JPS58135816A - 食欲調整物質の製造方法 - Google Patents
食欲調整物質の製造方法Info
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- JPS58135816A JPS58135816A JP57169481A JP16948182A JPS58135816A JP S58135816 A JPS58135816 A JP S58135816A JP 57169481 A JP57169481 A JP 57169481A JP 16948182 A JP16948182 A JP 16948182A JP S58135816 A JPS58135816 A JP S58135816A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒトおよび／１＆は動物血清から食欲調整物質
を製造する方法に関する。
を製造する方法に関する。
ハンがり一特許第１７８．７０５号にょシ、ヒトおよび
／または動物血清から単離される食欲中枢に特異的に作
用する食欲ｖ４整物質は公知である。
／または動物血清から単離される食欲中枢に特異的に作
用する食欲ｖ４整物質は公知である。
この特許明細書によれば、ヒトおよび／ま友は動物血清
をｓ ｏ、ｏ ｏ ｏ ｔでの分子量を通過させる膜フ
ィルターで濾過し、との濾液をダル上（＃去容量、Ｍ＝
５０，０００以下）クロマトグラフィーに付す。これ１
ｇＩ：ｏ、ｉ〜１．０−食塩溶液で溶出すると中性の溶
液が得られる。この溶出液を分画し、生物活性な分画な
蒸発させ、残留物を必要量の水に溶解し、この溶液を前
述の方法でｒルクロマトグラフイーに付し、水で分画溶
出し、生物学的活性を示す分画な蒸発させる。この方法
により、加水分解するとアミノ酸と糖に分解しくアミノ
酸６０−１糖１０％）、糖タンパク質と考えられる生成
物が分離される。この糖タンパク質は、中枢神経系に対
して興奮作用も抑制作用も示さないが、食欲中枢に特異
的に作用する食欲調整物質である。
をｓ ｏ、ｏ ｏ ｏ ｔでの分子量を通過させる膜フ
ィルターで濾過し、との濾液をダル上（＃去容量、Ｍ＝
５０，０００以下）クロマトグラフィーに付す。これ１
ｇＩ：ｏ、ｉ〜１．０−食塩溶液で溶出すると中性の溶
液が得られる。この溶出液を分画し、生物活性な分画な
蒸発させ、残留物を必要量の水に溶解し、この溶液を前
述の方法でｒルクロマトグラフイーに付し、水で分画溶
出し、生物学的活性を示す分画な蒸発させる。この方法
により、加水分解するとアミノ酸と糖に分解しくアミノ
酸６０−１糖１０％）、糖タンパク質と考えられる生成
物が分離される。この糖タンパク質は、中枢神経系に対
して興奮作用も抑制作用も示さないが、食欲中枢に特異
的に作用する食欲調整物質である。
上記特許についてさらに研究した結果、この特許に記載
の方法で得られる分画け、本発明を構成する親規方法に
よってさらに分画できることを発見した。この方法によ
れば、従来の方法で分離された分画よりも６〜４倍強力
な生成物を得ることができる。この新しい生成物の化学
的組成は公知の分画の組成と明らかに異なる。この生成
物は生理学的に均一で、化学的に純粋な、一定の組成な
４つ物質とみなすことができる。
の方法で得られる分画け、本発明を構成する親規方法に
よってさらに分画できることを発見した。この方法によ
れば、従来の方法で分離された分画よりも６〜４倍強力
な生成物を得ることができる。この新しい生成物の化学
的組成は公知の分画の組成と明らかに異なる。この生成
物は生理学的に均一で、化学的に純粋な、一定の組成な
４つ物質とみなすことができる。
上述の従来法で分離される活性物質のタンパクま九社ペ
ゾチド成分は、そのかなりの部分が化学的に結合してい
ないあるいは単に弱い結合型として存在し、サチェチン
（８ａｔｉｅｔｉｎ ）作用に関しては不活性な成分で
、適当なタンパク沈殿方法によって実際の作用物質から
分離できるものであることが明らかになった。こののち
に残留する低分子の、ペゾチＷ性またはその他の夾雑物
質は、さらに精製操作に付し、一部は電気泳動で、一部
は親和性クロマトグラフィーによって完全に除去できる
。この方法で、純粋な、化学的に均一なサチェチン活性
物質が得られる。
ゾチド成分は、そのかなりの部分が化学的に結合してい
ないあるいは単に弱い結合型として存在し、サチェチン
（８ａｔｉｅｔｉｎ ）作用に関しては不活性な成分で
、適当なタンパク沈殿方法によって実際の作用物質から
分離できるものであることが明らかになった。こののち
に残留する低分子の、ペゾチＷ性またはその他の夾雑物
質は、さらに精製操作に付し、一部は電気泳動で、一部
は親和性クロマトグラフィーによって完全に除去できる
。この方法で、純粋な、化学的に均一なサチェチン活性
物質が得られる。
本発明によれば、従来法で製造される分画の活性を数倍
も増強させ、食欲中枢に特異的に作用する、化学的に均
一で組成に関して適切に定義できる食欲調整物質、すな
わち純粋なサチェチンが得られる。
も増強させ、食欲中枢に特異的に作用する、化学的に均
一で組成に関して適切に定義できる食欲調整物質、すな
わち純粋なサチェチンが得られる。
ヒトおよび／または哺乳動物がら得た血清をｓ ｏ、ｏ
ｏ ｏ ｔでの分子、量を透過させる膜フィルターで
濾過する。濾液を部分蒸発させ、得られ友劇縮液の不溶
性部分を適当に遠心分離して除去する。
ｏ ｏ ｔでの分子、量を透過させる膜フィルターで
濾過する。濾液を部分蒸発させ、得られ友劇縮液の不溶
性部分を適当に遠心分離して除去する。
液相に０〜１０℃でトリクロル酢酸を５〜２５ｔ／Ｖ
％好ましくは１０〜１２２カ］（ｌｌ量／谷量チ）にな
るまで加える。沈殿し友タンパク質を一当な超遠心によ
って除去する。得られた溶液な除去容量Ｍ＝４０００の
デル上クロマトグラフィーに付しく除去容量、除去限界
；そのデルは有孔の合成樹脂粒子から構成されている。
