JPH1123551A

JPH1123551A - 液体クロマトグラフィー用充填剤、その製造方法、それを用いたカラム、分析方法及び分析装置

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Publication number: JPH1123551A
Application number: JP9176192A
Authority: JP
Inventors: Toyohide Takeuchi; 豊英竹内; Yoshimi Hashimoto; 佳巳橋本
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1997-07-01
Filing date: 1997-07-01
Publication date: 1999-01-29
Anticipated expiration: 2017-07-01
Also published as: JP3832031B2

Abstract

(57)【要約】【課題】イオン性成分の分離を可能とし、電気伝導度検
出、紫外可視間接吸光度検出において高感度、かつ装置
構成が簡潔で、良好な分析イオンの分離パターンが得ら
れ、有機溶媒を含有する溶液の使用も可能である液体ク
ロマトグラフィー用充填剤、その製造方法、それを用い
たカラム、分析方法及び分析装置を提供する。【解決の手段】陽イオン性及び／又は陰イオン性荷電部
を複数有する水溶性高分子化合物が支持担体に固定化さ
れてなることを特徴とする液体クロマトグラフィー用充
填剤、その製造方法、それを用いたカラム、分析方法及
び分析装置を用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は分析イオンを分析す
る液体クロマトグラフィーに使用する分離用充填剤、そ
の製造方法、それを用いたカラム、分析方法及び分析装
置に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、分析イオンの分析法として多
用されているイオンクロマトグラフィー（以下「ＩＣ」
という）では溶離液により被測定イオンをイオン交換基
を有する分離カラムへと導入し、分離カラムにおいてイ
オン交換作用を利用して分離が達成されている。

【０００３】しかしながら、従来のＩＣでは、被測定イ
オンの分離をイオン交換カラムにより行なっており、被
測定イオンをカラム外へ溶出させるために、通常、溶離
液に数ｍＭ程度のイオン性物質を含有させる必要があっ
た。

【０００４】ここでＩＣによる被測定イオンの検出方法
としては、その多くの場合に、電気伝導度検出器により
溶離液の電気伝導度をモニターする方法と、溶離液に含
有させるイオン性物質に紫外可視吸収を有する物質を使
用し、被測定イオンである分析イオンとの間の吸光度差
を利用することにより検出を行なうという紫外可視間接
吸光度検出法が採用されているが、いずれの検出方法に
おいても溶離液に数ｍＭ程度のイオン性物質を含有させ
ることが検出感度の下限を制限する原因となっている。

【０００５】すなわち、電気伝導度による検出方法にお
いては、イオン性物質を含有した溶離液により、その濃
度に応じて電気伝導度のバックグラウンドが上昇するた
めにノイズレベルが増大し、その結果として、検出感度
が制限されてしまっていた。

【０００６】また、紫外可視間接吸光度検出法において
は、検出に使用する紫外可視吸光度検出器には通常吸光
度と検出器応答との間の直線性に上限があり、通常両者
の直線関係が成立する範囲において用いられるため、こ
の検出方法により定量的な分析を行なう場合、使用する
溶離液の吸光度はその上限が制限されることとなってし
まっていた。そのため溶離液の濃度が高い場合には、溶
液の吸光度は溶質の濃度とその吸光度係数の積に比例す
るため、吸光度係数の大きなイオン性物質が使用でき
ず、吸光度係数の大きなイオン性物質を使用するほど感
度が向上する紫外可視間接吸光度検出法においては、こ
のことが検出感度の制約となっていた。

【０００７】これらのことより、いずれの検出方法にお
いても溶離液中に添加する数ｍＭ程度のイオン性物質に
より、その検出感度が制限されてしまっているという問
題があった。

【０００８】このために、電気伝導度検出におけるバッ
クグラウンドを低下させる試みとして、イオン交換膜等
を使用することによりカラムからの溶出液の電気伝導度
を低下させるサプレッサ法があった。しかしながら、こ
の方法では装置構成が複雑、かつ高価であり、溶離液の
調製が煩雑であるという問題があった。

