JPH10313878A - 新規膜タイプマトリックス金属プロテイナーゼ−５遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドおよびポリヌク
レオチド、ならびに組み換え法によりかかるポリペプチ
ドを製造する方法を開示する。また、とりわけ、アルツ
ハイマー病、卒中、癌、炎症、関節炎、筋骨格疾患、心
臓疾患および腎臓疾患の治療プロトコールの設計ならび
にかかる症状の診断アッセイにおけるＨＣＥ３Ｐ８３ポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドの使用を提供する。 【解決手段】 配列番号：２のポリペプチドもしくはそ
の対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
に対してその全長にわたり少なくとも８０％の同一性を
有するヌクレオチド配列または上記ヌクレオチド配列に
対して相補的なヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレ
オチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチ
ド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細に
は、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは膜タ
イプマトリックス金属プロテイナーゼファミリー（以
下、ＨＣＥ３Ｐ８３という）に関連している。また本発
明は、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの作
用の阻害または活性化にも関する。

【０００２】

【従来の技術】膜タイプマトリックス金属プロテイナー
ゼ（ＭＴ−ＭＭＰ）はトランスメンブランマトリックス
金属プロテイナーゼの新たなファミリーである。現在、
文献に好評された４種のＭＴ−ＭＭＰがある（Sato,H.e
t al.,Nature 370:61-65;Will,H.and Hinzmann,B.Eur.
J.Biochem231:602-608,1995;Takino,T.et al.,J.Biol.C
hem.23013-23020;Puente,X.S.et al.,Cancer Res.56:94
4-949,1996)。ＭＴ−ＭＭＰはある種のＭＭＰの容体な
らびにアクチベーターとして作用し、細胞外マトリック
ス蛋白分解を細胞周囲領域に局在化させることに役立
つ。ＭＴ−ＭＭＰは転移において役割を果たしているこ
とが示されており、多くの腫瘍中に同定されている。ま
た、あるＭＴ−ＭＭＰはアルツハイマー病に関与してい
ることも示されており、アルツハイマー病において白質
小グリア細胞中に見出されている（Yamada,T. et al.,A
cta Neuropathol.90:421-424,1995）。また、ＭＴ−Ｍ
ＭＰは炎症細胞の浸潤においても役割を果たしている。
ノーザン・アレイ・グリッド分析（Noerthern Array Gr
id Analysis）により、ＭＴ−ＭＭＰ−５発現が小脳お
よび腎臓において検出された。複数の組織についてのノ
ーザンブロットによってもＭＴ−ＭＭＰ−５がプローブ
され、脳、腎臓および膵臓におけるＭＴ−ＭＭＰ−５の
存在が示された。このことは、これらの膜タイプマトリ
ックス金属プロテイナーゼが治療標的として確立され証
明された歴史を有することを示す。明らかに、アルツハ
イマー病、卒中、癌、炎症、関節炎、筋骨格疾患、心臓
疾患および腎臓疾患（これらに限らない）を包含する機
能不全および疾病の予防、改善または修正において役割
を果たしうる膜タイプマトリックス金属プロテイナーゼ
ファミリーのさらなるメンバーの同定および特徴づけが
必要である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】１の態様において、本
発明は、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドおよび組み換え物
質ならびにそれらの製造方法に関する。本発明のもう１
つの態様は、かかるＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドおよび
ポリヌクレオチドの使用方法に関する。かかる使用は、
とりわけ、アルツハイマー病、卒中、癌、炎症、関節
炎、筋骨格疾患、心臓疾患および腎臓疾患の治療を包含
する。さらにもう１つの態様において、本発明は、本発
明により提供される材料を用いるアゴニストおよびアン
タゴニストの同定方法ならびに同定された化合物を用い
るＨＣＥ３Ｐ８３バランス不良に関連症状の治療方法に
関する。本発明のさらにもう１つの態様は、不適切なＨ
ＣＥ３Ｐ８３活性またはレベルに関連した疾病の検出の
ための診断アッセイに関する。

【０００４】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】定義 下記定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の
理解を容易にするためのものである。「ＨＣＥ３Ｐ８
３」は、一般的には、配列番号：２に示すアミノ酸配列
を有するポリペプチド、またはその対立遺伝子変種をい
う。「ＨＣＥ３Ｐ８３活性またはＨＣＥ３Ｐ８３ポリペ
プチド活性」または「ＨＣＥ３Ｐ８３またはＨＣＥ３Ｐ
８３ポリペプチドの生物学的活性」は、該ＨＣＥ３Ｐ８
３の代謝的または生理学的機能をいい、類似の活性また
は改善された活性または望ましくない副作用を減じられ
たこれらの活性を包含する。該ＨＣＥ３Ｐ８３の抗原性
および免疫原性の活性も含まれる。「ＨＣＥ３Ｐ８３ポ
リペプチド」は、ＨＣＥ３Ｐ８３配列に十分類似したア
ミノ酸配列を有するポリペプチドをいい、好ましくは、
少なくとも１つのＨＣＥ３Ｐ８３の生物学的活性を示す
ものをいう。「ＨＣＥ３Ｐ８３遺伝子」は、配列番号：
１に示すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドま
たはその対立遺伝子変種および／またはそれらの相補物
をいう。「ＨＣＥ３Ｐ８３ポリヌクレオチド」は、ＨＣ
Ｅ３Ｐ８３ポリペプチドまたはそのフラグメントをコー
ドしているヌクレオチド配列、または配列番号：２のポ
リペプチドまたはその対応フラグメントをコードしてい
るヌクレオチド配列に対して少なくとも６５％の同一性
を有するヌクレオチド配列、または配列番号：１に「含
まれるヌクレオチド配列に対して充分な同一性を有して
いて増幅に使用可能な条件下またはプローブもしくはマ
ーカーとして使用される条件下でハイブリダイズするヌ
クレオチド配列を含んでいるポリヌクレオチドをいう。

【０００５】本明細書の用語「抗体」は、ポリクローナ
ルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、ならび
にヒト化抗体、さらにはＦａｂフラグメントを包含し、
Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生
成物も包含する。

【０００６】「単離」とは、「人間の手により」天然の
状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在
する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除
く、またはその両方を行ったことを意味する。例えば、
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが天然の状態で生
物中に存在する場合は、「単離」されていないが、同一
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存
する物質から分離されている場合は、本明細書に用いる
用語である、「単離」がなされている。

