JPS58172549A - 血清学的に選定された細胞個体群の計数方法 - Google Patents
血清学的に選定された細胞個体群の計数方法Info
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- JPS58172549A JPS58172549A JP58043284A JP4328483A JPS58172549A JP S58172549 A JPS58172549 A JP S58172549A JP 58043284 A JP58043284 A JP 58043284A JP 4328483 A JP4328483 A JP 4328483A JP S58172549 A JPS58172549 A JP S58172549A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、不均質な個体群（ｐｏｐｓｌａｔｉｏｎ）か
ら特に選択され九個体群を含んでなる細胞の数を血清学
的反応によって計数する方法に関する。
ら特に選択され九個体群を含んでなる細胞の数を血清学
的反応によって計数する方法に関する。
多くの臨床や研究活動においては、不均質な個体群から
特定の細胞種を分離し且つ計数することが必要である。
特定の細胞種を分離し且つ計数することが必要である。
典型的には、細胞は特異的な抗原−抗体反応を利用する
血清学的タイプの反応を用いて選別できることが見出さ
れた。理想的には、単離すべき細胞にその表面圧、属目
の細胞タイプと共通でない抗原を有するであろう。これ
らの抗原は次いでこれを特異的に反応することのできる
抗体を中量することが良く知られ念技術によって使用さ
れる。抗体は普通固体基質例えばベトＩＪ皿の表面或い
はガラスピーズ又は他の微小球の表面に結合され、そし
て不均質な一胞固体群が血清学 。
血清学的タイプの反応を用いて選別できることが見出さ
れた。理想的には、単離すべき細胞にその表面圧、属目
の細胞タイプと共通でない抗原を有するであろう。これ
らの抗原は次いでこれを特異的に反応することのできる
抗体を中量することが良く知られ念技術によって使用さ
れる。抗体は普通固体基質例えばベトＩＪ皿の表面或い
はガラスピーズ又は他の微小球の表面に結合され、そし
て不均質な一胞固体群が血清学 。
・・′：、１：［
的反応の刺激に適当な条件下にこれと接触せしめられる
。これによって所望の細胞は固体表面に結合し、残りの
細胞は典型的な洗浄工程で除去されうる。細胞が平らな
表面に結合している場合、それは標準的な顕微鏡によっ
て数えることができるが、そのような作業は退屈であり
、従って誤差を引きおこし易い。更に、この種の計数法
はしばしば再現性ある結果を与えにくいことが示されて
いる。
。これによって所望の細胞は固体表面に結合し、残りの
細胞は典型的な洗浄工程で除去されうる。細胞が平らな
表面に結合している場合、それは標準的な顕微鏡によっ
て数えることができるが、そのような作業は退屈であり
、従って誤差を引きおこし易い。更に、この種の計数法
はしばしば再現性ある結果を与えにくいことが示されて
いる。
人手ＶＣよる計数法は、スキャンユングする光線が表面
に結合した細胞を照射するときに出す散乱光、螢光、吸
光などによる光ノタルスを検知することＶこよって自動
化することができる。しかし、そのようなスキャンユン
グ装置、即ち所楕フライイング・スポット・スキャンナ
ー（ｆｌｙｉｎｇ ５ｐｏｔａＣαｎｎａｒ Ｉはかな
り複雑で費用がかかる。例見ばＴｕｅｋｍｒＫよる米国
特許第３７１５，６０１号は、そのようなフライイイグ
・スポット・スキャンナーの使用法と必要とされる複雑
なシグナル処理法を記述している。
に結合した細胞を照射するときに出す散乱光、螢光、吸
