JPS5881782A - β−ガラクトシダ−ゼ又はその複合体の安定な保存法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はβ−ガラクトシダーゼ又はβ−がラクトシダー
ゼに抗体や抗原又は低分子のハプテンを結合修飾した複
合体の溶液の安定な保存法に関する。

従来大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼは凍結する◆に
よって失活する事が知られてお秒、一般的に溶液状態で
低温に保存されてきた。しかし近年酵素を利用し九免疫
学的な測定法が普及するに従い、β−ガラクトシダーゼ
又は該酵素と他の成分との複合体の溶液が冷蔵保存や冷
蔵輸送中に過度の冷却による凍結によって失活するとい
う事故を防止する事が重要な問題となってきた。

そこで発明者は凍結して４安定なβ−ガラクトシダーゼ
及びβ−ガラクトシダーゼ複合物溶液の保存方法を鋭意
研究し九結果、該酵素又は該酵素複合体溶液に糖類など
を添加することくよって凍結による失活を防止しりる事
を見い出し本発明を完成するに１ｊ１４つえ。

すなわち本発明の目的は、凍結しても安定な大腸菌由来
の！−ガラクトシダーゼ又は諌酵素と抗原、抗体又はハ
プテンとの複合体溶液の安定な保存方法を提供すること
である。本発明において使用される糖類は単糖、三糖及
び２多糖や又はアζ）基等で修飾されたものでも良く、
光学活性にも左右されないが実用上単糖又社二糖類が望
ましい。

又多価アルコール及びゼラチンでも効果がある。

溶液に添加する濃度は０．１〜５％（Ｗ／Ｖ）であるが
α５％以上が望ましい。

以下本発明を実施例によって更に詳細に説明するが２本
発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１．　β−ガラクトシダーゼ溶液の安定保存法（
１）β−ガラ夛トシダーゼ溶液の調製大腸菌由来のβ−
ガラクトシダーゼ液（５Ｍｇ／ｉｙｊ、−＜−リンガー
マンハイム・山之内）をα１−牛血清アルブミン及び０
．１Ｍ塩化ナトリウムを含むα０１Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液、ＰＨ７，０（緩衝液−１と略す）を用いてｓ、
　ｏ　ｏ　ｏ倍に希釈し、酵素溶液とした。この溶液に
各稲穂を１％の濃度に溶解した。又、糖を全く加えない
ものを、対照例とした。これらを凍結前試料液とした。

（２）凍結融解操作 前項で調製した各稲穂を含む溶液を一２０℃フリーザー
中にて凍結させ、−夜放置後室温にて融解させ、凍結後
試料液とした。

（３）酵素活性の測定 β−ガラクトシダーゼの基質であるＯ−二トロフェニル
−β−〇−ガラクトシド（シグマ社、　米国）を緩衝液
−１に０１％０濃度に溶解し、基質液とし友。（２）で
得られた各試料液の２０μｌを試験管に＆り、５７℃偲
温槽中にて基質液α５−と反応させ九。反応を停止させ
る為、２０分後及び４０分後にα１Ｍ炭酸ナトリウム２
ｉｌ／を加え九ものについてそれぞれ水を対照として波
長４２０１１１１における吸光Ｉｆ（ム４２０）を測定
し九。以下に示す式を用いて試料液２０ｊ／Ｔｏ九りの
酵素活性（４）結果 得られ九各試料液の酵素活性を表−■に示しえ。

表−■ 実施例２　β−ガラタトシダーゼー抗体複合体の安定保
存法 （１）β−ガラクトシダーゼ−抗体溶液の調製β−ガラ
クトシダーゼ−抗体複合体Ｑ調製は公知の方法（Ｋｍｔ
ｏ、に、　、　ＦａＫｕｌ、Ｈ，、Ｈａｍａｇａｃｈｉ
　、Ｙ。