【０００７】「ポリヌクレオチド」とは、一般的には、
修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾さ
れたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリ
ボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを
意味する。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本
鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本
鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一
本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖
領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的
には二本鎖もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖
領域の混合物であってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含む
ハイブリッド分子を意味するが、これらに限定するもの
ではない。さらに、本明細書で用いるポリヌクレオチド
は、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両
方を含む三本鎖領域を意味する。安定性またはその他の
理由で修飾した骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、本
明細書の用語「ポリヌクレオチド」に含まれる。イノシ
ン等の通常的でない塩基、またはトリチル化塩基等は
「修飾」された塩基に含まれる。種々の修飾がＤＮＡお
よびＲＮＡについて行われているので、「ポリヌクレオ
チド」は、典型的に天然において見いだされるようなポ
リヌクレオチドのかかる化学的、酵素的または代謝的に
修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的
なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。また、
「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチド
と称される短いポリヌクレオチドを包含する。

【０００８】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合により互いに結合している２個ま
たはそれ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意
味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプチド、
オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖のも
の、および一般的に蛋白と称される長鎖のものの両方を
意味する。ポリペプチドは遺伝子によりコードされた２
０種のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有していてもよ
い。「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその
他の翻訳後修飾のような天然プロセスにより修飾された
ものが含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっ
ても修飾される。かかる修飾は基礎的な参考書およびさ
らに詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載
されており、これらは当業者に周知である。修飾は、ペ
プチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキ
シル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こりうる。
同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位で、同
一または異なる程度で存在し得ることが理解されよう。
また、ポリペプチドは多くの型の修飾を含み得る。ポリ
ペプチドは、ユビキチネーションの結果として分枝状と
なったものであってもよく、ポリペプチドは分枝ありま
たはなしの環状のものであってもよい。修飾には、アセ
チル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フ
ラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド
またはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質
誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結
合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル
化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタ
メート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グ
リコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、
メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセ
ッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシ
ル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−
カルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、セレ
ノイル化、硫酸化、アルギニル化のごときトランスファ
ーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸の添加、ならびにユビ
キチネーションなどがある。例えばProteins-Structure
and Molecular Properties、第２版、T.E.Creighton、
W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（1993）およ
びPosttranslational Covalent Modification of Prote
ins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニューヨー
ク（1983）のWold,F.,Posttranslational Protein Modi
fications ：Perspective and Prospects、1〜12頁；Se
ifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1990）およびRat
tanら、Protein Synthesis：Posttranslational Modifi
cations and Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62（199
2）を参照されたい。

【０００９】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチ
ドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、
全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なもの
に限られる。変種および対照ポリペプチドは、１または
それ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こ
ることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコー
ドされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種
のような自然発生的なものでもよく、または自然発生す
ることが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチド
およびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技術
または直接的合成により製造できる。

【００１０】「同一性」とは、ヌクレオチド配列または
アミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最高
の合致が得られるように配列を並置する。「同一性」は
それ自体当該分野で認識されている意味を有し、公表さ
れた手法を用いて計算できる。例えば、Computational
Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・
ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Bi
ocomputing：Informatics and Genome Projects，Smit
h,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993
年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，
Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレ
ス、ニュージャージー、1994年；Sequence Analysis in
Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデミック・
プレス、1987年；およびSequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレ
ス、ニューヨーク、1991年参照。二つのポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列の間の同一性および類似
性を測定する方法は多くあるが、用語「同一性」は当業
者に周知である（Carillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.
Applied Math.，48:1073（1988））。配列間の同一性ま
たは類似性を測定するために通常用いられる方法は、Gu
ide to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed.,Academic
Press,San Diego,1994およびCarilo,H.,and Lipton,
D.,SIAM J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示さ
れているが、これらに限定するものではない。同一性を
決定するための好ましい方法は、試験する配列間で最も
良く適合するように設計される。同一性および類似性を
決定する方法は、公に入手できるコンピュータープログ
ラムに集成されている。二つの配列間の同一性および類
似性を測定する好ましいコンピュータープログラム法に
は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nuc
leic Acids Research 12(1):387（1984）、BLASTP、BLAS
TN、およびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol（199
0） 215:403））等があるが、これらに限定するもので
はない。

【００１１】本発明のポリペプチド 本発明ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドは、配列番号：２の
ポリペプチド（詳細には、成熟ポリペプチド）ならびに
ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドを包含し、それらは配列番
号：２またはその関連部分に対して少なくとも５９％の
同一性を有し、好ましくは、配列番号：２に対して少な
くとも８０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９
０％の同一性、そのうえさらに好ましくは少なくとも９
５％の同一性を有する。本発明ＨＣＥ３Ｐ８３は、ヒト
・ＨＣＥ３Ｐ８３をコードしているｃＤＮＡの配列決定
結果により示されるように、膜タイプマトリックス金属
プロテイナーゼファミリーの他の蛋白と構造的に関係が
ある。そのｃＤＮＡ配列は３２４個のアミノ酸からなる
蛋白をコードしている読み枠を含み、その蛋白の推定分
子量は３７７６３ｋＤａである。図１−４のＨＣＥ３Ｐ
８３（配列番号：２）は、膜タイプマトリックス金属蛋
白−３(Takino,T. et al.,J.Biol.Chem.270:23013-2302
0,1995)に対して３２４個のアミノ酸において約５９％
の同一性を有する（FASTAを用いた場合）。他の既知Ｍ
Ｔ−ＭＭＰは、膜タイプマトリックス金属プロテイナー
ゼ−２（Will,H.and Hinzmann,B.Eur.J.Biochem.231:60
2-608,1995）；膜タイプマトリックス金属プロテイナー
ゼ−１（Sata,H.et al.,Nature370:61-65,1994）；膜タ
イプマトリックス金属プロテイナーゼ−４（Puente,X.
S.et al.,Cancer Res.56:944-949,1996）を包含する。
ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドは「成熟」蛋白の形態であ
ってもよく、あるいは融合蛋白のごとき大型の蛋白の一
部であってもよい。分泌またはリーダー配列、プロ配
列、複数のヒスチジン残基のごとき精製を促進する配
列、または組み換え生産を行っている間の安定性のため
のさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含んでい
ることがしばしば有利である。

【００１２】生物学的に活性のあるＨＣＥ３Ｐ８３のフ
ラグメントも本発明に含まれる。フラグメントは、前述
のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドのアミノ酸配列のすべて
ではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドである。ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド
については、フラグメントは「独立して存在するもの
（free standing）」であるか、あるいはより大きなポ
リペプチド内に含まれていてもよく、その中でフラグメ
ントは一部分もしくは領域を形成している。最も好まし
くは、単一の連続した領域として、より大きなポリペプ
チドに含まれる。本発明ポリペプチドフラグメントの典
型例は、例えば、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドのアミノ
酸番号約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８
０、８１〜１００および１０１から末端までからなるフ
ラグメントを包含する。この意味において、「約」と
は、片方の端または両端において、示された数よりも数
個、５個、４個、３個、２個または１個多いかまたは少
ない範囲を含む。好ましいフラグメントは、例えば、ア
ミノ末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末
端を含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端
でもう一方がカルボキシ末端を含む２種の一連の残基が
欠失していること以外はＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドの
アミノ酸配列を有する末端切断ポリペプチドを包含す
る。また、構造的または機能的属性により特徴づけられ
るフラグメント、例えばアルファーヘリックスおよびア
ルファーヘリックス形成領域、ベータシートおよびベー
タシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コイ
ルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、ア
ルファー両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領
域、表面形成領域、基質結合領域、および高抗原性指標
領域を含むフラグメントなども好ましい。受容体活性を
媒介する、生物学的に活性な領域も好ましく、類似の活
性もしくは改善された活性のある、または望ましくない
活性を減じたフラグメント等がある。動物、とりわけヒ
トにおいて抗原的または免疫原的なフラグメントもまた
含まれる。

