JPH1073581A - 液体クロマトグラフィ定量方法及び装置 - Google Patents
液体クロマトグラフィ定量方法及び装置Info
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- JPH1073581A JPH1073581A JP8228961A JP22896196A JPH1073581A JP H1073581 A JPH1073581 A JP H1073581A JP 8228961 A JP8228961 A JP 8228961A JP 22896196 A JP22896196 A JP 22896196A JP H1073581 A JPH1073581 A JP H1073581A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 この発明は、目的物質の分離・精製後の純度
を確認することにより、定量精度を向上させることを目
的としたものである。 【解決手段】 測定原理が等しく、測定条件が異なる２
種類の測定条件が設定できる２台の検出器に目的物質を
連続的に順次送り、好ましくは測定原理が異なる２種類
の検出器に目的物質を連続的に順次送り、得られた２種
類の信号強度の比を計測する方法で標準試料及び被検体
試料についてそれぞれの信号強度を計測することを特徴
とする液体クロマトグラフィ定量方法。
を確認することにより、定量精度を向上させることを目
的としたものである。 【解決手段】 測定原理が等しく、測定条件が異なる２
種類の測定条件が設定できる２台の検出器に目的物質を
連続的に順次送り、好ましくは測定原理が異なる２種類
の検出器に目的物質を連続的に順次送り、得られた２種
類の信号強度の比を計測する方法で標準試料及び被検体
試料についてそれぞれの信号強度を計測することを特徴
とする液体クロマトグラフィ定量方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は目的物質の分離・
精製後の純度を確認することにより定量精度を向上させ
ることを目的とした液体クロマトグラフィ定量方法及び
装置に関する。
精製後の純度を確認することにより定量精度を向上させ
ることを目的とした液体クロマトグラフィ定量方法及び
装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】液体クロマトグラフィによる定量方法及
び定量装置の基本構成は、分離カラムに対して１種類の
検出器を配置し、標準試料及び被検体試料から得られる
クロマトグラムのそれぞれの信号が記録される位置、ま
たはその時間（保持時間）の比較により目的物質の定性
あるいは同定を、そしてそれぞれの信号強度の相対比較
により定量をする方法となっている。この場合、検出器
としては目的の物質に対して特異性が高く、かつ検出感
度が高い種類のものが選択され、かつ目的の物質を計測
するために最適の条件が設定される。したがって、複数
の成分を同時に検出する場合には、それぞれの成分の特
性に適した条件の複数の検出器で測定する場合がある。
あるいは分光分析機能をもった連続した波長の吸収スペ
クトルグラムを観測することにより未知物質の定性ある
いは同定を目的としたものを使用する場合もある。
び定量装置の基本構成は、分離カラムに対して１種類の
検出器を配置し、標準試料及び被検体試料から得られる
クロマトグラムのそれぞれの信号が記録される位置、ま
たはその時間（保持時間）の比較により目的物質の定性
あるいは同定を、そしてそれぞれの信号強度の相対比較
により定量をする方法となっている。この場合、検出器
としては目的の物質に対して特異性が高く、かつ検出感
度が高い種類のものが選択され、かつ目的の物質を計測
するために最適の条件が設定される。したがって、複数
の成分を同時に検出する場合には、それぞれの成分の特
性に適した条件の複数の検出器で測定する場合がある。
あるいは分光分析機能をもった連続した波長の吸収スペ
クトルグラムを観測することにより未知物質の定性ある
いは同定を目的としたものを使用する場合もある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】液体クロマトグラフィ
による定性・定量の基本は、分離カラムの特性及び目的
物質の特性により成分の溶出する時間（保持時間）が異