＆　Ｉｓｋｉｋａｗａ　、Ｉ　、　、　Ｊｏｓｃｒｍａ
ｌ　ｏｆ　Ｉｍｍａｎｏｌｏｇｙ　１１６ｅ１５５４　
（１９７６））に従った。すなわちウサギ抗体ＩｇＧｉ
ｊ分（４０ダ）をα１Ｍ酢酸緩衝液＊　　ｐＨ４−５に
溶解し１キのイブシン（イーリンガーマンハイム・山之
内社）゛を用いて３７℃１６時間消化しｅ　Ｆ（ａｂ’
）１画分を得え。このＦ（ａｂ’）画分を２−メルカプ
トエチルアミンを用いて還元して８Ｈ基の遊離したｔａ
ｂ’ａｂ’得九。この−分を更に１／２量のＯ−フェニ
レンシマレイ建ド飽和溶液中に滴下し、３０℃。

５０分間反応させ、マレイζＦ基の導入され九Ｆｅｂ’
−分を得た。このフレイ２ドーＦａｂ’とβ−ガラクト
シダーゼ（１２，５ａｉ／＞を４℃にて１日反応させ、
セファローズ−６Ｂカラムに通してβ−ガラクトシダー
ゼ−抗体Ｆａｂ’画分豪画分全合体。この複合体を実施
例１−（１）項記載の緩衝液−１を用いて適当な一度に
希釈し、β−ガラクトシダーゼ−杭体複合体溶液とした
。この溶液に各稲穂を１％一度となる様に加え、溶解し
、凍結前試料とした。又−２０℃のフリーザー中にて一
夜放置し凍結させ、再び融解させ友ものを凍結後試料と
じ九。叉糖を加えない−のを対照例と、した。

（２）酵素活性の測定 実施例１−（５）項記載の方法と同様に行った。

（３）結果 得られ九各試料の酵素活性及び残存活性率（Ｘ）を表−
■に示した。

表−■ 実施例工、β−ガラクトシダーゼーサイａキクン（Ｔ４
）＊合体の安定法 （１）β−ガラクトシダーゼ−Ｔ４複合体液の調製法β
−ガラクトシダーゼ液（５ｏｇ／＋＋＋ｊ）２ｏ、ｇ＜
７をＱ、ＩＭリン酸ナトリｆ）Ａ緩衝液、　ＰＨ７，０
５００ｓ１に加え９次にジメチルホルムアミドに溶解し
九Ｔ４（５００ｘｇ／’ｍ）５０．ｓ＋ｊを加え、更に
１．５Ｘグルタルアルデヒ）＃１０声ｊを加えて室温、
２時間放置した。この後セファローズ６Ｂカラムに通し
。

緩衝液−１を用いて溶出しβ−ガラクトシダー４７４１
１１合体を得え。β−ガラクトシダーゼに結合し九テ４
は園相不溶化抗〒４抗体を用い特異的に吸着させる方法
を用いて確鑓した。この複合体を緩衝１１１Ｅ−１を用
いて適当濃度に希釈し、更に各稲穂を２％の濃ｆＫ添加
溶解し、凍結前試料とし喪。ま九−２０℃めフリーザー
中にて一夜放置し凍結させ、再び融解させたものを凍結
後試料とした。又糖を全く加えない４のを対照例とした
。

（２）　ＩＩ酵素活性測定 実施例１−　（３）項記載の方法と同様に行つ九。

（５）結果 得られ九各試料の酵素活性及び残存活性率（Ｘ）を表−
ｍＫ示した。

表−■ 以上の実施例から明らかな様に本発明は、β−ガラクト
シダーゼ及びその豪合体の希薄溶液の凍結融解による失
活をほぼ完全に抑止する事ができ。

極めて有益なものである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）β−ガラクトシダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼ
   と他物質との複合体の溶液に糖類、ゼラチン又はグリセ
   リンを加える事を特徴とするβ−ガラクトシダーゼ又は
   β−ガラクトシダーゼと他物質との複合体溶液の安定な
   保存法。
2. （２）β−ガラクトシダーゼと複合体を形成する対称物
   が抗体、抗原又はハプテンである特許請求の範囲（０項
   記載の方法