JPH1072369A - ヒト免疫不全ウイルスに対するワクチンおよびその製造方法 - Google Patents
ヒト免疫不全ウイルスに対するワクチンおよびその製造方法Info
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- JPH1072369A JPH1072369A JP23237896A JP23237896A JPH1072369A JP H1072369 A JPH1072369 A JP H1072369A JP 23237896 A JP23237896 A JP 23237896A JP 23237896 A JP23237896 A JP 23237896A JP H1072369 A JPH1072369 A JP H1072369A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列
からなるエピトープ、および配列表の配列番号２に示す
エピトープを免疫グロブリンに移植したヒト免疫不全ウ
イルスに特異的に反応するエピトープ分子移植抗体、化
学架橋された上記エピトープ分子移植抗体からなるエピ
トープ分子移植抗体オリゴマー、および上記エピトープ
分子移植抗体および／または上記オリゴマーを含むヒト
免疫不全ウイルス用ワクチンを提供する。 【効果】 上記配列表の配列番号１または２に示すエピ
トープ分子を移植したエピトープ分子移植抗体モノマー
および／またはオリゴマーをワクチンとして投与するこ
とによって、良好な抗体応答を生じさせ、抗体価の上昇
およびＣＴＬを誘導擦ることができる。
からなるエピトープ、および配列表の配列番号２に示す
エピトープを免疫グロブリンに移植したヒト免疫不全ウ
イルスに特異的に反応するエピトープ分子移植抗体、化
学架橋された上記エピトープ分子移植抗体からなるエピ
トープ分子移植抗体オリゴマー、および上記エピトープ
分子移植抗体および／または上記オリゴマーを含むヒト
免疫不全ウイルス用ワクチンを提供する。 【効果】 上記配列表の配列番号１または２に示すエピ
トープ分子を移植したエピトープ分子移植抗体モノマー
および／またはオリゴマーをワクチンとして投与するこ
とによって、良好な抗体応答を生じさせ、抗体価の上昇
およびＣＴＬを誘導擦ることができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エピトープ分子移
植抗体、ワクチンおよびその製造方法に関する。より詳
細には、ヒト免疫不全ウイルス（エイズウイルス、ＨＩ
Ｖ）に対するエピトープ分子移植抗体、上記エピトープ
分子移植抗体を含むワクチンおよびその製造方法に関す
る。
植抗体、ワクチンおよびその製造方法に関する。より詳
細には、ヒト免疫不全ウイルス（エイズウイルス、ＨＩ
Ｖ）に対するエピトープ分子移植抗体、上記エピトープ
分子移植抗体を含むワクチンおよびその製造方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】予防接種は、古くから多くの菌による感
染症の予防のためにワクチンの投与といった形で行われ
ており、ある程度の効果を上げている。こうした予防接
種の効果は、免疫適格細胞（immunocompetent cell）、
すなわち、Ｂ細胞、Ｔ細胞および抗原提示細胞（APCs）
に対する刺激の強さに依存する。
染症の予防のためにワクチンの投与といった形で行われ
ており、ある程度の効果を上げている。こうした予防接
種の効果は、免疫適格細胞（immunocompetent cell）、
すなわち、Ｂ細胞、Ｔ細胞および抗原提示細胞（APCs）
に対する刺激の強さに依存する。
【０００３】近年、ウイルスによる感染症や疾病が社会
的にも問題となっており、ワクチンを使用することによ
って菌に起因する感染症の予防に効果があったことか
ら、ウイルスによる疾病に関しても同様の予防策を講じ
るために、様々な試みがなされてきた。
的にも問題となっており、ワクチンを使用することによ
って菌に起因する感染症の予防に効果があったことか
ら、ウイルスによる疾病に関しても同様の予防策を講じ
るために、様々な試みがなされてきた。
【０００４】こうした試みとしては、エイズウイルスの
ワクチンペプチドを有機合成により作成する方法（Berz
ofsky ら、Vaccines 94, Cold Spring Harbor Laborato
ry Press, New York, 147 頁(1994 年) ）、免疫グロブ
リンとＣＤ４分子のキメラ分子をエイズウイルス防御に
利用する方法（Capon 、Nature、337 巻、 525頁（1989
年））、免疫グロブリン軽鎖第３超可変部にエピトープ
を移植をし、これを抗原として用いる方法（Zanetti
ら、Nature、355 巻、476 頁（1992年））、免疫グロブ
リン軽鎖第３超可変部にインフルエンザウイルスの部分
構造を移植をし、これを抗原として用いる方法（Zaghou
riら、Science 、259 巻、 224頁（1993年））、免疫グ
ロブリン軽鎖第１および第３超可変部と免疫グロブリン
重鎖第２および第３超可変部にエピトープを移植すると
いう方法（Kumagai 、Vaccines 94, Cold Spring Harbo
r Laboratory Press, New York, 9 頁, 1994年）などが
ある。
ワクチンペプチドを有機合成により作成する方法（Berz
ofsky ら、Vaccines 94, Cold Spring Harbor Laborato
ry Press, New York, 147 頁(1994 年) ）、免疫グロブ
リンとＣＤ４分子のキメラ分子をエイズウイルス防御に
利用する方法（Capon 、Nature、337 巻、 525頁（1989
年））、免疫グロブリン軽鎖第３超可変部にエピトープ
を移植をし、これを抗原として用いる方法（Zanetti
ら、Nature、355 巻、476 頁（1992年））、免疫グロブ
リン軽鎖第３超可変部にインフルエンザウイルスの部分
構造を移植をし、これを抗原として用いる方法（Zaghou
riら、Science 、259 巻、 224頁（1993年））、免疫グ
ロブリン軽鎖第１および第３超可変部と免疫グロブリン
重鎖第２および第３超可変部にエピトープを移植すると
いう方法（Kumagai 、Vaccines 94, Cold Spring Harbo
r Laboratory Press, New York, 9 頁, 1994年）などが
ある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、ヒト免疫不全
ウイルス（ＨＩＶ）の体内動態は複雑巧妙であること、
さらに、ウイルスの排除に有効な機能的免疫を誘導する
ための適切な免疫原がデザインされていないこと、ある
いはＨＩＶは突然変異率が高いこと（多変異性）などの
ために、ＨＩＶ感染に対するワクチン開発が困難であっ
た。
ウイルス（ＨＩＶ）の体内動態は複雑巧妙であること、
さらに、ウイルスの排除に有効な機能的免疫を誘導する
ための適切な免疫原がデザインされていないこと、ある
いはＨＩＶは突然変異率が高いこと（多変異性）などの
ために、ＨＩＶ感染に対するワクチン開発が困難であっ
た。
【０００６】一方、ＨＩＶの研究が進むにつれて、ＨＩ
Ｖエピトープ地図が作成され、また、エピトープそれぞ