なる原理に基づいている。しかし、成分の保持時間は各
成分に特有なものではない。したがって標準試料など既
知物質が溶出するその保持時間の位置に他の成分が溶出
しているか否かの確証はそのクロマトグラムからは得ら
れない。そこで一般には特性の異なる分離カラムあるい
は溶離液を変更した条件で再測定することにより確認す
る方法がとられる。また、配合された試料の場合には、
あらかじめ目的の物質を除いた成分・組成の疑似試料で
目的とする保持時間の位置に他の成分が溶出していない
ことを確認した後に被検体試料を測定する方法で行われ
ている。これら複数の方法を試みるには多大の時間を必
要とする問題点がある。また、未知の被検体試料を対象
とする場合には、これらの方法をとることができない。
しかも天然の物質など未知の試料における微量成分を測
定の対象とする場合には、得られた定量値の信頼性を確
認することがさらに困難であるという問題点があった。
による定性・定量の基本は、分離カラムの特性及び目的
物質の特性により成分の溶出する時間（保持時間）が異
なる原理に基づいている。しかし、成分の保持時間は各
成分に特有なものではない。したがって標準試料など既
知物質が溶出するその保持時間の位置に他の成分が溶出
しているか否かの確証はそのクロマトグラムからは得ら
れない。そこで一般には特性の異なる分離カラムあるい
は溶離液を変更した条件で再測定することにより確認す
る方法がとられる。また、配合された試料の場合には、
あらかじめ目的の物質を除いた成分・組成の疑似試料で
目的とする保持時間の位置に他の成分が溶出していない
ことを確認した後に被検体試料を測定する方法で行われ
ている。これら複数の方法を試みるには多大の時間を必
要とする問題点がある。また、未知の被検体試料を対象
とする場合には、これらの方法をとることができない。
しかも天然の物質など未知の試料における微量成分を測
定の対象とする場合には、得られた定量値の信頼性を確
認することがさらに困難であるという問題点があった。
【０００４】
【課題を解決する為の手段】液体クロマトグラフィにお
いて分離カラムより目的物質が溶出する時間（保持時
間）を指標とする定性・定量の基本原理はそのまま生か
しながら、かつ、標準試料など既知物質が溶出する保持
時間の位置に、他の成分が溶出しているか否かを確証す
ることができる液体クロマトグラフィ定量方法及び装置
に関する研究を行った結果、通常の定量方法で行われて
いる最適の分離カラム、溶離液組成及び検出器並びにそ
の検出条件のもとで定量することに加え、あえて最適の
条件と異なる条件を設定あるいは測定原理の異なる検出
器を使用する極めて新規な定量方法及び定量装置によ
り、前記問題点を解決することに成功したのである。
いて分離カラムより目的物質が溶出する時間（保持時
間）を指標とする定性・定量の基本原理はそのまま生か
しながら、かつ、標準試料など既知物質が溶出する保持
時間の位置に、他の成分が溶出しているか否かを確証す
ることができる液体クロマトグラフィ定量方法及び装置
に関する研究を行った結果、通常の定量方法で行われて
いる最適の分離カラム、溶離液組成及び検出器並びにそ
の検出条件のもとで定量することに加え、あえて最適の
条件と異なる条件を設定あるいは測定原理の異なる検出
器を使用する極めて新規な定量方法及び定量装置によ
り、前記問題点を解決することに成功したのである。
【０００５】一般に成分を定量する際には、その成分の
特性を生かし検出し易く、かつより特異的な最適な条件
で測定される。そこで、この最適条件と異なる条件で測
定した場合に得られる情報は、当然最適条件と異なる情
報が得られ、しかもこの両者の情報は当然一致しないこ
と、さらに得られた２種類の情報が同時に示す特性は極
めて高い特異性をもつ情報となることに注目した。すな
わち、この発明は、複数の成分を同時測定する目的で、
それぞれの成分に対応した最適条件の複数の検出器で測
定する方法及び装置ではなく、一成分を対象としなが
ら、あえて最適条件と異なる条件で目的とする物質を測
定するところに特徴がある。
特性を生かし検出し易く、かつより特異的な最適な条件
で測定される。そこで、この最適条件と異なる条件で測
定した場合に得られる情報は、当然最適条件と異なる情
報が得られ、しかもこの両者の情報は当然一致しないこ
と、さらに得られた２種類の情報が同時に示す特性は極
めて高い特異性をもつ情報となることに注目した。すな
わち、この発明は、複数の成分を同時測定する目的で、
