JPH11276158A - Cultivation of filamentous bacterium - Google Patents

Cultivation of filamentous bacterium

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JPH11276158A
JPH11276158A JP10079461A JP7946198A JPH11276158A JP H11276158 A JPH11276158 A JP H11276158A JP 10079461 A JP10079461 A JP 10079461A JP 7946198 A JP7946198 A JP 7946198A JP H11276158 A JPH11276158 A JP H11276158A
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JP
Japan
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culture
spores
liquid medium
liquid
filamentous fungi
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JP10079461A
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Japanese (ja)
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Setsu Sakaguchi
摂 坂口
Sanae Fujita
早苗 藤田
Tatsuro Okubo
龍朗 大久保
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Snow Brand Milk Products Co Ltd
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Snow Brand Milk Products Co Ltd
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a cultivation method effectively forming spore of filamentous bacterium. SOLUTION: The spore is effectively formed by adding 0.01 to 1% amount of a magnesium salt and/or a potassium salt as an essential constituent in the formation of spore, to a liquid culture of a filamentous bacterium such as fungus Penicillium.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、ペニシリウム(Pe
nicillium)属菌等の糸状菌を液体培養して効率的に胞子
を形成させる糸状菌の培養方法に関する。なお、この糸
状菌の胞子は、発酵食品等を製造する際に使用される。
BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention is, Penicillium (Pe
The present invention relates to a method for culturing a filamentous fungus such as a fungus of the genus nicillium in a liquid culture to form spores efficiently. The spores of the filamentous fungus are used for producing fermented foods and the like.

【0002】[0002]

【従来の技術】従来より、糸状菌に胞子を形成させる方
法として、固体培養や液体培養が行われている。固体培
養では、米、大豆、小麦、ふすま等の穀類・雑穀類やそ
の加工品からなる固体培地を使用するが、固体培養を滅
菌するには長い時間を要すると共に無菌管理も難しく、
また、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御すること
も難しいという問題がある。そこで、容易に滅菌がで
き、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御し易い液体
培養により、糸状菌の胞子を形成させる方法が検討され
てきた。しかし、一般に糸状菌の液体培養を行う場合、
菌糸体は容易に形成させることができるが、胞子につい
ては形成させることが難しいという問題があった。
2. Description of the Related Art Conventionally, solid culture or liquid culture has been performed as a method for forming spores in filamentous fungi. In solid culture, rice, soybeans, wheat, bran and other solid media consisting of cereals and cereals such as bran and processed products are used, sterilization of solid culture takes a long time and sterile management is difficult,
There is also a problem that it is difficult to control the environment such as temperature, moisture and pH during the culture. Therefore, methods for forming spores of filamentous fungi by liquid culture that can be easily sterilized and easily control the environment such as temperature, moisture and pH during the culture have been studied. However, in general, when performing liquid culture of filamentous fungi,
Mycelium can be easily formed, but it is difficult to form spores.

【0003】そして、このような糸状菌の液体培養にお
ける諸問題を解決するために、糸状菌の胞子形成に影響
を及ぼす様々な要因についての検討がなされてきてい
る。例えば、(1) 液体培地中で安定した胞子形成能を有
する菌株の選択、(2) 液体培地へ接種するシードの形態
や接種濃度、(3) 液体培養中のpH制御、(4) 液体培養中
の溶存酸素濃度の制御、(5) 胞子形成に至適な液体培養
温度の検討、(6) 胞子形成と液体培養形態の検討、(7)
通気攪拌条件の検討、(8) 液体培養容器の種類の検討、
(9) 液体培養容器に対する液体培地量の検討、(10)液体
培養中の光照射条件の検討、(11)液体培地成分の検討等
である。
[0003] In order to solve such problems in the liquid culture of filamentous fungi, various factors affecting the spore formation of filamentous fungi have been studied. For example, (1) selection of strains that have a stable spore-forming ability in liquid medium, (2) form and concentration of seeds inoculated into liquid medium, (3) pH control during liquid culture, (4) liquid culture Control of dissolved oxygen concentration in spores, (5) Examination of optimal liquid culture temperature for sporulation, (6) Examination of sporulation and liquid culture form, (7)
Examination of aeration and stirring conditions, (8) Examination of the type of liquid culture vessel,
(9) Examination of the amount of liquid medium for the liquid culture vessel, (10) Examination of light irradiation conditions during liquid culture, and (11) Examination of liquid medium components.

