JPS5876086A - 浮遊性動物細胞の培養法 - Google Patents
浮遊性動物細胞の培養法Info
- Publication number
- JPS5876086A JPS5876086A JP17226581A JP17226581A JPS5876086A JP S5876086 A JPS5876086 A JP S5876086A JP 17226581 A JP17226581 A JP 17226581A JP 17226581 A JP17226581 A JP 17226581A JP S5876086 A JPS5876086 A JP S5876086A
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- Japan
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- culture
- cells
- partial pressure
- suspensible
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は浮遊性動物細胞の培養法に関する。
動物細胞の培養方法として浮遊培養法がある。
浮遊状態で生育する細胞としてはリンパ芽球様細胞（Ｔ
及びＢリンパ腫細胞等）、骨髄肺細胞（ＩｇＤ骨髄骨髄
脳細胞他の白血病細胞（単球様倉食細胞等）、乳癌細胞
等が良く知られている（「ガン」、山村雄−他編、共立
出版、１９７８）。
及びＢリンパ腫細胞等）、骨髄肺細胞（ＩｇＤ骨髄骨髄
脳細胞他の白血病細胞（単球様倉食細胞等）、乳癌細胞
等が良く知られている（「ガン」、山村雄−他編、共立
出版、１９７８）。
近年インターフェロン、リンフ才力イン等の生産にこれ
ら浮遊性細胞が有効であると判明し。
ら浮遊性細胞が有効であると判明し。
その大量培養について多くの検討が試みられ、回転培東
旋回培養、攪拌培養等が現在用いられている。これらの
方法において、細胞の生育ｔこ必要な酸素の供給ｔこ関
しては■密栓状態で容器内の気相、液相中の酸素を利用
する、Ｑ）綿栓等の通気性の栓を通して自然通気を行な
う、■５％炭酸ガス気流下？こ培養を行なう等の方法が
とられている。
旋回培養、攪拌培養等が現在用いられている。これらの
方法において、細胞の生育ｔこ必要な酸素の供給ｔこ関
しては■密栓状態で容器内の気相、液相中の酸素を利用
する、Ｑ）綿栓等の通気性の栓を通して自然通気を行な
う、■５％炭酸ガス気流下？こ培養を行なう等の方法が
とられている。
しかるに細胞の生育に必要な酸素濃度の検討はほとんど
なされていないのが現状である。わずかＶこ Ｃｏｏｐ
ｓ ｒ ら （Ｐ、 Ｄ、 Ｃｏｏｐｅｒ ａ
ｔ ａｌ、、 Ｎａｔｕｒｅ。
なされていないのが現状である。わずかＶこ Ｃｏｏｐ
ｓ ｒ ら （Ｐ、 Ｄ、 Ｃｏｏｐｅｒ ａ
ｔ ａｌ、、 Ｎａｔｕｒｅ。
１８２、 １５０８（１９５８））がウサギ腎細胞を用
いて酸素濃度の検討を行なっていて、気相酸素分圧０．
１４ ａｔ−から０．２２ ａｔｍまで段階的ｔこテス
トした結果、気相酸素分圧が高いほど細胞収量が高く、
細胞生育速度は０．１７〜０．１ （Ｊ ａｔｍの気相
酸素分圧で高いと報告している。
いて酸素濃度の検討を行なっていて、気相酸素分圧０．
１４ ａｔ−から０．２２ ａｔｍまで段階的ｔこテス
トした結果、気相酸素分圧が高いほど細胞収量が高く、
細胞生育速度は０．１７〜０．１ （Ｊ ａｔｍの気相
酸素分圧で高いと報告している。
我々は、細胞の効率よい培養をなしとげるためには、実
際ｔこ細胞が接している液相中の酸素分圧と細胞の生育
の関係を明らかにする必要があると考え、検討を重ねた
ところ、従来の知見とは全く異なるところの培養初期１
こ非常ｅこ低い溶存酸素分圧を保った場合に良好な細胞
生育が得られることを見出した。即ち、ヒト膀帯血すン
パ球由来リンパ芽球様細胞を、通常最も広く用いられて
いる密栓培養系で培養し、細胞生育と溶存酸素分圧の関
係を調べたところ、細胞の対数増殖期後期になり溶存酸
素分圧０，１ ａｔｍ程度に減少した時点で急激な溶存
酸素分圧の低下が生じ、−気１こ溶存酸素分圧０．０１
ａｔｍ以下になるとともｔこ数時間後ｔこ細胞増殖が
停止することが判明した。一方、通気条件下の培養１こ
おいては通気量により異なるが全培養経過を通じて溶存
