JPH10511855A

JPH10511855A - Stabilization of liquid enzyme composition

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Publication number: JPH10511855A
Application number: JP8521371A
Authority: JP
Inventors: リッケ，マズ; シモンセン，オレ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1995-01-09
Filing date: 1996-01-09
Publication date: 1998-11-17
Also published as: BR9606684A; AU4328396A; CN1168155A; EP0802968A1; WO1996021716A1; CA2208705A1; FI972896A0; AR000649A1; FI972896A; MX9705165A

Abstract

(57)【要約】たとえば多成分組成物、たとえば、クリーニング業の洗濯または食器洗い用洗剤への引き続いての組み入れに十分に適する液体酵素組成物であって、この組成物は（ｉ）40μＭを越える量の酵素及び（ii）前記液体組成物を次に組み入れる多成分組成物において、前記酵素の貯蔵安定性を増強するのに有効な量の前記酵素の可逆阻害剤を含む。 (57) [Summary] For example, a multi-component composition, such as a liquid enzyme composition that is well suited for subsequent incorporation into a laundry or dishwashing detergent of the cleaning industry, wherein the composition comprises (i) an amount of enzyme greater than 40 μM and (ii) A) a multi-component composition into which the liquid composition is subsequently incorporated, comprising an effective amount of a reversible inhibitor of the enzyme to enhance the storage stability of the enzyme;

Description

【発明の詳細な説明】液体酵素組成物の安定化発明の分野本発明は特に（ｉ）比較的高濃度〜非常に高濃度の１またはそれよりも多い酵素、及び（ii）強い酵素−阻害特性を示す及び／または強い酵素阻害を引き起こす濃度で存在する、１またはそれよりも多い適当な酵素阻害剤、特に可逆阻害剤、を含有する液体酵素組成物に関する。本発明はさらに次の、酵素含有多成分組成物であって、酵素源として本発明の阻害剤−安定化（inhi bitor-stabilized）液体酵素組成物を用いて調製された液体組成物、たとえばクリーニング組成物、たとえば洗剤組成物、酵素含有多成分組成物、たとえばクリーニング組成物、たとえば洗剤組成物であって、当該酵素を本発明の阻害剤−安定化液体酵素組成物の形で組み入れる、すなわち、多成分組成物に組み入れる時に酵素は阻害剤−安定化組成物の形である、前記組成物の調製方法、及び後者の型の方法によって調製された、酵素含有多成分組成物、たとえばクリーニング組成物、たとえば洗剤組成物に関する。本発明はさらに、酵素含有多成分組成物、たとえばクリーニング組成物、たとえば洗剤組成物の調製に本発明の液体酵素組成物を用いることに関する。発明の背景貯蔵安定性の問題は酵素を含有する液体組成物に関して良く知られている。したがって、酵素を含有する液体洗剤、たとえばプロテアーゼ（ペプチダーゼ）を含有する液体洗剤についての主要な問題は貯蔵の間の十分な酵素活性の維持を保証することである。酵素含有組成物、たとえば液体組成物、たとえば液体洗剤の貯蔵安定性を、たとえば、プロテアーゼを含有する組成物にプロテアーゼ阻害剤を加えることによって、改善する方法を見い出すために相当な努力をはらってきた。この項の残りの説明による検討は、主としてプロテアーゼの阻害に関するが、根本的な原理は他の型の酵素たとえばリパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ及びオキシドレダクターゼ（たとえばペルオキシダーゼ及びオキシダーゼ）に等しく適用でき、本発明の種々の面は、決して（可逆）プロテアーゼ阻害剤によるプロテアーゼの安定化に関連する面に限定されない。例として、ホウ酸及びボロン酸(boronic acids)はタンパク質分解酵素を可逆的に阻害することが公知である。ボロン酸による、セリンプロテアーゼである、ズプチリシンの阻害の検討が「Molecular & Cellular Bcochemistry」51、第５〜32頁（1983年）に載っている。ボロン酸はズブチリシン阻害剤として非常にいろいろな能力を有している。アルキル基、たとえばメチル、ブチルまたは２−シクロヘキシルエチル基のみを含有するボロン酸は不十分な阻害剤で、メチルボロン酸は最も不十分な阻害剤である。しかしながら、芳香族基、たとえば、フェニル、４−メトキシフェニルまたは３，５−ジクロルフェニル基を担持するボロン酸は非常に良い阻害剤で、３，５−ジクロルフェニルボロン酸は特に効果的なものと記載されている（Keller他の「Biochem．Biophys．Res．Comm.」176、第401〜405頁、1991）。ホウ素に関してアリール基の３−位置に置換されているアリールボロン酸は予想外に良い可逆プロテアーゼ阻害剤であると、国際特許出願公開第92/19707号明細書においても特許請求されている。このようにたとえば「アセトアミドベンゼンボロン酸」は、後者の文献にタンパク質分解酵素の特に有効な阻害剤であると記載されている。可逆酵素阻害剤の阻害効果を測るとき、いわゆる「阻害常数」（Ｋ_i）が酵素阻害活性能力の測定に普通用いられ、Ｋ_iは通常下記のように定義される。Ｋ_i＝〔Ｅ〕・〔Ｉ〕／〔EI〕式中、〔Ｅ〕，〔Ｉ〕及び〔EI〕は、当該条件下での、それぞれ、酵素、阻害剤及び酵素−阻害剤錯体の平衡濃度（慣習的にモル濃度）を表わす。後者のＫ_i の定義は本明細書及び請求の範囲に用いる。したがって相対的に低いＫ_i値は相対的に強力な阻害剤を示している。発明の開示多成分酵素含有組成物の調製及び製造において、酵素源として、酵素及び適当な（可逆）酵素阻害剤を含有する、予備調製された酵素組成物を用いることが望ましいであろう。予備調製された酵素組成物が、非常に高濃度の少なくとも１種の酵素、ことによると当該型のいくつかの酵素を含有することが、とりわけ、比較的に少容積または少量の予備調製された酵素／阻害剤組成物を用いて、大容積または大量の酵素含有多成分組成物の調製を可能にするだろうという理由で便利であろう。さらに、最終の多成分組成物の貯蔵の間の、酵素の満足な安定性を、最初の予備調製された酵素／阻害剤組成物の形で組み込まれた量の当該酵素阻害剤の存在によってのみで確保すること、すなわち、多成分組成物（たとえば洗剤組成物）にさらに安定化剤を含有させる必要がないこと（もちろん、所望により、さらに安定化剤を組み込んでもよいけれども）は明らかに有利であろう。さらに、このように予備調製された酵素／阻害剤組成物にあっては、阻害剤が存在している酵素の安定性が必然的に高いことが期待されるだろう。したがってこの型の多数の予備調製された組成物は製造後、有意の、または少なくとも容認できない酵素活性の低下なしに比較的に長期間貯蔵できることが期待されるだろう。したがって、本発明は、（ｉ）40μＭを越える量の酵素及び（ii）続いて液体組成物を組み入れる、多成分組成物（たとえば洗剤組成物、たとえば液体洗剤組成物）における酵素の貯蔵安定性を増強するのに有効な量の可逆酵素阻害剤、を含む液体組成物に関する。本発明の液体組成物は、たとえば、主として水性または主として非水性組成物〔たとえば溶媒として高割合の１またはそれよりも多い非水性であるが、通常は水混和性液体、一般的には有機液体（たとえば、アルコール、グリコールまたはその他類似のもの）〕でよい。本発明の液体組成物は、それ自身は、通常は非− 洗剤組成物であろう。洗剤組成物（たとえばクリーニング屋の洗濯、食器洗い及びその他類似用の）は別として、特に液体組成物の形にある（本発明の文脈において適切である）、他の型の酵素含有多成分組成物は、総義歯、コンタクトレンズまたは舗装面（たとえば畜殺場または食物加工産業における）の洗浄組成物、皮革産業で用いるため（たとえば獣皮の脱毛及び／または脱脂のための）組成物、織物の糊抜きのための組成物及び「ストーンウォシュした」外観を達成するためのデニム織物の洗浄用組成物を包含する。上記目的のための上記組成物の使用は本発明の範囲内である。酵素本明細書及び請求の範囲中の関連する酵素分類番号（EC番号）は「生化学及び分子生物学の国際同盟の命名法委員会の勧告（1992）（Recommendations（1992 ）of the Nomenclature Committee of the International Unon of Biochemistr y and Molecular Biology）」（Academic Press Inc.，1992）による。本発明の液体組成物は少なくとも１種の酵素を含む。適当な酵素は任意の市販の酵素を含む。特に適切な酵素は、プロテアーゼ（すなわち、ペプチダーゼ、EC ３．４）、アミラーゼ（EC３．２．１と分類される）、リパーゼ（３．１．１．３と分類されるものを含む）、セルラーゼ（EC３．２．１．４を包含する）及びオキシドレダクターゼ（EC１）、たとえばペルオキシダーゼ（EC１．11）及びオキシダーゼ〔EC１．10．３と分類される酵素、たとえばラッカーゼ（EC１．10．３．２．）〕及びそれらの任意の混合物からなる群から選択する酵素を包含する。同じ類からの酵素の混合物（たとえば異るプロテアーゼ、異るリパーゼ等の混合物）も包含する。液体組成物中の酵素の量は、酵素の型及び液体組成物の所期の用途により変るだろう。一般に、存在するいずれの酵素も好ましくは液体組成物の 0.2〜50重量（ｗ／ｗ）％（純粋な酵素タンパク質を基準にして計算）、しばしば液体組成物の 0.5〜25重量％、たとえば１〜10重量％、たとえば２〜８重量％の範囲の量で存在するだろう。濃度単位で表現すると、本発明の液体組成物に存在する酵素についての好ましい範囲は、約50μＭ〜約20mM、しばしば100μＭ〜10mM、たとえば 500μＭ〜５mM、たとえば 750μＭ〜３mMであろう（純粋な酵素タンパク質のモルを基準にして計算）。プロテアーゼ液体組成物中で用いるのに適当ないかなるプロテアーゼ（タンパク質分解酵素）も用いることができる。適切なプロテアーゼは動物、植物または微生物起原のもの、特に微生物起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して、１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたまたはタンパク質工学（遺伝子工学）による変異体であって、タンパク質分解活性を示すものを包含する。プロテアーゼは、たとえば、セリンペプチダーゼ、好ましくはアルカリ性微生物プロテアーゼまたはトリプシン様プロテアーゼである。アルカリ性プロテアーゼの例は、ズプチリシン、特にバチルス由来のもの、たとえば、ズブチリシンノボ、ズブチリシンカールスバーグ、ズブチリシン 309、ズブチリシン 147及びズブチリシン 1 68（国際特許出願公開第89/06279号明細書に記載されている）である。市販のバチルスズブチリシンの例はAlcalase（商標）、Savinase（商標）、Esperase（商標）及びDurazym（商標）製品であって、すべてノボノルディスクＡ／Ｓから入手できる。これらの多数のプロテアーゼ製品、たとえばAlcalase（商標）、Esperase（商標）及びSavinase（商標）は液体で入手でき（たとえばSavinase （商標）16.0Ｌ，DX型及びEX型）、本発明のプロテアーゼ含有液体組成物の調製によく適合している（下記参照）。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（たとえば、ブタまたはウシ起原の）及び国際特許出願公開第89/06270号明細書に記載されているフサリウム（ Fusarium）プロテアーゼである。アミラーゼ液体組成物中で用いるのに適当ないかなるアミラーゼ（デンプン分解酵素）も用いることができる。適当なアミラーゼは、細菌及び真菌起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して、１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたまたはタンパク質工学（遺伝子工学）による変異体であって、テンプン分解活性を示すものを包含する。アミラーゼは、たとえば英国特許第 1,296,839号明細書により詳細に記載されている、バチルスリヘニホルミス（B．licheniformis）の特定の菌株から得られる、たとえばα−アミラーゼ（EC３．２．１．１）を包含する。非常に適当なα−アミラーゼはTerm amyl（商標）であって、ノボノルディスクＡ／Ｓから入手できる（特に液体製品として）。リパーゼ液体組成物中で用いるのに適当ないかなるリパーゼ（脂質分解酵素）も用いることができる。適当なリパーゼは細菌及び真菌起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して、１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたか、またはタンパク質工学（遺伝子工学）で作られた変異体であって、脂質分解活性を示すものを包含する。非常に適当なリパーゼは、欧州特許第 0258068号明細書に記載されているように、フミコーララヌギノサ(Humicola lanuginosa)からの遺伝子をクローン化し、その遺伝子をアスペルギルスオリザエ（Aspergillus oryzae）中に発現させることにより得られたものであって、ノボノルディスクＡ／Ｓから、Lipolase（商標）という商品名で入手できる（特に液体製品として）。セルラーゼ液体組成物中で用いるのに適当ないかなるセルラーゼ（セルロース分解酵素）も用いることができる。適当なセルラーゼは細菌及び真菌起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して、１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたか、またはタンパク質工学（遺伝子工学）で作られた変異体であって、セルロース分解活性を示すものを包含する。適当なセルラーゼは、たとえば米国特許第 4,435 ,307号明細書に開示されているセルラーゼである。非常に適当なセルラーゼは、フミコーラインソレンス(Humicola insolens)の菌株により産生されたもので商品名Celluzyme（商標）でノボノルディスクＡ／Ｓから入手できる。ペルオキシダーゼ液体組成物、たとえば液体洗剤組成物に用いるのに適当ないかなるペルオキシダーゼも用いることができる。本明細書で適当なペルオキシダーゼは、植物、細菌及び真菌起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して、１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたか、またはタンパク質工学（遺伝子工学）で作られた変異体であって、ペルオキシダーゼ活性を示すものを包含する。適当なペルオキシダーゼの例はコプリヌス〔たとえば、コプリヌスシネリウス(C．ci nerius)またはコプリヌスマクロリツス（C．macrorhizus）〕の菌株またはバチルス〔たとえば、バチルスプミルス（B．pumilus）の菌株由来のもの、特に PCT/DK90/00260号明細書に記載のペルオキシダーゼである。オキシダーゼ液体組成物、たとえば液体洗剤組成物に用いるのに適当ないかなるペルオキシダーゼも用いることができる。本明細書で適当なペルオキシダーゼは細菌及び真菌起原のもの、並びに後者の型の１つの酵素のアミノ酸配列に関連して１つまたはそれよりも多いアミノ酸が置換、挿入及び／または削除された、化学的に製造されたか、またはタンパク質工学（遺伝子工学）で作られた変異体であって、オキシダーゼを活性を示すものを包含する。適当なオキシダーゼの例は、アスペルギルス、アカパンカビ属（Neurospora）〔たとえばアカパンカビ属クラッサ(N．crassa)〕、トラメテス（Trametes）〔たとえばトラメテスビロサ（T．villosa）〕またはマイセリオフトラ（Myceliophthora）〔たとえばマイセリオフトラテルモフィラ（M．thermophila）〕の菌株由来のラッカーゼである。酵素阻害剤（酵素安定剤）本発明の液体組成物は少なくとも１種の可逆酵素阻害剤、通常は液体組成物中に存在する少なくとも１種の酵素のための阻害剤を含有する。したがって、たとえば、本発明の液体組成物は、第１の型の酵素及びその型の酵素のための可逆阻害剤に加えて、第２、第３・・・等の型の酵素（たとえば上述の型の酵素の１つ）であって、その内の１種以上はそれについての可逆阻害剤を伴なわない、酵素を含有してもよい。本明細書に開示された量の１つまたはそれよりも多い酵素を含有するが、これらの酵素のための阻害剤を含有する代りに、液体組成物が次に接触する他の型の酵素のための阻害剤を含有する、液体酵素組成物を製造することも完全に実行できることであることをここに言及しなければならない。この１つの例は唯一の酵素としてのリパーゼとプロテアーゼ阻害剤を含有する液体組成物であって、プロテアーゼ阻害剤は、次いで故意にまたは不適切に続いてリパーゼと接触するプロテアーゼによる分解に関してリパーゼを保護するだろう。用いられる阻害剤の性質と量は、特にその組成物中に存在する酵素の性質と濃度及び組成物の目的とする用途に依存するだろう。本発明の液体組成物中に存在する種々の類／型の酵素に関連して用いるのに適切な可逆阻害剤（及びそれに関連するＫ_i値）に関して、広範囲にわたる列挙のためにＨ．ツォルナー(Zollner)の「Handbook of Enzyme inhibitors（Part Ａ及びＢ）」第２版、（VCH Verlagsgesellschaft mbH，Weinheim，ドイツ国，199 3年）に言及する。さらに適切な情報源はＰ．ウーリー(Woolley)及びＳ．Ｂ．ピーターセン（P etersen）編「Lipasestheir structure，Biochemistry and Application」（Cam bridge University Press，ケンブリッジ，1994年）中のＳ．パトカー（Patkar ）及びＦ．ブジェクリング可逆阻害剤の適切な型の選択された例は次のとおりである。プロテアーゼ阻害剤可逆プロテアーゼ阻害剤の特に重要な類の１つは、ボロン酸（boronic acid）〔R'B(OH)₂〕及びボリン酸（borinic acid）〔R'R''B(OH〕（式中、Ｒ’及びＲ''は有機置換基、たとえば任意に置換されたアリールまたは異節環置換基）により構成され、そのいくつかの例を上述した。この型の適切な化合物のさらなる例は国際特許出願公開第92/19707号明細書、欧州特許出願公開第 0478050号明細書及び欧州特許出願公開第 0511456号明細書中に言及されているものの中から選択し得る。この型の重要な化合物は国際特許出願公開第95/02046号明細書（これは本出願の優先日には公開されていなかった）に記載されたものの中に見い出すことができ、次の一般式の化合物を含む。〔式中、Ｒ₁は環中に14〜18の炭素原子を含有する任意に置換された融合芳香族環構造または環中に17までの炭素原子を含有する任意に置換された単環もしくは融合芳香族異節環構造または環中に18までの炭素原子を含有する任意に置換された単環もしくは融合キノイド環構造であって、Ｒ₂は式（式中、Ｘは同一または異なっていて、水素、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、置換されたＣ₁ 〜Ｃ₆アルキル、アリール、置換されたアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシ誘導体、ハロゲン、アミン、アルキル化アミン、アミン誘導体、ニトロ、チオール、チオール誘導体、アルデヒド、酸、酸の塩、エステル、スルホン酸塩またはホスホン酸塩から選択し、ｏ，ｐ及びｑは同一または異なっていて、各々０，１または２である）を有し、ｍ及びｎは同一または異なっていて各々、０または１で、Ｒ₃はＲ₁と同一または異なっていて、Ｒ₁から選択するか、Ｒ₃はヒドロキシ基であるか、Ｒ₁とＲ₃の両方が任意に置換された単環もしくは二環芳香族環構造である。