JPH11290005A - Water-soluble propolis and its production - Google Patents
Water-soluble propolis and its productionInfo
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- JPH11290005A JPH11290005A JP10093577A JP9357798A JPH11290005A JP H11290005 A JPH11290005 A JP H11290005A JP 10093577 A JP10093577 A JP 10093577A JP 9357798 A JP9357798 A JP 9357798A JP H11290005 A JPH11290005 A JP H11290005A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】この発明は、抗アレルギー活
性を有する水溶性プロポリス及びその製造方法に関する
ものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a water-soluble propolis having antiallergic activity and a method for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】近年、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管
支喘息、枯草熱、遅延型接触皮膚炎等のアレルギー性疾
患の罹患者が増加しつつあり、社会問題化している。こ
れらの原因の１つとして、食生活の欧米化や加工食品の
増加が挙げられるが、これらの問題の解決策の一環とし
て、低アレルギー性食品又は抗アレルギー性食品の開発
が進められている。さらに、健康食品や機能性食品の分
野においても、抗アレルギー作用を有する食品の開発や
改良が行われており、蜜蜂の巣を構成するプロポリスか
らも様々な抗アレルギー性食品の開発が行われている。2. Description of the Related Art In recent years, allergic diseases such as atopic dermatitis, hay fever, bronchial asthma, hay fever, and delayed contact dermatitis have been increasing and have become a social problem. One of these causes is the westernization of dietary habits and the increase in processed foods. As a solution to these problems, development of hypoallergenic foods or antiallergic foods has been promoted. Furthermore, in the field of health foods and functional foods, development and improvement of foods having an anti-allergic effect have been carried out, and various anti-allergic foods have been developed from propolis constituting a honeycomb. .
【０００３】天然のプロポリスは、様々な生理活性物質
等を含有しているため、これらは、目的に応じて抽出、
分画して利用されている。プロポリスの抽出物として
は、アルコール等の親水性有機溶媒に可溶な成分及び水
に可溶な成分が主として利用されており、いずれも抗ア
レルギー作用の存在が知られている。[0003] Natural propolis contains various physiologically active substances and the like.
It is fractionated and used. As a propolis extract, a component soluble in a hydrophilic organic solvent such as alcohol and a component soluble in water are mainly used, and both are known to have antiallergic effects.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】ところが、前記従来の
プロポリスの水に可溶な成分には、抗アレルギー活性を
抑制する物質が存在すると推定されることから、抗アレ
ルギー効果が充分に発揮されていなかったことが判明し
た。However, since the water-soluble component of the conventional propolis is presumed to contain a substance that suppresses antiallergic activity, the antiallergic effect is sufficiently exerted. It turned out that there was no.
【０００５】この発明は、上記のような従来技術に存在
する問題点に着目してなされたものである。その目的と
するところは、より強力な抗アレルギー活性を発揮させ
ることができる水溶性プロポリス及びその製造方法を提
供することにある。The present invention has been made by focusing on the problems existing in the prior art as described above. An object of the present invention is to provide a water-soluble propolis capable of exhibiting a stronger antiallergic activity and a method for producing the same.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに、請求項１に記載の水溶性プロポリスの発明は、プ
ロポリスの水抽出物の高分子画分よりなり、抗アレルギ
ー活性を有するものである。In order to achieve the above object, the invention of the water-soluble propolis according to claim 1 comprises a high-molecular-weight fraction of an aqueous extract of propolis and has antiallergic activity. It is.
【０００７】請求項２に記載の水溶性プロポリスの発明
は、請求項１に記載の発明において、前記高分子画分
は、平均分子量が２００００〜２０００００であり、多
糖類を含有するものである。According to a second aspect of the present invention, there is provided a water-soluble propolis according to the first aspect, wherein the high molecular fraction has an average molecular weight of 20,000 to 200,000 and contains a polysaccharide.
【０００８】請求項３に記載の水溶性プロポリスの発明
は、請求項１又は請求項２に記載の発明において、前記
高分子画分は、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有する
ものである。According to a third aspect of the present invention, there is provided the water-soluble propolis according to the first or second aspect, wherein the high molecular fraction has a hyaluronidase activity inhibitory action.
【０００９】請求項４に記載の水溶性プロポリスの製造
方法の発明は、プロポリス原塊から水抽出物を抽出し、
分画により抗アレルギー活性を有する高分子画分を得る
ものである。According to a fourth aspect of the present invention, there is provided a method for producing a water-soluble propolis, comprising extracting an aqueous extract from an original propolis mass,
By the fractionation, a high molecular fraction having antiallergic activity is obtained.
【００１０】[0010]
【発明の実施の形態】以下、この発明を具体化した実施
形態について詳細に説明する。プロポリスは、蜜蜂が種
々の植物から集めてきた樹脂状物質及び蜜蜂自身の腺分
泌物から構成される天然物質であり、樹脂、ミツロウ、
精油、花粉、フラボノイド等が含まれている。このプロ
ポリスは、蜜蜂の巣の骨格及び間仕切り部分を形成し、
微生物、ウィルス、昆虫等の外敵が巣へ侵入するのを防
ぐ役割を持つと考えられている。Embodiments of the present invention will be described below in detail. Propolis is a natural substance composed of resinous substances collected by bees from various plants and glandular secretions of bees themselves, and resins, beeswax,
Contains essential oils, pollen, flavonoids, etc. This propolis forms the skeleton and partition of the honeycomb,
It is thought to have a role in preventing foreign enemies such as microorganisms, viruses and insects from entering the nest.
【００１１】古来より、プロポリスは、民間療法薬とし
て使用されているが、近年になってその薬理作用には抗
菌作用、抗ウィルス作用、抗酸化作用、抗炎症作用、抗
潰瘍作用、局所麻酔作用、免疫調節作用、制癌作用、抗
アレルギー作用等の存在が明らかにされている。Since ancient times, propolis has been used as a folk remedy, but in recent years its pharmacological effects include antibacterial, antiviral, antioxidant, anti-inflammatory, anti-ulcer, and local anesthetic effects. The existence of an immunomodulatory effect, an anti-cancer effect, an anti-allergic effect, and the like has been revealed.
【００１２】天然のプロポリス原塊は、様々な生理活性
物質及び夾雑物を含有していることから、通常目的とす
る成分を選択的に抽出した抽出物が利用されている。こ
のプロポリス原塊の抽出物としては、エタノール等の親
水性有機溶媒に可溶な成分（以下、プロポリスのアルコ
ール抽出物と記載する）及び水に可溶な成分（以下、プ
ロポリスの水抽出物と記載する）が主として利用されて
おり、いずれも抗アレルギー作用の存在が知られてい
る。[0012] Since natural propolis mass contains various physiologically active substances and contaminants, an extract obtained by selectively extracting a target component is usually used. The extract of the original propolis mass includes a component soluble in a hydrophilic organic solvent such as ethanol (hereinafter, referred to as an alcohol extract of propolis) and a component soluble in water (hereinafter, an aqueous extract of propolis). ) Are mainly used, and all of them are known to have an antiallergic effect.
【００１３】プロポリスのアルコール抽出物は、抗アレ
ルギー作用と同時に、イソプレニルカフェ酸やフェニル
エチルカフェ酸等のアレルギー作用を有する物質が含有
されているが、プロポリスの水抽出物にはこれらの成分
の存在は知られておらず、アレルギー発症の報告もほと
んどない。The alcoholic extract of propolis contains substances having an allergic effect such as isoprenyl caffeic acid and phenylethyl caffeic acid at the same time as the anti-allergic effect, and the aqueous extract of propolis contains these components. Its existence is unknown and there are few reports of allergic episodes.
【００１４】プロポリスの水抽出物は、プロポリス原塊
に含有される水溶性物質全体を表し、平均分子量が２０
０００〜２０００００の高分子物質ばかりでなく、平均
分子量が２００００未満の低分子物質をも含むものであ
る。このプロポリスの水抽出物は、プロポリス原塊を粉
砕して水に溶解させたものであり、溶解しなかったもの
は取り除かれることから、平均分子量が概ね２００００
０以下の物質から構成される。The aqueous extract of propolis represents the entire water-soluble substance contained in the original propolis mass and has an average molecular weight of 20.
