JPH11142407A - 抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法 - Google Patents
抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法Info
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- JPH11142407A JPH11142407A JP30532997A JP30532997A JPH11142407A JP H11142407 A JPH11142407 A JP H11142407A JP 30532997 A JP30532997 A JP 30532997A JP 30532997 A JP30532997 A JP 30532997A JP H11142407 A JPH11142407 A JP H11142407A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 人の血漿中などに存在する抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体を簡便に検出でき、検出した抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体を定量することにも寄与する方法を提供すること。 【解決手段】 以下の工程を包含する抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の検出方法： （Ａ） ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加し
て、該ＦＫＢＰ１２を該タンパク質固相担体に結合させ
る工程； （Ｂ） ブロッキング溶液を該タンパク質固相担体に添
加して、該タンパク質固相担体のうち、該ＦＫＢＰ１２
が結合していない領域をブロッキングする工程； （Ｃ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想され
る被検液を該タンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体をＦＫＢＰ１２に結合させる工程； （Ｄ） 該抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し得る酵素標
識抗体を該タンパク質固相担体に添加して、該抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体と該酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫ
ＢＰ１２自己抗体を検知する工程。
己抗体を簡便に検出でき、検出した抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体を定量することにも寄与する方法を提供すること。 【解決手段】 以下の工程を包含する抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の検出方法： （Ａ） ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加し
て、該ＦＫＢＰ１２を該タンパク質固相担体に結合させ
る工程； （Ｂ） ブロッキング溶液を該タンパク質固相担体に添
加して、該タンパク質固相担体のうち、該ＦＫＢＰ１２
が結合していない領域をブロッキングする工程； （Ｃ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想され
る被検液を該タンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体をＦＫＢＰ１２に結合させる工程； （Ｄ） 該抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し得る酵素標
識抗体を該タンパク質固相担体に添加して、該抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体と該酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫ
ＢＰ１２自己抗体を検知する工程。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の検出方法に関し、より詳細には、種々の病態の
診断およびその発生メカニズムを解明すること、被験体
へ臓器を移植する前後に、その被験体が臓器移植に適す
るかどうかを診断することなどに貢献する、抗ＦＫＢＰ
１２自己抗体の検出方法に関する。
己抗体の検出方法に関し、より詳細には、種々の病態の
診断およびその発生メカニズムを解明すること、被験体
へ臓器を移植する前後に、その被験体が臓器移植に適す
るかどうかを診断することなどに貢献する、抗ＦＫＢＰ
１２自己抗体の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】FK506 binding protein 12 (ＦＫＢＰ１
２) は、現在、肝移植および腎移植後の免疫抑制剤とし
て広く使用されているＦＫ５０６の細胞質内受容体タン
パク質として１９９０年に発見された。
２) は、現在、肝移植および腎移植後の免疫抑制剤とし
て広く使用されているＦＫ５０６の細胞質内受容体タン
パク質として１９９０年に発見された。
【０００３】今日では、ＦＫＢＰ１２およびその類似タ
ンパク質は、ヒトなどの哺乳類のみならず、細菌中、昆
虫および植物の細胞中にも広く存在することが知られて
いる。
ンパク質は、ヒトなどの哺乳類のみならず、細菌中、昆
虫および植物の細胞中にも広く存在することが知られて
いる。
【０００４】ＦＫＢＰ１２の性質を免疫学的に検討する
と、ＦＫＢＰ１２は、免疫反応に直接関与しているタン
パク質であって、ＦＫ５０６に結合してＩＬ−２を初め
とするサイトカインの産生を抑制し、肝移植などの移植
後の拒絶反応を抑えることが報告されている（Thomson
AW, Bonham CA, Zeevi A. Mode of cation of tacrolim
us(FK506):molecular and cellular mechanisms. Ther
Drug Monit 1995; 17:584.、およびFung JJ. Eliasziw
M, Todo S et al. The Pittsburgh randomizedtrial of
tacrolimus compared to cyclosporine for hepatic t
ransplantation. J Am Coll Surg 1996;183:177.を参
照）。また、生理学的には、ＦＫＢＰ１２はＴＧＦ−β
ファミリー１型レセプターに結合して、このレセプター
のシグナルを抑制していること、細胞質内のカルシウム
チャンネルの機能をコントロールしていることなどが報
告されており（Wang. T, Li B,Danielson PD, et al.Th
eimmunophilin FKBP12 functions as a common inhibit
or of the TGF-β familytype I receptors. Cell 199
6;86:435.、およびBrillantes AB, Ondrias K,Scott A,