〕上記の文脈において、任意に置換された環構造は環構造上の置換基を自由に選択するものであるが、それらは好ましくは、水素、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルキル、アリール、置換されたアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシ誘導体、ハロゲン、アミン、アルキル化アミン、アミン誘導体、ニトロ、チオール、チオール誘導体、アルデヒド、酸、酸の塩、スルホン酸塩及びホスホン酸塩から選択する。ボロン酸誘導体及びボリン酸誘導体は当業者に周知の方法、たとえば次の方法の１つを用いて製造することができる。ａ）不飽和物質、すなわち、アルケン及びアルキンのホウ水素化（hydroborat ing）剤として、カテコールボラン（１，３，２−ベンゾジオキサボロール）またはジクロルボラン−ジメチルスルフィド錯体を用いるホウ水素化：H．C．Brow n，S．K．Gupta「JACS」97 第5249〜5255頁（1975年）及びH．C．Brown，N．Rav indran，S．U． Kuikarni「J．Org．Chem．」45 第 384頁（1980年）参照。ｂ）グリニア試薬とホウ酸トリ−ｎ−ブチルまたはホウ酸トリメチルのいずれかとの反応に続いて、このようにして生じたボロン酸エステルの加水分解：J．R ．Johnson「JACS」54 第4415〜4425頁（1932年）及びS．H．Dandegaonher，S． P．Ingleshwar「Journal of Shivasity University」６第11〜13頁（1932年）参照。市販されていない臭素置換出発物質は相当するカルボン酸から、LiAlH₄を用いる還元に続いてCBr₄を用いる２段階で適宜製造することができる。ｃ）有機リチウム試薬とホウ酸ブチルとの反応：S．O．Lauesson ntin，B．Rocques「C．R．Acad．Sci．Paris」t．270第1608〜1610頁、（1970年５月11日）参照。ｄ）ボリン酸誘導体は上記ｂ）方法により製造することができる。しかしながら、その時はグリニア試薬：ホウ酸エステルの比は２：１を採用する。ｅ）任意の核置換または官能基の保護は、当業者に周知の標準的方法を用いて達成する。この型のさらに重要な化合物は国際特許出願公開第95/29223号明細書（本出願の優先日には公開されていなかった）に記載されている、ナフタレンボロン酸から選択でき、それは次の一般式を有する化合物を含む。（式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄，Ｒ₅，Ｒ₆及びＲ₇は同一または異なっていて、水素、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、置換されたＣ₁〜Ｃ₆アルキル、アリール、置換されたアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシ誘導体、ハロゲン、アミン、アルキル化アミン、アミン誘導体、ニトロ、チオール、チオール誘導体、アルデヒド、酸、酸の塩、エステル、スルホン酸塩、ホスホン酸塩から選択する。）。ナフタレンボロン酸誘導体は同様に当業者に周知の、たとえば次のようなグリニア製造を用いる方法を用いて製造できる。グリニア試薬をナトリウム乾燥エーテル中のマグネシウム削りくずへの、ナトリウム乾燥エーテル中の適当な臭化ナフタレン出発物質のゆっくりした滴加により製造する。反応を少量のヨウ素結晶の添加により促進する。ナトリウム乾燥エーテル中のホウ酸トリメチルまたはホウ酸トリ−ｎ−ブチルを−70℃に冷却し、有機ホウ酸エステル溶液を−70℃に保ち、絶え間なく撹拌しながら、グリニア試薬を２時間かけて滴加する。反応混合物を一夜室温に加温させ、続いて冷希硫酸の滴加により加水分解する。エーテル層を分離し、水性層をエーテルで抽出する。エーテル含有分画をいっしょにし、溶媒を除去する。残留物は強アルカリ性であって、そのようにして生成したいかなるメタノールまたはブタノールも除去する。アルカリ性溶液を冷却し、生じる所望のボロン酸の結晶をろ過により除去する。すべての生成物を好ましくは蒸留水から再結晶化する。ナフタレンボロン酸は、ナフタレンの直接リチウム化（lithiation）及び／または臭化物のリチウム化のいずれかを用いても製造することができる。いかなる核置換または官能基の保護も当業者に周知の標準方法により達成できる。上述の型の化合物の中でも、本発明の文脈で重要な特定のボロン酸は次のものを包含する。すなわち、ベンゾフラン−２−ボロン酸、フェニルボロン酸、４− ブロムフェニルボロン酸、４−ホルミルフェニルボロン酸、３−アセトアミドフェニルボロン酸、３，５−ジクロルフェニルボロン酸、５−クロルチオフェン− ２−ボロン酸、ナフタレン−１−ボロン酸、ナフタレン−２−ボロン酸及び６− ヒドロキシナフタレン−２−ボロン酸である。さらに、本発明の文脈で重要なこの型の特定の化合物を本明細書の例２に示す表で言及する（下記参照）。ボロン酸またはボリン酸型の阻害剤を、本発明の液体組成物中に酸自体の形で（たとえば適当な水混和性有機溶媒、たとえばモノプロピレングリコールまたはその他類似のものに溶解して）または、適当ならば（たとえば溶解性の理由のため）塩として（たとえばアルカリ金属塩、たとえばナトリウムまたはカリウム塩）導入もしくは組み入れる。可逆アミラーゼ阻害剤本発明の文脈で受け入れられる適当な可逆アミラーゼ阻害剤は、たとえばいわゆる「アカルボース（acarbose）」型〔すなわちアカルビオシン（acarviosine）部分及び１またはそれよりも多いマルトース単位を含有するシュードーオリゴ糖類〕の化合物中に見い出すことができる。特にα−アミラーゼのための阻害剤として適当な他の化合物はマルトースとマルトトリオースを包含する。化合物、たとえばメチル−α−グルコシド並びにシクロアミロース、たとえばシクロヘキサ及び／またはシクロヘプタアミロースはβ− アミラーゼのための可逆阻害剤として適当である。可逆セルラーゼ阻害剤本発明の文脈中で受け入れられる重要な可逆セルラーゼ阻害剤は４−チオール−セロオリゴ糖類〔たとえばC．Schou他「Journal of Car bohydrate Chemistry」12 第 743〜752 頁、（1993年）参照〕を包含する。可逆リパーゼ阻害剤本発明の文脈で適当な可逆リパーゼ阻害剤は、上記及び／または下述のものから選択されるボロン酸及びボリン酸（たとえば、任意に置換されたフェニルボロン酸）を包含する。酵素阻害の程度本発明の液体組成物中に存在する酵素の所望の阻害の程度（強度、大きさ）は数ある中で、その組成物が意図する目的に依存するだろう。一般に酵素に対する可逆阻害剤のモル比は、当該酵素の活性部位当り少なくとも１阻害剤分子が存在するように選択されるだろう。そして、それはもちろん、少なくとも１：１の阻害剤（Ｉ）対酵素（Ｅ）のモル比を必要とするだろう。しかしながら、ある目的のためにはより低いＩ：Ｅモル比、たとえば約 0.8：１、約 0.7：１、約 0.6：１、さらに約 0.5：１が適当であろう。しかしながら、本発明の文脈では、一般に少なくとも５、たとえば少なくとも15の酵素に対する阻害剤のモル比を用いるのが望ましい。ある場合には、Ｉ：Ｅモル比が少なくとも50または少なくとも10 0またはさらに高いモル比が適当であろう。酵素に対する阻害剤のモル比は、とりわけ、本発明の液体組成物に基づく多成分酵素含有組成物の実際の使用の間に存在することが望まれる、遊離（阻害されていない）酵素のパーセントに関する考察を基にして選択されるだろう。したがって、たとえばクリーニング業の洗濯のためのクリーニング業用洗剤を用いる時は、十分に高レベルの遊離酵素（たとえば、プロテアーゼまたはリパーゼ）が洗浄媒体（それは代表的には当該洗剤組成物が加えられた水である）中に存在することが必要なことは明らかであろう。これに関して、重要なパラメータは酵素の可逆阻害についての阻害常数（上で定義）である。したがって、たとえば本発明の液体組成物が洗剤組成物中にあるとき、その中の酵素の可逆阻害剤についてのモル／ｌ（Ｍ）で慣用の方法で表わした阻害常数（Ｋ_i）は、しばしば３×10^-8Ｍ≦Ｋ_i≦ 1.2×10^-2Ｍ、たとえば３ ×10^-8Ｍ≦Ｋ_i≦１×10^-2Ｍが適切であろう。しかしながら、洗剤酵素に関してより望ましい「阻害の窓（window）」は、しばしば特定の酵素に関連する阻害剤が約３×10^-7Ｍ≦Ｋ_i≦１×10^-3、たとえば 4.3×10^-7Ｍ≦Ｋ_i≦ 4.5×10^-4Ｍに相当する阻害を及ぼすものであろう。一般に本発明の好ましい酵素含有液体組成物は、（ａ）その組成物中に存在する可逆酵素阻害剤、Ｉの総モル濃度（〔Ｉ〕_tと表わされる）と（ｂ）その組成物中に存在し、当該阻害剤により可逆阻害される酵素の阻害についての阻害常数（Ｋ_i：モル／ｌで表わされる）との間の比が、少なくとも50（すなわち〔Ｉ〕_t／Ｋ_i≧50）、たとえば少なくとも100、または、しばしば少なくとも250 である組成物である。本発明の液体組成物における〔Ｉ〕_t／Ｋ_i比についての実際的な上限は通常は約 10000（すなわち10⁴）であろう。多くの目的のためには、〔Ｉ〕_t／Ｋ_i比についての値は 250〜5000の範囲内、しばしば 250〜2500の範囲内が適当であろう。〔Ｉ〕_t／Ｋ_i比の値は、本発明の液体組成物の「阻害能力」の測定とみなせるだろう。高い値−そしてそれによる高「阻害能力」は、たとえば液体組成物中に、比較的にあまり大きくない濃度から低濃度の強く阻害する阻害剤を取り入れるか、比較的に高濃度のより弱く阻害する阻害剤を取り入れることにより達成されるたろう。阻害された酵素Ｅに関して、比較的に大モル過剰の阻害剤の存在では、阻害剤の大部分は通常は遊離形、すなわち酵素に結合していないだろう。遊離の（結合していない）阻害剤の濃度を〔Ｉ〕（Ｋ_iと関連して、下記参照）と表わすと、そこで〔Ｉ〕_t／Ｋ_i比は、そのような条件ではほぼ〔Ｉ〕_t／Ｋ_i比に等しい、すなわち、酵素と可逆酵素阻害剤を含む、本発明の液体組成物は適当な方法（たとえば凍結乾燥または噴霧乾燥）により乾燥することができるとここに言うことができる。乾燥された酵素／阻害剤生成物を次いで粉末にし（たとえば製粉により）、非水性液体媒体、たとえば非イオン界面活性剤〔たとえばBPからのSoftanol（商標）〕中に適当な濃度で懸濁またはスラリー化して、スラリー製品を生成する。洗剤洗剤組成物については、典型的な目標は洗剤組成物自体中の選択された酵素（たとえばプロテアーゼ）の少なくとも50％の阻害及びその酵素の総量の少なくとも50％に相当する洗浄媒体中の遊離酵素の量の達成であろう。本発明の液体組成物を組み入れる洗剤組成物は、酵素と阻害剤は別として、界面活性剤を含み、通常は液体洗剤組成物であろう。洗剤組成物はたとえばクリーニング業用の洗剤組成物または食器洗い用洗剤組成物であってもよい。液体洗剤組成物は、水性でたとえば典型的には70％までの水と０〜30％の有機溶媒を含有するか、または実質的に非水性である。洗剤組成物は１またはそれよりも多い界面活性剤を含み、その各々はアニオン性、非イオン性、カチオン性または両性（双極性）でよい。洗剤は通常０〜50％のアニオン性界面活性剤、たとえば線状アルキルベンゼンスルホン酸塩(LAS)、アルファーオレフィンスルホン酸塩(AOS)、アルキル硫酸塩（脂肪アルコール硫酸塩）（AS）、アルコールエトキシ硫酸塩(AEOSまたはAES)、第２級アルカンスルホン酸塩(SAS)、アルファースルホ脂肪酸メチルエステル、アルキルまたはアルケニルコハク酸または石けんを含むだろう。０〜40％の非イオン性界面活性剤、たとえばアルコールエトキシ化物(AEOまたはAE)、アルコールプロポキシ化物、カルボキシル化アルコールエトキシ化物、ノニルフェノールエトキシ化物、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミドまたはポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（たとえば国際特許出願公開第92/06154号明細書に記載されているような）も含み得る。通常洗剤は１〜65％の洗剤ビルダーを含むが、いくつかの食器洗い用洗剤は90 ％までもの、洗剤ビルダーまたは錯化剤、たとえばゼオライト、２リン酸塩、３リン酸塩、ホスホン酸塩、クエン酸塩、ニトリロトリ酢酸(NTA)、エチレンジアミンテトラ酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(DTMPA)、アルキルまたはアルケニルコハク酸、溶解性ケイ酸塩または層状化ケイ酸塩（たとえばヘキストからの SKS−６）を含有してもよい。洗剤ビルダーをリン含有型と非リン含有型に細分できる。リン含有無機アルカリ性洗剤ビルダーの例は水溶性塩、特にアルカリ金属ピロリン酸塩、オルトリン酸塩、ポリリン酸塩及びホスホン酸塩を包含する。非リン含有無機ビルダーの例は水溶性アルカリ金属カルボン酸塩、ホウ酸塩及びケイ酸塩、並びに層状化ジケイ酸塩及び種々の型の水不溶性、結晶または無定形アルミノケイ酸塩（ゼオライトが最も良く知られた典型である）を包含する。適当な有機ビルダーの例は、コハク酸塩、マロン酸塩、脂肪酸マロン酸塩、脂肪酸スルホン酸塩、カルボキシメトキシコハク酸塩、ポリ酢酸塩、カルボン酸塩、ポリカルボン酸塩、アミノポリカルボン酸塩及びポリアセチルカルボン酸塩のアルカリ金属、アンモニウムまたは置換アンモニウム塩を包含する。洗剤は洗浄効果を増加していない、すなわち、本質的に洗剤ビルダーがなくてもよい。洗剤は１またはそれよりも多いポリマーを含むことができる。例としてはカルボキシメチルセルロース(CMC)、ポリ（ビニルピロリドン）（PVP）、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ（ビニルアルコール）（PVA）、ポリカルボン酸、たとえばポリアクリル酸、ポリマレイン酸、マレイン酸／アクリル酸コポリマー及びメタクリル酸ラウリル／アクリル酸コポリマーである。洗剤組成物は、塩素／臭素型または酸素型の漂白剤を含有することができる。漂白剤は被覆されていても、カプセル化されていてもよい。無機の塩素／臭素型の漂白剤の例は、次亜塩素酸もしくは次亜臭素酸のリチウム塩、ナトリウム塩もしくはカルシウム塩、並びに塩素化リン酸トリナトリウムである。漂白系はH₂O₂源、たとえば過ホウ酸塩または過炭酸塩を含むこともでき、それは、過酸生成漂白活性化剤、たとえばテトラアセチルエチレンジアミン（TAED）またはノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩（NOBS）と組み合せてもよい。有機塩素／臭素型漂白剤の例は異節環Ｎ−臭素及びＮ−塩素イミド、たとえばトリクロルイソシアヌル酸、トリブロムイソシアヌル酸及びジクロルイソシアヌル酸及び水可溶化カチオン、たとえばカリウム及びナトリウムとのそれらの塩である。ヒダントイン化合物も適当である。漂白系は、たとえば、アミド、イミドまたはスルホン型の過オキシ酸も含むことができる。食器洗い洗剤においては、酸素漂白剤は、たとえば、好ましくは漂白前駆体といっしょの、または過オキシ酸化合物としての無機過酸塩の形であるのが好ましい。適当な過オキシ漂白化合物の代表的な例は、過ホウ酸アルカリ金属塩の４水和物と１水和物の両方、過炭酸、過ケイ酸及び過リン酸のアルカリ金属塩である。好ましい活性化剤物質はTAEDまたはNOBSである。前述したように、本発明の洗剤組成物の酵素を本発明の液体酵素／阻害剤組成物の形で洗剤組成物に組み入れる。所望なら、さらに慣用の酵素安定剤、たとえばポリオール、たとえばプロピレングリコールもしくはグリセロール、砂糖もしくは、砂糖アルコール、乳酸、ホウ酸もしくはホウ酸誘導体、たとえば芳香族ホウ酸エステルを組み入れることができる（たとえば、国際特許出願公開第92/19709号明細書及び国際特許出願公開第92/19708号明細書参照）。洗剤は他の慣用の洗剤成分、たとえば、粘土、解凝剤物質、泡増幅剤／泡抑制剤（食器洗い洗剤では泡抑制剤）、（せっけんの）泡抑制剤、腐食防止剤、土壌懸濁化剤、土壌再沈殿防止剤、染料、脱水剤、殺菌剤、光学的増白剤または香料を包含する織物コンディショナーを含有することもできる。 pH（使用濃度で水溶液で測定した）は通常中性またはアルカリ性で、たとえば７〜11の範囲である。本発明の範囲のクリーニング業用洗剤組成物の特定の形は、次に記載のものを包含する。１）次のものからなる水性液体洗剤組成物２）次のものからなる水性の構造のある（structured）液体洗剤組成物３）次のものからなる液体洗剤組成物４）次のものからなる液体洗剤組成物５）線状アルキルベンゼンスルホン酸のすべてまたは一部を（Ｃ₁₂〜Ｃ₁₈）アルキル硫酸塩で置換した１）〜４）に記載された洗剤配合物。６）付加成分またはすでに特定化された漂白系のための代用品のいずれかとして、安定化またはカプセル化過酸を含有する１）〜５）に記載された洗剤配合物。７）液体非イオン界面活性剤、たとえば線状アルコキシ化第１級アルコール、ビルダー系（たとえばリン酸塩）、酵素及びアルカリを含む、非水性洗剤液として配合された洗剤組成物。食器洗い用及び他の多成分酵素含有組成物この種の適切な型の配合物は次のものを包含する。１）次のものからなる洗浄界面活性剤系を有する液体食器洗い組成物２）次のものからなる非水性液体自動食器洗い機用組成物３）次のものからなる非水性液体食器洗い組成物４）次のものからなるチキソトロピー性液体自動食器洗い機用組成物５）次のものからなる液体自動食器洗い機用組成物６）次のものからなる保護された漂白剤粒子を含有する液体自動食器洗い機用組成物７）過ホウ酸塩を過炭酸塩で置換した１）及び５）に記載された自動食器洗い機用組成物。８）さらにマンガン触媒を含有する１）に記載された自動食器洗い機用組成物。マンガン触媒は、たとえば「ネイチャー（Nature）」369 第 637〜639 頁（1994 年）、『低温漂白に有効なマンガン触媒』に記載された化合物の１つであってもよい。上記配合物中の「酵素」含有量は、存在している酵素阻害剤の含有量を包含し得る。適当な場合には、上で列挙した型の１つに包含される特定の配合物は、その型の配合物に関して、特に上記していないが、たとえば、当該特定の配合物中に組み入れられた、本発明の液体酵素／阻害剤組成物中に存在する阻害剤の溶解剤としての役目を果たした型の有機溶媒を含有することができる。本発明の液体酵素／阻害剤組成分は、洗剤中において慣用に用いられる酵素濃度を与えるように洗剤組成物中に組み入れることができる。現在では、本発明の洗剤組成物について、本発明の液体酵素／阻害剤組成物は、たとえば、この酵素／阻害剤組成物中に存在する一定の酵素について、洗浄液１ｌ当り、0.00001〜１mg（純粋な酵素タンパク質として計算）の範囲の酵素の量に相当する量で組み入れることができる。安定剤の試験阻害剤の阻害効果を、プロテアーゼ／プロテアーゼ阻害剤について次の２つの試験によりここに説明する。種々の方法で試験することができる。ａ）液体洗剤中での貯蔵安定性試験液体酵素／阻害剤組成物をはっきり定義された条件に貯蔵された液体洗剤配合物に加える。各酵素活性を時間の関数として（たとえば、１，３及び７日後）測定する。貯蔵安定性のデータから阻害効率を計算するために反応メカニズムを提案する。次の反応はプロテアーゼ（Ｐ）、リパーゼ（Ｌ）及び阻害剤（Ｉ）を含有する液体洗剤についての、比較的に簡単であるが、なお、もっともらしいメカニズムを示す。Ｉ）プロテアーゼの自己消化：Ｐ＋Ｐ→Ｄ_P＋Ｐ II）プロテアーゼの変性：Ｐ→Ｄ_P III）プロテアーゼの阻害： IV）阻害された酵素のプロテアーゼの消化：Ｐ＋Pl→Ｐ＋Ｄ_P＋ＩＶ）阻害された酵素の変性： Pl→Ｄ_P＋Ｉ VI）リパーゼのプロテアーゼ阻害：Ｐ＋Ｌ→Ｐ＋Ｄ_L VII）リパーゼの変性：Ｌ→Ｄ_L 上記において、Ｄ_PとＤ_Lは変性された（すなわち不活性）プロテアーゼ及びリパーゼである。これらの反応から、Ｐ，Ｌ及びPlの不活化を表わす、３つの微分方程式を導き出す。反応速度常数はパラメータ評価方法（レーベンベルク修正を伴なったガウス−ニュートン）を用いることによる貯蔵安定性データから導びく。貯蔵安定性データは時間の関数として（Ｐ＋Pl）及びＬの濃度を示す。反応IIIは他の反応よりずっと早く、そして計算においては平衡を仮定する。反応IVをパラメータの数を減らすために除き、それにより、阻害された酵素の安定性を唯一の反応常数（式Ｖから）で示す。大量の上回る阻害分子（プロテアーゼ分子に関して）が存在すると、阻害剤の濃度は、合理的な近似として、一定であると仮定できる。反応速度常数の特定の値は、データの小さい変化についていくらか高感度であるが、感度をホウ酸についての値に関連する結果を示すことにより感度はかなり低下する。