【００１３】よって、本発明ポリペプチドは、配列番
号：２に対して少なくとも５９％の同一性を有するアミ
ノ酸配列を有するポリペプチド、または配列番号：２の
対応フラグメントに対して少なくとも５９％の同一性を
有するそのフラグメントを包含する。好ましくは、これ
らのポリペプチドのすべては、抗原的活性を包含する受
容体の生物学的活性を保持している。上記配列およびフ
ラグメントの変種もこのグループに含まれる。好ましい
変種は、保存的アミノ酸置換により変化したものであ
り、すなわち、同様の特徴を有するアミノ酸により置換
されているものである。典型的なかかる置換は、Ａｌ
ａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈ
ｒ間；ＡｓｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；
ならびに塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳
香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間におけるものである。数
個、５ないし１０個、１ないし５個、または１ないし２
個のアミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失また
は付加されている変種が特に好ましい。

【００１４】いずれの適当な方法でも本発明ＨＣＥ３Ｐ
８３ポリペプチドを製造することができる。かかるポリ
ペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法
によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、また
はこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含
する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野におい
て充分理解されている。

【００１５】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう１つの態様は、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチ
ドをコードしている単離ポリヌクレオチドおよびそれに
密接に関連しているポリヌクレオチドに関する。図１−
４のＨＣＥ３Ｐ８３遺伝子（配列番号：１）は、膜タイ
プマトリックス金属蛋白−３(Takino,T. et al.,J.Bio
l.Chem.270:23013-23020,1995)に対して９９５個のヌク
レオチドにおいて約６５％の同一性を有する（FASTAを
用いた場合）。他の関連ポリヌクレオチド配列は、膜タ
イプマトリックス金属プロテイナーゼ−２（Will,H.and
Hinzmann,B.Eur.J.Biochem.231:602-608,1995）；膜タ
イプマトリックス金属プロテイナーゼ−１（Sato,H.et
al.,Nature 370:61-65,1994）；膜タイプマトリックス
金属プロテイナーゼ−４（Puente,X.S.et al.,Cancer R
es.56:944-949,1996）である。

【００１６】標準的クローニングおよびスクリーニング
を用い、ヒト・好中球（活性化されたもの）、ヒト・胎
児脳およびヒト・白血球細胞のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ
ライブラリーから、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Adam
s,M.D.,et al.Science(1991)252:1651-1656;Adams,M.D.
et al.,Nature(1992)355:632-634;Adams,M.D.,et al.,N
ature(1995)377 Supp:3-174）を用いて、ＨＣＥ３Ｐ８
３をコードしている本発明の１のポリヌクレオチドを得
てもよい。ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然起源
から本発明ポリヌクレオチドを得ることもでき、あるい
はよく知られ市販されている手段方法を用いて合成する
こともできる。

【００１７】よって、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドをコ
ードしているヌクレオチド配列は図１−４（配列番号：
１）のコーディング配列に対してその全長にわたり同一
であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチド
をコードしているこのヌクレオチド配列の縮重形態であ
ってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチドをコ
ードしているヌクレオチド配列に対して非常に高い同一
性を有するものであってもよい。好ましくは、本発明ポ
リヌクレオチドは、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドをコー
ドしているヌクレオチド配列に対して高い同一性、少な
くとも６５％の同一性を有するヌクレオチド配列、ある
いは図１−４（配列番号：１）に示すヌクレオチド配列
に対して少なくとも６５％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列、あるいは配列番号：２のポリペプチドをコード
しているヌクレオチド配列に対して少なくとも６５％の
同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

【００１８】本発明ポリヌクレオチドをＨＣＥ３Ｐ８３
ポリペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレ
オチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグ
メントのコーディング配列を含むものであってもよく；
あるいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟
ポリペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を
含むものであってもよい。他のコーディング配列として
は、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プ
レプロ蛋白配列をコードするコーディング配列、または
他の融合ペプチド部分が挙げられる。例えば、融合ポリ
ペプチドの精製を促すマーカー配列をコードしていても
よい。本発明のこの態様の１の好ましい具体例におい
て、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）
中に提供されるようなヘキサ−ヒスチジンペプチド（Ge
ntzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，86:821-824（1989）
に記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，37:7
67（1984））である。本発明のポリヌクレオチドはま
た、構造遺伝子および遺伝子発現を調節する天然の配列
をも含むが、これらに限定するものではない。ポリヌク
レオチドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグ
ナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配
列、イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻
訳配列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディ
ング配列のごとき非コーディング５'および３'配列を含
有していてもよい。とりわけ好ましい本発明の具体例
は、図１−４（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有
するＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドをコードしているポリ
ヌクレオチド、およびそれらの変種である。さらに好ま
しい具体例は、図１−４に示すＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプ
チドのアミノ酸配列（配列番号：２）を含むＨＣＥ３Ｐ
８３変種をコードしているポリヌクレオチドであり、数
個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３個、１
ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれかの組み
合わせで置換、欠失または付加されているものである。
さらに好ましい本発明の具体例は、図１−４（配列番
号：２）に示すアミノ酸配列を有するＨＣＥ３Ｐ８３ポ
リペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して
その全長にわたり少なくとも６５％同一であるポリヌク
レオチド、およびかかるポリヌクレオチドに対して相補
的なポリヌクレオチドである。この点において、上記ポ
リヌクレオチドに対してその全長にわたり少なくとも８
０％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、少な
くとも９０％同一であるものが特に好ましい。さらにそ
のうえ、少なくとも９７％同一のものが非常に好まし
く、少なくとも９８−９９％のものが最も非常に好まし
く、少なくとも９９％同一のものが最高に好ましい。

【００１９】さらに本発明は、上記配列にハイブリダイ
ゼーションするポリヌクレオチドにも関する。この点に
おいて、本発明は、厳密な条件下で上記ポリヌクレオチ
ドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに特
別に関連する。本明細書の用語「厳密な条件」とは、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起
こることを意味する。

