JPS5890516A - 単純疱疹ウイルス（１型および２型）に対するワクチンおよび免疫化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生ウイルスワクチン、該ワクチンの製造方法
ならびに９イルスに対して宿主を免疫化する方法に関す
る。４１に、本発明は、生ウイルスワクチン、レワクチ
ンの製造方法ならびに該ワクチンを用いる、単純庖疹ウ
イルス１型および２型（それぞれＨ９Ｖ−１およびＨ３
Ｖ−２）に対する免疫化方法に関する。本発明のワクチ
ンは、単純癒疹９イルスの選択された株をかけ合せるこ
とによって得られる少なくとも１種の型間（Ｉｎｔ＠ｒ
ｔｙｐｌｃ）（ＨＳシーＩＸＨＳＶ−２）組換型株を有
効成分として含んでいる。

単純痢疹ウイルスの両方の識別可能な杭棒型（ＨＳＶ−
１おＺびｌ−１ｓＶ−２と呼ばれる）は、比較的嘔い唇
の発熱性水、泡から、重い生殖器感染および新生児の一
般感染までの範囲の感染および疾患をひき起こす。単純
横疹は、ヒト脳炎の病因として次第ＫＭＩめられて来て
おり、ある種のヒトの癌に関連がある可能性がある。

今まで、単純癩疹ウイルスに対する有効なりクチンは知
られていない。

本発明の目的は、病原性（野生型）ｌ−１ｓＶ−１およ
びＨＳＶ−２に対して有効な生ウイルスワクチン、ｗよ
ワクチンの製造方法ならびに該ワクチンの使用によるヒ
ト宿主の免疫化方法を提供することである。

本発明のＨ５Ｖ−１およびＨ５Ｖ−２に対する生ウイル
スワクチンは、少なくと本１種の無毒性の型間（Ｉｎｔ
＊ｒｔｙｐｌｃ）（Ｈ５Ｖ−１ＸＨ５Ｖ−２）組換型株
を有効成分として含んでいる。該組換型株は、識別用遺
伝的マーカーを有するＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の選
択された原型親株をかけ合せ、かつ後代をその望ましい
ワクチン特性によって選択することによって得られる。

本発明のワクチン株は、無毒性、安定性（毒性状１１に
復帰しない）であり、ＨＳＶ−１およびＨ６Ｖ−２の両
方の野生型株の大量抗原投与に対して立証された免疫性
を与え、病原性が低くかつ宿主の免疫化後消失する。

本発明の他の特徴および利益は、添付図面に関して述べ
る以下の詳細な説明ならびに特許請求の範囲から明らか
であろう。

原則として、ウイルスは、感染細胞に特殊な蛋白質を生
産させる。これらの蛋白質は相互に、かつ細胞蛋白質、
ＤＮＡまたはＩＩＮＡと相互作用してタイルス後代を作
らせ、ｍｃ染細胞を破壊しかつ今まで感染していなかっ
た細胞へ感染を広ける。

これらの蛋白質の中には、宿主を刺激して抗体を産生さ
せるものもある。ＨＳＶ−１とＨＳＶ−２とは、免疫学
的に関係があるが、これらの蛋白質のほとんどが、各蛋
白質を識別することができる識別用標識（特性）を担持
している〔モース（Ｍａｒｓｓ）他、′単純癩疹つイル
スｒＨＳＶ）ＤＮＡの解剖学：Ｘ、ＨＳＶ−１ｘＨＳＶ
−２該換型ニよって指定される／ＩＪペグチドおよび官
能の分析によるウイルス遺伝子の遺伝地図作製（Ａｎ・
ｔｏｍソｏｆＨ＠ｒｐｅｓＳｌｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓ（
ＨＳＶ）ＤＮＡ：ｘ。

ＭａｐｐｉｎｇｏｆＶｌｒａｌＧｅｎｅｓｂｙＡｎａｌ
ｙｓｉｓｏｆＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓａｎｄＦｕｎｃ
ｔｉｏｎｓ５ｐｅｃｉｆｉｅｄｂｙＨ５Ｖ−１ＸＨ５Ｖ
−２Ｒ＠ｃｏｍｂｉｎａｎｔｓ）“、Ｊ、Ｖｌｒｏｌ、
Ｖｏｌ。

２６、扁２．５８９−４１０（１９７−８年５月）参照
−０この記載該ｉ参照文として本明細書に含まれるもの
とする〕。

組換型後代が生成することがら、Ｈ９Ｖ−１の蛋白質が
Ｈ９Ｖ−２の蛋白質と相互作用して感染性後代を生成す
ることができることは知られている。Ｈ５ＶＪＩＩＫ対
する免疫性は幾つかの蛋白質に対する宿主の反応によっ
て測定されることも知られている。

本発明によれば、ＨＳＶ−１蛋白質とＨＳＶ−２蛋白質
との相互作用の適応＆は％ＨＳＶ−１単よよよｌ＊ｔ１
４ｓｖ−２単独の適応度より良好でないので、ＨＳＶ−
１およびＨＳＶ−２の遺伝的組換のウイルス後代該−１
ｔ、一般よＩＣ１野生型ウイルスより毒性が低いことが
発見され友。また１組換型は遺伝子の混合物であるので
、好判断で遺げれるならば、ＨＳＶ−ＩＪＩ染および１
−ＩＳＶ−２感染ノ両方に対して保膜する。

組換型は、原則として、突然変異誘発によって分化され
て病原能力を失うウイルスとは異なる。

ほとんどの場合、突然変異誘発は、１個以上の塩基対の
置換を含み、通常、１個の遺伝子の別の遺伝子による置
換を含まず、かかる突然変異株は野生型表現型に容易に
突然変異する（すなわち再び毒性になる）可能性がある
。

組換型は、全遺伝子および遺伝子の解が置換されている
ので、毒性を復帰することはできない。

その上、突然変異株は１つのウイルス抗原型のみに対す
る抗原決定基をもっている。上記したように、かつ後で
詳述するように、組換型は、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−
２の両方に対して抗原決定基部位を含むように選択する
ことができる。

従って、本発明によれば、組換型から識別される能力に
基づいて選択される原型親ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２
株の組換型後代を作ることによって、ＨＳＶ−１および
ＨＳＶ−２の両方に対して有効な生ウイルスワクチンが
提供される。かくして、親株は、組換型の同定および隔
離を可能にする識別用遺伝的マーカーを担持している。

結果として、親株の識別用特性に基づいて親株から識別
しかつ隔離することができる組換型を生成させるような
方法で親株をかけ合せる。

親の識別用特性は、組換型のワクチン特性と関係がある
必要灯ない。

滅弱化組換型は、その免疫原性、無毒性、毒性への復帰
傾向の欠如、免疫化後の宿主からの消失傾向に基づいて
選択される。特定の組換型のこれらの特性は、容易に実
験的に測定される。

本発明は、識別用マーカーを担持する原型親株のかけ合
せによって、ワクチン組換型の生成頻廖が増強されかつ
その隔離が可能になるという発見を意図している。本発
明は２、減弱化型間（Ｉｎｔ＊ｒｔｙｐｌｃ）（ＨＳＶ
−ＩＸＨＳＶ−２）組換型株は野生型ＨＳＶ−１および
ＨＳＶ−２に関するその減弱化を保持するという発見も
意図している。

かくして、本発明は、生ウイルスワクチン、該ワクチン
の製造方法、ならびに該ワクチンを使用して、ＨＳＶ−
１およびＨＳＶ−２の両方に対してヒト宿主を免疫化す
る方法を提供する。

以下、数種のｆｉＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２株をかけ
合せることによって得られる２８種の特定の組換型から
選択される８種の好ましいワクチン株に関して本発明の
詳細な説明するが、下記の説明の詳細は、限定のための
ものではなく、例示と理解の容易さのためにのみ提供す
るものである。

モース（Ｍｏｒｓ・）ら、’単純施庖ウイルスＤＮＡの
解剖学：■．型間（ＨＳＶ−１×ＨＳＶ−２）組換型の
世代に於けるある種の親ＤＮＡ配置の見かけの排除（Ａ
ｎａｔｏｍｙｏｆＨｓｒｐａｓＳｌｍｐｌｓｘＶｌｒｕ
ｓＤＮＡ：■、ＡｐｐａｒｓｎｔＥｘｃｌｕｓｌｏｎｏ
ｆＳｏｍｅＰａｒ＠ｎｔａｌＯＮＡＡｒｒａｎｇ＠ｍ５
ｎｔｓｉｎｔｈ＠Ｇ＠ｎ５ｒａｔｌｏｎｏｆＩｎｔ＠ｒ
ｔｙｐｌｃ（ＨＳＶ−ＩＸＨＳＶ−２）Ｒｅｃｏｍｂｌ
ｎａｎｔｓ）”ｓＪ、Ｖｌｒｏｌ、、Ｖｏｌ、２Ａ＊Ａ
１．２３１−４８ｒ１９７７．１０月号）〔以下、ｌモ
ースらの論文（１９７７）“と称し、この論文の記載は
参照文として本明細書に含まれるものとする）は、選択
された親単純庖疹ウイルス１型および２型（それぞれＨ
９Ｖ−１および＋５ｖ−２）をかけ合せることによって
生じる２８種の組換型の製造および特性を記載している
。