それぞれの成分に対応した最適条件の複数の検出器で測
定する方法及び装置ではなく、一成分を対象としなが
ら、あえて最適条件と異なる条件で目的とする物質を測
定するところに特徴がある。
【０００６】すなわち方法の発明は、測定原理が等し
く、測定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２
台の検出器、好ましくは測定原理が異なる２種類の検出
器に目的物質を連続的に順次送り、得られた２種類の信
号強度の比を計測する方法で標準試料及び被検体試料か
ら得られるそれぞれの信号強度を計測することを特徴と
する液体クロマトグラフィ定量方法である。
く、測定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２
台の検出器、好ましくは測定原理が異なる２種類の検出
器に目的物質を連続的に順次送り、得られた２種類の信
号強度の比を計測する方法で標準試料及び被検体試料か
ら得られるそれぞれの信号強度を計測することを特徴と
する液体クロマトグラフィ定量方法である。
【０００７】ここで信号強度は、クロマトグラムの信号
の高さでもよいし、あるいは信号が示す面積でもよい。
具体的には標準試料など単一成分の試料から得られた測
定条件の異なる２種類の信号強度Ａ及びＢの比：Ａ／Ｂ
は、もし未知の被検体試料から得られた信号が単一成分
でかつ同一成分であるならば、未知試料から得られた２
種類の信号強度Ｃ及びＤの比：Ｃ／Ｄと一致するはずで
あり、異なれば他の成分が混入していることを示す。
の高さでもよいし、あるいは信号が示す面積でもよい。
具体的には標準試料など単一成分の試料から得られた測
定条件の異なる２種類の信号強度Ａ及びＢの比：Ａ／Ｂ
は、もし未知の被検体試料から得られた信号が単一成分
でかつ同一成分であるならば、未知試料から得られた２
種類の信号強度Ｃ及びＤの比：Ｃ／Ｄと一致するはずで
あり、異なれば他の成分が混入していることを示す。
【０００８】また装置の発明は、測定原理が等しく、測
定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２台の検
出装置を直列に配置し、好ましくは測定原理が異なる２
種類の検出装置を直列に配置し、それぞれ異なる２種類
の信号強度を記録し、かつその信号強度の比を計測可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ定量装置
である。
定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２台の検
出装置を直列に配置し、好ましくは測定原理が異なる２
種類の検出装置を直列に配置し、それぞれ異なる２種類
の信号強度を記録し、かつその信号強度の比を計測可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ定量装置
である。
【０００９】
【発明の実施の形態】この発明は、測定原理が等しく、
測定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２台の
検出器を使用して測定し、好ましくは測定原理が異なる
２種類の検出器を使用して測定する方法及び装置であ
る。この発明の方法及び装置は、通常使用されているす
べての液体クロマトグラフィによる定量分析に適用でき
る。
測定条件が異なる２種類の測定条件が設定できる２台の
検出器を使用して測定し、好ましくは測定原理が異なる
２種類の検出器を使用して測定する方法及び装置であ
る。この発明の方法及び装置は、通常使用されているす
べての液体クロマトグラフィによる定量分析に適用でき
る。
【００１０】
【実施例１】通常行われている液体クロマトグラフィで
検出器として吸光光度が測定できる２台の検出器を直列
に配置した。そして一方の吸光光度検出器は、目的の物
質であるシチジンの吸光度特性から検討された最適の検
出条件である２７５ｎｍを設定し、さらに他方の検出器
には最適条件と異なる２６０ｎｍを設定し、常法にした
がって既知の標準シチジン溶液及び被検体試料の乳製品
溶液をそれぞれ測定した。
検出器として吸光光度が測定できる２台の検出器を直列
に配置した。そして一方の吸光光度検出器は、目的の物
質であるシチジンの吸光度特性から検討された最適の検
出条件である２７５ｎｍを設定し、さらに他方の検出器