【0004】これらの要因の中で、最も重要なものの一
つが液体培地である。そして、液体培地の成分の検討
は、胞子形成だけでなく、発酵生産に際しても重要なも
のである。糸状菌の胞子形成を目的とした液体培地につ
いては、例えば、液体培地中の窒素源として硝酸塩を使
用することが胞子形成に適しているといわれており(J.G
en. Microbiol., vol.59, pp.31-45, 1969)、また、液
体培地中のカルシウムイオンが胞子形成を誘導すること
や液体培地中へのカルシウム塩の添加の時期が胞子形成
に影響を与えることが知られている(Trans. Br. Mycol.
Soc., vol.113,pp.3109-3119, 1987) 。しかし、カル
シウム塩以外の塩類を糸状菌の胞子形成を目的とした培
地成分に添加し、その効果を検討したというような報告
はなされていない。
[0004] One of the most important of these factors is the liquid medium. Examination of the components of the liquid medium is important not only for spore formation but also for fermentation production. For a liquid medium for the purpose of sporulation of filamentous fungi, for example, it is said that the use of nitrate as a nitrogen source in the liquid medium is suitable for sporulation (JG
en.Microbiol., vol.59, pp.31-45, 1969) Also, the induction of sporulation by calcium ions in the liquid medium and the timing of addition of calcium salts to the liquid medium affect sporulation. (Trans. Br. Mycol.
Soc., Vol. 113, pp. 3109-3119, 1987). However, there have been no reports that salts other than calcium salts were added to a medium component for the purpose of spore formation of filamentous fungi, and the effect was examined.

【0005】[0005]

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、糸状菌
を液体培養して胞子を形成させる際に使用する液体培地
の成分について、鋭意研究を進めていたところ、液体培
地成分中の必要成分としてマグネシウム塩やカリウム塩
を添加することにより、効率的に胞子を形成させること
ができることを見出し、本発明を完成するに至った。し
たがって、本発明は、液体培地成分中の必要成分として
マグネシウム塩及び/又はカリウム塩を添加することに
より胞子を形成させる糸状菌の培養方法を提供すること
を課題とする。
DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have been intensively studying the components of a liquid culture medium used for forming spores by liquid culture of filamentous fungi. It has been found that spores can be efficiently formed by adding a magnesium salt or a potassium salt as a component, and the present invention has been completed. Therefore, an object of the present invention is to provide a method for culturing a filamentous fungus that forms spores by adding a magnesium salt and / or a potassium salt as a necessary component in a liquid medium component.

【0006】なお、本発明でいう糸状菌の胞子とは、胞
子及び複数個の胞子が内生した胞子のうを包含するもの
である。
The spores of the filamentous fungus referred to in the present invention include spores and spores in which a plurality of spores are endogenous.

【0007】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明では、糸状菌を液
体培養する際に使用する液体培地成分中に添加する必要
成分として、マグネシウム塩やカリウム塩を使用するこ
とにより、効率的に糸状菌の胞子を形成させる。
According to the present invention, the use of a magnesium salt or a potassium salt as a necessary component to be added to a liquid medium component used in liquid culture of a filamentous fungus enables efficient filamentous fungi. To form spores.

【0008】なお、本発明で糸状菌の培養に使用する液
体培地としては、通常の糸状菌を培養する際に使用する
培地で良く、例えば、培地成分中の炭素源としてグルコ
ースを使用し、必要に応じて、肉エキス、ペプトン、低
乳糖脱脂粉乳等の窒素源を添加したものを使用すれば良
い。
The liquid medium used for culturing the filamentous fungi in the present invention may be a medium used for culturing ordinary filamentous fungi. For example, glucose may be used as a carbon source in the medium components. Depending on the conditions, a meat extract, peptone, low-lactose skim milk or the like to which a nitrogen source has been added may be used.