モースらの論文（１９７７）に記載おれている親のかけ
合せは２種類である。第１に於て、ＨＳＶ−１とＨ３Ｖ
−２の温度感受性突然習異株をかけ合せて野生型組換型
を生成させた。第２に於ては、ホスホノ酢酸（ＰＡＡ”
）に対して抵抗性にし九ＨＳＶ−１の温度感受性突然変
異株を野生ＷＨ５Ｖ−２とかけ合せ、非許容（ｎｏｎｐ
ｅｒｍｌｓｓｉｖａ）温度で増殖させかつＰＡＡに対し
て抵抗性である組換戯を選択した。

１種以上の種類の制限エンドヌクレアーゼによって、こ
れらの組換型のＤＮＡの遺伝地図を作製したＯ 今回、モースらの論文（１９７７）に記載されでいる２
８種の組換型株のうちの少なくとも８株が、ＨＳＶ−１
およびｌ−１ｓＶ−２の両方に対してヒト宿主を免疫化
するためのワクチンの有効成分として使用するために安
全かつ有効であることが発見された。特に、関心のある
例示した株は、無毒性であり、望ましい免疫原性および
潜伏性ノ特性を示し、かつ低い病原性レベルをも示す。

さらに、これらの株は腫瘍原性が無いと考えられる。

本発明の好ましい株の例である８種のワクチン組換型株
は、アメリカン・タイプ−カルチャー拳コレクション（
ＡｒｎｅｒｌｃａｎＴｙｐｅＣｕ１ｔｕｒｉＣｏｌｌａ
ｃｔｌｏｎ）（ＡＴＣＣ）、ｏツクビル、メリーランド
２０８５２（ｕｓＡ）に寄託されており。

モースらの論文（１９７７）中に用いられている下記名
称および対応するＡＴＣＣ寄託番号で同定されてｂる。

モースらの論文１９７７）の、上で一定された８種の代
表的株の親ウイルス株は下記の通りである。

（ａ）アロン、Ｇ、Ｍ、（Ａｒｏｎ＊Ｇ、Ｍ、）ら、ｌ
単純横疹ウイルス１型温度感受性突然変異株のＤＮＡ合
成およびＤＮＡポリメラーゼ活性（ＤＮＡ５ｙｎｔｈ＠
ｓｌｓａｎｄＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＡｃｔｉｖｉ
ｔｙｏｆＨｅｒｐｅｓＳｌｍｐｌｅｘＶｌｒｕｓＴｙｐ
ｅＩＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ−８ｅｎｓｌｔｌｖｅＭｕ
ｔａｎｔｓ）”ｓＪ、Ｖｌｒｏｌ、、１６゜４９８−５
０７（１９７５）：ベニニッシュ・メルニツク、Ｍ、（
Ｂ＠ｎｙｅｓｈ−Ｍｅｌｎｌｃｋ、Ｍ、）ら。

ｌ単純磯疹ウイルスの温度感受性突然変異株によって表
現されかつ検知されるウイルス遺伝子機能（Ｖｌｒａｌ
Ｇｅｎ＠ＦｕｎｃｔｉｏｎｓＥｘｐｒ＠５ｓｓｄａｎｄ
Ｄｅｔ＠ｃｔ＠ｄｂｙＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ−５ｅｎ
ｓｉｔｉｖｅＭｕｔａｎｔｓｏｆＨ＊ｒｐｓｓＳｌｍｐ
ｌｓｘＶｌｒｕｓ’）”、Ｃｏ１ｄＳｐｒｉｎｇＨａｒ
ｂｏｒＳｙｍｐ、Ｑｕｓｎｔ、引０１．３９，７３１−
７４６（１９７４）；シャファー、Ｐ、Ａ、（ｓｃｈａ
ｔず・ｒｅ””）、′横疹ウイルスの温度感受性突然変
異株（Ｔ＠ｍｐｅｒａｔｕｒｅ−５ｏｎｓｌｔｌｖａＭ
ｕｔａｎｔｌｏｆＨｅｒｐ＠５ｖｌｒｕｓａｓ）”ｓＣ
ｕｒｒ、Ｔｏｐ。

Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌ、１ｍｍｕｎｏ１．７０ｅ５１−１
００（１９７５）：シャファーＰ、Ａ、（５ｃｈａｆｆ
ｅｒ、ｐ、Ａ、）ら、１４疹９イルスの遺伝学（Ｇ＠ｎ
＠ｔｌｃｓｏｆＨｅｒＨｉｖ１ｒｕｓ＠ｓ’）”（Ａ、
フアンゲ、Ｄ。パルチモア、Ｃ，ブレッドフォックス（
Ａ、Ｈｕａｎｇ＠ａｏ、８ａｌｔ１ｍｏｒｓａｎｄＣ，
Ｆｒ＊ｄＦＯＸ）編、動物ウイルス学（Ａｎ１ｍａｌＶ
ｌｒｏｌｏｇｙ）、プレナム１４ブリッジング社（Ｐｌ
＠ｎｕｍＰｕｂｌｌｓｈｌｎｇＣｏｒｐ、）ｓ二ニーヨ
ークｒ１９７６）のｐ、５４６−６１７）１（これらの
文献の記載は参照文として本駒細書に含まれるものとす
る）Ｋ記載されているＤＮＡ”Ｊ４突然変異体ＨＳＶ−
１（ＫＯ９ｔｓＥ６）、（ｂｌマースデン、Ｈ，よｉｉ
、ｒＭａｒｓｄ＠ｎ、Ｈ，Ｓ、）ら、′噸疹りイルス感
−細胞に於ける蛋白質合成の調節：ＨＳＶ株１７の野生
型および１６種の温度感受性突然変異株によって誘導さ
れるポリペプチドの分析（ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＰｒｏｔ
ｅｉｎ５ｙｎｔｈｅｓｉｓＩｎＨ＠ｒｐ＠５ｖｌｒｕｓ
−１ｎｆｌｌｌｅｔ＠ｄｃａｌＩｓ：Ａｎａｌｙｓｌｓ
ｏｆｔｈ・Ｐｏ１ｙｐＢｔｌｄｓｓＩｎｄｕｃ＠ｄｂｙ
Ｗ目ｄＴｙｐｅａｎｄ５ｉｘｔｅｅｎＴｅｍｐｅｒａｔ
ｕｒｅ−Ｓ＠ｎ５ｉｔｌｖ＠ＭｕｔａｎｔｓｏｆＨＳＶ
５ｔｒａｌｎ１７）”％Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ、。

３１．３４７−５７２（１９７６）、スバクーシャルペ
、Ｊ、Ｈ，（５ｕｂａｋ−５ｈａｒｐｓ、Ｊ、Ｈ，）ら
、’よ疹ウイルスの遺伝学的および生化学的研究（Ｇｅ
ｎ＠ｔｉｃａｎｄＢｉｏｃｈ＠ｍ１ｃａｌ５ｔｕｄｉｅ
ｓｗｉｔｈＨ＠ｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）“ｓＣｏ１ｄＳｐ
ｒｌｎｇＨａｒｂｏｒＳｙｍｐ。

Ｑｕａｎｔ、８１ｏ１．、５１、７１７−７３０（１９
７４）（これらの文献の記載は参照文として本明細書に
含まれる本のとする）に性質が記載されているＤＮＡ−
ｔｓ突然変異株ＨＳＶ−１（１７０−ｊ）、（ｃ）英国
バーミンガム（８，ｌｒｍｌｎｇｈａｍ）大学、医学微
生物学部、アレキサンダープチャン（Ａ１ａｘａｎｄｅ
ｒＢｕｃｈａｎ）から得られ九公知のＤＮＡ″″突然変
異株ＨＳＶ−１（ＨＦＥＭｔｓＮ１０２）、（ｄｌベニ
ニッシュ・メルニツｌ、Ｍ＋（Ｂｅｎソ・ｓｈ−Ｍｅｌ
ｎｌｃＬＭ、）ら、′単純頃疹ウイルスの温度感受性突
然変異株によって表現されかつ検知されるウイルス遺伝
子機能（ＶｌｒａｌＧｏｎ＠ＦｕｎｃｔｌｏｎｓＥｘｐ
ｒｅｓｓｅｄａｎｄＤｅｔｅｃｔ＠ｄｂｙＴｅＩＭｐｓ
ｒａｔｕｒｓ−＄＠ｎ５ｌｔｌｖ＠Ｍｕｔｓｎｔｓｏｆ
Ｈｅｒｐ＠ｓＳｌｍｐｌｅｘＶｌｒｕｓ）’。