れの免疫学的活性に関して膨大な情報が蓄積された。こ
うした情報から、ＨＩＶのエンベロープタンパク質（gp
120）の第３可変部であるＶ３ループ領域に存在するエ
ピトープ（ＰＮＤ，Principally Neutralizing Determi
nant）がＨＩＶの中和抗体、Ｔ細胞、さらに抗体依存性
細胞傷害機序（ＡＤＣＣ）のターゲットとなっているこ
とが判明した。このことに基づき、第３可変ループ領域
から得られる短いペプチド（Ｖ３合成ペプチド）を作成
し、これを用いた免疫法が試みられている。
Ｖエピトープ地図が作成され、また、エピトープそれぞ
れの免疫学的活性に関して膨大な情報が蓄積された。こ
うした情報から、ＨＩＶのエンベロープタンパク質（gp
120）の第３可変部であるＶ３ループ領域に存在するエ
ピトープ（ＰＮＤ，Principally Neutralizing Determi
nant）がＨＩＶの中和抗体、Ｔ細胞、さらに抗体依存性
細胞傷害機序（ＡＤＣＣ）のターゲットとなっているこ
とが判明した。このことに基づき、第３可変ループ領域
から得られる短いペプチド（Ｖ３合成ペプチド）を作成
し、これを用いた免疫法が試みられている。
【０００７】しかし、Ｖ３合成ペプチドの免疫原性が低
く、ペプチドの体内寿命が短いこと、あるいはフロイン
トの完全アジュバントのような強力なアジュバントを用
いてもＶ３特異的な免疫を強く誘導することは容易でな
いといった問題点がある。本発明の発明者らは、上記の
ような問題点を解決すべく鋭意研究を重ね、抗体超可変
部に複数のＨＩＶ−１ ＭＮ株のＰＮＤを蛋白質工学的
に分子移植し、抗体のＦｃ部の生物活性を有効に利用し
て、免疫誘導効率のよい、副作用のないワクチン（Ig-P
ND8 ）を分子設計し、抗体応答が効果的に誘導できるIg
-PND8を作成した。
く、ペプチドの体内寿命が短いこと、あるいはフロイン
トの完全アジュバントのような強力なアジュバントを用
いてもＶ３特異的な免疫を強く誘導することは容易でな
いといった問題点がある。本発明の発明者らは、上記の
ような問題点を解決すべく鋭意研究を重ね、抗体超可変
部に複数のＨＩＶ−１ ＭＮ株のＰＮＤを蛋白質工学的
に分子移植し、抗体のＦｃ部の生物活性を有効に利用し
て、免疫誘導効率のよい、副作用のないワクチン（Ig-P
ND8 ）を分子設計し、抗体応答が効果的に誘導できるIg
-PND8を作成した。
【０００８】Ig-PND8は抗体応答を効果的に誘導する
が、Ｖ３に対する細胞性免疫、特に、細胞傷害性Ｔ細胞
（cytotoxic T cell, CTL ）の誘導が充分でなかったた
め、さらに研究を重ねて、異なるＨＩＶのサブタイプの
Ｖ３配列を同一免疫グロブリン分子超可変部に分子移植
した複合型エピトープ移植抗体を作製し、Ｖ３株特異的
免疫応答の誘導機能を付与して本発明を完成したもので
ある。
が、Ｖ３に対する細胞性免疫、特に、細胞傷害性Ｔ細胞
（cytotoxic T cell, CTL ）の誘導が充分でなかったた
め、さらに研究を重ねて、異なるＨＩＶのサブタイプの
Ｖ３配列を同一免疫グロブリン分子超可変部に分子移植
した複合型エピトープ移植抗体を作製し、Ｖ３株特異的
免疫応答の誘導機能を付与して本発明を完成したもので
ある。
【０００９】さらに、これらに加えて、上記抗体をワク
チンとして使用したときにこのワクチン分子とＦｃレセ
プターとの相互作用を増強するために、上記抗体を化学
架橋して多価免疫グロブリンを作製する方法をも開発し
た。
チンとして使用したときにこのワクチン分子とＦｃレセ
プターとの相互作用を増強するために、上記抗体を化学
架橋して多価免疫グロブリンを作製する方法をも開発し
た。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、ヒト免疫不全
ウイルスに対するワクチンの製造方法、上記ヒト免疫不
全ウイルスに特異的に反応するエピトープ分子移植抗
体、化学架橋された上記エピトープ移植抗体からなるエ
ピトープ分子移植抗体オリゴマー、および上記エピトー
プ分子移植抗体および／または上記オリゴマーを含むヒ
ト免疫不全ウイルス用ワクチンを提供することを目的と
する。
ウイルスに対するワクチンの製造方法、上記ヒト免疫不
全ウイルスに特異的に反応するエピトープ分子移植抗
体、化学架橋された上記エピトープ移植抗体からなるエ
ピトープ分子移植抗体オリゴマー、および上記エピトー
プ分子移植抗体および／または上記オリゴマーを含むヒ
ト免疫不全ウイルス用ワクチンを提供することを目的と
する。
【００１１】すなわち、本発明は、免疫グロブリンの超
可変部の複数箇所にヒト免疫不全ウイルスのエピトープ
を移植し、エピトープ分子移植抗体を作製する工程を有
するヒト免疫不全ウイルスに対するワクチンの製造方法
である。
可変部の複数箇所にヒト免疫不全ウイルスのエピトープ
を移植し、エピトープ分子移植抗体を作製する工程を有
するヒト免疫不全ウイルスに対するワクチンの製造方法
である。
【００１２】上記ワクチンの製造方法では、上記エピト
ープ分子移植抗体の作製にあたり、前記移植されるエピ
トープが、少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルスのＶ
３塩基配列から得られたペプチドであることを特徴とす
る。また、上記エピトープ分子移植抗体を化学架橋する
工程をさらに含むことを特徴とする。
ープ分子移植抗体の作製にあたり、前記移植されるエピ
トープが、少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルスのＶ
３塩基配列から得られたペプチドであることを特徴とす
る。また、上記エピトープ分子移植抗体を化学架橋する
工程をさらに含むことを特徴とする。
【００１３】加えて、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス
に特異的に反応するエピトープ分子移植抗体である。さ
らに、上記エピトープ分子移植抗体は、少なくとも１種
のヒト免疫不全ウイルスのＶ３塩基配列から得られたペ
プチドからなるエピトープが移植されたことを特徴とす
る。
に特異的に反応するエピトープ分子移植抗体である。さ
らに、上記エピトープ分子移植抗体は、少なくとも１種
のヒト免疫不全ウイルスのＶ３塩基配列から得られたペ
プチドからなるエピトープが移植されたことを特徴とす
る。
【００１４】また、本発明は、化学架橋された上記エピ
トープ分子移植抗体からなるエピトープ分子移植抗体オ
リゴマーである。さらにまた、本発明は、上記エピトー
プ分子移植抗体および／または上記エピトープ分子移植
抗体オリゴマーを含むヒト免疫不全ウイルス用ワクチン
である。
トープ分子移植抗体からなるエピトープ分子移植抗体オ
リゴマーである。さらにまた、本発明は、上記エピトー
プ分子移植抗体および／または上記エピトープ分子移植
抗体オリゴマーを含むヒト免疫不全ウイルス用ワクチン
である。
【００１５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を具体的に説明す
る。本発明においては、免疫グロブリンの超可変部の複
数箇所にヒト免疫不全ウイルスのエピトープを移植し、
エピトープ分子移植抗体を作製してヒト免疫不全ウイル
スに対するワクチンを製造する。
る。本発明においては、免疫グロブリンの超可変部の複
数箇所にヒト免疫不全ウイルスのエピトープを移植し、
