JPH1129600A - Separation and purification of lactoferrin from milk - Google Patents
Separation and purification of lactoferrin from milkInfo
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- JPH1129600A JPH1129600A JP20265197A JP20265197A JPH1129600A JP H1129600 A JPH1129600 A JP H1129600A JP 20265197 A JP20265197 A JP 20265197A JP 20265197 A JP20265197 A JP 20265197A JP H1129600 A JPH1129600 A JP H1129600A
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、以下に述べるよう
に、種々の生理作用を示すラクトフェリンを、簡便、高
純度、しかも安全に分離・精製する方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for easily and safely separating and purifying lactoferrin having various physiological actions as described below.
【0002】[0002]
【従来の技術】ラクトフェリンは乳、涙、唾液等の外分
泌液中に含まれる、分子量が約8万の鉄結合性糖蛋白質
である。その含量は初乳中に多く、ヒト初乳中で約5〜
10mg/ml含まれるが、ウシ常乳中では約0.1〜
0.5mg/mlと少ない。特に初乳中に多く含まれる
ことから、乳児の健全な発育を維持する上で、重要な働
きを担っていると考えられている。これを裏付けるよう
に、近年、in vitro、及びin vivoにおける多くの研究
で、ラクトフェリンが抗菌作用、過酸化脂質生成抑制作
用、鉄吸収の調節作用、免疫機能調節作用、細胞増殖作
用、及び細菌感染防御作用などの有用な生理作用を有す
ることが報告されている。2. Description of the Related Art Lactoferrin is an iron-binding glycoprotein having a molecular weight of about 80,000 contained in exocrine fluids such as milk, tears and saliva. Its content is high in colostrum, and about 5-
10 mg / ml, but about 0.1-
It is as low as 0.5 mg / ml. In particular, it is considered to play an important role in maintaining the healthy growth of infants because it is contained a lot in colostrum. In support of this, in recent years, many studies in vitro and in vivo have shown that lactoferrin has an antibacterial action, an inhibitory action on lipid peroxide production, a regulation action on iron absorption, an immune function regulation action, a cell proliferation action, and a bacterial infection. It has been reported to have useful physiological effects such as protective effects.
【0003】このようにラクトフェリンには多岐にわた
る生理活性が期待されることから、栄養生理学的、並び
に薬理学的に重要な物質である。ラクトフェリンを分離
するための原料としては、牛乳およびチーズ製造時に副
生されるチーズホエイが使用されている。ラクトフェリ
ンは栄養学的に優れ、しかも安全な牛乳原料から分離さ
れているため、安全な天然物由来の原料である。また、
最近では遺伝子組み換えラクトフェリンの利用も研究さ
れている。Since lactoferrin is expected to have a wide variety of physiological activities, it is an important substance in nutritional physiology and pharmacologically. As a raw material for separating lactoferrin, milk and cheese whey by-produced during cheese production are used. Lactoferrin is a safe source of natural products because it is nutritionally superior and is separated from safe milk ingredients. Also,
Recently, the use of recombinant lactoferrin has been studied.