７５１−７４４（１９７４）、ピエリ７オイ、０、Ｊ、
Ｍ、（Ｐｕｒｌｆｏｙ％Ｏ，Ｊ、Ｍ、）ラ、′単純庖疹
ウイルス２１１のＤＮＡ−ネｆチプ温度感受性突然変異
株によるロＮＡ４リメラーゼ鱒導（［）ＮＡＰｏｌｙｍ
＠ｒａｓ＊１ｎｄｕｃｔｌｏｎｂｙＤＮＡ−Ｎ＠ｇａｔ
ｌＶ＠Ｔｍｐ＊ｒａｔｕｒｅＳ＠ｎ５ｌｔｌｖ＠Ｍｕｔ
ａｎｔｓｏｆＨ＊ｒｐｓｓ−８ｙｍｐｌｅｘＶｌｒｕｓ
Ｔｙｐｅ２）’Ｖｌｒｏｌｏｇｙｓ６８．５７４−５８
４（１９７５）：シャ７アー、Ｐ、Ａ、（Ｓｃｈａずず
・「、Ｐ、Ａ、）、１層疹つイ＆Ｘ１２）温度感受性突
然変１４株（Ｔ・ｍｐ・ｒａｔｕｒ・−＄＠ｎ５ｌｔｌ
ｖ＊ＭｕｔａｎｔｓｏｆＨ＊ｒｐｅｓｖｉｒｕｓ＠ｓ）
’５Ｃｕｒｒ、Ｔｏｐ、Ｍｌｃｒｏｌｏｌ、１ｎｖｎｕ
ｎｏ１．、７０．５ｌ−１００（１９７５）（これらの
文献の記載は参照文として本明細書に金型れるものとす
る）に記載されているＤＮＡ−Ｌｌ突然変異株ＨＳＶ−
２（１８４ｔｓ１５）、 （・）ニジエルシト（Ｅｊ・「ζＩＯ）も、感染細胞の
社会的挙動に及ぼす影響が異なる単純庖疹ウイルス株の
キヤラクタリゼーシヨン（Ｃｈａｒａｃｔ＠ｒｌ−ｚａ
ｔｌｏｎｏｆＨａｒｐ＠ｓＳｌｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓ５
ｔｒａｉｎｓＯ目ず＠ｒＮＱＩｎＴｉｔ＠ＩｒＥずｆ＠
ｃｔｓｏｎ８ｏｃｌａｌＢ＠ｈａｖｌｏｒｏｆＩｎずａ
ｃｔ＠ｄＣｅ１ｌ）“、Ｊ、Ｇ＠ｎ。

ＶｌｒｏＬ、２．５５７−１６４（１９６Ｂ）（この文
献の記載は参照文として本明細書に含まれるものとする
）に記載されているＨＩＶ−２（１８ｔｓ１５）の公知
の、親株ＨＳＶ−２（１８４）、（ｆ）ＨＳＶ−２（該
から得られ、かつカツサイ（Ｃ・５ｓａｌ）も、′単純
庖疹ウイルスのブック解離；ウイルス変異株の生化学的
および生物学的特性（Ｐｌａｇｕ＠Ｄｉｓｓｏｃｉａｔ
ｉｏｎｏずＨｓｒｐ＠ｓＳＩｍｐｌ＊ｘＶｉｒｕｓ＠ｓ
：ＩＩｏｃｈ＊ｍ１ｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈａｒａｃｔ＠ｒｓｅずｔｈｅＶｌｒｓｌＶａｒｉａ
ｎｔｓ）”、Ｉｎｔｅｒｖｌｒｏｌｏｇｙｓ６．２１２
−２２３（１９７５）（この文献の記載は参照文として
本明細書に含まれるものとする）に記載されているｎｒ
突然変異９８１よＶ−２（ＱＰ６）。

モースらの論文（１９７７）中の雛間組換型を得るえめ
には２種の基本的選択スキームが用いもれる。第１は、
ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２の、口＋突然変異株による
感染、およびエスパラザ、Ｊ、（区ｓｐ・ｒａｔｓ、Ｊ
、）ら、′単純峨疹１型および２種の温度感受性突然変
異株間の型間相補性および組換（慟ｎｔｓｒｔｙｐｌｃ
Ｃｏｍｐｌ＠ｍ＠ｎｔｓｔｌｏｎａｎｄＲ＠ｃｏｍｌｅ
ＩｎｓｔｌｏｎＢ＠ｔｗｅｅｎＴ＠ｍｐｅｒａｔｕｒｅ
−ｓ＊ｎｓ＋電−ｖ＠ＭｕｔａｎｔｏｆＨ＠ｒｐ＠ｓＳ
１ｍｐｌ＊翼Ｔｙｐｅ１ａｎｄ２）“、Ｖｌｒｏｌｏｇ
ｙ、７０ｓ５７２−５８４（１９７４）に記載され、か
う上記モースら（１９７７）が改良したように、非許容
（口＠ｎｐ＠ｒ−ｍｌｓｓｌｖ・）（Ｗ）温度で増殖す
る能力のある後代の選択を含む。上記エスパラザ（Ｅｓ
ｐａｒｓｚａ）らの論文の記載は参照文として本明細書
に金型れるものとする。第２の選択スキームは、野生型
ＨＳＶ−２とＨＩＶ−１ｔｓ−ＦＡＡ’突然変異株とで
二重に感染された細胞からのｔｓ”ＦＡＡ’後代の選択
を含む。

下記第１表に示すような遺伝的マーカーを含むＨｌｌＶ
−１およびＨＩＢＶ−２の選択された株で細胞を感染さ
せるととによって、３組の温間組換型を製造した・ 二重に感染させたベロ（Ｖ・ｒｏ）細胞を、３５．５℃
に於て、１８〜２０時間培養した。後代を、次に、アガ
ロース重層（ｏｖ＠ｒｌａｙ）下に平板磯橿し、非許容
（ｎｏ−ｐ・ｒｍｌｓｓｌｖ・）温度（３１Ｂ、５Ｃ）
で培養した。Ａ組およびＣ組の後代をＰＡＡ（１００μ
Ｐ／ｓｇ）を含む重層（ｏｖｅｒ目ｍｙ）下に平板接種
した。

Ａ組およびＣ組は、、ＨＳＶ−１ｔｓ親が作りたＰＡＡ
「をＨ＄Ｖ−２のｔｓ”＊とかけ合せることによって作
られた。かくして、あらゆる場合Ｋ。

後代はｔｓ”ＰＡＡｒで選択された。

次に、この選択された後代を、・−ｙｎマーカーの表１
１に’）いて分析した。Ａ組ては、ＨＳＶ−２＠Ｆｉ融
合細胞プラク形態（５ｙｎ−）を表現したが、Ｃ組では
、ＨＳＶ−２株は非融合細胞（ｓｙｎ”）であり九、Ａ
組とＣ組とのすべてのかけ合せは、各種の多数の５ＰＦ
Ｕ／細胞でなされた。

０組は％ｔｓｍをかけ合せ、かり上記のエスパラザ（Ｅ
ｓｐｓｒ・ｚｓ）もが報告している非許容温度で増殖す
る後代の能力で選択することによつて作られた。

アガロースで重層された（ｏｖ＠ｒｌａｉｄ）感染単層
からプラクを取ることによって組換型を隔離し、選択的
条件下で培養した。Ａ組およびＣ組では、着初のかけ合
ぜのプラク隔離物（１ｓｏｌ・ｔ＠ｓ、、）を、選択的
条件下で繰返しプラク精製（ｐｌ＠ｑｕ・−ｐｕｒ目１
ｅｄ）した後、ストック（５ｔａｃｋ）を作り九、予備
実験に於て、二重感染細胞の後代の約０．５から５−位
ｔでか選択的条件下で平板機種（ｐｌ・ｔ＠ｄ）される
ことが見られた。しかし、隔離プラクの多くの後代は、
さらに継代により、層温に分離するかあるいは親型と組
換型とに分離した。

これらの分離株（ｓ＠ｇｒ＠ｇａｎｔｓ）は、個々のプ
ラク後代な選択的および非選択的条件下で培養するとと
によって容易に証明することができた。

他の分離株（ｓ＠ｇｒ＠ｇａｎｔｓ）け、ＨＥ、−２細
胞のブラク形態の分析によって同定された。ある場合に
は、エンドヌクレアーゼによる消化後になって初めて、
親型断片および組換型断片の両方が同−ｒル中に存在す
ることで、親型および組換型後代の存在が明らかになっ
た。