【0009】[0009]

【発明の実施の形態】本発明では、例えば、ポテトデキ
ストロース寒天培地等の培地で純粋培養した糸状菌の胞
子を104 〜107 個/ml 程度、液体培地に接種する。この
液体培地は、上記したように、炭素源としてグルコース
を 0.5〜5%とし、必要に応じて、肉エキス、ペプトン
等の窒素源を 0.5〜5%とした培地、あるいは、炭素源
としてグルコースを 0.5〜5%とし、必要に応じて、低
乳糖脱脂粉乳を 0.1〜10%とした培地等を例示すること
ができる。そして、これらの培地に、塩化マグネシウ
ム、硫酸マグネシウム、リン酸水素マグネシウム、乳酸
マグネシウム等のマグネシウム塩や硫酸カリウム、炭酸
カリウム、炭酸水素カリウム、リン酸一カリウム、リン
酸二カリウム、酒石酸水素カリウム、硝酸カリウム、ク
エン酸三カリウム等のカリウム塩を0.01〜1%程度添加
して、糸状菌を培養すれば良い。なお、添加する塩類が
0.01%未満であると効果を発揮することができず、ま
た、添加する塩類が1%を越えるとそれ以上の効果は望
めず、むしろ胞子形成に悪影響を及ぼすこともある。
DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS In the present invention, for example, about 10 4 to 10 7 spores of a filamentous fungus purely cultured in a medium such as a potato dextrose agar medium are inoculated into a liquid medium. As described above, this liquid medium contains 0.5 to 5% of glucose as a carbon source and, if necessary, 0.5 to 5% of a nitrogen source such as meat extract and peptone, or glucose as a carbon source. A medium or the like containing 0.5 to 5% and, if necessary, 0.1 to 10% of low-lactose skim milk powder can be exemplified. Then, in these media, magnesium salts such as magnesium chloride, magnesium sulfate, magnesium hydrogen phosphate, magnesium lactate, potassium sulfate, potassium carbonate, potassium hydrogen carbonate, monopotassium phosphate, dipotassium phosphate, potassium hydrogen tartrate, potassium nitrate The fungi may be cultured by adding about 0.01 to 1% of a potassium salt such as tripotassium citrate. The salt to be added is
If the amount is less than 0.01%, the effect cannot be exerted. If the amount of the added salt exceeds 1%, no further effect can be expected, and the spore formation may be adversely affected.

【0010】そして、糸状菌の培養は、胞子形成に至適
な温度である18〜26℃で行うことが望ましく、旋回又は
通気撹拌して好気的条件下で培養することが望ましい。
このようにして糸状菌を培養することにより、培養3〜
7日で105 〜108 個/ml の胞子が得られる。なお、培養
中に培地のpHが変化することがあるが、特にpHを調整す
る必要はない。
[0010] The cultivation of the filamentous fungi is preferably carried out at 18 to 26 ° C, which is the optimal temperature for spore formation, and it is desirable to carry out the cultivation under aerobic conditions by swirling or aeration and stirring.
By culturing the filamentous fungus in this way, the culture 3 to 3
In 7 days, 10 5 to 10 8 spores / ml can be obtained. The pH of the medium may change during the culture, but it is not necessary to adjust the pH.

【0011】このようにして得られた糸状菌の胞子は、
酵素生産、物質生産、菌体生産、物質変換、麹や発酵食
品の製造等に種菌として使用することができる。
The spores of the filamentous fungus thus obtained are:
It can be used as an inoculum for enzyme production, substance production, cell production, substance conversion, production of koji and fermented food.

【0012】次に、実施例を示し、本発明をさらに詳し
く説明する。
Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples.

【0013】[0013]

【実施例1】表1に示した成分組成の液体培地10〜30ml
を100ml 容の振盪三角フラスコに注入し、加熱滅菌し
て、糸状菌の培養に使用した。
Example 1 10-30 ml of liquid medium having the composition shown in Table 1
Was poured into a 100 ml shake Erlenmeyer flask, sterilized by heating, and used for culturing filamentous fungi.