et al. Stabilization of calcium release channel(Ry
anodine receptor)function by FK506-binding protei
n. Cell 1994;77:513.を参照）、免疫系のみならず細胞
の生理機能自体において重要な役割を有するタンパク質
であると示唆されている。
と、ＦＫＢＰ１２は、免疫反応に直接関与しているタン
パク質であって、ＦＫ５０６に結合してＩＬ−２を初め
とするサイトカインの産生を抑制し、肝移植などの移植
後の拒絶反応を抑えることが報告されている（Thomson
AW, Bonham CA, Zeevi A. Mode of cation of tacrolim
us(FK506):molecular and cellular mechanisms. Ther
Drug Monit 1995; 17:584.、およびFung JJ. Eliasziw
M, Todo S et al. The Pittsburgh randomizedtrial of
tacrolimus compared to cyclosporine for hepatic t
ransplantation. J Am Coll Surg 1996;183:177.を参
照）。また、生理学的には、ＦＫＢＰ１２はＴＧＦ−β
ファミリー１型レセプターに結合して、このレセプター
のシグナルを抑制していること、細胞質内のカルシウム
チャンネルの機能をコントロールしていることなどが報
告されており（Wang. T, Li B,Danielson PD, et al.Th
eimmunophilin FKBP12 functions as a common inhibit
or of the TGF-β familytype I receptors. Cell 199
6;86:435.、およびBrillantes AB, Ondrias K,Scott A,
et al. Stabilization of calcium release channel(Ry
anodine receptor)function by FK506-binding protei
n. Cell 1994;77:513.を参照）、免疫系のみならず細胞
の生理機能自体において重要な役割を有するタンパク質
であると示唆されている。
【０００５】一方、免疫学的な異常をきたしている病態
（例えば、自己免疫疾患、臓器を移植された患者に見ら
れる病態など）では、しばしば自己の甲状腺、赤血球、
ミエリン、胃、ＤＮＡなどと反応する種々の抗体、すな
わち自己抗体が認められ、数多くの自己抗体が報告され
ている。このような自己抗体のうち、一部は疾患および
その活動性の診断におけるマーカーとして臨床に応用さ
れており、また他の一部は自己免疫疾患などの免疫異常
をきたす疾患の直接の原因と考えられている。
（例えば、自己免疫疾患、臓器を移植された患者に見ら
れる病態など）では、しばしば自己の甲状腺、赤血球、
ミエリン、胃、ＤＮＡなどと反応する種々の抗体、すな
わち自己抗体が認められ、数多くの自己抗体が報告され
ている。このような自己抗体のうち、一部は疾患および
その活動性の診断におけるマーカーとして臨床に応用さ
れており、また他の一部は自己免疫疾患などの免疫異常
をきたす疾患の直接の原因と考えられている。
【０００６】そのため、自己抗体が被験体内に存在して
いるか否かを判定すること、および被験体内の自己抗体
を定量する事は、被験体が疾患状態にあるかどうかを診
断する手段の１つになり、ひいては疾患の発症メカニズ
ムを解明することにもつながる。従って、自己抗体を被
験体内から検出すること、被験体内における自己抗体量
を定量することは、種々の病態の診断、研究などに貢献
すると考えられる。これらのことより、ＦＫＢＰ１２に
ついても、ＦＫＢＰ１２に対する自己抗体の検出および
定量ができれば、種々の疾病の診断およびその発生メカ
ニズムの解明に貢献するものと期待される。
いるか否かを判定すること、および被験体内の自己抗体
を定量する事は、被験体が疾患状態にあるかどうかを診
断する手段の１つになり、ひいては疾患の発症メカニズ
ムを解明することにもつながる。従って、自己抗体を被
験体内から検出すること、被験体内における自己抗体量
を定量することは、種々の病態の診断、研究などに貢献
すると考えられる。これらのことより、ＦＫＢＰ１２に
ついても、ＦＫＢＰ１２に対する自己抗体の検出および
定量ができれば、種々の疾病の診断およびその発生メカ
ニズムの解明に貢献するものと期待される。
【０００７】しかしながら、これまでＦＫＢＰ１２に対
する自己抗体（以下、「抗ＦＫＢＰ１２自己抗体」と記
す。）の存在の報告は無く、従って抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体の検出方法、定量方法などは当然開発されていなか
った。
する自己抗体（以下、「抗ＦＫＢＰ１２自己抗体」と記
す。）の存在の報告は無く、従って抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体の検出方法、定量方法などは当然開発されていなか
った。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
を解決するためになされ、その目的とするところは、人
の血漿中などに存在する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を簡便
に検出でき、検出した抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を定量す
ることにも寄与する方法を提供することにある。
を解決するためになされ、その目的とするところは、人
の血漿中などに存在する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を簡便
に検出でき、検出した抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を定量す
ることにも寄与する方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明に係る抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法
は、以下の工程を包含する： （Ａ） ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加し
て、ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に結合させる工
程； （Ｂ） ブロッキング溶液をタンパク質固相担体に添加
して、タンパク質固相担体のうち、ＦＫＢＰ１２が結合
していない領域をブロッキングする工程； （Ｃ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想され
る被検液をタンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ
１２自己抗体をＦＫＢＰ１２に結合させる工程；および
（Ｄ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し得る酵素標識
抗体をタンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体と酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体を検知する工程。