には最適条件と異なる２６０ｎｍを設定し、常法にした
がって既知の標準シチジン溶液及び被検体試料の乳製品
溶液をそれぞれ測定した。
【００１１】図１は、同じ検出原理で測定条件の異なる
２台の検出器で２種類の信号の比を測定する装置の実施
例である。
２台の検出器で２種類の信号の比を測定する装置の実施
例である。
【００１２】即ち容器１２の溶離液７内に吸入パイプ９
の一端を挿入し、吸入パイプ９の他端を液送ポンプ２の
吸入側に接続し、液送ポンプ２の吐出側に吐出パイプ１
０の一端を接続し、吐出パイプ１０の他端を分離カラム
１の一側に接続する。前記吐出パイプ１０には試料注入
部６を設ける。前記分離カラム１の他側に検出器３、４
を順次直列に接続すると共に、検出器４に排出パイプ１
１の一端を接続して、排出パイプ１１の他端を廃液槽８
に臨ませる。前記検出器３、４の検出出力は記録計５に
入力されて記録される。
の一端を挿入し、吸入パイプ９の他端を液送ポンプ２の
吸入側に接続し、液送ポンプ２の吐出側に吐出パイプ１
０の一端を接続し、吐出パイプ１０の他端を分離カラム
１の一側に接続する。前記吐出パイプ１０には試料注入
部６を設ける。前記分離カラム１の他側に検出器３、４
を順次直列に接続すると共に、検出器４に排出パイプ１
１の一端を接続して、排出パイプ１１の他端を廃液槽８
に臨ませる。前記検出器３、４の検出出力は記録計５に
入力されて記録される。
【００１３】図２は、図１に示した装置により既知の標
準シチジン（ｃｙｔｉｄｉｎｅ：Ｃ９Ｈ１３Ｎ３Ｏ５＝
２４３．２）を含む標準混合溶液を２７５ｎｍおよび２
６０ｎｍで測定したクロマトグラムである。その両者の
信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ１５１．０ｍｍ及
び６２．２ｍｍでその比は０．４１であった。
準シチジン（ｃｙｔｉｄｉｎｅ：Ｃ９Ｈ１３Ｎ３Ｏ５＝
２４３．２）を含む標準混合溶液を２７５ｎｍおよび２
６０ｎｍで測定したクロマトグラムである。その両者の
信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ１５１．０ｍｍ及
び６２．２ｍｍでその比は０．４１であった。
【００１４】図３は、図２に示した測定条件で未知の乳
製品溶液について２７５ｎｍおよび２６０ｎｍで測定し
たクロマトグラムである。その両者の信号強度（ピーク
の高さ）はそれぞれ４４．１ｍｍ及び１８．２ｍｍでそ
の比は０．４１であった。
製品溶液について２７５ｎｍおよび２６０ｎｍで測定し
たクロマトグラムである。その両者の信号強度（ピーク
の高さ）はそれぞれ４４．１ｍｍ及び１８．２ｍｍでそ
の比は０．４１であった。
【００１５】したがって、２７５ｎｍ及び２６０ｎｍの
各測定値の比について、両測定値を比較した場合、よい
一致が見られることから、被検体試料から得られた図３
上のシチジンが溶出する保持時間の位置の信号成分には
他の成分が含まれていないと判断された。
各測定値の比について、両測定値を比較した場合、よい
一致が見られることから、被検体試料から得られた図３
上のシチジンが溶出する保持時間の位置の信号成分には
他の成分が含まれていないと判断された。
【００１６】同様の操作により他の試料について測定し
た実施例を図４に示した。
た実施例を図４に示した。
【００１７】図４の実施例では測定条件が異なる条件で
得られた両者の信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ３
３．６ｍｍ及び１８．４ｍｍでその比は０．５５であっ
た。すなわち２７５ｎｍ及び２６０ｎｍの比が標準試料
から得られた測定値の比：０．４１と明かに異なってい
るため被検体試料から得られた図４上のシチジンが溶出
する保持時間の位置（↓）の信号成分には他の成分が含
まれていると推定されたため、さらに液体クロマトグラ
フィにおける移動相の組成を変更し再度測定したところ
標準溶液から得られた測定値とよい一致がみられたこと
から、前記クロマトグラフィ条件下で得られたクロマト
グラムは明かに他の成分が重複していたことが確認され
た。
得られた両者の信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ３
３．６ｍｍ及び１８．４ｍｍでその比は０．５５であっ
た。すなわち２７５ｎｍ及び２６０ｎｍの比が標準試料
から得られた測定値の比：０．４１と明かに異なってい