【0004】従来、乳からラクトフェリンを分離、精製
する方法としては、ホエイの濃縮液を陽イオン交換体に
通液し、リン酸緩衝液で洗浄後、0.3M塩化ナトリウ
ムを含む同緩衝液でラクトフェリンを溶出させる方法
(特開昭62−19523)、あるいは脱脂乳を陽イオ
ン交換体と混合、攪拌後、樹脂をカラムに充填し、水洗
後、5%塩化ナトリウムで溶出する方法がある(特開昭
63−152400)。また、ラクトフェリンと親和性
の強い物質をカラムに固定化し、アフィニティクロマト
グラフィーにより分離する方法がある。例えば、ヘパリ
ン(特開昭63−255299)、ラクトフェリンに対
するモノクロナール抗体(特開昭61−14520
0)、硫酸エステル化物(特開昭63−25530
0)、DNA(T. William Hutchens ら、Biochimica e
t Biophysica Acta, 999 (1989) 323-329)、及び色素
(Mariano Grasselli ら、Netherlands Milk & Dairy
J., 50 (1996)551-561)などをクロマトグラフィー用の
支持体に固定化し、ラクトフェリンを含む乳原料と接触
させ、吸着したラクトフェリンを0.5〜1.0Mの塩
化ナトリウムで溶出させる方法などがある。Conventionally, as a method of separating and purifying lactoferrin from milk, a whey concentrate is passed through a cation exchanger, washed with a phosphate buffer, and then washed with the same buffer containing 0.3 M sodium chloride. There is a method of eluting lactoferrin (Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-19523) or a method of mixing skim milk with a cation exchanger, stirring, packing the resin in a column, washing with water, and eluting with 5% sodium chloride. 63-152400). In addition, there is a method in which a substance having a strong affinity for lactoferrin is immobilized on a column and separated by affinity chromatography. For example, heparin (JP-A-63-255299), a monoclonal antibody against lactoferrin (JP-A-61-14520).
0), sulfated products (JP-A-63-25530)
0), DNA (T. William Hutchens et al., Biochimica e
Biophysica Acta , 999 (1989) 323-329), and dyes (Mariano Grasselli et al., Netherlands Milk & Dairy
J. , 50 (1996) 551-561) or the like is immobilized on a support for chromatography, brought into contact with a lactoferrin-containing milk material, and the adsorbed lactoferrin is eluted with 0.5 to 1.0 M sodium chloride. and so on.
【0005】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した技
術の現状に鑑み、数多くの生理作用を有するラクトフェ
リンを安全にしかも簡便、効率的に分離及び/又は精製
する方法を開発する目的でなされたものである。SUMMARY OF THE INVENTION In view of the above-mentioned state of the art, the present invention has been made for the purpose of developing a method for safely and simply and efficiently separating and / or purifying lactoferrin having many physiological actions. It is a thing.
【0006】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、各方面から検討の
結果、アフィニティクロマトグラフィーによる方法は、
ラクトフェリンとの特異的吸着反応を用いるため、イオ
ン交換クロマトグラフィー法に比べ、煩雑な工程を経ず
に簡便に高純度のものが得られるという利点がある点に
着目した。ただ、この方法は、たしかにすぐれた方法で
あるが、従来アフィニティカラムに使用されているリガ
ンドとして、ヘパリン、ラクトフェリンに対するモノク
ロナール抗体、硫酸エステル化物、DNAなどがある
が、何れも大量に入手するのが困難である。また、固定
化した上記物質が脱落してラクトフェリンに混入する恐
れもあり、食品用途としては、安全性に問題があり、更
にもう一段の改良が待たれるところである。Means for Solving the Problems The present invention has been made to achieve the above-mentioned object, and as a result of investigations from various aspects, it has been found that a method using affinity chromatography is:
Since the specific adsorption reaction with lactoferrin is used, attention has been paid to the advantage that a high-purity product can be easily obtained without a complicated step as compared with the ion exchange chromatography method. However, this method is certainly an excellent method, but heparin, a monoclonal antibody against lactoferrin, a sulfated product, DNA, etc., which have been conventionally used for the affinity column, are available in large quantities. Is difficult. Further, there is a possibility that the immobilized substance may fall off and be mixed into lactoferrin, and there is a problem in safety for food use, and further improvement is awaited.
【0007】そこで本発明者らは、鋭意各方面から研究
を行い、ラクトフェリンがκ−カゼインに対して強い親
和性を有するという新事実を見出し、この原理を応用し
てκ−カゼインを固定化したカラムを作成し、ラクトフ
ェリンとの親和性を検討したところ、特異的にラクトフ
ェリンが吸着、溶出されることを発見した。更に、κ−
カゼインは牛乳中に存在する成分であり、従来使用され
てきたヘパリン、モノクロナール抗体などに比べ、極め
て安全で、価格的にも安いという利点がある。Accordingly, the present inventors have conducted intensive studies from various angles and have found a new fact that lactoferrin has a strong affinity for κ-casein, and immobilized κ-casein by applying this principle. When a column was prepared and the affinity for lactoferrin was examined, it was found that lactoferrin was specifically adsorbed and eluted. Furthermore, κ-
Casein is a component present in milk and has the advantage of being extremely safe and inexpensive as compared with conventionally used heparin, monoclonal antibodies and the like.
