JPH11511126A - グルタメートにより誘発される細胞毒性の防止のためのｐ▲下２▼プリノセプターの作動薬または拮抗薬の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 グルタメートによって誘発される細胞毒性の予防のためのＰ２プリノセプターの作動薬または拮抗薬の使用、特にBasilen Blue E-3G（Reactive Blue 2）、Cibacron Blue 3GA および５−アデニリルイミドジホスフェート（ＡＭＰＰＮＰ）の使用。細胞毒性濃度のグルタメートの存在下では、これらの化合物は、例えば生後のラット小脳顆粒ニューロンのような中枢神経系（ＣＮＳ）ニューロンの細胞生存を維持する。

Description

【発明の詳細な説明】 グルタメートにより誘発される細胞毒性の防止のための Ｐ₂プリノセプターの作動薬または拮抗薬の使用 発明の背景 本発明は、グルタメート(glutamate)によって誘発される細胞毒性の防止のた めの特定の種類の化合物の使用に関する。 技術の状態 グルタメートは、中枢神経系の主要な興奮性神経伝達物質を構成し(Hollmann M.,Heinemann S.,Annu.Rev.Neurosci.,17,31-108,1994)、ＣＮＳ中でのグルタメ ートレセプターの遍在分布はグルタメートが広範囲の生理学並びに病理学的事象 に中心的役割を果たしていることを示している（Watkins J.C.,Collingridge G, L.，ＮＭＤＡレセプター(The NMDA Receptor),IRL Oxford，１９８９年）。 極めて論理的な理論と幾つかの実験的知見とにより、学習、パターン認識およ び記憶などの機能におけるグルタメート依存性の神経伝達に対する中心的役割が 示唆されている(Bliss T.V.P.,Collingridge G.L.,Nature,361,31-39,1993)。 また、グルタメートはイン・ビボおよび培養中にニューロンに対して毒性を有 し、グルタメートレセプターの機能は多くの脳疾患および傷害に重要であること も以前から知られている(Appel S.H.,Trends Neurosci.,16,3-5,1993)。発作(st roke)または癲癇発作(seizure)などの多くの神経学的疾患は、グルタメートによ る過剰刺激により実際に脳傷害を生じ、退行性疾患、特にアルツハイマー病、ハ ンティングトン病、パーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）はグル タメートレセプターの過剰活性化によって引き起こされるニューロン細胞死を伴 う。 発明の目的 本発明の目的は、グルタメートによって引き起こされる神経伝達および神経毒 性の調節のための特定の種類の化合物であって、急性および慢性の神経退行性疾 患の可能な治療に用いることができるものを提供することである。 本発明のもう一つの目的は、グルタメートが関係した生理学的機能、特に痛み 、ホルモンバランス、血圧、体温調節、呼吸、学習、パターン認識および記憶を 調節を可能にする特定の種類の化合物を提供することである。 更にもう一つの本発明の目的は、グルタメートによって誘発される細胞毒性を 防止するための薬理学的手段として用いることができる特定の種類の化合物を提 供することである。 もう一つのの本発明の目的は、以前に報告された化合物、例えば競合的および 非競合的グルタメート拮抗薬、ガングリオシドおよび成長因子の有効な薬理学的 代替物であって急性および慢性のグルタメートに関連した神経学的疾患の治療の ための特定の種類の化合物を提供することである。 発明の説明 これらおよび下記の説明によって更に明確に強調されるさらなる他の目的およ び関連の利点は、グルタメートによって誘発される細胞毒性の予防のためのＰ₂ プリノセプター(purinoceptors)の作動薬または拮抗薬である化合物の使用によ って達成される。 