るため被検体試料から得られた図４上のシチジンが溶出
する保持時間の位置（↓）の信号成分には他の成分が含
まれていると推定されたため、さらに液体クロマトグラ
フィにおける移動相の組成を変更し再度測定したところ
標準溶液から得られた測定値とよい一致がみられたこと
から、前記クロマトグラフィ条件下で得られたクロマト
グラムは明かに他の成分が重複していたことが確認され
た。
【００１８】
【実施例２】通常行われている液体クロマトグラフィで
検出器として蛍光強度が測定できる２台の検出器を直列
に配置した。そして一方の蛍光検出器は、目的の物質で
あるリボフラビンの蛍光特性から検討された最適の検出
条件である励起波長４４５ｎｍ及び測定波長５３０ｎｍ
を設定し、さらに他方の検出器には最適条件と異なる励
起波長４４５ｎｍ及び測定波長５４０ｎｍを設定し、常
法にしたがって既知の標準ビタミンＢ2 （リボフラビ
ン：Ｃ１７Ｈ２０Ｎ４Ｏ６）及び被検体試料の乳製品溶
液をそれぞれ測定した。
検出器として蛍光強度が測定できる２台の検出器を直列
に配置した。そして一方の蛍光検出器は、目的の物質で
あるリボフラビンの蛍光特性から検討された最適の検出
条件である励起波長４４５ｎｍ及び測定波長５３０ｎｍ
を設定し、さらに他方の検出器には最適条件と異なる励
起波長４４５ｎｍ及び測定波長５４０ｎｍを設定し、常
法にしたがって既知の標準ビタミンＢ2 （リボフラビ
ン：Ｃ１７Ｈ２０Ｎ４Ｏ６）及び被検体試料の乳製品溶
液をそれぞれ測定した。
【００１９】この実施例にも図１の装置を使用した。
【００２０】図５は、図１に示した装置により既知の標
準リボフラビンを含む標準混合溶液をリボフラビンの蛍
光特性から検討された最適の検出条件である励起波長４
４５ｎｍおよび測定波長５３０ｎｍ並びに最適条件と異
なる励起波長４４５ｎｍおよび測定波長５４０ｎｍの両
測定条件で測定したクロマトグラムである。その両測定
条件から得られた信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ
１８７．２ｍｍ及び５９．１ｍｍでその両測定値の比は
０．３２であった。
準リボフラビンを含む標準混合溶液をリボフラビンの蛍
光特性から検討された最適の検出条件である励起波長４
４５ｎｍおよび測定波長５３０ｎｍ並びに最適条件と異
なる励起波長４４５ｎｍおよび測定波長５４０ｎｍの両
測定条件で測定したクロマトグラムである。その両測定
条件から得られた信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ
１８７．２ｍｍ及び５９．１ｍｍでその両測定値の比は
０．３２であった。
【００２１】他方、図６は図５に示した測定条件で未知
の乳製品溶液について測定したクロマトグラムである。
その両測定条件から得られた信号強度（ピークの高さ）
はそれぞれ６２．９ｍｍ及び１９．８ｍｍでその測定値
比は０．３１であった。
の乳製品溶液について測定したクロマトグラムである。
その両測定条件から得られた信号強度（ピークの高さ）
はそれぞれ６２．９ｍｍ及び１９．８ｍｍでその測定値
比は０．３１であった。
【００２２】すなわち、標準溶液から得られた測定と比
較した場合極めてよい一致が見られることから、被検体
試料から得られた図６に示されるリボフラビンが溶出す
る保持時間の位置の信号成分には他の成分が含まれてい
ないことがわかった。
較した場合極めてよい一致が見られることから、被検体
試料から得られた図６に示されるリボフラビンが溶出す
る保持時間の位置の信号成分には他の成分が含まれてい
ないことがわかった。
【００２３】同様の操作で他の試料について測定し、リ
ボフラビンが溶出する保持時間の位置の信号成分につい
て測定条件の異なる条件で測定した両者の信号強度（ピ
ークの高さ）はそれぞれ８０．６ｍｍ及び３３．０ｍｍ
でその比は０．４１であった。
ボフラビンが溶出する保持時間の位置の信号成分につい
て測定条件の異なる条件で測定した両者の信号強度（ピ
ークの高さ）はそれぞれ８０．６ｍｍ及び３３．０ｍｍ
でその比は０．４１であった。
【００２４】これは、標準試料から得られた測定値の
比：０．３１と明かに異なっているため、このリボフラ
ビンが溶出すると推定される保持時間の位置の信号成分
には他の成分が含まれていると推定されたため、さらに
新規に液体クロマトグラフィにおける移動相の組成を変