【０００９】一方、溶離液に添加するイオン性物質の濃
度を低下させる試みとしては、陽、陰両性イオン荷電部
を有する化合部を固定化したカラムを使用し、純水ある
いは水系溶媒を溶離液とする方法があった。しかしなが
ら、この方法では被測定イオンは、イオンペアのような
形（ｉｏｎ−ｐａｉｒｉｎｇ−ｌｉｋｅｆｏｒｍ）と
して溶出するために、そのクロマトグラムにおける保持
容量は、被測定試料中に共存するその対イオンにより大
きく変化するという現象が見られ、このため、例えば、
被測定試料中のｎ種の陰イオンを分離定量する場合にお
いて、被測定試料中にｍ種の陽イオンが共存すれば、ｎ
×ｍ種のピークがあらわれることとなり、それらを完全
分離し、被測定試料中の各陰イオンの定量することがが
困難であるため、その適用できる試料が限られてしまっ
ているという問題があった。また、この方法では、陽、
陰両性イオン荷電部を有する化合物のカラムへの固定化
方法としては、充填剤表面との疎水的相互作用を利用し
た報告例があるだけである。このため、この方法におい
て、カラムへ有機溶媒を含有する溶液を送液した場合、
陽、陰両性イオン荷電部を有する化合物がカラム外へ溶
出してしまうという問題があった。従って、ＩＣにおい
て通常使用されている手法である疎水性の高い試料を測
定する場合の溶離液への有機溶媒の添加や、カラムに被
測定試料中の疎水性の高い夾雑物質が吸着してカラム効
率が低下した場合の有機溶媒を含有する溶液によるカラ
ム洗浄ができないという問題があり、また有機溶媒を含
有する試料への適用も困難であるという問題があった。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
記載の従来技術の問題点を克服し、イオン性成分の分離
を可能とし、電気伝導度検出、紫外可視間接吸光度検出
において高感度、かつ装置構成が簡潔で、良好な分析イ
オンの分離パターンが得られ、有機溶媒を含有する溶液
の使用も可能である液体クロマトグラフィー用充填剤、
その製造方法、それを用いたカラム、分析方法及び分析
装置を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意検討を行なった結果、支持担体
に、陽イオン性及び／又は陰イオン性荷電部を複数有す
る水溶性高分子化合物を固定化した液体クロマトグラフ
ィー用充填剤（以下、単に「液クロ用充填剤」という）
を充填したカラムを使用することにより、１）溶離液と
して１ｍＭ以下という希薄なイオン性物質を含有する水
溶液あるいは水系溶媒によるイオン性成分の分離を可能
となること、２）電気伝導度検出、紫外可視間接吸光度
検出において高感度検出が可能であること、３）良好な
被測定イオンの分離パターンが得られること、４）さら
に有機溶媒を含有する溶液の使用も可能であることを見
出だし、本発明を完成した。

【００１２】以下、本発明を詳細に説明する。

【００１３】本発明において用いられる陽イオン性及び
／又は陰イオン性荷電部を複数有する水溶性高分子化合
物（以下、単に「イオン性高分子化合物」という）とし
ては、充填剤に固定化できるものであれば特に制限なく
用いることができ、例えば、コンドロイチン硫酸、ヘパ
リン、ヒアルロン酸といったムコ多糖類、ポリスチレン
スルホン酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン
といった合成高分子、又はそれらの塩が例示できる。塩
としては、ナトリウム、カリウム等との塩が挙げられ
る。また、その分子量については本発明の目的が達成で
きるものであれば特に制限はないが、溶解性が良く、充
填剤に効率良く固定化するために、重量平均分子量で１
００００〜１００００００が、さらに３００００〜３０
００００のものが好ましく用いられる。