000 to 200,000 as well as low molecular substances having an average molecular weight of less than 20,000. This aqueous extract of propolis is obtained by pulverizing the original propolis mass and dissolving it in water, and removing the undissolved propolis, so that the average molecular weight is approximately 20,000.
It is composed of 0 or less substances.
【００１５】水溶性プロポリスは、プロポリス原塊に含
有される水溶性物質のうち、平均分子量が２００００〜
２０００００の範囲にある高分子画分である。この水溶
性プロポリスは、約７割の重量を占める多糖類及び少量
の窒素成分を含有している。この水溶性プロポリスは、
平均分子量が２００００以上となるように限外濾過法、
透析法又はエタノール析出法によって、低分子物質を除
去したものである。さらに、この水溶性プロポリスは、
平均分子量が２５０００〜４００００の範囲内にある物
質から構成されるとさらに好ましい。The water-soluble propolis has an average molecular weight of 20,000 to 20,000 of the water-soluble substances contained in the propolis mass.
The high molecular fraction is in the range of 200,000. This water-soluble propolis contains a polysaccharide occupying about 70% of the weight and a small amount of a nitrogen component. This water-soluble propolis is
Ultrafiltration so that the average molecular weight is 20,000 or more,
Low molecular substances are removed by dialysis or ethanol precipitation. Furthermore, this water-soluble propolis is
More preferably, it is composed of a substance having an average molecular weight in the range of 25,000 to 40,000.
【００１６】水溶性プロポリスは、プロポリス水抽出物
をさらに精製したものであり、プロポリス水抽出物に含
まれるヒアルロニダーゼ活性阻害物質抑制物質と考えら
れる低分子物質が除去されることから、精製前と比べて
２〜５０倍高いヒアルロニダーゼ活性阻害効果が発揮さ
れる。また、この水溶性プロポリスは、その精製の度合
いによって３〜３０倍、さらに５〜２０倍高いヒアルロ
ニダーゼ活性阻害効果が発揮され得る。従って、この水
溶性プロポリスは、従来のプロポリス水抽出物より強力
な抗アレルギー作用を有する健康食品として、食料品や
飲料品等に含有させて利用することができる。The water-soluble propolis is obtained by further purifying a water extract of propolis, and removes low-molecular substances, which are considered to be inhibitors of a substance inhibiting a hyaluronidase activity, contained in the water extract of propolis. 2 to 50 times higher hyaluronidase activity inhibitory effect. In addition, this water-soluble propolis can exhibit a hyaluronidase activity inhibitory effect that is 3 to 30 times, more preferably 5 to 20 times higher, depending on the degree of purification. Therefore, the water-soluble propolis can be used as a health food having a stronger antiallergic effect than conventional water extracts of propolis, contained in foods and beverages.
【００１７】次に、水溶性プロポリスの製造方法につい
て詳細に説明する。原料となるプロポリス原塊は、ブラ
ジル、中国、日本、米国、ヨーロッパ諸国、オセアニア
諸国等の様々な産地で採取されるものが使用される。プ
ロポリス水抽出物は、このプロポリス原塊を粉砕機によ
って粉砕した後、水に溶解させて抽出する方法（以下、
水抽出法と記載する）、又は親水性有機溶媒に浸漬及び
洗浄させる際に溶解されずに残る塊を収集する方法（以
下、アルコール洗浄法と記載する）によって抽出され
る。さらに、このプロポリス水抽出物は、水溶液状態で
の不溶解物を取り除くために珪藻土濾過される。Next, a method for producing water-soluble propolis will be described in detail. The raw propolis mass used as a raw material is one collected from various production areas such as Brazil, China, Japan, the United States, European countries, and Oceania countries. The propolis water extract is obtained by pulverizing the original propolis mass with a pulverizer and then dissolving it in water to extract (hereinafter, referred to as “propolis”).
It is extracted by a method of collecting a lump that is not dissolved when immersed and washed in a hydrophilic organic solvent (hereinafter, referred to as an alcohol washing method). Further, the aqueous propolis extract is subjected to diatomaceous earth filtration to remove insolubles in an aqueous solution.
【００１８】水抽出法において、プロポリス水抽出物
は、プロポリス原塊を粉砕機によって粉砕した後、プロ
ポリス原塊１重量部に対して２〜２０重量部の水を加
え、４０〜５０℃で３〜１５時間撹拌機で撹拌して水に
溶解させた水溶液を、珪藻土濾過することによって得ら
れる。このプロポリス原塊に加えられる水の量が、２重
量部未満の場合、プロポリス原塊の水溶性成分が飽和状
態となり、充分に抽出されない。逆に、水の量が２０重
量部を越える場合、必要以上に希釈することによって、
大がかりな抽出設備が必要となり、経済的でない。ま
た、プロポリス原塊を溶解させる際の温度が４０℃未満
の場合、水溶性成分が確実に溶解されるまでに長い時間
が必要とされ、逆に５０℃を越える場合、抗ヒアルロニ
ダーゼ活性が失活するおそれがある。同様に、撹拌時間
が３時間未満の場合には、水溶性成分が充分に抽出され
ず、逆に１５時間を越える場合には、水溶性成分が確実
に溶解された後にさらに撹拌することになってしまい、
時間の浪費となる。In the water extraction method, a propolis water extract is obtained by pulverizing an original propolis mass with a pulverizer, adding 2 to 20 parts by weight of water to 1 part by weight of the propolis mass, and adding the water at 40 to 50 ° C. The aqueous solution dissolved in water by stirring with a stirrer for ~ 15 hours is obtained by diatomaceous earth filtration. If the amount of water added to the original propolis mass is less than 2 parts by weight, the water-soluble components of the original propolis mass become saturated and are not sufficiently extracted. Conversely, when the amount of water exceeds 20 parts by weight, by diluting more than necessary,
Extensive extraction equipment is required, which is not economical. When the temperature at which the propolis mass is dissolved is lower than 40 ° C., a long time is required until the water-soluble component is completely dissolved. Conversely, when the temperature exceeds 50 ° C., the anti-hyaluronidase activity is inactivated. There is a possibility that. Similarly, when the stirring time is less than 3 hours, the water-soluble component is not sufficiently extracted. Conversely, when the stirring time is more than 15 hours, further stirring is performed after the water-soluble component is completely dissolved. And
It wastes time.
【００１９】アルコール洗浄法において、プロポリス水
抽出物は、粉砕されたプロポリス原塊を親水性有機溶媒
に浸漬し、室温で時々撹拌しながら２日〜１週間充分に
洗浄した後、濾紙を用いて有機溶媒及び有機溶媒溶解性
物質を除去し、後に残された塊に存在する。この撹拌時
間が２日未満の場合、プロポリス原塊は充分に洗浄され
ず、逆に１週間を越える場合、時間の浪費となってしま
う。さらに、プロポリス水抽出物は、このようにして得
られた塊を収集し、水に充分に溶解させた水溶液を珪藻
土濾過することによって得られる。In the alcohol washing method, the propolis water extract is obtained by immersing the ground propolis mass in a hydrophilic organic solvent, washing thoroughly for 2 days to 1 week with occasional stirring at room temperature, and then using a filter paper. The organic solvent and organic solvent solubles are removed and are present in the remaining mass. If the stirring time is less than 2 days, the original propolis mass is not sufficiently washed, and if it exceeds 1 week, time is wasted. Furthermore, the aqueous propolis extract is obtained by collecting the lump thus obtained and filtering the aqueous solution sufficiently dissolved in water through diatomaceous earth.
【００２０】アルコール洗浄法に用いられる親水性有機
溶媒としては、エタノールや含水エタノール等が好まし
く、さらに重金属等の不要な物質が含まれていない高純
度のものを使用すると、より好ましい。親水性有機溶媒
としてエタノールを使用する場合、洗浄に用いられる濃
度は７０〜１００容量％が好ましいが、その後の工程に
おいて、水で抽出しやすいプロポリス水抽出物を得るた
めに、９０容量％以上の濃度であると、より好ましい。
この洗浄する際のエタノール濃度が７０容量％未満の場
合、プロポリス原塊に含まれる水に不溶な成分が充分に
除去されない。As the hydrophilic organic solvent used in the alcohol washing method, ethanol or hydrated ethanol is preferable, and it is more preferable to use a high-purity solvent free of unnecessary substances such as heavy metals. When ethanol is used as the hydrophilic organic solvent, the concentration used for washing is preferably 70 to 100% by volume, but in the subsequent step, in order to obtain a propolis water extract that is easily extracted with water, 90% by volume or more is used. The concentration is more preferable.