本発明の基本的新規性は、グルタメートによって誘発される生物学的事象とＰ₂ プリノセプターモジュレーター（作動薬または拮抗薬）との相関である。グル タメートレセプターおよびＰ２プリノセプターはいずれも、実際にレセプターの イオン向性(ionotropic)並びに代謝向性(metabotropic)の特性を共有している。 一例として、本発明者らは、Ｐ₂プリノセプターの拮抗薬である化合物Basilen Blue E 3G（Reactive Blue 2 とも呼ばれる）およびCibacron Blue 3GA を選 択した。これらの化合物は、例えばSigma から購入することができ、それらの分 子構造および主要な特徴はイタリアで配布された１９９５年度版のSigma カタロ グに、Basilen Blue E-3G については１４９頁に、Cibacron Blue 3GA について は２６６頁にそれぞれ記載されている。本発明者らが選択した他の化合物は、Ｐ₂ プリノセプターの作動薬である５−アデニリルイミドジホスフェート(5-adenyl ylimidodiphosphate)（ＡＭＰＰＮＰ）である。この化合物もSigma から購入す ることができ、その分子構造および主要な特徴は１９９５年にイタリアで発行さ れたSigma カタログの５２頁に記載されている。 本発明によれば常に、これらの化合物は神経系細胞、特にＣＮＳニューロンに おいてグルタメートによって誘発される細胞毒性を防止するのに用いられる。Ｃ ＮＳニューロンについての細胞モデル系としては、本発明者らは生後ラット小脳 ニューロン(postnatal rat cerebellar neurons)を採用した。これらの細胞は特 に良く特徴決定された主要なニューロン培養物であり、生後ラット小脳から単離 すると(Lasher R.S.,and Zagon I,S.,Brain Res.,41,428-438,1972)、イン・ビ トロではその成熟表現型を介在ニューロンとして発生し、グルタメートを神経伝 達物質として用い、更にグルタメートの介在による細胞毒性の研究の優れたモデ ル系を構成する。 顆粒ニューロンを１００μＭグルタメートに１５〜３０分間暴露することによ って全細胞の８０〜１００％が（１５〜２０時間後に）死滅する。本発明者らは 、reactive blue 2 とも呼ばれるＰ₂プリノセプター拮抗薬であるbasilen blue （アントラキノンスルホン酸誘導体）が、グルタメートの同時存在下において１ ００μＭで顆粒ニューロンに導入すると、細胞の生存を完全に維持し、これによ りグルタメートの細胞毒性作用をなくすることを見出だした。basilen blueの小 脳顆粒細胞形態に対する作用は、これがなければ完全な細胞死を誘発するグルタ メートに暴露されていても、細胞体が明らかに健全な形態であり、高度に分岐 したプロセスの密な網状組織を有することを示している。粘着および神経突起の 束形成(fasciculation)もbasilen bleuによって保存される。一般に顆粒ニュー ロンをグルタメートで処理して最初の５分以内に見られる細胞体の急速な膨脹お よび明るさの喪失はbasilen blueの添加によって更に防止され、この化合物がＥ ＡＡ−レセプター相互作用のすぐ下流の一連の事象において極めて早期に作用す ると考えられることを示唆している。 basilen blue自体は３００μＭの試験した最高濃度までは細胞に対して毒性を 示さず、下流ニューロンに０．５〜２６時間与えると、血漿膜透過性（エチジウ ムブロミドの摂取によって測定）または細胞代謝（ミトコンドリアデヒドロゲナ ーゼ活性によってＭＴＴのホルマザンへの転換によって測定）に影響を与えない ことを強調することは重要である。