に、本発明に係る抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法
は、以下の工程を包含する： （Ａ） ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加し
て、ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に結合させる工
程； （Ｂ） ブロッキング溶液をタンパク質固相担体に添加
して、タンパク質固相担体のうち、ＦＫＢＰ１２が結合
していない領域をブロッキングする工程； （Ｃ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想され
る被検液をタンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ
１２自己抗体をＦＫＢＰ１２に結合させる工程；および
（Ｄ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し得る酵素標識
抗体をタンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体と酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体を検知する工程。
【００１０】
【発明の実施の形態】上記（Ａ）工程〜（Ｄ）工程を包
含する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法は、酵素標識
二次抗体を用いたエンザイムイムノアッセイ(enzyme-li
nked immunosorbent assay, 以下「ＥＬＩＳＡ」と記
す。）法を利用した検出方法である。以下、各工程につ
いてそれぞれ説明する。本発明においては、ＦＫＢＰ１
２は抗原として、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体は抗体として
用いた抗原抗体反応を利用する。
含する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法は、酵素標識
二次抗体を用いたエンザイムイムノアッセイ(enzyme-li
nked immunosorbent assay, 以下「ＥＬＩＳＡ」と記
す。）法を利用した検出方法である。以下、各工程につ
いてそれぞれ説明する。本発明においては、ＦＫＢＰ１
２は抗原として、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体は抗体として
用いた抗原抗体反応を利用する。
【００１１】（Ａ工程について）本発明においては、ま
ず、ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加して、Ｆ
ＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に結合させる。
ず、ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加して、Ｆ
ＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に結合させる。
【００１２】タンパク質固相担体としては、タンパク質
を吸着して担持することができれば特に限定されず、た
とえば、ポリプロピレン製あるいはポリスチレン製の試
験管、ビーズ、ニトロセルロース膜、二フッ化ポリビニ
ル（ＰＶＤＦ）膜、ミクロタイタプレートなどが挙げら
れる。タンパク質をタンパク質固相担体により効率的に
結合させ、工程の簡略化、および各工程における操作の
負担の軽減を図るという観点から、ミクロタイタプレー
トが好ましく、ＥＬＩＳＡ用に化学処理されたミクロタ
イタプレートがより好ましい。
を吸着して担持することができれば特に限定されず、た
とえば、ポリプロピレン製あるいはポリスチレン製の試
験管、ビーズ、ニトロセルロース膜、二フッ化ポリビニ
ル（ＰＶＤＦ）膜、ミクロタイタプレートなどが挙げら
れる。タンパク質をタンパク質固相担体により効率的に
結合させ、工程の簡略化、および各工程における操作の
負担の軽減を図るという観点から、ミクロタイタプレー
トが好ましく、ＥＬＩＳＡ用に化学処理されたミクロタ
イタプレートがより好ましい。
【００１３】タンパク質固相担体に対してより多く結合
させるために、ＦＫＢＰ１２は、水溶液の形態で添加さ
れることが好ましく、ｐＨの調整などの観点から、緩衝
液として添加されることがより好ましい。用いられる緩
衝液としては、ＰＢＳが好ましい。
させるために、ＦＫＢＰ１２は、水溶液の形態で添加さ
れることが好ましく、ｐＨの調整などの観点から、緩衝
液として添加されることがより好ましい。用いられる緩
衝液としては、ＰＢＳが好ましい。
【００１４】ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に結合
させた後には、タンパク質固相担体に結合しなかったＦ
ＫＢＰ１２を除去するために、タンパク質固相担体を洗
浄することが好ましい。洗浄液としては、界面活性剤を
含有する水溶液（より好ましくは緩衝液）が好ましい。
なお、以下の（Ｂ）工程〜（Ｄ）工程においても同様
に、適宜タンパク質固相担体を洗浄することが好まし
く、本明細書を考慮したいわゆる当業者はこのような洗
浄の必要性を適切に認識し、各洗浄における洗浄液、洗
浄回数を適切に選択することができる。
させた後には、タンパク質固相担体に結合しなかったＦ
ＫＢＰ１２を除去するために、タンパク質固相担体を洗
浄することが好ましい。洗浄液としては、界面活性剤を
含有する水溶液（より好ましくは緩衝液）が好ましい。
なお、以下の（Ｂ）工程〜（Ｄ）工程においても同様
に、適宜タンパク質固相担体を洗浄することが好まし
く、本明細書を考慮したいわゆる当業者はこのような洗
浄の必要性を適切に認識し、各洗浄における洗浄液、洗
浄回数を適切に選択することができる。
【００１５】またコントロールとしてＦＫＢＰ１２を含
有しないことを除き、上記と同一の水溶液（好ましくは
緩衝液）を用意する。さらに本発明に係る検出方法を用
いて、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の定量を行う場合には、
イムノプレートごとの標準曲線を得て、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体の濃度を算出するために種々の濃度の免疫グロ
プリン（以下、「Ｉｇ」と記す）を含有する水溶液（好
ましくは緩衝液）を用意する。
有しないことを除き、上記と同一の水溶液（好ましくは
緩衝液）を用意する。さらに本発明に係る検出方法を用
いて、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の定量を行う場合には、
イムノプレートごとの標準曲線を得て、抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体の濃度を算出するために種々の濃度の免疫グロ
プリン（以下、「Ｉｇ」と記す）を含有する水溶液（好
ましくは緩衝液）を用意する。
【００１６】これらＦＫＢＰ１２を含有する緩衝液、種
々の濃度のＩｇを含有する緩衝液、およびタンパク質を
含有しない緩衝液を、タンパク質固相担体に添加して、
ＦＫＢＰ１２あるいは種々の濃度のＩｇが結合したタン
パク質固相担体ならびにタンパク質が結合していない担