％好ましくは１０〜１２２カ］（ｌｌ量／谷量チ）にな
るまで加える。沈殿し友タンパク質を一当な超遠心によ
って除去する。得られた溶液な除去容量Ｍ＝４０００の
デル上クロマトグラフィーに付しく除去容量、除去限界
；そのデルは有孔の合成樹脂粒子から構成されている。
分子量４０００以下の物質はこの孔部に侵入し、緩和な
洗浄操作ではそこＫｉｌます、一方分子量４０００以上
の物質は粒子の表面にあって、直ちに洗い落されてしま
う）、このデルを０，５〜１．０％食塩溶液または−６
・０〜７．０の緩衝液で溶出する。生物学的に活性な分
画な凍結下に濃縮し、新たに３０００ダルトンの除去限
界のゲルを用いてクロマトグラフィーな行う、この方法
で得られた生成物を必要に応じて電気泳動で精製し、ｎ
製物質を親和性クロマトグラフィーで分離する。
洗浄操作ではそこＫｉｌます、一方分子量４０００以上
の物質は粒子の表面にあって、直ちに洗い落されてしま
う）、このデルを０，５〜１．０％食塩溶液または−６
・０〜７．０の緩衝液で溶出する。生物学的に活性な分
画な凍結下に濃縮し、新たに３０００ダルトンの除去限
界のゲルを用いてクロマトグラフィーな行う、この方法
で得られた生成物を必要に応じて電気泳動で精製し、ｎ
製物質を親和性クロマトグラフィーで分離する。
本発明の最初の精製工程における膜濾過（＠膜濾過）は
、たとえばＡｍ１ＣＯｎ ＵＭ −１０ｔたは５ａｒｔ
ｏｒｉｕｓ膜を用い、適当な条件下たとえば６気圧で絶
えず攪拌しながら行う。得られた濾液を真空蒸留して濃
縮し、不溶性部分を遠心分離で除去する。得られる、白
濁しているが沈殿はない溶液な０〜１０℃に冷却し、ト
リクロル酢酸を濃度５〜２５ ｔ／ｖ饅好ましくはＩ
Ｑ ｔ／ｖ−になるまで加えた。沈殿を生じた溶液を０
〜５℃に少なくと奄１時間好ましくは一夜放置し、つい
で沈殿したタンパク質を同温度で超遠心して除去すると
、澄明な、鮮やかな黄色の溶液が得られる。トリクロル
酢酸処理により、アルブミンを含めた高分子量の血清タ
ンパク質が除去される。高分子のサチェチン性を有する
炭水化物成分は少量のタンパク成分を含むが沈殿せず溶
液に残る。すなわち、このタンパク成分はサチェチンの
膨水化物部分に結合した、化学的結合の形で存在するも
のと考えられる。
、たとえばＡｍ１ＣＯｎ ＵＭ −１０ｔたは５ａｒｔ
ｏｒｉｕｓ膜を用い、適当な条件下たとえば６気圧で絶
えず攪拌しながら行う。得られた濾液を真空蒸留して濃
縮し、不溶性部分を遠心分離で除去する。得られる、白
濁しているが沈殿はない溶液な０〜１０℃に冷却し、ト
リクロル酢酸を濃度５〜２５ ｔ／ｖ饅好ましくはＩ
Ｑ ｔ／ｖ−になるまで加えた。沈殿を生じた溶液を０
〜５℃に少なくと奄１時間好ましくは一夜放置し、つい
で沈殿したタンパク質を同温度で超遠心して除去すると
、澄明な、鮮やかな黄色の溶液が得られる。トリクロル
酢酸処理により、アルブミンを含めた高分子量の血清タ
ンパク質が除去される。高分子のサチェチン性を有する
炭水化物成分は少量のタンパク成分を含むが沈殿せず溶
液に残る。すなわち、このタンパク成分はサチェチンの
膨水化物部分に結合した、化学的結合の形で存在するも
のと考えられる。
次の精製工程は除去限界少なくともＭ＝４０００のデル
による製造デルクロマトグラフィーでおる。
による製造デルクロマトグラフィーでおる。
５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５または８ｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−２５を充事したカラムを使用するのが好ましい。溶
出液として・Ｆｉｐ１４６．６の０．１ Ｍ酢酸アンモ
ニウム緩衝液を適当な条件下に使用する。この緩衝液に
よれはサチェチン活性をもつが分画が効果的に分離でき
ることが実験的に明らかにされた。しかもこの緩衝液は
蒸発させることができるので、塩を含まない生成物が得
られる点で実際上有利である。このほか０．９１！生理
的食塩水または−６，０〜７．０の範囲の各種リン酸緩
衝液を使用することもできる。活性分画はデルカラムの
除去容量近くＫあるように思われる（ＫｄＫおける目的
物質の分配係数■。は０である）。これは目的物分子は
デルの孔部内径より大きく、し九がってデルの内部には
侵入できないことを意味する。デルから排除され、溶出
液とともに連出分画に視れる。これはカラムの体積の６
分の１に相当する。８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −１５は記
載の方法では１５００以上の分子量をもつ分子の通過を
抑えることができる。これより小さい分子量をもつ血清
由来の物質はデルの内部に侵入し、溶出が遅れる（この
場合Ｋｄ社Ｑより大きい）、Ｈ膜濾過で捕集された低分
子物質および塩の量はサチェチン量に比べて著しく多く
、この精製工程での精製工率は大きさの順序にかかつて
いる。タンパク質の沈殿に使用したトリクロル酢酸は低
分子化合物としてデルカラム中に残る。カラム容量の６
分の１に相当する溶出領域（除去領域）は塩や酸を含ま
ない活性物質が包含、される。この分画を集め、凍結下
に濃縮する。その後の精製工程も同様Ｋｒデルクロマト
グラフィーあるが、除去容量６０００ダルトン以下のデ
ルを使用する。Ｂｉｏ −１’ｔｅｌＰ−２と蒸留水の
使用が適当である。この精製工程では、まだ生成物中に
夾雑する塩および低分子成分（たとえばペゾチド破片）
を除去する。
Ｇ−２５を充事したカラムを使用するのが好ましい。溶
出液として・Ｆｉｐ１４６．６の０．１ Ｍ酢酸アンモ
ニウム緩衝液を適当な条件下に使用する。この緩衝液に
よれはサチェチン活性をもつが分画が効果的に分離でき
ることが実験的に明らかにされた。しかもこの緩衝液は
蒸発させることができるので、塩を含まない生成物が得
られる点で実際上有利である。このほか０．９１！生理
的食塩水または−６，０〜７．０の範囲の各種リン酸緩
