【発明の詳細な説明】
霊長類供与体から霊長類受容体への造血細胞の移植発明の分野
本発明は一般に移植の分野に関し、さらに詳しくは１つの種霊長類の供与体（
donor）から他の種の霊長類の受容体（recipient）への造血細胞移植に関する。
本発明はまた、異なる種の別の霊長類の異種造血系（xenogeneic hematopoietic
systems）が安定に移植されている非ヒトキメラ霊長類に関する。
本発明はまた、前記方法と非ヒト霊長類の種々の利用に関する。先行技術
下記リストの文献は、本発明の先行技術の現状を理解するために関係あるもの
であるが、ここに定義した本発明の特許性に関して関係のあるものではない。
本発明で引用される先行技術の文献は、以下のものである：
１．Gale，R.P．and Reisner，Y．(1986)、移植片拒絶と移植片対宿主反応病；
鏡像、Lancet i，1468。
２．Reisner，Y.，Kapoor，N.，Good，R.A．and O'Reilly，R.J．(1984)、レク
チン分離移植片を用いるマウス、サルおよびヒトにおける同種異系骨髄移植。To
lerance in Bone Marrow and Organ Transplantation（Slavin，S.編）、293-30
8頁中。
３．Reisner，Y．(1990)、同種異系骨髄移植のためのマウスモデルにおけるＴ細
胞欠乏骨髄の移植。Bone Marrow Transplantation（Champlin，R.編）、9-25頁
中、クルワーアカデミック出版（Kluwer Academic Publishers）。
４．O'Reilly，R.J.，Keever，C.A.，Smell，T.N．and Brochstein，J．(1989)
、重症複合免疫不全症の治療のためのＨＬＡ非同−Ｔ細胞欠乏骨髄移植の利用、
Immunodefic．Ref．1，273-309。
５．O'Reilly，R.J.，Collins，N.H.，Keman，N.，Brochstein，J.，Dinsmore，
R.，Kilpatrick，D.，Siena，S.，Keever，C.，Shank，B.，Wolf，L.，Dupont，
B．and Reisner，Y．(1985)、大豆レクチン凝集とＥロゼット欠乏によるＴ細胞
の欠乏した骨髄の移植：白血病性移植受容体の主要組織適合遺伝子複合体関連移
植片拒絶、Transplant．Proc.，17:455-459。
６．Vallera，D.A．and Blazar，B.R．(1989)、移植片対宿主反応病（ＧＶＨＤ
）予防のためのＴ細胞欠乏：マウスとヒトにおける移植に関する展望、Transpla
nt atlon，47:751-760。
７．Van-Bekkum，D.W．and Lowenberg，B．(1985)、骨髄移植：生物学的機序と
臨床の実際、Marcel Dekker，ニューヨーク。
８．Lapidot，T.，Terenzi，A.，Singer，T.S.，Salomon，O．and Reisner，Y．
(1989)、骨髄同種移植片のマウス受容体における供与体型キメラのジメチルミレ
ラン（dimethyl myleran）による増強、Blood，73:2005。
９．ヨーロッパ特許出願第438053号（1991）。
１０．Andrews，R.G.，Bryant，E.M.，Bartelmez，S.H.，Muirhead，D.Y.，Knit
ter，G.H.，Bensinger，W.，Strong，D.M.，and Bernstein，I.D.，(1992)、Ｔ
リンパ球およびＢリンパ球が欠如したＣＤ３４+骨髄細胞は、放射線照射処理し
た同種異系ヒヒの安定なリンパ球生成および骨髄造血を再構成する、Blood，7:1
693-1701。
１１．Reisner，Y.，Friedrich，W．and Fabian，I．(1986)、移植のためのＥロ
ゼット欠損骨髄調製の短縮法、Transplantation，42:312-315。
１２．Sheridan，W.P.，Begley，C.G.，Juttner，C.A.，Szer，J.，To，L.B.，M
aher，D.，McGrath，K.M.，Morstyn，G．and Fox，R.M．(1992)、高用量の化学
療法後の血小板回復に及ぼす、フィルグラスチム（filgrastim）（Ｇ−ＣＳＦ）
に動員される末梢血前駆細胞の作用、Lancet i，640-644。
本文の以下の部分で前記文献は、上記リストの番号により示す。発明の背景
骨髄移植（ＢＭＴ）は種々の臨床的状況において有望な治療法であるが、通常
移植片拒絶および移植片対宿主反応病（ＧＶＨＤ）1などの免疫関連合併症によ
り妨害される。ＧＶＨＤはＴ細胞欠損骨髄を用いることにより低下させることが
でき、実際、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）3-4の小児の治療に、不整合のＴ
細胞欠乏骨髄が有効に利用されている。このような移植を受けたＳＣＩＤ患者で
は、宿主に対して寛容な供与体型Ｔ細胞が生成され、従ってＧＶＨＤが低下する
。ＳＣＩＤ患者の治療の成功により、この治療法が、型の一致する兄弟供与体の
い
ない白血病患者や型は一致するがＧＶＨＤの危険性が高い白血病患者にも拡大さ
れている。しかし、白血病患者では移植片拒絶または移植不全および白血病の再
発の率が高いため、うまくいっていない。ＨＬＡが同一のＴ細胞欠損骨髄の受容
体は、移植片拒絶の率は約１０〜１５％であり、ＨＬＡが一致しないＴ細胞欠損
骨髄の受容体では拒絶率は約５０％である5。
異なる動物モデルで多くの骨髄同種移植片拒絶が報告されている3、6、7。マウ
スでは骨髄摂取量を増加させることにより、このような拒絶は避けることができ
る。この摂取量の増加により、長期に免疫学的に活性の高いキメラを高率に産生
することが可能になった3。
骨髄の摂取量を増加させるために当該分野で示唆されていることの１つは、Ｈ
ＬＡの一致しない死体の凍結骨髄の使用であった8。さらに移植前にホルモン（
例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）でインビトロ処理して供与体の幹細胞の数を増加させる
ことが示唆された3。
ＥＰ−４３８，０５３号9は、ある哺乳動物から別の哺乳動物への造血系統の
移植を開示している。このヨーロッパ特許出願では、非ヒト哺乳動物Ｍ１がその
造血細胞を実質的に抑制または破壊するように処理され、次に少なくとも２つの
供給源からの造血細胞を移植される。その１つは、Ｍ１以外の種の哺乳動物Ｍ３
（好ましくはヒト）由来の細胞であり、これらの供給源の第２は、免疫不全症（
例えば、ＳＣＩＤ）を有するＭ３以外の種の哺乳動物Ｍ２由来の造血細胞である
。その結果、長期間安定な異種造血細胞を有するキメラ哺乳動物Ｍ４が得られる
。前記ヨーロッパ特許出願に開示された特定の好適な哺乳動物は、マウスである
。
１匹のヒヒの造血ＣＤ３４+細胞の、混合リンパ球培養（ＭＬＣ）非反応性ヒ
ヒへの移植も報告された10。
用語
以下は、以下の説明において時々使用されるいくつかの用語の意味を示す。
「異種移植」は、１つの種の組織または臓器を、異なる種へ移植することを意味
する。
「異種移植片」とは、移植された組織または臓器を示す。
「異種移植された霊長類」とは、異種移植片の受容体である霊長類を意味する。
「ヒト−霊長類造血細胞異種移植」とは、非ヒト霊長類受容体へのヒト造血細胞
の移植を意味する。
「霊長類−ヒト造血細胞異種移植」とは、ヒト受容体への非ヒト霊長類供与体の
造血細胞の異種移植を意味する。このような異種移植の造血細胞は、正常な霊長
類供与体由来でも、またはヒト−霊長類造血異種移植片由来のヒト造血細胞でも
よい。
本明細書において使用される他の科学用語は、当該分野で一般に受け入れられ
ている意味を有する。本発明の一般的説明
本発明の１つの目的は、１つの霊長類の造血系を異なる種の別の霊長類由来の
造血系で置換する方法を提供することである。
本発明のさらなる目的は、異なる種の別の霊長類（好ましくはヒト）の造血系
でその造血系が置換されている、異種移植された非ヒト霊長類を提供することで
ある。
本発明のさらなる目的は、霊長類（特にヒト）の造血系の種々の疾患または障
害の治療のための移植治療法を与えることである。
本発明のさらなる目的は、異なる種の霊長類間（例えば、非ヒト霊長類供与体
とヒト受容体の間）の非造血細胞または臓器の新規の異種移植法を提供すること
である。
本発明のさらなる目的は、造血系のまたはこれに関連した種々のヒトの疾患の
病理を研究するための、並びにそのような疾患の治療法を開発するための霊長類
モデルを提供することである。
本発明のさらなる目的は、ヒト造血細胞の供給を得るための方法を提供するこ
とである。
本発明のさらなる目的は、ヒトモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
並びに特定の細胞毒性Ｔ細胞の新規の調製法を提供することである。
本発明は、ＧＶＨＤ以外に霊長類の造血細胞の異種移植が失敗する大きな原因
は、受容体霊長類が通常、ある一定期間後に、異種移植された骨髄細胞より優勢
になるある幹細胞を有し、これが最終的に移植片を拒絶するという理解に基づく
。受容体霊長類中のすべての造血系統を破壊するための処理後でも、幹細胞のあ
るものがそのような処理から逃げる場合に、このことが言える。
従って本発明において、霊長類でこの欠点を克服し、長期間安定な造血細胞の
異種移植片を得るためには、受容体霊長類を供与体の造血系細胞調製物で、幹細
胞の総摂取量を受容体中に残存する幹細胞より大過剰にして異種移植すべきであ
ると認識される。
さらに本発明において、造血系に関連した種々の疾患または障害の病理を研究
するための並びにそのような疾患の治療法を開発するためのきわめて有用なモデ
ルを開発するために、ヒト−霊長類造血系異種移植が使用できると認識される。
さらに、得られる異種移植された霊長類は、種々のヒトの疾患または障害の治療
のための種々の治療薬の産生の手段になると認識される。これに対して、霊長類
−ヒト造血細胞異種移植は、造血系に関連した種々のヒトの疾患または障害の治
療のための新規の移植治療法を与えることが、本発明において認識される。
本発明は、霊長類Ｍ１の造血系を異なる種の霊長類Ｍ２の造血系で置換するた
めの方法を提供し、該方法は、
（ａ）Ｍ１霊長類を処理して分裂している造血細胞のほとんどを破壊し；そして
（ｂ）Ｍ２霊長類からの造血細胞調製物を、処理したＭ１霊長類に接種する（こ
こで、造血細胞調製物は幹細胞で増強されており、調製物中の幹細胞は、処理後
に残存しているＭ１霊長類の幹細胞に対して大過剰量である）ことからなり、こ
うして、Ｍ２霊長類由来の造血系を含有する安定な霊長類異種移植片Ｍ３が得ら
れる。
接種される幹細胞の量は、典型的には５×１０3〜２×１０9細胞/kg 体重であ
る。
前記方法の具体例は、一方ではヒト−霊長類造血細胞異種移植で、他方では霊
長類−ヒト造血細胞異種移植に関する。
本発明はまた、異種移植された非ヒト霊長類Ｍ３を提供し、この方法は、
（ｉ）これは、その造血系が基本的に破壊されている非ヒト霊長類Ｍ１から得ら