体を作製する。
々の濃度のＩｇを含有する緩衝液、およびタンパク質を
含有しない緩衝液を、タンパク質固相担体に添加して、
ＦＫＢＰ１２あるいは種々の濃度のＩｇが結合したタン
パク質固相担体ならびにタンパク質が結合していない担
体を作製する。
【００１７】（Ｂ工程について）次に、ブロッキング溶
液を上記のタンパク質固相担体に添加して、タンパク質
固相担体のうち、ＦＫＢＰ１２またはＩｇが結合してい
ない領域をブロッキングし（すなわち、非特異的吸着防
止操作を行い）、被験体に含まれる抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体以外のＩｇがタンパク質固相担体に結合することを
防止する。
液を上記のタンパク質固相担体に添加して、タンパク質
固相担体のうち、ＦＫＢＰ１２またはＩｇが結合してい
ない領域をブロッキングし（すなわち、非特異的吸着防
止操作を行い）、被験体に含まれる抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体以外のＩｇがタンパク質固相担体に結合することを
防止する。
【００１８】ブロッキング溶液とは、タンパク質固相担
体においてＦＫＢＰ１２が結合した領域以外の部位をコ
ートして、そのような部位において余分なタンパク質が
タンパク質固相担体に結合することを防止することがで
きる溶液を指す。このようなブロッキング溶液として
は、スキムミルクをＰＢＳ溶液で希釈した溶液、他の二
次抗体の標識物質とも相互作用を起こさないタンパク質
を希釈した溶液、界面活性剤を含有する溶液などが挙げ
られ、スキムミルクをＰＢＳ溶液で希釈した溶液が好ま
しく、界面活性剤をさらに添加してスキムミルクをＰＢ
Ｓ溶液で希釈した溶液が好ましい。このようなブロッキ
ング溶液は単独で用いられてもよく、あるいは２種類以
上組み合わせて用いられてもよい。なお、界面活性剤と
しては、Ｔｗｅｅｎ（商品名）などが用いられ得る。
体においてＦＫＢＰ１２が結合した領域以外の部位をコ
ートして、そのような部位において余分なタンパク質が
タンパク質固相担体に結合することを防止することがで
きる溶液を指す。このようなブロッキング溶液として
は、スキムミルクをＰＢＳ溶液で希釈した溶液、他の二
次抗体の標識物質とも相互作用を起こさないタンパク質
を希釈した溶液、界面活性剤を含有する溶液などが挙げ
られ、スキムミルクをＰＢＳ溶液で希釈した溶液が好ま
しく、界面活性剤をさらに添加してスキムミルクをＰＢ
Ｓ溶液で希釈した溶液が好ましい。このようなブロッキ
ング溶液は単独で用いられてもよく、あるいは２種類以
上組み合わせて用いられてもよい。なお、界面活性剤と
しては、Ｔｗｅｅｎ（商品名）などが用いられ得る。
【００１９】このようにして、次の（Ｃ）工程における
抗原抗体反応に関与せず、後の（Ｄ）工程において用い
られる酵素標識抗体とも相互作用を起こさないようなタ
ンパク質により、ＦＫＢＰ１２が結合した領域以外の部
位がコートされるので、以下の（Ｃ）工程以後に抗ＦＫ
ＢＰ１２自己抗体以外のＩｇを含有する溶液などをタン
パク質固相担体に添加した場合であっても、そのＩｇは
タンパク質固相担体に結合しないため、抗ＦＫＢＰ１２
の検出、定量などに悪影響が生じず、その精度が向上さ
れる。
抗原抗体反応に関与せず、後の（Ｄ）工程において用い
られる酵素標識抗体とも相互作用を起こさないようなタ
ンパク質により、ＦＫＢＰ１２が結合した領域以外の部
位がコートされるので、以下の（Ｃ）工程以後に抗ＦＫ
ＢＰ１２自己抗体以外のＩｇを含有する溶液などをタン
パク質固相担体に添加した場合であっても、そのＩｇは
タンパク質固相担体に結合しないため、抗ＦＫＢＰ１２
の検出、定量などに悪影響が生じず、その精度が向上さ
れる。
【００２０】（Ｃ工程について）次いで、抗ＦＫＢＰ１
２自己抗体を含有すると予想される被検液を、上記のタ
ンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体
をＦＫＢＰ１２に結合させる。
２自己抗体を含有すると予想される被検液を、上記のタ
ンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体
をＦＫＢＰ１２に結合させる。
【００２１】抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想
される被検液としては、被験体（例えば、ヒトなどのほ
乳類）由来の血漿、血清、関節滑膜液、髄液、尿、組織
抽出液、細胞培養上清）などが挙げられる。血漿を用い
る場合には、下記で説明する抗原抗体反応を効率的に行
うため、水溶液（好ましくは緩衝液）を用いて希釈して
おくことが好ましい。なお、このように血漿を含有する
希釈液を、「血漿サンプル」という場合がある。
される被検液としては、被験体（例えば、ヒトなどのほ
乳類）由来の血漿、血清、関節滑膜液、髄液、尿、組織
抽出液、細胞培養上清）などが挙げられる。血漿を用い
る場合には、下記で説明する抗原抗体反応を効率的に行
うため、水溶液（好ましくは緩衝液）を用いて希釈して
おくことが好ましい。なお、このように血漿を含有する
希釈液を、「血漿サンプル」という場合がある。
【００２２】上記のように、ブロッキングされたタンパ
ク質固相担体に、上記のような被検液が添加されると、
被検液中の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が、タンパク質固相
担体に結合したＦＫＢＰ１２と抗原抗体反応を起こし、
抗ＦＫＢＰ１２自己抗体とＦＫＢＰ１２とが特異的に結
合する。また、被検液中の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体以外
の成分（例えば、タンパク質）は、上記工程（Ｂ）で行
われたブロッキングにより、タンパク質固相担体に結合
しないため、タンパク質固相担体においては、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体とＦＫＢＰ１２との特異的結合が選択的
に行われる。
ク質固相担体に、上記のような被検液が添加されると、
被検液中の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が、タンパク質固相
担体に結合したＦＫＢＰ１２と抗原抗体反応を起こし、
抗ＦＫＢＰ１２自己抗体とＦＫＢＰ１２とが特異的に結
合する。また、被検液中の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体以外
の成分（例えば、タンパク質）は、上記工程（Ｂ）で行
われたブロッキングにより、タンパク質固相担体に結合
しないため、タンパク質固相担体においては、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体とＦＫＢＰ１２との特異的結合が選択的
に行われる。
【００２３】なお（Ｂ）工程におけるブロッキングを行
っても、被検液に含まれるＩｇが非特異的にタンパク質
固相担体へ結合することを完全に阻害することは不可能
である。そこで（Ａ）工程で作製したＦＫＢＰ１２が結
合していない担体にも被検液を添加し、（Ｄ）工程にお
いて詳述するように非特異的に結合したＩｇの補正を行
う。また、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の定量を行う場合に
は、血漿から血漿サンプルを調製する際に用いた希釈液
を、Ｉｇを結合させた担体に添加しておく。
