JPS58969A - α−（アザ）ベンゾチアゾ−ル−２−イルチオ−α−フェニル酢酸およびその誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規α−（アザ）ベンゾチアゾール−２−イル
５−オーα−フェニル酢酸、その誘導体およびその医薬
上許容される塩、ならびに２−置換−３−ヒドロキシチ
アゾロＣ２，３−ｂ）ベンゾチアゾリウム塩、２−置換
−チアゾロＣ２，３−ｂ）ベンゾチアゾール−３（２Ｈ
）−オンのメンイオン性ジデヒドロ誘導体、２−置換−
チアゾロ〔２′。

３’−２，３）チアゾロ〔５，４−ｂ）ピリジン−３（
２Ｈ）−オンのメンイオン性ジデヒドロ誘導体およびそ
の関連化合物の製造における中間体としての用途、さら
にその免疫反応の緩和剤としての用途に関する。

近年免疫学的研究の急速な高まりにより免疫反応の複雑
さの認識および理解が大きく進歩した。

免疫システム全体については従来の観点が残っているも
のの新規な知見により該システムの詳細についての考え
方のいくつかは急速に変化している。

すなわち、免疫システムはｊ）まだ、Ｂ細胞により発現
し、抗体形成に関与する液性免疫、およびＴ細胞により
発現し、器官移植組織または皮膚移植の拒絶反応に勿与
する細胞媒介（ｃｅｌｌ　−ｍｅｄｉａｔｅ）免疫、並
びに各種の異種生物物質および内因性腫瘍性増殖に対す
る防御機能に分かれる。

しかしながら、最近１０年はかりの間に液性免疫および
細胞媒介免疫の両方の誘発と発現において異種の細胞集
団が相互に作用するという概念が容認されるようになっ
ている。すなわち、Ｂ細胞おＪび’ＴＴ細胞副集団（５
ｕｂｐｏｐｕｌａｔ　ｉｏｎ　）は例えば［サプレッサ
ー（５ｕｐｐｒｅｓｏｒ月および［ヘルパー（ｈｅｌｐ
ｅｒ）　Ｊ　Ｔ細胞と記載されている。多くΦ哺乳動物
のモデルでは、多数の抗原に対する完全抗体の誘発にお
いてはヘルパーＴ細胞が作用し、これに対し、Ｔサプレ
ッサー細胞はこれら反応の抑制または制限をなしうると
考えられる。正および負の細胞相互作用は根本的に免疫
反応の最終的な程度を制御するものと現在は考えられて
いる。したかって、いかなる免疫反応も規制され、かつ
規制の程度および態様は有機体の免疫システム作用の発
現である各種の反応、病状および障害を基本的に説明す
るものと思われる。

サプレッサーであるＴ細胞側集団およびヘルパーＴ細胞
は多くの免疫反応の発現に関与する。したがって、現在
、サプレッサーＴ細胞の喪失は全身性狼癒紅斑症のよう
な自己免疫結合性組織病における主要因であると考えら
れる。さらに後者の場合、また、多分、リウマチ関節炎
のような損傷した免疫システム反応における場合にも、
ヘルパーＴ細胞は状態を悪化させるものと考えられる。

また、Ｔサプレッサー細胞が機能低下すると、免疫反応
における不適当なＴ−Ｂ細胞協カが起り、連続的なり細
胞刺激およびその後の抗体生成が、関接炎および自己免
疫疾患に埴ける腎および炎症進行の原因物質である抗原
−抗体複合体生成の原因となりうるという理論が前進し
ている。

すなわち、現在、多くのリンパ球生成障害は疑いなくＴ
細胞の異常、ことに、サプレッサー細胞機能の異常を伴
なうことが明らかである。サプレッサー機能の喪失は、
少なく−とも、ある種の免疫反応疾患における初期の現
象であり、他の疾患における病状持続機序でもある。サ
プレッサー機能の喪失は、多分ミ過剰のリンパ球様細胞
増殖を起し、リンパ球増殖性障害に著しく関与しうる。

これにより生じた症状はヘルパーＴ細胞によって悪化し
うる。

免疫疾患および障害の治療ならびに器官移植組織および
皮膚移植組織の生命を長く保持するための試みにおける
免疫変調剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｇｅ
ｍ　）の役割は免疫反応、ことに、細胞媒介免疫の抑制
である。細胞媒介免疫反応を抑制することにより、宿主
組織が皮膚組織移植や器官移植を拒絶することや、ある
いは移植−織が免疫的に宿主を拒絶すること（移植組織
−宿主反応）などを遅らせたり防止することができる。

同様に、免疫変調法によりサプレッサー機能を高揚した
り再生することは自己免疫や自己免疫に基づくような種
々の疾病の治療に有利である。また、免疫療法は各種の
癌や転移性疾病の治療、とくに化学療法において重要で
あることが認められている。

本発明の化合物は高い選択性を有する免疫変調剤の製造
用中間体であって、かかる免疫変調剤は、各種の皮膚組
織移植や器官移植の拒絶反応、新生物および転移性疾病
、ならびに全身性狼癒紅斑症やリウマチ関節炎などのサ
プレッサーＴ細胞機能異常によると考えられる免疫系疾
病などの治療に特に有用である。また本発明の化合物は
それ自体免疫変調剤としても有用である。