【００１４】固定化に使用される支持担体としては、イ
オン性高分子化合物を固定化できる充填剤であることが
好ましく、さらに、その表層部に陽イオン及び／又は陰
イオン交換基を有した、例えば、高分子化合物やシリカ
ゲル等の基材に陽イオン及び／又は陰イオン交換基を導
入したものが好ましく、これらの充填剤はイオン的相互
作用によりイオン性高分子化合物が固定化されることが
望ましい。さらに詳しくいえば、好適な充填剤として
は、高分子化合物基材の固定相表面に陰イオン交換基が
化学結合されたＴＳＫｇｅｌＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＰＷ
_XL、陽イオン交換基が化学結合されたＴＳＫｇｅｌＩ
Ｃ−ＣａｔｉｏｎＩ／ＩＩ、シリカゲル基材に陰イオ
ン交換基が化学結合されたＴＳＫｇｅｌＩＣ−Ａｎｉ
ｏｎ−ＳＷ、陽イオン交換基が化学結合されたＴＳＫｇ
ｅｌＩＣ−Ｃａｔｉｏｎ−ＳＷ等（以上、いずれも東
ソー製）が例示できる。

【００１５】例えば、固定化に使用される充填剤とイオ
ン性高分子化合物の組み合わせとしては、ＴＳＫｇｅｌ
ＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷとコンドロイチン硫酸−Ｃが
挙げられる。

【００１６】また、本発明において用いられるイオン性
高分子化合物の固定化の方法は、イオン性高分子化合物
と充填剤表面のイオン交換基とのイオン的相互作用を利
用する方法や、イオン性高分子化合物を充填剤表面に化
学結合させる方法等、イオン性高分子化合物が充填剤の
表層部に固定化される方法であれば特に限定されるもの
ではない。

【００１７】イオン性高分子化合物の充填剤の固定相表
面への固定化の方法、すなわち本発明の液体クロ用充填
剤の製造方法としては次の２つに大別でき、本発明にお
いてはいずれの方法でも構わない。第一の方法は、充填
剤をカラムに充填した状態で固定化を実施する方法であ
り、第二の方法は、充填剤をカラムに充填しない状態で
固定化を実施する方法である。

【００１８】第一の方法により製造を行なう場合、使用
する装置の一例として図１に示すことができる。図中、
２の送液ポンプに製造を施すカラム３を接続する。１の
溶液タンクにはイオン性高分子化合物の水溶液を満たし
た溶液タンクを用意する。その濃度はその溶解度の範囲
内であれば特に制限されるものではないが、０．１％
（重量／容量）程度が好ましく用いられる。

【００１９】製造の手順としては、まず送液ポンプ２に
よりイオン性高分子化合物の水溶液をカラム３へと一定
流速で一定時間送液する。ここで、送液の際の流速はカ
ラムの耐えられる圧力の範囲内であれば特に制限される
ものでない。また、送液の時間についても特に制限され
るものではないが、例えば、カラム３の大きさが内径
４．６ｍｍ×長さ５０ｍｍの場合、１ｍｌ／分の流速で
２時間程度の送液することで良く、その後適当な廃液タ
ンク４へ排出される。

【００２０】以上の操作により完了する。

【００２１】一方、第二の方法により製造を行なう場
合、充填剤をイオン性高分子化合物の水溶液と共に、こ
れらの量に応じた適切な大きさ、形状を有する容器に入
れ、これらを分散させる。一定時間経過後、処理された
充填剤を回収することにより完了する。ここで、その充
填剤を回収する方法としては、通常用いられる方法であ
れば良く、例えば、フィルターによる分離、遠心沈降等
を利用した分離などを採用できる。