【００２０】配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列
に対して十分に同一である本発明ポリヌクレオチドをｃ
ＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーション
プローブとして用いて全長のｃＤＮＡおよびＨＣＥ３Ｐ
８３をコードしているゲノムクローンを単離し、またＨ
ＣＥ３Ｐ８３遺伝子に対して高い類似性を有する配列を
有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単
離してもよい。かかるハイブリダイゼーション法は当業
者に知られている。典型的には、これらのヌクレオチド
配列は、対照に対して７０％、好ましくは８０％、より
好ましくは９０％の同一性を有する。一般的には、プロ
ーブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む。好まし
くは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレオチ
ドを有し、少なくとも５０個のヌクレオチドを有してい
てもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０個の
範囲のヌクレオチドを含む。本発明ポリヌクレオチドお
よびポリペプチドを、動物およびヒトの疾病の研究試薬
ならびに治療および診断のための材料として用いてもよ
い。

【００２１】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作される宿主細胞および組換え技法による本発明のポ
リペプチドの製造にも関する。本発明のＤＮＡ構築物に
由来するＲＮＡを用いる、かかる蛋白の製造に無細胞翻
訳系を用いてもよい。組換え体を製造するために、宿主
細胞を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、
または本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができ
る。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、
Davisら、Basic Methods in Molecular Biology（198
6）；Sambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory M
anual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラ
ボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバ
ー、ニューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実
験マニュアルに記載される方法により行うことができ、
例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランス
ベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質
媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、
トランスダクション、スクレイプ負荷（scrapeloadin
g）、バリスティック導入（ballistic introduction）
および感染等がある。

【００２２】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（Streptococci）、ブドウ球菌属
（Staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セス（Streptomyces）および枯草菌（Bacillus subtii
s）細胞；真菌細胞例えば酵母細胞およびアスペルギル
ス属（Aspergillus）細胞；昆虫細胞例えばショウジョ
ウバエＳ２（Drosophila S2）およびスポドプテラＳｆ
９（Spodoptera Sf9）細胞；動物細胞例えばＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３お
よびボウズ（Bows）黒色腫細胞；ならびに植物細胞等が
ある。

【００２３】非常に多くの発現系を使用できる。かかる
系は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせた物に由来す
るベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファー
ジ遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミド
およびファージミドを包含する。発現系は、発現を制御
ならびに発生させる制御領域を含有していてもよい。一
般的には、宿主中でポリヌクレオチドを保持、伸長また
は発現してポリペプチドを発現するのに適した系または
ベクターを用いてもよい。例えばSambrookら、Molecula
rCloning，A Laboratory Manual（上述）に記載されて
いるような周知のおよび常套的な種々の技術により、適
当なＤＮＡ配列を発現系に挿入できる。

【００２４】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを所望ポリペプチド中に含ませてもよ
い。これらのシグナルはポリペプチドに本来的なもので
あってもく、あるいは異種性のシグナルでもよい。

【００２５】ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドをスクリーニ
ングアッセイのために発現させる場合、一般的には、細
胞表面にポリペプチドを生成させるのが好ましい。この
場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集
めてもよい。ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドを培地中でス
クリーニングする場合、培地を回収してポリペプチドを
回収し精製することができる。細胞内に生成される場
合、まず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収し
なければならない。ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドは周知
の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製で
き、その方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノ
ール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマ
トグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、
疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
およびレクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体
クロマトグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。
ポリペプチドが単離および／または精製中に変性した場
合、再び活性な立体配座にするために、蛋白再生のため
の周知の技法を用いることができる。

【００２６】診断アッセイ 本発明はまた診断試薬としての本発明ＨＣＥ３Ｐ８３ポ
リヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関連した
変異形態のＨＣＥ３Ｐ８３遺伝子の検出により、ＨＣＥ
３Ｐ８３の発現不足、過剰発現または変化した発現から
生じる疾病またはかかる疾病に対する感受性の診断に付
加でき、かかる診断を決定づける診断手段が提供される
であろう。種々の方法によりＤＮＡレベルでＨＣＥ３Ｐ
８３遺伝子における変異を有する個体を検出してもよ
い。診断用の核酸は、対象の細胞、例えば血液、尿、唾
液、組織生検または剖検材料から得てもよい。ゲノムＤ
ＮＡは検出に直接使用できるか、または分析の前にＰＣ
Ｒもしくはその他の増幅法を用いることにより酵素的に
増幅できる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同様の方法で用い
ることができる。正常な遺伝子型と比較した場合の増幅
生成物のサイズの変化により、欠失および挿入を検出す
ることができる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識化Ｈ
ＣＥ３Ｐ８３ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズさ
せることにより同定できる。好ましくは、完全に対合し
た配列は、ＲＮアーゼ消化または融解温度の差により、
誤対合二重らせんから区別できる。ＤＮＡ配列の差はま
た、変性剤含有または不含のゲル中のＤＮＡフラグメン
トの電気泳動の移動度の変化を検出することにより、ま
たは直接的なＤＮＡの配列決定により検出できる。例え
ばMeyers et.al.Science，230:1242（1985）参照。特異
的な位置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッ
セイ例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断
法によっても明らかにすることができる。例えばCotton
et al.Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，85:4397-4401（198
5）参照。もう１つの具体例において、ＨＣＥ３Ｐ８３
ヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含むオリゴ
ヌクレオチドプローブのアレイ(array）を構築して、例
えば、遺伝学的変異の効果的なスクリーニングを行なう
こともできる。アレイ法はよく知られており、適用範囲
が広く、遺伝子発現、遺伝学的連関、および遺伝学的変
化を包含する分子遺伝学における種々の問題を調べるた
めに使用することができる。例えば、M.Chee et al.,Sc
ience,vol.274,pp610-613 (1996)参照。

【００２７】診断アッセイは、本明細書記載の方法によ
りＨＣＥ３Ｐ８３遺伝子の変異を検出することにより、
アルツハイマー病、卒中、癌、炎症、関節炎、筋骨格疾
患、心臓疾患および腎臓疾患に対する感受性の診断また
は決定方法を提供する。

【００２８】さらに、対象由来の試料の異常に上昇また
は低下したＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドもしくはＨＣＥ
３Ｐ８３ ｍＲＮＡレベルを調べることを特徴とする方
法によって、アルツハイマー病、卒中、癌、炎症、関節
炎、筋骨格疾患、心臓疾患および腎臓疾患を診断するこ
とができる。減少または増加した発現は、ポリヌクレオ
チドの定量法として当該分野で周知の方法の任意の方
法、例えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノ
ーザンブロッティングおよびその他のハイブリダイゼー
ション法を用いて測定できる。宿主由来の試料中の蛋白
レベル、例えばＨＣＥ３Ｐ８３のレベルを決定するため
に用いることができるアッセイ法は、当業者に周知であ
る。このようなアッセイ法には、ラジオイムノアッセ
イ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット分析および
ＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００２９】染色体アッセイ 本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。本発明配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置
を標的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本
発明による重要な部分の染色体へのマッピングは、それ
らの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程
である。配列を正確な染色体位置にマッピングしたなら
ば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデー
タと関連づけることができる。かかるデータは、例え
ば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns
Hopkins University Weich Medical Libraryからオン
ラインで利用できる）に見いだされる。次いで、連関
（物理的に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、
同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関
係を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡ
またはゲノム配列の相違も調べることができる。罹病個
体のいくつかまたは全部において変異が観察されるが正
常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の
原因である可能性がある。