本発明の化合物は新規化合物であって、下記−〔式中、
Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、ニトロ、アミノ、低級
アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまたは
ヒドロキシ；Ｒ２はフッ素、塩素、臭素、低級アルキル
、低級アルコキシ、アミノ、ニトロまたはトリフルオロ
メチル；Ｒ３はヒドロキシ、低級アルコキシ、アミン、
ヒドロキシ（低級）アルキルアミノ、Ｎ；（低級）アル
カノイルアミノ（低級）アルコキシまたはＮ−アリール
カルバモイル（低級）アルキルチオ；ＸはＣＨまたはＮ
ｉ破線ぼ５，６位および７，８位の任意の二重結合を意
味する〕 で示され、またその医薬上許容される塩も含む。

用いられる「低級アルキル」とは炭素数１〜約６個の直
鎖または分枝鎖アルキル、「低級アルコキシ」および「
低級アルカノイル」とは同様に炭素数１〜約６個のアル
コキシまたはアルカノイルを含む。「ハロゲン」とはフ
ッ素、塩素および臭素を含む。

本発明の化合物は、一般式 〔式中、ｋ□は水電原子、ハロゲン原子、低級アルキル
、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまたはヒドロキ
シ；Ｒ２はフッ素、塩素、臭素、低級アルキル、低級ア
ルコキシ、アミノ、ニトロまたはトリフルオロメチル；
Ｒ４は水素原子または低級アルカノイル；ＸはＣＨまた
はＮｉＹはＣＦａ　Ｃ０２−またはハライド逼破線は５
，６位および７，８位の任意の二重結合を意味する〕 でボされる化合物（米国特許第１３０，４８３号に開示
）の製造中間体として利用しうる。

これらの化合物は本発明の中間体がら次式のようにして
製造される。

− 〔式中、ｋ□、Ｒ２、Ｘ、Ｙおよび破線は前記に同じ。

へは水素原子または縮合剤の残基〕 反応剤をアセトンのような有機溶媒中で、酢酸と無水酢
酸の混合物、トリスルオロ酢酸無水物などの縮合剤とと
もに、溶媒量が減少し析出物が生成付着するまで加熱す
る。析出した固体を再結晶して目的とする′２−置換−
３−ヒドロキシ〔チアゾロ（２，３−ｂ’）ベンゾチア
ゾリウム塩または２−置換−３−ヒドロキシ−チアゾロ
〔２，３−ｂ〕アザベンゾチアゾリウム塩かえられる。

Ｒ４が縮合剤の残基である場合には、その残基を常法に
より、例えば溶媒中加熱して脱アシル化することにより
に４が水素の化合物かえられる。また、へがアミンまた
はヒドロキシである場合にはこれらを通常の保護基、例
えばアミノ茶番こついてはトシル、ベンジルオキシカル
ボニル　ｔ　−ブチルオキシカルボニルなど、ヒドロキ
シζこついてはアセチル、ベンゾイル、【−ブチルなど
、により保護しておいて閉環反応中にアシル化されるの
を防ぐことができる。その保護基は閉環完了後に常法に
より容易に離脱できる。

ベンゾチアゾリウム塩は次式で示されるそのメソイオン
性ジデヒドロ誘導体に変換されうる。

その変換はベンゾチアゾリウムまたはアザベンゾチアゾ
リウム塩を塩化メチレン−水混液に溶解し、有機層と水
層に分け、有機（塩化メチレン）層を濃縮してメンイオ
ン性ジデヒドロ誘導体を回収し、さらに再結晶して精製
することにより行なわれる。

本発明の化合物は次の反応式に示す方法により容易に製
造される。

〔式中、Ｒｔ　、Ｒ２および破線は前記に同じ〕適当に
置換した２−メル々ブト（アザ）ベンゾチアゾールとα
−ハロフェニル酢酸との反応は、アセトンなどの有機溶
媒中で、室温〜昇温下に行なわれる。その７置換２−メ
ルカプト（アザ）ベンゾチアゾール類はそのアルカリ金
属またはアルカリ土金属塩で反応されうる。その反応は
また遊離したハロゲン化水素を捕捉する捕捉剤の存在下
に行ないうる。捕捉剤としては例えばトリエチルアミン
などの第三級アミンが挙げられる。これはアザベンゾチ
アゾリルチオグリコール酸類の製造に適している。

本発明のび一フェニル（アザ）ベンゾチアゾール−２−
イルチオグリコール酸〔＝（アザ）ベンゾチアゾール−
２−イルチオ−α−フェニル酢酸類〕は、最も好適には
三環式メンイオン性ジデヒドロ化合物を適当な求核試薬
と反応させて製造される。この反応は次式に示すように
末端チアゾール環の開環を含む。

〔式中、ｋ□、Ｒ２、ｋ３、ｘおよび破線は前記に同じ
。

Ｒ３Ｚは所望のに３置換基を持った求核試薬である〕こ
の反応により常法では得られ難い化合物の製造に用いら
れる。この反応は適当な有機溶媒（例えば塩化メチレン
）中、求核試薬の性状に応じて室温〜還流温度の範囲内
で行なわれる。

本発明の化合物は前記のような中間体として用いられる
外、それ自体免疫液゛調剤として有用であり種々の免疫
変調用に適応される。すなわち、本発明の化合物は、組
織移植異常反応、器官移植反応および移植組織−宿主反
応の治療に有用である。