【００２２】本発明の分析イオンの分析方法における溶
離液は、所定の分析イオンを移動させることができるも
のであれば良く、液クロ用充填剤の種類、分析イオンの
種類等により種々選択される。その組成としては、イオ
ン性物質を含有する水溶液あるいは水系溶媒が使用で
き、通常のＩＣで使用されているフタル酸、酒石酸とい
った有機酸、及びそれらの塩や、硫酸ナトリウム、硝酸
ナトリウム、炭酸緩衝液等の無機系化合物の水溶液を使
用できる。

【００２３】また、溶離液中のイオン性物質の濃度とし
ては、１ｍＭ以下が好ましく、さらに０．０１〜１ｍＭ
が、特に０．０１〜０．１ｍＭが好ましい。この濃度範
囲にあれば、検出時のノイズも小さくなり、高感度な分
析が可能となる。例えば、酒石酸の５０μＭ水溶液にお
いて良好な分離が達成できる。

【００２４】本発明の方法又は装置により分離できる対
象、すなわち分析イオンとしては、無機イオン、有機
酸、アミノ酸、タンパク質等、イオン性を有するもので
あれば特に限定されるものではなく、例えば、血清、血
漿、尿等の体液成分や、廃液などあらゆる試料を対象と
することができる。また、分析イオンとしては、目的、
用途により種々選択可能であり、１以上の陰イオンの
み、１以上の陽イオンのみ又は１以上の両性イオンのみ
とすることもできるし、これらの混合物とすることもで
きる。また、これらのイオンの価数は問わず、価数の異
なったイオンの混合物でも良い。

【００２５】これらを具体的に記載すると、無機の陰イ
オンとして、フッ素イオン、塩素イオン、臭素イオン、
ヨウ素イオンのハロゲンイオン；ハロゲン酸イオン；亜
硝酸、硝酸、次亜リン酸、亜リン酸、リン酸、ピロリン
酸、トリポリリン酸、亜硫酸、硫酸、チオ硫酸、チオシ
アン酸、二チオン酸、亜ヒ酸、亜セレン酸、セレン酸、
クロム酸、モリブデン酸、タングステン酸、フッ化ホウ
酸、アジ化酸、イオウ、シアン等の酸の陰イオン；ＥＤ
ＴＡ及びその金属との錯イオンが挙げられる。

【００２６】無機陽イオンとして、リチウム、ナトリウ
ム、カリウム、ルビジウム、セシウム、マグネシウム、
カルシウム、ストロンチウム、バリウム等のアルカリ金
属又はアルカリ土類金属イオン；鉄、鉛、銅、カドミウ
ム、コバルト、亜鉛、ニッケル、マンガン、アルミニウ
ム、アンモニウム、金、白金等の金属イオン；ランタニ
ド族のイオンが挙げられる。

【００２７】有機酸イオンとして、ギ酸、酢酸、プロピ
オン酸、酪酸、バレリアン酸、ラウリン酸、ミスチリン
酸、ステアリン酸、コハク酸、シュウ酸、マロン酸、乳
酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマー
ル酸、ピルビン酸、グルコン酸、キニン酸、ジクロル酢
酸、トリクロル酢酸、アクリル酸、メタクリル酸等の有
機カルボン酸陰イオン；炭酸、ホウ酸、アルカンスルホ
ン酸、芳香族スルホン酸、アルキルリン酸等のイオン；
アミン類、エタノールアミン類等の有機陽イオンが挙げ
られる。

【００２８】また、糖類、アルコール類、フェノール
類、アミノ酸類、核酸類、タンパク質等も挙げられる。

【００２９】これらのうち、分析イオンの分離能の面か
ら、無機の陰イオンを測定することが好ましく、さら
に、ハロゲンイオン、ハロゲン酸イオン、又は酸の陰イ
オンを測定することが好ましい。

【００３０】本発明により製造したカラムは図２に示す
ような分析装置に接続して使用される。図中、装置は溶
離液タンク５、送液ポンプ６、試料注入部７、分離カラ
ム８、検出器９、記録計１０からなる。