Basilen blueは１０〜２０μＭの範囲のＩＣ 50でグルタメートによって誘発される細胞死を防止し、この値はＰ２プリノセプ ター拮抗作用について報告された化合物の濃度とほぼ一致している。アントラキ ノンのスルホン酸誘導体の他の市販の異性体(cibacron blue)は、この点に関し て有効である。Ｐ１プリノセプター拮抗薬であるカフェインは、１００μＭまで はグルタメートの細胞毒性作用を破壊しない。 細胞毒性からの保護に対するbasilen blueの効果は経時的に直線的であり、化 合物の薬剤導入の様式に依存する。basilen blueをグルタメートの１０分後に細 胞に添加した後、顆粒ニューロンと共に１５分間だけインキュベーションすると 、全ニューロン数(population)の６０〜７0％が細胞死から保護されるが、グル タメートで細胞を処理した最後の５分間だけ薬剤導入すると、basilen blueは全 ニューロンの２５〜４０％の生存を維持する。代わりに、顆粒ニューロンをグル タメートに暴露してから１〜２分、または３０分、または２時間後に添加すると （その後、細胞と共に更に２０時間インキュベーションすると）、basilen blue は全ニューロン数のそれぞれ５５〜７０％、３０％および１０％を細胞死から保 護する。顆粒ニューロンをグルタメートに暴露する前（暴露中でも後でもない） にこれを添加すると、グルタメートの細胞毒性作用を７０〜８０％まで防止する にはbasilen blueを少なくとも２０〜２５時間前処理することが必要である。こ れらの同じ処理の結果として、アスパルテート(aspartate)の摂取の抑制は見ら れない。顆粒ニューロンへの薬剤投与の様式とは無関係に、basilen blueによっ て誘発される細胞毒性の防止は新たなタンパク質合成によっては変化しないので あり、これはアクチノマイシンＤ（１０μＭで使用）またはアニソマイシン（１ ００μＭで使用）のような阻害剤には不感受性であるからである。 Basilen blueは、約１０μＭのＩＣ50で顆粒ニューロンの膜に対する［³Ｈ］ ＡＴＰの結合を阻害し、これはグルタメートによって誘発される細胞毒性を防止 するＩＣ50に相当する。［³Ｈ］ＡＴＰを用いる結合研究も、完全な(intact)細 胞を用いて直接行ない、basilen blueは有効であることが示された。 本発明者らは、既知のＰ₂プリノセプター作動薬である１００μＭの５−アデ ニリルイミドジホスフェート（ＡＭＰＰＮＰ）の継続的存在下（インビトロでは １日目からであるが２日目より後ではない）で細胞を培養した。グルタメートに よって誘発される細胞毒性は、この処理の結果として約５０〜６０％まで抑制さ れる。細胞を１００μＭのＡＭＰＰＮＰに急に暴露（グルタメートと同時に）す ると、これに関しては有効でない。ＡＭＰＰＮＰの継続的存在下でのニューロン の培養により、basilen blueに急に暴露することによって引き起こされるのと同 じ効果が誘発されることは、グルタメート依存性の神経毒性においてプリノセプ ターが直接関与しているという本発明者らの仮説を支持するものであり、これは またプリノセプター脱感作の現象が小脳顆粒細胞で起こるであろうことを示唆し ている。 Ｄ−［³Ｈ］アスパルテートの放出はイン・ビトロで培養された小脳顆粒ニュ ーロンの機能状態の尺度としてしばしば用いられており、脱分極化またはグルタ メートによって誘発されるアスパルテートの放出はニューロンの成熟と共にこれ らの細胞によって次第に得られる特徴であるので、本発明者らはこのパラメータ ーを試験することに決め、細胞死の防止においてbasilen blueによって用いられ る生物学的効果および可能な機構を更に検討した。