エピトープ分子移植抗体を作製してヒト免疫不全ウイル
スに対するワクチンを製造する。
【００１６】本発明で使用する免疫グロブリンは、重鎖
（Ｈ鎖）と軽鎖（Ｌ鎖）からなる免疫グロブリンＧ（Ig
G ）を意味する。この免疫グロブリンは、いかなる動物
種から得られるものであってもよく、特に限定されない
が、マウス、ヒト、ラットなどから得られるものが遺伝
子構造や生物活性についての情報が豊富であることから
好ましい。特に、ワクチン活性を容易に検定できること
から、マウスIgG を好適に使用することができる。
（Ｈ鎖）と軽鎖（Ｌ鎖）からなる免疫グロブリンＧ（Ig
G ）を意味する。この免疫グロブリンは、いかなる動物
種から得られるものであってもよく、特に限定されない
が、マウス、ヒト、ラットなどから得られるものが遺伝
子構造や生物活性についての情報が豊富であることから
好ましい。特に、ワクチン活性を容易に検定できること
から、マウスIgG を好適に使用することができる。
【００１７】上記IgG のサブクラスは特に限定されない
が、マウスIgG2b 、マウスIgG2a を好適に使用すること
ができる。免疫グロブリンのＬ鎖およびＨ鎖には、それ
ぞれ３つの超可変部（相補性決定部ともいい、ＣＤＲ１
〜３と略される）が存在する。本発明においては、後述
するヒト免疫不全ウイルスのエピトープを、これらのＣ
ＤＲのうちの複数の箇所に移植する。免疫グロブリンの
ＣＤＲの複数箇所に後述するＨＩＶのエピトープを移植
すると、免疫原性が増強することによる。
が、マウスIgG2b 、マウスIgG2a を好適に使用すること
ができる。免疫グロブリンのＬ鎖およびＨ鎖には、それ
ぞれ３つの超可変部（相補性決定部ともいい、ＣＤＲ１
〜３と略される）が存在する。本発明においては、後述
するヒト免疫不全ウイルスのエピトープを、これらのＣ
ＤＲのうちの複数の箇所に移植する。免疫グロブリンの
ＣＤＲの複数箇所に後述するＨＩＶのエピトープを移植
すると、免疫原性が増強することによる。
【００１８】エピトープを移植する複数箇所のＣＤＲと
しては、Ｌ鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ３、あるいはＨ鎖のＣ
ＤＲ２とＣＤＲ３などの組み合わせを挙げることがで
き、特に限定されない。しかし、Ｌ鎖のＣＤＲ１とＣＤ
Ｒ３、あるいはＨ鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３といったよう
に異なるＣＤＲに移植することが、複数のエピトープを
同一免疫グロブリン分子上に提示できる点から好まし
い。
しては、Ｌ鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ３、あるいはＨ鎖のＣ
ＤＲ２とＣＤＲ３などの組み合わせを挙げることがで
き、特に限定されない。しかし、Ｌ鎖のＣＤＲ１とＣＤ
Ｒ３、あるいはＨ鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３といったよう
に異なるＣＤＲに移植することが、複数のエピトープを
同一免疫グロブリン分子上に提示できる点から好まし
い。
【００１９】上記移植するエピトープは、少なくとも１
種のヒト免疫不全ウイルスのＶ３塩基配列から得られた
ペプチドである。ＨＩＶはＨＩＶ−１とＨＩＶ−２に大
別されるが、このように分けられた種類のＨＩＶには、
さらにＨＩＶ−１ IIIB 、ＨＩＶ−１ ＭＮ、ＨＩＶ−
１ ＳＦ２、ＨＩＶ−１ ＪＲＣＳ、およびＨＩＶ−１
ＪＹ１などといった幾つかの系統（株）があることが
知られている。本発明においては、ＨＩＶ−１ IIIB 株
およびＨＩＶ−１ ＭＮ株を使用することが、液性免
疫、細胞性免疫の両者を誘導する目的から好ましい。
種のヒト免疫不全ウイルスのＶ３塩基配列から得られた
ペプチドである。ＨＩＶはＨＩＶ−１とＨＩＶ−２に大
別されるが、このように分けられた種類のＨＩＶには、
さらにＨＩＶ−１ IIIB 、ＨＩＶ−１ ＭＮ、ＨＩＶ−
１ ＳＦ２、ＨＩＶ−１ ＪＲＣＳ、およびＨＩＶ−１
ＪＹ１などといった幾つかの系統（株）があることが
知られている。本発明においては、ＨＩＶ−１ IIIB 株
およびＨＩＶ−１ ＭＮ株を使用することが、液性免
疫、細胞性免疫の両者を誘導する目的から好ましい。
【００２０】本発明で使用する移植用エピトープとして
は、上記のウイルス株より得られる主要抗原のＶ３配列
から得られたペプチドを好適に使用することができる。
これらのペプチドは、上記の超可変部の複数箇所に同一
のものを移植してもよく、異なるものを移植してもよ
い。しかし、液性免疫および細胞性免疫の双方を効率的
に誘導するためには、上記Ｖ３配列の異なる上記エピト
ープを上記超可変部の複数箇所に移植することが好まし
い。
は、上記のウイルス株より得られる主要抗原のＶ３配列
から得られたペプチドを好適に使用することができる。
これらのペプチドは、上記の超可変部の複数箇所に同一
のものを移植してもよく、異なるものを移植してもよ
い。しかし、液性免疫および細胞性免疫の双方を効率的
に誘導するためには、上記Ｖ３配列の異なる上記エピト
ープを上記超可変部の複数箇所に移植することが好まし
い。
【００２１】上記エピトープは、配列表の配列番号１ま
たは２に示されるアミノ酸配列、または配列表の配列番
号１または２に示されるアミノ酸配列と実質的に同一な
アミノ酸配列を有する。ここで、「配列表の配列番号１
または２に示されるアミノ酸配列と実質的に同一なアミ
ノ酸配列」とは、配列表の配列番号１または２に示され
るアミノ酸配列の１もしくは数個のアミノ酸残基につい
て、欠失、置換、付加などの変化が生じた配列であっ
て、配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を有す
るタンパク質と同様の機能を有するエピトープをいう。
１もしくは数個のアミノ酸残基についての欠失、置換、
付加などの変化は、本願の出願時において常用される技
術、例えば、部位特異的変異誘発法（Nucleic Acid Res
earch, vol.10, No.20, p6487-6500）により生じさせる
ことができる。
たは２に示されるアミノ酸配列、または配列表の配列番
号１または２に示されるアミノ酸配列と実質的に同一な
アミノ酸配列を有する。ここで、「配列表の配列番号１
または２に示されるアミノ酸配列と実質的に同一なアミ
ノ酸配列」とは、配列表の配列番号１または２に示され
るアミノ酸配列の１もしくは数個のアミノ酸残基につい
て、欠失、置換、付加などの変化が生じた配列であっ
て、配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を有す
るタンパク質と同様の機能を有するエピトープをいう。
１もしくは数個のアミノ酸残基についての欠失、置換、
付加などの変化は、本願の出願時において常用される技
術、例えば、部位特異的変異誘発法（Nucleic Acid Res
earch, vol.10, No.20, p6487-6500）により生じさせる
ことができる。
【００２２】特に、ＨＩＶ−１ＭＮ株のＶ３コアセンス
配列であり配列表の配列番号１に示されるSIHIGPGRAFYT
TGE、またはＨＩＶ−１ IIIB 株のＶ３コア配列であ
り、配列表の配列番号２に示されるRIQRPGRAFVTIGK（い
ずれもgp120 のposition 315-329）を移植すると、良好