っても、被検液に含まれるＩｇが非特異的にタンパク質
固相担体へ結合することを完全に阻害することは不可能
である。そこで（Ａ）工程で作製したＦＫＢＰ１２が結
合していない担体にも被検液を添加し、（Ｄ）工程にお
いて詳述するように非特異的に結合したＩｇの補正を行
う。また、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の定量を行う場合に
は、血漿から血漿サンプルを調製する際に用いた希釈液
を、Ｉｇを結合させた担体に添加しておく。
【００２４】（Ｄ工程について）続いて、抗ＦＫＢＰ１
２自己抗体に結合し得る酵素標識抗体をタンパク質固相
担体に添加して、２次抗体反応を生じさせて、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体と酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体を検知する。
２自己抗体に結合し得る酵素標識抗体をタンパク質固相
担体に添加して、２次抗体反応を生じさせて、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体と酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体を検知する。
【００２５】本工程に用いられる酵素標識抗体として
は、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し、さらに適切な手
段により検知され得る標識を備えていればよく、例え
ば、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）標識抗ヒト
ＩｇＭ抗体、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＭ抗体、
およびペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体が挙げら
れる。ＡＬＰ標識抗ヒトＩｇ抗体を用いた場合には、蛍
光反応物質などの酵素基質を含有する溶液を添加して、
酵素反応を生じさせる。このような酵素基質としては、
４−メチルウムベリフェリルリン酸塩(4-methylumbelli
feryl phosphate)が挙げられる。
は、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し、さらに適切な手
段により検知され得る標識を備えていればよく、例え
ば、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）標識抗ヒト
ＩｇＭ抗体、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＭ抗体、
およびペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体が挙げら
れる。ＡＬＰ標識抗ヒトＩｇ抗体を用いた場合には、蛍
光反応物質などの酵素基質を含有する溶液を添加して、
酵素反応を生じさせる。このような酵素基質としては、
４−メチルウムベリフェリルリン酸塩(4-methylumbelli
feryl phosphate)が挙げられる。
【００２６】すなわち、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体と結合
した酵素標識抗体と蛍光反応物質とが反応すると、蛍光
が生じるので、これを蛍光強度計などを用いて検知する
ことにより、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が検出される。一
方、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が被検液に存在しなかった
場合には、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体と酵素標識抗体とが
結合せず、酵素標識抗体は洗浄などによりタンパク質固
相担体から除去されてしまうので、蛍光が生じず、蛍光
強度計などによっても検知されない。なお、蛍光強度計
を用いた場合には、測定される蛍光は所定の蛍光強度と
して検知される。
した酵素標識抗体と蛍光反応物質とが反応すると、蛍光
が生じるので、これを蛍光強度計などを用いて検知する
ことにより、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が検出される。一
方、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が被検液に存在しなかった
場合には、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体と酵素標識抗体とが
結合せず、酵素標識抗体は洗浄などによりタンパク質固
相担体から除去されてしまうので、蛍光が生じず、蛍光
強度計などによっても検知されない。なお、蛍光強度計
を用いた場合には、測定される蛍光は所定の蛍光強度と
して検知される。
【００２７】なお、このように、酵素標識抗体と反応し
た抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を検知する手段としては、上
記のように蛍光を検知することによる間接的な手段だけ
でなく、他の適切な手段（例えば、酵素基質としてｐ−
ニトロフェニルリン酸、ｏ−フェニレンヂアミンなどを
用い、特異的な波長の吸光度を測定する手段）も用いら
れ得る。
た抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を検知する手段としては、上
記のように蛍光を検知することによる間接的な手段だけ
でなく、他の適切な手段（例えば、酵素基質としてｐ−
ニトロフェニルリン酸、ｏ−フェニレンヂアミンなどを
用い、特異的な波長の吸光度を測定する手段）も用いら
れ得る。
【００２８】また、コントロールとして（Ａ）工程にて
作製したタンパク質が結合していない担体を用い、上記
と同様の過程を行うことによって非特異的に結合したＩ
ｇの補正を行うことができる。すなわち、上記のように
蛍光強度計を用いて得られた蛍光強度から、タンパク質
が結合していない担体に結合した非特異的なＩｇの蛍光
強度を減ずることにより、固相化されたＦＫＢＰ１２に
特異的に結合したＩｇ、すなわち抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体の検出が可能となる。
作製したタンパク質が結合していない担体を用い、上記
と同様の過程を行うことによって非特異的に結合したＩ
ｇの補正を行うことができる。すなわち、上記のように
蛍光強度計を用いて得られた蛍光強度から、タンパク質
が結合していない担体に結合した非特異的なＩｇの蛍光
強度を減ずることにより、固相化されたＦＫＢＰ１２に
特異的に結合したＩｇ、すなわち抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体の検出が可能となる。
【００２９】また、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の定量を行
う場合には、種々の濃度のＩｇが結合したタンパク質固
相担体に、血漿サンプルの代わりに希釈液を反応させて
得られた蛍光強度から、各イムノプレートごとのＩｇ標