０組では、第２または第３回のプラク精製後Ｋ、非選択
的条件下でウイルスストックを作った。従って、付加的
な組換過程（ｒｏｕｎｄｓ）から、次のリクローニング
（「・ｃｌｏｎｌｎｇ）で選択された後代が生じるかも
知れない。

組換型製造方法のさらに詳細は、上掲の、参照文として
本明細に含まれているモース（１９７７）の文献に記載
されている。

各組換型は、親のかけ合せ（Ａ組または０組またはＤ組
）と初期クローン数（１，２など）とプラク精製数（Ａ
、Ｂなど）とによって呼ばれた。

ある場合には、数回のプラク精製後まで、組換型混合物
の分離は起らず、これらは追加のアラビア数字で呼称し
た。

ハルペリン（Ｈｓｌｐ＠ｒｌｎ）ら、′新生児単純該１
疹の見かけの病院での獲得の研究に於けるＯＮＡフイン
ガープリンテイング（ＤＮＡＦｌｎｇｅｒｐｒｌｎｔｌ
ｎｇＩｎｌｎｖ＠ｓｔ１ｇ・ｔｌｏｎｏｆＡｐｐａｒ・
ｎｔＮｏｓｏｃｏｍ１ｍｌＡｃｑｕｌｓｌｔｌｏｎｏｒ
Ｎ＠ｏｎａｔａｌＨ＠ｒｌ）＠ＩＳ１ｍｐｌ＠Ｘ）’ｓ
Ｊ、Ｐ＠引ｓｔｒ１ｃｍ％９７．９ｌ−９５（１９８０
）（この文献の記載は参照文として本明細書に含まれる
ものとする）に記載されているように、ウイルスＯＮＡ
の消化ならびに得られた断片のゲル電気泳動によるその
後の分析は、ウイルスＯＮＡのキヤラクタリゼーシヨン
（ＯＮＡ地図作製）ならびに与えられ九ウイルスの独特
の″フインガープリント１を得るのに有用である。

第１図および第２図は、本発明の代表的なＨ３ｖ−１お
よびＨＳＶ−２組換型株のＯＮＡを、それぞれ制限エン
ドヌクレアーゼＢａｒｎＨ１またはにｐｎｌで消化し、
アガロースダル中で電気泳動にかけた後、臭化エチジウ
ム（ｓｔｈｌｄｌｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）で染色した電気
泳動図である。第１図および第２図のおのおのには、野
生１１ＨＳＶ−１（にＯＳ）および野生型ＨＳＶ−２（
１８６）のＤＮＡを参考として示しである。

第１図および第２図の電気泳動図は、下記の実施例１の
方法で得られえものである。

実施例１−制限エンドヌクレアーゼ消化による組換型Ｄ
ＮＡのキヤラクタリゼーシ ョン 本明細書中では、制限エンドヌクレアーゼ社、スミス、
ナサンズ（Ｓｍ１ｔｈａｎｄＮａｔｈａｎｓ）、′細菌
宿主修飾および制限系ならびにその酵素の命名法試案（
ＡＳＵ厘ｇ＊ｓｔ＠ｄＮｏｍ＠ｎｃｌａｔｕｒ＠ｆｏｒ
ＢａｃｔｓｒｌａｌＨｏ５ｔＭｏｄｌｆｌｃａｔｌｏｎ
ａｎｄＲ＠５ｔｒｊｃｔｌｏｎよよｙｓｔ＠ｍｓａｎｄ
ＴＭｌｒＥｎｚｙｍｅｓ）“、Ｊ、Ｍｏｌ。

μμヨｌユ、４１９（１９７５）（この論文の記載は参
照文として本明細書中に含まれるものとする）の命名法
に従って呼称される。ｓａｍＨ１およびにｐｎ１は、適
当な細胞ペーストから、標準槽製法：ＤＮＡの沈殿（ス
トレプトマイシン硫酸塩）、蛋白質の分別（硫酸アンモ
ニウム）、モレキユラーシーブクロマトグラフイー（ア
ガロースピーズ）およびイオン交換クロマトグラフイー
（ホスホセルロース）によって調製された。この制限エ
ンドヌクレアーゼ調製物は、使用前に、汚染性エクソお
よびエンドヌクレアーゼ活性がないことが示された。

ＯＮＡを、各制限エンドヌクレアーゼによって、全容１
００〜２００μｍで、３７℃に於て、２時間保温して分
解した。ＢａｍＨｌまたはにｐｎ１による消化のため、
混合物は、２０ｍＭトリス（ｐＨ７，５）、２０ｍＭＭ
ｇＣｌ２．２０ｍＭＮａＣＪを含んでいた。４０ｍ＆４
ＥＯＴＡの添加によって反応を停止させた。この時点で
、反応混合物に、ブロモフェノールブルー含有１糖（２
０μｍ、６０ｗ／ｗ−）をも添加した。

この限界消化物（１１ｍ１ｔ６１１６８口）中のＯＮＡ
断片を、０．８１１アｆロース〔シーカエム（Ｓ・・ｋ
ａ＠ｎ）、米国メリーランド州ロックランド市〕よりン
コロイＰ社（Ｍａｒｉｎ＠（：ｏｌｌｏｌｄｓ、Ｉｎｃ
、）製を含むスラブダル（２０Ｘ２０ｃｓ）中で、ヘイ
ヮーｐ％Ｇ、８ＪＨａｙｗａｒｄｓＬ’ａ）ら−”単純
庖疹ウイルスＯＮＡの解制学：制限エンドスクレアーゼ
賜位Ｏ位重の株差違および不均一性（５ｔｒａｉｎＯ：
ずｔ・ｊ＠ｎｅ・畠ｎｄＨ＠ｔ・ｒｏｇ＠ｎ１ｃｉｔｙ
ＩｎｔｈｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＲ＠５ｔｒｌｃｔｌｏ
ｎＥｎｄｏｎｕｃｌ＊ａｓ＠Ｓｆｔ＠ｓ）”、Ｐｒｏｃ
、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ．Ｓ．Ａ．７２、１
７６８−１７７２（１９７５）；およびヘイワード、Ｇ
−ｓｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、Ｇ、Ｓ、）ら、ｌ麺純噸疹つ
イルスＯＮへの解剖学：長分節および短分節の相対的配
向が異なる分子の４集団の証拠（Ｅｖｌｄｅｎｃ・ｆｏ
ｒｆｏｕｒＰｏｐｕｌａｔｌｏｎｏｆＭｏ１ｅｃｕｌｅ
ｓｔｈａｔＤｌｆｆｅｒｉｎｔｈｅＲｅｌａｔｉｖｅ０
ｒｉｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＴｈｅｉｒＬｏｎｇ’ａｎｄ
ＳｈｏｒｔＳｅｇｍｅｎｔｓ）’Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、
ＡｃａｄｅＳｃ１．Ｕ、５ａＡｅ。

−７−２，４２３４−４２４７（１９７４）（コｔ１．
ｃ−，（７）文献の記載は参照文として本明該ｉ８書に
含まれるものとする）記載のように、但し、管でｒｉな
くスラｆを用いて、トリス−燐酸塩緩衝液（３０ｍＭＮ
ａＨ２？０４ａ３６ｒｎＭトリス、１、０ｍＭＥＤＴＡ
。

ｐＨ１３，０）中、２＊２５Ｖ／ｃｕで、１８時間、電
気泳動を行うことによって分離した。電気泳動後、ｒル
會ワットマンＮ０ＩＩＦ紙上で乾燥し、クロネツクスメ
デイカル（ＣｒｏｎｅｘＭｅｄｉｃａｌ）Ｘ４該フイル
ムでオートラジオダラム？作った。

下記の実施例に、本発明の代表的組換型株の毒性および
免梗原性を親株および野生型Ｈ５Ｖ−１およびＨ３Ｖ−
２の特性と比較して竹った実験方法および結果を示す。

実施例２−一毒性の評価 本発明の８種の代表的組換型ウイルスならひに表体およ
び檀々の野生型Ｈ３Ｖ−１およびＨ５Ｖ−２株のおのお
のを、燐戚塙緩衝液、生珈的食塩水、葡萄ｍ（０，１Ｘ
）で１ｍ次１０ｔＷＩ希釈した。不活性化子牛血１１（
ｔ％）を希釈剤とし−Ｃ用藝た。希釈前に、ウイルスス
トックを、脱脂乳と混曾して一７０Ｃで貯蔵した。