ホウ酸〔密接に関連する、または等価の物質、たとえばホウ酸アルカリ金属塩（たとえばホウ砂）及びホウ素酸化物〕を特にプロテアーゼの阻害の目的で用いることは周知であるが（たとえば、欧州特許出願公開明細書参照）、その低阻害強度と上記物質の一般的にどちらかといえば不十分な溶解性（本明細書の実施例でホウ酸についてさらに説明する：下記参照）の組み合せは、一般的にそれらを本発明の文脈で用いるのに不適当にする〔本発明の液体組成物中に存在する阻害剤及び／またはその量は、その液体組成物を多成分組成物の１成分として組み入れる時に、なお、良好な酵素安定化を生じるようなものであるべきである。〕。したがって、化合物、たとえばホウ酸、ホウ酸アルカリ金属（たとえばホウ砂）及びホウ素酸化物は、本発明の文脈において一般的に阻害剤としては除かれるだろう。「改良因子」は次のように定義できる。したがって、このように定義されたIF_i は、ホウ酸に関連して示された阻害効率の程度を規定する。ｂ）Ｋ_iの決定：阻害常数Ｋ_iは標準方法を用いることにより決定することができる〔Keller他「Biochem．Biophys．Res．Comm.」17 6 第 401〜405 頁（1991年）、J．Bieth「Bayer-Symposium『Proteinase lnhibi tors』」第 463〜469 頁（Springer-Verlag，1974年）及びLone Kierstein Hans en「プロテアーゼ活性、分子量、動的パラメータ及び阻害反応速度論を用いる選択した洗剤プロテアーゼの特異的活性の決定(Determination of Specific Activ ities of Selected Detergent Proteases using Protease Activity，Molecular Weights，Kinetic Parameters)」博士論文（ノボノルディスクＡ／Ｓ及びコペンハーゲン大学、1991年）参照。〕所望により、洗剤組成物の非酵素成分（界面活性剤等）の存在下に決定を実施してもよい。酵素の阻害のためのＫ_i値を決定するのに適当な条件は、一般に、適当なpHを与え、当該酵素または酵素阻害剤と反応しないかまたは錯体を生成しない緩衝系を用いることにより達成されるだろう。多くの酵素／阻害剤反応についての適切な系は、たとえば穏やかなアルカリ性pH、たとえばpH8.6 で、室温（一般的に25 ℃）のグリシル−グリシン緩衝液であろう。実験の部本発明をさらに次の例で説明し、具体化するが、例は、どのような意味でも請求された発明の範囲を限定するものではない。例１次の手順は多数の型のボロン酸及びボリン酸の合成への適切なアプローチを説明するものである。チオフェン−３−ボロン酸の製造ナトリウム乾燥したエーテル(100ml)中の３−ブロムチオフェン(0.043モル)を −60℃に冷却した。速やかにブチルリチウム（１Ｍ，30ml）を加えた。次に混合物を３分間撹拌し、その後、ナトリウム乾燥したエーテル（25ml）中のホウ酸トリｎ−ブチル(0.043モル )またはホウ酸トリメチル(0.043モル）を加えた。混合物を４時間撹拌し、室温になるまで放置した。その後反応混合物を塩酸（１Ｍ）で処理し、エーテル層を分離した。水性層をエーテルで抽出した（25mlで２回）。エーテル層をいっしょにし、水酸化ナトリウム（１Ｍ）で抽出した。次に、そのアルカリ性溶液を塩酸（10％）で酸性化し、このようにして、所望のボロン酸を沈殿させた。そのボロン酸を単離し、次いで、水／エタノールで再結晶させ、空気中で乾燥させた。 C₄H₅BO₂S、融点 163〜164 ℃。ジフェニルボリン酸の製造：これを上記方法を用いて製造した。グリニア試薬をブロムベンゼンとマグネシウムの削りくずから製造した。しかしながら、１モルのホウ酸トリ−ｎ−ブチルに対して２モルのグリニア試薬を用いた。そのようにして生じたボリン酸をエタノールアミンとの反応で単離し、このようにして、ジフェニルボリン酸、エタノールアミン錯体（(C₆H₅)₂BO・CH₂CH₂NH₂）（扱いやすい）を得た。融点192〜194 ℃４−ホルミルフェニル−ボロン酸の製造：この化合物は「Chem．Ber.」123 第18 41〜1843頁（1990年）の記載のようにして製造することができる。４−ブロムベンズアルデヒドジエチルアセタールとマグネシウム削りくずとをテトラヒドロフラン中で反応させ、その後エーテルに溶解したホウ酸トリブチルを加え、その混合物に硫酸を混合する。例２Ｋ_iの決定プロテアーゼSavinase（商標）についての阻害常数Ｋ_iを次の条件下に標準方法を用いて決定した。基質：スクシニル−アラニン−アラニン−プロリン−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリド＝SAAPFpNA（シグマからカタログ番号Ｓ−7388）。緩衝液： 0.1Ｍグリシル−グリシン pH8.6；１ｌ当り 1.5mlの15％ Brij（商標）；25℃（グリシル−グリシンはシグマからカタログ番号Ｇ-3028）。分析中の酵素濃度： Savinase（商標）：１×10^-10〜３×10^-10Ｍ基質の加水分解の初期速度はCobas 自動分光光度計を用いて、0.01〜２mMの範囲の９つの基質濃度で測定した。動的パラメータＶ_max及びＫ_mをENZFITTER（非線状回帰データ分析プログラム）を用いて決定した。Ｋ_catを式Ｖ_max＝Ｋ_cat× 〔Ｅ_o〕から計算した。活性酵素の濃度〔Ｅ_o〕を非常に強く結合するタンパク質型プロテアーゼ阻害剤を用いる活性部位滴定で測定した。阻害常数Ｋ_iを阻害剤の濃度の関数としてＫ_m／Ｋ_catのプロットから計算した。阻害剤は 100％純粋であるものと仮定し、モル濃度を秤量された量及び分子量から決定した。試験した１連のボロン酸酵素安定剤（阻害剤）についての阻害常数Ｋ_iの結果として生じた値を下表に、これらのいくつかの阻害剤についての比〔Ｉ〕_t／Ｋ_i の値と共に示す。例３液体洗剤の貯蔵安定性試験次においては、Savinase（商標）調製品に関して、KNPU（「Kilo Novo Protea se Units」）に、Lipolase（商標）調製物に関してKLU（「Kilo Lipase Units」に言及する。１KNPUは2.53mg（約 9.4×10^-5ミリモル）の純粋酵素タンパク質に相当する。Savinase（商標）活性の測定に関して、パンフレット、AF220／１−G B（請求によりノボノルディスクＡ／Ｓ、デンマーク国バグスバードから入手できる）に言及することができる。１リパーゼ単位（LU）は、標準条件下で（30.0℃，pH7.0、乳化剤としてアラビアゴム、基質としてトリブチリンを用いて）、１分当り１μモルの滴定し得る酪酸を遊離する酵素の量と定義されている。この分析方法をもっと詳細に記載しているパンフレット（AF95／５）は請求によりノボノルディスクＡ／Ｓ（デンマーク国バグスバード）から入手できる。１KLU は 0.2mg（約 6.7×10^-6ミリモル）の純粋な酵素タンパク質に相当する。下記に要約した条件下で、上記方法を用いて、種々のプロテアーゼ阻害剤について液体洗剤における貯蔵安定性（酵素活性保持率）試験で試験した。各阻害剤（ホウ酸以外）のモノプロピレングリコール(MPG)の４ｗ／ｗ％溶液を調製した。ホウ酸は当該媒体に溶解性が不十分であり、したがって液体酵素／阻害剤組成物よりもむしろ最終洗剤配合物に溶解した（その中で１ｗ／ｗ％のホウ酸濃度を示した）。最初の試験シリーズ：最初の試験シリーズのために、等重量部の阻害剤溶液とSavinase（商標）16.0 Ｌ，EX型（１ｇ当り16KNPUのプロテアーゼを含有する液体プロテアーゼ調製物、ノボノルディスクＡ／Ｓ、バグスバード、デンマーク国）を混合して、各々２ｗ／ｗ％の阻害剤を含有するSavinase（商標）８Ｌ EXを得た。各々１ｗ／ｗ％の上記Savinase（商標）／阻害剤調製物、98ｗ／ｗ％の「洗剤ベース１」（下記参照）及び１ｗ／ｗ％のLipolase（商標）100Ｌ，EX型（１ｇ当り100KLUのリパーゼを含有する液体リパーゼ調製物、ノボノルディスクＡ／Ｓ、バグスバード、デンマーク国）を含有する洗剤組成物についての貯蔵安定性の結果は次のとおりであった。残存Lipolase（商標）活性％（30℃で貯蔵）残存Savinase（商標）活性％（30℃で７日貯蔵）上記結果は特に洗剤組成物中のLipolase（商標）及びSavinase（商標）の活性の保持率は阻害剤の存在により著るしく改善されることを表わす。第２試験シリーズ：第２試験シリーズのために、Savinase（商標），MPG 中の４ｗ／ｗ％の阻害剤及び純粋なMPG をそれぞれ50：37.5：12.5の重量比で混合し、各々 1.5ｗ／ｗ％の阻害剤を含有するSavinase（商標）８Ｌ EX調製物を得た。各々１ｗ／ｗ％の上記Savinase（商標）／阻害剤調製物、98ｗ／ｗ％の「洗剤ベースII」（下記参照）及び１ｗ／ｗ％のLipolase（商標） 100Ｌ，EX型を含有する洗剤組成物についての貯蔵安定性の結果は次のとおりであった。残存Lipolase（商標）活性％（30℃で貯蔵）第３試験シリーズ：各々 1.5ｗ／ｗ％の阻害剤を含有するSavinase（商標）８Ｌ EX調製物を上記第２試験シリーズと同じ方法で調製した。各々１ｗ／ｗ％の上記Savinase（商標）／阻害剤調製物、98ｗ／ｗ％の「不活性化」OMO（商標）Micro（下記参照）及び１ｗ／ｗ％のLipolase（商標）100Ｌ，EX型を含有する洗剤組成物についての貯蔵安定性の結果は次のとおりであった。残存Lipolase（商標）活性％（35℃で貯蔵）第４試験シリーズ：貯蔵温度30℃を用い、不活性化OMO（商標）Micro を「洗剤ベースIII」（下記参照）で置換した以外は本質的に上記第３シリーズと同じである。残存Lipolase（商標）活性％（30℃で貯蔵）後の方の結果は、特に種々の洗剤組成物におけるLipolase（商標）活性の保持率が阻害剤の存在により著るしく改善されることを表わす。洗剤ベースＩの組成（米国型）：洗剤ベースIIの組成：洗剤ベースIIIの組成： OMO（商標）Micro はデンマークのスーパーマーケットで購入した小売製品であった。その中の酵素内容物は電子レンジでの処理（85℃，５分間）により不活性化した。例４液体酵素／阻害剤組成物の例本発明の液体酵素／阻害剤組成物のいくつかの例は次のとおりである（すべての組成物は満足できる外観の溶液であった）：１） 0.1ｇの４−ブロムフェニルボロン酸＋10ｇのSavinase 16.0Ｌ，EX型：この組成物の阻害剤：酵素（Ｉ：Ｅ）のモル比は約33である。２） 0.2ｇの３，５−ジクロルフェニルボロン酸＋40ｇのSavinase 16.0Ｌ， EX型：この組成物のＩ：Ｅモル比は約17である。３） 0.1ｇの５−クロルチオフェン−２−ボロン酸＋10ｇのSavinase 16.0Ｌ，EX型：この組成物のＩ：Ｅモル比は約40である。４） 0.1ｇのフェニルボロン酸＋10ｇのSavinase 16.0Ｌ，EX型：この組成物のＩ：Ｅモル比は約54である。５） 0.2ｇのフェニルボロン酸＋10ｇのSavinase 16.0Ｌ，EX型：この組成物のＩ：Ｅモル比は約 108である。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Stabilization of liquid enzyme composition Field of the invention The invention is particularly (I) relatively high to very high concentrations of one or more enzymes, and (Ii) at concentrations that exhibit strong enzyme-inhibitory properties and / or cause strong enzyme inhibition Contains one or more suitable enzyme inhibitors present, especially reversible inhibitors Liquid enzyme composition. The present invention further provides: An enzyme-containing multi-component composition comprising the inhibitor-stabilized (inhi) bitor-stabilized) liquid compositions prepared using liquid enzyme compositions, e.g. A cleaning composition, such as a detergent composition, In an enzyme-containing multi-component composition, for example a cleaning composition, for example a detergent composition Wherein the enzyme is incorporated in the form of an inhibitor-stabilized liquid enzyme composition of the invention. That is, when incorporated into a multi-component composition, the enzyme is in the form of an inhibitor-stabilized composition. A method for preparing the composition, and Enzyme-containing multi-component compositions, such as creams, prepared by methods of the latter type. Cleaning compositions, such as detergent compositions. The present invention further provides an enzyme-containing multi-component composition, such as a cleaning composition, For example, the use of the liquid enzyme composition of the present invention in the preparation of a detergent composition. Background of the Invention The problem of storage stability is well known for liquid compositions containing enzymes. I Therefore, liquid detergents containing enzymes, such as proteases (peptidases) A major problem with contained liquid detergents is maintaining sufficient enzyme activity during storage. It is proof. Enzyme-containing compositions, such as liquid compositions, such as liquid detergents Storage stability can be improved, for example, by adding protease inhibitors to compositions containing proteases. Has made a considerable effort to find ways to improve Was. The discussion by explanation in the remainder of this section is primarily concerned with protease inhibition, The underlying principle is that other types of enzymes such as lipase, amylase, cellulase and Equally suitable for oxidoreductases (eg, peroxidase and oxidase) Various aspects of the present invention can be used to protect proteins by (reversible) protease inhibitors. It is not limited to aspects related to stabilizing ase. For example, boric acid and boronic acids can reverse proteolytic enzymes It is known that it inhibits in vivo. A serine protease by boronic acid, Examination of inhibition of subtilisin is "Molecular & Cellular Bcochemistry"51, Fifth ~ 32 pages (1983). Boronic acids have a great variety of potential as subtilisin inhibitors. A Containing only alkyl groups such as methyl, butyl or 2-cyclohexylethyl groups. Boronic acids are poor inhibitors and methylboronic acid is the poorest inhibitor. You. However, aromatic groups such as phenyl, 4-methoxyphenyl or Is a boronic acid bearing a 3,5-dichlorophenyl group is a very good inhibitor, 5-Dichlorophenylboronic acid is described as being particularly effective. (Keller et al., “Biochem. Biophys. Res. Comm.”176Pp. 401-405, 1991) . Arylboronic acids substituted at the 3-position of the aryl group with respect to boron are Unexpectedly good reversible protease inhibitor, published International Patent Application No. 92/19707 It is also claimed in the detailed text. Thus, for example, "acetamidobenze The latter document states that `` boronic acid '' is a particularly effective inhibitor of proteolytic enzymes. Are listed. When measuring the inhibitory effect of a reversible enzyme inhibitor, the so-called “inhibition constant” (K_i) Is an enzyme Usually used to measure inhibitory activity, K_iIs usually defined as: K_i= [E] • [I] / [EI] In the formula, [E], [I] and [EI] are the enzyme and the inhibitor under the conditions, respectively. Represents the equilibrium concentration (conventionally, molarity) of the agent and the enzyme-inhibitor complex. The latter K_i Is used in the present specification and claims. Therefore a relatively low K_iValue is phase In contrast, they show potent inhibitors. Disclosure of the invention In the preparation and manufacture of a multi-component enzyme-containing