れ、そして
（ii）これは、すべてＭ１とは異なる種の霊長類Ｍ２から得られる再構成された
造血系を含んでなる、ことを特徴とする。
霊長類Ｍ３が調製される好適な霊長類Ｍ１は、サルである。
本発明はさらに、ヒト造血細胞の供給を得るための方法を提供し、
（ａ）非ヒト霊長類Ｍ１を処理して分裂している造血細胞のほとんどを破壊し；
（ｂ）幹細胞を増強した造血細胞調製物（ここで、造血細胞調製物中の幹細胞の
量は、処理後に残存しているＭ１霊長類の幹細胞に対して大過剰量である）を、
処理したＭ１霊長類に接種し、
（ｃ）異種移植された非ヒト霊長類Ｍ３を得て、そして
（ｄ）ヒト由来の造血系が出現するまで霊長類Ｍ３を生育させることからなる、
こうして、安定なヒト由来の造血系を有する異種移植された非ヒト霊長類Ｍ３が
得られ、ここからヒト造血細胞を採取することができる。
また本発明は、前記方法により得られる造血細胞を提供される。
別の面で本発明は、異種移植された霊長類Ｍ３を免疫し、次にそこから抗原に
対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を調製することからなる、
目的の抗原に対するヒト抗体を得る方法を提供する。ポリクローナル抗体は、こ
のＭ３霊長類から血清試料を採取し、そこから抗−該抗原−抗血清を得ることに
より得られる。この抗原に対するモノクローナル抗体は、Ｂ細胞を免疫し、この
抗原に対する抗体を分泌するものを選択することにより得られる。
別の面において本発明は、病原性細胞または組織に対して反応性のヒト細胞毒
性Ｔ細胞を得る方法を提供する。本発明において、ヒト−霊長類造血細胞異種移
植された霊長類を、細胞毒性Ｔ細胞免疫反応の出現を誘発することができる病原
性細胞もしくは組織またはこれらの成分により免疫し、次にこの霊長類から細胞
毒性Ｔ細胞を回収し、該細胞または組織に対して反応性である細胞毒性Ｔ細胞を
選択する。そのような細胞または組織の例には、ウイルス感染細胞、癌細胞、真
核または原核病原性微生物（原生動物、細菌、マイクロプラズマ）などがある。
本発明はさらに、治療上有効量の前記抗体または細胞毒性Ｔ細胞を含んでなる
治療用製剤を提供する。本発明はまた、治療の必要な個体に、抗体または細胞毒
性Ｔ細胞を投与することからなる、個体の治療法を提供する。
本発明はまた別の面で、霊長類−ヒト造血細胞異種移植された霊長類（好まし
くはサルである）からなる、ヒト造血系の研究のためのモデルを提供する。その
ようなモデルは、造血系に関連した種々の疾患または障害（例えば、鎌形赤血球
貧血、サラセミア、ＡＩＤＳ、マラリア、白血病、リンパ腫、など）の病理の研
究に特に適している。このモデルは、そのような疾患または障害の病理の研究の
ために、そのような疾患または障害を有するヒトからの造血幹細胞で異種移植さ
れる。あるいは異種移植された霊長類は、ヒト由来の再構成された造血系で疾患
または障害が出現するように処理される。
前記モデルの具体的な面は、疾患または障害の治療薬の効果または治療法の効
果の試験のための系である。１つの具体例は、造血細胞（例えば、幹細胞）を標
的とした遺伝子治療法の効果を試験するためのモデルである。
本発明はまた、移植される造血細胞は、正常な（すなわち未処理の）非ヒト霊
長類であるかまたは前記異種移植された霊長類Ｍ３である、非ヒト霊長類から得
られる幹細胞である造血細胞移植治療法による、疾患または障害の治療法を提供
する。このような治療法により治療される疾患または障害の例としては、種々の
自己免疫疾患、ＨＩＶ感染症、リンパ腫、白血病などがある。ＨＩＶ感染症の場
合は、例えば異種移植された造血幹細胞が好ましくは正常な非ヒト霊長類から得
られる。前記方法の例により、移植された造血細胞はまず、遺伝子治療法（例え
ば、多剤耐性遺伝子（「ＭＤＲ遺伝子」）を与えることによりこれらの細胞をト
ランスフェクションする）などにより操作される。
また本発明により、幹細胞を増強した非ヒト霊長類血球が与えられる。このよ
うな調製物は、前記移植治療法において薬物製剤として使用するか、またはその
ような治療のアリコートの産生のためのバルクの生物学的製剤として使用される
。バルク調製物または単回投与のためのアリコートは凍結保存され、その後使用
前に融解される。本発明のこの面の態様により、幹細胞調製物は、外来遺伝子（
例えば、ＭＤＲ遺伝子）によりトランスフェクションされる。
本発明はまた、前記幹細胞を増強した非ヒト霊長類血液細胞調製物の産生方法
を提供する。
本発明の種々の他の例は、以下の説明から明らかであろう。発明の詳細な説明
本発明を、以下のいくつかの具体的な非限定例を参考に説明する。
本発明において、１つの霊長類から他の霊長類への造血系統の新規の異種移植
法、並びに安定な非ヒト造血異種移植霊長類が提供される。ヒトと霊長類の進化
の距離は、ヒトと非−霊長類哺乳動物（例えば、齧歯類）の間の進化の距離に比
較して短いため、ヒト−霊長類造血細胞異種移植は、先行技術の異種移植（例え
ば、ＥＰ−４３８，０５３10）より有効である。例えば、ヒトと霊長類のサイト
カインは非常によく似ているが、ヒトと齧歯類のサイトカインは交差反応性がな
いことが多い。
本発明の１つの実施態様において、ヒト供与体の造血幹細胞が、非ヒト霊長類
（好ましくはサル）に移植される。受容体の分裂造血細胞の破壊を目的とする治
療（例えば、分割全身放射線照射（ＴＢＩ）処理）後に、受容体霊長類に、ヒト
供与体（これは基本的にＴ細胞が欠乏している）の幹細胞を増強した調製物を接
種する。このような造血調製物は、Ｔ細胞欠乏ヒト骨髄であるか、またはＴ細胞
欠乏末梢血幹細胞調製物（末梢血中の側鎖は、例えば癌患者の化学療法もしくは
Ｇ−ＣＳＦ投与後などの種々の処理の結果として得られる）でもよい。
異種移植された非ヒト霊長類中のヒト由来の造血系を確実に再構成するために
、移植される幹細胞の量は、前記処理後に残存する受容体の幹細胞に対して過剰
でなければならない。例えば、マーモセットサルの場合は、このために有効な接
種量（Ｔ細胞欠乏後）は、５×１０3〜２×１０9細胞の範囲である。
異種移植後サルを、少なくとも受容体霊長類中で供与体免疫系が再構成される
まで、無菌条件下に置くことが必須である。
放射線照射のような処理（特に、分割全身放射線照射）は、分裂している造血
細胞（特に、幹細胞）のほとんどを破壊する。処理した動物に残存する造血系の
細胞は、主に赤血球である。赤血球（ＲＢＣ）の寿命は１００〜１２０日であり
、従って異種移植された霊長類のＲＢＣは最初受容体型であるが、時間とともに
接種された細胞由来の供与体型赤血球で置換される。初期の相では、異種移植さ
れた霊長類は基本的に、造血免疫細胞のほとんどが欠如しており、これらは時間
とともに接種された供与体の幹細胞により再構成される。
ヒト−霊長類造血細胞異種移植は、ヒト造血系の種々の疾患または障害の病理
の研究の有効なモデルとして、並びにそのような疾患または障害の治療法の開発
のための手段として有用である。良好なモデルがないそのような疾患または障害
の例には、鎌形血球貧血やサラセミアおよび慢性骨髄性白血病がある。そのよう
な疾患の研究のために、疾患を有するヒト供与体からのＴ細胞欠乏幹細胞増強画
分をサル受容体に異種移植したり、その疾患およびその治療法が異種移植された
サルのモデルで研究される。
ヒト−霊長類造血細胞異種移植の利用の別の例は、ＡＩＤＳの病理の研究のた
めのモデル、およびＡＩＤＳ治療法の開発のためのモデルとしてである。このよ
うな例において、ヒト−霊長類造血細胞異種移植の形成後、非ヒト異種移植片を
、ＡＩＤＳの起因菌であるＨＩＶで感染させる。ＨＩＶの病理並びに抗ＨＩＶ治
療法はこの霊長類異種移植片で研究することができる。このモデルの応用の別の
例は、レトロウイルスベクターの研究、または造血細胞（例えば幹細胞）を標的
とした遺伝子治療法で使用される他の方法の研究である。そのような治療法の具
体例には、造血細胞の保存疾患（酵素欠損）の遺伝子治療法または癌患者の多剤
薬剤耐性遺伝子による幹細胞のトランスフェクションなどがある。
種々のヒトの造血疾患または障害の研究のためのモデルとしての使用以外に、
ヒト−霊長類造血細胞異種移植された霊長類は、他の種々の用途がある。例えば
、異種移植した霊長類に抗原を接種し、次にそのような抗原に対してヒト抗血清
を作成するのに使用される。抗血清は、ポリクローナル抗体またはモノクローナ
ル抗体でもよく、そのために霊長類異種移植片のＢ細胞を不死化し、そこから公
知の方法に従ってポリクローナル抗体が調製される。
同様に、病原性細胞または組織に対して細胞毒性Ｔ細胞が調製される。このた
めに、ヒト−霊長類造血細胞異種移植された霊長類を、細胞毒性Ｔ細胞免疫反応
の出現を誘発することができる細胞もしくは組織またはこれらの成分で免疫する
。そのような成分としては、例えばその細胞または組織から得られる膜性調製物
がある。霊長類で免疫反応が出現後、細胞毒性Ｔ細胞を採取し、細胞または組織
と反応性のものを選択する。
前記抗体または細胞毒性Ｔ細胞は、種々のヒトの疾患または障害の治療用の治
療薬として使用される。
ヒト−霊長類造血細胞異種移植された霊長類の別の重要な用途は、ヒトの治療
用途（および特に骨髄置換治療法）の幹細胞バンクとしてである。時に移植のた
めの骨髄の適当なヒト供与体が不足していることがあり、このような異種移植さ
れた霊長類は幹細胞供給源として有用である。
本発明により提供される霊長類間の移植プロトコールはまた、種々のヒトの疾
患または障害の治療法として使用される。具体的な応用は、ヒトの組織および細
胞を障害するが非ヒト霊長類の組織および細胞を障害しないウイルス疾患の治療
である。例えば、ＡＩＤＳの１つの可能な治療法は、骨髄置換治療法である。し
かし分裂造血細胞の破壊を目的とする治療（例えば、分裂ＴＢＩ）後にも、ＨＩ
Ｖに感染したＣＤ４+細胞が体内に残存していることがあり、これらの細胞はＨ
ＩＶによる供与体細胞の感染を引き起こし、ＡＩＤＳを再発させる。これは、Ｈ
ＩＶに非感受性の非ヒト霊長類供与体の造血細胞をヒトＡＩＤＳ患者に異種移植
することにより避けられる。
霊長類−ヒト造血細胞異種移植の別の可能な応用は、非造血臓器（例えば、肝
臓）の異種移植と造血細胞の異種移植からなる併用治療法である。このような治
療法の１例は、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎感染症のような肝臓のウイルス感染症で
ある。急性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎に感染したヒトでは、ＨＢＶまたはＨＣＶが
移植肝臓に感染するために、ヒト−ヒト肝臓移植は一般的に効果がない。このよ
うなヒトにとって唯一の可能な治療法は、非ヒト供与体からの肝臓の異種移植で
ある。しかしこのような移植では、移植臓器の拒絶の原因である免疫反応を起こ
し易い。免疫抑制剤を使用すると、感染症および癌にかかり易くなる。本発明に
おいては、臓器の異種移植とともに霊長類−ヒト造血細胞異種移植が行われ、こ
れは典型的には臓器移植の前に行われる。免疫系は受容体中で出現する間に、「