な抗体応答を得ることができる。
配列であり配列表の配列番号１に示されるSIHIGPGRAFYT
TGE、またはＨＩＶ−１ IIIB 株のＶ３コア配列であ
り、配列表の配列番号２に示されるRIQRPGRAFVTIGK（い
ずれもgp120 のposition 315-329）を移植すると、良好
な抗体応答を得ることができる。
【００２３】上記エピトープ分子移植抗体の作製にあた
っては、ＨＩＶのＶ３領域のＤＮＡ塩基配列から想定さ
れるアミノ酸配列と対応した遺伝子断片を、IgG Ｈ鎖の
ＣＤＲ１およびＣＤＲ３、およびＬ鎖（λ鎖）のＣＤＲ
１とＣＤＲ３の遺伝子断片と、それぞれ遺伝子増幅法を
用いて入れ換える。ついで、常用される遺伝子導入法を
用いて、免疫グロブリン産生能を欠落した形質細胞腫
（たとえばＳＰ２／０細胞）で発現させる。
っては、ＨＩＶのＶ３領域のＤＮＡ塩基配列から想定さ
れるアミノ酸配列と対応した遺伝子断片を、IgG Ｈ鎖の
ＣＤＲ１およびＣＤＲ３、およびＬ鎖（λ鎖）のＣＤＲ
１とＣＤＲ３の遺伝子断片と、それぞれ遺伝子増幅法を
用いて入れ換える。ついで、常用される遺伝子導入法を
用いて、免疫グロブリン産生能を欠落した形質細胞腫
（たとえばＳＰ２／０細胞）で発現させる。
【００２４】こうして作成されたエピトープ分子移植抗
体は、ヒト免疫不全ウイルスに特異的に反応する抗体や
ＣＴＬを誘導する。ウイルスは一般的に突然変異を起こ
し易く、ＨＩＶも高い突然変異性を有するためにワクチ
ンの製造が難しい。しかし、上述のようにして、ＨＩＶ
のＶ３の配列を免疫グロブリンのＣＤＲの複数箇所に移
植してライブラリー化を行うと、このようなＨＩＶにお
ける高いウイルスの突然変異性に対応することが可能と
なる。
体は、ヒト免疫不全ウイルスに特異的に反応する抗体や
ＣＴＬを誘導する。ウイルスは一般的に突然変異を起こ
し易く、ＨＩＶも高い突然変異性を有するためにワクチ
ンの製造が難しい。しかし、上述のようにして、ＨＩＶ
のＶ３の配列を免疫グロブリンのＣＤＲの複数箇所に移
植してライブラリー化を行うと、このようなＨＩＶにお
ける高いウイルスの突然変異性に対応することが可能と
なる。
【００２５】本発明では、さらに、モノマーである上記
エピトープ分子移植抗体をジチオビス（スクシミジルプ
ロピオネート）、ジサクシミジルスベレートなどの化学
架橋剤を用いて、弱アルカリ性条件下で化学架橋させ
る。特に、ジチオビス（スクシミジルプロピオネート）
を用いて架橋することが架橋度の制御が容易な点から好
ましい。
エピトープ分子移植抗体をジチオビス（スクシミジルプ
ロピオネート）、ジサクシミジルスベレートなどの化学
架橋剤を用いて、弱アルカリ性条件下で化学架橋させ
る。特に、ジチオビス（スクシミジルプロピオネート）
を用いて架橋することが架橋度の制御が容易な点から好
ましい。
【００２６】上記エピトープ分子移植抗体は、モノマー
のまま後述するワクチンに使用することもできる。ま
た、こうしたモノマーを化学架橋してオリゴマー、すな
わち、多価免疫グロブリンとしてもよい。上記モノマー
をオリゴマーとすると、これらの抗体をワクチンとして
使用したときに抗原提示細胞上のＦｃレセプターとの相
互作用が増強されてin vivoにおける免疫原性を高める
ことができ、また、細胞性免疫の誘導性、特に、細胞傷
害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導性を高めることができる。
のまま後述するワクチンに使用することもできる。ま
た、こうしたモノマーを化学架橋してオリゴマー、すな
わち、多価免疫グロブリンとしてもよい。上記モノマー
をオリゴマーとすると、これらの抗体をワクチンとして
使用したときに抗原提示細胞上のＦｃレセプターとの相
互作用が増強されてin vivoにおける免疫原性を高める
ことができ、また、細胞性免疫の誘導性、特に、細胞傷
害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導性を高めることができる。
【００２７】一般的には、ハプテンの免疫原性を高める
ためには、アジュバントなどの免疫増強剤とハプテンと
を結合させるという方法が採用されるが、このような免
疫増強剤は、細胞性免疫の誘導を抑制することがある。
本発明においては、このような細胞性免疫の誘導抑制を
回避するために、免疫増強剤を使用せず、上記のエピト
ープ分子移植抗体オリゴマーを使用する。
ためには、アジュバントなどの免疫増強剤とハプテンと
を結合させるという方法が採用されるが、このような免
疫増強剤は、細胞性免疫の誘導を抑制することがある。
本発明においては、このような細胞性免疫の誘導抑制を
回避するために、免疫増強剤を使用せず、上記のエピト
ープ分子移植抗体オリゴマーを使用する。
【００２８】上記化学架橋された上記エピトープ分子移
植抗体からなるエピトープ分子移植抗体オリゴマーは、
２〜３量体程度であることが、抗原提示細胞上のＦｃレ
セプターとの結合とプロセッスィングの効率が高いこと
から好ましい。さらにまた、本発明は、上記エピトープ
分子移植抗体および／または上記エピトープ分子移植抗
体オリゴマーを含むヒト免疫不全ウイルス用ワクチンで
ある。
植抗体からなるエピトープ分子移植抗体オリゴマーは、
２〜３量体程度であることが、抗原提示細胞上のＦｃレ
セプターとの結合とプロセッスィングの効率が高いこと
から好ましい。さらにまた、本発明は、上記エピトープ
分子移植抗体および／または上記エピトープ分子移植抗
体オリゴマーを含むヒト免疫不全ウイルス用ワクチンで
ある。
【００２９】上記ワクチンは、これらのエピトープ分子
移植抗体オリゴマーの他に、防腐剤、安定化剤などを含
んでもよい。上記エピトープ分子移植抗体は、他の生物
製剤で使用される適当な賦形剤、吸着防止剤などととも
に処理して、組換え沈降ワクチンあるいは凍結乾燥ワク
チンとすることができる。
移植抗体オリゴマーの他に、防腐剤、安定化剤などを含
んでもよい。上記エピトープ分子移植抗体は、他の生物
製剤で使用される適当な賦形剤、吸着防止剤などととも
に処理して、組換え沈降ワクチンあるいは凍結乾燥ワク
チンとすることができる。
【００３０】例えば、所望量の上記エピトープ分子移植
抗体モノマーおよび／またはオリゴマーと上記成分とを
混合して、組換え沈降ワクチン溶液を製造し、一定量ず
つアンプルに充填・封入し、組換え沈降ワクチン製剤と
することができる。あるいは、所望量の上記エピトープ
分子移植抗体モノマーおよび／またはオリゴマーを抗原
性を有しないタンパク成分と水溶液の状態で混合し、一
定量ずつバイアルに分注して凍結乾燥し、凍結乾燥ワク
チン製剤としてもよい。このようなワクチンの製造は、
通常のタンパク製剤を製造する工程と同様に行うことが
できる。
抗体モノマーおよび／またはオリゴマーと上記成分とを
混合して、組換え沈降ワクチン溶液を製造し、一定量ず
つアンプルに充填・封入し、組換え沈降ワクチン製剤と
することができる。あるいは、所望量の上記エピトープ
分子移植抗体モノマーおよび／またはオリゴマーを抗原
性を有しないタンパク成分と水溶液の状態で混合し、一
定量ずつバイアルに分注して凍結乾燥し、凍結乾燥ワク
チン製剤としてもよい。このようなワクチンの製造は、
通常のタンパク製剤を製造する工程と同様に行うことが
できる。
【００３１】以上のようにして製造したＨＩＶに対する
ワクチンをＨＩＶの予防のために投与する場合には、例