衝液を使用することもできる。活性分画はデルカラムの
除去容量近くＫあるように思われる（ＫｄＫおける目的
物質の分配係数■。は０である）。これは目的物分子は
デルの孔部内径より大きく、し九がってデルの内部には
侵入できないことを意味する。デルから排除され、溶出
液とともに連出分画に視れる。これはカラムの体積の６
分の１に相当する。８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −１５は記
載の方法では１５００以上の分子量をもつ分子の通過を
抑えることができる。これより小さい分子量をもつ血清
由来の物質はデルの内部に侵入し、溶出が遅れる（この
場合Ｋｄ社Ｑより大きい）、Ｈ膜濾過で捕集された低分
子物質および塩の量はサチェチン量に比べて著しく多く
、この精製工程での精製工率は大きさの順序にかかつて
いる。タンパク質の沈殿に使用したトリクロル酢酸は低
分子化合物としてデルカラム中に残る。カラム容量の６
分の１に相当する溶出領域（除去領域）は塩や酸を含ま
ない活性物質が包含、される。この分画を集め、凍結下
に濃縮する。その後の精製工程も同様Ｋｒデルクロマト
グラフィーあるが、除去容量６０００ダルトン以下のデ
ルを使用する。Ｂｉｏ −１’ｔｅｌＰ−２と蒸留水の
使用が適当である。この精製工程では、まだ生成物中に
夾雑する塩および低分子成分（たとえばペゾチド破片）
を除去する。
この工程でもサチェチン活性を有する分ｌｌｉ＃ｉデル
に補光られず、カラム容量の３分の１に相当する溶出容
量に現れる。この分画を集めて凍結乾燥すると、作用物
質は取扱いの容易な淡黄色粉末として得られる。ヒト血
清１ｔ（限外濾過液−ｔに相当）から８〜１０ｑの凍結
乾燥生成物が得られる、。
に補光られず、カラム容量の３分の１に相当する溶出容
量に現れる。この分画を集めて凍結乾燥すると、作用物
質は取扱いの容易な淡黄色粉末として得られる。ヒト血
清１ｔ（限外濾過液−ｔに相当）から８〜１０ｑの凍結
乾燥生成物が得られる、。
この方法で製造された・粗すチェチンＦｉ標準と考える
ことができ、このまま食欲調整の目的に実用できる純度
を有する。この物質のサテエチン活性は２５〜５０ Ｂ
、Ｆｉ、／ηである。
ことができ、このまま食欲調整の目的に実用できる純度
を有する。この物質のサテエチン活性は２５〜５０ Ｂ
、Ｆｉ、／ηである。
生成物のサチェチン活性は確立された生物学的方法で測
定できる。サチェチン単位（Ｓ、Ｅ、 ） Ｆｉ、９６
時間絶食させた体重２００〜２４０ｔの雌ＣＦＹラット
の脳室内に適用した場合、標準飼料の１日目の摂食量が
平均２４．０４±０．７６ ｆから１０ｔに低下する作
用量を意味する。
定できる。サチェチン単位（Ｓ、Ｅ、 ） Ｆｉ、９６
時間絶食させた体重２００〜２４０ｔの雌ＣＦＹラット
の脳室内に適用した場合、標準飼料の１日目の摂食量が
平均２４．０４±０．７６ ｆから１０ｔに低下する作
用量を意味する。
上述の粗すチェチンは動物血清（ウシ、ウマ、ウサギ、
ラット等）からも同様に得られる。生成物の収率、作用
強度は動物の種類によって異なる。
ラット等）からも同様に得られる。生成物の収率、作用
強度は動物の種類によって異なる。
友とえばウシ血清からはヒトの場合−と同じ活性を有す
る生成物がヒトの場合よシやや嵩収率に、１０〜１３ｓ
ｖ／を得られる。食欲中枢に特異的、選択的に現れる作
用の特徴は動物の種類によって変化することなく同一で
ある。
る生成物がヒトの場合よシやや嵩収率に、１０〜１３ｓ
ｖ／を得られる。食欲中枢に特異的、選択的に現れる作
用の特徴は動物の種類によって変化することなく同一で
ある。
上述の方法で得られた活性２５〜５０ Ｂ、Ｅの粗すチ
ェチンについて、ポリアクリルアミド上ナトリウムドデ
シル硫酸（Ｓｎ２）を用いるｒルミ気泳動またはポリア
クリルアミＹ）ｌ”ル上勾配電気泳動法によって測定し
た分子量はｓ ｏ、ｏ ｏ ｏ〜７０，０００である。
ェチンについて、ポリアクリルアミド上ナトリウムドデ
シル硫酸（Ｓｎ２）を用いるｒルミ気泳動またはポリア
クリルアミＹ）ｌ”ル上勾配電気泳動法によって測定し
た分子量はｓ ｏ、ｏ ｏ ｏ〜７０，０００である。
この生成物は塩を夾雑せず、１＋アルデ１１１１Ａ
きンを事実土倉まず、タンパク成分は少なく（５〜２５
チ）、炭水化物成分け６０〜９０−である。
チ）、炭水化物成分け６０〜９０−である。
凍結乾燥状態で淡黄色の粉末でおる。この生成物の炭水
化物成分の主要構成成分はフコース、マンノース、がラ
クトースおよびグルコースである。
化物成分の主要構成成分はフコース、マンノース、がラ
クトースおよびグルコースである。
加水分解生成物には常にかなりの量のグルコサミンが検
出できる。ポリアクリアミド上ナトリウムｒデシル硫酸
で行ったｒルミ気泳動と分析的等電集束法では、タンパ
ク染色によって識別できる線条４〜６がみられる（構成
成分または統合）。
出できる。ポリアクリアミド上ナトリウムｒデシル硫酸
で行ったｒルミ気泳動と分析的等電集束法では、タンパ
ク染色によって識別できる線条４〜６がみられる（構成
成分または統合）。
この生成物ｐＨ６，２ま九は１．６の緩衝液にとり、さ
らに荷電圧電気泳動を行うと混合物であることがわかる
。生物学的に活性な主成分は原点またはわずかにその陰
極側に動く。電気泳動終了後、活性物質をニンヒドリン
または過ヨード酸で検出できるが、この物質が糖タンパ
ク質であることは同様に確認できる。
らに荷電圧電気泳動を行うと混合物であることがわかる
。生物学的に活性な主成分は原点またはわずかにその陰
極側に動く。電気泳動終了後、活性物質をニンヒドリン
または過ヨード酸で検出できるが、この物質が糖タンパ
ク質であることは同様に確認できる。
上述の方法で得られ太祖すチェチンは電気泳動により、
また実験室的には濾紙電気線動でさらに精製できる。Ｐ
Ｉ′１６．．２の緩衝液中で行つ良電気泳動による分離
