JPS59122952A - 血清ビリルビン標準組成物の貯蔵寿命を伸ばす方法およびその生成組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は検査室用材料、さらに詳しくは、安定な血清
ビリルビン標準組成物に関するものである。

従来、２　ｏｍｇ／ｌｏ　ｏｍｌなるビリルビンの濃度
は、脳損傷が起きないように新産児への輸血を決める医
師の判定基準として使用されている。普通、この操作は
、分娩時にかなりの外傷を受ける新産児の場合に行なわ
れる。その新産児には、ビリルビン試験に基づいて輸血
か或いは血液交換が行なわれる。

現在、標準品（医薬品を検定するときに基準として用い
るもの）は、ビリルビンを含む種々の分析体を安定化す
るために凍結乾燥法で調製されている。これらの凍結乾
燥した標準品は使用前に検査室で再生（または還元）し
なければならない。

再生した標準品は、最高で約１日間だけ検定体として有
効である。その再生標準品は徐々に分解して低い値にな
って行く。しかるに、検査室は常にその検定体の理論的
に高い値を使用する。それは残念ながら間違った結果を
もたらすことになる。

先行技術のビリルビン標準品は、貯蔵温度が一２５℃の
時に１ケ月当り約２％劣化すると報告されている。従っ
て、この温度では長い貯蔵ができない。−１６℃で１２
日間貯蔵したビリルビン標準品は約５％劣化する。−７
０では、ビリルビン標準品はかなり良好な安定性を示貝
、６ケ月後Ｃ１１ｎ　ｌ　Ｃａ　ｌ　　Ｃｈ　ｅ　ｍ　
ｌ　Ｓ　ｔｒ　ｙ＋　　Ｗ　、Ｂ　、Ｓ　ａｕｎｄｅ　
ｒ　Ｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ　ｌＰｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ
、　　Ｐｅｎｎ、＋　　２ｎｄ、　Ｅｄｉｔｉｏｎ（１
９７６）。

ｐ　１０３５−１０１↓う、およびＤｏｕｍａｓ　ｅｔ
　ａｌ、。

Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９（９）　
、ｐ９８Ｌ（１９７３）を参照されたい）〕。

この発明は、優れた貯蔵寿命を有する血清ビリルビン標
準組成物全包含する。その血清ビリルビン標準組成物は
、該組成物が（１）さらにビリルビンの安定性を増すの
に十分な量のスルフヒドリル化合物を含むこと、または
（２）約８３〜９５のｐＨ’に有しかつビリルビンの安
定性を増すのに十分な量のスルフヒドリル化合物を含む
こと、または（〉）約８２〜９２のｐＨｔ有しかつ（ａ
）ビリルビンの安定性を増すのに十分な量のスルフヒド
リル化合物と、（ｂ）該組成物の血清部分に存在する全
ての金属を結合するのに十分な量のキレート剤を含むこ
とを特徴とする。

血漿に対する酸化−還元電位の範囲は、血漿の鮮度に依
存して普通約＋７〜＋ｌｌＯｍＶ（ミＩＪボルト）であ
る。血漿のレドックス電位をスルフヒドリル化合物で下
げることによって、ビリルビン組成物の貯蔵寿命を著し
く長くできることがわかった。用いるスルフヒドリル化
合物の正確な量が決定的ではないが、スルフヒドリル結
合の橋かけを避けるためにスルフヒドリル化合物を余り
多く使用することは回避すべきである。スルフヒドリル
結合の橋かけは二硫化物のブリッジ（−Ｓ−Ｓ−）を形
成し、それが重合体マトリックスをもたらす。

この重合体マトリックスは組成物にゲル状コンシスチン
シーを与え、それによって組成物は臨床用に望１しくな
いものになる。同様に、スルフヒドリル化合物の使用量
が少な過ぎるとビリルビン組成物は不安定になる。従っ
て、スルフヒドリル化合物の使用量は、組成物に有害な
特性を与えることなくビリルビンの安定性を増すのに十
分なものにすべきであり、その量は組成物のレドックス
電位を約−５０〜−３００ｍＶに下げるのに十分なもの
である。さらに詳しくは、スルフヒドリル化合物はレド
ックス電位を約−１００〜−２００ｍＶに下げるのに十
分々量で使用される。レドックス電位が約−１６０ｍＶ
に下がるようなスルフヒドリル化合物の使用量が最適で
ある。