パルｆ／Ｃ（８８１ｂ／Ｃ）マウス（４−６週令）ｋ同
一供給業者から得、２０１匹の群にランダムに分けた・
各群は１ｍ１０匹、−１０匹からなり、別＋−に収容し
、各群會それぞれの休でｔｌａｌｋＫ同定し罠。

用いた豪ａをよび抗１Ｍ、投与ルート（す４々ゎち１内
または１襄腔内または皮下）には関係なく、試験は、１
群２０匹に、１０°（細胞場誉から侍た木布釈ウイルス
）から１０−８まで（但し、ＦおよびＧ野生型体では１
０〜１０−８希釈しか用いなかった）のウイルス希釈−
のおのおのｔ社射してイ１つた。２つの対照群には、各
試験の希釈剤を注射した。

ＦシよびＧ野生株は上記のエノエルシｈ（Ｅｊｅｒｃｉ
ｔｏ）らの論文に記載されている。ＭＧＨｊＱは、マサ
チューセッツ・ゼネラル・ホスピタル（Ｍａｓｓａｃｈ
ｕｓｅｔｔｓＧｅｎｅｒａｌＨｏ５ｐｌｔａｌ）の脳炎
の患者から分離された一高度に毒性の野生型株でＴｏシ
、ハンマー（Ｈδｍｍａｒ）ら、′岸純唯疹脳炎の側頭
部クラスタｍ：ウイルスＯＮＡの制限エンドヌクレアー
ゼ分野による研９ｅ（ＴｓＩｍｐｏｒａｌＣ１ｕｓｔａ
ｒｏｆＨ＠ｒｐｅｓＳｌｍｐｌｅｘＥｎｃｅ−ｐｈａｌ
ｌｔｌｓ：ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｂｙＲｅ５ｔｒ
ｉｃｔｉｏｎＥｎｄｏｕｃｌｅａｓｅＣｌｅｖａｇｅｏ
ｆＶｌｒａｌＯＮＡ）“、Ｊ、Ｉｎ−Ｑｃｔ、Ｄｉｓ、
、１−４１−、４５６−４４０（１９８０）（この論文
の記載に参照文として本明ａ１１に含まれるものとする
）に記載されている〇 各つイルスｓ濁液の感染方価を、上で用いたウイルスの
希釈で、ペロ細胞（Ｖｅｒｏｃｅｌｌｓ）についてのプ
ラク計数によって測定した〇 接種後、マウスを、２０日曲毎日検査し、次いで５０日
０まで１週２回検査するか、あるいは感染後側に述べる
ように検査した。接種方法は下記の通りである。

脳内ｗ−檜のためには、エーテルを用いるか、あるいは
４ントパルビトンの腹膜腔内注射によってマウスを麻酔
した。

各マウスは、脳の右半球に、ウイルス希釈物または希釈
剤５０μｍを投与された。

腹膜校内よＩよ種の場合には、各マウスに、麻酔なしに
、０＠２ｍｊを投萼した。

皮下接種では、マウスの左足パッド（足の裏のふくらみ
）に、麻酔せずに、２０μｍを注射した。

第５図は、親Ｈ５Ｖと本発明の誘導ｌ＆１４挨型のＨ３
Ｖのグラフ形成単位（ＰＦＬＪ）で測定されるマウス脳
内ＬＤ５ｏを比較する試験結果を示す◎義３図の左の対
数目盛は脳内注射による被検マウスの５０５Ｘ死亡に要
するＰＦＵの数を示す。３組の親および組換型体はＡ、
Ｃ１０と呼ばれ、各親株および本発明の８ｓのＭｉ侯型
抹のおのおのに対する被検マウスの５０％死亡に喪する
ＰＦＬＩの数が示されている〇 炊つかの例でｔよ、与えられた突然変異体ｌよ株のＬＤ
ｓｏは対応する組換型よりも高いようである。

かかる婦合の毒性の欠如は、マウスの温度が温度感受性
ウイルスが増殖しない温度またはその付近である限りに
おいて、完全に温度感受性障害によるものである。

突然＆該よ株は、容拠に復帰しかつ高温でｊＩＩｌ殖が
Ｉ２１訃であり、かつ復帰突然変異株は、親ウイルスの
毒性を再獲得するので、かかる突然変異株は、ワクチン
として適当でない＠ 組換型は、温度性に関Ｌ７て”野ケ型ｌでありかつ遺伝
情報を交伊しであるので、組換型は、野生型ウイルスの
遺伝情報および性′Ｍ４を再獲得することができない。

従って、その性質は安定である＠各試験で死亡の分布に
基づいて、５０％紋死倉（ＬＯｓｏ）をＩＩ−＊した。

異なる株の比較を行うため、ウイルス１１１ｔ当たりの
ＬＯ５，の数を感染力価プラク形成単位／ｄ）と呼んだ
。〔すべての試験に於て、毒性または免役性の瞠ト其、
感染力価の計１ＪｉＬａ１公知のケルバー（に賀ｒｂａ
ｒ）法で行った。〕最終結果は、下記該４２女中に承す
ように、ｌｏｇＰＦυ／ＬＤ５ｏとして示さ、れる〇 病原性 毒性は、ｌｏｇＰＦＵ／ＩＬ（）ｓｏとして示される。

警凌智１ル−）、ｌＣＩｃ、ＩＰ Ｄ５Ｅ１７．８７．７８．９ Ｄ４Ｅ１７．６ Ｄ３Ｅ２７．５６．９８．６ Ｄ４Ｅ１６．８ ＧＯ０７ Ｆ１．５ｓ・９ ２．５ 本異なる時期に２寮−を行った。

実施例３−免役原性の評価 毒性試該（上記実施り１２）で生存Ｌ７ていたマウスは
、種々の書のウイルスで免役化されていると考えられた
。毒性試験の５０日後に、一定量の抗・ｍ伎与ウイルス
で、免疫性を試験した。

マウスの抗原投与に用いたウイルスＳ滴液の襟付の力価
を、脳内ルートを用い、４〜６週令８ａ１ｂ／Ｃマウス
について測定した。

抗原投与のためには、燐酸塩で緩衝した生理的食塩水、
葡萄楯および不活性化子牛血清中の適当なウイルス希釈
物を、５０μノ中に３．０００故死瀘をもつように１よ
１製した・感染力価を同時に検査した。

し橿は、上記実施例と同じ方法で行った。次いで、マウ
スを２０日１１ｔ＋毎日奈察した後、３０日１まで週２
回ｍ１１１した。

ウイルスの発病または致死効果の点で、脳が体内で最も
敏感な器管であるので、脳内抗原投与ルートを選んだ。

かくして、敏感な脳内接種および抗原投与ルートのため
に％結果はワクチン組換型の減物性を強く反映し、本発
明の方法は、性質が減弱さルた休を与える手段會与える
ので、病気またμ死を起こすことなく免疫化を与えると
いう結論へ導く。

抗原投与後の生存分布に基づいて、各に−に１１して、
毒性試験に用いた株の５０９６予防＠（ｐｏｓｏ）を計
算した。次に、このｐｏ５ｏを上記実施例２のように感
染力価と呼んだ。鍛終結果は、ｌｏｇＰＦＵ／ｐｏ５ｏ
として、下記第３表中に示す。

第５表 免役化 すべての抗原投与ｒｉｌｃルートで行った。免疫原性ｎ
ｓｌｏｇＰＦ、Ｕ／１５０％予防装として示される。

４．５３．１５．５２，９７６．２Ｄ５Ｅ１３．１２．
６Ｄ４Ｅ１ ２．９２．ＩＬ９２．８７６．８０Ｅ５２３．８４．２
０１Ｅ１ （１）０．７ａ ｌ、６１ 本２ｓｊよ＠は、異なる時期に行われた。

実施例４−免疫原性の評価 第４表は、５種の組換型株、０５Ｅ１、ＤＩＥｌ、０５
Ｅ２のおのおのＫよる宿主動物の脳内感染から得られる
免疫原性を示す。宿主動物（４−６透射８ａｌｂ／Ｃマ
ウ２）Ｋ、免疫化後１２０日で、それぞれＷＴ・１７お
よび１８６という名称の公知の野生型Ｈ５Ｖ−１＞よび
Ｈ５Ｖ−２ウイルスを＠ＩＩＡ投すした。（ＷＴ１７は
上記マースデン（Ｍａｒｓｄｅｎ）らの−文に記載され
ており、１８６ｔ：ｌ上記エスパラデ（Ｅｓｐａｒａｚ
ａ）らの−文に記載されている。］各場合に於て、異な
るマウス群を、１０，０００ＰＦＵで、ＤＩＥｌおよび
０５Ｅ２の一合にｒよ、七ねそれの休の１０．０００Ｐ
ＦＬｌで、±に２実施ｙｕ２ｔｋ２絋の方法に従って脳
内ルートより一免投化した。刈照は、免疫化しなかった
。