本発明者らは、basilen blue が約１０μＭのＩＣ50で［³Ｈ］アスパルテートのグルタメートによって誘発さ れる放出を抑制することを見出だした。この抑制はほぼ完全であり、基礎放出に 影響せず、またこれは放出を１分間、更に長時間（３、１０および２５分間）で 、またはＭｇ²⁺の存在下で測定するときにも生ずる。また、顆粒ニューロンの、 １００μＭのＡＭＰＰＮＰへの８日間の長期にわたる暴露でも、［³Ｈ］アスパ ルテートのグルタメートによって誘発される放出は７０〜８０％まで抑制される 。 グルタメート依存性の神経毒性は、小脳顆粒ニューロンでも多段階プロセスに よる細胞内Ｃａ²⁺の増加を伴うことが多い。Basilen blueは、カフェインとは異 なり、約１０μＭのＩＣ50でグルタメートによって誘発される（しかし基礎的で はない）Ｃａ²⁺摂取をほぼ完全に破壊する。また、この値は、ＡＴＰ結合、細胞 毒性およびアスパルテート放出の抑制について見られたＩＣ50と一致している。 basilen blue依存性の抑制は、Ｃａ²⁺摂取を短時間（１分）または長時間（３、 １０および２５分）測定する場合に生ずる。顆粒ニューロンの、１００μＭのＡ ＭＰＰＮＰへの８日間の長期にわたる暴露では、細胞毒性およびアスパルテート の放出の抑制と同様に、グルタメートによって誘発されるＣａ²⁺流入が５０〜７ ０％まで抑制される。 図面の説明 シート１／８および２／８ Basilen Blueは、小脳顆粒の主要培養物においてグルタメートによって誘発さ れる細胞毒性を防止する：投与量−応答、および添加の様式の効果。反復の小脳 顆粒培養物を８ＤＩＶで、様々な濃度のbasilen blueの同時存在下で１００μＭ のグルタメートに２５分間暴露した（第１図）。２０時間後、培養物を、完全な 成育力のある核(nuclei)の直接計数によって細胞の生存を評価した。星印は、細 胞に１００μＭグルタメートおよび１００μＭカフェインを同時添加した後に得 られた核の％を示す。第２図では、反復の小脳顆粒培養物を８ＤＩＶで１００μ Ｍグルタメートに２５分間暴露した。グルタメートを撤回した後、様々な時間に basilen blue（１００μＭ）を培地に加え、培養物を２０時間後に完全な成育力 のある核の直接計数によって細胞の生存について評価した。星印は、細胞に１０ ０μＭグルタメートおよび１００μＭbasilen blueを同時添加した後に得られた 核の％を示す。第３図では、反復の培養物を１００μＭのbasilen blueの存在下 で様々な時間前処理した後、１００μＭグルタメートの添加を２５分間行なった （basilen blueの非存在下で行なう）。２０時間後、培養物を細胞の生存につい て評価した。 星印は、細胞に１００μＭグルタメートおよび１００μＭのbasilen blueを同 時添加した後に得られた核の％を示す。計数値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝４）であり 、１００％の細胞生存は１．７５〜２×１０６総細胞数を表す。 方法． 顆粒細胞をグルタメートに暴露して約２０時間後に、培地を除いて、界 面活性剤含有リーシス溶液(lysing solution)（０．５エチルヘキサデシルジメ チル−アンモニウムブロミド、０．２５％酢酸、０．５％Triton X-100、３ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ₂、ＰＢＳ，ｐＨ７．４で１／１０に希釈）１ｍ ｌで置き換えた。 １〜２分後に、細胞を数回粉砕し(triturated)、単一の完全な成育力のある核 の均一な懸濁液を得た。後者を血球計で計数することによって定量した。破壊さ れたまたは損傷を受けた核は計数しなかった。 シート３／８および４／８ Basilen BlueはＡＴＰの小脳顆粒細胞膜への結合を抑制するが、アスパルテー トの摂取は抑制しない。