教育」されて移植臓器に対して非応答性となり、同時に宿主細胞に対する応答が
欠如してくる。
当然ながら、前記実施態様は、本明細書で定義される発明の多くの実施態様の
わずかな例である。本発明は前記実施態様に限定されるものではなく、本発明の
範囲は他のすべて実施態様を包含する。
以下の例で本発明を説明する。例１ ヒト幹細胞強化造血細胞調製物
幹細胞を強化したヒト造血細胞調製物は、ヒト骨髄のＴ細胞欠乏により得られ
る。このような欠乏は、大豆凝集素と、ヒツジ赤血球によるＥ−ロゼット形成を
用いる差別的凝集（レイスナー（Reisner）ら11）により分画して得られる。
ヒト幹細胞を強化した造血細胞調製物は、幹細胞を末梢血に移動させるような
治療を受けているヒトの末梢血から得られる。末梢血中でそのような幹細胞を出
現させることが証明されている化学療法を受けている癌患者の場合は、これに相
当する（シェリダン（Sheridan）12）。あるいは、Ｇ−ＣＳＦ（１２g/kgを７日
間）を使用して正常な供与体中で誘発することにより末梢血中の幹細胞強化をす
ることができ、３日以後にそのようなヒトから幹細胞を採取する。幹細胞は、Ｃ
Ｄ３４+細胞強化を目的とする白血球フェレーシス、および次に前述のＴ細胞欠
乏を行うことにより末梢血から得られる。例２ 霊長類中のヒト幹細胞の移植
マーモセットサルを、４Ｇｙの分割全身放射線照射（ＴＢＩ）で処理し、３日
後に１０ｇｙで処理する。ＴＢＩ終了の１日後、５×１０3〜２×１０9のＴ細胞
欠乏骨髄細胞または例１のＴ細胞欠乏末梢血ＣＤ３４+幹細胞強化画分、または
この両方の組合せ移植物をサルに接種する。
サルを層流フード下の無菌ケージに入れ、無菌の食事と水を与え、必要に応じ
て正常なサル供与体から輸血して維持する（輸血はあらかじめ２Ｇｙを放射線照
射した）。また必要に応じてサルを抗生物質、抗真菌剤および抗ウイルス剤で処
理する。
放射線照射２０日後、処理したサルは、ヒト造血系（すなわち、顆粒球）の成
分を含んでなることが証明された。例３ 抗体の調製
例２の異種移植したサルに種々の抗原を接種し、必要に応じて抗原の接種を数
回繰り返す。
免疫反応が出現する充分な時間後、公知の方法によりこれらのサルから抗血清
を調製する。
モノクローナル抗体の調製のために、公知の方法によりハイブリドーマを調製
し、ここからヒトモノクローナル抗体を得る。例４ 細胞毒性Ｔ細胞の調製
例４の異種移植したサルに、病原性細胞（例えば、癌細胞、ウイルス感染細胞
など）、またはペプチドもしくは膜調製物を接種する。免疫反応が出現する充分
な時間後、細胞毒性Ｔ細胞を採取し、細胞または組織に対して反応性のあるもの
を選択する。
そのような細胞毒性Ｔ細胞（これらは、インビトロで拡張できる）は、上記病
原性細胞または組織により引き起こされる疾患または障害の治療用薬剤として有
用である。例５ ヒト骨髄置換治療法
ヒトＨＩＶ患者に分裂ＴＢＩを放射線照射する（これにより基本的にその造血
細胞が破壊される）。
次に全身無菌条件下で維持されるヒトに、非ヒト霊長類（特にサル）から得ら
れる幹細胞増強調製物を移植する。
幹細胞強化調製物は、例１に記載のようにヒトから得られる調製物と同様に得
られる。
必要であれば、処理したヒトの再構成造血系の出現の前に、無菌および放射線
照射赤血球調製物を連続的に注入する。さらに必要であれば、ヒトに種々の血液
因子を投与する。
処理後のヒトの感染症の発生を避けるために、ヒトに抗生物質、抗真菌剤、お
よび抗ウイルス剤を注入する。
ヒトを、供与体由来の造血系がその中で出現するまで、基本的に無菌条件下で
維持する。BACKGROUND OF THE INVENTION Field of the Invention The implantation invention of hematopoietic cells from primate donor to primate receptor relates generally to the field of transplantation, more particularly other from a donor of one species primate (Donor) Hematopoietic cell transplantation into primate recipients of the same species. The present invention also relates to non-human chimeric primates in which another primate xenogeneic hematopoietic systems of a different species have been stably transplanted. The invention also relates to the method and various uses of the non-human primate. Prior Art The documents listed below are relevant for understanding the current state of the art of the present invention, but are not relevant for the patentability of the present invention as defined herein. Prior art documents cited in the present invention are as follows: Gale, RP. and Reisner, Y. (1986), Graft rejection and graft-versus-host reaction disease; mirror image, Lancet i, 1468. 2. Reisner, Y., Kapoor, N., Good, RA. and O'Reilly, RJ. (1984), Allogeneic bone marrow transplantation in mice, monkeys and humans using lectin-isolated grafts. Tolerance in Bone Marrow and Organ Transplantation (Slavin, S. ed.), Pp. 293-30. 3. Reisner, Y .; (1990), Transplantation of T cell deficient bone marrow in a mouse model for allogeneic bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplantation (Champlin, R., ed.), Pp. 9-25, Kluwer Academic Publishers. 4. O'Reilly, RJ, Keever, CA, Smell, TN. and Brochstein, J .; (1989), Use of non-HLA non-T cell deficient bone marrow transplantation for the treatment of severe combined immunodeficiency, Immunodefic. Ref. 1,273-309. 5. O'Reilly, RJ, Collins, NH, Keman, N., Brochstein, J., Dinsmore, R., Kilpatrick, D., Siena, S., Keever, C., Shank, B., Wolf, L., Dupont, B.S. and Reisner, Y. (1985), Transplantation of T-cell deficient bone marrow by soybean lectin aggregation and E-rosette deficiency: major histocompatibility complex-related graft rejection of leukemic transplant recipients, Transplant. Proc., 17 : 455-459. 6. Vallera, DA. and Blazar, BR. (1989), T-cell deficiency for graft-versus-host reaction disease (GVHD) prevention: perspective on transplantation in mice and humans, Transplant atlon, 47 : 751-760. 7. Van-Bekkum, DW. and Lowenberg, B .; (1985), Bone Marrow Transplant: Biological Mechanisms and Clinical Practice, Marcel Dekker, New York. 8. Lapidot, T., Terenzi, A., Singer, TS, Salomon, O .; and Reisner, Y. (1989), Enhancement of a donor-type chimera in a mouse acceptor of a bone marrow allograft by dimethyl myleran, Blood, 73 : 2005. 9. European Patent Application No. 438053 (1991). 10. Andrews, RG, Bryant, EM, Bartelmez, SH, Muirhead, DY, Knitter, GH, Bensinger, W., Strong, DM, and Bernstein, ID, (1992), CD34 lacking T and B lymphocytes. + Bone marrow cells reconstitute stable lymphopoiesis and bone marrow hematopoiesis in irradiated allogeneic baboons, Blood, 7: 1 693-1701. 11. Reisner, Y., Friedrich, W.C. and Fabian, I. (1986), Shortened method for preparing E-rosette-deficient bone marrow for transplantation, Transplantation, 42: 312-315. 