１２０日後、各群に、Ｈ５Ｖ−１ま７ｊ１１Ｈ５Ｖ−２
の３．０００ＬＤ、ある場合には３０．００００ Ｌ０５ｏを抗原投与し、３０日後の生存数を測定りまた
。

第５表は、種々の菫の組換型体による脳内感染によって
免疫化され、免疫化の６０日後に、それぞれＨＳＶ−１
およびＨ５Ｖ−２のｗＴ１７株または１８６株の３、０
００ＬＤ５０の量による抗原俣与で生存しているマウス
の数を示す。

第６表は、野生型ＨＳＶ−２（（２）による脳内抗原投
与に対する被検動物の抵抗性に及ぼすＤ５Ｅ１株による
腹膜腔内（＋、ｐ、）ワクチン接種の効果を示す、１８
ｆ＋の−ＦつＸＫ１ｏｔｉｈｔｏ、ｏｏ。

ＰＦＵの組換ｄＤ５Ｅ１株を腹膜腔内ワクチン接種し、
６７日で野生ＷＨＳＶ−２（Ｇ）の脳内注射によって抗
原投与した。

第７表は、０５Ｅ１およびＡ５Ｃ株による腹膜腔内ワク
チン接種の、その後の野生４ＨＳＶ−２（Ｑ）による腹
膜腔内抗原投与に対する被検動物の抵抗性に及ぼす効果
を示す。２該を、１０，０００ＰＦυの組換型法Ｄ５Ｅ
１またはＡ５Ｇで腹膜腔内ワクチン接種し１次いで種々
の量の野生型Ｈ３Ｖ−２（Ｑを抗原投与したう 第４−は、被検マウスに於ける、本発明の６極の戊表的
組換望Ｈ３Ｖ株の免疫原性に対する感染力の関係をまと
めたものである。第４図は、６檜の組換型ならびに野生
型ＨＳＶ−１およびＨ３Ｖ９イルスｗＴ１７および１８
６の、脳内注射（１・ＣＥＲ，）による１ｔ、Ｏ５（１
のたメニ必要ＦｋＰＦＵ故を示す。第４図は、また、脳
内注射によるＨＳＶ−１（ＷＴ１７）ノ３００ｔｏ５Ｑ
の抗原投与に対する免疫化に必要な各組換型のｐＦＵ数
、ならびに１ｉ１１１１腔内注射によるＨＳＶ−１（Ｗ
Ｔ１７）の５００ＬＤ５０の抗原投与に対する免疫化に
必要な、？よｒ組換型のＰＦＵ数をも示す。第４図は、
さらＫ。

＠Ｄ４Ｅ５．０６Ｅ２、Ｄ５Ｅ１について、脳内注射に
よるＨＲＶ−２（１８６）の５００ＬＤｓ。

の抗原投与に対する免疫化に必要なＰＦＵ数をも示す。

前記実施例３および４は、腹喚腔内または脳内”または
皮下のどのルートで接種が行われても、本発明の代表的
な組換型殊によってワクチン接種された被検マウスが、
ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２Ｏ両方の高い抗原投与量に
対して免疫性であることを示している。この結果は、極
度に敏感な脳内ルートならびにｊＩＩＩ［ＰＡ腔内ルー
トで抗原投与ができるということから考えて特に顕著で
ある。

以上のことは、さらに、免疫性が、試−に用いたマウス
の寿命の約１／４である、少なくとも１２０日間保持さ
れていることを１示している。

実施例５−潜伏期 有用なワクチンの１つの特性は、中和用抗体の産生を一
発した後、ワクチンが宿主から消失する傾向である。

組換植株ｏ１Ｅ１．Ｄ４．Ｅ３、Ｄ５Ｅ１の一連の試験
を、準および＠体１異型交配マウスを用いて行い、これ
らの組換型の潜伏期を、Ｈ５Ｖ−１株にＯ５およびＨ３
Ｖ−２株１８６ならびに野生ｇＨＳＶ−Ｉ５Ｃ１６（ｓ
ｙｎ＋およびｓｙｎ）と比較した。試験は、アンドン、
ｊ、（Ａｎｄｒｅ、Ｊ、）他−、ヒトのべ疹ウイルスお
よび一４際的全体１砿（ＨｕｍａｎＨｅｒｐｅｓｖｌｒ
ｕｓａｎｄＩｎｔ＊ｒｄｌｓｃｌｐ目ｎａｒｙＰ＠ｒｓ
−ｐ＊ｃｔｌｖ＋ｅ）、米国＝ｚ−ヨーク州エルスピア
ｒＦｉ、２４１〜２４４貞にめるヒル（Ｈｉｌｌ）、Ｉ
再発＊純（疹に関与する機構（ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓＩ
ｎｖｏｌｖ＠ｄＩｎＲｅｃｕｒｒｅｎｔＨｅｒｐｅｓＳ
ｌｍｐｌｓｘ）Ｉ（この文献の記載は、参照文として本
明細・書中に含ま九るものとする）に記載されているマ
ウス耳モデル（ｍｏｕｓｅｍａｒｍｏｄｅｌ）を用いた
。

各ウイルス株について行った試験を２群に分けた。第１
％臨床的観察では、皮膚および神経節からのウイルスの
隔離および力価測定を、耳の皮膚の一次感染中に行った
。これらの試験の目的は、疾患の型、ならびに接種部位
および神経節におけるウイルスの増殖能力を決足するこ
とである。−次感染後に行った第２該の試験では、神経
節に於ける着伏感染、神経節に於ける活性感染の刺激、
Ｐ＋発性臨床疾患の誘発、中和用抗体の存在および持続
、皮膚に於ける二次感染に対する抵抗性を測定したう すべての試験に於て、にＯ３，１８６，５Ｃ１６ウイル
ス株は、マウス１匹につきｌ０ＰＦＩＪで接種したが、
組換型体は、Ｆ記に示す以外は、マウ１１匹につき１０
ＰＦＵで接ｍＬ、た。柿米は。

Ｆ記構８表〜第１７表に示す。これらの表の幾つかに関
しては、下記の説明のための参考文献（これらの参考文
献の記載は参照文として本該Ｊ細簀に含まれるものとす
る）が引用される。

１、ヒル、Ｔ、Ｊ、（Ｈｌｌｌ、Ｔ、Ｊ、）ら、ｌマウ
スに於ける単純１疹ウイルスによる急性および再発性感
染：該伏および再発疾患の研究の九へ）のモデル（Ａｃ
ｕｔｓａｎｄＲｅｃｕｒｒｅｎｔＩｎｆｅｃｔｉｏｎｗ
ｌｔｈＨａｒａｓｓＳｌｍｐｌｅｘＶｌｒｕｓＩｎｔｈ
ｅＭｏｕｓｅ：ＡＭｏｄｅｌｆｏｒＳｔｕｄｙｉｎｇＬ
ａｔ＠ｎｃｙａｎｄＲ＠ｃｕｒｒｅｎｔＤｉｓｅａｓｅ
）’ｒ、Ｊ、Ｇａｎ、、Ｖｌｒｏｌ、２８．３４１−５
５５（１９７５） ２、ヒル、Ｔ、Ｊ、（Ｈ倶１．工、」、）ら、ｌ漕法感
染中の臨床的に正常なマウスの皮膚からの重線４疹の１
４＠（１ｓｏｌａｔｌｏｎｏｆＨｅｒｐ＠ｓＳｌｍｐｌ
ｅｘｆｒｏｍｔｈ＠５ｋｌｎｏずＣ１１ｎｌｃｓｌｌｙ
ＮｏｒｍａｌＭｉｃｅ（）ｕｒｌｎｇＬａｔ＠ｎｔＩｎ
ｆｅｃｔｉｏｎ）’、Ｊ、Ｇｅｎ。

Ｖｌｒｏｌ−４７，２０５−２０７（１９８０）＆ヒル
、Ｔ、Ｊ、（Ｈｉｌｌ、Ｔ、Ｊ、）ら、ｌ皮嘴に対する
外場はマウスの単純庖疹の再発をひき起こす（丁ｒａｕ
ｍａｔｏｔｈｅ５ｋｌｎＣａｕｓｅｓＲｓｃｕｒ−ｒａ
ｎｃｅｏｆＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘＩｎｔｈｅＭｏ
ｕｓｅ）ＩＪ−Ｇｓｎ、Ｖｌｒｏｌ、２９．２ｌ−２８
（１９７８）Ｓ０１６は、上記のヒル（Ｈｌｌｌ）他の
文献に１献されている。