では約７５９６の収率で、原点に残る（ ａｔ ＝Ｏ−
１）主生成物が得られる。一方２ａ＋の畢 タンパクないし糖タンパクの性質をもつ夾雑物な陽極の
方向に動く。この方法で高い活性（６０’−１００Ｂ、
ｍ、／ｑ ）を示し、ニンヒドリン、過ヨウ素酸に陽性
な主生成物が完全に分離できる。
また実験室的には濾紙電気線動でさらに精製できる。Ｐ
Ｉ′１６．．２の緩衝液中で行つ良電気泳動による分離
では約７５９６の収率で、原点に残る（ ａｔ ＝Ｏ−
１）主生成物が得られる。一方２ａ＋の畢 タンパクないし糖タンパクの性質をもつ夾雑物な陽極の
方向に動く。この方法で高い活性（６０’−１００Ｂ、
ｍ、／ｑ ）を示し、ニンヒドリン、過ヨウ素酸に陽性
な主生成物が完全に分離できる。
この方法で得られた物質はきわめて純度が高い。
これまで試みた実験（ｒルクロマトグラ−ｙ４−、ポリ
アクリルアミＰデル上勾配電気泳動）Ｋよればこの物質
は均質であることを示している。糖タンパク質としての
性質を示すこの物質の活性は約１００８、ｉ／）である
。しかしながら組成および活性にはわずかに変動があっ
て、なおこの物質が完全には均一でないと考えられる。
アクリルアミＰデル上勾配電気泳動）Ｋよればこの物質
は均質であることを示している。糖タンパク質としての
性質を示すこの物質の活性は約１００８、ｉ／）である
。しかしながら組成および活性にはわずかに変動があっ
て、なおこの物質が完全には均一でないと考えられる。
サチェチン活性物質の精製に関するその後の研究から、
上述の方法で分離し電気泳動で精製した物質は最近開発
された親和性クロマトグラフィー（たとえばり、Ｍ。
上述の方法で分離し電気泳動で精製した物質は最近開発
された親和性クロマトグラフィー（たとえばり、Ｍ。
８ｖｒａｌｌｏｗ、 Ｌ、 Ｅｖａｎｓ、 Ｄ、 Ａ、
Ｈｏｐｋｉｎｓｏｎ ： Ｎａｔｕｒｅ２６９：２６
１〜２６２．１９７７）によってさらに精製できること
が明らかになった。
Ｈｏｐｋｉｎｓｏｎ ： Ｎａｔｕｒｅ２６９：２６
１〜２６２．１９７７）によってさらに精製できること
が明らかになった。
親和性クロマトグラフィーで杜１分離を目的とする物質
には存在するが夾雑物質にはない基に選択的に結合でき
る物質を吸着剤として使用する。
には存在するが夾雑物質にはない基に選択的に結合でき
る物質を吸着剤として使用する。
糖タンパクであるサチェチ、ンには、糖タンパクのグル
コぎラノース基に特異的に結合する吸着剤を使用する。
コぎラノース基に特異的に結合する吸着剤を使用する。
この基に特異性を有する公知の吸着剤としては“Ｃｏｎ
−Ａ −８ｅｐｈａｒｏｓｅ ”と呼ばれる吸着ｒル
がと〈Ｋ有利である。このｒルはシアノゾロミドで活性
化された８ｅｐｈａｒｏａｅ ４ Ｂ Ｋ Ｃｏｎｃａ
ｖａｌｉｎＡが結合していて、特定の条件下Ｋａミーマ
ンノビバク、ペプチド）はこのｒルに結合しない、この
結合しない物質は初期の溶出液、すなわちカラム容量の
６分の１に相当する椿出液中に現れる。
−Ａ −８ｅｐｈａｒｏｓｅ ”と呼ばれる吸着ｒル
がと〈Ｋ有利である。このｒルはシアノゾロミドで活性
化された８ｅｐｈａｒｏａｅ ４ Ｂ Ｋ Ｃｏｎｃａ
ｖａｌｉｎＡが結合していて、特定の条件下Ｋａミーマ
ンノビバク、ペプチド）はこのｒルに結合しない、この
結合しない物質は初期の溶出液、すなわちカラム容量の
６分の１に相当する椿出液中に現れる。
ｒルに結合した糖タンパク瞼質は結合の様式によって、
すなわち物質の・化学的性質に応じて分−され、とくに
ｒルに結合する物質の場合は勾配浴出が用いられる。
すなわち物質の・化学的性質に応じて分−され、とくに
ｒルに結合する物質の場合は勾配浴出が用いられる。
親和性クロマトグラフィーな実施するにあたってはあら
かじめ分画化によって精製した物質を中性の出発緩衝液
に溶解する。出発緩衝液としては０．０２モルのトリス
塩酸塩（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，６−
プロパンジオール塩酸塩）＊＊を使用し、これに０．５
〜１．０モル／ｌの食塩および好ましくは少量の（゛数
ミリモルの）カルシウムおよびマグネシウムイオンを含
む緩衝液カニ有利である。ａ着剤とタンパク性夾雑物の
間の非特異的タンパク結合を低下させるためには、食塩
の濃度を高くする。出発緩衝液溶解した物質は、吸着剤
（好ましくはＣａｎ−Ａ−８ｅｐｈａｒｏａｅ ）を充
填したカラムに適用する。カラ入社あらかじめ、たとえ
ｄカラム容量の１０倍の緩衝液な通して、出発緩衝液で
平衡化する。
かじめ分画化によって精製した物質を中性の出発緩衝液
に溶解する。出発緩衝液としては０．０２モルのトリス
塩酸塩（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，６−
プロパンジオール塩酸塩）＊＊を使用し、これに０．５
〜１．０モル／ｌの食塩および好ましくは少量の（゛数
ミリモルの）カルシウムおよびマグネシウムイオンを含
む緩衝液カニ有利である。ａ着剤とタンパク性夾雑物の
間の非特異的タンパク結合を低下させるためには、食塩
の濃度を高くする。出発緩衝液溶解した物質は、吸着剤
（好ましくはＣａｎ−Ａ−８ｅｐｈａｒｏａｅ ）を充
填したカラムに適用する。カラ入社あらかじめ、たとえ
ｄカラム容量の１０倍の緩衝液な通して、出発緩衝液で
平衡化する。
出発物質をカラムに適用したのち、濃度勾配（ａ−メチ
ルマンノシドの＊衛液中濃度が上っていく）のある溶出
液で溶出する。溶出液は出発緩衝液と、α−メチルマン
ノシドを含むほかは同一とすることが好ましい。濃度０
．５モル／ｌのα−メチルマンノシド溶液をたえず緩衝
液に適カロし、常に攪拌を続りる方法が有用である。こ
の方法で直線性の勾配が得られる。＊出液はα−メチル
マンノシドの含量のみが変わって、イオン濃度ヤＳ値は
溶出の間を通じて変化しない、この過程を２５４および
２８０ｎｍの波長を用いて光度計で追跡すると第２図に
示すような溶出曲線が得られる。