本発明の化合物は、宿主の他の感染に対する免疫性を失
なうことなく宿主が組織移植を受は入れうるようにする
作用がある。この化合物はまた全身性狼癒紅斑症（ＳＬ
Ｅ）のような自己免疫疾患の治療にも有用である。さら
に、Ｓ′ＬＥのような自己免疫疾患に病理的なイムノグ
ロブリンの生成や、関節炎、自己色°疫疾患における腎
臓での工程または炎症工程の原因となる抗原−抗体コン
プレックスの生成などを抑える。このように、本発明の
化合物はリウマチ関節炎のような症状の治療に有用であ
り、さらに新生物疾病ならびに転移性疾病の治療に有用
である。

したがって、本発明は、一般式 Ｃ式中、ｋｏ、Ｒ２、Ｒ３、ｘ！ヨび破線は前記に同じ
〕で示される化合物またはその医薬上許容される塩を免
疫反応の変調（緩和）をもたらすに有効な量にて温血動
物に投与してその温血動物の免疫反応を変調させる方法
およびその免疫反応変調剤をも提供するものである。

本発明の化合物を免疫変調剤として用いる場合には、錠
剤、カプセル剤などの経口投与形態に処方されうる。こ
の化合物は単独でも、また炭酸マグネシウム、ステアリ
ン酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、ペクチン、デ
キストリン、でんぷん、ゼラチン、トラガカント、メチ
ルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース
、低融点ワックス、カカオバターなどの通常の担体とと
もに投与されうる。希釈剤、香味剤、安定剤、滑剤、懸
濁化剤、結合剤、錠剤崩壊剤なども用いうる。

この化合物は担体とともにまた担体を用いずにカプセル
化してもよい。すべての場合において、該固形または液
状製剤中の活性成分の比率は少なくとも経口投与により
免疫変調作用を示すに必要な割合である。この化合物は
非経口的に注射することもでき、この場合は、他の溶質
、例えば等張にするための食塩やグルコースなどを含ん
だ滅菌液の形で用いられる。

用量は用いられる製剤の種類、投与ルート、症状の程度
などにより変わる。一般に、治療は、化合物の最適用量
よりも少な（，４用量にて開始し、最適用量に達するま
で増量する。一般に、本発明の化合物は、有害な好まし
くない副作用が生じることなく所望の効果をもたらす濃
度（用量）にて投与するのが最も望ましい。大きな動物
（約７０ｋＱの体重）に注射する場合には、その用量は
約２５■〜約５０ｗ１で、経口投与では約５０■〜約２
００〜、好ましくは約５０ｑ〜約１００１１１Ｐ（いず
れも−日当りの単一単位用量として）であり、所望によ
り、その用量にて一日のうち数回に分けて与えて−もよ
い。

本発明化合物の免疫変調効果は標準的薬理試験法および
歴史的方法−にて示される。その薬理試験法の詳細は後
記実施例中に記載される。これらの方法により、液性免
疫および細胞媒介免疫に対する化合物の効果を測定する
ことにより、本発明化合物の免疫変調効果、ことに選択
的な細胞媒介免疫に効果があることが示される。これら
はまた、プレシア（Ｐｌｅｓｃｉａ　）抗−３ＲＢＣ抗
体生成試験オヨびミトーゲン活性化ねずみＴ　−＋）ン
パ球増殖試験における化合物の評価も含む。

つぎに実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

実施例１ α−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）−α−フェニ
ル酢酸： Ａ６　　α−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）−α
−フェニル酢酸臭化水素酸塩： ２−メルカプトベンゾチアゾール１６．７　ｆｌ　（０
，１０モル）とα−ブロモ−α−フェニル１ｔ４２１．
５ｆ（０，１０モル）のアセトン溶液を５時間加熱還流
し、その溶媒を留去する。その油状残渣をアセトン中で
トリチュレートし、固体３１Ｆをえる。

この化合物の融点１９２〜１９４°ｃ０分析値：Ｃ１５
Ｈ１１Ｎｏ２Ｓ２・ＨＢｒとして計算値：　Ｃ，４７，
１２；Ｈ，３，１７；Ｎ、３．６６；Ｂｒ。

２０．９０ｉＳ、１６．７７ 実測値：　Ｃ，４７，２２ｉＨ，３，０６ｉＮ、３．６
９．Ｂｒ。

２０．９３　ｉｓ　、　１６．７３ Ｂ、α−（ペンツチアゾール−２−イル）−α−フェニ
ル酢酸： Ａでえられた臭化水素酸塩を水中で室温にて一晩攪拌し
、固体を集めて空気乾燥する。この粗生成物をアセトニ
アトリルから再結晶して標記化合物をえる。収率７０％
、融点１５２〜１５４°Ｃ分析値：０１５Ｈ１１Ｎ０２
８２として計算値：　Ｃ，５９，７８ｉＨ，３，６８、
Ｎ、４．６５実測値：　Ｃ，５９，８１ｉＨ，３，８５
；Ｎ、４．７７実施例２ α〜（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルニーα−
フェニル酢酸： ５−クロロ−２−メルカプトベンゾチアゾール５０．０
ｆ（０，２４８モル）とα−ブロモフェニル酢酸５３．
０ＩＣ０，２４８モル）をアセトン１．５４にとかし、
これを氷酢酸５０ｓｌの存在下に４時間加熱する。この
溶液を少量になるまで（約２００ＴＩＬｅ）濃縮し、残
留する固体９０１を集める。えられた塩を水１１に懸濁
し、室温にて一晩攪拌する。