更し、再度測定したところ標準溶液から得られた測定値
とよい一致がみられたことから、前記クロマトグラフィ
条件下で得られたクロマトグラムは明かに他の成分が重
複していたことが確認された。
比：０．３１と明かに異なっているため、このリボフラ
ビンが溶出すると推定される保持時間の位置の信号成分
には他の成分が含まれていると推定されたため、さらに
新規に液体クロマトグラフィにおける移動相の組成を変
更し、再度測定したところ標準溶液から得られた測定値
とよい一致がみられたことから、前記クロマトグラフィ
条件下で得られたクロマトグラムは明かに他の成分が重
複していたことが確認された。
【００２５】
【実施例３】通常行われている液体クロマトグラフィに
おいて、蛍光強度及び酸化電流量が測定できる２種類の
検出器を直列に配置した。そして一方の蛍光検出器は、
目的の物質であるビタミンＫの還元生成物の蛍光特性か
ら検討された最適の検出条件である励起波長３２０ｎｍ
及び測定波長４３０ｎｍを設定し、さらに他方の検出器
にはビタミンＫが電気的に還元・酸化されるために最適
条件である還元電位−８００ｍｖ及び酸化電位＋５０ｍ
ｖを設定し、常法にしたがって既知の標準ビタミンＫ及
び被検体試料の乳製品溶液をそれぞれ測定した。
おいて、蛍光強度及び酸化電流量が測定できる２種類の
検出器を直列に配置した。そして一方の蛍光検出器は、
目的の物質であるビタミンＫの還元生成物の蛍光特性か
ら検討された最適の検出条件である励起波長３２０ｎｍ
及び測定波長４３０ｎｍを設定し、さらに他方の検出器
にはビタミンＫが電気的に還元・酸化されるために最適
条件である還元電位−８００ｍｖ及び酸化電位＋５０ｍ
ｖを設定し、常法にしたがって既知の標準ビタミンＫ及
び被検体試料の乳製品溶液をそれぞれ測定した。
【００２６】図７は測定原理が異なる２種類の検出器で
２種類の信号の比を測定する装置の実施例である。
２種類の信号の比を測定する装置の実施例である。
【００２７】即ち容器１２の溶離液７に吸入パイプ９の
一端を挿入し、吸入パイプ９の他端を液送ポンプ２の吸
入側に接続し、液送ポンプ２の吐出側に吐出パイプ１０
の一端を接続し、吐出パイプ１０の他端を分離カラム１
の一側に接続する。前記吐出パイプ１０には試料注入部
６を設ける。前記分離カラム１の他側に測定原理が異な
る検出器３ａ、４ａを順次直列に接続すると共に、検出
器４ａに排出パイプ１１の一端を接続し、排出パイプ１
１の他端は廃液槽８内に臨ませる。前記検出器３ａ、４
ａの検出出力は、記録計５に入力されて記録される。
一端を挿入し、吸入パイプ９の他端を液送ポンプ２の吸
入側に接続し、液送ポンプ２の吐出側に吐出パイプ１０
の一端を接続し、吐出パイプ１０の他端を分離カラム１
の一側に接続する。前記吐出パイプ１０には試料注入部
６を設ける。前記分離カラム１の他側に測定原理が異な
る検出器３ａ、４ａを順次直列に接続すると共に、検出
器４ａに排出パイプ１１の一端を接続し、排出パイプ１
１の他端は廃液槽８内に臨ませる。前記検出器３ａ、４
ａの検出出力は、記録計５に入力されて記録される。
【００２８】前記において、検出器３ａは励起波長及び
測定波長として最適条件を設定し、検出器４ａは−の還
元電位と、＋の酸化電位として最適条件を設定した。
測定波長として最適条件を設定し、検出器４ａは−の還
元電位と、＋の酸化電位として最適条件を設定した。
【００２９】図８は、図７に示した装置により常法にし
たがい既知の標準ビタミンＫ1 （ｐｈｙｌｌｏｑｕｉｎ
ｏｎｅ：Ｃ３１Ｈ４６Ｏ２＝４５０．７）を含む溶液に
ついてビタミンＫ1 の還元生成物の最適蛍光検出励起波
長である３２０ｎｍおよびその測定波長である４３０ｎ
ｍで測定したクロマトグラム並びに電気化学検出器のビ
タミンＫ1 に対する最適還元電位−８００ｍｖ及び酸化
電位＋５０ｍｖで測定したクロマトグラムである。ビタ
ミンＫ1 に対する測定原理の異なる両測定装置から得ら
れた信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ７２．４ｍｍ
及び９２．８ｍｍでその比は０．７８であった。
たがい既知の標準ビタミンＫ1 （ｐｈｙｌｌｏｑｕｉｎ
ｏｎｅ：Ｃ３１Ｈ４６Ｏ２＝４５０．７）を含む溶液に
ついてビタミンＫ1 の還元生成物の最適蛍光検出励起波
長である３２０ｎｍおよびその測定波長である４３０ｎ
ｍで測定したクロマトグラム並びに電気化学検出器のビ
タミンＫ1 に対する最適還元電位−８００ｍｖ及び酸化