【0008】本発明は、これらの有用新知見に基づき更
に研究の結果完成されたものであって、κ−カゼイン
に、ラクトフェリン含有原料を接触させてラクトフェリ
ンを特異的に吸着させ、次いで吸着したラクトフェリン
を溶出することにより、ラクトフェリンを分離及び/又
は精製する方法に関するものである。The present invention has been completed as a result of further research based on these useful new findings. Specifically, lactoferrin-containing raw material is brought into contact with κ-casein to specifically adsorb lactoferrin and then adsorbed lactoferrin. And a method for separating and / or purifying lactoferrin by eluting lactoferrin.
【0009】本発明は、κ−カゼインを用いることによ
り、乳、涙、唾液などの外分泌液、微生物や細胞の培養
物、遺伝子組み換え培養液、こ(れら)の濃縮液、抽出
液、等に含まれる生理学的に重要なラクトフェリンを高
純度に、しかも簡便に分離/精製する方法に関するもの
である。以下、本発明について詳述する。The present invention relates to the use of κ-casein to produce exocrine fluids such as milk, tears, saliva, etc., cultures of microorganisms and cells, genetically modified cultures, concentrated liquids and extracts thereof. The present invention relates to a method for easily separating / purifying a physiologically important lactoferrin contained in lactoferrin with high purity and easily. Hereinafter, the present invention will be described in detail.
【0010】[0010]
【発明の実施の形態】本発明は、κ−カゼインに対して
ラクトフェリンが特異的、選択的に親和性を有するとい
う本発明者らがはじめて発見した新しい原理に基づくも
のであって、ラクトフェリン含有原料をκ−カゼインで
処理し、両者を特異的に結合せしめた後、ラクトフェリ
ンを分離するものである。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention is based on a new principle discovered for the first time by the present inventors that lactoferrin has a specific and selective affinity for κ-casein. Is treated with κ-casein to specifically bind both, and then lactoferrin is separated.
【0011】したがって、本発明を実施するには、κ−
カゼインを担体に固定化しておき、これにラクトフェリ
ン含有原料を接触せしめてラクトフェリンを特異的にκ
−カゼインに吸着させた後、次いで吸着させたラクトフ
ェリンを溶出せしめるいわば工業的な方法、あるいは、
κ−カゼインを担体に固定化することなく遊離状態にし
ておき、これにラクトフェリン含有原料を接触せしめて
ラクトフェリンとの結合体ないし複合体を形成せしめ、
これを取り出した後に両者を分離するいわば化学的ない
し生物学的方法のいずれもが利用可能である。Therefore, to implement the present invention, κ-
Casein is immobilized on a carrier, and a lactoferrin-containing material is brought into contact with the carrier to specifically convert lactoferrin to κ.
A so-called industrial method of adsorbing casein and then eluting the adsorbed lactoferrin, or
κ-casein is left in a free state without being immobilized on a carrier, and is contacted with a lactoferrin-containing raw material to form a conjugate or complex with lactoferrin,
Any of chemical and biological methods for separating the two after removal can be used.
【0012】κ−カゼインの固定化は、従来より行われ
ている酵素、各種蛋白質、微生物の担体への固定化技術
が適宜利用可能であるすなわち、無機又は有機、天然又
は合成、高分子又は低分子、生物系又は非生物系等各種
担体を用い、共有結合法、イオン結合法、物理的吸着法
等による従来既知の固定化技術が適宜利用可能である。For the immobilization of κ-casein, conventional techniques for immobilizing enzymes, various proteins and microorganisms on carriers can be appropriately used, that is, inorganic or organic, natural or synthetic, macromolecular or low-molecular-weight. Using various carriers such as molecules, biological systems and non-biological systems, conventionally known immobilization techniques such as a covalent bonding method, an ion bonding method, and a physical adsorption method can be appropriately used.