多くのスルフヒドリル化合物が知られているが、いずれ
も本発明における還元剤として使用できる。

例えば、スルフヒドリル化合物はジチオエリトレイトー
ル、ジチオトレイトール（ＤＥＴ）、メルカプトエタノ
ール、システィン、還元グルタチオン＋Ｎ−７セチル・
システィン、メルカフトアセテート、並びにそれらの混
合物からなる群から選ぶことができる。このスルフヒド
リル化合物の中でジチオトレイトールが望ましい。

本発明の第２実施態様における優れたビリルビン標準組
成物は、スルフヒドリル化合物を含む外に該組成物が約
８３〜９５、望ましくは約８５〜８７、最適には約８５
のｐＨｋ有することを特徴とする。本発明のビリルビン
標準組成物のｐＨば、先行技術がビリルビン標準品の安
定性全最高にするのに必須であると教示しているｐＨの
範囲７．５〜７．１＋の外側である（このことは前記Ｔ
ｉｅｔｚ　　の論文を参照されたい）。ｐＨは通常の方
法、例えば組成物にＮａＯＨを添加することによって調
整することができる。

本発明の第う実施態様におけるビリルビン標準組成物は
、（１）それが約８２〜９２のｐＨｅ有し、かつ（ａ）
スルフヒドリル化合物と（ｂ１組成物の血清部分に存在
する全ての金属を結合するのに十分な量のキレート剤か
らなることを特徴とする。この第５実施態様のビリルビ
ン標準組成物は約８．１１−８．９゜最適には約８７の
ｐＨ’ｚ有することが望ましい。

使用するキレート剤の量は、本発明のビリルビン標準組
成物１００ｍ１当り約２５〜１０００　ｒｎｇ、望まし
くは約５０〜１５０　ｍｇ、最適にはｔ’　ｏ　ｏ　ｍ
ｇである。

本質的に、いずれのキレート剤も本発明の組成物に使用
できる。既知キレート剤はフラッシュ力らによって検討
されている［　ＦＬａｓｃｈｋａ　ｅｔ　ａｌ−。

Ｃｈｅｌａｔｅｓ　ｉｎ　ＡｎａｌｙｔｌＣａｌ　ＣＦ
ｌｅｍｌＳｆｉｒｙ＋　Ｖｏｌ。

Ｉ−’Ｖ、　Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｃｋｅｒ、　Ｉｎｃ、
、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ＋を参照されたい〕。典型的なキ
レート剤としては、エチレンジアミニトリ酢酸（ＥＤＴ
Ａ、）、ニトリロトリ酢酸、エチレンジアミノ、ジエチ
レントリアミン、トリエチルテトラアミン、テトラエチ
レンペンタミン、ペンタエチレンヘキサアミン、Ｎ−ヒ
ドロキシエチルイミノジ酢酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−
Ｎ、Ｎ、Ｎ、エチレンジアミニトリ酢酸、Ｎ、Ｎ、Ｎ、
Ｎ、Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸、クエン酸、
タルタン酸、グルコン酸、トリポリリン酸塩イオン、ポ
リリン酸塩アニオン、Ｎ、Ｎ’−エチレンビス［２−（
０−ヒドロキシフェニル）〕グリシン、う、５−ジスル
ホピロカテコール、ビス（オルトヒドロキシベンジル）
エチレンジアミン−Ｎ、Ｎ−ジ酢酸、それらの塩類、お
よびそれらの混合物がある。これらのキレート剤の中で
Ｅ、Ｄ　Ｔ　Ａのニナトリウム塩が望ましい。ＥＤＴＡ
の他の塩としては、そのナトリウム塩およびテトラナト
リウム塩がある。

本発明の安定な血清ビリルビン標準組成物は血清ビリル
ビン標準品として使用される。即ち該組成物は機器の検
定、或いは機器が所望許容範囲内で作動していることを
周期的に立証するために使用することができる。これら
の用途に、本発明の血清ビリルビン標準組成物は約０１
〜ｎｏｍｇ７ｄｔの既知量のビリルビンを含有すること
ができる。