【0014】[0014]

【表1】 ────────────────────── 低乳糖脱脂粉乳 2.0 (%) グルコース 1.0 塩化マグネシウム 0.2 ──────────────────────[Table 1] Low-lactose skim milk powder 2.0 (%) Glucose 1.0 Magnesium chloride 0.2 ───────────

【0015】この液体培地を使用して、ポテトデキスト
ロース寒天培地で前培養したペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti;ハンセン社製) を胞子
数が104 〜106 個 /mlとなるように接種して、18〜26℃
で3〜7日間、旋回振盪培養(振盪回数;毎分 150回、
振盪幅;4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をト
ーマの血球計算板で測定したところ、8.0 ×107 個 /ml
であった。
Using this liquid medium, Penicillium camemberti (Hansen) pre-cultured on a potato dextrose agar medium was inoculated so that the number of spores becomes 10 4 to 10 6 / ml. , 18 ~ 26 ℃
For 3 to 7 days with shaking culture (number of shaking; 150 times per minute,
(Shaking width: 4.5 cm). Then, after the culture was completed, when the number of spores was measured with a toma hemocytometer, 8.0 × 10 7 cells / ml
Met.

【0016】[0016]

【実施例2】表2に示した成分組成の液体培地10〜30ml
を100ml 容の振盪三角フラスコに注入し、加熱滅菌し
て、糸状菌の培養に使用した。
Example 2 10-30 ml of a liquid medium having the composition shown in Table 2
Was poured into a 100 ml shake Erlenmeyer flask, sterilized by heating, and used for culturing filamentous fungi.

【0017】[0017]

【表2】 ────────────────────── 低乳糖脱脂粉乳 2.0 (%) グルコース 1.0 硫酸マグネシウム 0.1 ──────────────────────[Table 2] ────────────────────── Low-lactose skim milk powder 2.0 (%) Glucose 1.0 Magnesium sulfate 0.1 ─────────── ───────────

【0018】この液体培地を使用し、実施例1と同様に
して、ペニシリウム・カマンバーティ(Penicillium ca
memberti) を培養した。そして、培養終了後、胞子数を
トーマの血球計算板で測定したところ、7.2 ×107 個 /
mlであった。
Using this liquid medium, Penicillium camberti (Penicillium ca.
memberti ). Then, after the culture was completed, the number of spores was measured with a toma hemocytometer, and found to be 7.2 × 10 7 /
ml.

【0019】[0019]

【実施例3】表3に示した成分組成の液体培地10〜30ml
を100ml 容の振盪三角フラスコに注入し、加熱滅菌し
て、糸状菌の培養に使用した。
Example 3 10-30 ml of a liquid medium having the composition shown in Table 3
Was poured into a 100 ml shake Erlenmeyer flask, sterilized by heating, and used for culturing filamentous fungi.

【0020】[0020]

【表3】 ────────────────────── 低乳糖脱脂粉乳 2.0 (%) グルコース 1.0 リン酸水素マグネシウム 0.1 ──────────────────────[Table 3] Low-lactose skim milk powder 2.0 (%) Glucose 1.0 Magnesium hydrogen phosphate 0.1 ─────────────

【0021】この液体培地を使用し、実施例1と同様に
して、ペニシリウム・カマンバーティ(Penicillium ca
memberti) を培養した。そして、培養終了後、胞子数を
トーマの血球計算板で測定したところ、7.5 ×107 個 /
mlであった。
Using this liquid medium, Penicillium camembert (Penicillium ca.
memberti ). Then, after the culture was completed, when the number of spores was measured with a toma hemocytometer, 7.5 × 10 7 cells /
ml.

【0022】[0022]

【実施例4】表4に示した成分組成の液体培地10〜30ml
を100ml 容の振盪三角フラスコに注入し、加熱滅菌し
て、糸状菌の培養に使用した。
EXAMPLE 4 10-30 ml of a liquid medium having the composition shown in Table 4
Was poured into a 100 ml shake Erlenmeyer flask, sterilized by heating, and used for culturing filamentous fungi.