酸素分圧は０．１ないし０，２ ａｔｍを保っているこ
とが判明した。以上の結果から人為的１こ溶存酸素分圧
を調節した場合、細胞の生育がどのような影響を受ける
について検討したところ上記密閉培養系や通気培養系で
は得られない０．０５ ａｔｍ以下の溶存酸素分圧下で
最も細胞生育が良いという事実を見出した。又細胞生育
に必要な溶存酸素濃度の最少限界点は０，０１ ａｔｍ
であることも見出した。
際ｔこ細胞が接している液相中の酸素分圧と細胞の生育
の関係を明らかにする必要があると考え、検討を重ねた
ところ、従来の知見とは全く異なるところの培養初期１
こ非常ｅこ低い溶存酸素分圧を保った場合に良好な細胞
生育が得られることを見出した。即ち、ヒト膀帯血すン
パ球由来リンパ芽球様細胞を、通常最も広く用いられて
いる密栓培養系で培養し、細胞生育と溶存酸素分圧の関
係を調べたところ、細胞の対数増殖期後期になり溶存酸
素分圧０，１ ａｔｍ程度に減少した時点で急激な溶存
酸素分圧の低下が生じ、−気１こ溶存酸素分圧０．０１
ａｔｍ以下になるとともｔこ数時間後ｔこ細胞増殖が
停止することが判明した。一方、通気条件下の培養１こ
おいては通気量により異なるが全培養経過を通じて溶存
酸素分圧は０．１ないし０，２ ａｔｍを保っているこ
とが判明した。以上の結果から人為的１こ溶存酸素分圧
を調節した場合、細胞の生育がどのような影響を受ける
について検討したところ上記密閉培養系や通気培養系で
は得られない０．０５ ａｔｍ以下の溶存酸素分圧下で
最も細胞生育が良いという事実を見出した。又細胞生育
に必要な溶存酸素濃度の最少限界点は０，０１ ａｔｍ
であることも見出した。
本発明の方法で培養できる浮遊性動物細胞を例示すれば
以下のものがある。ウィルストランスフオームもしくは
非トランスフオームＴｃｅｌｌ型 リンパ芽球細胞及
びＢ ｃｅｌｌ型リンパ芽球様細胞ならびにその他のリ
ンパ芽球様細胞株（「ガン」、山村雄−他編、共立出版
、１９７８）、赤芽球系細胞（「組織培養」、中井準之
助他編、朝食書店、１９７６）等。
以下のものがある。ウィルストランスフオームもしくは
非トランスフオームＴｃｅｌｌ型 リンパ芽球細胞及
びＢ ｃｅｌｌ型リンパ芽球様細胞ならびにその他のリ
ンパ芽球様細胞株（「ガン」、山村雄−他編、共立出版
、１９７８）、赤芽球系細胞（「組織培養」、中井準之
助他編、朝食書店、１９７６）等。
溶存酸素分圧の測定は、スビ・ナーフラ之溶存酸素電極
（ＴｙｐｅＮｌ 石川製作新製）をセットすることに
より測定したが、他のどのような方法も使用できる。
（ＴｙｐｅＮｌ 石川製作新製）をセットすることに
より測定したが、他のどのような方法も使用できる。
溶存酸素分圧を調節するには、どのような方法でも良い
が、最も簡便な方法としでは、培養槽の攪拌数、培養槽
の内圧、空気等の培養槽へ導入する気体の酸素分圧のい
ずれか１又は２以上を変化せしめる方法がある。
が、最も簡便な方法としでは、培養槽の攪拌数、培養槽
の内圧、空気等の培養槽へ導入する気体の酸素分圧のい
ずれか１又は２以上を変化せしめる方法がある。
浮遊性動物細胞の増殖は、対数増殖形式を示すが、本発
明における対数増殖の中期とは生細胞数が培養開始時点
の約２〜３倍に増加した時期ない浮遊性動物細胞を培養
する培地は通常の培地でよい。例えば、Ｅ−ＭＥＭ （
Ｅａｇｌｅｓ ｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍ
ｅｄｉｕｍ ）＋ Ｄ−ＭＥＭ （Ｄｕｌｂｅｅｅ。
明における対数増殖の中期とは生細胞数が培養開始時点
の約２〜３倍に増加した時期ない浮遊性動物細胞を培養
する培地は通常の培地でよい。例えば、Ｅ−ＭＥＭ （
Ｅａｇｌｅｓ ｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍ
ｅｄｉｕｍ ）＋ Ｄ−ＭＥＭ （Ｄｕｌｂｅｅｅ。
ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅｓ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅ
ｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ）。
ｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ）。