電位＋５０ｍｖで測定したクロマトグラムである。ビタ
ミンＫ1 に対する測定原理の異なる両測定装置から得ら
れた信号強度（ピークの高さ）はそれぞれ７２．４ｍｍ
及び９２．８ｍｍでその比は０．７８であった。
【００３０】他方、図９は、図８に示した測定条件で未
知濃度の乳製品溶液について常法にしたがって測定した
クロマトグラムである。ビタミンＫ1 が溶出すると推定
される保持時間の位置の信号について、測定原理が異な
る両測定装置による信号強度（ピークの高さ）はそれぞ
れ３５．４ｍｍ及び４２．７ｍｍでその比は０．８３で
あった。これは標準溶液から得られた測定値の比０．７
８と比較すると極めてよい一致がみられたことから図９
に示されるビタミンＫ1 が溶出する保持時間の位置に相
当する信号成分には他の成分が含まれていないことがわ
かった。
知濃度の乳製品溶液について常法にしたがって測定した
クロマトグラムである。ビタミンＫ1 が溶出すると推定
される保持時間の位置の信号について、測定原理が異な
る両測定装置による信号強度（ピークの高さ）はそれぞ
れ３５．４ｍｍ及び４２．７ｍｍでその比は０．８３で
あった。これは標準溶液から得られた測定値の比０．７
８と比較すると極めてよい一致がみられたことから図９
に示されるビタミンＫ1 が溶出する保持時間の位置に相
当する信号成分には他の成分が含まれていないことがわ
かった。
【００３１】同様の操作により他の試料について測定し
たところその両者の信号強度（ピークの高さ）はそれぞ
れ３３．３ｍｍ及び５１．２ｍｍでその比は０．６５
で、この測定値は標準試料から得られた測定値の比：
０．７８と異なっていたためこのビタミンＫ1 が溶出す
る保持時間の位置に測定された信号には他の成分が含ま
れていると推定されたため、さらに新規に液体クロマト
グラフィにおけるカラムの種類を変更し、前記記載と同
様の操作により再度測定したところ標準溶液から得られ
た測定値の比とよい一致がみられたことから、前記クロ
マトグラフィ条件下で得られたクロマトグラムは明かに
他の成分が重複していたことが確認された。
たところその両者の信号強度（ピークの高さ）はそれぞ
れ３３．３ｍｍ及び５１．２ｍｍでその比は０．６５
で、この測定値は標準試料から得られた測定値の比：
０．７８と異なっていたためこのビタミンＫ1 が溶出す
る保持時間の位置に測定された信号には他の成分が含ま
れていると推定されたため、さらに新規に液体クロマト
グラフィにおけるカラムの種類を変更し、前記記載と同
様の操作により再度測定したところ標準溶液から得られ
た測定値の比とよい一致がみられたことから、前記クロ
マトグラフィ条件下で得られたクロマトグラムは明かに
他の成分が重複していたことが確認された。
【００３２】
【発明の効果】この発明は、測定原理が同一、又は異な
る２台の検出器を直列に接続して検出したので、通常の
すべての液体クロマトグラフィによる目的物質の分離・
精製後の定量における純度の確認に適用できる極めて汎
用性の高い方法であり、しかもその所要時間は短く極め
て経済的となる。
る２台の検出器を直列に接続して検出したので、通常の
すべての液体クロマトグラフィによる目的物質の分離・
精製後の定量における純度の確認に適用できる極めて汎
用性の高い方法であり、しかもその所要時間は短く極め
て経済的となる。
【図１】検出原理（吸光度計測または蛍光強度計測）が
等しくそれぞれ測定条件が異なる２台の検出器で２種類
の信号の比を測定する実施例のブロック図。
等しくそれぞれ測定条件が異なる２台の検出器で２種類
の信号の比を測定する実施例のブロック図。
【図２】（ａ）標準シチジン溶液の２７５ｎｍ吸光度−
保持時間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
保持時間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
【図３】（ａ）被検体試料の２７５ｎｍ吸光度−保持時
間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
【図４】（ａ）被検体試料の２７５ｎｍ吸光度−保持時
間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
間グラフ。 （ｂ）同じく２６０ｎｍ吸光度−保持時間グラフ。
【図５】（ａ）標準ビタミンＢ2 （リボフラビン）を含