準曲線を作製する。そして被検液中に存在する抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体の蛍光強度と等しい蛍光強度を発するＩ
ｇの濃度をこの標準曲線から算出して抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の濃度（単位／ｍｌ）と定義する。これによって
異なるイムノプレートごとの結果の比較、すなわち定量
化が可能となる。
う場合には、種々の濃度のＩｇが結合したタンパク質固
相担体に、血漿サンプルの代わりに希釈液を反応させて
得られた蛍光強度から、各イムノプレートごとのＩｇ標
準曲線を作製する。そして被検液中に存在する抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体の蛍光強度と等しい蛍光強度を発するＩ
ｇの濃度をこの標準曲線から算出して抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の濃度（単位／ｍｌ）と定義する。これによって
異なるイムノプレートごとの結果の比較、すなわち定量
化が可能となる。
【００３０】このようにして、主として自己免疫疾患を
患う被験体、臓器を移植される前後の被験体において存
在し得る抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を検出することによ
り、あるいはどれほど抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が存在し
ているかを測定することにより、種々の病態の診断およ
びその発生メカニズムを解明すること、被験体へ臓器を
移植する前後に、その被験体が臓器移植に適するかどう
かを診断することなどが可能になる。このような診断は
以下の実施例において詳細に説明される。
患う被験体、臓器を移植される前後の被験体において存
在し得る抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を検出することによ
り、あるいはどれほど抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が存在し
ているかを測定することにより、種々の病態の診断およ
びその発生メカニズムを解明すること、被験体へ臓器を
移植する前後に、その被験体が臓器移植に適するかどう
かを診断することなどが可能になる。このような診断は
以下の実施例において詳細に説明される。
【００３１】
【実施例】本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に
説明するが、以下の実施例は例示の目的にのみ用いら
れ、限定の目的で用いられてはならない。
説明するが、以下の実施例は例示の目的にのみ用いら
れ、限定の目的で用いられてはならない。
【００３２】（実施例１）血漿を、種々の自己免疫疾患
を患う不特定の以下の表１に示す計１２６人の患者、お
よびコントロールとしての３３人の健常な被験体から得
た：
を患う不特定の以下の表１に示す計１２６人の患者、お
よびコントロールとしての３３人の健常な被験体から得
た：
【００３３】
【表１】
【００３４】なお、使用前まで、全ての各血漿を−２０
℃に保った。なお、全ての測定項目に対して２つのウェ
ルを使用し（duplicate）、その平均値をもってその測
定項目の測定値とした。
℃に保った。なお、全ての測定項目に対して２つのウェ
ルを使用し（duplicate）、その平均値をもってその測
定項目の測定値とした。
【００３５】上記計１５９名から得られた各血漿を、４
％ブロックエース／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する
水溶液で４０倍に希釈して血漿サンプルを調製し、次い
で、この血漿サンプルを用いて、抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体を、以下のように、若干の修正を加えた間接ＥＬＩＳ
Ａ法で定量した。
％ブロックエース／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する
水溶液で４０倍に希釈して血漿サンプルを調製し、次い
で、この血漿サンプルを用いて、抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体を、以下のように、若干の修正を加えた間接ＥＬＩＳ
Ａ法で定量した。
【００３６】（Ａ工程について）１０被検体ごとにＡ、
Ｂ、２枚のミクロタイタープレート（商品名「Nunc-Imm
unoplate Maxisorp F 96」、Inter Med社製、以下単に
「プレート」という）を用いて、ＩｇＧおよびＩｇＭの
抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の測定を行った。プレートＡ
（ＩｇＧ用）およびプレートＢ（ＩｇＭ用）には各々3
つの部分に以下の内容物を添加し、４℃で一晩、インキ
ュベートして、ウェルをそれぞれの内容物でコートし
た： プレートＡ （Ａｌ）ヒト遺伝子組み換えＦＫＢＰ１２（Sigma Chem
ical社製）を含有するＰＢＳ（濃度５μｇ／ｍｌ、５０
μｌ）； （Ａ２）ＰＢＳ（５０μｌ）； （Ａ３）ヒトＩｇＧのＰＢＳ溶液の希釈系列（１０００
ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、２５０ｎｇ／ｍｌ、１
２５ｎｇ／ｍｌ、６２．５ｎｇ／ｍｌ、３１．２５ｎｇ
／ｍｌ、１５．６２５ｎｇ／ｍｌ、および７．８１２５
ｎｇ／ｍｌの8系列、各５０μｌ） プレートＢ （Ｂｌ） （Ａｌ）と同様； （Ｂ２） （Ａ２）と同様； （Ｂ３） ヒトＩｇＭのＰＢＳ溶液の希釈系列（上記と
同様、各５０μｌ）。次いで、ウェルを３回、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（Ｔｗｅｅｎ ＰＢ
Ｓ）で３回洗浄し、ウェルをコートしなかった未反応成
分を除去した。
Ｂ、２枚のミクロタイタープレート（商品名「Nunc-Imm
unoplate Maxisorp F 96」、Inter Med社製、以下単に
「プレート」という）を用いて、ＩｇＧおよびＩｇＭの
抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の測定を行った。プレートＡ
（ＩｇＧ用）およびプレートＢ（ＩｇＭ用）には各々3
つの部分に以下の内容物を添加し、４℃で一晩、インキ
ュベートして、ウェルをそれぞれの内容物でコートし
た： プレートＡ （Ａｌ）ヒト遺伝子組み換えＦＫＢＰ１２（Sigma Chem
ical社製）を含有するＰＢＳ（濃度５μｇ／ｍｌ、５０
μｌ）； （Ａ２）ＰＢＳ（５０μｌ）； （Ａ３）ヒトＩｇＧのＰＢＳ溶液の希釈系列（１０００
ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、２５０ｎｇ／ｍｌ、１
２５ｎｇ／ｍｌ、６２．５ｎｇ／ｍｌ、３１．２５ｎｇ
／ｍｌ、１５．６２５ｎｇ／ｍｌ、および７．８１２５
ｎｇ／ｍｌの8系列、各５０μｌ） プレートＢ （Ｂｌ） （Ａｌ）と同様； （Ｂ２） （Ａ２）と同様； （Ｂ３） ヒトＩｇＭのＰＢＳ溶液の希釈系列（上記と
同様、各５０μｌ）。次いで、ウェルを３回、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（Ｔｗｅｅｎ ＰＢ
Ｓ）で３回洗浄し、ウェルをコートしなかった未反応成
分を除去した。