固体を集め、アセトニトリル２．５１から再結晶して標
記化合物６４ｇ（８５％）をえる。融点１９０〜１９２
°Ｃ 分析値：　Ｃ１５Ｈ１ｏＣ１ＮＯ２８２として計算値：
　Ｃ，５３，６４，Ｈ，３，００ｉＮ、４．１７実測値
：　Ｃ，５３，８３；Ｈ，３，１３；Ｎ、４．１３実施
例３ α−（５−１０口ペンゾチアゾール−２−イルチオ）−
α−フェニル酢酸： 実施例２の化合物１０ｇ（０，０３モル）のアセトン６
００ｄ中溶液にアルコール性ＮａＯＨ（１，２ｇ（０，
０３モル）のエタノール２０ｄ溶液）を加え、析出物を
集め、水から再結晶して標記化合物の一水和物８．０１
７１悌）をえる。融点２３８〜２４２℃（分解） 分析値：Ｃ１５Ｈ９ＣＩＮＯ２Ｓ２Ｎａ、Ｈ２Ｏとして
計算値：　Ｃ，４７，９３；Ｈ，２，９５ｉＮ、３．７
３実測値：　Ｃ，４７，７ｉＨ，３，１２ｉＮ、３．７
９実施例４ α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−
α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸方法Ａ）５−クロロ−
２−メルカプトベンゾチアゾール１２．１ｆ（０，０６
−ｉル）とα−ブロモ−α−（Ｐ−クロロフェニル）酢
酸のアセトン溶液を氷酢酸３０ｄの存在下に５時間加熱
する。溶媒を留去後、残留ゞ固体を集め（標記化合物の
臭化水素酸塩９ｆ）、これを水中で一晩攪拌し、固体を
集め、空気乾燥する。この粗生成物をアセトニトリルか
ら再結晶して標記化合物４．７ｇ（２１％）をえる。融
点１５７〜１５８°Ｃ 方法Ｂ）　　５−クロロ−２−メルカプトベンゾチアゾ
ールカリウム塩Ｏ，ＯＳモルとα−ブロモ−α−（Ｐ−
クロロフェニル）酢酸０．０５モルのアセトン溶液を３
日間加熱還流し、その固体（ＫＢｒ）をＦ去し、ｐ液を
濃縮し、残留固体をアセトンとヘキサンの混液でトリチ
ュレートする。えられた粗生成物をベンゼンから再結晶
して標記化合物７゜７ｇ（４２％）をえる。融点１５７
〜１５８”Ｃ方法Ｃ）　　５−クロロ−２−メルカプト
ベンゾチアゾール１０．０１０．０５モル）とα−ブロ
モ−α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸１２．５　（１（
０，０５モル）の塩化メチレン溶液を一晩加熱還流する
。

反応混合物を希塩酸、ついで水で洗浄し、Ｍｇ　ＳＯ４
で乾燥する。塩化メチレンを留去し、残留固体をアセト
ニトリルでトリチュレートして標記化合物１３．６ｇ（
７４％）をえる、融点１５７〜１５８°Ｃ 分析値：０１５Ｈ９°１２Ｎ０２ｓ２トシテ計算値：　
Ｃ、４８，６５ｉ、Ｈ、２，４５逼Ｎ　、　３．７８実
測値：　Ｃ，４８，６９；Ｈ，２，５８ｉＮ、３．７９
実施例５ α−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）−α−（ｐ−
クロロフェニル）酢酸 実施例４、方法Ｃの方法により、５−クロロ−２−メル
カプトベンゾチアゾールに代えて２−メルカプトベンゾ
チアゾールを用いて標記化合物をえる。収率３４憾、融
点１８５〜１８７°Ｃ（分解）分析値：Ｃ１５Ｈ１ｏＣ
ＩＮ０２Ｓ２として計算値：　Ｃ，５３，６４ｉＨ，３
，００；Ｎ、、４．１７実測値：　Ｃ，５４，０７；Ｈ
，３，１７；Ｎ、４．１３実施例６ ロークロロー２−フェニルチアゾロＣ２，３−ｂ〕ベン
ゾチアゾール−３（２Ｈ）−オンメソイオン性ジデヒド
ロ誘導体の調製： 実施例２の化合物３１ｇ（０，０９２モル）を塩化メチ
レン３．５’ｌに懸濁し、無水酢酸２５ｍ１／の存在下
にゆるやかに加熱還流する。固体は衿々に溶解し、赤色
溶液となる。−晩加熱後、溶液を濾過し、２００ｄまで
濃縮する。残留した橙色固体２９．５ｇ（定量的）を集
める。融点２１５〜２１６’Ｃ実施例７ α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−
α−フェニル酢酸： 実施例６の化合物７ｇをＮ、Ｎ−ジメチルアセトアミド
１００ｄにとかし、水５ｄの存在下に室温にて２日間放
置する。この溶液を水１２０ｄで希釈し、えられた固体
を集め、空気乾燥する。この粗生成物をベンゼン５００
−から再結晶して純粋な標記化合物ｓ、９ｇ（ｓｏ％）
をえる。融点１９０〜１９１°Ｃ 分析値：　’Ｃｔ　ｓＨｉ　ｏｃｖす２Ｓ　２として計
算値：　Ｃ，５３，６４ｉＨ，３，００ｉＮ、４．１７
実測値：　Ｃ，５３，８３ｉＨ，３，１３；Ｎ、４．１
３実施例８ α−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルチオ）
−α−フェニル酢酸エチルエステル：実施例６の化合物
８．Ｏｆをエタノールにとがし、水蒸気浴にて橙色が退
色するまで加温する。溶媒を留去し、油状残渣をヘキサ
ンがら再結晶して標記化合物６．６ｇ（７３％）をえる
。融点６２〜６４℃ 分析値：Ｃ□７Ｈ□４Ｃ１ＮＯ２Ｓ２として計算値：　
Ｃ，５６，１１ｉＨ，３，８８ｉＮ、３．８５実測値：
Ｃ，５６，０５暮Ｈ，３，９２−Ｎ　、　３．８４実施
例９ α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−
α−フェニルアセトアミド： 実施例６の化合物６．（１（０，１８９モル）の塩化メ
チレン３００ｄ溶液にアンモニアガスを導入する。橙色
固体が退色しながら溶解し、ついで白色の固体が析出す
る。ＩＦ）分後、アンモニアの導入を止め、その混合物
を３０分間攪拌する。固体を集め、ｐ液から溶媒を留去
してさらに固体を回収する。これらの固体を合せ、アセ
トニトリルから再結晶して標記化合物５．０１７９％）
をえる。