If the ethanol concentration at the time of this washing is less than 70% by volume, water-insoluble components contained in the original propolis mass are not sufficiently removed.
【００２１】上述のようにして得られるプロポリス水抽
出物は、抗アレルギー効果はやや低いが、そのまま食料
品や飲料品等に添加して、抗アレルギー性食品として利
用することができる。また、プロポリス水抽出物は、直
接濃縮法、減圧濃縮法、スプレードライ法又は凍結乾燥
法によって水分を除去し、プロポリス水抽出物乾燥粉末
として利用することもできる。The aqueous propolis extract obtained as described above has a slightly low antiallergic effect, but can be used as an antiallergic food by directly adding it to foods and beverages. Further, the water content of the propolis extract can be used as a dry powder of the propolis water extract by removing water by a direct concentration method, a vacuum concentration method, a spray drying method or a freeze drying method.
【００２２】以下、プロポリス水抽出物から水溶性プロ
ポリスを抽出する方法を説明する。水溶性プロポリス
は、水に溶解された状態のプロポリス水抽出物を限外濾
過法、透析法又はエタノール析出法を用いて、低分子物
質を除去することによって得られる。限外濾過法として
は、ゲル濾過担体、限外濾過モジュール、加圧式濾過装
置等を使用する方法が好適に適用される。Hereinafter, a method for extracting water-soluble propolis from a water extract of propolis will be described. The water-soluble propolis can be obtained by removing a low-molecular substance from a propolis water extract dissolved in water by ultrafiltration, dialysis, or ethanol precipitation. As the ultrafiltration method, a method using a gel filtration carrier, an ultrafiltration module, a pressurized filtration device, or the like is suitably applied.
【００２３】なお、プロポリス水抽出物乾燥粉末を水に
溶解させる際の濃度としては、プロポリス水抽出物乾燥
粉末が確実に水に溶解される０．１〜１０重量％が好ま
しく、１〜２重量％であるとより好ましい。このプロポ
リス水抽出物乾燥粉末を水に溶解させる際の濃度が０．
１重量％未満の場合、必要以上に希釈することによっ
て、大がかりな設備が必要となり、経済的でない。逆
に、１０重量％を越える場合、プロポリス水抽出物が飽
和状態となり、充分に溶解されない。The concentration of the dried propolis water extract powder in water is preferably from 0.1 to 10% by weight, and more preferably from 1 to 2% by weight, at which the dried powder of propolis water extract is surely dissolved in water. % Is more preferable. The concentration at which the dry powder of propolis water extract was dissolved in water was 0.1.
If the amount is less than 1% by weight, large-scale equipment is required by diluting more than necessary, which is not economical. On the contrary, if it exceeds 10% by weight, the propolis water extract becomes saturated and is not sufficiently dissolved.
【００２４】ゲル濾過担体を用いる方法は、ゲル濾過担
体を充填したカラム上に、水に溶解された状態のプロポ
リス水抽出物を静置した後、低流速で水を流しながら高
分子物質と低分子物質とのカラム中での移動速度の差を
利用して、目的とする高分子画分を分取するものであ
る。このときに使用されるゲル濾過担体は、セファデッ
クスやバイオゲル等のゲル濾過担体のうち、平均分子量
が２００００未満の低分子物質を容易に分離できるもの
が好ましい。In the method using a gel filtration carrier, a propolis water extract dissolved in water is allowed to stand on a column filled with the gel filtration carrier, and then the polymer substance is mixed with the polymer substance while flowing water at a low flow rate. The objective polymer fraction is fractionated by utilizing the difference in the moving speed in the column with the molecular substance. The gel filtration carrier used at this time is preferably a gel filtration carrier such as Sephadex or biogel that can easily separate low molecular substances having an average molecular weight of less than 20,000.
【００２５】限外濾過モジュールを用いる方法は、水に
溶解された状態のプロポリス水抽出物に含まれる低分子
物質を、循環ポンプで強制的にモジュール内のフィルタ
ーを通過させながら、フィルター外に透過させて除去す
ると同時に、高分子物質を濃縮するものである。このフ
ィルターとしては、平均分子量が２００００未満の低分
子物質を透過させるものが好ましい。また、プロポリス
水抽出物を循環させる時間は、６時間〜３日間であると
好ましく、１２〜２４時間であるとさらに好ましい。こ
のプロポリス水抽出物を循環させる時間が６時間未満の
場合、プロポリス水抽出物中の低分子物質が、充分に除
去されない。逆に、３日を越える場合、時間の浪費とな
る。In the method using an ultrafiltration module, a low molecular substance contained in a water extract of propolis dissolved in water is permeated out of the filter while forcibly passing through a filter in the module by a circulation pump. And at the same time, the polymer substance is concentrated. As this filter, a filter that allows a low molecular substance having an average molecular weight of less than 20,000 to pass therethrough is preferable. Further, the time for circulating the aqueous propolis extract is preferably from 6 hours to 3 days, and more preferably from 12 to 24 hours. When the time for circulating the aqueous propolis extract is less than 6 hours, low molecular substances in the aqueous propolis extract are not sufficiently removed. On the other hand, if it exceeds three days, time is wasted.
【００２６】加圧式濾過装置を用いる方法は、水に溶解
された状態のプロポリス水抽出物に含まれる低分子物質
を、加圧しながら強制的に限外濾過用ウルトラフィルタ
ーを透過させることによって除去し、目的とする高分子
画分を得るものである。このときに使用される限外濾過
用ウルトラフィルターは、平均分子量が２００００未満
の物質を透過させるものが好ましい。In the method using a pressurized filtration device, low molecular substances contained in a water extract of propolis dissolved in water are removed by forcibly passing through an ultrafilter for ultrafiltration while applying pressure. To obtain a desired high molecular fraction. The ultrafilter for ultrafiltration used at this time is preferably one that allows a substance having an average molecular weight of less than 20,000 to pass therethrough.
【００２７】透析法は、水に溶解された状態のプロポリ
ス水抽出物を透析チューブ内に封入し、水又は希薄な緩
衝液からなる透析外液中で、時々透析外液を交換しなが
ら１２時間〜６日間、好ましくは２〜３日間透析するこ
とによって、低分子物質を透析外液中に拡散させて目的
とする高分子画分を得るものである。この透析に要する
時間が１２時間未満の場合、プロポリス水抽出物中の低
分子物質が、充分に除去されない。逆に、６日を越える
場合、時間の浪費となる。また、このときに使用される
透析チューブは、セルロースエステルやセロファン等の
半透膜のうち、平均分子量が２００００未満の低分子物
質を透過させるものが好ましい。In the dialysis method, a propolis water extract dissolved in water is sealed in a dialysis tube, and the propolis water extract is exchanged for 12 hours in an external dialysis solution consisting of water or a dilute buffer, while occasionally changing the external solution. By dialysis for up to 6 days, preferably for 2 to 3 days, the low-molecular substance is diffused into the outer dialysis solution to obtain a desired high-molecular fraction. When the time required for the dialysis is less than 12 hours, low molecular substances in the propolis water extract are not sufficiently removed. Conversely, if it exceeds six days, it will waste time. The dialysis tube used at this time is preferably a semipermeable membrane such as cellulose ester or cellophane that allows a low molecular substance having an average molecular weight of less than 20,000 to pass therethrough.