む測定波長５３０ｎｍにおける標準混合溶液の蛍光強度
−保持時間のグラフ。 （ｂ）同じく測定波長５４０ｎｍの蛍光強度−保持時間
のグラフ。
む測定波長５３０ｎｍにおける標準混合溶液の蛍光強度
−保持時間のグラフ。 （ｂ）同じく測定波長５４０ｎｍの蛍光強度−保持時間
のグラフ。
【図６】（ａ）被検体試料の測定波長５３０ｎｍの蛍光
強度−保持時間のグラフ。 （ｂ）同じく測定波長５４０ｎｍの蛍光強度−保持時間
グラフ。
強度−保持時間のグラフ。 （ｂ）同じく測定波長５４０ｎｍの蛍光強度−保持時間
グラフ。
【図７】検出原理（蛍光強度・電気化学計測）が異なる
２台の検出器で２種類の信号の比を測定する実施例のブ
ロック図。
２台の検出器で２種類の信号の比を測定する実施例のブ
ロック図。
【図８】（ａ）標準ビタミンＫ1 溶液の電流−保持時間
グラフ。 （ｂ）同じく蛍光強度−保持時間のグラフ。
グラフ。 （ｂ）同じく蛍光強度−保持時間のグラフ。
【図９】（ａ）被検体試料の電流−保持時間グラフ。 （ｂ）同じく蛍光強度−保持時間のグラフ。
１ 分離カラム ２ 液送ポンプ ３、３ａ 検出器 ４、４ａ 検出器 ５ 記録計 ６ 試料注入部 ７ 溶離液 ８ 廃液槽 ９ 吸入パイプ １０ 吐出パイプ １１ 排出パイプ １２ 容器
Claims (2)
- 【請求項１】 測定原理が等しく、測定条件が異なる２
種類の測定条件が設定できる２台の検出器に目的物質を
連続的に順次送り、好ましくは測定原理が異なる２種類
の検出器に目的物質を連続的に順次送り、得られた２種
類の信号強度の比を計測する方法で標準試料及び被検体
試料についてそれぞれの信号強度を計測することを特徴
とする液体クロマトグラフィ定量方法。 - 【請求項２】 測定原理が等しく、測定条件が異なる２
種類の測定条件が設定できる２台の検出装置を直列に配
置し、好ましくは測定原理が異なる２種類の検出装置を
直列に配置し、それぞれ異なる２種類の信号強度を計測
可能とし、かつその信号強度の比を測定可能としたこと
を特徴とする液体クロマトグラフィ定量装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8228961A JPH1073581A (ja) | 1996-08-29 | 1996-08-29 | 液体クロマトグラフィ定量方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8228961A JPH1073581A (ja) | 1996-08-29 | 1996-08-29 | 液体クロマトグラフィ定量方法及び装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1073581A true JPH1073581A (ja) | 1998-03-17 |
Family
ID=16884583
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8228961A Pending JPH1073581A (ja) | 1996-08-29 | 1996-08-29 | 液体クロマトグラフィ定量方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1073581A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004520709A (ja) * | 2001-01-24 | 2004-07-08 | ハイ キュー レーザー プロダクション ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | コンパクトな超高速レーザー |
-
1996
- 1996-08-29 JP JP8228961A patent/JPH1073581A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004520709A (ja) * | 2001-01-24 | 2004-07-08 | ハイ キュー レーザー プロダクション ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | コンパクトな超高速レーザー |
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