【0013】例えば担体としては、アガロース、セルロ
ース、デキストラン、セファローズ、セファデックス等
の多糖類(誘導体)、ポリアクリルアミドゲル、ポリス
チレン等の合成高分子物質、(多孔質)ガラス、(多孔
質)セラミックス、活性炭、シリカゲル、アルミナ、粘
土鉱物等の無機ないしセラミックス系物質が適宜利用さ
れる。Examples of the carrier include polysaccharides (derivatives) such as agarose, cellulose, dextran, sepharose, and Sephadex; synthetic polymer substances such as polyacrylamide gel and polystyrene; (porous) glass; and (porous) ceramics. Inorganic or ceramic materials such as activated carbon, silica gel, alumina and clay minerals are appropriately used.
【0014】これらの担体は、そのまま、あるいは臭化
シアン、水素化シアノホウ素等で処理したり、架橋剤や
縮合試薬で処理したりして、常法にしたがってκ−カゼ
インとの固定化を更に推進せしめてもよい。These carriers may be treated as they are, or treated with cyanogen bromide, cyanoborohydride, or the like, or treated with a cross-linking agent or a condensing reagent to further immobilize them with κ-casein according to a conventional method. May be promoted.
【0015】本発明を実施するには、先ず、このように
して固定化したκ−カゼインとラクトフェリン含有原料
とを接触せしめるのであるが、ラクトフェリン含有原料
としては、乳、脱脂乳のほか、ホエイ等の乳副製物等ヒ
トを含む哺乳類の乳類;涙、唾液等の各種外分泌液;細
胞中微生物の培養液、遺伝子組み換え培養液;これらの
抽出液や濃縮液等、ラクトフェリンを含有する物質がす
べて包含される。In order to carry out the present invention, the κ-casein thus immobilized is brought into contact with a lactoferrin-containing raw material. Examples of the lactoferrin-containing raw material include milk, skim milk, whey, etc. Milk of mammals including humans such as milk by-products of humans; various exocrine secretions such as tears and saliva; cultures of microorganisms in cells, genetically modified cultures; substances containing lactoferrin such as extracts and concentrates of these All included.
【0016】κ−カゼインとラクトフェリンの接触時に
おいて、pHは4.5〜8.5、好ましくは5.0〜
8.0とするのがよく、イオン強度は0.4以下、好ま
しくは0.3以下とするのがよい。At the time of contact between κ-casein and lactoferrin, the pH is 4.5 to 8.5, preferably 5.0 to 8.5.
The ionic strength is preferably set to 8.0 and the ionic strength is set to 0.4 or less, preferably 0.3 or less.
【0017】次いで吸着されたラクトフェリンを塩類溶
液で溶出するが、その際塩類溶液としては、イオン強度
が0.3〜1.6、好ましくは0.4〜1.5とするの
がよい。溶出した後、電気透析等の常法にしたがって脱
塩を行い、ラクトフェリンを得る。Next, the adsorbed lactoferrin is eluted with a salt solution. At this time, the salt solution has an ionic strength of 0.3 to 1.6, preferably 0.4 to 1.5. After elution, desalting is performed according to a conventional method such as electrodialysis to obtain lactoferrin.
【0018】吸着ラクトフェリンの溶出に用いられる塩
類溶液としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化
カルシウム、塩化マグネシウム、及びこれらの1種又は
それ以上の混合物から選ばれた塩類の溶液が使用され
る。以下、本発明の実施例について述べる。As the salt solution used for eluting the adsorbed lactoferrin, a salt solution selected from sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, and a mixture of one or more of these is used. Hereinafter, examples of the present invention will be described.