【００３７】（Ｂ工程について）４％ブロックエースパ
ウダー（大日本製薬株式会社製）の水溶液２５０μｌを
（Ａ１）から（Ｂ３）の各ウェルに添加し、室温で２時
間インキュベートして、ヒト遺伝子組み換えＦＫＢＰ１
２またはヒトＩｇがコートされていないウェルの領域を
上記のパウダーでブロックした。ＴｗｅｅｎＰＢＳで１
回洗浄して未反応のブロックエースパウダーを除去した
後、０．４％ＥＤＴＡ・２Ｎａ、４％ブロックエース、
および０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する５０μｌの水
溶液を各ウェルに添加した。
ウダー（大日本製薬株式会社製）の水溶液２５０μｌを
（Ａ１）から（Ｂ３）の各ウェルに添加し、室温で２時
間インキュベートして、ヒト遺伝子組み換えＦＫＢＰ１
２またはヒトＩｇがコートされていないウェルの領域を
上記のパウダーでブロックした。ＴｗｅｅｎＰＢＳで１
回洗浄して未反応のブロックエースパウダーを除去した
後、０．４％ＥＤＴＡ・２Ｎａ、４％ブロックエース、
および０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する５０μｌの水
溶液を各ウェルに添加した。
【００３８】（Ｃ工程について）上記１５９名から得ら
れた血漿サンプル（５０μｌ）を、上記の（Ａ１）およ
び（Ａ２）のウェル、ならびに（Ｂ１）および（Ｂ２）
のウェルに添加し、２時間、振盪しながら室温でインキ
ュベートして、（Ａ１）および（Ｂ１）のウェルにおい
て、血漿サンプル中に含有され得る抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体とＦＫＢＰ１２との抗原抗体反応を生じさせ、また
（Ａ２）および（Ｂ２）のウェルにおいて、Ｉｇとプレ
ートとの非特異的結合を生じさせた。次いで７回、Ｔｗ
ｅｅｎＰＢＳで洗浄し、未反応の抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体をウェルから除去した。なお、（Ａ３）および（Ｂ
３）のウェルには、４％ブロックエース／０．１％Ｔｗ
ｅｅｎ２０を含有する水溶液（５０μｌ）を添加した。
れた血漿サンプル（５０μｌ）を、上記の（Ａ１）およ
び（Ａ２）のウェル、ならびに（Ｂ１）および（Ｂ２）
のウェルに添加し、２時間、振盪しながら室温でインキ
ュベートして、（Ａ１）および（Ｂ１）のウェルにおい
て、血漿サンプル中に含有され得る抗ＦＫＢＰ１２自己
抗体とＦＫＢＰ１２との抗原抗体反応を生じさせ、また
（Ａ２）および（Ｂ２）のウェルにおいて、Ｉｇとプレ
ートとの非特異的結合を生じさせた。次いで７回、Ｔｗ
ｅｅｎＰＢＳで洗浄し、未反応の抗ＦＫＢＰ１２自己抗
体をウェルから除去した。なお、（Ａ３）および（Ｂ
３）のウェルには、４％ブロックエース／０．１％Ｔｗ
ｅｅｎ２０を含有する水溶液（５０μｌ）を添加した。
【００３９】（Ｄ工程について）（Ａ１）、（Ａ２）お
よび（Ａ３）の各ウェルに、１％ブロックエース／０．
１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する水溶液で５０００倍に希
釈された１００μｌのアルカリホスファターゼ標識抗ヒ
トＩｇＧ抗体Ｆ（ａｂ）2分画（Kirkegaard&Perry Labo
ratories社製、以下、単に「標識抗体」という）を添加
し、室温で２時間インキュベートして抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体と標識抗体とを結合させた。ウェルを７回洗浄
し、未反応の標識抗体をウェルから除去した。また、同
様に、（Ｂ１）、（Ｂ２）および（Ｂ３）の各ウェル
に、１％ブロックエース／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含
有する水溶液で５０００倍に希釈された１００μｌのア
ルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＭ抗体Ｆ（ａ
ｂ‘）2分画（Kirkegaard&Perry Laboratories社製）を
添加して、室温で２時間インキュベートし、ウェルを７
回洗浄した。
よび（Ａ３）の各ウェルに、１％ブロックエース／０．
１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する水溶液で５０００倍に希
釈された１００μｌのアルカリホスファターゼ標識抗ヒ
トＩｇＧ抗体Ｆ（ａｂ）2分画（Kirkegaard&Perry Labo
ratories社製、以下、単に「標識抗体」という）を添加
し、室温で２時間インキュベートして抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体と標識抗体とを結合させた。ウェルを７回洗浄
し、未反応の標識抗体をウェルから除去した。また、同
様に、（Ｂ１）、（Ｂ２）および（Ｂ３）の各ウェル
に、１％ブロックエース／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含
有する水溶液で５０００倍に希釈された１００μｌのア
ルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＭ抗体Ｆ（ａ
ｂ‘）2分画（Kirkegaard&Perry Laboratories社製）を
添加して、室温で２時間インキュベートし、ウェルを７
回洗浄した。
【００４０】１０％ジエタノールアミンおよび０．５ｍ
ＭＭｇＣｌ2を含有する０．５ｍＭ４−メチルウンベリ
フィリルホスフェート水溶液（Sigma社製、ｐＨ１０、
各１００μｌ）を（Ａ１）から（Ｂ３）の各ウェルに添
加し、３０分インキュベートして標識抗体と上記酵素基
質とを結合させた。
ＭＭｇＣｌ2を含有する０．５ｍＭ４−メチルウンベリ
フィリルホスフェート水溶液（Sigma社製、ｐＨ１０、
各１００μｌ）を（Ａ１）から（Ｂ３）の各ウェルに添
加し、３０分インキュベートして標識抗体と上記酵素基
質とを結合させた。
【００４１】次いで、各ウェルの蛍光強度を蛍光強度計
ＮＪ−５０００（Inter Med社製）を用いて励起波長３
６０ｎｍ、放射波長４６０ｎｍの条件で測定した。この
際、（Ａ）工程から（Ｄ）工程の操作を全く行っていな
いウェルをブランクとし、このウェルの値が０となるよ
うにゼロ調整した後、ウェル全体の中で最大値を示す検
体の蛍光強度が３００から４００の範囲に入るように感
度を調節した。
ＮＪ−５０００（Inter Med社製）を用いて励起波長３
６０ｎｍ、放射波長４６０ｎｍの条件で測定した。この
際、（Ａ）工程から（Ｄ）工程の操作を全く行っていな
いウェルをブランクとし、このウェルの値が０となるよ
うにゼロ調整した後、ウェル全体の中で最大値を示す検
体の蛍光強度が３００から４００の範囲に入るように感
度を調節した。
【００４２】さらに、（Ａ１）のウェルにおける蛍光強
度から、（Ａ２）のウェルにおける蛍光強度を差し引い
た値をＦＫＢＰ１２に特異的に結合したＩｇＧの値とし
た。同様に、（Ｂ１）と（Ｂ２）とから、ＦＫＢＰ１２
に特異的に結合したＩｇＭの値を求めた。（Ａ３）およ
び（Ｂ３）のウェルにおける蛍光強度を用いて、ＩｇＧ
またはＩｇＭの標準曲線を求め、ＦＫＢＰ１２に特異的
に結合したＩｇＧまたはＩｇＭの濃度を計算し、この値
を各検体における抗ＦＫＢＰ１２の抗体価とした。Ｉｇ
ＧおよびＩｇＭともに正常人の平均値＋標準偏差×２以
上の抗体価（ＩｇＧについては１６．９単位／ｍｌ以