えば、所定量を４週間間隔で２回皮下ないし筋肉内に投
与し、20〜24週経過後にさらに１回、皮下ないし筋肉内
に投与する。投与量は、上記エピトープ分子移植抗体モ
ノマーおよび／またはオリゴマーとして、１〜500 μｇ
程度を投与することができ、0.1 〜100 μｇを投与する
ことが好ましい。
ワクチンをＨＩＶの予防のために投与する場合には、例
えば、所定量を４週間間隔で２回皮下ないし筋肉内に投
与し、20〜24週経過後にさらに１回、皮下ないし筋肉内
に投与する。投与量は、上記エピトープ分子移植抗体モ
ノマーおよび／またはオリゴマーとして、１〜500 μｇ
程度を投与することができ、0.1 〜100 μｇを投与する
ことが好ましい。
【００３２】投与量については、投与を受ける者の体
重、年齢、健康状態などによって適宜調整する。また、
投与期間についても、血中抗体価の上昇をモニターしな
がら調整する。
重、年齢、健康状態などによって適宜調整する。また、
投与期間についても、血中抗体価の上昇をモニターしな
がら調整する。
【００３３】（製剤例） （１）組換え沈降ワクチン製剤 下記の処方により、ワクチン溶液を調製してガラスアン
プルに0.50 mL ずつ分注し、封入して組換え沈降ワクチ
ン製剤とした。
プルに0.50 mL ずつ分注し、封入して組換え沈降ワクチ
ン製剤とした。
【００３４】 エピトープ分子移植抗体 20μｇ （モノマーおよび／またはオリゴマー） 水酸化アルミニウムゲル 5 mg チメロサール 0.01 w/v％ 総 量 0.50 mL
【００３５】（２）凍結乾燥製剤 下記の処方により、ワクチン溶液を調製してガラスバイ
アルに0.50 mL ずつ分注し、−２０℃で終夜凍結乾燥し
て凍結乾燥ワクチン製剤とした。
アルに0.50 mL ずつ分注し、−２０℃で終夜凍結乾燥し
て凍結乾燥ワクチン製剤とした。
【００３６】 エピトープ分子移植抗体 20μｇ （モノマー／またはオリゴマー） アルブミン １mg 総 量
１．０２ｍｇ
１．０２ｍｇ
【００３７】
（実施例１）エピトープ分子移植抗体 （１）遺伝子のコンストラクトの構築 ＢＡＬＢ／ｃマウス由来の脾臓細胞のｃＤＮＡライブラ
リーをＬａｍｄａ Ｚａｐ ＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ 社製）で作製し、γ2bのＨ鎖の定常部およびλ1 の
L 鎖の定常部のＤＮＡ配列をプローブとして、可変部全
体を含むγ2bのＨ鎖およびλ1 のL 鎖のｃＤＮＡを遺伝
子クローニングした。これらを鋳型として使用し、プラ
イマーとしてオーバーラッピングプライマーを用いて遺
伝子増幅を行った。遺伝子増幅の条件は、常法に従い20
サイクル行った。
リーをＬａｍｄａ Ｚａｐ ＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ 社製）で作製し、γ2bのＨ鎖の定常部およびλ1 の
L 鎖の定常部のＤＮＡ配列をプローブとして、可変部全
体を含むγ2bのＨ鎖およびλ1 のL 鎖のｃＤＮＡを遺伝
子クローニングした。これらを鋳型として使用し、プラ
イマーとしてオーバーラッピングプライマーを用いて遺
伝子増幅を行った。遺伝子増幅の条件は、常法に従い20
サイクル行った。
【００３８】得られた上記抗体の超可変部を、ＣＤＲの
５’側20〜30ＤＮＡの塩基配列あるいはＣＤＲの３’側
20〜30ＤＮＡの塩基配列と化学合成し、連続したＨＩＶ
−１のＶ３コア配列をプライマーとして用いたリコンビ
ナント遺伝子増幅法（Nucleic Acid Res., vol.17, 723
-733(1989)）により、ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３コアセ
ンス配列であるSIHIGPGRAFYTTGE（ gp120の position 3
15-329 ）と入れ替えた。また、上記抗体の超可変部を
ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コアセンス配列であるRIQRGP
GRAFVTIGKで入れ替えた遺伝子コンストラクトを同様に
して作製した。
５’側20〜30ＤＮＡの塩基配列あるいはＣＤＲの３’側
20〜30ＤＮＡの塩基配列と化学合成し、連続したＨＩＶ
−１のＶ３コア配列をプライマーとして用いたリコンビ
ナント遺伝子増幅法（Nucleic Acid Res., vol.17, 723
-733(1989)）により、ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３コアセ
ンス配列であるSIHIGPGRAFYTTGE（ gp120の position 3
15-329 ）と入れ替えた。また、上記抗体の超可変部を
ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コアセンス配列であるRIQRGP
GRAFVTIGKで入れ替えた遺伝子コンストラクトを同様に
して作製した。
【００３９】（２）ＨＩＶ−１のgp120 のＶ３エピトー
プの分子移植 上記（１）で得た遺伝子コンストラクトを、常法として
用いられている免疫グロブリン遺伝子発現法（Proc. Na
tl. Acad. Sci., USA, 80, 2495 ）により組み込んだ。
プの分子移植 上記（１）で得た遺伝子コンストラクトを、常法として
用いられている免疫グロブリン遺伝子発現法（Proc. Na
tl. Acad. Sci., USA, 80, 2495 ）により組み込んだ。
【００４０】その後、この組換えベクターを、マウス由
来の骨髄種細胞であるＳＰ２／０細胞へエレクトロポレ
ーションにより導入し、10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1
640培地（５Ｌ）中、37℃にて、５％ＣＯ2 インキュベ
ーター中で72時間までの適当な時間培養し、発現させ
た。得られたエピトープ分子移植抗体（700 μｇ）を、
プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ファ
ルマシア社製）により、培養産物から回収、精製した。
来の骨髄種細胞であるＳＰ２／０細胞へエレクトロポレ
ーションにより導入し、10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1
640培地（５Ｌ）中、37℃にて、５％ＣＯ2 インキュベ
ーター中で72時間までの適当な時間培養し、発現させ
た。得られたエピトープ分子移植抗体（700 μｇ）を、
プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ファ
ルマシア社製）により、培養産物から回収、精製した。
【００４１】（実施例２）エピトープ分子移植抗体オリ
ゴマーの調製 上記のようにキメラ遺伝子産物として発現したエピトー
プ分子移植抗体（500μｇ）を、１ｍＭのジチオビスサ
クシミジルプロピオネート（dithiobis(succimidyl pro
pionate)）を含む0.1 Ｍのカーボネートバッファー（pH
8.0）中で30分間37℃で保温して化学架橋した。その
後、Sephacryl S-300 HR（ファルマシア社製）およびSe
phacryl S-400 HR（ファルマシア社製）を用いて、リン
酸緩衝生理食塩水（１mMリン酸バッファー、pH 7.2、0.