【0023】[0023]

【表4】 ────────────────────── 低乳糖脱脂粉乳 2.0 (%) グルコース 1.0 硫酸カリウム 0.1 ──────────────────────[Table 4] Low-lactose skim milk powder 2.0 (%) Glucose 1.0 Potassium sulfate 0.1 ───────────

【0024】この液体培地を使用し、実施例1と同様に
して、ペニシリウム・カマンバーティ(Penicillium ca
memberti) を培養した。そして、培養終了後、胞子数を
トーマの血球計算板で測定したところ、8.2 ×107 個 /
mlであった。
Using this liquid medium, Penicillium camembert (Penicillium ca.
memberti ). After completion of culture was measured the number of spores in a hemocytometer of Tomah, 8.2 × 10 7 cells /
ml.

【0025】[0025]

【比較例1】表5に組成を示した液体培地10〜30mlを10
0ml 容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状
菌の液体培養に使用した。
[Comparative Example 1] 10 to 30 ml of a liquid medium having the composition shown in Table 5 was added to 10
The mixture was poured into a 0 ml shake Erlenmeyer flask, sterilized by heating, and used for liquid culture of filamentous fungi.

【0026】[0026]

【表5】 ────────────────────── 低乳糖脱脂粉乳 2.0 (%) グルコース 1.0 ──────────────────────[Table 5] Low-lactose skim milk 2.0 (%) Glucose 1.0 ────────

【0027】この液体培地を使用し、実施例1と同様に
して、ペニシリウム・カマンバーティ(Penicillium ca
memberti) を培養した。そして、培養終了後、胞子数を
トーマの血球計算板で測定したところ、4.0 ×107 個/m
l であった。
Using this liquid medium, Penicillium camembert (Penicillium ca.
memberti ). And after the culture, when the number of spores was measured with a toma hemocytometer, 4.0 × 10 7 / m
l.

【0028】以上の結果から、糸状菌を液体培養して胞
子を形成させる際に使用する液体培地成分中の必要成分
として、マグネシウム塩やカリウム塩を添加することに
より、胞子の形成を促進することができることが判る。
From the above results, it can be seen that spore formation can be promoted by adding a magnesium salt or a potassium salt as a necessary component in a liquid medium component used for liquid culture of filamentous fungi to form spores. You can see that it can be done.

【0029】[0029]

【発明の効果】本発明の方法に従って糸状菌を培養する
ことにより、pH調整等の特別な培養管理を行うこと無
く、胞子の形成を促進することができる。そして、この
ような糸状菌の胞子は、発酵食品等を製造する際に有用
である。
By culturing filamentous fungi according to the method of the present invention, spore formation can be promoted without performing special culture management such as pH adjustment. Such spores of the filamentous fungus are useful for producing fermented foods and the like.

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 糸状菌を液体培養して胞子を形成させる
際に使用する液体培地成分中の必要成分として、マグネ
シウム塩及び/又はカリウム塩を添加することを特徴と
する糸状菌の培養方法。
1. A method for culturing a filamentous fungus, which comprises adding a magnesium salt and / or a potassium salt as a necessary component in a liquid medium component used for forming a spore by performing a liquid culture of the filamentous fungus.
【請求項2】 マグネシウム塩及び/又はカリウム塩を
0.01〜1%添加する請求項1記載の培養方法。
2. A magnesium salt and / or a potassium salt.
The culture method according to claim 1, wherein 0.01 to 1% is added.
【請求項3】 糸状菌がペニシリウム(Penicillium)
菌である請求項1又は2記載の培養方法。
3. The method according to claim 1, wherein the filamentous fungus is a bacterium belonging to the genus Penicillium .
JP10079461A 1998-03-26 1998-03-26 Cultivation of filamentous bacterium Pending JPH11276158A (en)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006109795A1 (en) * 2005-04-11 2006-10-19 Kureha Corporation Method for producing filamentous fungus spores and method for preventing plant disease

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