光などによる光ノタルスを検知することＶこよって自動
化することができる。しかし、そのようなスキャンユン
グ装置、即ち所楕フライイング・スポット・スキャンナ
ー（ｆｌｙｉｎｇ ５ｐｏｔａＣαｎｎａｒ Ｉはかな
り複雑で費用がかかる。例見ばＴｕｅｋｍｒＫよる米国
特許第３７１５，６０１号は、そのようなフライイイグ
・スポット・スキャンナーの使用法と必要とされる複雑
なシグナル処理法を記述している。
本発明の目的は、７ライインダ・スポット・スキャンナ
ーのような費用のかかる複雑な装着に依存しなン自勧化
された技術を用いることによって生理学的に特異的な細
胞を計数する方法を提供することである。
ーのような費用のかかる複雑な装着に依存しなン自勧化
された技術を用いることによって生理学的に特異的な細
胞を計数する方法を提供することである。
細胞タイプを区別する勢力において、螢光着色技術は自
動化されたスポット・スキャンナーと組合せて使用され
てきた。例えばＳｅｈｏＬｍｆｉａｌｄによる米国特許
第４０９４７４５号は、フライイング・スポット・スキ
ャンナー又は手動式顕微−計数技術のいずれかを適用す
るのに適当な方法を記述している。５ｃｈｏｌａｆｉａ
ｌｄＦｉ食品の製造に使用される原料又は食品中の微生
物不純物の量を評価するための方法を開示している。こ
の方法は、微生物を燐酸塩の水溶液で処理し、この処理
した微生物を螢光染料と反応させることを必要、とする
。
動化されたスポット・スキャンナーと組合せて使用され
てきた。例えばＳｅｈｏＬｍｆｉａｌｄによる米国特許
第４０９４７４５号は、フライイング・スポット・スキ
ャンナー又は手動式顕微−計数技術のいずれかを適用す
るのに適当な方法を記述している。５ｃｈｏｌａｆｉａ
ｌｄＦｉ食品の製造に使用される原料又は食品中の微生
物不純物の量を評価するための方法を開示している。こ
の方法は、微生物を燐酸塩の水溶液で処理し、この処理
した微生物を螢光染料と反応させることを必要、とする
。
見かけ上、染料は中間の燐酸塩の結合を通して微生物と
結合する。微生物の計数は、試料の既装置を担体プレー
トの既知の面積に割当て、次いで微生物の数を決定する
ための標準的なコロニー計数技術を用いることによって
達成される。生／死の割合の決定は螢光波長における相
違に基づいて行なうことができる。しかしながら、
Ｓｃｈｏｌｇｆｉｍｌｄの方法は液体媒体懸濁液に依存
しないで或いは燐酸イオンで処理せずに特定の細胞個体
群を計数する方法を記述していない。
結合する。微生物の計数は、試料の既装置を担体プレー
トの既知の面積に割当て、次いで微生物の数を決定する
ための標準的なコロニー計数技術を用いることによって
達成される。生／死の割合の決定は螢光波長における相
違に基づいて行なうことができる。しかしながら、
Ｓｃｈｏｌｇｆｉｍｌｄの方法は液体媒体懸濁液に依存
しないで或いは燐酸イオンで処理せずに特定の細胞個体
群を計数する方法を記述していない。
本発明の目的は、不均質な試料内に見出される特定の細
胞個体群を燐酸塩での処理に依存しないで計数するため
に使用しつる自動化された方法を提供することである。
胞個体群を燐酸塩での処理に依存しないで計数するため
に使用しつる自動化された方法を提供することである。
細胞又は他の粒子を生理学的反応によって固体基質に結
合させるｒｃ ｈ 、一般ＶＣ粒子の検知の次めの検知
体を、再び生理学的反応によって引き続いて結合させる
ことが必要でめった。例えばＧｉａａｖｍｒＫよる米国
特許第４０１１，３ｏｇ４＋け、検出すべき粒子の存在
を決定する念めの間接的な標識法の利用を教示している
。特に、抗体のような免疫学的に反応する生物学的粒子
ｒｉ特別な層・９ターンで基質の表面上に吸着される。
合させるｒｃ ｈ 、一般ＶＣ粒子の検知の次めの検知