膜は８ＤＩＶの小脳顆粒細胞から調製し、タンパク質２ ０μｇを様々な濃度のbasilen blueの存在下で［³Ｈ］ＡＴＰ（０．５μＣｉ／ ｍｌ、最終濃度１４ｎＭ）（第４図）と共に４℃で１時間インキュベーションし た。特異的結合を示し、計数値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）を表す。星印は、１０ ０μＭカフェインの存在下で行なった結合を示す。第５図では、反復の小脳顆粒 培養物を８ＤＩＶで２回洗浄し、様々な濃度のbasilen blueの存在下にて［³Ｈ ］Ｄ−２，３−アスパラギン酸（１μＣｉ／ｍｌ、最終濃度４０ｎＭ）と共にロ ック溶液(Locke's solution)で様々な時間インキュベーションした。２回洗浄し た後、細胞を０．１Ｍ ＮａＯＨに溶解し、取り込まれた放射能を液体シンチレ ーション計数法によって計数した。値をｃｐｍ／μｇとして示し、平均値±ＳＥ Ｍ（ｎ＝３）を表す。タンパク質濃度は、ヒツジ血清アルブミンを標準としてブ ラッドフォードの方法によって測定した。 方法． 反復の小脳顆粒細胞を８ＤＩＶで氷冷緩衝液Ａ（５０ｍＭトリス、１ｍ Ｍ ＥＧＴＡ、ＨＣｌでｐＨ７．４に調整、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフ ルオリド、２００ＫＩＵ／ｍｌのアプロチニン、および１μｇ／ｍｌのロイペプ チンをも含む）に回収し、３５，０００×ｇで４℃にて２０分間遠心分離した。 ペレットを緩衝液Ａに再懸濁してタンパク質濃度を５〜６ｍｇ／ｍｌとし、直ち に結合研究に用いた。［³Ｈ］ＡＴＰと結合した後、試料（１ｍｌ）をWhatman G F/Bガラス繊維フィルターで真空濾過し、フィルターを直ちに５０ｍＭトリス− ＨＣｌ（ｐＨ７．４）５ｍｌで洗浄し（３×４ｓ）、風乾し、特異的に結合した 放射能を液体シンチレーション計数法によって評価した。 シート５／８および６／８ ＡＭＰＰＮＰの存在下における小脳顆粒細胞の培養： グルタメート依存性の細 胞死、Ｃa⁺⁺摂取およびアスパルテート放出の調節。主要な小脳顆粒培養物を調 製し、１ ＤＩＶで開始し、それらの幾らかに毎日１００μＭ ＡＭＰＰＮＰを 補足した（第６図）。８ＤＩＶで２回洗浄した後、培養物の幾らかを１００μＭ グルタメートと共に２０℃で２５分間インキュベーションした。翌日、それらを 細胞生存について、前記の方法で評価した。 （第７図）反復の小脳顆粒培養物を８ＤＩＶで４５Ｃａ⁺⁺（１μＣｉ／ｍｌ）の 存在下にて、１００μＭのグルタメートと共にまたはなしでロック溶液中で１分 間インキュベーションした後、Ｃａ⁺⁺流入について評価した（第８図）。反復の 小脳顆粒培養物を８ＤＩＶで［³Ｈ］Ｄ−２，３−アスパラギン酸（１μＣｉ／ ｍｌ、最終濃度４０ｎＭ）の存在下にて、ロック溶液で５分間インキュベーショ ンした後、１００μＭグルタメートの存在下または非存在下でのアスパルテート の放出について評価した。データーは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）で表す。 シート７／８および８／８ Bsilen Blue は、小脳顆粒細胞でのグルタメートによって誘発されるアスパルテ ートの放出およびＣａ⁺⁺の摂取を抑制する。（第９図）反復の小脳顆粒培養物を ８ＤＩＶで［³Ｈ］Ｄ−２，３−アスパラギン酸（１μＣｉ／ｍｌ、最終濃度４ ０ｎＭ）の存在下にて、ロック溶液中で５分間インキュベーションした。２回洗 浄した後、培養物を１００μＭのグルタメートと共にまたはなしで、様々な濃度 のbasilen blueの存在下にてロック溶液中で１分間インキュベーションした。こ の放出相の際に培養物から取り出した緩衝液をバイアルに集め、放射能を測定し た。