融点１８１〜１′８３°Ｃ 分析値：Ｃ□５Ｈ□□Ｃ４Ｎ２０Ｓ２として計算値：　
Ｃ，５３，８０ｉＨ，３，３１、Ｎ、８．３７実測値：
　Ｃ，５３，６７ｉＨ，３，４１ｉＮ、８．４４実施例
１０ α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−α−フェニルアセトｔ
ミド： 実施例６の化合物６．２９　（０，０２モル）とエタノ
ールアミン１．２９　（０，０２モル）の塩化メチレン
溶液を水蒸気浴上完全に溶解し退色するまで加温する。

この溶液を濾過し、溶媒を留去する。残渣ラニーチルで
トリチュレートし、固体を集め、乾燥オーブンにて乾燥
し、標記化合物６．１ｇ（８２％）をえる。融点１４８
〜１４９°Ｃ分析値：ＣエフＨ□５ＣＩＮ２０゜Ｓ２と
して計算値：　Ｃ，５３，８８ｉＨ，３，９９ｉＮ、７
．４０実測値：　Ｃ，５４，０３ｉＨ，４，１４ｉＮ、
７．４６実施例１１ α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−
α−フェニル酢酸２−（アセチルアミ７）エチルエステ
ル： 実施例６の化合物３．１８ｆ（０，０１モル）とＮアセ
チルエタノールアミン１．０３ｆ（０，０１モル）を塩
化メチレンにとかし、゛３日間加熱還流する。

溶媒を除去後、油状残渣をエーテル１００１Ｉ／から再
結晶して標記化合物３．！Ｍ（８３％）をえる。

、融点１０７〜１０８°Ｃ 分析値”　１９Ｈ１７°ハ２°３ｓ２トシテ計算値：　
Ｃ，５４，２１ｉＨ，４，０７ｉＮ、６．６６実測値：
　Ｃ，５３，９５ｉＨ，４，１４；Ｎ、６．５９実施例
１２ α−（５１０ロベンゾチアゾール−２−イルチオ）−α
−フェニルエタンチオン酸２−（２−ナフタレニルアミ
ノ）−２−オキソエチルエステル： 実施例６の化合物３．１８９（０，０１モル）とα−メ
ルカプト−Ｎ−（２−ｔフチル）アセトアミド２．１７
Ｆ（０，０１モル）を塩化メチレンにとかし、７日間加
熱還流する。反応の進行はＴＬＣでモニターする。・溶
媒を留去後、残渣をエーテルから再結晶して標記化合物
２．：Ｍ（４２％）をえる。

融点１４４ヴ１４５℃ 分析値：　Ｃ２７Ｈ１９ＣｌＮ２Ｏ。Ｓ３として計算値
：　Ｃ，６０，６０ｉＨ，３，５８、Ｎ、５．２４実測
値：　Ｃ，６０，８９；Ｈ，３，７８；Ｎ、５．２７実
施例１３ 一α−（５−クロロチアゾロ（５，４−ｂ）ピリジン−
２−イルチオ）−α−フェニル酢酸：５−クロロ−２−
メルカプトチアゾロＣ５，４−ｂ〕ピリジン４．０５ｇ
（０，０２モル）、α−ブロモ−α−フェニル酢酸４．
３０ｇ（０，０２モル）およびトリエチルアミン４．０
　’ｌ　（０，０４モル）の塩化メチレン溶液を一晩ゆ
るやかに加熱還流する。

この塩化メチレン溶液を希塩酸にて２回、水で１回抽出
し、無水Ｍ　ｇ　Ｓ　０４で乾燥する。溶媒を留去後、
残留固体をアセトニトリルがら再結晶して標記化合物５
．０ｆ（７４％）をえる。融点１７５〜１７７°Ｃ 分析値：ｃ０４Ｈ９ｃｌＮ２ｏ２ｓ２トシテ計算値：　
Ｃ，４９，９２，Ｈ，２，６９ｉＮ、８．３２実測値：
　Ｃ，４９，９７，Ｈ，２，８５蟇Ｎ　、　８．３７実
施例１４ α−（５−クロロチアゾロ（５，４−り）ピリジン−２
−イルチオ）−α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸： ５−クロロ−２−メルカプトチアゾロＣ５，４−ｂ〕ピ
リジ７６、Ｏｆｌ　（０，０３モル）、ｄ　−フＣ１モ
ーα−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸７．５　ｆｌ　（０
，０６モル）およびトリエチルアミン６、Ｏｆ　（０，
０６モル）の塩化メチレン溶液を一晩おだやかに加熱還
流する。この溶液を希塩酸で２回、水で１回抽出する。