体を、再び生理学的反応によって引き続いて結合させる
ことが必要でめった。例えばＧｉａａｖｍｒＫよる米国
特許第４０１１，３ｏｇ４＋け、検出すべき粒子の存在
を決定する念めの間接的な標識法の利用を教示している
。特に、抗体のような免疫学的に反応する生物学的粒子
ｒｉ特別な層・９ターンで基質の表面上に吸着される。
次いでこの被債された基質を試料溶液にさらし、続いて
検出すべき粒子に特異的な非吸着性の標識し急抗体にさ
らす、このＧｉａａｖｅデの方法は特定の粒子を吸着さ
せ且りＷＪ＃＆するための通常のサンドウィッチ型の技
術に関係する。ノリーン基質表面は、特別なノ９ターン
に感じる適当な装置を用いて検知することによってタッ
グ（ｔαｇ）父は標繊物の存在に関して監視することが
できる。即ち、ＧＣα−！＃ｒは選択された粒子の存在
又は不存在を決定する方法を教示しているが、粒子のｉ
教法を提供していない。
検出すべき粒子に特異的な非吸着性の標識し急抗体にさ
らす、このＧｉａａｖｅデの方法は特定の粒子を吸着さ
せ且りＷＪ＃＆するための通常のサンドウィッチ型の技
術に関係する。ノリーン基質表面は、特別なノ９ターン
に感じる適当な装置を用いて検知することによってタッ
グ（ｔαｇ）父は標繊物の存在に関して監視することが
できる。即ち、ＧＣα−！＃ｒは選択された粒子の存在
又は不存在を決定する方法を教示しているが、粒子のｉ
教法を提供していない。
重合体粒子を固体基質として用いる方法は、Ｍｏｎｔｋ
ｏｎｙらの米国特許第４２５４ＬＩ９８４に記述されて
いる。この方法は、抗原を重合体粒子に結合した特定の
抗体と反応させ、続いて結合した粒子を抗原に特異的な
標識し念抗体と反応させてサンドウィッチ型反応複合体
を形成させることに裏って抗原の存在を決定するための
技術を教示している。粒子ｒｉ物場的に溶液から分離さ
れ、直接的な分光学的方法によって分析することができ
る。
ｏｎｙらの米国特許第４２５４ＬＩ９８４に記述されて
いる。この方法は、抗原を重合体粒子に結合した特定の
抗体と反応させ、続いて結合した粒子を抗原に特異的な
標識し念抗体と反応させてサンドウィッチ型反応複合体
を形成させることに裏って抗原の存在を決定するための
技術を教示している。粒子ｒｉ物場的に溶液から分離さ
れ、直接的な分光学的方法によって分析することができ
る。
重合体粒子径の選択は実質的に均一なＭ濁液の生成のた
めに明らかに重要である。そのような技術は未知の免疫
反応物の濃度の決定法を提供するが、特定な細胞個体群
を計数しうる方法を示していない。
めに明らかに重要である。そのような技術は未知の免疫
反応物の濃度の決定法を提供するが、特定な細胞個体群
を計数しうる方法を示していない。
本発明の目的に、費用のかかるフライイング・し。
スポット・スキャンナー型の自動化され念装蓋或いはサ
ンドウィッチ型の免疫評価（ｊｍｒ＋ｕ％ｎｏα８１α
Ｙ）技術に依存しないで上述の欠点を克服することでめ
る。
ンドウィッチ型の免疫評価（ｊｍｒ＋ｕ％ｎｏα８１α
Ｙ）技術に依存しないで上述の欠点を克服することでめ
る。
細胞タイプを区別する他の技術は、Ａｄａｍｓらの米国
特許第３６８４，３７７号に記述されている螢光着色し
ｓｔａｉｎｉｎｇ ）技術に依存したものである。特に
Ａ ｄ ａ ｍ ａらの参考文献は、水性試料中の白血
球の異なるタイプを、７−ジータイブの照射に対する螢
光応答の差に基づいて職別するための接着色物としてア
クリジン・オレンジを用いることを教示している。しか
しながら教示されている技術及び方法は基質に結合して
いないＩｌ！！濁Ｊｌｌ砲に限定され、結果として流動
式血球計数装置に特に適当である。事実アクリシン・オ
レンジは、薬剤又は癌で−４された変化の結果としての
細胞変化を評価するための手段としてＤＮＡ及びＲＮＡ