次の実施例は、説明を目的としたものであって本発明の
限定を意図したものではない。

非生物学的成分が約６６−％（重量）％の水と、約５５
−３Ａ（重量）％のエチレン・グリコールと、約１１０
１Ａ／ｄｔのビリルビンからなり、かつ６０〜１０．０
のｐＨ’に有するビリルビン組成物−１１１１℃で２１
１時間温置装、しかる後にビリルビンを定量した。第１
表は高温にさらした後に残るビＩＪ　）レビン（％）を
示す。

６．０　　　　　　　　　　　　　２１１８０　　　　
　　　　　　　　　ヰ　７８．３　　　　　　　　　　
　　７９ ８５　　　　　　　　　　　９６ ９０　　　　　　９６ ９、５　　　　　　　　　　　９２ １　０、０　　　　　　　　　　　　７０第１表は、約
８５〜９うなる最適のｐＨで本発明のビリルビン組成物
が顕著な安定性を示すことを明示している。ビリルビン
はｐ　Ｈ１０，０できわめて安定であるが、このｐＨ値
において酵素が急速に変性する。従って血清ビリルビン
標準組成物のｐＨｔ約９５以上に調整することは望まし
くなＩｔ’。

非生物学的成分が約ｊ６−Ｘ（重量）％の氷と、約５３
−％（重量）％のエチレン・グリコールと、約２ｏｍｇ
／ｄｔのビリルビンからなり、スルフヒドリル化合物の
量を変え、そして約８５のｐＨｋ有するビリルビン組成
物を４１℃で７２時間温装した後、ビリルビンを定量し
た。第■表は、高温にさらしん後に残るビリルビン（％
）を示す。

第　　　２　　　表 還元剤　　濃　度　　　レドックス電位　　　回収率（
”！？／ｄｔ）　　　　　（ｍ　Ｖ　）　　　　　　（
％）＋２５　　　　　　　７１ ＤＴＥ　　　　　５　　　　　　−１１１７　　　　　
９０ＤＴＥ　　　　２０　　　　　　−１８５　　　　
　８２第■表は、本発明の組成物のレドックス電位を下
げるべくスルフヒドリル化合物を用いることによって得
られる安定性が著しく増すことを明示している。ＤＴＥ
　（ジチオトレイトール）の含量が２ｏｍｇ／ｄｔで改
善度が低いのは、高温での実験でスルフヒドリル結合の
櫛かけに起因する。実験におけるこの高温は、ビリルビ
ン組成物の分解を促進するために用いる。普通の高度で
２０　ｍ９／　ｄｔのＤ　Ｔ　Ｅ含量ではスルフヒドリ
ル結合の橋かけは決して起きない。

実施例う〜１１ ２０　ｍｇ　／　ｄ　Ｌのビリルビンと；約６６−　Ｋ
　（重量）％の水と約３５−％（重量）％のエチレン・
グリコールからなる溶液に１５ｍ９／ｄｔのＤＴＥと、
Ｌ　ＯＯｍｇ／ｄｉ　ＥＤＴＡ−’ジナトリウム塩から
なり、か・り７．０〜９０のｐＨを有するビリルビン組
成物全調製し、それをガラスびんに貯蔵した。

それらのガラスびんを種々の温度（−１５℃、３２℃、
３７℃および４１℃）に湿量して一定の時間毎に定量し
た。それらの結果を第■〜Ｘ表に示す。第■表は、ＩＪ
　１℃、５７℃および３２℃で得られたデータに基づい
た９０％寿命に対するアレニウスのプロットのまとめを
示す。

第　　　ｍ　　　表 ｐＨ７，０ ０、Ｏ１２，ｇ　１００１５．８１００１５．ｇ　１０
０１５．８２１１．０１１＋、６９２１５゜Ｏ９５１１
１，９９１↓１５８７２．０１１．１７１４１２．０　
ｇ、ｏ　１１１．０９５１５．０９６．０１０．０６２
１２．１１７７１１１．１１９０１６．Ｑｌ、　　Ｎ／
Ａは入手不能を表わす。