12. Sheridan, WP, Begley, CG, Juttner, CA, Szer, J., To, LB, Maher, D., McGrath, KM, Morsyn, G. and Fox, RM. (1992), Effect of peripheral blood progenitor cells recruited to filgrastim (G-CSF) on platelet recovery after high dose chemotherapy, Lancet i, 640-644. In the following part of the text the documents are indicated by the numbers in the above list. Background of the Invention Bone marrow transplantation (BMT) is a promising treatment in a variety of clinical settings , but is usually hampered by immune-related complications such as graft rejection and graft-versus-host disease (GVHD) 1 . GVHD can be reduced by using T-cell deficient bone marrow, and indeed, mismatched T-cell deficient bone marrow has been successfully used to treat children with severe combined immunodeficiency (SCID) 3-4 . In SCID patients who have received such transplants, donor-type T cells that are tolerant to the host are generated, and thus GVHD is reduced. The successful treatment of SCID patients has extended this therapy to leukemia patients without a matched sibling donor or matched type but at high risk of GVHD. However, it has been unsuccessful in leukemia patients due to a high rate of graft rejection or transplant failure and leukemia recurrence. Receptors in T cell-deficient bone marrow with the same HLA have a graft rejection rate of about 10-15%, and receptors in T cell-deficient bone marrow with inconsistent HLA have a rejection rate of about 50% 5 . Many bone marrow allograft rejections have been reported in different animal models 3,6,7 . In mice, such rejection can be avoided by increasing bone marrow intake. This increase in intake, long-term high immunologically active chimeric it has become possible to a high rate produce 3. One suggestion in the art to increase bone marrow intake was the use of frozen bone marrow of HLA-mismatched cadaver 8 . It was further suggested that in vitro treatment with a hormone (eg, GM-CSF) prior to transplantation increased the number of donor stem cells 3 . EP-438,053 9 discloses the transplantation of a hematopoietic lineage from one mammal to another. In this European patent application, the non-human mammal M1 is treated to substantially suppress or destroy its hematopoietic cells, and then transplanted with hematopoietic cells from at least two sources. One is cells from a mammal M3 (preferably human) of a species other than M1, and the second of these sources is a mammal of a species other than M3 having an immunodeficiency (eg, SCID). Hemopoietic cells derived from M2. As a result, a chimeric mammal M4 having a long-term stable heterologous hematopoietic cell is obtained. A particular preferred mammal disclosed in said European patent application is a mouse. Transplantation of one baboon hematopoietic CD34 + cells into mixed lymphocyte culture (MLC) non-reactive baboons has also been reported 10 . Terminology The following indicates the meaning of some terms that are sometimes used in the following description. "Xenotransplant" means transplanting a tissue or organ of one species to a different species. "Xenograft" refers to a transplanted tissue or organ. "Xenografted primate" means a primate that is a recipient of a xenograft. "Human-primate hematopoietic cell xenograft" refers to the transplantation of human hematopoietic cells into a non-human primate receptor. By "primate-human hematopoietic cell xenograft" is meant xenotransplantation of hematopoietic cells of a non-human primate donor into a human receptor. Such xenograft hematopoietic cells may be from a normal primate donor or human hematopoietic cells from a human-primate hematopoietic xenograft. Other scientific terms used herein have their generally accepted meanings in the art. GENERAL DESCRIPTION OF THE INVENTION One object of the present invention is to provide a method for replacing a hematopoietic system of one primate with a hematopoietic system from another primate of a different species. It is a further object of the present invention to provide a xenografted non-human primate, wherein the hematopoietic system of another primate (preferably a human) of a different species has been replaced. It is a further object of the present invention to provide a transplant therapy for the treatment of various diseases or disorders of the hematopoietic system of primates, especially humans. It is a further object of the present invention to provide a novel method of xenotransplantation of non-hematopoietic cells or organs between primates of different species (eg, between a non-human primate donor and a human acceptor). It is a further object of the present invention to provide a primate model for studying the pathology of various human diseases of or related to the hematopoietic system and for developing therapeutics for such diseases. . It is a further object of the present invention to provide a method for obtaining a supply of human hematopoietic cells. It is a further object of the present invention to provide novel methods for preparing human monoclonal or polyclonal antibodies as well as certain cytotoxic T