ルマンノシドの＊衛液中濃度が上っていく）のある溶出
液で溶出する。溶出液は出発緩衝液と、α−メチルマン
ノシドを含むほかは同一とすることが好ましい。濃度０
．５モル／ｌのα−メチルマンノシド溶液をたえず緩衝
液に適カロし、常に攪拌を続りる方法が有用である。こ
の方法で直線性の勾配が得られる。＊出液はα−メチル
マンノシドの含量のみが変わって、イオン濃度ヤＳ値は
溶出の間を通じて変化しない、この過程を２５４および
２８０ｎｍの波長を用いて光度計で追跡すると第２図に
示すような溶出曲線が得られる。
カラムを素通シした最初のビーク１で示される分画に夾
雑物と考えられる。一方、カラムに結合する糖タンパク
質は保持時間が長く、はは対称のビーク２として、α−
メチルマンノシドの濃度が上がると溶出する。相当する
分画な合する。この方法で得られた物質は緩衝液成分の
塩、ａ−メチルマンノシＰおよび高分子物質から分離さ
れた低分子フラグメンな含むので、これから純粋な目的
物質を上述のｒルクロマトグラフイーによって分離しな
けれにならない。この場合は、除去容量６０００ダルト
ン以下、のｒル、好ましくはＢｉｏ −Ｇｅｌ Ｐ −
２を使用する。溶出は脱イオン水による。
雑物と考えられる。一方、カラムに結合する糖タンパク
質は保持時間が長く、はは対称のビーク２として、α−
メチルマンノシドの濃度が上がると溶出する。相当する
分画な合する。この方法で得られた物質は緩衝液成分の
塩、ａ−メチルマンノシＰおよび高分子物質から分離さ
れた低分子フラグメンな含むので、これから純粋な目的
物質を上述のｒルクロマトグラフイーによって分離しな
けれにならない。この場合は、除去容量６０００ダルト
ン以下、のｒル、好ましくはＢｉｏ −Ｇｅｌ Ｐ −
２を使用する。溶出は脱イオン水による。
生成物中に含有される塩やその他の低分子量夾雑物は分
子径が小さいので、ｒルの内部に侵入し、保持される。
子径が小さいので、ｒルの内部に侵入し、保持される。
純粋な、塩を含まないサチェチンはｒルの表面におって
、洗浄されてカラム容量の６分の１に相当する最初の溶
出液中に現れる。純粋なイオンを含まない水の中の、作
用物質分画を集め、凍結乾燥する。この方法で完全に純
粋、均一な作用物質、サチェチンが白色粉末として得ら
れる。
、洗浄されてカラム容量の６分の１に相当する最初の溶
出液中に現れる。純粋なイオンを含まない水の中の、作
用物質分画を集め、凍結乾燥する。この方法で完全に純
粋、均一な作用物質、サチェチンが白色粉末として得ら
れる。
活性物質サチェチンのヒトまたは動物血清からの製造お
よび精製の全工程、中間生成物および収量を第１図のフ
ローシートに示した。このフローシートから明らかなよ
うに血清１ｔから約１．５ｑの凍結乾燥サチェチンが得
られ、その生物活性は約１００８．Ｒ，／ｑである。
よび精製の全工程、中間生成物および収量を第１図のフ
ローシートに示した。このフローシートから明らかなよ
うに血清１ｔから約１．５ｑの凍結乾燥サチェチンが得
られ、その生物活性は約１００８．Ｒ，／ｑである。
本発明によって分離された精製サチェチンの分子量は８
Ｄ８を用いたｒルミ気泳動によって６０．０００ないし
７０．０００と確認された。−値５〜７ま九は７〜９の
Ａｍｆｏｌｉｎとポリアクリルア建ドデルを用いて等電
集束を行うと、等電点ＰＩ＝７．０〜７．１である。生
成物の酸加水分解物を分析し九結釆から、次の組成を示
す。
Ｄ８を用いたｒルミ気泳動によって６０．０００ないし
７０．０００と確認された。−値５〜７ま九は７〜９の
Ａｍｆｏｌｉｎとポリアクリルア建ドデルを用いて等電
集束を行うと、等電点ＰＩ＝７．０〜７．１である。生
成物の酸加水分解物を分析し九結釆から、次の組成を示
す。
タンパク質 １５％
縦木化物 ７５％
グルコサミン ４チ
水 ５ｑｂ
アミノ酸成分の分析： ＡＳｐｌ、２１ ％、 Ｔｈｒ
Ｏ，６６９６、８ｅｒ Ｏ・−７１Ｔｏ、 Ｇｌｕ
１．８７％、 Ｐｒｏ ０．４５Ｔｏ、 Ｇｌｙ
Ｏ−４２９６ｔ Ａｌａｌ−５８＊＊ ＣｙａＯ，１
５’４１ Ｖａｌ Ｏ８５５ｆｂｌ Ｍｅｔ Ｏ−１２
’ｌｋｔ Ｉｌｅ Ｏ−２６’Ｉｋ、 ＬｅｕＯ，
９０ｇ６． ’Ｉ’ｙｒ Ｏ−３１９６，Ｐｈｅ Ｏ，
４４チ、 ＮＨ３０−２４Ｔｏ＊ Ｌｙｅ ３．７９１
１Ｇｔ Ｈｌｓ ０１１５−９Ａｒ）＜ Ｏ−４９％ 糖成分：フコース １９−、マンノース ２１１６、が
ラクトース １１チ、グルコース ２４１分析値は凍結
乾燥物についてのものでるる。凍結乾燥状態の変化によ
り水分含量は変動する。
Ｏ，６６９６、８ｅｒ Ｏ・−７１Ｔｏ、 Ｇｌｕ
１．８７％、 Ｐｒｏ ０．４５Ｔｏ、 Ｇｌｙ
Ｏ−４２９６ｔ Ａｌａｌ−５８＊＊ ＣｙａＯ，１
５’４１ Ｖａｌ Ｏ８５５ｆｂｌ Ｍｅｔ Ｏ−１２
’ｌｋｔ Ｉｌｅ Ｏ−２６’Ｉｋ、 ＬｅｕＯ，
９０ｇ６． ’Ｉ’ｙｒ Ｏ−３１９６，Ｐｈｅ Ｏ，
４４チ、 ＮＨ３０−２４Ｔｏ＊ Ｌｙｅ ３．７９１
１Ｇｔ Ｈｌｓ ０１１５−９Ａｒ）＜ Ｏ−４９％ 糖成分：フコース １９−、マンノース ２１１６、が
ラクトース １１チ、グルコース ２４１分析値は凍結
乾燥物についてのものでるる。凍結乾燥状態の変化によ
り水分含量は変動する。
ナトリウムドデシル硫酸で行ったポリアクリルアミド−
ｒルミ気泳動、ポリアクリルアミドダル上勾配電気泳動
および轡電果束化の結果は、この物質が化学的に均一で
あることを示している。
ｒルミ気泳動、ポリアクリルアミドダル上勾配電気泳動
および轡電果束化の結果は、この物質が化学的に均一で
あることを示している。
次に本発明の方法を以下の実施例によってさらに評細に
説萌する。
説萌する。
艶
ａ）３０００−のヒト血清をたえず攪拌しながらら６〜
４気圧においてＡｍ１ｃｏｎ ＵＭ −１０膜フィルタ
ーによって濾過する。得られた限外濾液（約２０００ｍ
）ｖ真空中で６０ｗＩｔまで蒸発させる。
４気圧においてＡｍ１ｃｏｎ ＵＭ −１０膜フィルタ