【００３１】図２において、溶離液タンク５は溶離液を
貯蔵するためのタンクであり、それぞれ、その大きさ、
形状、材質は特に限定されるものではなく、大きさとし
ては、分析するために必要な溶離液を越える量貯蔵でき
ればよく、形状も次に示す送液ポンプ６により、その貯
蔵されている溶離液が送液できるものであればよい。材
質としても溶離液を貯蔵した場合に安定的に貯蔵できれ
ば良く、例えば、ガラスや高分子樹脂などが例示でき
る。

【００３２】送液ポンプ６は溶離液を送液するためもの
である。送液の条件としては、特に限定はなく、試料中
の分析イオンを分析するような小規模のシステムにより
実施する場合には、分離用カラムの大きさにより異なる
が、通常１．５ｍｌ／分以下の流速により実施される。
さらに具体的には、カラムの内径が４．６ｍｍ程度の場
合には、０．７〜１．０ｍｌ／分の範囲の流速が、カラ
ムの内径が２．０ｍｍ程度の場合には、０．１〜０．２
ｍｌ／分の範囲の流速が好ましく用いられ、このような
流速を達成できる送液ポンプであればよい。

【００３３】試料注入部７は、用いられる試料の容量を
任意の容量に変えることができ、又、注入に際しては、
手動によりもしくは自動的に注入できる。

【００３４】分離カラム８は、本発明の液クロ用充填剤
を充填したものであり、必要に応じて恒温槽を用いて一
定の温度に保つこともできる。その温度としては、分離
の対象、目的にも左右されるため、一概にはいえない
が、１０〜７０℃の温度範囲が好ましく、さらに２０〜
４０℃の温度範囲が好ましい。この範囲を外れるような
温度条件の場合には、分離性能が悪くなったり、充填剤
の劣化を招くことがある。また、分離カラムの大きさ、
形状としては、目的、用途により種々選択できる。

【００３５】検出器９としては、分析イオンの検出が可
能なものであれば特に限定されるものではないが、例え
ば電気伝導度検出器、紫外可視吸光検出器、示差屈折率
計等が例示できる。また、必要に応じて恒温槽を用いる
こともできる。検出器を通過した液は適当な廃液タンク
１１へ排出される。

【００３６】記録計１０としては、検出器９で得られた
信号を記録するものであり、信号を記録紙に出力するの
みならず、直接電子記録媒体等へ記録することもでき
る。

【００３７】また、上記記載の５〜９と１１の各部との
間を接続する送液管については、耐圧性があれば、その
材質、内径、外径、長さ等には特に限定されることはな
く、通常、ステンレス等の金属や、高分子樹脂などが用
いられる。

【００３８】さらに、本発明の分析方法により分析イオ
ンを分析するにあたっては、試料中に１の分析イオンし
かない場合も複数存在する場合も共に測定することがで
きる。例えば、試料中に１の分析イオンしかない場合に
は、得られる出力をピークとして捉えることができ、そ
の保持時間等の測定により分析イオンの同定等の定性の
目的に使用でき、ピークの面積や高さ等の測定から分析
イオンの定量にも適用できる。また、試料中に複数の分
析イオンが存在する場合には、これらの分析イオンを分
離し、それぞれの保持時間等の測定により分析イオンの
同定等の定性の目的に使用でき、ピークの面積や高さ等
の測定から分析イオンの定量にも適用できる。

【００３９】

【実施例】本発明を以下の実施例により更に詳細に説明
するが、本発明はこれに限定されるものではない。

【００４０】実施例１固定相として使用される充填剤としてＴＳＫｇｅｌＩ
Ｃ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷを、陽イオン性及び／又は陰イオ
ン性荷電部を複数有する水溶性高分子化合物としてコン
ドロイチン硫酸ナトリウム−Ｃ（ナカライテスク社製、
重量平均分子量として約６４０００）を用い、以下のよ
うにカラムを製造した。