を監視するのに成功裏に使用することができる。
特許第３６８４，３７７号に記述されている螢光着色し
ｓｔａｉｎｉｎｇ ）技術に依存したものである。特に
Ａ ｄ ａ ｍ ａらの参考文献は、水性試料中の白血
球の異なるタイプを、７−ジータイブの照射に対する螢
光応答の差に基づいて職別するための接着色物としてア
クリジン・オレンジを用いることを教示している。しか
しながら教示されている技術及び方法は基質に結合して
いないＩｌ！！濁Ｊｌｌ砲に限定され、結果として流動
式血球計数装置に特に適当である。事実アクリシン・オ
レンジは、薬剤又は癌で−４された変化の結果としての
細胞変化を評価するための手段としてＤＮＡ及びＲＮＡ
を監視するのに成功裏に使用することができる。
（ＭｍｌａｒｎｅｄｌＭ、Ｒ，、Ｄａｒｇｙｎｋｉａｗ
ｉｅｔ、 Ｚ、。
ｉｅｔ、 Ｚ、。
Ｔｒａｇａｎｏａ、 Ｆ、、ａｎｄ ５ｈａｒｐｌ
ａａａ、 Ｔ、、ＣｙｔｏｌｏｇｙＡｕｔｏｍａｔｉ
ｏｎ ｂｙ Ｆｌｏｗ （４ｔＯＷＬａｔｒｙ、 Ｃａ
ｒｅｅｒＲｍａａａｒａｈ ３７．２８０８〜２８１２
．１９７７）。
ａａａ、 Ｔ、、ＣｙｔｏｌｏｇｙＡｕｔｏｍａｔｉ
ｏｎ ｂｙ Ｆｌｏｗ （４ｔＯＷＬａｔｒｙ、 Ｃａ
ｒｅｅｒＲｍａａａｒａｈ ３７．２８０８〜２８１２
．１９７７）。
アク＋７ ｐン・オレンＶ及び他の染料による細胞のＤ
ＮＡ着色は、Ｆｌｏｗ ＣｙｔｏｒＭｔｒｙ ａｎｄ
Ｓｏｒｔｉｎｇ（Ｗｉｌａｙ ＆ Ｓａｎｇ、 Ｉｎ
ｃ、、 １１１７９ ）、特に第１４章のＨ，Ａ、 Ｃ
ｒｉａａｍａｎらのＴａｃｈｎｉｑｓｍａ ｆｏｒＱｓ
ａｎｔｉｔａｔｉｖｇ Ｓｔａｉｎｉｎｇ ６／ Ｃａ
１ｌｓｌａｒ ＤＮＡｆｏｒ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｎ＋
ａｔｒｉｅ Ａｎａｌｌａｉａ、及び第１＠章のＺ、
Ｄａｒｚｙｎｋｉａｗｉｃｚ Ｑ：） Ａｍｍデミ ｉ
ｎｎＯｒａｎｇｅ ａｓ ａ Ｍｏｌｍａｕｌａｒ Ｐ
ｒｏｂｅ ｉｎ ５ｔｓｄｉａａｏｆＮ％ｃｌａｉ６Ａ
ｅｉｄａに記述されている。しかしながら、これらの報
告されている着色技術は固体基質上に吸着された不均質
な個体群中の特定な細胞タイプを計数する助けとならな
い。
ＮＡ着色は、Ｆｌｏｗ ＣｙｔｏｒＭｔｒｙ ａｎｄ
Ｓｏｒｔｉｎｇ（Ｗｉｌａｙ ＆ Ｓａｎｇ、 Ｉｎ
ｃ、、 １１１７９ ）、特に第１４章のＨ，Ａ、 Ｃ
ｒｉａａｍａｎらのＴａｃｈｎｉｑｓｍａ ｆｏｒＱｓ
ａｎｔｉｔａｔｉｖｇ Ｓｔａｉｎｉｎｇ ６／ Ｃａ
１ｌｓｌａｒ ＤＮＡｆｏｒ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｎ＋
ａｔｒｉｅ Ａｎａｌｌａｉａ、及び第１＠章のＺ、
Ｄａｒｚｙｎｋｉａｗｉｃｚ Ｑ：） Ａｍｍデミ ｉ
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ｒｏｂｅ ｉｎ ５ｔｓｄｉａａｏｆＮ％ｃｌａｉ６Ａ
ｅｉｄａに記述されている。しかしながら、これらの報
告されている着色技術は固体基質上に吸着された不均質
な個体群中の特定な細胞タイプを計数する助けとならな
い。
本発明の目的は、通常の技術に付随する欠点を克服し、
血清学的に選定された細胞個体群を計数するための方法
を提供することである。本発明の他の目的は、比較的費
用がかかる且つ複雑なフライイング・スポット・スキャ
ンナー型の技術に依存しない自動化された製電を用いる
方法を提供することである。
血清学的に選定された細胞個体群を計数するための方法
を提供することである。本発明の他の目的は、比較的費
用がかかる且つ複雑なフライイング・スポット・スキャ
ンナー型の技術に依存しない自動化された製電を用いる
方法を提供することである。