上、ＩｇＭに対しては１７．５単位／ｍｌ以上）を陽
性、これ未満を陰性とした。結果を以下の表２に示す。
度から、（Ａ２）のウェルにおける蛍光強度を差し引い
た値をＦＫＢＰ１２に特異的に結合したＩｇＧの値とし
た。同様に、（Ｂ１）と（Ｂ２）とから、ＦＫＢＰ１２
に特異的に結合したＩｇＭの値を求めた。（Ａ３）およ
び（Ｂ３）のウェルにおける蛍光強度を用いて、ＩｇＧ
またはＩｇＭの標準曲線を求め、ＦＫＢＰ１２に特異的
に結合したＩｇＧまたはＩｇＭの濃度を計算し、この値
を各検体における抗ＦＫＢＰ１２の抗体価とした。Ｉｇ
ＧおよびＩｇＭともに正常人の平均値＋標準偏差×２以
上の抗体価（ＩｇＧについては１６．９単位／ｍｌ以
上、ＩｇＭに対しては１７．５単位／ｍｌ以上）を陽
性、これ未満を陰性とした。結果を以下の表２に示す。
【００４３】
【表２】
【００４４】上記の表２から、全身性エリスマトーデス
などの自己免疫性疾患を患う患者においては、健常者と
比較して、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が存在する割合が高
いことが理解される。従って、本発明の抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体の検出方法により、種々の疾患（特に自己免疫
疾患）の診断に役立つ。
などの自己免疫性疾患を患う患者においては、健常者と
比較して、抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が存在する割合が高
いことが理解される。従って、本発明の抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体の検出方法により、種々の疾患（特に自己免疫
疾患）の診断に役立つ。
【００４５】（実施例２）血漿を、生体肝移植患者４７
名から得たこと以外は、上記とほぼ同様に実験を行っ
た。結果を以下の表３に示す。なお、生体肝移植患者４
７名のうち、２２名が肝臓を移植された後に拒絶反応が
観察され（Ｒ（＋））、２５名には拒絶反応が観察され
なかった（Ｒ（−））。
名から得たこと以外は、上記とほぼ同様に実験を行っ
た。結果を以下の表３に示す。なお、生体肝移植患者４
７名のうち、２２名が肝臓を移植された後に拒絶反応が
観察され（Ｒ（＋））、２５名には拒絶反応が観察され
なかった（Ｒ（−））。
【００４６】
【表３】
【００４７】上記の表３より、移植前に抗ＦＫＢＰ１２
自己抗体が陽性を示す被検体は拒絶反応を示す確率が高
いこと、また移植後に抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が陽性を
示す被検体は死亡率が高いことが理解される。従って、
移植前及び移植後に本発明に係る方法により、被検体中
の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の存在を検出することによっ
て、患者のリスクを予め予測することが可能となる。リ
スクの高い患者に対しては、より慎重な臨床経過のモニ
タリングと免疫抑制剤の増量あるいは種類の変更によっ
て、拒絶反応を未然に防ぎ、合併症による死亡率を減少
させることが可能となる。
自己抗体が陽性を示す被検体は拒絶反応を示す確率が高
いこと、また移植後に抗ＦＫＢＰ１２自己抗体が陽性を
示す被検体は死亡率が高いことが理解される。従って、
移植前及び移植後に本発明に係る方法により、被検体中
の抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の存在を検出することによっ
て、患者のリスクを予め予測することが可能となる。リ
スクの高い患者に対しては、より慎重な臨床経過のモニ
タリングと免疫抑制剤の増量あるいは種類の変更によっ
て、拒絶反応を未然に防ぎ、合併症による死亡率を減少
させることが可能となる。
【００４８】
【発明の効果】本発明により、種々の病態の診断および
その発生メカニズムを解明すること、被験体へ臓器を移
植する前後に、その被験体のリスクを予測することなど
に貢献する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法が提供さ
れる。
その発生メカニズムを解明すること、被験体へ臓器を移
植する前後に、その被験体のリスクを予測することなど
に貢献する抗ＦＫＢＰ１２自己抗体の検出方法が提供さ
れる。
Claims (1)
- 【請求項１】 以下の工程を包含する抗ＦＫＢＰ１２自
己抗体の検出方法： （Ａ） ＦＫＢＰ１２をタンパク質固相担体に添加し
て、該ＦＫＢＰ１２を該タンパク質固相担体に結合させ
る工程； （Ｂ） ブロッキング溶液を該タンパク質固相担体に添
加して、該タンパク質固相担体のうち、該ＦＫＢＰ１２
が結合していない領域をブロッキングする工程； （Ｃ） 抗ＦＫＢＰ１２自己抗体を含有すると予想され
る被検液を該タンパク質固相担体に添加して、抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体をＦＫＢＰ１２に結合させる工程； （Ｄ） 該抗ＦＫＢＰ１２自己抗体に結合し得る酵素標
識抗体を該タンパク質固相担体に添加して、該抗ＦＫＢ
Ｐ１２自己抗体と該酵素標識抗体とを結合させ、抗ＦＫ
ＢＰ１２自己抗体を検知する工程。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30532997A JP3309900B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30532997A JP3309900B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11142407A true JPH11142407A (ja) | 1999-05-28 |
| JP3309900B2 JP3309900B2 (ja) | 2002-07-29 |
Family
ID=17943812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30532997A Expired - Fee Related JP3309900B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3309900B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999065939A1 (en) * | 1998-06-18 | 1999-12-23 | Curagen Corporation | INTERACTION OF p27(KIP1) WITH FKBP-12 |
-
1997
- 1997-11-07 JP JP30532997A patent/JP3309900B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999065939A1 (en) * | 1998-06-18 | 1999-12-23 | Curagen Corporation | INTERACTION OF p27(KIP1) WITH FKBP-12 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3309900B2 (ja) | 2002-07-29 |
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