15Ｍ NaCl 、以下ＰＢＳと略す）を溶出液としてゲルク
ロマトグラフィーを行い、後述する画分を調製した。
ゴマーの調製 上記のようにキメラ遺伝子産物として発現したエピトー
プ分子移植抗体（500μｇ）を、１ｍＭのジチオビスサ
クシミジルプロピオネート（dithiobis(succimidyl pro
pionate)）を含む0.1 Ｍのカーボネートバッファー（pH
8.0）中で30分間37℃で保温して化学架橋した。その
後、Sephacryl S-300 HR（ファルマシア社製）およびSe
phacryl S-400 HR（ファルマシア社製）を用いて、リン
酸緩衝生理食塩水（１mMリン酸バッファー、pH 7.2、0.
15Ｍ NaCl 、以下ＰＢＳと略す）を溶出液としてゲルク
ロマトグラフィーを行い、後述する画分を調製した。
【００４２】（実施例３）エピトープ分子移植抗体画分
の調製と命名 上述のようにして、エピトープ分子移植抗体を精製し、
得られた画分からモノマー、ダイマー、トライマーとし
て調製した。これらの画分の分子量を、ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動で分子量を検定した。その後、Ｖ３ペ
プチドで免疫したマウス血清を用いた酵素抗体法によ
り、これらの抗体のＣＤＲの複数箇所に移植されたエピ
トープの発現を調べた。
の調製と命名 上述のようにして、エピトープ分子移植抗体を精製し、
得られた画分からモノマー、ダイマー、トライマーとし
て調製した。これらの画分の分子量を、ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動で分子量を検定した。その後、Ｖ３ペ
プチドで免疫したマウス血清を用いた酵素抗体法によ
り、これらの抗体のＣＤＲの複数箇所に移植されたエピ
トープの発現を調べた。
【００４３】その結果、上記Ｖ３配列からなるエピトー
プが抗体分子Ｈ鎖の第二超可変部（ＣＤＲ２）と第三超
可変部（ＣＤＲ３）に移植されている抗体と、そのエピ
トープ分子移植抗体がＬ鎖の第一超可変部（ＣＤＲ１）
と第三超可変部（ＣＤＲ３）とに移植されている抗体と
が産生されていることを確認した。
プが抗体分子Ｈ鎖の第二超可変部（ＣＤＲ２）と第三超
可変部（ＣＤＲ３）に移植されている抗体と、そのエピ
トープ分子移植抗体がＬ鎖の第一超可変部（ＣＤＲ１）
と第三超可変部（ＣＤＲ３）とに移植されている抗体と
が産生されていることを確認した。
【００４４】また、上述の方法で、上記ＣＤＲに移植さ
れているＶ３配列がＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列のみ
である抗体（ホモエピトープ移植抗体）と、ＨＩＶ−１
ＭＮ株のＶ３配列とＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コア配
列の両方を抗体１分子の超可変部に有するヘテロエピト
ープ移植抗体とを作製した（図１）。得られた抗体を、
それらの超可変部に含まれるＨＩＶ−１ ＭＮ株または
ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３配列によって以下のように命
名した（図１参照）。
れているＶ３配列がＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列のみ
である抗体（ホモエピトープ移植抗体）と、ＨＩＶ−１
ＭＮ株のＶ３配列とＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コア配
列の両方を抗体１分子の超可変部に有するヘテロエピト
ープ移植抗体とを作製した（図１）。得られた抗体を、
それらの超可変部に含まれるＨＩＶ−１ ＭＮ株または
ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３配列によって以下のように命
名した（図１参照）。
【００４５】（１）ホモエピトープ移植抗体（homologo
us graft）：ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列またはＨＩ
Ｖ−１ IIIB株のＶ３コア配列のいずれかのみを抗体超
可変部に分子移植したもの ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列のみを有する抗体；Ig-P
NDMN8 ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コア配列のみを有する抗体；
Ig-PNDIIIB8
us graft）：ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列またはＨＩ
Ｖ−１ IIIB株のＶ３コア配列のいずれかのみを抗体超
可変部に分子移植したもの ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列のみを有する抗体；Ig-P
NDMN8 ＨＩＶ−１ IIIB株のＶ３コア配列のみを有する抗体；
Ig-PNDIIIB8
【００４６】（２）ヘテロエピトープ移植抗体（hetero
logous graft）：ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列とＨＩ
Ｖ−１ IIIB株のＶ３コア配列の両方を抗体１分子の超
可変部に有するもの；Ig-PNDMN4IIIB4
logous graft）：ＨＩＶ−１ ＭＮ株のＶ３配列とＨＩ
Ｖ−１ IIIB株のＶ３コア配列の両方を抗体１分子の超
可変部に有するもの；Ig-PNDMN4IIIB4
【００４７】（実施例４）エピトープ分子移植抗体によ
る動物の免疫と抗体応答の測定 （１）エピトープ分子移植抗体による動物の免疫 免疫する動物として、ＢＡＬＢ／ｃマウス（８週令、
雌、日本チャールズリバー社より購入）した。このマウ
スを、アラム５mgとともに上記モノマー、ダイマーおよ
びトライマー抗体10μｇ／300 μL ／マウスで投与する
Ａ群(1群５匹）、アラムなしで上記各抗体（ＰＢＳ(pH
7.2））に溶解したもの)10 μｇ／300 μL／マウスで投
与するＢ群、ＰＢＳ 300μL のみを投与する陰性対照
群、およびアラム 300μL のみを投与するアラム対照群
とした。初回免疫として、実施例２および３で調製した
エピトープ移植抗体のモノマーあるいはオリゴマーを、
Ａ群及びＢ群に腹腔内投与した。
る動物の免疫と抗体応答の測定 （１）エピトープ分子移植抗体による動物の免疫 免疫する動物として、ＢＡＬＢ／ｃマウス（８週令、
雌、日本チャールズリバー社より購入）した。このマウ
スを、アラム５mgとともに上記モノマー、ダイマーおよ
びトライマー抗体10μｇ／300 μL ／マウスで投与する
Ａ群(1群５匹）、アラムなしで上記各抗体（ＰＢＳ(pH
7.2））に溶解したもの)10 μｇ／300 μL／マウスで投
与するＢ群、ＰＢＳ 300μL のみを投与する陰性対照
群、およびアラム 300μL のみを投与するアラム対照群
とした。初回免疫として、実施例２および３で調製した
エピトープ移植抗体のモノマーあるいはオリゴマーを、
Ａ群及びＢ群に腹腔内投与した。