ーによって濾過する。得られた限外濾液（約２０００ｍ
）ｖ真空中で６０ｗＩｔまで蒸発させる。
沈殿を生じた濃縮液を９００Ｏｆで５０分関連心分離す
る。上澄液を分離し、攪拌、冷却下に５５チドリクロル
酢酸１２ｍを滴加する。混合物を５〜１０℃に１時間放
置する。沈殿したタンパク質な加速３０，０００で、５
℃において超遠心して除去する。得られた液体は完全に
澄明である。この液体を８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５を
充填したカラム（５，９０個）に適用し、０．１モル酢
酸アンモニウム緩衝液（ｐ＆４６．６）で溶出するクロ
マトグラフィーに付す。
る。上澄液を分離し、攪拌、冷却下に５５チドリクロル
酢酸１２ｍを滴加する。混合物を５〜１０℃に１時間放
置する。沈殿したタンパク質な加速３０，０００で、５
℃において超遠心して除去する。得られた液体は完全に
澄明である。この液体を８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５を
充填したカラム（５，９０個）に適用し、０．１モル酢
酸アンモニウム緩衝液（ｐ＆４６．６）で溶出するクロ
マトグラフィーに付す。
５００〜６００−の分画を集め、凍結乾燥する。
凍結乾燥残貿愉を水１０ｍに溶解し、Ｂｉｏ −Ｇｅ１
ｐ−２のカラム（２，５Ｘ９０ｍ）に適用する。カラム
を蒸留水で溶出し、１６０〜１８０ｍの分画な集め、凍
結乾燥する。この方法で、塩を含まない粗すチェチン２
５〜６０匈が淡黄色の粉末として得られる。
ｐ−２のカラム（２，５Ｘ９０ｍ）に適用する。カラム
を蒸留水で溶出し、１６０〜１８０ｍの分画な集め、凍
結乾燥する。この方法で、塩を含まない粗すチェチン２
５〜６０匈が淡黄色の粉末として得られる。
ｂ）上記方法で得られた粗生成物３０＋＋ｖを蒸留長さ
６０ｔｘに、Ｗｈａｔｍａｎ ３ Ｍ電気泳動濾紙上に
滴加する。この濾紙を乾燥し、ｐＨ６，２（ピリジン１
０Ｖｉ酢酸０．５Ｖ％）＋２）緩衝液に均一に浸す。
６０ｔｘに、Ｗｈａｔｍａｎ ３ Ｍ電気泳動濾紙上に
滴加する。この濾紙を乾燥し、ｐＨ６，２（ピリジン１
０Ｖｉ酢酸０．５Ｖ％）＋２）緩衝液に均一に浸す。
水平位置、電圧２０ｖ／ＩＩＩで４時間電気泳動を行う
。
。
次に濾紙を乾燥し、１譚の帯に、ニンヒドリンま喪は過
ヨウ素酸で発色させると、分離し友成分の位置がわかる
。相当する濾紙の部分を切断して、蒸留水で活性物質を
抽出する。凍結乾燥すると活性５０〜１００ ｓ、ｉ＜
、／ｉｖｏ活性物質２０〜２６岬が得られる。
ヨウ素酸で発色させると、分離し友成分の位置がわかる
。相当する濾紙の部分を切断して、蒸留水で活性物質を
抽出する。凍結乾燥すると活性５０〜１００ ｓ、ｉ＜
、／ｉｖｏ活性物質２０〜２６岬が得られる。
Ｃ）電気泳動で和製した生成物２０ｑを出発緩衝液（ｐ
）１７．０、組成ニトリ≧塩１！ｌ ａ Ｏ，０２モ＃
／ｌ、ＮａＣｊ Ｏ，５モＶｔ、塩、化カルシウム０
．０１モｈ／Ｌ。
）１７．０、組成ニトリ≧塩１！ｌ ａ Ｏ，０２モ＃
／ｌ、ＮａＣｊ Ｏ，５モＶｔ、塩、化カルシウム０
．０１モｈ／Ｌ。
塩化マンガン０．０１モに／ｌ ） ４−にと９、Ｃｏ
ｎ −Ａ −Ｂｅｐｈａｒｏａｅ ＊ ！１４カラム（
φ１．７個、を二３７５１）に適用する。溶出は出発緩
衝液１００−で開始する。同じ１歳の緩衝液１００−を
たえず攪拌しながら、これに０．５七々ｔのα−メチル
マンノシドを適加する。α−メチルマンノシドの濃度は
０から０，５モｂ／Ｌ ｔで直線的に徐々に変化する。
ｎ −Ａ −Ｂｅｐｈａｒｏａｅ ＊ ！１４カラム（
φ１．７個、を二３７５１）に適用する。溶出は出発緩
衝液１００−で開始する。同じ１歳の緩衝液１００−を
たえず攪拌しながら、これに０．５七々ｔのα−メチル
マンノシドを適加する。α−メチルマンノシドの濃度は
０から０，５モｂ／Ｌ ｔで直線的に徐々に変化する。
・この過程を紫外部モニター（波長２５４ ｎｍ ）で
連続的に追跡する。各２．５ ｍｇの分画なとる。所望
の生成物を含む分１ｉｉｌｉ（７５−〜１００ｗｔ）を
集め、凍結乾燥して容量１０−にする。
連続的に追跡する。各２．５ ｍｇの分画なとる。所望
の生成物を含む分１ｉｉｌｉ（７５−〜１００ｗｔ）を
集め、凍結乾燥して容量１０−にする。
濃縮液から塩および犬の他の低分子夾雑物を除くために
、ｎｔｏ−Ｇｅｌ ｐ−２充填カラム（φ＝２．５υ、
Ｌ ＝ ９０ ｃｍ ）に適用し、蒸留水で溶出する。
、ｎｔｏ−Ｇｅｌ ｐ−２充填カラム（φ＝２．５υ、
Ｌ ＝ ９０ ｃｍ ）に適用し、蒸留水で溶出する。
１４０〜１８０−の分画を集め、凍結乾燥する。
純白色の、塩を含まない、均一の生成物が得られる。こ
のサチェチンの活性は１００ ａ、Ｅ、／ｑである。
のサチェチンの活性は１００ ａ、Ｅ、／ｑである。
第１図は本発明の方法の一態様を示すフローシートであ
り、第２図は本発明の粗生成物をＣｏｎ Ａ−８ｅｐｈ
ａｒｏｓｅカラムによる親和性クロマトグラフィーに付
した場合の溶出液を紫外部吸収でモニターして得られた
溶出曲線である。 代理人 漫 村 皓 図面の＋？ＩＪ）（１’ｉ １’；に′Ａ史、Ｒ１ｊオ
１図 ｃｈ Ｉ！ｌｉｔ （３０ＣＩＤｍｌｌ懺ｑ１：ｒｔＬ
ｆｔ ＋２０）Ｏｍｌ）＠Ｌ ＊ （７２ｍｌ） ｇ’ｒｌｒＱＪ１ン（３０ｍｇ） 手続補正書（自発） 昭和５７年１１月ｚｑ日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５７ 年特許願第１６９４８１ 号３、補ｉＦを
する者 事１９との関係 特許出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和 年 月 口 明細書の浄書（内容に変更なし） 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和 ５７年特許願第 １６９４８１ 号２、発明