composition, enzymes and It is desirable to use a pre-prepared enzyme composition containing a novel (reversible) enzyme inhibitor. Would be better. The pre-prepared enzyme composition has a very high concentration of at least one May contain several enzymes, possibly of the type, Using relatively small or small volumes of pre-prepared enzyme / inhibitor compositions, Or because it will allow for the preparation of multi-component compositions containing large amounts of enzymes Will. In addition, the initial stability of the enzyme during storage of the final multi-component composition should be satisfactory. Presence of the enzyme inhibitor in an incorporated amount in a prepared enzyme / inhibitor composition Only by means of a multi-component composition (eg a detergent composition) Need not further contain a stabilizer (of course, if desired, (Although stabilizers may be incorporated) would clearly be advantageous. Furthermore, in the enzyme / inhibitor composition thus prepared, the inhibitor One would expect that the stability of the enzymes present is necessarily high. Therefore Numerous pre-prepared compositions of this type have significant, or at least acceptable, post-production. Would be expected to be able to be stored for a relatively long time without unavoidable loss of enzyme activity U. Thus, the present invention relates to the use of (i) enzymes in amounts exceeding 40 μM and (ii) A multi-component composition (eg, a detergent composition, eg, a liquid detergent composition) incorporating the composition. An effective amount of a reversible enzyme inhibitor to enhance the storage stability of the enzyme in Comprising a liquid composition. The liquid compositions of the present invention include, for example, primarily aqueous or mainly non-aqueous compositions. [E.g. a high proportion of one or more non-aqueous solvents, but usually Water-miscible liquids, generally organic liquids (eg, alcohols, glycols or Other similar ones)]. The liquid composition of the present invention itself is usually non- Will be a detergent composition. Detergent compositions (eg for laundry cleaning, dishwashing and similar) Apart from, especially in the form of a liquid composition (appropriate in the context of the present invention), Other types of enzyme-containing multi-component compositions include dentures, contact lenses or paved surfaces (such as Cleaning compositions, for example in the slaughterhouse or the food processing industry, for use in the leather industry Composition (eg for depilation and / or defatting of hides), desizing of textiles Of denim fabric to achieve a "stone-washed" appearance Cleaning compositions. Use of the composition for the above purpose is within the scope of the present invention. is there.enzyme Relevant enzyme classification numbers (EC numbers) in the specification and claims are “Biochemical and Recommendations of the Nomenclature Committee of the International Alliance for Molecular Biology (1992) (Recommendations (1992) ) Of the Nomenclature Committee of the International Unon of Biochemistr y and Molecular Biology ”” (Academic Press Inc., 1992). The liquid composition of the present invention contains at least one enzyme. Suitable enzymes are any commercially available Including the enzyme. Particularly suitable enzymes are proteases (ie, peptidases, EC 3.4), amylase (classified as EC 3.2.1), lipase (3.1.1. 3), cellulases (including EC 3.2.1.4) and Oxidoreductases (EC1) such as peroxidase (EC1.11) and Oxidase [an enzyme classified as EC 1.10.3, such as laccase (EC 1.10. 3.2. )] And any mixture thereof. . A mixture of enzymes from the same class (eg, a mixture of different proteases, different lipases, etc.) Compounds). The amount of enzyme in the liquid composition will vary depending on the type of enzyme and the intended use of the liquid composition. right. Generally, any enzymes present are preferably from 0.2 to 50% by weight of the liquid composition. (W / w)% (calculated based on pure enzyme protein), often a liquid composition 0.5 to 25% by weight, for example 1 to 10% by weight, for example 2 to 8% by weight Will exist. Expressed in concentration units, the enzyme present in the liquid composition of the present invention Preferred ranges for about 50 μM to about 20 mM, often 100 μM to 10 mM, such as 500 μM to 5 mM, for example 750 μM to 3 mM (Calculated based on moles of pure enzyme protein).Protease Any protease (protein) suitable for use in the liquid composition Enzyme) can also be used. Suitable proteases are animals, plants or Of microbial origin, in particular of microbial origin, and the amino acids of one of the latter types of enzymes One or more amino acids are substituted, inserted and / or Or has been removed, chemically manufactured or by protein engineering (genetic engineering) And mutants having proteolytic activity. Protease For example, serine peptidase, preferably an alkaline microbial protease. Or a trypsin-like protease. Examples of alkaline proteases include Zupuchi Lysine, especially from Bacillus, such as subtilisin Novo, subtilisi Carlsberg, Subtilisin 309, Subtilisin 147 and Subtilisin 1 68 (described in WO 89/06279). Commercially available Examples of tils subtilisins are Alcalase®, Savinase®, Esperase ( Trademark) and Durazym (TM) products, all Novo Nordisk A / S Available from Many of these protease products, such as Alcalase ™ , Esperase ™ and Savinase ™ are available in liquid form (eg, Savinase ™). (Trademark) 16.0 L, DX type and EX type), Preparation of the protease-containing liquid composition of the present invention (See below). An example of a trypsin-like protease is trypsin (eg, porcine or bovine). And the fusarium (as described in WO 89/06270). Fusarium) protease.amylase Any amylase (starch content) suitable for use in liquid compositions (Enzyme) can also be used. Suitable amylases are of bacterial and fungal origin , As well as the amino acids of one of the latter types of enzymes One or more amino acids are substituted, inserted and / or associated with the acid sequence. Is deleted, chemically manufactured or by protein engineering (genetic engineering) Mutants that exhibit amylolytic activity are included. Amylase For example, Bacillus li-z, described in more detail in GB 1,296,839. For example, α-α obtained from a specific strain of B. licheniformis. Mirase (EC 3.2.1.1). A very suitable α-amylase is Term amyl®, available from Novo Nordisk A / S (particularly liquid As a product).Lipase Any lipase (lipolytic enzyme) suitable for use in liquid compositions Can also be used. Suitable lipases are of bacterial and fungal origin, and the latter One or more amino acids in relation to the amino acid sequence of one enzyme of the type Chemically produced or tampered with acids substituted, inserted and / or deleted Mutants produced by protein engineering (genetic engineering) that show lipolytic activity Include. Very suitable lipases are described in EP 0258068. To cut genes from Humicola lanuginosa Loaned and cloned its gene in Aspergillus oryzae And obtained by the expression in Novo Nordisk A / S Available under the trade name Lipolase ™ (especially as a liquid product).Cellulase Any cellulase (cellulose suitable for use in liquid compositions) Degradation enzyme) can also be used. Suitable cellulases are of bacterial or fungal origin And one or more in relation to the amino acid sequence of one enzyme of the latter type Many amino acids have been substituted, inserted and / or deleted, chemically produced, Or a mutant made by protein engineering (genetic engineering), Includes those that show decomposing activity. Suitable cellulases are described, for example, in U.S. Pat. No. 307, which is a cellulase. A very suitable cellulase is Humicola insolens produced by a strain of Humicola insolens Available from Novo Nordisk A / S under the trade name Celluzyme ™.Peroxidase Not suitable for use in liquid compositions, such as liquid detergent compositions Such peroxidases can also be used. Peroxidas suitable herein The enzymes are of plant, bacterial and fungal origin, as well as the amino acids of one of the latter types of enzymes. One or more amino acids are substituted, inserted and / or associated with the acid sequence. Has been removed, chemically manufactured or by protein engineering (genetic engineering) Includes mutants that have been made and exhibit peroxidase activity. Appropriate Examples of peroxidases are Coprinus [eg Coprinus sinerius (C. ci. nerius) or Coprinus macroritus (C. macrorhizus)] Tils [eg, those derived from strains of B. pumilus, especially A peroxidase described in PCT / DK90 / 00260.Oxidase Is it not suitable for use in liquid compositions, for example liquid detergent compositions? Peroxidase can also be used. Suitable peroxidases herein Related to bacterial and fungal origin, and to the amino acid sequence of one of the latter types of enzymes Has one or more amino acids replaced, inserted and / or deleted, Mutants that are chemically manufactured or made by protein engineering (genetic engineering) And those exhibiting oxidase activity. Examples of suitable oxidases Are Aspergillus, Neurospora [eg, Neurospora N. crassa], Trametes [eg Trametes biloba (T. villosa)] or