JPS59125900A - 糞潜血の存在を決定する方法およびそれに使用する薬剤 - Google Patents
糞潜血の存在を決定する方法およびそれに使用する薬剤Info
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- JPS59125900A JPS59125900A JP58240810A JP24081083A JPS59125900A JP S59125900 A JPS59125900 A JP S59125900A JP 58240810 A JP58240810 A JP 58240810A JP 24081083 A JP24081083 A JP 24081083A JP S59125900 A JPS59125900 A JP S59125900A
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヘモグロビンとグアヤク（ｇｕａｉａｃ）と
の反応に基づく方法を用いて、糞便試料の糞潜血を決定
する際に、偽陽性の原因となる妨害作用を防止する方法
に関する。
の反応に基づく方法を用いて、糞便試料の糞潜血を決定
する際に、偽陽性の原因となる妨害作用を防止する方法
に関する。
偽陽性テストヲ避けるために、過去には、グアヤク−ペ
ルオキシダーゼ（ｇｕａｉａｃ −ｐｅｒｏｘｉｄａａ
ｅ）試薬によってテストする際に、患者の食物摂取をコ
ントロールすることをしばしば行なっていた。このよう
なテスト全適用する際のよジ改良された方法は本発明者
によって米国特許第４：３３３，７ ａ ４号明細書に
記載されておシ、損出した食物からのペルオキシダーゼ
の存在による偽陽性テストが防止される。この方法の基
本は、ペルオキシダーゼ酵素の部分的な変性と、効果的
なペルオキシダーゼ酵素活性に必要な金属の除去との組
合せにある。この組合せによれば、ヘモグロビン活性に
影響を与えるような厳しい条件全必要とすることなく、
ベルオキシダー′ゼ効果の阻害要素を除くことができる
。
ルオキシダーゼ（ｇｕａｉａｃ −ｐｅｒｏｘｉｄａａ
ｅ）試薬によってテストする際に、患者の食物摂取をコ
ントロールすることをしばしば行なっていた。このよう
なテスト全適用する際のよジ改良された方法は本発明者
によって米国特許第４：３３３，７ ａ ４号明細書に
記載されておシ、損出した食物からのペルオキシダーゼ
の存在による偽陽性テストが防止される。この方法の基
本は、ペルオキシダーゼ酵素の部分的な変性と、効果的
なペルオキシダーゼ酵素活性に必要な金属の除去との組
合せにある。この組合せによれば、ヘモグロビン活性に
影響を与えるような厳しい条件全必要とすることなく、
ベルオキシダー′ゼ効果の阻害要素を除くことができる
。
米国特許第４，３３３，７３４号明細書の方法および装
置を臨床的に数多くテストすることによって、患者から
取られたある種の試料が、未だ偽陽性を生じることが判
った。この偽陽性テストは薬剤ないしは薬剤代謝物、あ
るいは患者の排泄物中のｐｉ（の大きな変化によるもの
と考えられている。
置を臨床的に数多くテストすることによって、患者から
取られたある種の試料が、未だ偽陽性を生じることが判
った。この偽陽性テストは薬剤ないしは薬剤代謝物、あ
るいは患者の排泄物中のｐｉ（の大きな変化によるもの
と考えられている。
本発明の主な目的は、種々の試料中のヘモグロビンの決
定にグアヤク−ペルオキシダーゼ型の反応を用いる際に
、阻害薬剤ないしは薬剤代謝産物によって起こる偽陽性
テスト全適用ないしは除去することにある。
定にグアヤク−ペルオキシダーゼ型の反応を用いる際に
、阻害薬剤ないしは薬剤代謝産物によって起こる偽陽性
テスト全適用ないしは除去することにある。
１つには本発明は水性アルコール溶剤系を提供すること
にあり、この溶剤系は、溶解性の差違によシ薬剤が試料
から反応混合物中に抽出さ′れるの全妨害し、これによ
シ、グアヤク−ペルオキシダーゼテスト法が用いられる
際の、薬剤の反応に対する影響を事実玉取シ除くことが
できる。本発明方法は、ひとつには米国特許第４．３３
３，７３４号明細誉に記載された方法の改良発明であシ
、特にこの、従来方法と組合せて用いるのに有用である
。この従来方法は反応開始剤の添加の前に、抑制剤を用
いることが必要であシ、つまり２つの工程が必要となる
。この結果、ペーノで−クロマトグラフイー分離に類似
した移動により、阻害薬剤が反応帯域に抽出される可能
性がある。
にあり、この溶剤系は、溶解性の差違によシ薬剤が試料
から反応混合物中に抽出さ′れるの全妨害し、これによ
シ、グアヤク−ペルオキシダーゼテスト法が用いられる
際の、薬剤の反応に対する影響を事実玉取シ除くことが
できる。本発明方法は、ひとつには米国特許第４．３３
３，７３４号明細誉に記載された方法の改良発明であシ
、特にこの、従来方法と組合せて用いるのに有用である
。この従来方法は反応開始剤の添加の前に、抑制剤を用
いることが必要であシ、つまり２つの工程が必要となる