【００２８】エタノール析出法は、濃いエタノール溶液
中での水溶性プロポリスの溶解性の低さを利用して、選
択的に析出させる方法である。このエタノール析出法
は、水に溶解された状態のプロポリス水抽出物に適当量
のエタノールを加え、沈澱を生成させることによって水
溶性プロポリスを得るものである。この沈澱は、水に溶
解された状態のプロポリス水抽出物に、終濃度が３０〜
８０容量％になるようにエタノールを添加した溶液を、
静置又は遠心分離した後に上清を除くことによって得ら
れる。さらに、添加されるエタノールの終濃度は、活性
及び収率を向上させるために、５０〜７０容量％である
ことが好ましい。この水溶性プロポリスを析出させる際
のエタノール濃度が３０容量％未満の場合、充分な量の
水溶性プロポリスが析出されない。逆に、８０重量％を
越える場合、ほとんど全ての水溶性成分が析出してしま
い、プロポリス水抽出物中の低分子物質を充分に除去す
ることができない。The ethanol precipitation method is a method of selectively precipitating by utilizing the low solubility of water-soluble propolis in a concentrated ethanol solution. In this ethanol precipitation method, an appropriate amount of ethanol is added to a water-soluble propolis extract in a state of being dissolved in water to form a precipitate, thereby obtaining a water-soluble propolis. This precipitate is added to the aqueous propolis extract dissolved in water to a final concentration of 30 to 30%.
The solution to which ethanol was added to be 80% by volume,
It is obtained by removing the supernatant after standing or centrifuging. Further, the final concentration of ethanol to be added is preferably 50 to 70% by volume in order to improve the activity and the yield. If the ethanol concentration at the time of precipitating this water-soluble propolis is less than 30% by volume, a sufficient amount of water-soluble propolis will not be precipitated. On the other hand, if it exceeds 80% by weight, almost all the water-soluble components are precipitated, and the low molecular substances in the aqueous propolis extract cannot be sufficiently removed.
【００２９】また、水溶性プロポリスは、前記のエタノ
ール析出法において、水に溶解された状態のプロポリス
水抽出物に、あらかじめ食塩や硫酸アンモニウム等の塩
析用塩類を０．５〜５重量％、好ましくは１〜２重量％
添加することによって、塩析させて得ることも可能であ
る。この添加される塩類濃度が０．５重量％未満の場
合、塩析効果がほとんど発揮されない。逆に、５重量％
を越える場合、塩析効果が高すぎて、ほとんど全ての水
溶性成分が析出してしまい、プロポリス水抽出物中の低
分子物質を充分に除去することができない。The water-soluble propolis is prepared by adding 0.5 to 5% by weight of a salt for salting-out such as sodium chloride or ammonium sulfate to the aqueous propolis extract dissolved in water in the above-mentioned ethanol precipitation method. Is 1-2% by weight
It is also possible to obtain by salting out by adding. When the concentration of the added salt is less than 0.5% by weight, the salting out effect is hardly exhibited. Conversely, 5% by weight
If the ratio exceeds, the salting-out effect is too high, almost all water-soluble components are precipitated, and low molecular substances in the aqueous propolis extract cannot be sufficiently removed.
【００３０】さらに、前記限外濾過法、透析法及びエタ
ノール析出法の少なくとも１種の分離方法を組み合わせ
ることによって、さらに精製された高品質の水溶性プロ
ポリスを得ることも可能である。Further, by combining at least one of the above-mentioned separation methods of the ultrafiltration method, the dialysis method and the ethanol precipitation method, it is possible to obtain a further purified high-quality water-soluble propolis.
【００３１】以上のような方法によって得られた水溶性
プロポリスは、平均分子量が２００００〜２０００００
の多糖類及び窒素成分を含有する高分子物質である。さ
らに、この水溶性プロポリスは、プロポリス原塊中に含
有される抗アレルギー性物質の本体として、従来より公
知であったフラボノイド類以外の物質であることが、分
子量等の性質的特徴から推定される。さらに、この水溶
性プロポリスは、従来より知られているプロポリス水抽
出物よりも、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果が２〜５０
倍強力に発揮される。The water-soluble propolis obtained by the above method has an average molecular weight of 20,000 to 200,000.
Is a polymer substance containing a polysaccharide and a nitrogen component. Furthermore, this water-soluble propolis is a substance other than the conventionally known flavonoids as the main body of the antiallergic substance contained in the original propolis mass, which is presumed from properties such as molecular weight. . Furthermore, this water-soluble propolis has a hyaluronidase activity inhibitory effect of 2 to 50 times higher than that of a conventionally known propolis aqueous extract.
It is twice as powerful.
【００３２】また、この水溶性プロポリスは、水に溶解
しやすい性質を有しており、水溶液のまま利用すること
ができるうえ、直接濃縮法、減圧濃縮法、スプレードラ
イ法又は凍結乾燥法によって水分を除去し、水溶性プロ
ポリス乾燥粉末としても利用することができる。従っ
て、この水溶性プロポリスは、従来より強力な抗アレル
ギー剤として食料品や飲料品等に添加したりして、広範
囲に利用することが可能である。The water-soluble propolis has the property of being easily dissolved in water, and can be used as an aqueous solution. In addition, the water-soluble propolis can be used by direct concentration, reduced pressure concentration, spray drying or freeze drying. And can also be used as a dry powder of water-soluble propolis. Therefore, this water-soluble propolis can be widely used by adding it to foods and beverages as a stronger antiallergic agent than before.
【００３３】次に、前記実施形態の水溶性プロポリス及
びその製造方法の効果を説明する。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスによれば、アレルギー
性がほとんどないプロポリスの水抽出物から抽出される
ことから、抗アレルギー活性を確実に発揮させることが
できる。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスによれば、プロポリス
水抽出物をさらに精製することによって、２〜５０倍高
められたヒアルロニダーゼ活性阻害効果が発揮されて経
済的である。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスによれば、水に溶解し
やすい性質を有しており、水溶液のまま又は乾燥粉末と
して使用することができることから、広範囲な用途に利
用することができる。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスによれば、抗アレルギ
ー活性を有する成分が公知の成分と異なることから、従
来とは違った形で利用することができる。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスの製造方法によれば、
多くの地域で採取される原料が使用できることから、原
料の入手が容易であるうえ、経済的である。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスの製造方法によれば、
水溶性プロポリスを抽出する抽出方法が数多く存在する
ことから、それらを自由に選択できるうえ、抽出方法も
単純であり経済的である。さらに、抽出方法を様々に組
み合わせることによって、さらに高品質の水溶性プロポ
リスを製造することも可能である。 ・ 実施形態の水溶性プロポリスの製造方法によれば、
エタノール析出法を用いることによって、精製にかかる
時間、手間及び費用を大幅に減らして、高品質の水溶性
プロポリスを容易に製造することができる。Next, the effects of the water-soluble propolis of the above embodiment and the method for producing the same will be described. According to the water-soluble propolis of the embodiment, since it is extracted from an aqueous extract of propolis having almost no allergenicity, the antiallergic activity can be surely exhibited. According to the water-soluble propolis of the embodiment, by further purifying the aqueous propolis extract, the effect of inhibiting the hyaluronidase activity, which is 2 to 50 times higher, is exhibited, which is economical. According to the water-soluble propolis of the embodiment, it has the property of being easily dissolved in water, and can be used as an aqueous solution or as a dry powder, so that it can be used for a wide range of applications. -According to the water-soluble propolis of the embodiment, since the component having anti-allergic activity is different from the known component, it can be used in a different form from the conventional one. According to the method for producing a water-soluble propolis of the embodiment,
Since raw materials collected in many areas can be used, raw materials are easily available and economical. According to the method for producing a water-soluble propolis of the embodiment,
Since there are many extraction methods for extracting water-soluble propolis, they can be freely selected, and the extraction method is simple and economical. Furthermore, it is also possible to produce higher quality water-soluble propolis by variously combining extraction methods. According to the method for producing a water-soluble propolis of the embodiment,
By using the ethanol precipitation method, it is possible to easily produce high-quality water-soluble propolis while greatly reducing the time, labor and cost required for purification.