【００３０】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそ
れらを発現する細胞は、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドに
対して免疫特異的な抗体を産生する免疫原として用いる
ことができる。本明細書で用いる「免疫特異的」とは、
抗体が、先行技術における他の関連ポリペプチドに対し
てよりも、本発明ポリペプチドに対して実質的に大きい
アフィニティーを有することを意味する。本発明のポリ
ペプチドに対して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエ
ピトープが付いたフラグメント、アナログまたは細胞
を、好ましくはヒトはでない動物に、通常の実験法を用
いて投与することにより得ることができる。連続的細胞
系培養により産生される抗体を提供する、当業者周知の
技術を用いて、モノクローナル抗体を調製することがで
きる。例としては、Kohler,G. and Milstein,C.，Natur
e，256:495-497（1975）；Kozbor et al.Immunology To
day，4:72（1983）；Cole et al.Monoclonal Antibodie
s and Cancer Therapy,Alan R Liss,Inc.,77-96頁（198
5）に記載されるような種々の技法がある。

【００３１】一本鎖抗体の産生のために記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプ
チドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。ま
た、トランスジェニックマウスまたはその他の生物、例
えばその他の哺乳動物は、ヒト化抗体等の抗体を発現す
るのに用いることができる。上記抗体を用いて、ポリペ
プチドを発現するクローンを単離または同定してもよ
く、あるいはアフィニティークロマトグラフィーにより
ポリペプチドを精製してもよい。

【００３２】ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドに対する抗体
を用いて、アルツハイマー病、卒中、癌、炎症、関節
炎、筋骨格疾患、心臓疾患および腎臓疾患を治療しても
よい。

【００３３】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を
誘導する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ
細胞免疫応答を生じさせるに十分なＨＣＥ３Ｐ８３また
はそれらのフラグメントを哺乳動物に接種して、アルツ
ハイマー病、卒中、癌、炎症、関節炎、筋骨格疾患、心
臓疾患および腎臓疾患から該動物を防御することを特徴
とする。本発明のもう１つの態様は、哺乳動物における
免疫学的応答を誘導する方法に関し、該方法は、ＨＣＥ
３Ｐ８３ポリペプチドをインビボで発現させるベクター
を介してＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドを送達し、かかる
免疫学的応答を誘導して該動物を疾患から保護する抗体
を生させることを特徴とする。

【００３４】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）に関するものであり、それは、哺乳動
物宿主中に導入された場合、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチ
ドに対する哺乳動物の免疫学的応答を誘導する。該組成
物はＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたはＨＣＥ３Ｐ８３
遺伝子を含んでなる。ワクチン処方は、さらに適当な担
体を含んでいてもよい。ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドは
胃で分解される可能性があるので、好ましくは非経口投
与する（皮下、筋肉内、静脈、皮内等への注射を包
含）。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファ
ー、静細菌剤および処方を受容者の血液と等張にする溶
質を含んでいてもよい水性または非水性滅菌注射用溶
液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい水
性または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回量ま
たは複数回量として容器に入れて提供してもよく、例え
ば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提供してもよ
く、また使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要とす
る凍結乾燥状態として保存してもよい。またワクチン処
方は、水中油系および当該分野で知られた他の系のごと
き処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を含ん
でいてもよい。用量は、個々のワクチンの活性に左右さ
れ、通常の実験により容易に決定することができる。

【００３５】スクリーニングアッセイ 本発明受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化（ア
ゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物の
スクリーニングプロセスにおいて本発明ＨＣＥ３Ｐ８３
を用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用い
て、小型分子基質とリガンドとの結合を、例えば細胞、
無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物
において評価してもよい。これらの基質およびリガンド
は天然の基質およびリガンドであってもよく、あるいは
構造または機能を模倣したものであってもよい。Coliga
n et al.,Current Protocols in Immunology 1(2):Chap
ter5(1991)参照。

【００３６】ＨＣＥ３Ｐ８３蛋白は哺乳動物宿主に広く
存在し、多くの生物学的機能に関与しており、多くの病
気にもかかわっている。したがって、ＨＣＥ３Ｐ８３を
刺激する化合物および薬剤、あるいはまたＨＣＥ３Ｐ８
３を阻害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望ま
れる。一般的には、アルツハイマー病、卒中、癌、炎
症、関節炎、筋骨格疾患、心臓疾患および腎臓疾患のご
とき状態を治療または予防するためにアゴニストが用い
られる。アルツハイマー病、卒中、癌、炎症、関節炎、
筋骨格疾患、心臓疾患および腎臓疾患のごとき状態の種
々の治療または予防のためにアンタゴニストを用いても
よい。

【００３７】一般的には、かかるスクリーニング手順
は、細胞表面に本発明受容体ポリペプチドを発現する適
当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動
物由来の細胞、酵母、ショウジョウバエ（Drosophila）
または大腸菌（E.coli）を包含する。次いで、受容体発
現細胞（または発現された受容体を含む細胞膜）を試験
化合物と接触させて、結合または機能的応答の刺激もし
くは阻害を観察する。

【００３８】ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドを発現してい
る細胞（または発現ポリペプチドを含む細胞膜）は、潜
在的治療阻害剤の同定目的の高処理量スクリーニングの
開発に使用できる。さらに、「ヌル（null）」細胞にお
いて発現されたＨＣＥ３Ｐ８３を用いて、発現ポリペプ
チドの生理学的および病理学的特性を調べることもでき
る。そのアッセイは候補化合物の結合を試験するだけで
よく、候補化合物に直接的または間接的に結合した標識
を用いることにより、あるいは標識競争物質との競争を
用いるアッセイにおいて、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド
を有する細胞への付着を検出する。さらに、これらのア
ッセイにおいて、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドを表面に
有する細胞に適する検出系を用いて、候補化合物がＨＣ
Ｅ３Ｐ８３の活性化により発生するシグナルを生じるか
どうかを試験してもよい。一般的には、既知アゴニスト
存在下において活性化阻害剤をアッセイし、アゴニスト
による活性化に対する候補化合物の存在の影響を観察す
る。かかるスクリーニングアッセイを行うための標準的
方法は当該分野においてよく理解されている。潜在的な
ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドのアンタゴニストの例は抗
体を包含し、いくつかの場合には、リガンド、基質、受
容体等に密接に関連したオリゴヌクレオチドまたは蛋白
を包含し、さらにリガンド、基質、受容体のフラグメン
ト、またはポリペプチドに結合するが応答を誘発せずに
ポリペプチド活性を妨げる小型分子等がある。