第　　　■　　　表 ｐＨ７，５ ｐＨ７，６ ｐＨＢ、Ｏ ｐＨ８，２ 第　　　■　　　表 時間　４１℃　　５７℃　　５２℃　−１５℃０．０１
７．１１１００１７．１！　１００１７．ｌＬ　１００
１７．ｕ２４．０１６．８９７１６．ｇ、　９７１６．
７９６１７．１１４１１！、０１６．２９２１７．２９
８１７．６１００１７．６７２．０１５．１８９１５．
１８９’　１５．２　ｇ９１７．０９６．０１１１．０
　？３１１１．３　Ｑ　１６．１９５１７．０１２０．
０１２ＪＬ　７３１１１．３　ＩＩ！１１１６．１９５
１７．０１６８．０１２．０６７１４０７８１５．６　
ｇ７１８．０５３６．０６．０５５８．２１Ｉｌｌ！　
１４．０８２１７．１第　　ＩＸ　　　　表 時間　１１１℃　　５７℃　　３２℃　−１５℃０．０
１７．７１００１７．７１００１？、７１００１７．７
２１ｔ、０１７．１９７１７．３９８１７．１１９８１
７．７１１ａ０１６３９２１７．３９７１７．５９８１
７．１！！７２、Ｃ１１５，１ｇ９１５．２８９１５．
６９２１７．０９６．０１１１．ヰ＋１！１１１６．１
９１＋　１６．ｌｌｔ　９８１７．１１２０．０１２．
２７１１１１．１１　ｇ３１６．１９３１７．う１６８
．０１２．０６Ｇ　１１１．１７８１６．１８９１８．
１第　　　Ｘ　　　表 Ｈ８８ ０，０１７，７１００１７，７１００１７，７１００１
７，７２＋１．０１Ｖ、１９７１７．２９７１７．５９
９１７．７１４８、ｏ　１５．９８ｇ　１７．５９７１
７．７９８１８．１７２．０１５．１　ｇ９１５．３９
０１５．８９５１？、０９６．０１ヰ、５．８１１６．
１８９１６．８９３１ｇ、０１２０．０．１２．０６９
１４．２８２１６．１９３１７．１１１６８．０１１．
５６２１３．５７２１６．０　ｇ６１７．５ｐＨ９，０ ０，０１７，６１００４７，６１００１７，６１００１
７，６２１１，０１７，１９７１７，う９．！！　１７
．５９９１７．．６４８．０１６．１８８１７．１９１
１１７．５９６１８．２７２．０１５．１８８１５．３
８９１５．８９２１７．２９６．０１７．４９７１６．
０１１！９１７゜１９５１１１！、０１２０．０１１．
１６３１５．１８６　ｉ６．ｘ　９２１７．５第■表〜
第■表に示すデータは、本発明の範囲内の血清ビリルビ
ン標準組成物が先行技術の血清ビリルビン標準組成物の
貯蔵寿命よりはるかに長（１）期間安定であることを示
す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　約ｌｌＯ〜８５（重量）％の水と、約１５〜６０
   （重量）％の２〜５個の炭素原子を有する少なくとも１
   種類のアルキレン・ポリオールと、残部がビリルビンか
   らなる非生物学的成分；または該非生物学的成分と、血
   清、酵素、代謝物質、電解質、およびホルモンからなる
   群から選んだ天然の生物学的成分からなるビリルビン標
   準組成物において、さらにビリルビンの安定性を高める
   のに十分な量のスルフヒドリル化合物を含有することを
   特徴とするビリルビン標準組成物。 ２、約８５〜９，５のｐＨを有する特許請求の範囲第１
   項記載の組成物。 う、前記スルフヒドリル化合物が、前記組成物の酸化−
   還元電位が約−３０〜−５００：：　ＩＪボルトになる
   ような量存在するところの特許請求の範囲第２項記載の
   組成物。 ４、前記スルフヒドリル化合物が、前記標準組成物の酸
   化−還元電位が約−１００〜−２００ミリボルトになる
   ような量存在し；かつ前記組成物が約８５〜８７のｐＨ
   ’に有するところの特許請求の範囲第５項記載の組成物
   。 ５、前記スルフヒドリル化合物が、前記標準組成物の酸
   化−還元電位が約−Ｌ　６０　ミＩＪボルトになるよう
   な量存在し；かつ前記組成物が約ｇ５のｐＨ’に有する
   ところの特許請求の範囲第４項記載の組成物。 ６　前記スルフヒドリル化合物ｔジチオエリトレイトー
   ル、ジチオトレイトール、メルカプトエタノール、シス