【００３４】[0034]
【実施例】以下、前記実施形態を具体化した実施例及び
比較例について説明する。 （比較例１）ブラジル産プロポリス原塊１０ｋｇを粉砕
機で粉砕し、蒸留水２００リットルを加えて４５℃で１
５時間、撹拌機で時々撹拌を加えて懸濁液とした。この
懸濁液に珪藻土を１０ｋｇ添加して珪藻土濾過を行っ
た。この濾液を凍結乾燥したところ、７５０ｇのプロポ
リス水抽出物乾燥粉末が得られた。 （実施例１）比較例１で得られたプロポリス水抽出物乾
燥粉末１．０ｇに、蒸留水１００ミリリットルを加えて
充分に撹拌した水溶液を、ＰＤ−１０カラム（ファルマ
シア社製のセファデックスＧ−２５を充填した使い捨て
カラムであり、低分子物質を容易に除去できる）を用い
てゲル濾過を行った。そして、ゲル濾過担体に吸着され
ずに溶出してきた高分子画分を採取して凍結乾燥したと
ころ、２４８ｍｇの水溶性プロポリス乾燥粉末が得られ
た。 （実施例２）比較例１で得られたプロポリス水抽出物乾
燥粉末１０．０ｇに、蒸留水１リットルを加えて充分に
撹拌した水溶液に、９５容量％エタノールを撹拌しなが
らゆっくりと添加していった。２リットルのエタノール
を添加した後、しばらく撹拌を続けて不溶解物を充分に
生成させた。この不溶解物を含むエタノール水溶液を遠
心分離して、可能な限り多くの上清を除いた。このよう
にして得られた沈澱をさらに減圧乾燥したところ、２．
２ｇの水溶性プロポリス乾燥粉末が得られた。 （ヒアルロニダーゼ活性阻害試験１）試料として実施例
１、実施例２及び比較例１で得られた乾燥粉末を水に溶
解した後、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）中に添加
し、濃度の異なる４種類の水溶液を作製した。これら４
種類の水溶液に、ヒアルロニダーゼ（シグマ社製の牛睾
丸由来、タイプＩＶ−Ｓ）を３９０単位添加して反応液
とした。なお、これら４種類の反応液中の乾燥粉末の終
濃度は、表１に示すように、０．０３、０．１、０．
３、１．０ｍｇ／ｍｌである。また、これらの乾燥粉末
を添加しない反応液を、上記と同様に作製して対照とし
た。EXAMPLES Examples and comparative examples which embody the above embodiment will be described below. (Comparative Example 1) 10 kg of Brazilian propolis mass was pulverized with a pulverizer, and 200 l of distilled water was added thereto.
For 5 hours, stirring was occasionally added with a stirrer to form a suspension. 10 kg of diatomaceous earth was added to this suspension, and diatomaceous earth filtration was performed. The filtrate was freeze-dried to obtain 750 g of a propolis aqueous extract dry powder. (Example 1) An aqueous solution obtained by adding 100 ml of distilled water to 1.0 g of the dried propolis water extract powder obtained in Comparative Example 1 and sufficiently stirring was added to a PD-10 column (Sephadex G-manufactured by Pharmacia). Gel filtration was performed using a disposable column packed with No. 25 and capable of easily removing low-molecular substances. Then, a polymer fraction eluted without being adsorbed by the gel filtration carrier was collected and freeze-dried, whereby 248 mg of a dry powder of water-soluble propolis was obtained. Example 2 One liter of distilled water was added to 10.0 g of the dried propolis water extract powder obtained in Comparative Example 1, and 95% by volume ethanol was slowly added to an aqueous solution which was sufficiently stirred while stirring. Was. After adding 2 liters of ethanol, stirring was continued for a while to sufficiently generate insolubles. The aqueous ethanol solution containing the insoluble material was centrifuged to remove as much supernatant as possible. The precipitate thus obtained was further dried under reduced pressure.
2 g of a dry powder of water-soluble propolis were obtained. (Hyaluronidase activity inhibition test 1) The dried powders obtained in Examples 1, 2 and Comparative Example 1 as samples were dissolved in water, and then added to a 0.1 M acetate buffer (pH 3.5) to give a concentration. Were prepared. These four
390 units of hyaluronidase (derived from bovine testes, type IV-S, manufactured by Sigma) was added to each type of aqueous solution to prepare a reaction solution. As shown in Table 1, the final concentrations of the dry powders in these four types of reaction liquids were 0.03, 0.1, 0.
3, 1.0 mg / ml. Further, a reaction solution to which these dry powders were not added was prepared in the same manner as described above, and used as a control.
【００３５】水溶性プロポリス又はプロポリス水抽出物
によるヒアルロニダーゼ活性阻害を充分に行うために、
上記５種類の反応液を３７℃で２０分間プレインキュベ
ートした。その後、ヒアルロニダーゼの活性化物質であ
る化合物４８／８０（シグマ社製のＮ−メチル−ｐ−メ
トキシフェネチルアミンのホルムアルデヒド縮合物）の
濃縮液を、終濃度が０．１ｍｇ／ｍｌとなるように加
え、さらに３７℃で２０分間プレインキュベートして、
ヒアルロニダーゼを活性化した。このプレインキュベー
トされた溶液に、基質であるヒト臍帯由来のヒアルロン
酸カリウム（和光純薬製）の濃縮液を、終濃度が０．６
ｍｇ／ｍｌとなるように加えて、３７℃で４０分間イン
キュベートして酵素反応を行った。In order to sufficiently inhibit hyaluronidase activity by water-soluble propolis or an aqueous extract of propolis,
The above five reaction solutions were pre-incubated at 37 ° C. for 20 minutes. Thereafter, a concentrated solution of compound 48/80 (a formaldehyde condensate of N-methyl-p-methoxyphenethylamine manufactured by Sigma), which is an activator of hyaluronidase, was added to a final concentration of 0.1 mg / ml. Pre-incubate at 37 ° C for another 20 minutes,
Hyaluronidase was activated. A concentrated solution of potassium hyaluronate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) derived from human umbilical cord as a substrate was added to the pre-incubated solution at a final concentration of 0.6%.
mg / ml, and the mixture was incubated at 37 ° C for 40 minutes to perform an enzyme reaction.
【００３６】その後、基質が分解されることによって遊
離したＮ−アセチルグルコサミンをモルガン・エルソン
の改良法（Davidson,E.A., J.Biol.Chem.,242,437,196
7）により発色させ、分光光度計ＵＶー１２００（島津
製作所製）を用いて５８５ｎｍの吸光度を測定した。こ
の測定結果から、水溶性プロポリス又はプロポリス水抽
出物を含有する反応液におけるヒアルロニダーゼ活性阻
害率（％）を、以下に示す計算式に従って計算した。Thereafter, N-acetylglucosamine released by the decomposition of the substrate was converted to a modified Morgan-Elson method (Davidson, EA, J. Biol. Chem., 242, 437, 196).
The color was developed according to 7), and the absorbance at 585 nm was measured using a spectrophotometer UV-1200 (manufactured by Shimadzu Corporation). From this measurement result, the inhibition rate (%) of the hyaluronidase activity in the reaction solution containing the water-soluble propolis or the aqueous propolis extract was calculated according to the following formula.
【００３７】[0037]
【数１】 さらに、水溶性プロポリス濃度又はプロポリス水抽出物
濃度とヒアルロニダーゼ活性阻害率との関係から、最小
二乗法によって、水溶性プロポリス又はプロポリス水抽
出物が、ヒアルロニダーゼ活性を５０％阻害する場合の
濃度（ＩＣ50）（ｍｇ／ｍｌ）を求めた。そして、比較
例１のプロポリス水抽出物のＩＣ50の値を基準（１．
０）にして、実施例１又は実施例２の水溶性プロポリス
のヒアルロニダーゼ活性阻害効果の比活性の比率を、以
下に示す計算式に従って計算した。(Equation 1) Furthermore, from the relationship between the water-soluble propolis concentration or the water concentration of the propolis and the hyaluronidase activity inhibition rate, the concentration (IC 50 ) at which the water-soluble propolis or the water extract of propolis inhibits the hyaluronidase activity by 50% is determined by the least square method. ) (Mg / ml). Then, based on the value of the IC 50 of propolis water extract of Comparative Example 1 (1.
0), the ratio of the specific activity of the hyaluronidase activity inhibitory effect of the water-soluble propolis of Example 1 or Example 2 was calculated according to the following calculation formula.