【００４１】製造は、充填剤をカラムに充填した状態で
図１示した装置を用いて行った。１の溶液タンクにはコ
ンドロイチン硫酸ナトリウム−Ｃの０．１％（重量／容
量）水溶液を満たした溶液タンクを用意し、送液ポンプ
２によりコンドロイチン硫酸ナトリウム−Ｃの０．１％
水溶液をカラムへと、流速１ｍｌ／分で２時間送液し
た。この状態でカラムの出口側に紫外吸光度検出器を接
続して、カラムからの溶出液の２１０ｎｍにおける吸光
度の変化を送液開始時からモニターし、その結果を図３
に示した。

【００４２】カラムからの溶出液の吸光度は、送液開始
後しばらくは低いものの、その後は上昇する傾向にあ
り、約４０分を過ぎるあたりから高い水準でほぼ一定に
なっていることが示されている。これは送液開始からし
ばらくはコンドロイチン硫酸−Ｃがイオン交換作用によ
りカラム内に取り込まれているためにカラムからの溶出
液中のコンドロイチン硫酸−Ｃ濃度が低いのに対し、時
間の経過とともにカラム内のイオン交換基がコンドロイ
チン硫酸−Ｃのイオン的吸着により減少するためにカラ
ムのコンドロイチン硫酸−Ｃの吸着能力が低下し、カラ
ムからの溶出液中のコンドロイチン硫酸−Ｃ濃度が徐々
に高くなり、イオン交換基がコンドロイチン硫酸−Ｃに
より完全に飽和された約４０分（図３において、矢印に
て示される点）以後はカラムからの溶出液のコンドロイ
チン硫酸−Ｃはほぼ一定になっていることによる結果で
あると考えられる。なお、送液開始後約５〜２０分で一
時的な吸光度の上昇が見られるが、これは使用したカラ
ムのイオン交換基の対イオンとして酒石酸が使用されて
おり、これがコンドロイチン硫酸−Ｃにより置換され溶
出しているためのものと考えられる。図３に示すデータ
よりコンドロイチン硫酸−Ｃがカラム内に取り込まれて
いることが示されている。

【００４３】以下には上記に例示した一連の手順により
コンドロイチン硫酸−Ｃが固定化されたＴＳＫｇｅｌ
ＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷ（内径４．６ｍｍ×長さ５０ｍ
ｍ）を使用して得られたデータを示す。以下に示す操作
は、分離温度２５℃、吸光度検出は２５℃、電気伝導度
検出は４０℃にて実施された。

【００４４】図４は上記手順により本発明による製造を
施したカラム（コンドロイチン硫酸−Ｃを固定化したＴ
ＳＫｇｅｌＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷ）と本発明による
製造を施していない従来のＩＣにおいて一般に使用され
ているカラム（ＴＳＫｇｅｌＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷ、
内径４．６ｍｍ×長さ５０ｍｍ）との間の無機陰イオン
に対する保持挙動の比較を行った結果である。ここで
は、溶離液として硫酸ナトリウム水溶液を使用して、そ
の濃度を変化させた場合の被測定イオンである硝酸イオ
ンの両カラムにおけるリテンションファクター（図４に
おいて、ｋにて示される）の対数を調べた。製造を施し
ていないカラムと比較して製造を施したカラムでは全体
的に保持が小さくなり、また製造を施したカラム調製後
では溶離液の硫酸ナトリウム濃度が２０〜１００ｍＭの
範囲では保持はほぼ一定であり、硫酸ナトリウム濃度が
２０ｍＭ以下では硫酸ナトリウム濃度が低くなるに従っ
て保持が小さくなる傾向が見られた。