Myceliophthora (for example, Myceliophthora thermophilia La. (M. thermophila)].Enzyme inhibitors (enzyme stabilizers) The liquid composition of the present invention comprises at least one reversible enzyme inhibitor, usually in a liquid composition. Contains an inhibitor for at least one enzyme present in the enzyme. Therefore, For example, the liquid compositions of the present invention may comprise a first type of enzyme and a reversible inhibitor for that type of enzyme. In addition to the harmful agent, enzymes of the second, third, etc. type (eg one of the above mentioned types of enzymes) Wherein one or more of the enzymes does not have a reversible inhibitor thereof, May be contained. Containing one or more enzymes in the amounts disclosed herein, Instead of containing inhibitors for these enzymes, the liquid composition is then contacted with other types of It is also completely feasible to produce liquid enzyme compositions containing inhibitors for enzymes. It must be mentioned here that it is possible. One example of this is the only yeast A liquid composition comprising lipase as a source and a protease inhibitor, comprising: Thease inhibitors may then be deliberately or inappropriately contacted with a lipase. It will protect the lipase against degradation by thease. The nature and amount of the inhibitor used will depend, inter alia, on the nature and concentration of the enzyme present in the composition. It will depend on the degree and the intended use of the composition. Suitable for use in connection with the various classes / types of enzymes present in the liquid compositions of the present invention. Sharp reversible inhibitors (and their associated K_iValue) for an extensive enumeration H. for Zollner 「Handbook of Enzyme inhibitors （Part Ａ） And B) "Second Edition, (VCH Verlagsgesellschaft mbH, Weinheim, Germany, 199 3 years) You. A more appropriate source is P. Woolley and S.W. B. Petersen (P etersen) "Lipasestheir structure, Biochemistry and Application" (Cam bridge University Press, Cambridge, 1994). Patkar ) And F.R. Brekring Selected examples of the appropriate type of reversible inhibitor are as follows.Protease inhibitor One particularly important class of reversible protease inhibitors is boron Acid (boronic acid) [R'B (OH)_Two] And bolinic acid (R'R''B (OH) Wherein R ′ and R ″ are organic substituents, such as optionally substituted aryl or A heterocyclic substituent), some examples of which are described above. Appropriate for this type Further examples of compounds can be found in WO 92/19707, European Patent Application No. 0478050 and EP 0511456. You can choose from things. Important compounds of this type are described in WO 95/02046, which is the subject of the present application. Was not published on the priority date of And includes compounds of the following general formula: [Wherein, R₁Is an optionally substituted fused aromatic containing 14-18 carbon atoms in the ring An optionally substituted monocyclic ring containing up to 17 carbon atoms in the ring structure or ring or Fused aromatic heterocyclic structures or optionally substituted containing up to 18 carbon atoms in the ring A monocyclic or fused quinoid ring structure, R_TwoIs the expression Wherein X is the same or different and is hydrogen, C₁~ C₆Alkyl, substituted C₁ ~ C₆Alkyl, aryl, substituted aryl, hydroxy, hydroxy derived Body, halogen, amine, alkylated amine, amine derivative, nitro, thiol, Thiol derivative, aldehyde, acid, acid salt, ester, sulfonate or phos O, p and q are the same or different and are each 0, 1 or Is 2), and m and n are the same or different and each is 0 or 1, R_ThreeIs R₁Is the same as or different from₁Choose from or R_ThreeIs a hydroxy group Yes, R₁And R_ThreeAre both optionally substituted monocyclic or bicyclic aromatic ring structures. You. ] In the above context, an optionally substituted ring structure is free to select substituents on the ring structure. Optionally, they are preferably hydrogen, C₁~ C₆Alkyl, substituted C₁~ C₆Alkyl, aryl, substituted aryl, hydroxy, hydroxy Derivative, halogen, amine, alkylated amine, amine derivative, nitro, thio- , Thiol derivatives, aldehydes, acids, acid salts, sulfonates and phosphonates Choose from Boronic acid derivatives and borinic acid derivatives can be prepared by methods known to those skilled in the art, for example Can be manufactured using one of the above. a) hydroborat of unsaturated substances, ie alkenes and alkynes ing) agents such as catechol borane (1,3,2-benzodioxaborole) Or dichloroborane-dimethylsulfide complex: C. Brow n, S. K. Gupta "JACS"97 5249-5255 (1975); C. Brown, N. Rav indran, S.M. U. Kuikarni "J. Org. Chem."45 See page 384 (1980). b) Grignard reagent and either tri-n-butyl borate or trimethyl borate Following reaction with the heel, hydrolysis of the boronic ester thus formed: R . Johnson "JACS"54 4415-4425 (1932); H. Dandegaonher, S.M. P. Ingleshwar `` Journal of Shivasity University ''6 Pages 11-13 (1932) reference. The non-commercially available brominated substituted starting materials are LiAlH_FourTo Following the reduction used, CBr_FourCan be suitably produced in two steps using c) Reaction of organolithium reagent with butyl borate: O. Lauesson ntin, B .; Rocques "CR Acad. Sci. Paris" t. 270 pp. 1608-1610, (1970 May 11). d) The borinic acid derivative can be produced by the above b) method. However In that case, the ratio of Grignard reagent: borate is 2: 1. e) Any nuclear substitution or protection of functional groups is performed using standard methods well known to those skilled in the art. To achieve. More important compounds of this type are described in WO 95/29223 (the present application Was not released on the priority date of And includes compounds having the general formula: (Where R₁, R_Two, R_Three, R_Four, R_Five, R₆And R₇Are the same or different, water Elementary, C₁~ C₆Alkyl, substituted C₁~ C₆Alkyl, aryl, substituted Reel, hydroxy, hydroxy derivative, halogen, amine, alkylated amine , Amine derivatives, nitro, thiol, thiol derivatives, aldehydes, acids, acid salts , Esters, sulfonates, phosphonates. ). Naphthaleneboronic acid derivatives are also well known to those skilled in the art, for example, It can be manufactured using a method using near manufacturing. Grineer reagent is added to magnesium shavings in sodium dry ether By slow dropwise addition of the appropriate naphthalene bromide starting material in liumium dry ether Manufacturing. The reaction is accelerated by the addition of a small amount of iodine crystals. Trimethyl borate or tri-n-butyl borate in sodium dry ether Cool to -70 ° C, keep the organic borate solution at -70 ° C and stir constantly. The Grignard reagent is added dropwise over 2 hours. Warm the reaction mixture to room temperature overnight And then hydrolyzed by the dropwise addition of cold dilute sulfuric acid. Separate the ether layer and separate the aqueous layer Extract with ether. The ether containing fractions are combined and the solvent is removed. Residual The substance is strongly alkaline and any methanol or Butanol is also removed. Cool the alkaline solution and form crystals of the desired boronic acid Is removed by filtration. All products are preferably recrystallized from distilled water. Naphthaleneboronic acid is the direct lithiation of naphthalene and / or Alternatively, it can be produced using either lithiation of bromide. Any nuclear substitution or protection of functional groups can be achieved by standard methods well known to those skilled in the art. You. Among the above types of compounds, certain boronic acids that are important in the context of the present invention are: Is included. That is, benzofuran-2-boronic acid, phenylboronic acid, 4- Bromophenylboronic acid, 4-formylphenylboronic acid, 3-acetamidofur Enylboronic acid, 3,5-dichlorophenylboronic acid, 5-chlorothiophene 2-boronic acid, naphthalene-1-boronic acid, naphthalene-2-boronic acid and 6- Hydroxynaphthalene-2-boronic acid. In addition, important items in the context of the present invention Specific compounds of the type are referred to in the table shown in Example 2 herein (see below). An inhibitor of the boronic or borinic acid type is added to the liquid composition of the invention in the form of the acid itself. (Eg, a suitable water-miscible organic solvent such as monopropylene glycol or Dissolved in other similar substances) or, if appropriate (eg, for solubility reasons). As salts (eg alkali metal salts, eg sodium or potassium salts) ) Introduce or incorporate.Reversible amylase inhibitor A suitable reversible amylase inhibitor acceptable in the context of the present invention. The harmful agents are, for example, of the so-called “acarbose” type (ie Contains an acarviosine moiety and one or more maltose units Pseudo-oligosaccharides]. Especially α-ami Other compounds suitable as inhibitors for the lase are maltose and maltotriose. Is included. Compounds such as methyl-α-glucoside as well as cyclo Amylose, for example cyclohexa and / or cycloheptaamylose, is β- Suitable as a reversible inhibitor for amylase.Reversible cellulase inhibitor Important reversible cellulases accepted in the context of the present invention