【００３８】[0038]
【数２】 続いて、プロポリス原塊１ｋｇから得られる水溶性プロ
ポリス又はプロポリス水抽出物乾燥粉末の重量（原塊１
ｋｇ当たりの収量）を計算した。さらに、この原塊１ｋ
ｇ当たりの収量とヒアルロニダーゼ活性阻害効果の比活
性の比率とを乗じた値を計算し、比較例１のプロポリス
水抽出物において得られた値を基準（１．０）にして、
実施例１又は実施例２の水溶性プロポリスの原塊当たり
の活性量の比率を求めた。(Equation 2) Subsequently, the weight of the water-soluble propolis or propolis water extract dry powder obtained from 1 kg of the original propolis mass (the original mass 1
yield per kg) was calculated. Furthermore, this original lump 1k
The value obtained by multiplying the yield per g by the ratio of the specific activity of the hyaluronidase activity inhibitory effect was calculated, and the value obtained in the propolis water extract of Comparative Example 1 was used as a reference (1.0).
The ratio of the active amount of the water-soluble propolis of Example 1 or 2 to the original mass was determined.
【００３９】以上の計算によって得られた結果を表１に
示す。なお、阻害率の測定において、正確な数値が得ら
れなかった試験の結果については記入しなかった。Table 1 shows the results obtained by the above calculations. In addition, in the measurement of the inhibition rate, the result of the test in which an accurate numerical value was not obtained was not entered.
【００４０】[0040]
【表１】 表１の結果より、実施例１及び実施例２の水溶性プロポ
リスは、比較例１のプロポリス水抽出物と比べてＩＣ50
の値が低下しており、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果の
比活性の比率が、１５倍〜２０倍程度高められていたこ
とが示された。さらに、実施例１及び実施例２の水溶性
プロポリスでは、同量のプロポリス原塊より得られるヒ
アルロニダーゼ活性阻害効果の活性量の比率が、数倍に
増大していたことが示された。[Table 1] From the results shown in Table 1, the water-soluble propolis of Example 1 and Example 2 had an IC 50 compared to the aqueous propolis extract of Comparative Example 1.
Was decreased, indicating that the ratio of the specific activity of the hyaluronidase activity inhibitory effect was increased by about 15 to 20 times. Furthermore, in the water-soluble propolis of Example 1 and Example 2, it was shown that the ratio of the active amount of the hyaluronidase activity inhibitory effect obtained from the same amount of the original propolis mass was increased several times.
【００４１】後者の結果は、同量のプロポリス原塊から
得られる水溶性プロポリスに含まれる活性量が、比較例
１のプロポリス水抽出物に含まれる活性量よりも多かっ
たことを示している。実施例１及び実施例２の水溶性プ
ロポリスは、比較例１のプロポリス水抽出物をさらに精
製したものであることから、原塊当たりの活性量の比率
が１．０を越えることは通常は考えられない。しかし、
この一見矛盾する結果は、比較例１のプロポリス水抽出
物中にヒアルロニダーゼ活性阻害物質抑制物質が含まれ
ていたと考えることによって、矛盾なく説明することが
できる。さらに、このヒアルロニダーゼ活性阻害物質抑
制物質は、プロポリス水抽出物に含まれる低分子物質で
あると考えられる。The latter result indicates that the amount of activity contained in the water-soluble propolis obtained from the same amount of the original propolis mass was greater than the amount of activity contained in the aqueous propolis extract of Comparative Example 1. Since the water-soluble propolis of Example 1 and Example 2 was obtained by further purifying the aqueous propolis extract of Comparative Example 1, it is generally considered that the ratio of the active amount per original mass exceeds 1.0. I can't. But,
This seemingly contradictory result can be explained without contradiction by considering that the propolis water extract of Comparative Example 1 contained a substance inhibiting a hyaluronidase activity inhibitor. Furthermore, it is considered that this hyaluronidase activity inhibitory substance is a low molecular substance contained in the aqueous propolis extract.
【００４２】従って、ゲル濾過法によりプロポリス水抽
出物中の低分子物質を除去するか、又は６３容量％のエ
タノール水溶液中で高分子物質を析出させることによっ
て、より強力なヒアルロニダーゼ活性阻害効果を有した
水溶性プロポリスを得ることができる。 （比較例２）ブラジル産プロポリス原塊１０ｋｇを粉砕
機で粉砕し、９５容量％エタノール２００リットルを加
えて室温で４日間、撹拌機で時々撹拌を加えた後、２４
時間静置した。この不溶解物が含まれるエタノール溶液
を濾紙によって濾過して、エタノール溶液を除いたとこ
ろ、不溶解物である洗浄済みのプロポリス原塊が、１
０．２ｋｇ得られた。Therefore, by removing the low molecular substances in the aqueous propolis extract by the gel filtration method, or by precipitating the high molecular substances in a 63% by volume aqueous ethanol solution, a stronger hyaluronidase activity inhibitory effect is obtained. Water-soluble propolis can be obtained. (Comparative Example 2) 10 kg of a raw propolis mass produced in Brazil was pulverized with a pulverizer, and 200 l of 95% by volume ethanol was added thereto.
Let stand for hours. The ethanol solution containing the insoluble matter was filtered through filter paper to remove the ethanol solution.
0.2 kg was obtained.
【００４３】この洗浄済みプロポリス原塊１０．２ｋｇ
に、蒸留水２００リットルを加えて充分に撹拌した水溶
液を、比較例１と同様の方法によってプロポリス水抽出
物乾燥粉末を抽出したところ、８１０ｇの乾燥粉末が得
られた。 （実施例３）比較例２で得られたプロポリス水抽出物乾
燥粉末１．０ｇに、蒸留水１００ミリリットルを加えて
充分に撹拌した水溶液を、実施例１と同様な方法によっ
て水溶性プロポリス乾燥粉末を分画したところ、４４０
ｍｇの水溶性プロポリス乾燥粉末が得られた。 （実施例４）比較例２で得られたプロポリス水抽出物乾
燥粉末１０．０ｇに、蒸留水１リットルを加えて充分に
撹拌した水溶液を、実施例２と同様な方法によって水溶
性プロポリス乾燥粉末を分画したところ、４．２ｇの水
溶性プロポリス乾燥粉末が得られた。 （ヒアルロニダーゼ活性阻害試験２）試料として実施例
３、実施例４及び比較例２で得られた乾燥粉末につい
て、ヒアルロニダーゼ活性阻害試験１と同様に、ヒアル
ロニダーゼ活性阻害率（％）、ＩＣ50（ｍｇ／ｍｌ）、
比活性の比率、プロポリス原塊１ｋｇ当たりの収量
（ｇ）、及びプロポリス原塊当たりの活性量の比率を求
めた。結果を表２に示す。10.2 kg of the washed propolis mass
Then, 200 liters of distilled water was added thereto, and the aqueous solution obtained by sufficiently stirring the aqueous solution was extracted in the same manner as in Comparative Example 1 to obtain 810 g of a dry powder. (Example 3) An aqueous solution obtained by adding 100 ml of distilled water to 1.0 g of the dry powder of the propolis water extract obtained in Comparative Example 2 and sufficiently stirring the mixture was dried in the same manner as in Example 1 to obtain a water-soluble propolis dry powder. Was fractionated to 440
mg of water-soluble propolis dry powder was obtained. (Example 4) An aqueous solution obtained by adding 1 liter of distilled water to 10.0 g of the dried propolis water extract powder obtained in Comparative Example 2 and sufficiently stirring the mixture was dried in the same manner as in Example 2 to obtain a water-soluble propolis dried powder. Was obtained, whereby 4.2 g of a dry powder of water-soluble propolis was obtained. (Hyaluronidase activity inhibition test 2) For the dry powders obtained in Examples 3, 4 and Comparative Example 2 as samples, the hyaluronidase activity inhibition rate (%), IC 50 (mg / ml),
The ratio of the specific activity, the yield (g) per kg of the original propolis mass, and the ratio of the activity amount per the original propolis mass were determined. Table 2 shows the results.
【００４４】[0044]
【表２】 表２の結果より、実施例３及び実施例４の水溶性プロポ
リスは、比較例２のプロポリス水抽出物と比べてＩＣ50
の値が低下しており、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果の
比活性の比率が高められていたことが示された。さら
に、実施例３及び実施例４の水溶性プロポリスでは、同
量のプロポリス原塊より得られるヒアルロニダーゼ活性
阻害効果の活性量の比率が、数倍に増大していることが
示された。 （比較例３）ブラジル産プロポリス原塊１５ｋｇを粉砕
機で粉砕し、９５容量％エタノール３００リットルを加
え、比較例２と同様な方法を用いてプロポリス原塊を洗
浄したところ、１５．３ｋｇの洗浄済みのプロポリス原
塊が得られた。[Table 2] From the results shown in Table 2, the water-soluble propolis of Examples 3 and 4 has an IC 50 compared to the aqueous propolis extract of Comparative Example 2.