本発明の目的及び理論によれば、細胞中の核酸がフルオ
ロクローム（ｆＬｕｏｒｏａｋｒｏｍｍ ）で特異的に
着色でき、そして照射し九時に得られる全螢光の測定値
が細胞内に存在する核酸、特にデオキシリゲース核酸（
ＤＮＡ）の量に比例するという理論に基づいて、血清学
的に選定された細胞個体群を計数する念めの方法が提供
される。ＤＮＡは典型的には検査すべき細胞個体群の殆
んどを含む多くの非複写細胞（ｎｏｎ −ｒｍｐｌｉｅ
ａｔｉｎｇ ｃａｌｌ ）において有利なことに一定で
あるから、ＤＮＡのＩｔけ細胞の数に比例する。ｉれ故
に全螢光の簡単な測定値は、適当に補正すると、着色さ
れる細胞と関係づけることができる。核酸に対して特異
的な色素（ａｔａｉ鶏）は典型的には細胞タイ７６ＶＣ
対して特異的でないから、所望の細胞に血清学的技術に
従って同定され、選別される。即ち細胞に特異的な抗体
を固体基質上に吸着させ、これに細胞を結合させ、その
抗体に一特異的でない他の細胞を排除する。それ故に、
適当に補正すれば続く適当な螢光染料での着色ζ照射及
び測定により、血清学的に特定し九細胞の数を計算する
ことが可能となろう。
ロクローム（ｆＬｕｏｒｏａｋｒｏｍｍ ）で特異的に
着色でき、そして照射し九時に得られる全螢光の測定値
が細胞内に存在する核酸、特にデオキシリゲース核酸（
ＤＮＡ）の量に比例するという理論に基づいて、血清学
的に選定された細胞個体群を計数する念めの方法が提供
される。ＤＮＡは典型的には検査すべき細胞個体群の殆
んどを含む多くの非複写細胞（ｎｏｎ −ｒｍｐｌｉｅ
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あるから、ＤＮＡのＩｔけ細胞の数に比例する。ｉれ故
に全螢光の簡単な測定値は、適当に補正すると、着色さ
れる細胞と関係づけることができる。核酸に対して特異
的な色素（ａｔａｉ鶏）は典型的には細胞タイ７６ＶＣ
対して特異的でないから、所望の細胞に血清学的技術に
従って同定され、選別される。即ち細胞に特異的な抗体
を固体基質上に吸着させ、これに細胞を結合させ、その
抗体に一特異的でない他の細胞を排除する。それ故に、
適当に補正すれば続く適当な螢光染料での着色ζ照射及
び測定により、血清学的に特定し九細胞の数を計算する
ことが可能となろう。
本発明は、細胞内の核酸をフルオロクロームで着色しう
ろことに一部依存している。好ましくはそのような核酸
色素は、細胞基準において、典型的にけＲＮＡ （リゲ
ース核＃）よりも一定の濃度で細胞上に見出されるＤＮ
Ａに対して特異的である。結果として、細胞ＤＮＡを有
利に見金に着色するためＶＣアクリソン・オレンジのよ
うな染料を非平衡状態で用いることができる。
ろことに一部依存している。好ましくはそのような核酸
色素は、細胞基準において、典型的にけＲＮＡ （リゲ
ース核＃）よりも一定の濃度で細胞上に見出されるＤＮ
Ａに対して特異的である。結果として、細胞ＤＮＡを有
利に見金に着色するためＶＣアクリソン・オレンジのよ
うな染料を非平衡状態で用いることができる。
しばしば−アクリジン・オレンジなどの１うな染料の使
用は、さもなければ不合理な高いノイズ／シグナル比の
もとになりうる／４ツタグランドの螢光を排除するため
に洗浄工程を必要とする。そのような問題は、ＤＮＡに
結合した時ＶＣ九は螢光を出すＰｏｌｙａｃｉｇｎｃｇ
ａ社（Ｗａｒｒｉｓｇｔｏｖｓ。
用は、さもなければ不合理な高いノイズ／シグナル比の
もとになりうる／４ツタグランドの螢光を排除するため
に洗浄工程を必要とする。そのような問題は、ＤＮＡに
結合した時ＶＣ九は螢光を出すＰｏｌｙａｃｉｇｎｃｇ
ａ社（Ｗａｒｒｉｓｇｔｏｖｓ。
Ｐ＃％％ａｙｌｖαｎ（α）から入手しうる螢光染料、
例えば４’−６−ゾアミンノー２−フィルインドール（