cells. The present invention is a major cause of failure of xenotransplantation of primate hematopoietic cells in addition to GVHD is that the recipient primate usually has certain stem cells that become dominant over the xenografted bone marrow cells after a certain period of time, This is based on the understanding that this will eventually reject the graft. This is true even after treatment to destroy all hematopoietic lineages in the recipient primate, if some of the stem cells escape such treatment. Thus, in the present invention, in order to overcome this drawback in primates and to obtain a long-term stable hematopoietic cell xenograft, the recipient primate may be used as a donor hematopoietic cell preparation and the total stem cell uptake Should be xenografted with a large excess of the remaining stem cells in the receptor. Further, in the present invention, human-primate hematopoiesis is used to study the pathology of various diseases or disorders associated with the hematopoietic system and to develop very useful models for developing therapeutics for such diseases. It is recognized that lineage xenografts can be used. Further, it is recognized that the resulting xenografted primates will be a means of producing a variety of therapeutic agents for the treatment of various human diseases or disorders. In contrast, it is recognized herein that primate-human hematopoietic cell xenografts provide a novel transplantation therapy for the treatment of various human diseases or disorders associated with the hematopoietic system. The present invention provides a method for replacing the hematopoietic system of primate M1 with a hematopoietic system of primate M2 of a different species, comprising: (a) treating hematopoietic cells dividing M1 primate to divide And (b) inoculating a treated M1 primate with a hematopoietic cell preparation from an M2 primate, wherein the hematopoietic cell preparation has been enriched with stem cells and the stem cells in the preparation Is a large excess with respect to the remaining M1 primate stem cells after treatment), thus obtaining a stable primate xenograft M3 containing the hematopoietic system from the M2 primate. The amount of inoculated stem cells is typically between 5 × 10 3 and 2 × 10 9 cells / kg body weight. Examples of such methods relate to human-primate hematopoietic cell xenografts on the one hand and primate-human hematopoietic cell xenografts on the other hand. The present invention also provides a xenografted non-human primate M3, the method comprising: (i) obtaining a non-human primate M1 whose hematopoietic system is essentially disrupted; ii) It is characterized in that it comprises a reconstituted hematopoietic system, all obtained from a primate M2 of a different species than M1. The preferred primate M1 from which the primate M3 is prepared is a monkey. The invention further provides a method for obtaining a supply of human hematopoietic cells, comprising: (a) treating non-human primate M1 to destroy most of the dividing hematopoietic cells; and (b) enhancing stem cells. Inoculating the treated M1 primate with a hematopoietic cell preparation (where the amount of stem cells in the hematopoietic cell preparation is in large excess relative to the remaining M1 primate stem cells after treatment); (C) obtaining a xenografted non-human primate M3 and (d) growing the primate M3 until a human-derived hematopoietic system emerges, thus having a stable human-derived hematopoietic system A xenografted non-human primate M3 is obtained from which human hematopoietic cells can be harvested. The present invention also provides a hematopoietic cell obtained by the above method. In another aspect, the present invention provides a method for obtaining a human antibody against an antigen of interest, comprising immunizing a xenograft primate M3 and then preparing a polyclonal or monoclonal antibody against the antigen. A polyclonal antibody is obtained by collecting a serum sample from this M3 primate and obtaining anti-the antigen-antiserum therefrom. Monoclonal antibodies to this antigen can be obtained by immunizing B cells and selecting those that secrete antibodies to this antigen. In another aspect, the present invention provides a method for obtaining human cytotoxic T cells responsive to pathogenic cells or tissues. In the present invention, a human-primate hematopoietic cell xenograft primate is immunized with a pathogenic cell or tissue or a component thereof capable of eliciting the appearance of a cytotoxic T cell immune response, and then priming the primate. And collecting cytotoxic T cells that are reactive to the cells or tissues. Examples of such cells or tissues include virally infected cells, cancer cells, eukaryotic or prokaryotic pathogenic microorganisms (protozoa, bacteria, microplasmas) and the like. The invention further provides a therapeutic