。この結果、ペーノで−クロマトグラフイー分離に類似
した移動により、阻害薬剤が反応帯域に抽出される可能
性がある。
最も好ましい実施態様においては、温和な酸が反応混合
物に添加され、ペルオキシダーゼ抑制の速度が高められ
、反応条件の均一性全確実なものとする。また、陽性テ
ストの色強度も高められる。
物に添加され、ペルオキシダーゼ抑制の速度が高められ
、反応条件の均一性全確実なものとする。また、陽性テ
ストの色強度も高められる。
本発明は、薬剤代謝産物あるいは他の水溶性の阻害物質
による偽陽性テストヲ避けるための改良に関し、溶剤、
即ちアルコール含有混合溶剤の使用を骨子とするもので
あって、これによシ上記物質の溶解性が減少する。水−
アルコール混合物を用いることは、従来方法の信頼性全
改善するのに非常に有利であることが判った。
による偽陽性テストヲ避けるための改良に関し、溶剤、
即ちアルコール含有混合溶剤の使用を骨子とするもので
あって、これによシ上記物質の溶解性が減少する。水−
アルコール混合物を用いることは、従来方法の信頼性全
改善するのに非常に有利であることが判った。
用いられるアルコールや、種々のテストシステムの試薬
の得られる混合物に対する溶解性にもよるが、約５０％
アルコール、５０％水の混合物が好ましい。広い組成範
囲に亘って水と混和する低級アルコールは本発明におい
て有用であシ、この具体例としてメタノール、エタノー
ルプロパノール、インプロパツール、ｎ−ブタノールが
挙げられる。この中でも、価格が適当であること、入手
しやすいこと、取扱いが安全であることから、エタノー
ル、インプロパツールが好ましい。
の得られる混合物に対する溶解性にもよるが、約５０％
アルコール、５０％水の混合物が好ましい。広い組成範
囲に亘って水と混和する低級アルコールは本発明におい
て有用であシ、この具体例としてメタノール、エタノー
ルプロパノール、インプロパツール、ｎ−ブタノールが
挙げられる。この中でも、価格が適当であること、入手
しやすいこと、取扱いが安全であることから、エタノー
ル、インプロパツールが好ましい。
また、本発明は、アルカリ試料の存在下にあっても反応
混合物がわずかに酸性にあるようにすることにより、テ
ストによシ得られる色強度を増加する方法を提供するこ
とにある。これは、スライド上の試料塗布に１ないし２
滴の弱酸、好ましくは酢酸を加えることにょシ行なわれ
る。
混合物がわずかに酸性にあるようにすることにより、テ
ストによシ得られる色強度を増加する方法を提供するこ
とにある。これは、スライド上の試料塗布に１ないし２
滴の弱酸、好ましくは酢酸を加えることにょシ行なわれ
る。
酸は、また、ペルオキシダーゼ抑制の速度をスピードア
ップし、米国特許第４，３３３，７３４号明細書の方法
を用いたとき、酸の添加がない条件では通常２．５〜３
時間であるが、酸を添加することによ９５〜１０分にな
る。この結果、試験を実施するに際しての時間が大幅に
節約される。
ップし、米国特許第４，３３３，７３４号明細書の方法
を用いたとき、酸の添加がない条件では通常２．５〜３
時間であるが、酸を添加することによ９５〜１０分にな
る。この結果、試験を実施するに際しての時間が大幅に
節約される。
後記の第１表において、色強度は次のよう罠判定した。
なし：色応答がない。
痕跡：肉眼で色応答が殆どみられない。
＋ｌ：わずかな色応答がある
＋２：中度の色応答がある。
＋３二強い色応答がある。
＋４：非常に強い色応答がある。
水に対して高い割合でアルコールを用いることによシ、
阻害物質の溶解性を最小にして良い結果が得られること
が期待された。そこで、試料に適用されるペルオキシダ
ーゼ変性試薬と用いることができる最大アルコール濃度
を決定するために、試薬溶解性テスト２行なった。
阻害物質の溶解性を最小にして良い結果が得られること
が期待された。そこで、試料に適用されるペルオキシダ
ーゼ変性試薬と用いることができる最大アルコール濃度
を決定するために、試薬溶解性テスト２行なった。
公知の方法で野菜および果物のペルオキシダーゼ活性を
抑制するのに用いられるＥＤＴＡ試薬および６Ｍ−グア
ニジンハイドロクロライドは、メタノール、エタノール
、イソプロパ／ −ルまたはｎ−ブタノールの７０％水
溶液に完全に溶けないことが判った。ｎ−ブタノールが
細かいサスペンションの形で溶解性の問題の眺候本発明
に゛よれば、修正し庭ペルオキシダーゼ抑制剤試薬を用
いることによシ、多くの利点が得られ、これには以下の
点が含まれる。
抑制するのに用いられるＥＤＴＡ試薬および６Ｍ−グア
ニジンハイドロクロライドは、メタノール、エタノール
、イソプロパ／ −ルまたはｎ−ブタノールの７０％水
溶液に完全に溶けないことが判った。ｎ−ブタノールが
細かいサスペンションの形で溶解性の問題の眺候本発明
に゛よれば、修正し庭ペルオキシダーゼ抑制剤試薬を用
いることによシ、多くの利点が得られ、これには以下の
点が含まれる。
（１） ペルオキシダーゼの阻害を抑制する時間が約
２〜３時間から約１０分に効率的に減少する。これは第