【００４８】（２）免疫応答の測定 （２−１）抗体価およびウイルス中和活性の測定 免疫応答の測定を行うために、初回免疫刺激後、４週目
に初回免疫に使用したと同じ上記エピトープ移植抗体の
モノマーあるいはオリゴマーを、アラム非存在下で腹腔
内投与した。この２度目の免疫の２週後に、各群５匹の
マウスの尾静脈から血液を採取してプールし、血清を調
製した。
に初回免疫に使用したと同じ上記エピトープ移植抗体の
モノマーあるいはオリゴマーを、アラム非存在下で腹腔
内投与した。この２度目の免疫の２週後に、各群５匹の
マウスの尾静脈から血液を採取してプールし、血清を調
製した。
【００４９】産生された抗体の配列表の配列番号１に示
す SIHIGPGRAFYTTGE（ＭＮ）と配列表の配列番号2 に示
すRIQRGPGRAFVTIGK（IIIB）とに対する力価、およびＨ
ＩＶ−１のＭＮ株とＨＩＶ−１のIIIB株とに対するウイ
ルス中和活性とを表１に示す。
す SIHIGPGRAFYTTGE（ＭＮ）と配列表の配列番号2 に示
すRIQRGPGRAFVTIGK（IIIB）とに対する力価、およびＨ
ＩＶ−１のＭＮ株とＨＩＶ−１のIIIB株とに対するウイ
ルス中和活性とを表１に示す。
【００５０】
【表１】
【００５１】上記ペプチドを高原としたときの抗体価
は、ＥＬＩＳＡを用いてＡ405nm で測定した。ウイルス
中和活性は、７日間アッセイでＨＩＶ−１感受性細胞で
あるＭＴ−４細胞へのＨＩＶ−１感染阻止をｐ２４産生
阻害により測定した。
は、ＥＬＩＳＡを用いてＡ405nm で測定した。ウイルス
中和活性は、７日間アッセイでＨＩＶ−１感受性細胞で
あるＭＴ−４細胞へのＨＩＶ−１感染阻止をｐ２４産生
阻害により測定した。
【００５２】表１に示したように、上記抗体価は、アラ
ムの存在下、非存在下に関わらず、モノマー抗体＜ダイ
マー抗体＜トライマー抗体の順で高くなっていた。アラ
ム存在下では、ダイマー抗体およびトライマー抗体を用
いると、モノマー抗体を使用した場合に比べて、40倍以
上抗体価が上昇した。また、アラムの非存在下でも、ダ
イマー抗体とトライマー抗体を使用すると、モノマー抗
体を使用した場合に比して、70倍以上抗体価が上昇して
いた。
ムの存在下、非存在下に関わらず、モノマー抗体＜ダイ
マー抗体＜トライマー抗体の順で高くなっていた。アラ
ム存在下では、ダイマー抗体およびトライマー抗体を用
いると、モノマー抗体を使用した場合に比べて、40倍以
上抗体価が上昇した。また、アラムの非存在下でも、ダ
イマー抗体とトライマー抗体を使用すると、モノマー抗
体を使用した場合に比して、70倍以上抗体価が上昇して
いた。
【００５３】ウイルス中和活性もまら、抗体価と同様の
傾向を示した。以上より、エピトープ分子移植抗体を化
学架橋させてオリゴマーを形成させると、モノマーより
高いin vivo での免疫原性を賦与することができること
が示された。
傾向を示した。以上より、エピトープ分子移植抗体を化
学架橋させてオリゴマーを形成させると、モノマーより
高いin vivo での免疫原性を賦与することができること
が示された。
【００５４】（２−２）ＣＴＬ誘導能の測定 ついで、ＣＴＬの誘導能を測定した。ＣＴＬの誘導能の
測定には、上記（１）と同様に初回免疫を行い、その後
４週目に各群のマウスから腹膜切開により脾臓を摘出
し、各マウスから脾細胞を採取して効果細胞（エフェク
ター）としてプールした。こうして得た脾細胞を通常の
マウス細胞培養条件下で、試験管内で１週間、１μｇ／
mLの上述したhomologous graftまたはheterologous gra
ftを用いて再刺激した。
測定には、上記（１）と同様に初回免疫を行い、その後
４週目に各群のマウスから腹膜切開により脾臓を摘出
し、各マウスから脾細胞を採取して効果細胞（エフェク
ター）としてプールした。こうして得た脾細胞を通常の
マウス細胞培養条件下で、試験管内で１週間、１μｇ／
mLの上述したhomologous graftまたはheterologous gra
ftを用いて再刺激した。
【００５５】その後、51Ｃｒ遊離試験のために、P815細
胞（DBA/2 マウス由来、５×107 個／mL）を20μＬの51
Ｃｒ（比活性５mCi/mL）とともに、RPMI1640培地中にて
１時間インキュベートし、51Ｃｒを細胞内に取り込ませ
た。ついで、このようにラベルしたP815細胞をＰＢＳで
調製した10μｇ／mLの上記２種類のペプチド、ＭＮＶ３
またはIIIBＶ３ペプチドで37℃で１時間保温することに
よりパルスした。
胞（DBA/2 マウス由来、５×107 個／mL）を20μＬの51
Ｃｒ（比活性５mCi/mL）とともに、RPMI1640培地中にて
１時間インキュベートし、51Ｃｒを細胞内に取り込ませ
た。ついで、このようにラベルしたP815細胞をＰＢＳで
調製した10μｇ／mLの上記２種類のペプチド、ＭＮＶ３
またはIIIBＶ３ペプチドで37℃で１時間保温することに
よりパルスした。
【００５６】上述のように刺激した脾細胞をエフェクタ
ー細胞（Ｅ）とし、上記のように51Ｃｒでラベルし、Ｍ
ＮＶ３またはIIIBＶ３ペプチドでパルスしたP815細胞を
標的細胞（Ｔ）として、Ｅ／Ｔ比＝50：１または100 ：
１で混合し、51Ｃｒ遊離試験を行った。結果を表２に示
す。
ー細胞（Ｅ）とし、上記のように51Ｃｒでラベルし、Ｍ
ＮＶ３またはIIIBＶ３ペプチドでパルスしたP815細胞を
標的細胞（Ｔ）として、Ｅ／Ｔ比＝50：１または100 ：
１で混合し、51Ｃｒ遊離試験を行った。結果を表２に示
す。
【００５７】
【表２】
【００５８】表２に示したように、ＰＢＳ中のダイマー
およびトライマーで、いずれのパルスの場合において
も、ＣＴＬ活性が誘導された。また、SIHIGPGRAFYTTGE
（ＭＮ）およびＭＮでパルスし、アラムとともに抗体を
投与した場合には、ＣＴＬの誘導は観察されなかった
が、RIQRGPGRAFVTIGK（IIIB）およびIIIBでパルスした
場合には、ＣＴＬの誘導が観察された。
およびトライマーで、いずれのパルスの場合において
も、ＣＴＬ活性が誘導された。また、SIHIGPGRAFYTTGE
（ＭＮ）およびＭＮでパルスし、アラムとともに抗体を
投与した場合には、ＣＴＬの誘導は観察されなかった
が、RIQRGPGRAFVTIGK（IIIB）およびIIIBでパルスした
場合には、ＣＴＬの誘導が観察された。
【００５９】homologous graftとして調製したIg-PNDMN
8 は、モノマー、オリゴマーともにＭＮＶ３特異的免疫
応答は誘導できるが、ＣＴＬの誘導は不十分であること
が示された。また、別のhomologous graftとして調製し
たIg-PNDIIIB8 は、モノマー、オリゴマーともにIIIBＶ
３特異的免疫応答並びにＣＴＬを誘導することも観察さ
れた。
8 は、モノマー、オリゴマーともにＭＮＶ３特異的免疫
応答は誘導できるが、ＣＴＬの誘導は不十分であること
が示された。また、別のhomologous graftとして調製し
たIg-PNDIIIB8 は、モノマー、オリゴマーともにIIIBＶ
３特異的免疫応答並びにＣＴＬを誘導することも観察さ
れた。
【００６０】さらに、heterologous graftであるIg-PND