第８表 にＯ８８０７５２５４− １８６１０９３０１３５４２５ ０１Ｅ１１８９５５６５−− ０４Ｅ３１５２４７５５−−− Ｄ５Ｅ１１９６４２５Ｂ−− 第１０表 一次感染中に於ける皮膚および （参考文献１および２） ０１Ｅｌ皮膚５１５９／１０３／１００１５−−−→Ｄ
４Ｅ３皮膚５１５５１５１１５［１１５□→岬経節０１
５−−−−−−−−−−−−−−−−”−→０５Ｅｌ皮
膚１１５’Ｏ１５−−−−一一−−→第１１表 一次感染中に於ける皮膚中の ＨＳＶの力価 （参考文献２） ＫＯ８２，１２，２４，１−−−− １８６−１，９２，４１，４５，５１，５ｓ、ａＤＩＥ
ｌ２．２１．８１．４−−−− ［）４Ｅ３１．９２．８１．６−−−−Ｄ５Ｅ１１，５
−−一一一− 第１２表 １着伏ｗＩＡ染Ｉ中に於ける （参考文献１および２） に０５５Ｘ１０５ １８６１Ｘ１０’１７／２６ １×１０２６／８ １Ｘ１０１２／８ ｏＩＥ１０／４００／４０ ＤａＥ３０／４００１５７ Ｄ５Ｅ１０／３７０／２５ 第１３表 セロファンチーブによる皮膚の剥ｐＩ後（参考文献６） にＯ３ １８６０／３０ ＤＩＥ１０／２０ ｏ４Ｅ５０／２４ Ｄ５Ｅ１０／４０ ＳＣＬ６１１／８２ 無感染０／２ｓ 第１４表 耳ヘキシレンを塗布した後の神経節 （参考文献５） ２ に０８ １８６１／６０／６ Ｄ１Ｅ１０／１００／８ Ｄ４Ｅ３０／１００／９ ０５Ｅ１０／１９０／２０ 本ブリストール（８ｒｉｓｔｏｌ）マウスに於いて。

第１５表 ＤＩＥｌ４８８７６９４９４１ ０４Ｅ３２４０−−−−−−− Ｄ５Ｅ１７１２１４０＝一 本ｌプリストール（８ｒｌｓｔｏ＋）’マウスに於いて
。

よ１６表 Ｈ５Ｖ１／ＳＣ１６−ｓｙｎによる一次感染中に於ける
一床的似候一 ウイルス 量マウスマウΔ左エーーーーーーーー ｐｆυ／マウスのμ畝候なし炎症のみＣＮＳ戚侯死亡ｌ
Ｘ１０５１６６０３１− ＩＸ１ｏ’１６４４５６１ １Ｘ１０７１７６６５２９ 第１７表 ＨＳＶ１／５Ｃ１６−ｓｙｎによる ５ｘ、ｏ５１０６２１１０００００ ＰＦＵＤ４Ｅｉ＄１０’２０９０１０００上記実施例お
よび記４１６よは１本発明の型間（Ｈ５Ｖ−ＩＸＨＳＶ
−２）組ｍａ株が、免疫原性、無毒性、毒性への復号傾
向の欠如、免疫化後の省王中の残存がないことなどの特
性を示すことを示している。さらに、本発明の型間組換
型Ｆｉ野生型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の両方に対し
て何効である。

ヒト宿主には、好ましくは、本発明の１種以上のＳ関（
＋５ｖ−ｉｘＨＳＶ−２）生ワクチン組換盛株の溶液を
含むワクチンを、非経口ルートにより、好ましくは筋肉
内または皮下注射によって接種する。また、接種は、表
面乱切または体腔の接種によって行うこともできる。典
型的には、ヒト宿主の免疫化を達、成するには、ヒトジ
ブロイド細胞株で測定して約１０〜１０、０１１’ＯＰ
Ｆυの１回接樵で十分である。

ワクチン接種の徴候には （−）高確率の自然感染に直面した場合の免疫の欠如、
あるいは （ｂ）近い将来またはめまり遁〈ない将来に於ける免疫
抑圧性治療による免疫の欠如および働者が免疫学的にあ
やうくなる可能性： が含まれる。

野生＠ＨＳＶｌｂよびＨＳＶ−２に対してヒトを免疫化
することに加えて、本発明の種間（ＨＳＶ−ＩＸＨＳＶ
−２）組換型株は、野生型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２
で感染した患者の治療に有用であると考えられる。治療
は、上記の免疫化に用い九と同様な投与量および投与ル
ートを用いて行うことができる。