Inhibitors are 4-thiol-cellooligosaccharides [e.g. Schou et al. `` Journal of Car bohydrate Chemistry "12 743-752, (1993)].Reversible lipase inhibitor Suitable reversible lipase inhibitors in the context of the present invention are described above and / or Or boronic and borinic acids selected from those described below (eg, optionally substituted Phenylboronic acid).Degree of enzyme inhibition The desired degree of inhibition (intensity, magnitude) of the enzyme present in the liquid composition of the invention is In many cases, the composition will depend on the intended purpose. Generally for enzymes The molar ratio of the reversible inhibitor is such that at least one inhibitor molecule is present per active site of the enzyme. Would be selected to. And that, of course, is at least 1: 1 A molar ratio of harmful agent (I) to enzyme (E) would be required. However, for some purpose Lower I: E molar ratios such as about 0.8: 1, about 0.7: 1, about 0.6: 1, or even about 0.5: 1 would be appropriate. However, in the context of the present invention, Using a molar ratio of inhibitor to enzyme of at least 5, for example at least 15 It is desirable. In some cases, the I: E molar ratio is at least 50 or at least 10 Zero or higher molar ratios may be appropriate. The molar ratio of inhibitor to enzyme may vary, inter alia, depending on the composition of the liquid composition of the invention. It is desirable that free (inhibited) be present during actual use of the enzyme-containing composition. (Not) will be selected based on considerations of the percentage of enzyme. But For example, when using a cleaning detergent for laundry in the cleaning industry Is high enough Levels of free enzyme (eg, protease or lipase) are Is typically the water to which the detergent composition is added). It should be clear. In this regard, an important parameter is the inhibition constant for reversible inhibition of the enzyme (above Definition). Thus, for example, the liquid composition of the present invention is in a detergent composition Sometimes expressed in a conventional manner in mol / l (M) for the reversible inhibitor of the enzyme therein. Inhibition constant (K_i) Is often 3 × 10^-8M ≦ K_i≦ 1.2 × 10^-2M, for example 3 × 10^-8M ≦ K_i≦ 1 × 10^-2M would be appropriate. However, regarding detergent enzymes More desirable "windows of inhibition" are often inhibitors associated with a particular enzyme. Is about 3 × 10^-7M ≦ K_i≦ 1 × 10^-3, For example 4.3 × 10^-7M ≦ K_i≤ 4.5 × 10^-FourTo M Would have a corresponding inhibition. Generally, preferred enzyme-containing liquid compositions of the present invention include: (A) the total molar concentration of the reversible enzyme inhibitor, I, present in the composition ([I]_tAnd table Be told) (B) inhibiting the enzyme present in the composition and reversibly inhibited by the inhibitor; Constant (K_i: Expressed in mol / l) of at least 50 ( That is, [I]_t/ K_i≧ 50), for example at least 100, or often low At least 250. [I] in the liquid composition of the present invention_t/ K_iA practical upper limit on the ratio is usually About 10000 (ie 10^Four)Will. For many purposes, [I]_t/ K_iTo ratio Values between 250 and 5000, often between 250 and 2500 . [I]_t/ K_iThe value of the ratio can be regarded as a measure of the "inhibition ability" of the liquid composition of the present invention. right. High value-and thus high "inhibition capacity" Is, for example, in a liquid composition, Inhibitors should be incorporated, or relatively high concentrations of less inhibitory inhibitors should be used. Would have been achieved by With respect to the inhibited enzyme E, in the presence of a relatively large molar excess of the inhibitor Will usually be in free form, ie, not bound to the enzyme. Free (bound (Not performed) The concentration of the inhibitor [I] (K_iIn connection with, see below) So [I]_t/ K_iThe ratio is approximately [I] under such conditions._t/ K_iEqual to the ratio That is, The liquid composition of the present invention comprising an enzyme and a reversible enzyme inhibitor can be prepared by any suitable method (eg, freezing). Can be dried here by drying or spray drying) . The dried enzyme / inhibitor product is then ground (eg, by milling) and Aqueous liquid media such as nonionic surfactants [eg Softanol ™ from BP )] To form a slurry product.detergent For detergent compositions, a typical goal is to select the selected enzymes (in the detergent composition itself). At least 50% inhibition of the protease and at least the total amount of the enzyme Would also achieve an amount of free enzyme in the wash medium equal to 50%. Detergent compositions incorporating the liquid compositions of the present invention, apart from enzymes and inhibitors, contain It contains a surfactant and will usually be a liquid detergent composition. Detergent compositions, for example, It may be a detergent composition for the garment industry or a dishwashing detergent composition. Liquid detergent compositions are aqueous, for example, typically up to 70% water and 0-30% organic. Contains solvent or is substantially non-aqueous. The detergent composition comprises one or more surfactants, each of which Each may be anionic, non-ionic, cationic or amphoteric (zwitter). Detergent Usually 0 to 50% of anionic surfactant such as linear alkylbenzene sulfone Acid salt (LAS), alpha-olefin sulfonate (AOS), alkyl sulfate (fatty acid Alcohol sulfate (AS), alcohol ethoxy sulfate (AEOS or AES), secondary Alkane sulfonate (SAS), alpha sulfo fatty acid methyl ester, alkyl Or alkenyl succinic acid or soap. 0-40% non-ionic Surfactants such as alcohol ethoxylates (AEO or AE), alcohol pro Poxified products, carboxylated alcohol ethoxylated products, nonylphenol ethoxy Silicide, alkyl polyglycoside, alkyl dimethylamine oxide, ethoxy Fatty acid monoethanolamide, fatty acid monoethanolamide or polyhydro Xyalkyl fatty acid amides (for example, as described in WO 92/06154) As described). Normally detergents contain 1-65% detergent builder, but some dishwashing detergents have 90 %, Detergent builder or complexing agent such as zeolite, diphosphate, 3% Phosphate, phosphonate, citrate, nitrilotriacetic acid (NTA), ethylenedia Mintetraacetic acid (EDTA), diethylenetriaminepentaacetic acid (DTMPA), alkyl Or alkenyl succinic acid, soluble silicate or layered silicate (eg It may contain SKS-6) from Kist. Detergent builders can be subdivided into phosphorus-containing and non-phosphorus-containing types. Phosphorus-containing inorganic alka Examples of detergent builders are water-soluble salts, especially alkali metal pyrophosphates, orthorin Acid salts, polyphosphates and phosphonates. Examples of non-phosphorus-containing inorganic builders Are water-soluble alkali metal carboxylates, borates and silicates, and And various types of water-insoluble, crystalline or amorphous aluminosilicates (zeolites) Is the best-known example). Examples of suitable organic builders are succinate, malonate, fatty acid malonate, fats Fatty acid sulfonate, carboxymethoxysuccinate, polyacetate, carboxylate Of polycarboxylates, aminopolycarboxylates and polyacetylcarboxylates Includes alkali metal, ammonium or substituted ammonium salts. Detergent is washing It may not increase the effect, ie be essentially free of detergent builders. The detergent can include one or more polymers. For example, Cal Boxymethylcellulose (CMC), poly (vinylpyrrolidone) (PVP), polyethylene Glycol (PEG), poly (vinyl alcohol) (PVA), polycarboxylic acid, For example, polyacrylic acid, polymaleic acid, maleic acid / acrylic acid copolymer and Lauryl methacrylate / acrylic acid copolymer. The detergent composition may contain a bleach of the chlorine / bromine or oxygen type. The bleach may be coated or encapsulated. Inorganic chlorine / bromine type Examples of bleaching agents include lithium and sodium salts of hypochlorous or hypobromite. Or calcium salt, and chlorinated trisodium phosphate. H is bleaching_TwoO_TwoSources, such as perborates or percarbonates, which Is a peracid-generating bleach activator such as tetraacetylethylenediamine (TAED) Alternatively, it may be combined with nonanoyloxybenzenesulfonate (NOBS). Examples of organochlorine / bromine type bleaches are heterocyclic N-bromine and N-chlorimide, such as Trichloroisocyanuric acid, tribromoisocyanuric acid and dichloroisocyanuric acid And their salts with luic acid and water solubilizing cations, such as potassium and sodium is there. Hydantoin compounds are also suitable. Bleaching systems include, for example, amides, imides Or sulfo A peroxy acid in the form of an acid can also be included. In dishwashing detergents, oxygen bleaches are, for example, preferably with bleach precursors. Preferably in the form of an inorganic persalt together or as a peroxyacid compound No. A representative example of a suitable peroxy bleaching compound is tetrahydric alkali metal perborate. Alkali metal salts of percarbonate, persilicic acid and perphosphoric acid, both hydrates and monohydrates . The preferred activator material is TAED or NOBS. As described above, the enzyme of the detergent composition of the present invention is combined with the liquid enzyme / inhibitor composition of the present invention. It is incorporated into the detergent composition in the form of a product. If desired, more conventional enzyme stabilizers such as polyols, for example propylene Glycol or glycerol, sugar or sugar alcohol, lactic acid, Incorporation of boric acid or boric acid derivatives such as aromatic borates (Eg, International Patent Application Publication No. WO 92/19709 and International Patent Application Publication No. 92/19708). The detergent may comprise other conventional detergent ingredients, such as clay, deflocculant material, foam booster / foam suppressor. Agents (foam inhibitors in dishwashing detergents), foam inhibitors (of soap), corrosion inhibitors, soil Suspending agent, soil reprecipitation inhibitor, dye, dehydrating agent, bactericide, optical brightener or fragrance And a fabric conditioner containing the same. pH (measured in aqueous solution at working concentration) is usually neutral or alkaline, eg It is in the range of 7-11. Particular forms of detergent compositions for the cleaning industry within the scope of the present invention include those described below. Include. 