   ティン、還元グルタチオン、Ｎ−アセチル・システィン
   、メルカプトアセテート、およびそれらの混合物からな
   る群から選択するところの特許請求の範囲第５項記載の
   組成物。 ７、　前記スルフヒドリル化合物がジチオトレイトール
   であるところの特許請求の範囲第６項記載の組成物。 ８　ビリルビンが約０．１〜１１０　ｍｙ／　ｄｔ存在
   し、かつ前記組成物が約６０〜８０（重量）％の水と約
   ２０〜４０（重量）％のアルキレン・ポリオールを含有
   するところの特許請求の範囲第２項記載の組成物・ ９　前記ビリルビンが約１〜５０ｍ９／ｄｔ存在すると
   ころの特許請求の範囲第８項記載の組成物。 １０　　ビリルビンが約２〜２５ｔｒｙ／ｄｂ存在する
   ところの特許請求の範囲第９項記載の組成物。 １１、本釣６０〜８０（重量）％と、２〜５個の炭素原
   子を有する少なくとも１種類のアルキレン・ポリオール
   約２０〜）↓−０（重量）％と、残部のビリルビンから
   なる非生物学成分；または該非生物学的成分と、血清、
   酵素、代謝物質、電解質、およびホルモンからなる群か
   ら選択した天然の生物学的成分からなるビリルビン標準
   組成物において、前記組成物が、約８６２〜９２のｐＨ
   を有し、かつ（ａ）ビリルビンの安定性を一層高めるの
   に十分な量のスルフヒドリル化合物と、（ｂｌ前記血清
   に存在する金属類を結合させるのに十分な量のキレート
   剤を含有することを特徴とするビリルビン標準組成物。 １２、前記組成物の酸化−還元電位が約−３０〜−５０
   ０ミリボルトになるような量の前記スルフヒドリル化合
   物が存在し、かつ前記組成物が血清１００　ｍｌ当り約
   ２５〜１０００ｍ１？のキレート剤を含有するところの
   特許請求の範囲第１１項記載の組成物。 １３、　　前記組成物の酸化−還元電位が約−１００〜
   −２００ミリボルトになるような量の前記スルフヒドリ
   ル化合物が存在し、前記組成物が血清１００ｍ１当り約
   ５０〜１５０１ｎｇのキレート剤を含有し、かつ前記組
   成物が約８４〜８９のｐＨ”ｋ有するところの特許請求
   の範囲第１１項記載の組成物。 １４、　　前記組成物の酸化−還元電位が約−１６０ミ
   リボルトになるような量の前記スルフヒドリル化合物が
   存在し、前記組成物が血清１００ｍ１当り約１００　ｍ
   ９のキレート剤を含有し、かつ前記組成物が約８７のｐ
   Ｈｆｚｆ：有するところの特許請求の範囲第１う項記載
   の組成物。 １５、　　前記スルフヒドリル化合物をジチオエリトレ
   イトール、ジチオトレイトール、メルカプトエタノール
   、システィン、還元グルタチオン、Ｎ−アセチル・シス
   ティン、メルカプトアセテート、およびそれらの混合物
   からなる群から選択し、前記キレートをエチレンジアミ
   ンテトラ酢酸、ニトロトリ酢酸、エチレンジアミノ、ジ
   エチレントリアミン、トリエチルテトラアミン、テトラ
   エチレンペンタミン、ペンタエチレンへキサミン、＝Ｎ
   −ヒドロキシエチルイミノジ酢酸、Ｎ−ヒドロキシエチ
   ル−Ｎ　、　Ｎ’　、　Ｎ’　、エチレンジアミニトリ
   酢酸。 Ｎ、Ｎ、Ｎ’、ば、Ｎ″−ジエチレントリアミ／ペンタ
   ｆｆ＋［、クエン酸、タルタン酸、クルコン酸、トリポ
   リリン酸イオン、ポリリン酸アニオン、　Ｎ　、　Ｎ’
   −エチレンビス（２−（０−ヒドロキシフェニル）〕・
   グリシン、３，５−シスルホヒロカテコール、ビス−（
   オルトヒドロキシベンジル）・エチレンジアミン−Ｎ　
   、　Ｎ’−ジ酢酸、それらの塩類、およびそれらの混合
   物からなる群から選択するところの特許請求の範囲第１
   １１項記載の組成物。 １６゜前記スルフヒドリル化合物がジチオトレイトール
   であり、かつ前記キレート剤ケエチレンジアミンテトラ
   酢酸、その塩類、およびそれらの混合物からなる群から
   選択するところの特許請求の範囲第１５項記載の組成物
   。