【００４５】通常のＩＣでは、本データの製造を施して
いないカラムに見られるように溶離液中の塩濃度が低く
なるに従って保持は大きくなる傾向にあり、本発明によ
る製造を施したカラムでは、その保持挙動が変化してい
ることが示されている。また図４は通常のＩＣでは、使
用する溶離液中のイオン性物質が希薄である場合には保
持が極めて大きく、分析に長時間を要し、実用的でない
のに対し、本発明による製造を施したカラムでは溶離液
中にイオン性物質が希薄である場合においても被測定イ
オンが短時間に溶出し、従って、溶離液として含有する
イオン性物質が希薄な水溶液が使用可能であることをを
示している。

【００４６】図５は本発明による製造を施したカラム
（コンドロイチン硫酸−Ｃを固定化したＴＳＫｇｅｌ
ＩＣ−Ａｎｉｏｎ−ＳＷ、内径４．６ｍｍ×長さ５０ｍ
ｍ）を使用してヨウ素酸イオン、塩化物イオン、亜硝酸
イオン、臭化物イオン、硝酸イオン、ヨウ化物イオン、
チオシアン化物イオン、硫酸イオン各０．１ｍＭの混合
溶液を分析した例である（注入量２１μｌ）。ここでは
溶離液を５０μＭ酒石酸として電気伝導度検出を行っ
た。従来のＩＣでは酒石酸を溶離液として使用する場
合、通常、数ｍＭ程度の濃度を必要とするが、本発明に
おいては、約７０分以内でその１００分の１程度の濃度
で各陰イオンの分離においてほぼベースライン分離が達
成できる。具体的に分離度Ｒ_s（Ｒ_s＝２（ｔ₁−ｔ₂）／
（ｔ_1w＋ｔ_2w）、式中、ｔ₁はピーク１の保持時間、ｔ₂
はピーク２の保持時間、ｔ_1wはピーク１のピークバンド
幅、ｔ_2wはピーク２のピークバンド幅）を求めると、
１．５以上となり、良好な分離が達成できた。従来のＩ
Ｃにおいてこのような希薄な溶離液では被測定イオンを
溶出させることは困難であり、また、もしも溶出した場
合であっても、その溶出には長時間を要するばかりでな
く、ピーク幅が増大し、その検出も困難である。５０μ
Ｍ酒石酸を溶離液とした場合の電気伝導度のバックグラ
ウンドは３０μＳ／ｃｍであった。２ｍＭ酒石酸を溶離
液とした場合、通常、電気伝導度のバックグラウンドは
５００μＳ／ｃｍ程度であり、本分析におけるバックグ
ラウンドが従来のＩＣと比較して極めて低い値であり、
ノイズレベルの低減により検出感度の改善が可能となる
ことが示されている。また、本分析においては、溶離液
が希薄であるため、その調製に要する費用も安価である
という利点もある。

【００４７】実施例２図６は実施例１で得たカラムを用いて、溶離液を１０ｍ
Ｍ硫酸ナトリウムとし、硝酸イオン、ヨウ化物イオン、
チオシアン化物イオン各０．１ｍＭの混合溶液の分離を
行い、紫外吸光検出（２２０ｎｍ）した例を示している
（注入量２１μｌ）。このカラムでは、このように従来
のＩＣにおける通常の溶離液濃度範囲においても使用可
能である。この測定条件にて、被測定イオンの濃度とピ
ーク高さの関係を調べた結果を図７に示す。各被測定イ
オン０．０１〜０．１ｍＭの範囲でピーク高さとの良好
な直線関係が得られた。このため、低試料濃度域におけ
る定量性も良好となる。

【００４８】

【発明の効果】本発明によれば、ＩＣにおいて希薄なイ
オン性物質を含有する水溶液を溶離液として使用するこ
とが可能であることから、溶離液の調製が簡便で、電気
伝導度検出、紫外可視間接吸光検出において高感度、か
つ簡潔な装置構成で、良好な分析イオンの分離、定量が
得られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の充填剤をカラムに充填した状態で製造
するための装置の概略図である。