【００３９】予防および治療方法 本発明は、過剰または不十分な量のＨＣＥ３Ｐ８３活性
に関連する異常な状態の治療方法を提供する。ＨＣＥ３
Ｐ８３活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いること
ができる。１の方法は、有効量の上記阻害剤化合物（ア
ンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に
投与して、ＨＣＥ３Ｐ８３へのリガンドの結合をブロッ
クすることあるいは第２のシグナルを阻害することによ
り活性化を阻害し、そのことにより異常な状態を改善す
ることを特徴とする。

【００４０】もう１つのアプローチにおいて、内在性Ｈ
ＣＥ３Ｐ８３と競争してリガンドに結合する能力をやは
り有している可溶性形態のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド
を投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例は
ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドのフラグメントを含む。

【００４１】さらにもう１つの方法において、発現ブロ
ック法を用いて内在性ＨＣＥ３Ｐ８３をコードしている
遺伝子の発現を阻害してもよい。知られているかかる方
法には、細胞内で生成した、あるいは別個に投与された
アンチセンス配列を用いる。例えば、Oligodeoxynucleo
tides as Antisense Inhibitors of Gene Expression,C
RC Press,Boca Raton, FL(1988)中、O'Connor,J.Neuroc
hem(1991)56:560を参照のこと。別法として、遺伝子と
ともに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを提供
してもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res(1
979)6:3073;Cooney et al.,Science(1988)241:456;Derv
an et al.,Science(1991)251:1360参照。これらのオリ
ゴマーはそれ自体投与することができ、あるいは関連オ
リゴマーをインビボで発現させることもできる。

【００４２】ＨＣＥ３Ｐ８３およびその活性の発現不足
に関連する異常な症状の治療には、いくつかの方法が用
いられる。１の方法は、ＨＣＥ３Ｐ８３を活性化する治
療上有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬
上許容される担体とともに投与し、そのことにより異常
な状態を改善することを特徴とする。別法として、遺伝
子治療を用いて、対象中の細胞によるＨＣＥ３Ｐ８３の
細胞内での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記
のごとく本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠
損レトロウイルスベクターに入れて発現するようにして
もよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、
本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレト
ロウイルスプラスミドベクターでトランスダクションし
たパッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージ
ング細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成
するようにしてもよい。これらのプロデューサー細胞を
対象に投与して細胞をインビボで処理加工して、インビ
ボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺伝子
治療の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Str
achan and A.P.Read,BIOS Scientific Publishers Ltd
(1986)中、第２０章、Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches（およびそ
の中の引用文献）参照。

【００４３】処方および投与 可溶性形態のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドのごときペプ
チド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチ
ドまたは小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処
方してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプ
チドまたは化合物、および医薬上許容される担体または
賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライ
ン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロ
ール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられる
が、これらに限らない。処方は投与経路に適したものと
すべきであり、当業者によく知られている。さらに本発
明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填し
た、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パック
およびキットにも関する。

【００４４】本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。

【００４５】必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。

【００４６】しばしば「遺伝子治療」と称される上記治
療方法において、治療に使用するポリペプチドを対象中
において生成させることもできる。よって、例えば、レ
トロウイルスプラスミドベクターを用いることにより、
ポリペプチドをコードしているＤＮＡまたはＲＮＡのご
ときポリヌクレオチドを用いて対象由来の細胞をエクス
ビボで処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に導入
する。

【００４７】

【実施例】特記しないかぎり、当業者によく知られた標
準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明を
例示説明するものであり、本発明を限定するものではな
い。 実施例１：クローニング方法 まず、４つの既知ＭＴ−ＭＭＰの膜貫通ドメインについ
ての配列データを用いて、配列決定されたヒト・ＥＳＴ
（Adamsらの上記文献参照）のコレクションを含むデー
タベースを検索することにより、部分クローン（ATG 84
4,HGS EST # 808618）を同定した。この部分クローン
（２．７ｋｂ、Ｃ末端領域の９７残基をコード）はＭＴ
−ＭＭＰ−３に対する有為な相同性を示した。全長のク
ローンを得るため、First Human Skeletal muscle ｃＤ
ＮＡ（Marathon Ready, Clontech,Palo Alto,CA）をネ
スティッドアンチセンスプライマーとともに使用して失
われた５’領域を増幅した。ＰＣＲ条件は以下のとお
り：９４℃で１分；５サイクル：９４℃で３０秒；７２
℃で４分；５サイクル：９４℃で３０秒；７０℃で４
分；２５サイクル：９４℃で３０秒；６８℃で４分。８
００ｂｐの生成物が得られ、このフラグメントをＰＣＲ
２．１ベクター（Invitrogen,San Diego,CA）中にサブ
クローンし、配列決定した。このフラグメントは上記部
分クローンをさらに２４０残基伸長したものであった。
新たな配列に基づいて新たな逆Marathonオリゴを設計
し、ヒト・全脳ｃＤＮＡ（Marathon Ready,Palo Alto,C
A）とともにＰＣＲ反応に使用した。ＰＣＲ条件は最初
の反応と同一であった。４００ｂｐの生成物を得て、こ
れをサブクローンし、配列決定したところ、これは上記
配列をさらに伸長したものであり、ここに全コーディン
グ配列が得られた。上記結果を確認するために、ヒト・
小脳ｃＤＮＡ(Marathon Ready）を上記ＰＣＲプライマ
ーおよび条件とともに鋳型として用いることにより類似
のフラグメントを得た。最終的な全長ｃＤＮＡは９７５
ｂｐであり、３２４個のアミノ酸をコードしている。全
長の遺伝子を得るために、２セットのネスティッドプラ
イマーを設計した。第１のセットの配列は５’センス
５’−ＧＧＡＴＡＡＡＣＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＧＴ
ＧＡＡＣＧＴＧＧ−３’（配列番号：３）および３’ア
ンチセンスプライマー：５’−ＣＡＧＣＴＧＴＡＧＧＡ
ＣＣＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧ−３’（配列番号：４）で
あり、第２のセットの配列は５’センス ５’−ＣＧＡ
ＧＧＴＧＡＡＴＴＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧ
ＡＣＧＡＴＣＴＣ−３’（配列番号：５）および３’ア
ンチセンスプライマー：５’−ＣＴＡＧＡＡＣＴＡＧＴ
ＴＴＡＴＡＧＴＡＧＧＴＧＡＣＡＧＧＣＴ−３’（配列
番号：６）であった。サブクローン目的でＥｃｏＲＩお
よびＳｐｅＩ制限部位を第２のプライマーのセット中に
設計した。ヒト・全脳Gene Trapper Library(Gibco, BR
L Bethesda,MD）を鋳型として上記プライマーとともに
使用した。このＰＣＲからの最終生成物は予想どおり１
ｋｂのフラグメントであった。