【0019】[0019]
【実施例1】κ−カゼインの固定化:市販のアクチゲル
10ml(アガロースゲル、ステロジェン・バイオセパ
レーション社製)を脱イオン交換水で十分洗浄し、濾過
した後、κ−カゼイン20mgを10mMリン酸緩衝液
(pH7.0)3mlに溶かし、この混合物に水素化シ
アノホウ素ナトリウム(NaCNBH3)130mgを
添加し、κ−カゼイン固定化アクチゲルを得た。Example 1 Immobilization of kappa-casein: 10 ml of commercially available actigel (agarose gel, manufactured by Sterogen Bioseparation) was sufficiently washed with deionized water, filtered, and then 20 mg of kappa-casein was buffered with 10 mM phosphate buffer. dissolved in the liquid (pH 7.0) 3 ml, the sodium cyanoborohydride in a mixture (NaCNBH 3) was added 130 mg, was obtained κ- casein immobilized Akuchigeru.
【0020】ラクトフェリンの分離、精製:上記の手順
で調製したκ−カゼイン固定化アガロースゲルを直径1
cm、長さ10cmのカラムに充填し、10mMリン酸
緩衝液(pH7.0)で平衡化した。このカラムに、ウ
シラクトフェリン(シグマ社)(1mg/ml)1ml
を通液し、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)でカラ
ムを洗浄した。次いで0.5M NaCl 20mlを
通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを溶
出した。Separation and purification of lactoferrin: κ-casein-immobilized agarose gel prepared by the above procedure
The column was packed in a 10 cm long column of 10 cm and equilibrated with 10 mM phosphate buffer (pH 7.0). 1 ml of bovine lactoferrin (Sigma) (1 mg / ml) was added to this column.
Then, the column was washed with a 10 mM phosphate buffer (pH 7.0). Next, bovine lactoferrin adsorbed on the column was eluted by passing 20 ml of 0.5 M NaCl.
【0021】[0021]
【実施例2】実施例1で調製したκ−カゼイン固定化ア
ガロースカラム(直径1cm×長さ10cm)に、ヒト
ラクトフェリン(シグマ社)(1mg/ml)1mlを
通液し、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)でカラム
を洗浄した。次いで0.5MNaCl 20mlを通液
してカラムに吸着しているヒトラクトフェリンを溶出し
た。Example 2 1 ml of human lactoferrin (Sigma) (1 mg / ml) was passed through a κ-casein-immobilized agarose column (1 cm in diameter × 10 cm in length) prepared in Example 1, and a 10 mM phosphate buffer was added. The column was washed with (pH 7.0). Next, 20 ml of 0.5 M NaCl was passed through to elute human lactoferrin adsorbed on the column.
【0022】[0022]
【実施例3】κ−カゼイン固定化カラム(直径1cm×
長さ10cm)は、実施例1と同様な手順で調製した。
乳タンパク質共存下において、κ−カゼイン固定化カラ
ムに対するラクトフェリンの特異的吸着性を確認するた
めに、ホエイ中の主要タンパク質である牛血清アルブミ
ン(BSA)(0.7mg)、免疫グロブリン(1.4
mg)、α−ラクトアルブミン(2.8mg)、及びβ
−ラクトグロブリン(7.0mg)をホエイ中の濃度と
同レベルに溶解し、この中にウシラクトフェリン1.0
mgを添加した。Example 3 κ-casein immobilized column (diameter 1 cm ×
(Length 10 cm) was prepared in the same procedure as in Example 1.
In order to confirm the specific adsorptivity of lactoferrin to the κ-casein-immobilized column in the presence of milk protein, the main proteins in whey were bovine serum albumin (BSA) (0.7 mg) and immunoglobulin (1.4).
mg), α-lactalbumin (2.8 mg), and β
Lactoglobulin (7.0 mg) was dissolved to the same level as the concentration in whey, in which bovine lactoferrin 1.0
mg was added.