無水Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４で乾燥後、溶媒を留去し、残留固
体をアセトニトリルがら再結晶して標記化合物７．５１
６８襲）をえる。融点１４４〜１４６°Ｃ 分析値：Ｃ□４Ｈ８Ｃ１２Ｎ２０２Ｓ２として計算値：
　Ｃ，４５，２９，Ｈ，２，１７−Ｎ　、　７．５５実
測値：Ｃ，４４，８７逼Ｈ，２，２７ｉＮ、７．５９実
施例１５ α−（４，５，６？７−チトラヒドロペンゾチアゾール
ー２−イルチオ）−α−フェニル酢酸：２−メルカプト
−４，５，６，７−チトラヒドロペンゾチアゾール５．
１３１０．０３モル）、α−ブロモフェニル酢酸６．２
９　（０，０３モル）おヨヒトリエチルアミン６．Ｏｆ
ｌ　（０，０６モル）の塩化メチレン溶液を一晩おだや
かに加熱還流する。この溶液を希塩酸で２回、水で１回
抽出し、無水Ｍ　ｇ　ｊｏ　４で乾燥する。溶媒を留去
し、残留固体をアセトニトリルから再結晶して標記化合
物７．０ｆＣ７７％）をえる。融点１１８〜１２０’Ｃ 分析値２０１５Ｈ１５Ｎ０２５２　として計算値：　Ｃ
，５８，９９；Ｈ，４，９５ｉＮ、４．５９実測値、Ｃ
，５９，００，Ｈ，４，９４；Ｎ、４．５２実施例１６ α−（６−ニドロペンゾチアゾールー２−イルチオ）−
α−フェニル酢酸： ２−メルカプト−６−ニトロベンゾチアゾール５、Ｏｆ
　（０，０２３５モル）、α−ブロモ−α−フェニル酢
酸５．２１１Ｃ０，０２３５モル）およびトリエチルア
ミン５．０．ｆ　（０，０５モル）の塩化メチレン溶液
を一晩おだやかに加熱還流する。この溶液を希塩酸で２
回、水で１回洗浄し、無水Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ、ｉで乾燥後
、濃縮する。その残渣をベンゼンから再結晶後、さらに
アセトニトリルから再結晶して標記化合物１．５ｇ（１
８％）をえる。融点１５２〜１５５℃ 分析値”　１５Ｈ１゜Ｎ２Ｏ４Ｓ　２として計算値：　
Ｃ，５２，０１ｉＨ，２，９１ｉＮ、８．０９実測値：
　Ｃ，５１，７２；Ｈ，２，９７ｉＮ、８．０１実施例
１７ ブレシア抗−８ＲＢＣ（羊赤血球）抗体誘引試験は非常
に感度の高い試験法であって、５ＲＢＣ特異性１ｇＭお
よびＩｇＧ　抗体の５ＲＢＣ誘引による生成を増加また
は抑制する免疫変調剤の効力を測定するために使用され
ている。すなわち、この試験法は、全免疫系に抗原（本
性では５ＲＢＣ）で攻撃する高揚したまたは抑制された
抗体反応を誘引する免疫変調剤の効力に関する特異的な
情報を提供するものである。Ｔ細胞およびその各種副集
団なら引どＢ細胞に対する強い免疫変調化合物の効力を
この方法で測定できる“。

この試験方法の操作は基本的に３つの部分からなる。第
１部分では、抗原を詰めた膵臓細胞を調製する。Ｃ５７
Ｂ１／６Ｊ雄マウスに１０８ＲＢＣ（発熱物質フリーの
等張食塩液として）を腹腔内に注射する。１０日後、動
物を殺し、肺臓をとり出し、それから膵臓細胞の懸濁液
を調製する。この懸濁液は肺臓当り組織培地（１０％牛
脂児血清を加えたクリック培地）１１Ｅ／を用いて調製
し、全懸濁液を単一の懸濁液にプールする。生きている
有核膵臓細胞の数をかぞえ、１０／／ｌＥ／に調整する
。

第２の部分では、上記膵臓細胞の懸濁液１　ｍｌを滅菌
培養管に入れ、これに標準の５ＲＢＣ懸濁液（１０７／
ｄ組織培地）１−を加える。試験化合物の原液を組織培
地にて調製し、それから適当な希釈倍率にて種々のもの
を調製する。各培養管に試験化合物希釈液０．１１１ｔ
を加え、対照管には培地１ｄのみ加える。培養管にフタ
をして混合し、湿度を調節した５％ＣＯ２インキュベー
ターにて３７°Ｃで６日間保持する。この培養管を１０
００）ｌにて約１０分間遠心して細胞を沈降させ、その
上澄を試験管に傾斜してとる。

第３の部分では、その上澄液を２倍希釈法にて１／１〜
１／３２までの希釈液を調製し、各希釈液０６１ｍ、を
各試験管に加える。各試験管に５ＲＢＣ（１０９／１１
ｔ）０．１−を加え、混合したのち室温にて１５〜３０
分間放置する。各試験管に補体（やや過剰量の補体を含
むモルモット血清希釈液）０．１ｄを加え、混合後、３
７℃水浴につけて５ＲＢＣの溶解を起させる。上澄液中
の抗−８ＲＢＣ抗体により感応性となった５ＲＢＣのみ
が溶ける。等張食塩水２．０−を各試験管に加え、混合
し、遠心して不溶細胞を沈降させ、溶解した５ＲＢＣか
らのヘモグロビンを含む上澄液を回収する。この上澄液
の吸光度を５４１１１ｍにて測定する。

