分とするりウマチ関節炎治療
   剤。