ＲＰＭ Ｉ １６４０ （Ｒｏｓｗｅｌｌ −Ｐａｒｋ
ＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ １６４０
）、ＲＰＭ１１６４０を改変し無血清状態で細胞生育を
可能にしたＲＴＴＣ５５−９培地等である。
ＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ １６４０
）、ＲＰＭ１１６４０を改変し無血清状態で細胞生育を
可能にしたＲＴＴＣ５５−９培地等である。
浮遊性動物細胞の培養方法もまた、通常の方法でよい。
即ち、培養試験管を垂直から約５°の角度に傾けて設置
された円板に差し込み恒温状態で回転させる回転培養法
、一定半径の水平運動を行なう板上に培養フラスコをセ
ットし恒温状態で旋回させる旋回培養法、及び培養槽内
ｔこ攪拌子を入れて培養液を攪拌しながら培養する攪拌
培養法（スピンナー培養法）等がある。
された円板に差し込み恒温状態で回転させる回転培養法
、一定半径の水平運動を行なう板上に培養フラスコをセ
ットし恒温状態で旋回させる旋回培養法、及び培養槽内
ｔこ攪拌子を入れて培養液を攪拌しながら培養する攪拌
培養法（スピンナー培養法）等がある。
実施例１および２に記載したＲＩＴＣ５５−９培地は、
組織培養の分野で周知のものであり、組織培養学会 昭
和５５年度大会 報告要旨 ４頁に報告されている。
組織培養の分野で周知のものであり、組織培養学会 昭
和５５年度大会 報告要旨 ４頁に報告されている。
実施例！
ヒ＋屓帯血すンパ球由来リンパ芽球細胞を、ＲＩＴＣ５
５−９培地７００ｗ１ｌケこ細胞４〜５ Ｘ １０’個
／ ｍｅになる様にけん濁した。これを１０００ ｖｒ
ｌ容のガラス製スピンナーボトル（ＧｒＢＣＯ社製）で
攬袢速度１５０ ｒｐｍで培養を行なった。この時、ス
ピンナーボトルの上面を５ｆｂ炭酸ガスを含む混合ガス
を流すこと１こよりｐ）Ｉ調節を行なった。溶存酸素分
圧（Ｄｏ、 ）はあらかじめスピンナーボトルに取りつ
けた溶存酸素電極で測定し、溶存酸素分圧の調節は、培
養液上面を流す混合ガスの流量、並びにその組成を変化
させることにより行なった。
５−９培地７００ｗ１ｌケこ細胞４〜５ Ｘ １０’個
／ ｍｅになる様にけん濁した。これを１０００ ｖｒ
ｌ容のガラス製スピンナーボトル（ＧｒＢＣＯ社製）で
攬袢速度１５０ ｒｐｍで培養を行なった。この時、ス
ピンナーボトルの上面を５ｆｂ炭酸ガスを含む混合ガス
を流すこと１こよりｐ）Ｉ調節を行なった。溶存酸素分
圧（Ｄｏ、 ）はあらかじめスピンナーボトルに取りつ
けた溶存酸素電極で測定し、溶存酸素分圧の調節は、培
養液上面を流す混合ガスの流量、並びにその組成を変化
させることにより行なった。
溶存酸素分圧は対数増殖期後期
ａｔｍ、 ０．０１から０．０５ ａｔｍ、 ０．０
５から０．１０ａｔｍ又は０．１から０．１ ａｔｍに
調節し、それ以後は０．０１ ａｔｍ以下にならないよ
うｔこ調節した。その結果を第１図に示す。なお、図中
矢印の時点を対数増殖中期と設定した。
５から０．１０ａｔｍ又は０．１から０．１ ａｔｍに
調節し、それ以後は０．０１ ａｔｍ以下にならないよ
うｔこ調節した。その結果を第１図に示す。なお、図中
矢印の時点を対数増殖中期と設定した。
実施例２
実施例１ｔこ示す方法ｔこおいて対数増殖中期迄の溶存
酸素分圧を０．Ｏｌから０．０５１こ調節し、スピンナ
ーボトル培養を行なった。それ以後は第１表？こ示すよ
うに溶存酸素分圧を調節した。培養後生細胞数を測定し
た。
酸素分圧を０．Ｏｌから０．０５１こ調節し、スピンナ
ーボトル培養を行なった。それ以後は第１表？こ示すよ
うに溶存酸素分圧を調節した。培養後生細胞数を測定し
た。
第 １ 表
細胞数が多いものはそれに比例して細胞の生産物である
インターフェロンも多くなっている。
インターフェロンも多くなっている。
第１図は細胞増殖ｔこ及ぼす培養初期溶存酸素分圧の影
響を示す。 △−△；溶存酸素分圧 ０−０．０１０−〇ＩＯ，
０１〜０．０５ ・−・； ｏ、ｏ ｓ〜０．１０Ｘ −
Ｘ ； ０．１０−０．２０特許出願人
味の素株式会社
響を示す。 △−△；溶存酸素分圧 ０−０．０１０−〇ＩＯ，
０１〜０．０５ ・−・； ｏ、ｏ ｓ〜０．１０Ｘ −
Ｘ ； ０．１０−０．２０特許出願人
味の素株式会社
Claims (1)