溶解した８３ＢＣのパーセントは試験した細胞培養上澄
液中に存在する抗、５ＲＢＣ抗体の量に比例するため、
またその溶解分析は溶解した５ＲＢＣから放出されるヘ
モグロビンにて行なうため、放出ヘモグロビンの吸光度
の測定は上澄液中の抗５ＲＢＣ抗体の定量になる。この
試験法は過剰の補体の存在下にｓｇｕｃの５０％溶解の
範囲で最も正確に行なわれるため、５ＲＢＣの５０％溶
解をもたらす上澄液の容量は５０％溶血ユニット（Ｈ２
Ｏ）と呼ばれる抗体１単位を含んでいる。この容量で分
割した１つはＨ５０／ｄ（試験上澄液）を与える。吸収
一対照上澄液Ｈ５Ｑｄの標準曲線を作り、試験培養上澄
液中の抗体濃度を各希釈毎に測定する。各種の試験化合
物について種々の濃度について抗−５ＲＢＣ抗体の含量
を測ることにより、その化合物が免疫反応を刺戟するか
抑制するかが判る。

本発明の数種の化合物についてこの試験を行なった結果
を第１表に示す。表中のデータは抗体のＨ５０単位／Ｗ
Ｌｌおよび対照からの差哄を示す。

第１表 上記結果に示されるよ・うに、本発明の化合物は免疫反
応に対して充分な抑制効果を有し、その効果はミトーゲ
ン活性化ねずみＴ　ＩＪンパ球増殖試験の結果によりさ
らに裏付けられる。

実施例１８ ミトーゲン活性化ねずみＴ　１７ンパ球増殖試験は、ね
ずみＴ細胞集団の増殖に対する免疫変調剤の効果を測る
ためｌに用いられる。この試験法は、コンカナバリア　
Ａ　（Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｌｉｎ　Ａ　）　　（以下
、Ｃｏｎ　Ａと略す）などの７ミトーゲンによりあらか
じめその増殖を亢進されているＴ細胞の増殖を化合物が
高揚するか抑制するかを測るために行なう。試験化合物
かＣｏｎ　Ａ結合部位Ｃｂｉｎｄｉｎｇ　ｓ、１ｔｅｓ
　）　ニ作用する可能性を排除するために、試験化合物
とＣｏｎ　Ａとが細胞培地中に共存する系の代りに、Ｃ
ｏｎ　Ａを添加する前に試験化合物４Ｔ細胞でインキュ
ベートした系にてＴ゛細胞増殖を調べる。

試験方法は以下のとおりである。

１９７８球を雄のＣ；　Ｂ　Ａ／ＪまたはＮＺＢマウス
の膵臓から単離する。バンクの平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）
にで細胞均質液を調製′する。大きな粒子を除き、ＨＢ
ＳＳ中の細胞を繰返し洗浄したのち、それらを最小基本
培地（ＭＥＭ）中に懸濁させ、ガラスウールカラムを通
して大食細胞を除く。この細胞をナイロンウールカラム
で３７°Ｃ，９５１ａ空気、５％Ｃ０２にて４５分間イ
ンキュベートする。

非吸着Ｔ　＋）ンパ球をカラムがら溶出し、数をかぞえ
、２　Ｑ　ｘ　ＩＱ細胞／ＩＥ／に調整する。この細胞
５０μｅを、化合物と時に、または化合物とミトーゲン
（ＣｏｎＡ　Ｏ，Ｏ２５１ｉｔＡ＠地）トドもに、４８
時間培養（３７℃、９５％空気、５％ＣＯ２）　Ｌ、最
後の１６時間を３Ｈ−チミジン０．５μＣｉを添加して
培養する。培養系の全容量は２００μｌである。この細
胞を多段自動サンプル収集器（ＭａｓｈＩＩ）ニ集メル
。コノサンフル収集器にはキシレンベースのシンチレー
ション液１０ｄ中にガラス繊維フィルターディスクを置
き、それにて液体シンチレーションカウンター中で１分
間細胞をカウントする。

インキュベーション実験は下記２方法にて行なう。

１）リンパ球を試験化合物と２時間インキュベートし、
洗浄後、異なる濃度のＣｏｎ　Ａとともに培養する。

２）リンパ球を種々の量のＣａｎ　Ａと２４時間インキ
ュベートし、洗浄後、試験化合物とともに培養する。

用いたＣｏｎＡの濃度は０．０４または０．０５μｆ／
培地である。本発明化合物の効果を以下に要約する。

Ａ、　α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
オ）−α−フェニル酢酸ナトリウム塩：化合物を０．０
２．０．０４．０．０６および０．０８μｆ／培地の量
のＣｏｎＡと共存させて培養すると、化合物は０．１．
１．０．５および１０μｇ／培地の濃度にて、ＣｏｎＡ
誘引の胚子発生を抑制した。化合物を、ＣｏｎＡの０．
０４または０．０５μｇ／培地の添加前にリンパ球とと
もに培養すると、化合物はそのような抑制活性を示さな
かった。また、細胞を０．０４または０，０５４ｆ／培
地のＣｏｎＡとイアー＋−！−ベートしたのちに、化合
物を〉２または３μｇ／培地の濃度にてリンパ球ととも
に２４時間培養すると、化合物はリンパ球胚子発生の強
い抑制を示した。