ＤＡＰＩ）を用いることによって好適に回避することか
できる。即ち無関係な洗浄工程に依存する問題は有利に
回避でき、高いシグナル／ノイズ比、従って高い精度が
得られる。核酸に特異的なフルオロクロームで着色した
細胞の照射及び得られる螢光の検知は、ＤＮＡの量に比
例する光強度シグナルを与える。ＤＮＡが多くの非複写
細胞Ｖこおいてかなり一定であるという観察に基づいて
、ＤＮＡの量が普通には細胞の数に比例するということ
が推定される。即ち螢光の量は存在する細胞数に直接関
係する。
例えば４’−６−ゾアミンノー２−フィルインドール（
ＤＡＰＩ）を用いることによって好適に回避することか
できる。即ち無関係な洗浄工程に依存する問題は有利に
回避でき、高いシグナル／ノイズ比、従って高い精度が
得られる。核酸に特異的なフルオロクロームで着色した
細胞の照射及び得られる螢光の検知は、ＤＮＡの量に比
例する光強度シグナルを与える。ＤＮＡが多くの非複写
細胞Ｖこおいてかなり一定であるという観察に基づいて
、ＤＮＡの量が普通には細胞の数に比例するということ
が推定される。即ち螢光の量は存在する細胞数に直接関
係する。
実施−］
全血中に循環する脚線分化リン・Ｉ細胞（ｔｈｙｍ％＃
ｄｉｆｆｅｖａｎｔ １ａｔａｄ ｌｙｍｐルｏｅｙｔ
ａ’ｓ ）又はＴ細胞ノ数は、いくつかのタイプの病気
に対する診断基準としてしげしげ使用される。結果とし
て非胸腺分化細胞に対するＴａ胞の数の計算は臨床上の
診断に対して有用なデータを提供する。そのような計数
は次の如く行なうことができる：白血球の既知の数の部
分標本（Ｔａ胞のサブクラスを含む白血球細胞）を、Ｔ
細胞抗原に対する抗体、例えば０ｒｔｋｏ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃ Ｓｙａｔｍｔｎ Ｉｎｃ、（Ｒｏｕｔｅ２
０２、Ｒａｒｉｔａｎ、 Ｎｏｖ Ｊｅｒｓｅｙ ）
ｆ：ｒｈ ラ入手シウる０ＫＴｔ 、ＯＫＴ３ＴＭ
又は０ＫＴ１１αＴＭＭ が吸着されている固体表面に適用する。そのような表面
は好ましくはベトＩＪ皿の底或いＦｉキクロ滴定器壁な
どである。血清学的反応に適当な条件下に適当なインキ
ュベーション期間後、結合してない細胞を洗い出し、フ
ルオロクローム例えばアクリノン・オレンジ又はＤＡＰ
Ｉを表面に結合した細胞に添加する。再び、所望の着色
の念めの条件を調節して適当な環境にする。結合してな
い染料を必要ならば（ＤＡＰＩの場合不必要）洗い落し
、螢光を刺激するのに選定されたフルオロクロームに応
じて選ばれた波長を有する光で表面をエビ照射（ｇｐｉ
−（１１ｓｒｎｉｎａｔｉｏｎ ）する。この時通常
の光電管型検知器によって螢光を検知し、存在するＤＮ
Ａの量に比例するシグナル、従って結合した細胞の数を
得る。適当な補正により、表面に結合した最初の部分標
本中の細胞の画分を決定することができる。
ｄｉｆｆｅｖａｎｔ １ａｔａｄ ｌｙｍｐルｏｅｙｔ
ａ’ｓ ）又はＴ細胞ノ数は、いくつかのタイプの病気
に対する診断基準としてしげしげ使用される。結果とし
て非胸腺分化細胞に対するＴａ胞の数の計算は臨床上の
診断に対して有用なデータを提供する。そのような計数
は次の如く行なうことができる：白血球の既知の数の部
分標本（Ｔａ胞のサブクラスを含む白血球細胞）を、Ｔ
細胞抗原に対する抗体、例えば０ｒｔｋｏ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃ Ｓｙａｔｍｔｎ Ｉｎｃ、（Ｒｏｕｔｅ２
０２、Ｒａｒｉｔａｎ、 Ｎｏｖ Ｊｅｒｓｅｙ ）
ｆ：ｒｈ ラ入手シウる０ＫＴｔ 、ＯＫＴ３ＴＭ
又は０ＫＴ１１αＴＭＭ が吸着されている固体表面に適用する。そのような表面
は好ましくはベトＩＪ皿の底或いＦｉキクロ滴定器壁な