の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特ｔ’＋出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和５８ 年 ２月 ２２日 ８、補正の内容 別紙のとおり
り、第２図は本発明の粗生成物をＣｏｎ Ａ−８ｅｐｈ
ａｒｏｓｅカラムによる親和性クロマトグラフィーに付
した場合の溶出液を紫外部吸収でモニターして得られた
溶出曲線である。 代理人 漫 村 皓 図面の＋？ＩＪ）（１’ｉ １’；に′Ａ史、Ｒ１ｊオ
１図 ｃｈ Ｉ！ｌｉｔ （３０ＣＩＤｍｌｌ懺ｑ１：ｒｔＬ
ｆｔ ＋２０）Ｏｍｌ）＠Ｌ ＊ （７２ｍｌ） ｇ’ｒｌｒＱＪ１ン（３０ｍｇ） 手続補正書（自発） 昭和５７年１１月ｚｑ日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５７ 年特許願第１６９４８１ 号３、補ｉＦを
する者 事１９との関係 特許出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和 年 月 口 明細書の浄書（内容に変更なし） 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和 ５７年特許願第 １６９４８１ 号２、発明
の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特ｔ’＋出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和５８ 年 ２月 ２２日 ８、補正の内容 別紙のとおり
Claims (3)
- （１） ヒトおよび／または動物血清を膜濾過および
ｒルクロマトグラフイーに付して、特異的に食欲中枢に
作用する食欲調整物質を製造する方法において、ヒトお
よび／ま九は動物血清を分子量５０．０００までを通過
させる膜フィルターを通して濾過し、濾液を部分蒸発さ
せ、得られた濃縮液から不溶性部分を適当な遠心分離に
よって除去し、ついで液相に０〜１０℃でトリクロル酢
酸を濃度５〜２５ｆ／′ｖ９６好壜しくは１０〜１２ｆ
／Ｖ嗟になるように添加し、沈殿しえタンパク質を適当
な超遠心によって除去し、得られた溶液を除去容量４０
００ダルトン以下のｒル上、０．５〜１．０−好ましく
は０．９−食塩滴液また社ｐＨ６，０〜７．０の緩ｗｍ
を溶出液としてクロマトグラフィーに付し、生物活性分
−を凍結下に濃縮し、この物質なあらえめて除去限界３
０００ダルトン以下のｒル上、クロマトグラフィーに付
し１．水で溶出し、活性分画を凍結乾燥し、得られた生
成物を所望によυさらに電気泳動による精製工程に付す
ことを特徴とする食欲調整物質の製造方法 - （２） ヒトおよび／または動物血清を膜濾過および
ｒルクロマトグラフィーに付して、特異的に食欲中枢に
作用する食欲調整物質を製造する方法において、ヒトお
よび／オたは動物血清を分子量ｓ ｏ、ｏ ｏ ｏまで
を通過させる膜フィルターを通して濾過し、濾液を部分
蒸発させ、得られ九濃縮液から不溶性部分を適当な遠心
分離によって除去し、ついで液相に０〜１０℃でトリク
ロル酢酸を濃度５〜２５ｔ／′ｖ１１好ましくは１０〜
１２ ｆ／ｌ／ＩＫなるように添加し、沈殿したタンパ
ク質を適当な超遠心によって除去し、得られ九溶液を除
去容量４０００ダルトン以下のｒル上、０．５〜１．０
−好ましくは０．９−食塩溶液を九は−６，０〜７．０
の緩衝液を溶出液としてクロマトグラフィーに付し、生
物活性分画を凍結下に捩縮し、仁の物質をあら九めて除
去限界３００．０ダルトン以下のｒル上、クロマトグラ
フィーに付し、水で溶出し、活性分画を凍結乾燥し、得
られた粗生成物をｐＨ６，０〜６．５において電気泳動
によって精製し、原点に残留した主生成物を分離し、グ
ルコビラノースおよび／普九はマンノピラノース基に％
異的な親和性を示す吸着剤好ましくはＣｏｎ −Ａ −
５ｅｐｈａｒｏｓｅを用いた親和性クロマトグラフィー
に付すことを特徴とする食欲調整物質の製造方法 - （３） ヒトおよび／または動物血清を分子量ｓ ｏ
、ｏ ｏ ｏまでを通過させる膜フィルターを通して濾
過し、濾液を部分蒸発させ、得られた鎖縮液から不溶性
部分を適当な遠心分離によって除去し、ついで液相に０
〜１０℃でトリクロル酢酸を濃度５〜２５ｆ／ｖｓ好ま
しくは１０〜１２１／Ｖｆｋになるように添加し、沈殿
したタンパク質を適当な超遠心によって除去し、得られ
た溶液な輪去容量４０００ダルトン以下のダル上、０．
５〜１．０チ好ましくは０．９１食塩溶液また祉ｐ）１
６．０〜７．０の緩衝液を溶出液としてクロマトグラフ
ィーに付し、生物活性分画を凍結下に濃縮し、この物質
をあらためて除去限界６０００ダルトン以下のダル上、
クロマトグラフィーに付し、水で溶出し、活性分画を凍
結乾燥し、得られ九生成物を所望によりさらに電気泳動
による精製工程に付すことを特徴とする製造方法によっ
て得られた食欲調整物質
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU2251-2783/81 | 1981-09-28 | ||
| HU812783A HU183590B (en) | 1981-09-28 | 1981-09-28 | Process for the isolation of an active suastance influencing specifically the nutrition centre with a regulative effect on the appetite from human and/or animal blood serum |
| HU2251/2783/81 | 1982-03-03 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58135816A true JPS58135816A (ja) | 1983-08-12 |