NM4IIIB4は、モノマー、オリゴマーともにＭＮＶ３並び
にIIIBＶ３特異的免疫応答とＣＴＬを誘導することが示
された（表１および２）。
NM4IIIB4は、モノマー、オリゴマーともにＭＮＶ３並び
にIIIBＶ３特異的免疫応答とＣＴＬを誘導することが示
された（表１および２）。
【００６１】さらにまた、ホモエピトープ移植抗体とヘ
テロエピトープ移植抗体は化学架橋によりオリゴマーを
形成すると、アラムの非存在下でも、有意な免疫応答を
誘導できること、およびアラムを初回免疫刺激に用いる
と、ＣＴＬ誘導に対しては抑制的に働くことが判明し
た。
テロエピトープ移植抗体は化学架橋によりオリゴマーを
形成すると、アラムの非存在下でも、有意な免疫応答を
誘導できること、およびアラムを初回免疫刺激に用いる
と、ＣＴＬ誘導に対しては抑制的に働くことが判明し
た。
【００６２】本発明のエピトープ移植抗体は、合成ペプ
チドに比べて500 倍から1,000 倍高い抗原提示能を有す
るが、この抗原提示活性はオリゴマー形成によりさらに
増強された。また、オリゴマーの抗原提示活性は、低親
和性Ｆｃγレセプターに対する単クローン抗体のＦabフ
ラグメント、アンモニウムクロリドやクロロキン処理、
抗Ｉ−Ａd 抗体で阻害されることも示された。
チドに比べて500 倍から1,000 倍高い抗原提示能を有す
るが、この抗原提示活性はオリゴマー形成によりさらに
増強された。また、オリゴマーの抗原提示活性は、低親
和性Ｆｃγレセプターに対する単クローン抗体のＦabフ
ラグメント、アンモニウムクロリドやクロロキン処理、
抗Ｉ−Ａd 抗体で阻害されることも示された。
【００６３】
【発明の効果】本発明によれば、免疫学的性質の異なる
ＨＩＶ中和主要エピトープ（ＰＮＤ）を、抗体分子Ｈ鎖
の第二超可変部（ＣＲＤ２）と第三超可変部（ＣＲＤ
３）、またはＬ鎖の第一超可変部（ＣＲＤ１）と第三超
可変部（ＣＲＤ３）とに分子移植をし、ＨＩＶのＶ３エ
ピトープに対する免疫応答反応を誘導するＨＩＶに対す
るワクチンを製造することができる。また、このように
して作製されたエピトープ分子移植抗体をさらに化学架
橋してＨＩＶに対するワクチンとして製造することがで
きる。
ＨＩＶ中和主要エピトープ（ＰＮＤ）を、抗体分子Ｈ鎖
の第二超可変部（ＣＲＤ２）と第三超可変部（ＣＲＤ
３）、またはＬ鎖の第一超可変部（ＣＲＤ１）と第三超
可変部（ＣＲＤ３）とに分子移植をし、ＨＩＶのＶ３エ
ピトープに対する免疫応答反応を誘導するＨＩＶに対す
るワクチンを製造することができる。また、このように
して作製されたエピトープ分子移植抗体をさらに化学架
橋してＨＩＶに対するワクチンとして製造することがで
きる。
【００６４】さらに、本発明は、上記のようにしてエピ
トープ分子移植抗体を作製することができ、また、これ
らを化学的に架橋させてオリゴマーとし、複合型多価エ
ピトープ分子移植抗体を作製することができる。この複
合型多価エピトープ移植抗体では。その免疫原性がオリ
ゴマー形成により増強されるのでアジュバントなどの免
疫誘導抑制を生じることがある免疫増強剤を利用しない
という利点を有する。さらにまた、免疫学的特性の異な
る主要エピトープを共有結合的に複合型エピトープとし
て移植抗体において表現提示することにより、液性免疫
および細胞性免疫機能におけるリンパ球スペクトラムを
抑制できる。
トープ分子移植抗体を作製することができ、また、これ
らを化学的に架橋させてオリゴマーとし、複合型多価エ
ピトープ分子移植抗体を作製することができる。この複
合型多価エピトープ移植抗体では。その免疫原性がオリ
ゴマー形成により増強されるのでアジュバントなどの免
疫誘導抑制を生じることがある免疫増強剤を利用しない
という利点を有する。さらにまた、免疫学的特性の異な
る主要エピトープを共有結合的に複合型エピトープとし
て移植抗体において表現提示することにより、液性免疫
および細胞性免疫機能におけるリンパ球スペクトラムを
抑制できる。
【００６５】
配列番号：１ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｌａ
Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ １ ５
１０ １５
Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ １ ５
１０ １５
【００６６】配列番号：２ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 配列： Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｌａ
Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ 1 5 10 15
Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ 1 5 10 15
【図１】超可変部の複数の箇所に２種類のＨＩＶエピト
ープが移植されたエピトープ移植抗体を示す図である。
ープが移植されたエピトープ移植抗体を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｐ 21/02 9282−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (7)
- 【請求項１】 免疫グロブリンの超可変部の複数箇所に
ヒト免疫不全ウイルスのエピトープを移植し、エピトー
プ分子移植抗体を作製する工程を有するヒト免疫不全ウ
イルスに対するワクチンの製造方法。 - 【請求項２】 前記エピトープ分子移植抗体の作製にあ
たり、前記移植されるエピトープが、少なくとも１種の
ヒト免疫不全ウイルスのＶ３配列から得られたペプチド
である請求項１に記載のワクチンの製造方法。 - 【請求項３】 前記エピトープ分子移植抗体を化学架橋
する工程をさらに含む請求項１または２に記載のワクチ
ンの製造方法。 - 【請求項４】 ヒト免疫不全ウイルスに特異的に反応す
るエピトープ分子移植抗体。 - 【請求項５】 少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルス
のＶ３配列から得られたペプチドからなるエピトープが
移植された請求項４に記載のエピトープ分子移植抗体。 - 【請求項６】 化学架橋された前記エピトープ分子移植
抗体からなるエピトープ分子移植抗体オリゴマー。 - 【請求項７】 請求項４もしくは５に記載のエピトープ
分子移植抗体および／または請求項６に記載のエピトー
プ分子移植抗体オリゴマーを含むヒト免疫不全ウイルス
用ワクチン。
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-
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- 1996-09-02 JP JP23237896A patent/JP3780421B2/ja not_active Expired - Fee Related
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