Was decreased, indicating that the ratio of the specific activity of the hyaluronidase activity inhibitory effect was increased. Furthermore, in the water-soluble propolis of Example 3 and Example 4, it was shown that the ratio of the active amount of the hyaluronidase activity inhibitory effect obtained from the same amount of the original propolis mass increased several times. (Comparative Example 3) 15 kg of propolis raw mass produced in Brazil was pulverized with a grinder, 300 l of 95% by volume ethanol was added, and the propolis raw mass was washed using the same method as in Comparative Example 2, and 15.3 kg was washed. A finished propolis mass was obtained.
【００４５】この洗浄済みプロポリス原塊１５．３ｋｇ
に、蒸留水３００リットルを加えて充分に撹拌した水溶
液を、比較例１と同様の方法によってプロポリス水抽出
物乾燥粉末を抽出したところ、１２４０ｇの乾燥粉末が
得られた。 （実施例５〜１０）比較例３で得られたプロポリス水抽
出物乾燥粉末１２０．０ｇに、蒸留水６リットルを加え
て充分に撹拌した水溶液を１リットルずつに分注して、
６種類の分注液を得た。これら６種類の分注液に、９５
容量％エタノールを撹拌しながらゆっくりと添加して、
エタノール濃度がそれぞれ３０、４０、５０、６０、７
０、８０容量％となるようにした後、しばらく撹拌を続
けて充分に不溶解物を生成させた。15.3 kg of this washed propolis mass
Then, 300 liters of distilled water was added thereto, and the aqueous solution obtained by sufficiently stirring the aqueous solution was subjected to the same method as in Comparative Example 1 to extract a dry powder of a propolis water extract. As a result, 1240 g of a dry powder was obtained. (Examples 5 to 10) To 120.0 g of the dried propolis water extract powder obtained in Comparative Example 3, 6 liters of distilled water was added, and an aqueous solution which was sufficiently stirred was dispensed into 1 liter portions.
Six types of dispensed liquids were obtained. These six types of dispensed liquids have 95
Slowly add volume% ethanol with stirring,
Ethanol concentrations of 30, 40, 50, 60, 7 respectively
After adjusting the volume to 0, 80% by volume, stirring was continued for a while to sufficiently generate insolubles.
【００４６】これらの不溶解物を含むエタノール水溶液
を遠心分離して、可能な限り多くの上清を除いた。この
ようにして得られた沈澱をさらに減圧乾燥したところ、
それぞれ０．１１、０．５８、１．８、５．２、６．
５、７．３ｇの水溶性プロポリス乾燥粉末が得られた。 （ヒアルロニダーゼ活性阻害試験３）試料として実施例
５〜１０及び比較例３で得られた乾燥粉末について、ヒ
アルロニダーゼ活性阻害試験１と同様に、ヒアルロニダ
ーゼ活性阻害率（％）、ＩＣ 50（ｍｇ／ｍｌ）、比活性
の比率、プロポリス原塊１ｋｇ当たりの収量（ｇ）及び
プロポリス原塊当たりの活性量の比率を求めた。結果を
表３に示す。Ethanol aqueous solution containing these insolubles
Was centrifuged to remove as much supernatant as possible. this
When the precipitate thus obtained was further dried under reduced pressure,
0.11, 0.58, 1.8, 5.2, 6. respectively.
5, 7.3 g of water-soluble propolis dry powder were obtained. (Hyaluronidase activity inhibition test 3) Example as a sample
5 to 10 and the dry powder obtained in Comparative Example 3
Hyaluronidase activity inhibition test 1
Activity inhibition rate (%), IC 50(Mg / ml), specific activity
, The yield (g) per kg of propolis mass, and
The ratio of the amount of activity per the original propolis mass was determined. The result
It is shown in Table 3.
【００４７】[0047]
【表３】 表３の結果より、実施例５〜１０の水溶性プロポリス
は、比較例３のプロポリス水抽出物と比べてＩＣ50の値
が低下しており、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果の比活
性の比率が高められていたことが示された。実施例５及
び実施例６の水溶性プロポリスでは、エタノール濃度が
低いことから、充分な量の水溶性プロポリスが析出せ
ず、プロポリス原塊１ｋｇ当たりの収量が極端に少なく
なっていた。さらに、実施例７〜１０の水溶性プロポリ
スでは、同量のプロポリス原塊より得られるヒアルロニ
ダーゼ活性阻害効果の活性量の比率が、数倍に増大して
いることが示された。[Table 3] From the results in Table 3, the water-soluble propolis of Examples 5 to 10 had a lower IC 50 value than the aqueous propolis extract of Comparative Example 3, and the ratio of the specific activity of the hyaluronidase activity inhibitory effect was increased. Was shown. In the water-soluble propolis of Examples 5 and 6, since the ethanol concentration was low, a sufficient amount of water-soluble propolis was not precipitated, and the yield per kg of the original propolis mass was extremely low. Furthermore, in the water-soluble propolis of Examples 7 to 10, it was shown that the ratio of the active amount of the hyaluronidase activity inhibitory effect obtained from the same amount of the original propolis mass increased several times.
【００４８】後者の結果は、ヒアルロニダーゼ活性阻害
試験１における説明と同様に、プロポリス水抽出物中に
含まれるヒアルロニダーゼ活性阻害物質抑制物質が除去
されたものであると推定される。従って、少なくとも５
０〜８０容量％のエタノール水溶液中で、プロポリス水
抽出物中の高分子物質を析出させることによって、より
強力なヒアルロニダーゼ活性阻害効果を有した水溶性プ
ロポリスを得ることができる。 （糖含有量の測定）実施例７〜１０で得られたそれぞれ
の水溶性プロポリス乾燥粉末について、オルシノール−
硫酸法（Kainuma,K., Research Methods for Carbohydr
ates and Carbohydrate Enzymology, Iowa State Unive
rsity,p.7,1978）によって糖含有量（重量％）を求め
た。結果を表４に示す。 （窒素含有量の測定）実施例７〜１０で得られたそれぞ
れの水溶性プロポリス乾燥粉末１５．０ｍｇを、Ｎ2 ア
ナライザー（住友分析センター製、スミグラフＮＣ−９
０Ａ）で窒素ガスに変換した後、ＴＣＤガスクロマトグ
ラフィー（島津製作所製の熱伝導度検出器を備えたガス
クロマトグラフ装置、ＧＣ−８ＡＰ）によって検出、定
量した。これらの測定値を窒素−タンパク質換算係数で
ある６．２５を乗することにより、窒素含有量のタンパ
ク質換算（重量％）として表した。結果を表４に示す。The latter result is presumed to be the result of removal of the inhibitor of the hyaluronidase activity inhibitor contained in the aqueous propolis extract, as described in the hyaluronidase activity inhibition test 1. Therefore, at least 5
By precipitating the polymer substance in the aqueous propolis extract in an aqueous ethanol solution of 0 to 80% by volume, a water-soluble propolis having a stronger hyaluronidase activity inhibitory effect can be obtained. (Measurement of sugar content) For each of the dry powders of water-soluble propolis obtained in Examples 7 to 10, orcinol-
Sulfuric acid method (Kainuma, K., Research Methods for Carbohydr
ates and Carbohydrate Enzymology, Iowa State Unive
rsity, p.7, 1978) to determine the sugar content (% by weight). Table 4 shows the results. (Measurement of nitrogen content) of each of the water-soluble propolis dry powder 15.0mg obtained in Example 7 to 10, N 2 analyzer (Sumitomo Chemical Analysis Center Ltd., Sumigurafu NC-9
After conversion to nitrogen gas by OA), the gas was detected and quantified by TCD gas chromatography (GC-8AP, a gas chromatograph equipped with a thermal conductivity detector manufactured by Shimadzu Corporation). These measured values were expressed as protein equivalent (% by weight) of nitrogen content by multiplying by 6.25 which is a nitrogen-protein conversion coefficient. Table 4 shows the results.