１表からも明らかな通シであシ、修正した試薬を用いた
反応に酸を添加したとき、１０分後にはわずかに痕跡の
反応のみが残った。酸を添加しないと、反応を「痕跡」
にまで減するのに、抑制時間は未だ約３０分である。
２〜３時間から約１０分に効率的に減少する。これは第
１表からも明らかな通シであシ、修正した試薬を用いた
反応に酸を添加したとき、１０分後にはわずかに痕跡の
反応のみが残った。酸を添加しないと、反応を「痕跡」
にまで減するのに、抑制時間は未だ約３０分である。
（２）酢酸は抑制時間全減少するのに役立つばかりでな
く、各サンプルについて“均一なテスト条件を確保する
。即ち、酢酸のような弱酸全添加することによシ、アル
カリサンプルの存在下であっても反応混合物がわずかに
酸性に止まるのを確かなものにする。
く、各サンプルについて“均一なテスト条件を確保する
。即ち、酢酸のような弱酸全添加することによシ、アル
カリサンプルの存在下であっても反応混合物がわずかに
酸性に止まるのを確かなものにする。
（３） アルコール性のマトリックスは、糞便中の脂
肪が著しく増加した脂肪便症）ヒ示す患者をテストする
際に、ｔ５効率的である。７アル・コール性の抑制剤試
薬音用いて試料全前処理することによシ、試料の疎水的
な粘稠性が減少し、ペルオキシダーゼ活性の抑制および
ヘモグロビンの反応性をより効率的にする。
肪が著しく増加した脂肪便症）ヒ示す患者をテストする
際に、ｔ５効率的である。７アル・コール性の抑制剤試
薬音用いて試料全前処理することによシ、試料の疎水的
な粘稠性が減少し、ペルオキシダーゼ活性の抑制および
ヘモグロビンの反応性をより効率的にする。
（４） 陽グアヤク反応の色が陽テストでょシ鮮やか
にみられた。後者は、陽テスト条件下に示された色の、
そうでない場合の比較的早い色の消失を減するテストの
酸性の均一性から生じるものである（即ち、ヘモグロビ
ンの存在）。
にみられた。後者は、陽テスト条件下に示された色の、
そうでない場合の比較的早い色の消失を減するテストの
酸性の均一性から生じるものである（即ち、ヘモグロビ
ンの存在）。
明細書および具体例は本発明全具体的に説明するための
ものであシ、本発明を限定するものではない。また、本
発明の考え方および範囲に含まれ当業者に示唆される実
施態様も当然に本発明に含まれるものである。
ものであシ、本発明を限定するものではない。また、本
発明の考え方および範囲に含まれ当業者に示唆される実
施態様も当然に本発明に含まれるものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 グアヤクーベルオキシターゼ・テストマトリックスを用
い、プロティン−水素結合解裂剤を使用するベルオキシ
ターゼ酵素プロティンの変性と、効率的なペルオキシダ
ーゼ酵素活性に必要な金属の除去とを組合せるペルオキ
シダーゼ酵素の阻害を抑制する手段を用いる糞潜血の存
在を決定する方法において、前記プロティン−水素結合
解裂用試薬を、該試薬全試料に添加する前に、アルコー
ル−水溶媒に溶解することを特徴とする糞潜血の存在を
決定する方法。 ２・ 色を発色させる前に、反応混合物に温和な酸を添
加する工程をさらに含む特許請求の範囲第１項に記載の
方法。 ３、前記酸が酢酸である特許請求の範囲第２項に記載の
方法。 ４．２滴の酸が試料に添加される特許請求の範囲第２項
に記載の方法。 ５、 前記試薬が、グアニジン、尿素またはザリチル酸
である特許１１８求の範囲第１項に記載の方法。 ６、 前記アルコール−水溶剤が約等量の水およびアル
コールを含む特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ７、 前記試薬溶液が６Ｍ−グアニジンノ・イドロクロ
ライドを含む特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ８、 グアヤク−ペルオキシダーゼ・−テストマトリッ
クスを用い、プロティン−水素結合解裂剤を使用するペ
ルオキシダーゼ酵素プロティンの変性と、効率的なペル
オキシダーゼ酵素活性に必要な金属の除去とを組合せる
ぺ・ルオキシダーゼ酵素の阻害全抑制する手段を用いる
糞潜血の存在を決定する方法において、色を発色させる
前に、反応に温和な酸を添加すること全特徴とする糞潜
血の存在を決定する方法。 ９、 プロティン−水素結合解裂用試薬を加える前に、
温和な酸が添加される特許請求の範囲第８項に記載の方
法。 ｉｏ、 前記温和な酸が酢酸である特許請求の範囲第
８項に記載の方法。 １１．２滴の酸が添加される特許請求の範囲第１０項に
記載の方法。 １２．２滴の酸が添加される特許請求の範囲第９項に記
載の方法。 １３、 アルコール９２０〜５ｏ容Ｍ％の水溶液に溶
解された有効量のグアニジン、尿素またはサリチル酸お
よびＥ Ｄ ’ｊＡ ’ｉ含むこと全特徴とする、特許
請求の範囲第１項の糞潜血の決定方法におけるペルオキ