1) Aqueous liquid detergent composition comprising: 2) Aqueous structured liquid detergent composition comprising: 3) a liquid detergent composition comprising: 4) Liquid detergent composition comprising: 5) All or a part of the linear alkylbenzene sulfonic acid is (C₁₂~ C₁₈) Al Detergent formulations according to 1) to 4), which have been replaced by kill sulphates. 6) As either an additional ingredient or a substitute for an already specified bleaching system Detergent formulations according to 1) to 5), containing a stabilized or encapsulated peracid. 7) Liquid nonionic surfactants, such as linear alkoxylated primary alcohols, As a non-aqueous detergent liquid containing ruder (eg phosphate), enzymes and alkalis The formulated detergent composition. Dishwashing and other multi-component enzyme-containing compositions Suitable types of formulations of this type include: 1) A liquid dishwashing composition having a cleaning surfactant system comprising: 2) Non-aqueous liquid automatic dishwashing composition comprising: 3) Non-aqueous liquid dishwashing composition comprising: 4) A thixotropic liquid automatic dishwashing composition comprising: 5) Liquid automatic dishwashing composition comprising: 6) Liquid automatic dishwasher set containing protected bleach particles comprising: Adult 7) The automatic dishwasher according to 1) or 5), wherein the perborate is replaced by percarbonate. Composition. 8) The composition for an automatic dishwasher according to 1), further comprising a manganese catalyst. Manganese catalysts are, for example, "Nature"369 637-639 (1994 Year), even one of the compounds described in "Manganese catalyst effective for low-temperature bleaching" Good. The "enzyme" content in the above formulations includes the content of enzyme inhibitors present. obtain. Where appropriate, particular formulations included in one of the above listed types may be included in the formulation. Although not specifically mentioned above for the type of formulation, for example, in the particular formulation Of the inhibitor present in the liquid enzyme / inhibitor composition of the present invention, incorporated into An organic solvent of the type that served as an agent may be included. The liquid enzyme / inhibitor composition of the present invention comprises enzyme concentrates conventionally used in detergents. A degree can be incorporated into the detergent composition. At present, the present invention For detergent compositions, the liquid enzyme / inhibitor compositions of the present invention include, for example, / For certain enzymes present in the inhibitor composition, 0.00001- Combine in an amount equivalent to the amount of enzyme in the range of 1 mg (calculated as pure enzyme protein). You can enter.Stabilizer testing The inhibitory effect of the inhibitor was determined for the protease / protease inhibitor by This is illustrated here by tests. It can be tested in various ways. a)Storage stability test in liquid detergent Liquid detergent formulation with liquid enzyme / inhibitor composition stored under well-defined conditions Add to things. Each enzyme activity was measured as a function of time (eg, after 1, 3 and 7 days). Set. Propose a reaction mechanism to calculate inhibition efficiency from storage stability data . The next reaction contains protease (P), lipase (L) and inhibitor (I) A relatively simple but still plausible mechanism for liquid detergents Is shown. I) Autolysis of protease: P + P → D_P+ P II) Protease denaturation: P → D_P III) Protease inhibition: IV) Digestion of protease of inhibited enzyme: P + Pl → P + D_P+ I V) Denaturation of the inhibited enzyme: Pl → D_P+ I VI) Protease inhibition of lipase: P + L → P + D_L VII) Denaturation of lipase: L → D_L In the above, D_PAnd D_LIs a modified (ie, inactive) protease and Pase. From these reactions, three differential equations representing the inactivation of P, L and Pl were derived. put out. The reaction rate constant is determined by the parameter evaluation method (Gau with Levenberg correction). (New-Newton). Storage stability The data shows the concentration of (P + Pl) and L as a function of time. Reaction III is much faster than the other reactions and assumes equilibrium in the calculations. Exclude Reaction IV to reduce the number of parameters Thus, the stability of the inhibited enzyme is indicated by a unique reaction constant (from equation V). The presence of large amounts of higher inhibitory molecules (with respect to protease molecules) The concentration can be assumed to be constant, as a reasonable approximation. Certain values of the rate constant are somewhat sensitive to small changes in the data. However, the sensitivity is significantly higher by showing the results related to the value for boric acid. descend. Boric acid (a closely related or equivalent substance, such as an alkali borate Metal salts (eg, borax) and boron oxides] It is well-known to use it (see, for example, European Patent Application Publication). Low inhibitory strength and generally rather poor solubility of the above substances (see Examples further illustrate boric acid: see below). Making them unsuitable for use in the context of the present invention [present in the liquid composition of the present invention. The amount of the inhibitor and / or the amount thereof may be such that the liquid composition is a component of a multi-component composition. Should still be such as to result in good enzyme stabilization. You. ]. Thus, compounds such as boric acid, alkali metal borates (eg, Borax) and boron oxide are generally excluded as inhibitors in the context of the present invention. I will get it. "Improvement factor" can be defined as follows. Therefore, the IF thus defined_i Is the inhibitory effect shown for boric acid. Specifies the degree of the rate. b)Determination of the K _i : Inhibition constant K_iCan be determined by using standard methods [Keller et al., “Biochem. Biophys. Res. Comm.”17 6 Pp. 401-405 (1991); Bieth `` Bayer-Symposium '' Proteinase lnhibi tors ”, pp. 463-469 (Springer-Verlag, 1974) and Lone Kierstein Hans en "Selection using protease activity, molecular weight, kinetic parameters and inhibition kinetics" Determination of Specific Activity of Selected Detergent Proteases ities of Selected Detergent Proteases using Protease Activity, Molecular Weights, Kinetic Parameters) ”doctoral dissertation (Novo Nordisk A / S and Copenhagen University, 1991). ] If desired, non-enzymatic components of the detergent composition ( The determination may be performed in the presence of a surfactant (such as a surfactant). K for enzyme inhibition_iConditions appropriate for determining the value generally include the appropriate pH. A buffer system that does not react with or react with the enzyme or enzyme inhibitor. Would be achieved by using Suitable for many enzyme / inhibitor reactions Suitable systems are, for example, at a mild alkaline pH, for example pH 8.6, at room temperature (typically 25 C) glycyl-glycine buffer.Experimental part The present invention is further described and embodied in the following examples, which are not to be construed in any way. It does not limit the scope of the invention sought. Example 1 The following procedure describes an appropriate approach to the synthesis of many types of boronic and borinic acids. It is clear.Preparation of thiophene-3-boronic acid 3-Bromothiophene (0.043 mol) in sodium dried ether (100 ml) Cooled to -60 ° C. Butyllithium (1M, 30 ml) was added immediately. Then mix The mixture was stirred for 3 minutes, then borated in sodium dried ether (25 ml). N-butyl (0.043 mol ) Or trimethyl borate (0.043 mol) was added. The mixture was stirred for 4 hours, It was left until it became. Thereafter, the reaction mixture was treated with hydrochloric acid (1M), and the ether layer was separated. separated. The aqueous layer was extracted with ether (2x25ml). Ether layer together And extracted with sodium hydroxide (1M). Next, add the alkaline solution to hydrochloric acid (10%), thus precipitating the desired boronic acid. That rag The acid was isolated and then recrystallized from water / ethanol and dried in air. C_FourH_FiveBO_TwoS, mp 163-164 ° C.Production of diphenyl borinic acid : This was produced using the above method. Grignard reagent Made from bromobenzene and magnesium shavings. However, one mole 2 moles of Grignard reagent was used with respect to tri-n-butyl borate. so The resulting borinic acid is isolated by reaction with ethanolamine, and thus Phenylborinic acid, ethanolamine complex ((C₆H_Five)_TwoBO ・ CH_TwoCH_TwoNH_Two) I got it. Melting point 192-194 ° CProduction of 4-formylphenyl-boronic acid : This compound is "Chem. Ber."one two Three 18th It can be produced as described on pages 41 to 1843 (1990). 