- 浮遊性動物細胞の生育が対数増殖の中期に達するまで培
養液中の溶存酸素分圧を０．０１ ａｔｍから０．０５
’ａｔｍの範囲に、それ以降は０．０１ａｔｍ以下會こ
ならないようにして酸素を供給して浮遊性動物細胞を培
養することを特徴とする浮遊性動物細胞の培養法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17226581A JPS5876086A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 浮遊性動物細胞の培養法 |
| EP82109939A EP0078061B1 (en) | 1981-10-28 | 1982-10-27 | Method for culturing non-adhering mammalian cells |
| DE8282109939T DE3275433D1 (en) | 1981-10-28 | 1982-10-27 | Method for culturing non-adhering mammalian cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17226581A JPS5876086A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 浮遊性動物細胞の培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5876086A true JPS5876086A (ja) | 1983-05-09 |
| JPH0120868B2 JPH0120868B2 (ja) | 1989-04-18 |
Family
ID=15938687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17226581A Granted JPS5876086A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 浮遊性動物細胞の培養法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0078061B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5876086A (ja) |
| DE (1) | DE3275433D1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5550050A (en) * | 1994-04-15 | 1996-08-27 | Cytotherapeutics, Inc. | Method for implanting encapsulated cells in a host |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3997396A (en) * | 1973-07-02 | 1976-12-14 | Monsanto Company | Method for the in vitro propagation and maintenance of cells |
-
1981
- 1981-10-28 JP JP17226581A patent/JPS5876086A/ja active Granted
-
1982
- 1982-10-27 EP EP82109939A patent/EP0078061B1/en not_active Expired
- 1982-10-27 DE DE8282109939T patent/DE3275433D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0078061B1 (en) | 1987-02-11 |
| EP0078061A3 (en) | 1984-02-22 |
| JPH0120868B2 (ja) | 1989-04-18 |
| DE3275433D1 (en) | 1987-03-19 |
| EP0078061A2 (en) | 1983-05-04 |
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