formulation comprising a therapeutically effective amount of said antibody or cytotoxic T cell. The invention also provides a method of treating an individual in need thereof, comprising administering to the individual in need thereof an antibody or cytotoxic T cells. In another aspect, the present invention provides a model for studying the human hematopoietic system, comprising a primate-human hematopoietic cell xenograft primate, preferably a monkey. Such models are particularly suitable for studying the pathology of various diseases or disorders associated with the hematopoietic system (eg, sickle cell anemia, thalassemia, AIDS, malaria, leukemia, lymphoma, etc.). This model is xenografted with hematopoietic stem cells from a human having such a disease or disorder for the study of the pathology of such disease or disorder. Alternatively, the xenotransplanted primate is processed so that a disease or disorder appears in the reconstituted hematopoietic system of human origin. A specific aspect of the model is a system for testing the effect of a therapeutic or therapeutic method on a disease or disorder. One specific example is a model for testing the effects of gene therapy targeting hematopoietic cells (eg, stem cells). The present invention also relates to a hematopoietic cell, wherein the transplanted hematopoietic cell is a stem cell obtained from a non-human primate, which is a normal (ie, untreated) non-human primate or the xenografted primate M3. A method for treating a disease or disorder by cell transplantation therapy is provided. Examples of diseases or disorders treated by such treatments include various autoimmune diseases, HIV infection, lymphoma, leukemia, and the like. In the case of HIV infection, for example, xenografted hematopoietic stem cells are preferably obtained from normal non-human primates. According to examples of the above methods, the transplanted hematopoietic cells are first manipulated, such as by gene therapy (eg, transfecting these cells by providing a multidrug resistance gene ("MDR gene")). The present invention also provides non-human primate blood cells having enhanced stem cells. Such a preparation is used as a drug formulation in the transplantation therapy or as a bulk biologic for the production of an aliquot of such therapy. Aliquots for bulk preparations or single doses are stored frozen and then thawed before use. According to embodiments of this aspect of the invention, the stem cell preparation is transfected with a foreign gene (eg, the MDR gene). The present invention also provides a method for producing a non-human primate blood cell preparation with enhanced stem cells. Various other examples of the invention will be apparent from the description below. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention will be described with reference to the following specific non-limiting examples. In the present invention, there is provided a novel method for xenotransplantation of a hematopoietic lineage from one primate to another, as well as stable non-human hematopoietic xenograft primates. Human-primate hematopoietic cell xenografts have been described in the prior art because the evolutionary distance between humans and primates is short compared to the evolutionary distance between humans and non-primate mammals (eg, rodents). Xenografts (eg, EP-438,053 10 ). For example, human and primate cytokines are very similar, whereas human and rodent cytokines are often not cross-reactive. In one embodiment of the invention, human donor hematopoietic stem cells are transplanted into a non-human primate, preferably a monkey. After treatment aimed at destroying the dividing hematopoietic cells of the recipient (eg, fractionated whole body irradiation (TBI) treatment), the recipient primate can receive a human donor, which is essentially depleted of T cells. Is inoculated with a preparation enriched for stem cells. Such hematopoietic preparations may be T cell deficient human bone marrow or T cell deficient peripheral blood stem cell preparations (side chains in peripheral blood may be different, such as after chemotherapy or G-CSF administration in cancer patients). Obtained as a result of the above processing). To ensure reconstitution of the human-derived hematopoietic system in the xenografted non-human primate, the amount of stem cells transplanted must be in excess of the recipient stem cells remaining after the treatment. For example, in the case of marmoset monkeys, the effective inoculum (after T cell depletion) for this is in the range of 5 × 10 3 to 2 × 10 9 cells. Following xenotransplantation, it is essential that the monkeys be placed under sterile conditions, at least until the donor immune system is reconstituted in the recipient primate. Treatments such as irradiation (particularly fractionated whole body irradiation) destroy most of the dividing