シダーゼ酵素阻害の抑制用試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/451,526 US4493892A (en) | 1982-12-20 | 1982-12-20 | Solvent system for peroxidase inhibitor reagent for fecal occult blood determinations |
| US451526 | 1982-12-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59125900A true JPS59125900A (ja) | 1984-07-20 |
Family
ID=23792585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58240810A Pending JPS59125900A (ja) | 1982-12-20 | 1983-12-20 | 糞潜血の存在を決定する方法およびそれに使用する薬剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4493892A (ja) |
| EP (1) | EP0111916A1 (ja) |
| JP (1) | JPS59125900A (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4956300A (en) | 1982-01-05 | 1990-09-11 | Helena Laboratories Corporation | Aid for determining the presence of occult blood, method of making the aid, and method of using the aid |
| US5702913A (en) | 1983-12-21 | 1997-12-30 | Helena Laboratories Corporation | Chromgen-reagent test system |
| US5273888A (en) | 1984-01-16 | 1993-12-28 | Helena Laboratories Corporation | Chemical test kit and method for determining the presence of blood in a specimen and for verifying the effectiveness of the chemicals |
| US4818702A (en) * | 1986-06-02 | 1989-04-04 | Litmus Concepts, Inc. | Fecal occult blood test reagent |
| EP0281251A3 (en) * | 1987-02-04 | 1988-09-28 | International Immunoassay Laboratories, Inc. | A method for preparing a fecal sample composition for immunoassay testing |
| US5198365A (en) * | 1987-02-04 | 1993-03-30 | International Immunoassay Laboratories, Inc. | Fecal sample immunoassay method testing for hemoglobin |
| US5081040A (en) | 1987-06-29 | 1992-01-14 | Helena Laboratories Corporation | Composition and kit for testing for occult blood in human and animal excretions, fluids, or tissue matrixes |
| US5310680A (en) * | 1987-09-16 | 1994-05-10 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Test for fecal occult blood |
| CA1322326C (en) * | 1987-09-16 | 1993-09-21 | Josefina Tecson Baker | Test for fecal occult blood |
| WO1990002202A1 (en) * | 1988-08-16 | 1990-03-08 | Cetus Corporation | Reduction of peroxidatic and catalatic interference with assays of peroxidatic activity |
| US5182191A (en) * | 1988-10-14 | 1993-01-26 | Pacific Biotech, Inc. | Occult blood sampling device and assay |