Ｂ、　α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
オ）−α−（ｐ−クロロフェニル）酢酸：化合物を０．
０２．０．０３．０．０４および０．０６μｇ／培地の
量のＣｏｎＡの共存下に培養すると、化合物は〉２μｇ
／培地の濃度にてＣｏｎＡ誘引の胚子発生を抑制しだ。

化合物をＣｏｎＡ　Ｏ，０４または０゜０５μｇ／培地
の添加前にリンパ球とともに培養すると、化合物は３お
よび５μｆ／培地にて明らかな抑制活性を示した。また
、細胞をＣｏｎＡ　Ｑ、０４または０．０５μｇ／培地
とともにインキュベートしたのちに、化合物をリンパ球
とともに２４時間培養すると〉２または３μｆ／培地の
濃度にて、化合物（さ胚子発生の強い抑制を示した。

これらの結果から明らかなように、本発明の化合物は、
ミトーゲン誘引のＴ細胞増殖を明らかにかつ強力に抑制
する。また、本発明の化合物は、ＣｏｎＡ結合部位をふ
さいだときにＴりンパ球胚子発生を混乱させることもで
き、しかも本発明の化合は細胞結合部位に対してＣｏｎ
Ａとは競合しない。

特許量ｍ人　アメリカン・ホーム啼プロダクツ・コーポ
レイション 第１頁の続き ０発　明　者　フランシス・ジョセフ・グレゴリ− アメリカ合衆国ペンシルベニア 州バーウィン・サイプレス・レ イン１１番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）次式： 〔式中、Ｒ１は水素、ハロゲン、ニトロ、アミ八低級ア
   ルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまたはヒ
   ドロキシ；Ｒ２はフッ素、塩素、臭素、低級アルキル、
   低級アルコキシ、アミン、ニトロまたはトリフルオロメ
   チル；Ｒ３はヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、ヒ
   ドロキシ（低級）アルキルアミノ、Ｎ−（低級）アルカ
   ノイルアミノ（低級）アルコキシまたはＮ−アリールカ
   ルバモイル（低級）アルキルチオ；ＸはＣＨまたはＮ；
   破線は５，６位および７，８位の任意の二重結合を意味
   する〕 で表わされる化合物またはその医薬上許容される塩。 （２）α−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）−α−
   フェニル酢酸である前記第（１）項の化合物。 （３）α−Ｃ５−’９０ロベンゾチアゾールー２−イル
   チオ）−α−フェニル酢酸である前記第（１）項の化合
   物。 （４）α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
   オ）−α−フェニル酢酸のナトリウム塩である前記第（
   １）項の化合物。 （５）α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
   オ）−α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸であ、る前記第
   （１）項の化合物。 （６）α−（ベンゾチアゾール−２−イルーｆ−オ）−
   α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸である前記第（１）項
   の化合物。 （７）α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
   オ）−α−フェニル酢酸エチルエステルである前記第（
   １）項の化合物。 （８）α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
   オ）−α−フェニルアセトアミドである前記第（１）項
   の化合物。 （９）α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチ
   オ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−α−フェニルア
   セトアミドである前記第（１）項の化合物。 ００α−（５−クロロベンゾチアゾール−２−イルチオ
   ）−α−フェニル酢酸２−（アセチルアミノ）エチルエ
   ステルである前記第（１）項の化合物。 θυａ−（５−クロロベンゾチアゾール−２〜イルチオ
   ）−α−フェニルエタンチオン酸２−（２−ナフタレニ
   ルアミ／）−２−オキンエチルエステルである前記第（
   １）項の化合物。 （２）α−（５−クロロチアゾロ［：’５．４−ｂ）ピ
   リジン−２−イルチオ）−α−フェニル酢酸である前記
   第（１）項の化合物。 ０３α−（５−クロロチアゾロ［５，４−ｂ’）ピリジ
   ン−２−イルチオ）−α−（Ｐ−クロロフェニル）酢酸
   である前記第（１）項の化合物。 Ｑ→α−（４，５，６，７−チトラヒドロペンゾチアゾ
   ールー２−イルチオ）−α−フェニル酢酸である前記第
   （１）項の化合物。 αＱα−（６−ニドロペンゾチアゾールー２−イルチオ
   ）−α−フェニル酢酸である前記第（１）項の化合物。 Ｍ免疫反応の゛変調を生ぜしめるに有効な量の次〔式中
   、ｋｌは水素、ハロゲン、ニトロ、アミ八低級アルキル
   、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまた゛はヒドロ
   キシ；に２はフッ素、塩素、臭素、低級アルキル、低級
   アルコキシ、アミノ、ニトロまたはトリフルオロメチル
   ；Ｒ３はヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、ヒドロ
   キシ（低級）アルキルアミノ、Ｎ−（低級）アルカノイ
   ルアミノ（低級）アルコキシまたはＮ−アリールカルバ
   モイル（低級）アルキルチオ；ＸはＣＨまたはＮ；破線
   は５，６位および７．８位の任意の二重結合を意味する
   〕 で表わされる化合物またはその医薬上許容される塩から
   なることを特徴とする温血動物用免疫反応変調剤。