星印は、１００μＭグルタメートおよび１００μＭカフェインの同時存在下 で得られたアスパルテートの放出を表す。細胞を０．１Ｍ ＮａＯＨに溶解し、 タンパク質濃度をブラッドフォードの方法によってウシ血清アルブミンを標準と して測定した。（第１０図）反復の小脳顆粒培養物を８ＤＩＶで４５Ｃａ⁺⁺（１ μＣｉ／ｍｌ）の存在下にて、１００μＭのグルタメートと共にまたはなしで、 様々な濃度のbasilen blueの同時存在下にて、ロック溶液中で１分間インキュベ ーションした。氷冷した１４５ｍＭの塩化コリン、２ｍＭ ＥＤＴＡで２回洗浄 した後、細胞を０．１Ｍ ＮａＯＨで溶解し、アリクウォットを集めてＣａ⁺⁺流 入（放射能測定による）およびタンパク質濃度を測定した。星印は、１００μＭ グルタメートおよび１００μＭカフェインの同時存在下で得られたＣａ⁺⁺流入を 表す。データーは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/00 ６３９ Ａ６１Ｋ 31/00 ６３９Ａ ６４３ ６４３Ｄ 31/53 31/53 31/70 ６２０ 31/70 ６２０ // Ｃ０７Ｄ 251/50 Ｃ０７Ｄ 251/50 Ｄ Ｃ０７Ｈ 19/20 Ｃ０７Ｈ 19/20 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． グルタメートによって誘発される細胞毒性の防止のためのＰ２プリノセ プターの作動薬である化合物。 ２． グルタメートによって誘発される細胞毒性の防止のための医薬品を製造 するためのＰ₂プリノセプターの作動薬または拮抗薬である化合物の使用。 ３． 急性および慢性の神経退行性疾患の治療のための医薬品の製造のための Ｐ₂プリノセプターの作動薬または拮抗薬である化合物の使用。 ４． 通常の添加剤の他にＰ₂プリノセプターの作動薬である化合物を活性薬 剤として含んでなる薬理組成物。 ５． 通常の添加剤の他にＰ₂プリノセプターの作動薬である化合物を薬理学 的に許容可能な手段で活性薬剤として含んでなる、請求の範囲第４項に記載の薬 理組成物。 ６． 前記Ｐ２プリノセプターの作動薬が５−アデニリルイミドジホスフェー ト（ＡＭＰＰＮＰ）である、請求の範囲第４項に記載の薬理組成物。 ７． グルタメートによって誘発される細胞毒性の防止のための医薬品を製造 するためのＰ₂プリノセプターの作動薬または拮抗薬である化合物を活性薬剤と して含んでなる薬理組成物の使用。 ８． 前記拮抗薬がBasilen Blue E-3G（Reactive blue 2）およびCibacron B lue 3GA から選択される、請求の範囲第７項に記載の薬理組成物の使用。 ９． 急性および慢性の神経退行性疾患に使用するための、請求の範囲第４項 に記載の薬理組成物。 １０． グルタメートによって誘発される生理学的機能の調節に使用するため の、請求の範囲第４項に記載の薬理組成物。 １１． 前記グルタメートによって誘発される生理学的機能が痛み、ホルモン バランス、血圧、体温調節、呼吸、学習、パターン認識および記憶である、請求 の範囲第１０項に記載の薬理組成物。 １２． グルタメートによって誘発される神経毒性の防止に用いるための、請 求の範囲第４項に記載の薬理組成物。 １３． 急性および慢性の神経退行性疾患に使用される医薬品の製造のための Ｐ２プリノセプターの作動薬または拮抗薬である化合物を活性薬剤として含んで なる薬理組成物の使用。 １４． グルタメートによって誘発される生理学的機能の調節に用いられる医 薬品の製造のためのＰ２プリノセプターの作動薬または拮抗薬である化合物を活 性薬剤として含んでなる薬理組成物の使用。 １５． 前記グルタメートによって誘発される生理学的機能が痛み、ホルモン バランス、血圧、体温調節、呼吸、学習、パターン認識および記憶である、請求 の範囲第１４項に記載の組成物の使用。