【００４９】[0049]
【表４】 表４の結果より、実施例７〜１０の水溶性プロポリス
は、およそ７割の重量を占める多糖類によって構成され
ていることが示された。また、微量ながら窒素成分も含
有されていることが示された。[Table 4] From the results in Table 4, it was shown that the water-soluble propolis of Examples 7 to 10 was constituted by a polysaccharide occupying about 70% of the weight. It was also shown that a small amount of a nitrogen component was contained.
【００５０】なお、前記実施形態を次のように変更して
構成することもできる。 ・ プロポリス原塊から抽出されているフラボノイド類
等の他の公知成分と組み合わせて利用すること。The above embodiment can be modified as follows. -Use in combination with other known components such as flavonoids extracted from the original propolis mass.
【００５１】このように構成した場合、さらに強力な抗
アレルギー活性を発揮させることができる。 ・ プロポリス水抽出物を抽出する際に不要となるプロ
ポリスのアルコール抽出物を、別の生理活性を有するプ
ロポリス製品の製造に利用すること。In the case of such a constitution, a stronger antiallergic activity can be exhibited. -Use of an alcoholic extract of propolis, which is unnecessary when extracting a water extract of propolis, for the production of a propolis product having another physiological activity.
【００５２】このように構成した場合、入手した原料の
無駄を無くすことができて経済的である。次に、前記実
施形態から把握できる技術的思想について以下に記載す
る。 ・ 前記抽出は、プロポリス原塊を７０〜１００容量％
のエタノール水溶液に浸漬して生成される不溶解物を水
に溶解して水抽出物を得る請求項４に記載の水溶性プロ
ポリスの製造方法。With this configuration, it is economical because it is possible to eliminate waste of the obtained raw materials. Next, technical ideas that can be grasped from the embodiment will be described below. -The extraction is performed by converting the original propolis mass to 70 to 100% by volume.
5. The method for producing a water-soluble propolis according to claim 4, wherein an insoluble matter generated by immersing in an aqueous ethanol solution is dissolved in water to obtain a water extract.
【００５３】このように構成した場合、より強力な抗ア
レルギー活性物質を容易に得ることができる。 ・ 前記分画は、限外濾過法、透析法及び３０〜８０容
量％のエタノール水溶液で、抗アレルギー活性を有する
高分子画分を析出させる分画方法の少なくとも１種の方
法を用いて、抗アレルギー活性を有する高分子画分を得
る請求項４に記載の水溶性プロポリスの製造方法。With such a constitution, a stronger antiallergic substance can be easily obtained. The fractionation is carried out by at least one of ultrafiltration, dialysis, and a fractionation method of precipitating a polymer fraction having anti-allergic activity with a 30 to 80% by volume aqueous ethanol solution. The method for producing a water-soluble propolis according to claim 4, wherein a polymer fraction having allergic activity is obtained.
【００５４】このように構成した場合、より強力な抗ア
レルギー活性物質を確実に得ることができる。 ・ 前記抽出は、プロポリス原塊を７０〜１００容量％
のエタノール水溶液に浸漬して生成される不溶解物を水
に溶解して水抽出物を得、前記分画は、限外濾過法、透
析法及び３０〜８０容量％のエタノール水溶液で、抗ア
レルギー活性を有する高分子画分を析出させる分画方法
の少なくとも１種の方法を用いて、抗アレルギー活性を
有する高分子画分を得る請求項４に記載の水溶性プロポ
リスの製造方法。In the case of such a constitution, a stronger antiallergic substance can be surely obtained. -The extraction is performed by converting the original propolis mass to 70 to 100% by volume.
The insolubles produced by immersion in an aqueous ethanol solution are dissolved in water to obtain a water extract, and the fractionation is performed by ultrafiltration, dialysis, and 30 to 80% by volume of an aqueous ethanol solution. The method for producing a water-soluble propolis according to claim 4, wherein the polymer fraction having anti-allergic activity is obtained by using at least one fractionation method of precipitating a polymer fraction having activity.
【００５５】このように構成した場合、より強力な抗ア
レルギー活性物質を確実に得ることができる。With this configuration, a stronger antiallergic substance can be obtained without fail.
【００５６】[0056]
【発明の効果】この発明は、以上のように構成されてい
るため、次のような効果を奏する。請求項１に記載の水
溶性プロポリスの発明によれば、より強力な抗アレルギ
ー活性を発揮させることができる。The present invention is configured as described above, and has the following effects. According to the invention of the water-soluble propolis according to the first aspect, a stronger antiallergic activity can be exhibited.
【００５７】請求項２に記載の水溶性プロポリスの発明
によれば、請求項１に記載の発明の効果に加えて、さら
に強力な抗アレルギー活性を発揮させることができる。
請求項３に記載の水溶性プロポリスの発明によれば、請
求項１又は請求項２に記載の発明の効果に加えて、より
確実に抗アレルギー活性を発揮させることができる。According to the invention of the water-soluble propolis according to the second aspect, in addition to the effects of the first aspect, a stronger antiallergic activity can be exhibited.
According to the invention of the water-soluble propolis according to the third aspect, in addition to the effects of the first or second aspect, the antiallergic activity can be exhibited more reliably.
【００５８】請求項４に記載の水溶性プロポリスの製造
方法の発明によれば、より強力な抗アレルギー活性物質
を容易かつ確実に得ることができる。According to the method for producing a water-soluble propolis according to the fourth aspect, a stronger antiallergic substance can be easily and reliably obtained.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 野々垣 孝 岐阜市加納桜田町１丁目１番地 アピ 株 式会社内 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuing from the front page (72) Inventor Takashi Nonogaki 1-1-1, Kano Sakuradacho, Gifu-shi Api Co., Ltd.
Claims (4)
なり、抗アレルギー活性を有する水溶性プロポリス。1. A water-soluble propolis having an antiallergic activity, comprising a high molecular fraction of an aqueous extract of propolis.
００〜２０００００であり、多糖類を含有する請求項１
に記載の水溶性プロポリス。2. The high molecular fraction has an average molecular weight of 200.
2. The composition according to claim 1, which contains a polysaccharide.
2. The water-soluble propolis according to item 1.
性阻害作用を有する請求項１又は請求項２に記載の水溶
性プロポリス。3. The water-soluble propolis according to claim 1, wherein the high molecular fraction has a hyaluronidase activity inhibitory action.
分画により抗アレルギー活性を有する高分子画分を得る
水溶性プロポリスの製造方法。4. Extracting an aqueous extract from the original propolis mass,
A method for producing water-soluble propolis, which obtains a high molecular fraction having antiallergic activity by fractionation.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10093577A JPH11290005A (en) | 1998-04-06 | 1998-04-06 | Water-soluble propolis and its production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10093577A JPH11290005A (en) | 1998-04-06 | 1998-04-06 | Water-soluble propolis and its production |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11290005A true JPH11290005A (en) | 1999-10-26 |
Family
ID=14086133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10093577A Pending JPH11290005A (en) | 1998-04-06 | 1998-04-06 | Water-soluble propolis and its production |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11290005A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004000338A1 (en) * | 2002-06-25 | 2003-12-31 | Api Co., Ltd. | Propolis extract and process for producing the same, and propolis-extract-containing antihypertension drug, food preparation and propolis composition |
| DE102008021756A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Gehrlicher Pharmazeutische Extrakte Gmbh | Propolis extract |
| CN106805177A (en) * | 2017-01-06 | 2017-06-09 | 重庆师范大学 | A kind of extracting method of propolis |
-
1998
- 1998-04-06 JP JP10093577A patent/JPH11290005A/en active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004000338A1 (en) * | 2002-06-25 | 2003-12-31 | Api Co., Ltd. | Propolis extract and process for producing the same, and propolis-extract-containing antihypertension drug, food preparation and propolis composition |
| DE102008021756A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Gehrlicher Pharmazeutische Extrakte Gmbh | Propolis extract |
| WO2009133073A1 (en) | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Gehrlicher Pharmazeutische Extrakte Gmbh | Propolis extract |
| CN106805177A (en) * | 2017-01-06 | 2017-06-09 | 重庆师范大学 | A kind of extracting method of propolis |
| CN106805177B (en) * | 2017-01-06 | 2020-04-07 | 重庆师范大学 | Propolis extraction method |
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