4-Brombe Tetrahydrofuran React in a run, then add tributyl borate dissolved in ether and mix Mix sulfuric acid with the mixture. Example 2Determination of the K _i Inhibition constant K for protease Savinase ™_iThe standard method under the following conditions Method.Substrate : Succinyl-alanine-alanine-proline-phenylalanine-p-ni Toloanilide = SAAPFpNA (Sigma to Catalog No. S-7388).Buffer : 0.1 M glycyl-glycine pH 8.6; 1.5 ml per liter of 15% Brij (trademark) 25 ° C (glycyl-glycine from Sigma, catalog number G-3028).Enzyme concentration during analysis : Savinase ™: 1 x 10^-Ten~ 3 × 10^-TenM The initial rate of substrate hydrolysis was determined using a Cobas automatic spectrophotometer in the range of 0.01 to 2 mM. Measurements were taken at the 9 substrate concentrations in the box. Dynamic parameter V_maxAnd K_mTo ENZFITTER (non (Linear regression data analysis program). K_catTo the formula V_max= K_cat× [E_o]. Active enzyme concentration [E_oA protein that binds very strongly Active site titration with a protease inhibitor. Inhibition constant K_iAn inhibitor K as a function of the concentration of_m/ K_catWas calculated from the plot. Inhibitors are 100% pure Assuming that there was, the molarity was determined from the weighed amount and the molecular weight. Inhibition constant K for a series of boronic enzyme stabilizers (inhibitors) tested_iResult In the table below are the ratios [I] for some of these inhibitors._t/ K_i It is shown with the value of Example 3Storage stability test of liquid detergent In the following, KNPU (Kilo Novo Protea se Units ") and KLU (" Kilo Lipase Units ") for the Lipolase ™ preparation. To mention. 1 KNPU is 2.53 mg (about 9.4 x 10^-FiveMmol) of pure enzyme protein Equivalent to. For measurement of Savinase ™ activity, refer to brochure, AF220 / 1-G B (entered from Novos Nordisk A / S, Bagsbad, Denmark upon request) Can be mentioned). One lipase unit (LU) can be obtained under standard conditions (30.0 ° C, pH 7.0, Beer gum, with tributyrin as substrate) 1 μmol / min can be titrated It is defined as the amount of enzyme that releases butyric acid. This analysis method is described in more detail Brochure (AF95 / 5) is requested by Novo Nordisk A / S Available from Bagsbad, Indonesia. 1 KLU is 0.2 mg (about 6.7 x 10^-6Millimeter Mol) of the pure enzyme protein. Under the conditions summarized below, various protease inhibitors may be And tested in a storage stability (enzyme activity retention) test in a liquid detergent. Each inhibitor A 4 w / w% solution of monopropylene glycol (MPG) (other than boric acid) was prepared. . Boric acid is poorly soluble in the medium and therefore has a liquid enzyme / inhibitor composition Dissolved in the final detergent formulation (rather than 1% w / w boric acid concentration) Indicated).First test series : For the first test series, equal parts by weight of inhibitor solution and Savinase ™ 16.0 L, EX type (liquid protease preparation containing 16 KNPU protease per gram, Novo Nordisk A / S, Bagsbad, Denmark) Savinase ™ 8 L EX containing 2 w / w% inhibitor was obtained. 1w / each w% of the above Savinase ™ / inhibitor preparation, 98% w / w of “detergent base 1” ( See below) and 1 w / w% Lipolase ™ 100 L, EX type (100 KLU / g) Liquid lipase preparation containing lipase, Novo Nordisk A / S, Bagus (Bird, Denmark) The storage stability results for detergent compositions containing It was as follows. Residual Lipolase ™ activity% (store at 30 ° C) Residual Savinase ™ activity% (stored at 30 ° C for 7 days) The above results are particularly indicative of the activity of Lipolase ™ and Savinase ™ in detergent compositions. Indicates that the retention rate of the compound is significantly improved by the presence of the inhibitor.Second test series : For the second series of tests, Savinase ™, 4% w / w inhibitor in MPG And pure MPG at a weight ratio of 50: 37.5: 12.5, respectively, and 1.5 w / w% each. Savinase ™ 8 L EX preparation containing the following inhibitors: 1w / w% each Of the above Savinase ™ / inhibitor preparation, 98% w / w of “detergent base II” (see below) See) and 1 Storage for detergent compositions containing w / w% Lipolase ™ 100 L, EX type The results of storage stability were as follows. Residual Lipolase ™ activity% (store at 30 ° C) Third test series: Savinase ™ 8 L EX preparations containing 1.5 w / w% inhibitor each Prepared in the same manner as in the second test series. Each 1w / w% of the above Savinase Mark) / inhibitor preparation, 98% w / w "inactivated" OMO ™ Micro (see below) And 1% w / w% Lipolase ™ 100L, EX-type detergent composition The results of storage stability were as follows. Residual Lipolase ™ activity% (stored at 35 ° C) 4th test series: Using a storage temperature of 30 ° C, passivated OMO ™ Micro to “Detergent Base III” (see below). Essentially the same as the third series above, except that The same. Residual Lipolase ™ activity% (store at 30 ° C) The later results show the retention of Lipolase ™ activity, especially in various detergent compositions. The rates are markedly improved by the presence of the inhibitor.Composition of detergent base I (US type) : Composition of Detergent Base II: Composition of detergent base III: OMO ™ Micro is a retail product purchased from a Danish supermarket. there were. Enzyme contents in it are inactivated by microwave treatment (85 ° C, 5 minutes) Sexualized. Example 4Examples of liquid enzyme / inhibitor compositions Some examples of liquid enzyme / inhibitor compositions of the invention are as follows (all Was a solution with a satisfactory appearance): 1) 0.1 g of 4-bromophenylboronic acid + 10 g of Savinase 16.0 L, EX type: The molar ratio of inhibitor: enzyme (I: E) in this composition is about 33. 2) 0.2 g of 3,5-dichlorophenylboronic acid + 40 g of Savinase 16.0 L, Form EX: The composition has an I: E molar ratio of about 17. 3) 0.1 g of 5-chlorothiophene-2-boronic acid + 10 g of Savinase 16.0 L , EX type: the composition has an I: E molar ratio of about 40. 4) 0.1 g of phenylboronic acid + 10 g of Savinase 16.0 L, EX type: this composition Has an I: E molar ratio of about 54. 5) 0.2 g of phenylboronic acid + 10 g of Savinase 16.0 L, EX type: this composition Has an I: E molar ratio of about 108.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG , CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, SZ, U G), UA (AZ, BY, KZ, RU, TJ, TM), A L, AM, AT, AU, AZ, BB, BG, BR, BY , CA, CH, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, IS, JP, KE, KG, K P, KR, KZ, LK, LR, LS, LT, LU, LV , MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, S K, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ , VN

Claims

[Claims] 1. A liquid composition comprising: (i) an amount of the enzyme in excess of 40 μM; and (ii) an amount effective to enhance the storage stability of the enzyme in a multi-component composition into which the liquid composition is subsequently incorporated. The composition comprising a reversible inhibitor of the enzyme. 2. The composition of claim 1 wherein said enzyme is present in an amount of 500 μM to 50 mM. 3. A composition according to claim 1 or 2, wherein the molar ratio of the inhibitor to the enzyme is at least 5. 4. The composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the [I] _t / _Ki ratio (as defined herein) is at least 50. 5. [I] _t / K _i ratio composition according to claim 4, wherein in the range of 250 to 5000. 6. A composition according to any one of the preceding claims, wherein said enzyme is selected from the group consisting of proteases, amylases, cellulases, lipases and oxidoreductases. 7. 3. A composition according to any preceding claim, wherein the enzyme is a protease. 8. The composition according to claim 7, wherein said inhibitor is selected from boronic acid, borinic acid and salts thereof. 9. A method for producing a detergent composition comprising an enzyme and an enzyme inhibitor, wherein the liquid composition according to any one of claims 1 to 9 is combined with the remaining components of the detergent composition. Ten. 10. The method according to claim 9, wherein the detergent composition is a liquid composition. 11． A detergent composition produced by the method according to claim 9 or 10. 12． Use of a liquid composition according to any of claims 1 to 8 in the manufacture of a detergent composition for laundry or dishwashing in the cleaning industry. 13. 13. Use according to claim 12, for the manufacture of a liquid detergent composition.