どである。血清学的反応に適当な条件下に適当なインキ
ュベーション期間後、結合してない細胞を洗い出し、フ
ルオロクローム例えばアクリノン・オレンジ又はＤＡＰ
Ｉを表面に結合した細胞に添加する。再び、所望の着色
の念めの条件を調節して適当な環境にする。結合してな
い染料を必要ならば（ＤＡＰＩの場合不必要）洗い落し
、螢光を刺激するのに選定されたフルオロクロームに応
じて選ばれた波長を有する光で表面をエビ照射（ｇｐｉ
−（１１ｓｒｎｉｎａｔｉｏｎ ）する。この時通常
の光電管型検知器によって螢光を検知し、存在するＤＮ
Ａの量に比例するシグナル、従って結合した細胞の数を
得る。適当な補正により、表面に結合した最初の部分標
本中の細胞の画分を決定することができる。
本発明の精神又は範囲を離れずして、多くの他の別法、
例えば螢光染色抗体組合せ法が当業者Ｖ（Ｆｉ想起され
るであろうということを更に理解すべきである。
例えば螢光染色抗体組合せ法が当業者Ｖ（Ｆｉ想起され
るであろうということを更に理解すべきである。
特許出願人 オーツ・〆イアグノスティック・システ
ムズ・インコーポレーテッド ２７
ムズ・インコーポレーテッド ２７
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌα）選定し且つ計数すべ無細胞に特異的な抗体が被覆
された固体基質を調製し； ６）所望の細胞を選定し且つ計数すべき試料を、抗体及
び細胞間の血清学的反応に適し九条件下に該固体基質Ｖ
Ｃ適用し； Ｃ）結合してない細胞を除去し； ｄ）結合した細胞を適当な条件下に核酸に特異的な螢光
色素で着色し； ＃）着色した細胞に螢光色素が螢光を出す光波長を照射
し：そして ｆ）着色した核酸からの螢光を検知し、それから着色さ
れた細胞の数を計算する、 工程からなることを特徴とする血清学的に選定された細
胞個体群の計数方法。 ２ 核酸色素がデオキシリメース核酸に特異的であり、
検知される螢光が結合した螢光色素の量に比例する特許
請求の範囲第１項記載の方法。 １ デオキシリメース核酸に特異的な色素がアクリジン
・オレンジ及びＤＡＰＩからなる群よ抄選択される特許
請求の範囲第２項記載の方法。 表 血清学的に検知し且つ計数すべき細胞個体群が胸腺
分化白血球細胞であり、試料が既知の数の白血球からな
り、そして固体基質を被覆する抗体が胸腺細胞抗原ｒζ
対して特異的な抗体０ＫＴＩＴＡ′ＴＭ
ＴＭＯＫＴｓ 及びＱＫ７’ｌｌα
からなる群より選択される特許請求の範囲第３項記
載の方法。 五 細胞をエビ照射により照射する特許請求の範囲第１
．２．３又は４項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US36011882A | 1982-03-19 | 1982-03-19 | |
| US360118 | 1982-03-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58172549A true JPS58172549A (ja) | 1983-10-11 |
Family
ID=23416666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58043284A Pending JPS58172549A (ja) | 1982-03-19 | 1983-03-17 | 血清学的に選定された細胞個体群の計数方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0089826A3 (ja) |
| JP (1) | JPS58172549A (ja) |