【００４８】

【配列表】

【００４９】（１）一般的情報： （ｉ）出願人：アーレス，アンソニー アーノルド，アン ウスマン，シャボン （ｉｉ）発明の名称：新規膜タイプマトリックス金属プ
ロテイナーゼ−５遺伝子 （ｉｉｉ）配列の数：６ （ｖｉ）連絡先： （Ａ）宛て名：ラトナー・アンド・プレスティア （Ｂ）通り名：ピー・オー・ボックス９８０ （Ｃ）都市名：バレー・フォージュ （Ｄ）州名：ペンシルベニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４８２ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖｉ）本願のデータ： （Ａ）出願番号：まだ付与されていない （Ｂ）出願日：これと同日 （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号：０８／８１６７５５ （Ｂ）出願日：１９９７年３月６日 （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：プレスティア，ポール・エフ （Ｂ）登録番号：２３０３１ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ５０００７ （ｘｉ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６１０−４０７−０７００ （Ｂ）ファックス番号：６１０−４０７−０７０１ （Ｃ）テレックス：８４６１６９

【００５０】（２）配列番号：１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３８０７塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： GAATTCGGCT TCCGATGGTG AGTGGATCCT GCGGACGGGA TGATGAAAGC ATGGGTGAGG 60 GGAGAAGACC CTAAACAGCT GTCTTTGTTA GTCCCCGCCC ACCTGGCCGG GATGCCAGCA 120 ACAAGGCCAC CTGCAGTCTG CCCTGCCCTT CCTCCCCTCA GTGGCTTTGA AGGCAGGTGT 180 CCTTGAAGCT AAGCTCTGCT GGCTGCAGGT AAAACCACAG GTGGGGGAGT TCTCTGAGAC 240 CTAGGAGCTG GGGTGTACGG AGACCTGCCC GGGCGGCCGC TGAATTCTAG GTCTTGGATA 300 AACTGAAAGC TTAGCGTGAA CGTGGTATCA CCATTGATAT CTCCTTGTGG AAATTTGAGA 360 CCAGCAAGTA CTATGTGACT ATCATGGATG CCCCAGGACG ATCTCCAGGG CATCCCGAAG 420 ATCTATGGAC CCCCAGCCGA GCCTCTGGAG CCTACAAGGC CACTCCCTAC ACTCCCCGTC 480 CGCAGGATCC ACTCACCATC GGAGAGGAAA CACGAGCGCC AGCCCAGGCC CCCTCGGCCG 540 CCCTCGGGGG ACCGGCCATC CACACCAGGC ACCAAACCCA ACATCTGTGA CGGCAACTTC 600 AACACAGTGG CCCTCTTCCG GGGCGAGATG TTTGTCTTTA AGGATCGCTG GTTCTGGCGT 660 CTGCGCAATA ACCGAGTGCA GGAGGGCTAC CCCATGCAGA TCGAGCAGTT CTGGAAGGGC 720 CTGCCTGCCC GCATCGACGC AGCCTATGAA AGGGCCGATG GGAGATTTGT CTTCTTCAAA 780 GGTGACAAGT ATTGGGTGTT TAAGGAGGTG ACGGTGGAGC CTGGGTACCC CCACAGCCTG 840 GGGGAGCTGG GCAGCTGTTT GCCCCGTGAA GGCATTGACA CAGCTCTGCG CTGGGAACCT 900 GTGGGCAAGA CCTACTTTTT CAAAGGCGAG CGGTACTGGC GCTACAGCGA GGAGCGGCGG 960 GCCACGGACC CTGGCTACCC TAAGCCCATC ACCGTGTGGA AGGGCATCCC ACAGGCTCCC 1020 CAAGGAGCCT TCATCAGCAA GGAAGGATAT TACACCTATT TCTACAAGGG CCGGGACTAC 1080 TGGAAGTTTG ACAACCAGAA ACTGAGCGTG GAGCCAGGCT ACCCGCGCAA CATCCTGCGT 1140 GACTGGATGG GCTGCAACCA GAAGGAGGTG GAGCGGCGGA AGGAGCGGCG GCTGCCCCAG 1200 GACGACGTGG ACATCATGGT GACCATCAAC GATGTGCCGG GCTCCGTGAA CGCCGTGGCC 1260 GTGGTCATCC CCTGCATCCT GTCCCTCTGC ATCCTGGTGC TGGTCTACAC CATCTTCCAG 1320 TTCAAGAACA AGACAAGGCC CTCAGCCTGT CACCTACTAT AAGCGGCCAG TCCAGGAATG 1380 GGTGTGAGCA GCCCAGAGCC CTCTCTATCC ACTTGGTCTG GCCAGCCAGG CCCTTCCTCA 1440 CCAGGGTCTG AGGGGCAGCT CTGGCCAGTG CTCACCAGGG CCAGCAGGGC CCTAGGCTGG 1500 GGTCGTACAG CTGAAGTGGT GGGTGCATTG GCCTAGGCTG AGCGTGGGGC AGGGAATTAT 1560 GGGGGCTGTG CCCCAGGGTG GGTGTCTGGC ACCCAGCTGC CAGCCTTCTG TCCTGGGCAA 1620 ACTACTCCCT ACTTAAGGGA ATAGGCCAGG CTCCATCCGG AGGCAGGGAC CATGCCAGGA 1680 GGAGCCCCTG TGGTCACGGC ATCCTGTGGT GTCCATGAGG TACCACAGCT CCACTCCTGG 1740 CTGGAACCCA GCACCCTCTG TGGGAAGCCA GCACTAGCTC TCATCCCCCA TCCGGGAGAT 1800 ACCACCAGTC CTGGTCCCCT TTTGCCAACA CCTGCTGGTC ATATGTCCCC CTACCCNNAC 1860 CCCACTGTCC TCCAGNGCTA CAGGACCCCT GCTTNTGACA CAGTGAGCAA CAAGCCTGGG 1920 TTTCCCTGCT GGCAGACGGC AGATCCCTCA GGNAACCTGC TCCACTTGTC AGGGTCTCTT 1980 CGGAGACCCA GGATTTAGGG TCACATGCTG CAGGCAGGGC TNTGGNCNAG CTGGGTCTTA 2040 CAAGGACCCA GCNTGTCANA TCGTGANTAT TTAAATGTNC TGTTAATNAT TGTCCCATTT 2100 TGCAAAGGCT GCTTGAGGCT TTAGGTGAAC TAGAGGTGAC TGTCTTGGTG ATGAGGCCAG 2160 CATAGCGGCC CTCCCCCAGG CGACAAGGAC CAAGGTGCTG CTAAGGCCAC TCTAGCGCCC 2220 AGACACCCCA GTAGCTGAGC TCTGCTCCTA TGGCTACAGA GCTGGGGCAG AAGCTGACCC 2280 CATTTCTGGA GGAAGATCCG AGTTTGTGAC CGTCCTCCAC TCCCCTCTAT TGTCACTGTC 2340 CCCAGCTTTG CTCCAGTCTG TCACTTGCAG CCTGGAGCTC AGCCTCACCA GTTAGGTGAG 2400 GCAGGAGATG GCTGCAGGGC CAACACTGGC AGAGCCTGGG GAGTCCTTCG GAAGGGGACC 2460 AGGGCGTCTG AAGTGCTCAG TGCCCCCACT ACTCTGAGGC CGACTCCAGC TACTCTGAGG 2520 CCGACTCAAT CTCTCGGCTG GAAGCAGTGT TTTCCCAGAG CTTGGCCCTT GCTGACCTCG 2580 CTCACTGGGC CCATCTTCCC ACACTGCTCT TAGAAGGACA CCCCTACCGG TAGCAGCCCC 2640 AAGCTGAGGG GGCTCCCTTT TTGACCTTCA CTGGCCCGCC CTTCACTGTC TCCAGCAGGA 2700 GTTCCTAGGG CTTGGCCTGC CTTGCTCCAC AGTACGGCGG AGGCAGCCCT GCTTGTCACT 2760 GAGGAGCCCT AGACAAGGCC AATGGGTTCA TCAATGCCCA CTGGCTCTCT GCCAAAGCCA 2820 AAAAGGTGTC AGGCAGTCTC CAGCGTGCTG GCCGGGTCTC GGATGCCACC CCTGCTCACT 2880 GAGCCTGCAT GGGCCTTGCC CCGGACCCTG TGGTCTCTGG GATTGGGGTC GGCTTACCCT 2940 GTAGCACAGA CAGGGACTCC TGCTGCCCTG GGGAGCTGTC TTAAGCAAAA TCTCTTGTTC 3000 CCAGAGGTTG CCCATGTTGG TTCCGTTGTT GTTCCCTGTT CATCATCCTT GTTTTTTCTT 3060 CATTTTGGCC AAGGGAGGGT TCTTGGGACA GGCAGGGAAC AATTGCGGAG ATATTAGTGA 3120 TTCATAGGTT TGTACAGTTT TTTATACTTT GCAAAGCACT TTATTAGCTC ACACCTGTCC 3180 ACTCACATGA AACTCGTGTT AGGCCCTGGG AGGCGAACGG TAACTCTCAC CGTGCCCTCA 3240 GATGAAGCAC AGAGAGGTTG TTACTTGCCC GGGCCATCCA GTGGGCTGGC TGGGTCTTGT 3300 GTCCCCATCT GTGGACCCCT CTAGGGTCTG AGATGAGATG AGAAGTGTCT CCTGTATCCA 3360 CCTCTTCCTG GCCTCCCTTC CCCCAACTTC CTGGTCCCTG TCCACTCCTC AGGTTGGTGC 3420 TCTCACTTCT TGAAAGCTCT AGGCACCCCC GCCTCCCGCC AGGCTCCCCA TTGGCTCCTG 3480 GCAGCCCAGC TGAGAATGAA CAGGAGATGG AGGCAGCAGC CCAGGCTGCA GAGGTGAGGG 3540 ATGTGGGGGC CAGGCCCAGA GGGCTCAGCC TAGAGGCTTC CAATCTCAGA TTCTCCTGCC 3600 TGTGGTCATC TGTTTGTCCA TCACCCCAGG ACAGGGCAGA CAGAGGGGCA AAGCACTGGG 3660 GGCCCCAGAG CCTAGCTTCC CCTCAGCCTG GGGGACATCA CAGCATTTCA GTGTCAGTCA 3720 CATTTTAAAC TGATCAGCCT TTGTATAATG TTTTTTAAAT CATTTCTAAA ATAAAACAGA 3780 AATACAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAA 3807