【0023】このようにして調製したホエイのモデル溶
液の全量(2ml)を、上記のκ−カゼイン固定化カラ
ムに通液し、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)でカ
ラムを洗浄した。次いで1.0M NaCl 20ml
を通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを
溶出した。溶出したウシラクトフェリン量をELISA
で分析したところ、約0.95mgのウシラクトフェリ
ンが回収されたことから、ウシラクトフェリンの回収率
は96%であることを確認した。回収したウシラクトフ
ェリンの純度は、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動(PAGE)図より、95%以上と測定された。The whole amount (2 ml) of the whey model solution thus prepared was passed through the above-mentioned κ-casein-immobilized column, and the column was washed with a 10 mM phosphate buffer (pH 7.0). Then 20 ml of 1.0 M NaCl
Then, the bovine lactoferrin adsorbed on the column was eluted. The amount of eluted bovine lactoferrin was determined by ELISA.
As a result, about 0.95 mg of bovine lactoferrin was recovered, confirming that the recovery of bovine lactoferrin was 96%. The purity of the recovered bovine lactoferrin was determined to be 95% or more by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE).
【0024】図面は、κ−カゼイン固定化アフィニティ
クロマトグラフィーによるウシラクトフェリンの分離を
示し、図1は溶出したカラムナンバーと吸光度
(A280)との関係を示し、図2は上記SDS−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動(PAGE)図を示す。The drawings show the separation of bovine lactoferrin by affinity chromatography immobilized on κ-casein, FIG. 1 shows the relationship between the column number eluted and the absorbance (A 280 ), and FIG. 2 shows the SDS-polyacrylamide gel An electrophoresis (PAGE) diagram is shown.
【0025】[0025]
【実施例4】κ−カゼイン固定化カラム(直径1cm×
長さ10cm)は、実施例1と同様な手順で調製した。
ヒト初乳から脂肪を分離した脱脂乳において、塩酸でp
H4.5調整することにより、カゼインを等電点沈殿さ
せて、ホエイ画分を得た。上清液のpHを水酸化ナトリ
ウムでpH7.0に調整した。このようにして調製した
ヒト初乳ホエイ5mlをκ−カゼイン固定化カラムに通
液した。10mMリン酸緩衝液(pH7.0)でカラム
を洗浄後、1.0M NaCl 20mlを通液してカ
ラムに吸着している成分を溶出した。この成分をSDS
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)で分析
したところ、ヒトラクトフェリンであることが確認でき
た。回収されたヒトラクトフェリンの純度は、95%以
上であった。Example 4 κ-casein immobilized column (diameter 1 cm ×
(Length 10 cm) was prepared in the same procedure as in Example 1.
In skim milk in which fat is separated from human colostrum, p with hydrochloric acid
By adjusting H4.5, casein was subjected to isoelectric point precipitation to obtain a whey fraction. The pH of the supernatant was adjusted to pH 7.0 with sodium hydroxide. 5 ml of the human colostrum whey thus prepared was passed through a κ-casein-immobilized column. After washing the column with 10 mM phosphate buffer (pH 7.0), 20 ml of 1.0 M NaCl was passed through to elute the components adsorbed on the column. This component is SDS
-Analysis by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) confirmed that it was human lactoferrin. The purity of the recovered human lactoferrin was 95% or more.
【0026】[0026]
【実施例5】κ−カゼイン固定カラム(直径1cm×長
さ10cm)は、実施例1と同様な手順で調製した。ゴ
ーダチーズ製造過程で得られるチーズホエイ10mlを
κ−カゼイン固定化カラムに通液した。10mMリン酸
緩衝液(pH7.0)でカラムを洗浄後、1.0M N
aCl 30mlを通液してカラムに吸着している成分
を溶出した。この成分をSDS−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動(PAGE)で分析したところ、ウシラクト
フェリンであることが確認できた。回収されたウシラク
トフェリンの純度は95%以上であった。Example 5 A κ-casein fixed column (1 cm in diameter × 10 cm in length) was prepared in the same procedure as in Example 1. 10 ml of cheese whey obtained in the process of producing Gouda cheese was passed through a κ-casein-immobilized column. After washing the column with 10 mM phosphate buffer (pH 7.0), 1.0 M N
The components adsorbed on the column were eluted by passing 30 ml of aCl. Analysis of this component by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) confirmed that it was bovine lactoferrin. The purity of the recovered bovine lactoferrin was 95% or more.