| US5217874A (en) | 1989-04-04 | 1993-06-08 | Helena Laboratories Corporation | Fecal occult blood test product with positive and negative controls |
| US5196167A (en) | 1989-04-04 | 1993-03-23 | Helena Laboratories Corporation | Fecal occult blood test product with positive and negative controls |
| US5447868A (en) | 1993-09-14 | 1995-09-05 | Propper Manufacturing Co. Inc. | Method, reagent and kit for the detection of fecal occult blood |
| WO1995021849A1 (de) * | 1994-02-11 | 1995-08-17 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur trennung von doppelstrang/einzelstrangnukleinsäurestrukturen |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3933594A (en) * | 1974-08-16 | 1976-01-20 | Polaroid Corporation | Method and device for determining the concentration of a substance in a fluid |
| CS175782B1 (ja) * | 1974-10-16 | 1977-05-31 | ||
| US4175923A (en) * | 1978-06-26 | 1979-11-27 | Friend William G | Method and apparatus for occult blood testing in the home |
| DE2850603A1 (de) * | 1978-11-22 | 1980-06-19 | Merck Patent Gmbh | Haemolysierloesung und verfahren zur haemolyse von blut |
| JPS5592698A (en) * | 1978-12-31 | 1980-07-14 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | Test strip for glucose determination |
| DE2910737C2 (de) * | 1979-03-19 | 1984-01-19 | Ewald 6701 Dannstadt-Schauernheim Blees | Verfahren zur Ausschaltung störender Begleitreaktionen bei enzymatischen Analysenverfahren |
| US4277250A (en) * | 1979-12-10 | 1981-07-07 | Baylor College Of Medicine | Methods for detecting and quantifying occult blood |
| US4333734A (en) * | 1980-01-18 | 1982-06-08 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Diagnostic device for fecal occult blood and method of use |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
-
1982
- 1982-12-20 US US06/451,526 patent/US4493892A/en not_active Expired - Fee Related
-
1983
- 1983-12-17 EP EP83112749A patent/EP0111916A1/en not_active Withdrawn
- 1983-12-20 JP JP58240810A patent/JPS59125900A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4493892A (en) | 1985-01-15 |
| EP0111916A1 (en) | 1984-06-27 |
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