hematopoietic cells, especially stem cells. The hematopoietic cells remaining in the treated animal are mainly red blood cells. The life span of red blood cells (RBCs) is 100-120 days, so xenografted primate RBCs are initially of the acceptor type, but are replaced over time with donor-type red blood cells from the inoculated cells. In the early phase, xenotransplanted primates essentially lack most of the hematopoietic immune cells, which are reconstituted over time with the inoculated donor stem cells. Human-primate hematopoietic cell xenografts are useful as effective models for the study of the pathology of various diseases or disorders of the human hematopoietic system, and as tools for the development of treatments for such diseases or disorders. Examples of such diseases or disorders for which there is no good model are sickle cell anemia and thalassemia and chronic myeloid leukemia. For the study of such diseases, a T cell-deficient stem cell-enhanced fraction from a diseased human donor was xenografted to a monkey acceptor, and the disease and its treatment were studied in xenograft monkey models. Be studied. Another example of the use of human-primate hematopoietic cell xenografts is as a model for studying the pathology of AIDS and for developing AIDS treatments. In such an example, after formation of the human-primate hematopoietic cell xenograft, the non-human xenograft is infected with HIV, the causative agent of AIDS. HIV pathology as well as anti-HIV treatments can be studied in this primate xenograft. Another example of the application of this model is the study of retroviral vectors or other methods used in gene therapy targeting hematopoietic cells (eg, stem cells). Specific examples of such treatments include gene therapy for conserved hematopoietic cells (enzyme deficiency) or transfection of stem cells with multidrug resistance genes in cancer patients. Besides being used as a model for the study of various human hematopoietic diseases or disorders, human-primate hematopoietic cell xenograft primates have a variety of other uses. For example, xenografted primates are used to inoculate antigens and then used to raise human antisera to such antigens. The antiserum may be a polyclonal or monoclonal antibody, for which immortalizing B cells of a primate xenograft, from which a polyclonal antibody is prepared according to known methods. Similarly, cytotoxic T cells are prepared for pathogenic cells or tissues. To this end, human-primate hematopoietic cell xenograft primates are immunized with cells or tissues or components thereof capable of eliciting the appearance of a cytotoxic T cell immune response. Such components include, for example, a membranous preparation obtained from the cell or tissue. After an immune response has emerged in the primate, cytotoxic T cells are harvested and those that are reactive with the cells or tissues are selected. The antibodies or cytotoxic T cells are used as therapeutics for the treatment of various human diseases or disorders. Another important use of human-primate hematopoietic cell xenograft primates is as a stem cell bank for human therapeutic uses (and especially bone marrow replacement therapy). Occasionally, there is a shortage of a suitable human donor of bone marrow for transplantation, and such xenografted primates are useful as a source of stem cells. The primate transplantation protocol provided by the present invention is also used as a treatment for various human diseases or disorders. A particular application is the treatment of viral diseases that damage human tissues and cells but not non-human primate tissues and cells. For example, one possible treatment for AIDS is bone marrow replacement therapy. However, even after treatment aimed at destroying mitotic hematopoietic cells (eg, dividing TBI), HIV-infected CD4 + cells may remain in the body, and these cells may be responsible for HIV-induced donor cells. Causes infection and relapses AIDS. This can be avoided by xenotransplanting non-human primate donor hematopoietic cells that are insensitive to HIV into human AIDS patients. Another possible application of primate-human hematopoietic cell xenografts is a combination therapy consisting of xenografts of non-hematopoietic organs (eg, liver) and xenografts of hematopoietic cells. One example of such a treatment is a viral infection of the liver, such as hepatitis B or hepatitis C infection. In humans infected with acute hepatitis B or C, human-to-human liver transplantation is generally ineffective because HBV or HCV infects the transplanted liver. The only possible treatment for such a human is liver xenograft from a non-human donor. However, such transplants are susceptible to an immune response that causes rejection of the transplanted organ. The use of immunosuppressants makes it more susceptible to infections and cancer. In the present