| CA (1) | CA1197186A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6044869A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-03-11 | エイビーエス・グローバル・インコーポレーテッド | 遺伝物質の可視化技術 |
| JPS63172963A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-07-16 | ロバート エイ．レビン | 生物学的粒子の検出方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5616872A (en) * | 1979-07-13 | 1981-02-18 | Ortho Diagnostics | Automatized identification and counting method of and apparatus for subclass of specified blood cell |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3684377A (en) * | 1970-07-13 | 1972-08-15 | Bio Physics Systems Inc | Method for analysis of blood by optical analysis of living cells |
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| US3970518A (en) * | 1975-07-01 | 1976-07-20 | General Electric Company | Magnetic separation of biological particles |
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-
1983
- 1983-02-02 CA CA000420743A patent/CA1197186A/en not_active Expired
- 1983-03-17 JP JP58043284A patent/JPS58172549A/ja active Pending
- 1983-03-18 EP EP83301513A patent/EP0089826A3/en not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS5616872A (en) * | 1979-07-13 | 1981-02-18 | Ortho Diagnostics | Automatized identification and counting method of and apparatus for subclass of specified blood cell |
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| JPS63172963A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-07-16 | ロバート エイ．レビン | 生物学的粒子の検出方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0089826A3 (en) | 1986-02-26 |
| EP0089826A2 (en) | 1983-09-28 |
| CA1197186A (en) | 1985-11-26 |
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