| JPH0427998B2 JPH0427998B2 (ja) | 1992-05-13 |
Family
ID=10961083
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57169481A Granted JPS58135816A (ja) | 1981-09-28 | 1982-09-28 | 食欲調整物質の製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4430264A (ja) |
| EP (1) | EP0075925B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58135816A (ja) |
| AT (1) | ATE59556T1 (ja) |
| AU (1) | AU551250B2 (ja) |
| DE (1) | DE3280277D1 (ja) |
| DK (1) | DK429082A (ja) |
| HU (1) | HU183590B (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3219248A1 (de) * | 1982-05-21 | 1983-11-24 | Solco Basel AG, Birsfelden | Verfahren zur gewinnung zellatmungsfoerdernder wirkstoffe aus kaelberblut |
| HU194916B (en) * | 1983-07-29 | 1988-03-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing new type of active compound of selective inhibiting activity for intake of food |
| HUT45903A (en) * | 1986-12-17 | 1988-09-28 | Rixhter Gedeon Vegyeszeti Gyar | Cleaned active substances of biological origin hindering the nutrition selectively, their antibodies and immune complexes of these active substances and the proper antibodies |
| JP6930101B2 (ja) * | 2016-12-12 | 2021-09-01 | オムロン株式会社 | 音響センサ及び静電容量型トランスデューサ |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU178703B (en) * | 1978-08-29 | 1982-06-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for separating appetite-controlling fraction from human or animal sera,of activity specifically on the nutrient center |
-
1981
- 1981-09-28 HU HU812783A patent/HU183590B/hu not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-09-27 DK DK429082A patent/DK429082A/da not_active Application Discontinuation
- 1982-09-28 EP EP82108965A patent/EP0075925B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1982-09-28 US US06/425,867 patent/US4430264A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-09-28 AT AT82108965T patent/ATE59556T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-09-28 JP JP57169481A patent/JPS58135816A/ja active Granted
- 1982-09-28 AU AU88774/82A patent/AU551250B2/en not_active Ceased
- 1982-09-28 DE DE8282108965T patent/DE3280277D1/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0427998B2 (ja) | 1992-05-13 |
| EP0075925B1 (de) | 1991-01-02 |
| AU551250B2 (en) | 1986-04-24 |
| DK429082A (da) | 1983-03-29 |
| EP0075925A2 (de) | 1983-04-06 |
| DE3280277D1 (de) | 1991-02-07 |
| ATE59556T1 (de) | 1991-01-15 |
| AU8877482A (en) | 1983-05-12 |
| HU183590B (en) | 1984-05-28 |
| US4430264A (en) | 1984-02-07 |
| EP0075925A3 (en) | 1986-01-02 |
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