【図２】本発明の充填剤を充填したカラムの適用するイ
オンクロマトグラフィー装置の概略図である。

【図３】実施例１の製造過程におけるカラムからの溶出
液の紫外吸光度（２１０ｎｍ）の変化を示す図である。
図において、縦軸は吸光度を示し、横軸は操作開始後の
時間（分）を示す。

【図４】無機陰イオンに対する保持挙動の比較を行った
結果を示す図である。図において、縦軸はリテンション
ファクター（ｋ）の対数値（ｌｏｇｋ）を示し、ｌｏｇ
ｋ＝ｌｏｇ｛（ｔ_R−ｔ₀）／ｔ₀｝（式中、ｔ_Rは目的物
質である硝酸イオンの保持時間を、ｔ₀はカラムを素通
りする物質の保持時間を示す）より計算される。横軸
は、硫酸ナトリウム水溶液の濃度（ｍＭ）を示す。ま
た、図において、白丸はコンドロイチン硫酸−Ｃを充填
剤に固定化しない場合を、黒丸は固定化した場合を示
す。

【図５】実施例１の結果を示すクロマトグラムである。
図において、縦軸は電気伝導度（単位として、μＳ／ｃ
ｍであり、両矢印の長さは１μＳ／ｃｍ）を示し、横軸
は操作開始後の時間（分）を示す。

【図６】実施例２の結果を示すクロマトグラムである。
図において、縦軸は２２０ｎｍにおける吸光度を示し、
横軸は操作開始後の時間（分）を示す。

【図７】実施例２における検量線である。図において、
縦軸は各イオンのピーク高さに基づく２２０ｎｍにおけ
る吸光度を示し、横軸は各イオンの濃度（ｍＭ）を示
す。

【符号の説明】

図において番号は共通のものであり、その番号は以下に
示す。１：溶液タンク２：送液ポンプ３：製造を施すカラム４：廃液タンク５：溶離液タンク６：送液ポンプ７：試料注入部８：分離カラム９：検出器１０：記録計１１：廃液タンク

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】陽イオン性及び／又は陰イオン性荷電部を
複数有する水溶性高分子化合物が支持担体に固定化され
てなることを特徴とする液体クロマトグラフィー用充填
剤。
【請求項２】請求項１に記載の支持担体が、その表層部
に陰イオン及び／又は陽イオン交換基を有することを特
徴とする液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項３】請求項１又は請求項２に記載の液体クロマ
トグラフィー用充填剤がイオンクロマトグラフィー用充
填剤であることを特徴とする液体クロマトグラフィー用
充填剤。
【請求項４】請求項１〜３に記載の水溶性高分子化合物
が多糖であることを特徴とする液体クロマトグラフィー
用充填剤。
【請求項５】請求項４に記載の多糖がコンドロイチン硫
酸又はその塩であることを特徴とする液体クロマトグラ
フィー用充填剤。
【請求項６】請求項１〜５のいずれかに記載の液体クロ
マトグラフィー用充填剤により形成されてなる液体クロ
マトグラフィー用カラム。
【請求項７】表層部に陰イオン及び／又は陽イオン交換
基を有する支持担体に、陽イオン性及び／又は陰イオン
性荷電部を複数有する水溶性高分子化合物の水溶液を接
触させることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記
載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法。
【請求項８】請求項６に記載の液体クロマトグラフィー
用カラムに１以上の分析イオンを含む試料を注入し、そ
の後、溶離液を展開させて該分析イオンを分析すること
を特徴とする分析方法。
【請求項９】分析イオンが無機の陰イオンであることを
特徴とする請求項８に記載の分析方法。
【請求項１０】溶離液として１ｍＭ以下のイオン性物質
を含有する水溶液を用いることを特徴とする請求項８又
は請求項９に記載の分析方法。
【請求項１１】請求項８〜１０のいずれかに記載の分析
方法を用いることを特徴とする分析装置。