【0027】[0027]
【発明の効果】乳等ラクトフェリン含有原料中に含まれ
るラクトフェリンを安全、簡便、しかも高純度に分離及
び/又は抽出することができる。As described above, lactoferrin contained in lactoferrin-containing raw materials such as milk can be separated safely and simply and / or with high purity.
【図1】カラムナンバーと溶出したウシラクトフェリン
の吸光度の関係を示す。FIG. 1 shows the relationship between the column number and the absorbance of eluted bovine lactoferrin.
【図2】回収したウシラクトフェリンの純度を示す電気
泳動写真である。FIG. 2 is an electrophoresis photograph showing the purity of recovered bovine lactoferrin.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 植田 智子 東京都東村山市栄町1−21−3 明治乳業 株式会社栄養科学研究所内 ──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (72) Inventor Tomoko Ueda 1-21-3 Sakaemachi, Higashimurayama-shi, Tokyo Meiji Dairies Co., Ltd.
Claims (7)
料を接触させてラクトフェリンを吸着させ、次いで吸着
させたラクトフェリンを溶出すること、を特徴とするラ
クトフェリン含有原料からラクトフェリンを分離、精製
する方法。1. A method for separating and purifying lactoferrin from a lactoferrin-containing raw material, comprising contacting a lactoferrin-containing raw material with κ-casein to adsorb lactoferrin, and then eluting the adsorbed lactoferrin.
アフィニティークロマトグラフィーによりラクトフェリ
ンを分離、精製すること、を特徴とする請求項1に記載
の方法。2. Using a carrier on which κ-casein is immobilized,
The method according to claim 1, wherein lactoferrin is separated and purified by affinity chromatography.
乳、ホエイ、涙、唾液、細胞培養物、微生物培養物、濃
縮液、抽出液から選ばれる少なくともひとつであるこ
と、を特徴とする請求項1又は2に記載の方法。3. The lactoferrin-containing raw material is at least one selected from milk, skim milk, whey, tears, saliva, cell culture, microbial culture, concentrate, and extract. Or the method of 2.
時のpHが、5.0〜8.0であること、を特徴とする
請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。4. The method according to claim 1, wherein the pH at the time of contacting κ-casein with lactoferrin is 5.0 to 8.0.
時のイオン強度が、0.3以下であること、を特徴とす
る請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。5. The method according to claim 1, wherein the ionic strength at the time of contact between κ-casein and lactoferrin is 0.3 or less.
4〜1.5の塩類溶液で溶出した後、電気透析等で脱塩
すること、を特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に
記載の方法。6. An adsorbed lactoferrin having an ionic strength of 0.
The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the salt is eluted with a salt solution of 4 to 1.5, and then desalted by electrodialysis or the like.
リウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシ
ウム、及びこれらの混合物から選ばれた塩類の溶液であ
ること、を特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に
記載の方法。7. The salt solution used for the elution is a solution of a salt selected from sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, and a mixture thereof. The method according to any one of claims 1 to 4.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP20265197A JPH1129600A (en) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | Separation and purification of lactoferrin from milk |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP20265197A JPH1129600A (en) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | Separation and purification of lactoferrin from milk |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
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JPH1129600A true JPH1129600A (en) | 1999-02-02 |
Family
ID=16460884
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP20265197A Pending JPH1129600A (en) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | Separation and purification of lactoferrin from milk |
Country Status (1)
Country | Link |
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JP (1) | JPH1129600A (en) |
-
1997
- 1997-07-14 JP JP20265197A patent/JPH1129600A/en active Pending
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