invention, primate-human hematopoietic cell xenotransplantation is performed together with organ xenotransplantation, which is typically performed prior to organ transplantation. While appearing in receptors, the immune system is "educated" and becomes unresponsive to the transplanted organ, while at the same time lacking a response to host cells. Of course, the above embodiments are merely examples of many embodiments of the invention as defined herein. The invention is not limited to the embodiments described above, but the scope of the invention includes all other embodiments. The following example illustrates the invention. Example 1 Human stem cell enriched hematopoietic cell preparation A human hematopoietic cell preparation enriched for stem cells is obtained by T cell depletion of human bone marrow. Such a deficiency is obtained by fractionation by soy agglutinin and differential agglutination using E-rosette formation by sheep red blood cells (Reisner et al. 11 ). Hematopoietic cell preparations enriched for human stem cells are obtained from the peripheral blood of a human being treated to migrate the stem cells to the peripheral blood. This is the case for cancer patients receiving chemotherapy that has been shown to produce such stem cells in peripheral blood (Sheridan 12 ). Alternatively, stem cells in peripheral blood can be enriched by inducing in a normal donor using G-CSF (12 g / kg for 7 days) and stem cells can be obtained from such humans after 3 days. Collect. Stem cells are obtained from peripheral blood by performing leukocyte pheresis for CD34 + cell enrichment and then T cell depletion as described above. Example 2 Transplantation of Human Stem Cells in Primates Marmosets monkeys are treated with 4 Gy fractionated whole body irradiation (TBI) and 3 days later with 10 gy. One day after TBI completion, seeded 5 × 10 3 ~2 × 10 9 T cells depleted bone marrow cells or Example 1 of T cell depleted peripheral blood CD34 + stem cells enhanced fraction, or a combination implant of both monkeys. The monkeys are placed in sterile cages under a laminar flow hood, provided with a sterile diet and water, and if necessary, transfused and maintained from a normal monkey donor (transfusions were previously irradiated with 2 Gy). Monkeys are also treated with antibiotics, antifungals and antivirals as needed. Twenty days after irradiation, the treated monkeys proved to comprise components of the human hematopoietic system (ie, granulocytes). Example 3 Preparation of Antibodies The xenograft monkey of Example 2 is inoculated with various antigens, and if necessary, the antigen inoculation is repeated several times. After sufficient time for an immune response to develop, antisera are prepared from these monkeys by known methods. For preparation of a monoclonal antibody, a hybridoma is prepared by a known method, from which a human monoclonal antibody is obtained. Example 4 Preparation of Cytotoxic T Cells The xenografted monkey of Example 4 is inoculated with pathogenic cells (eg, cancer cells, virus infected cells, etc.), or peptide or membrane preparations. After sufficient time for an immune response to develop, the cytotoxic T cells are harvested and those that are reactive against the cells or tissues are selected. Such cytotoxic T cells, which can be expanded in vitro, are useful as agents for treating diseases or disorders caused by the pathogenic cells or tissues. Example 5 Human Bone Marrow Replacement Therapy Human HIV patients are irradiated with dividing TBI, which essentially destroys the hematopoietic cells. The human, maintained under systemic aseptic conditions, is then transplanted with a stem cell enrichment preparation obtained from a non-human primate, especially a monkey. The stem cell enriched preparation is obtained similarly to a preparation obtained from humans as described in Example 1. If necessary, a sterile and irradiated red blood cell preparation is continuously infused prior to the appearance of the reconstituted hematopoietic system of the treated human. If necessary, humans are administered various blood factors. Inject humans with antibiotics, antifungals, and antivirals to avoid developing human infections after treatment. The human is maintained under essentially sterile conditions until a donor-derived hematopoietic system appears therein.
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(51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＥＢ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＥＢ
Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/08
Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ０１Ｎ 1/00
// Ａ０１Ｎ 1/00 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ
Ｃ１２Ｎ 15/02 15/00 Ｃ ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FI A61K 48/00 AEB A61K 48/00 AEB C12N 5/10 C12P 21/08 C12P 21/08 A01N 1/00 // A01N 1/00 C12N 5/00 B C12N 15/02 15/00 C