以上の詳細な説明は、理解を容易にするためにのみ示し
たものであり、本発明の範囲内での変更は当業者には明
らかであろうから−、上記−ａは不必要な制限と解され
るべきではない。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＳＡＭＨ１制限エンドヌクレアーゼで消化さ
れた本発明の代表的ＨＳＶ−ＩＸＨＳＶ−２組換型株の
ＤＮＡの電気泳動図であり、消化された野生微ウイルス
ＨＳＶ−１（にＯ３）および＋５ｖ−２（１８６）のＤ
ＮＡを参考として示しである。 第２図は、にｐｎ１制限エンドヌクレアーゼで消化され
た本発明の代表的Ｈ５Ｖ−ＩＸＨ５Ｖ−２組換型株のＤ
ＮＡの電気泳動図であり、消化された野生型ウイルスＨ
ＳＶ−１（ＫＯ８）およびＨ５Ｖ−２＜１８６）（ＤＤ
ＮＡｆ参考トシテ示シである。 第５図は、＠ＨＳＶおよび本発明の誘導組換蝋Ｈ３Ｖの
マウス−内ＬＤ５０の比較であるう＠４図は、組換７］
よＨＳＶの感染力対免疫原性の関係を示すものであり、
野生型ＨＳＶ−１および−Ｈ５Ｖ−２株を蚕考として示
しである一０ＦＩＧ、１ ＦＩＧ、２ Ｐ−ＲＰ−Ｒ ＦＩＧ、３ Ｐ−１’１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、野生型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対して有効で
   ありかつ免疫誘発量の少なくとも１種のワクチン型間（
   ｖａｃｃｉｎａｌＩｎ１ｅｒｔｙ９ｉｃ）（ＨＳＶ−１
   ｘｓｓｖ−２）組換型ウイルス株を含む生ウイルスワク
   チン。 ２、野生型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対して有効で
   ありかつ約１０〜１０，０００プラク形成単位の少なく
   とも１種のワクチン型間（ＨＳＶ−１ｘＨＳＶ−２）組
   換型ウイルス株を含む生ウイルスワクチン。。 ３、該組換型株がヒト宿主への筋肉内ま九は皮下注射用
   に適応している特許請求の範囲第１項または第２項記載
   のワクチン。 ４、野生型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対して有効で
   ありかつ免疫誘発量の少なくとも１種のワクチン型間（
   Ｈ５Ｖ−ＩＸＨＳＶ−２＞組換型ウイルス株を含む生ウ
   イルスワクチンであって、１組換型ウイルス株が、 （ａ）２種の原型ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２親ウイル
   ス株をかけ合せて組換後代を祷る工程であって、該親株
   が識別用遺伝的マーカーを有していて、該マーカーによ
   って該親株から該組換型後代を識別することができるよ
   うになっている工程と、 （ｂ）該組換型後代を固定する工程と、（Ｃ）該組換型
   後代を該親株から隔離する工程と。 （ｄ）該後代から、野生型Ｈ５Ｖ二１およびＨＳＶ−２
   に関してワクチン特性を示す株を選択する工程と を含む方法によって製造される生ウイルスワクチン・ ５、該選択が、野生型Ｈ３Ｖ−１およびＨＳＶ−２に関
   しての、無毒性、無毒性に関する安定性、免疫原性（１
   ｍｍｕｎｏｇａｎｌｃｉｔｙ）および潜伏期（ｌａｔ＠
   ｎｃソ）に関する実験的測定によって付われる特許請求
   の範囲第４項記載のワクチン。 ６野生型ＨＳＶ−１＞よび＋８Ｖ−２に対［７て有効で
   ありかつ免疫誘発量の少なくとも１Ｐよ１の７１ｆン型
   間（＋８Ｖ−ＩＸＨＳＶ−２）組換型９イルス株を含む
   生ウイルスワクチンの製造方法であって。 （ａ）２種の原型ＨＳＶ−１および＋Ｓｖ−２ｇウイル
   ス株をかけ合せて組換型後代を得る工程であって、し親
   株が識別用遺伝的マーカーを有していて、酸マーカーに
   よって該親株から該組換型後代を識別することができる
   ようになっている工程と、 （ｂ）該組換型後代を同定する工程と、（Ｃ）該組換型
   後代を該親株から隔離する工程と。 （ｄ）該後代から、野生型ＨＳＶ−１および５ｓｖ−２
   に関してワクチン特性を示す株を選択する工程と を含む方法。 野生型ＨＳＶ−１および＋８Ｖ−２に関してワクチン特
   性を示す少なくとも１種の型間（＋５Ｖ−１ｘＨ３Ｖ−
   ２）該ｌ換型ウイルス株を含む生ウイルスワクチンの免
   疫誘発量で宿主を接種する工程を含む、野生型ＨＳＶ−
   １および＋８Ｖ−２に対して宿主を免疫化する方法０８
   、野生型ＨＳＶ−１および＋５Ｖ−２に関してワクチン
   特性を示す少なくとも１橿の型間（＋８Ｖ−ＩＸＨＳＶ
   −２）組換型ウイルス株の約１０〜１０．０００７°ラ
   ク形成単位を含む化９イルスワクチンを筋肉内または皮
   下注射によりヒト宿主に接種する工程を含む、野生型Ｈ
   ＳＶ−１および＋８Ｖ−２に対してヒト宿主を免疫化す
   る方法。 ９野生型ＨＳＶ−１おｊび＋８Ｖ−２に対してヒト宿主
   を免疫化する方法であって、 （ａ）２種の原型ＨＳＶ−１およびＨ６ｖ−２ｇウイル
   ス株をかけ合せて組換型後代を得る工程であって、該親
   株が識別用遺伝的マーカーを有していて、レマーカーに
   よって該親株から該組換型後代を識別することができる
   ようになっている工程と。 翰該組換型後代を同定する工程と、 （Ｃ）該組換型後代を該親株から隔離する工程と。 （ｄ）該後代から、野生型ＨＳＶ−１および＋９Ｖ−２
   に関してワクチン特性を示す株を選択する工程と によって製造された少なくとも１ｍのワクチン型間（＋
   ５ｖ−１ｘ＋５ｖ−２）組換型ウイルス株を含む生ウイ
   ルスワクチンの免疫誘発量を宿主に接種する工程を含む
   方法。 １０、野生型ＨＳＶ−１および＋５Ｖ−２に関してワク
   チン特性を示す少なくとも１種の型間（＋５ｖ−１ｘ＋
   ５ｖ−ｚ）組換型ウイルス株の約１０〜１０．０００プ
   ラク形威単位を含む生ウイルスワクチンを筋肉内または
   皮下注射により宿主に接種する工程を含む、野生型ｍｔ
   −ｔｓｖ−１および＋８Ｖ−２に対してヒト宿主を免疫
   化する方法。 １１、野生型ＨＳＶ−１ｔ？よび＋８Ｖ−２に嘴してワ
   クチン特性を示す型間（＋８Ｖ−ＩＸＨＳＶ−２）組換
   機ウイルス株の免疫誘発量をヒト宿主に接種する工程を
   含む、野生型Ｈ５Ｖ−１および＋８Ｖ−２に対してヒト
   宿主を免疫化する方法。 １２原型１１Ｈ５Ｖ−１および＋８Ｖ−２株の間のかけ
   合せのウイルス後代から少なくとも１檜のｆｉ間（＋８
   Ｖ−ＩＸＨＳＶ−２）組換製ウイルス株であって、野生
   型ＨＳＶ−１および＋８Ｖ−２に関してワクチン特性を
   示す組構型ウイルス株を隔離する工程を含む、野生型Ｈ
   ＳＶ−１および＋９Ｖ−２に対して有効な化９イルスワ
   クチンの製造方法。 １５、該親株は担持しているが骸後代は担持していない
   識別用遺伝的マーカーによって隔離を行う。 特許請求の範囲第１２項記載の方法。 １４、型間（＋５Ｖ−ＩＸＨ５Ｖ−２）組換型ウイルス
   株である減弱化ウイルス株を含み、その減弱化を保持し
   かつ野生型Ｈ５Ｖ−１および＋５Ｖ−２に関してワクチ
   ン特性を示す、野生型Ｈ５Ｖ−１および＋８Ｖ−２，に
   対して有効な生ウイルスワクチンの製造方法であって、
   ＪＮｉ型親ＨＳＶ−１お上びＨＳＶ−２株の間のかけ合
   せのウイルス後代から該減鱒化ウイルス株を隔寵する工
   程を含む方法。 １５、該親株は担持してｈるが該後代は担持していない
   識別用遺伝的、マーカーによって該１４離を竹なう、特
   許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６ＡＳＣ（ＡＴＣＣＡＶＲ２０１９）、ＤＩＥｌ（Ａ
   ＴＣＣＡＶＲ２０２０）、Ｃ４Ｅ３（ＡＴＣＣＡＶＲ２
   ０２１）、Ｃ７Ｄ（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２２）、Ｃ４Ｅ
   ２（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２５’）、Ｃ５Ｏ（ＡＴＣＣＡ
   ＶＲ２０２４）、Ｄ５Ｅ１（ＡＴＣＣム２０２５）、Ｄ
   ＩＥｌ（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２６）と呼ばれる休からな
   る群から選ばれる少なくとも１檜の安定な、無毒性ｏｍ
   関（ＨＳＶ−ＩＸＨ５Ｖ−２）組換型ウイルス株を有効
   成分として含む生ウイルスワクチンをヒト宿主に撤権す
   る工程を宮む、毒性Ｈ５Ｖ−１およびＨ５Ｖ−２に対し
   てヒト宿主を免疫化する方法っ １７、Ａ５Ｃ（ＡＴＣＣ４ＶＲ２０１９）、Ｃ４Ｅ１（
   ＡＴＣＣＡＶＲ２０２０）、Ｃ４Ｅ３（ＡＴＣＣＡＶＲ
   ２０２１）、Ｃ７０（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２２）、Ｃ５
   Ｅ２（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２３）、Ｃ５Ｄ（ＡＴＣＣＡ
   ｖＲ２０２４）。 Ｃ５Ｅ１（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２５）、ＤＩＥｌ（ＡＴ
   ＣＣＡｖＲ２０２６）からなる群から選ばれる株の同定
   用特性を有する少なくと４１ｍの安定な、無毒性、型間
   （ＨＳＶ−ＩＸＨ５Ｖ−２）組換型株を有効成分として
   含む生ウイルスワクチンをヒト宿主に接種する工程を含
   む、毒性ＨＳＶ−１およびＩｊ３Ｖ−２に対してヒト宿
   主を免疫化する方法・ １８添付図面第１図および第２図に示されたＢａｍＨｌ
   ｂよびにｏｎ１フインガープリントを有する。 少なくとも１種の安定な、無毒性の型間（ＨＳＶ−１Ｘ
   ＨＳＶ−２）組換型株を有効成分として含む生ウイルス
   ワクチンをヒト宿主に１該種する工程を含む、毒性ＨＳ
   Ｖ−１およびＨＳＶ−２に対してヒト宿主を免疫化する
   方法・ １９、Ａ５Ｃ（ＡＴＣＣＡＶＲ２０１９）、Ｃ４Ｅ１（
   ＡＴＣＣＡＶＲ２０２０）、ｏ４Ｅｓ（ＡｖｃｃＡＶＲ
   ２０２１）、Ｃ７ＤｒＡＴＣＣ４ＶＲ２０２２）、Ｃ５
   Ｅ２（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２５Ｌｃ５ｏ（ＡＴＣＣＡＶ
   Ｒ２０２４）、Ｄ５Ｅ１（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２５）、
   ＤｌＥ１（ＡＴＣＣＡＶＲ２０２６）と呼ばれる株から
   なる群から選ばれる、少なくとも１種の安定な、無毒性
   の型間（Ｈ９ｖ、−１ｘＨＳＶ−２）組換型ウイルス株
   を有効成分として含む、毒性Ｈよ１ｌＶ−１およびＨ９
   Ｖ−２に対する生９イルスワクチン。 ２０、添付図面の第１図およびＩＩ２図に示された８Ｏ
   ｍＨ１およびにｐｎ１フインガープリントを有する。少
   なくとも１ｍの安定な、無毒性の型間（ＨＳＶ−ＩＸＨ
   ＳＶ−２）１１換型株ヲ有効成分として含む、毒性ＨＳ
   Ｖ−１およびＨＳＶ−２に対する生ウイルスワクチン。 ２、特許請求の範囲第１項または纂２項または第４項ま
   たは＠１９項管九は第２０項記載のワクチンの有効量を
   ヒト患者に投与する工程を含む。 野生型Ｈ９Ｖ−１またはＨＳＶ−２あるいは両方に感吟
   じたヒト患者の治療方法。