【００５１】（２）配列番号：２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３２４アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：蛋白 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Pro Gln Asp Asp Leu Gln Gly Ile Pro Lys Ile Tyr Gly Pro Pro 1 5 10 15 Ala Glu Pro Leu Glu Pro Thr Arg Pro Leu Pro Thr Leu Pro Val Arg 20 25 30 Arg Ile His Ser Pro Ser Glu Arg Lys His Glu Arg Gln Pro Arg Pro 35 40 45 Pro Arg Pro Pro Ser Gly Asp Arg Pro Ser Thr Pro Gly Thr Lys Pro 50 55 60 Asn Ile Cys Asp Gly Asn Phe Asn Thr Val Ala Leu Phe Arg Gly Glu 65 70 75 80 Met Phe Val Phe Lys Asp Arg Trp Phe Trp Arg Leu Arg Asn Asn Arg 85 90 95 Val Gln Glu Gly Tyr Pro Met Gln Ile Glu Gln Phe Trp Lys Gly Leu 100 105 110 Pro Ala Arg Ile Asp Ala Ala Tyr Glu Arg Ala Asp Gly Arg Phe Val 115 120 125 Phe Phe Lys Gly Asp Lys Tyr Trp Val Phe Lys Glu Val Thr Val Glu 130 135 140 Pro Gly Tyr Pro His Ser Leu Gly Glu Leu Gly Ser Cys Leu Pro Arg 145 150 155 160 Glu Gly Ile Asp Thr Ala Leu Arg Trp Glu Pro Val Gly Lys Thr Tyr 165 170 175 Phe Phe Lys Gly Glu Arg Tyr Trp Arg Tyr Ser Glu Glu Arg Arg Ala 180 185 190 Thr Asp Pro Gly Tyr Pro Lys Pro Ile Thr Val Trp Lys Gly Ile Pro 195 200 205 Gln Ala Pro Gln Gly Ala Phe Ile Ser Lys Glu Gly Tyr Tyr Thr Tyr 210 215 220 Phe Tyr Lys Gly Arg Asp Tyr Trp Lys Phe Asp Asn Gln Lys Leu Ser 225 230 235 240 Val Glu Pro Gly Tyr Pro Arg Asn Ile Leu Arg Asp Trp Met Gly Cys 245 250 255 Asn Gln Lys Glu Val Glu Arg Arg Lys Glu Arg Arg Leu Pro Gln Asp 260 265 270 Asp Val Asp Ile Met Val Thr Ile Asn Asp Val Pro Gly Ser Val Asn 275 280 285 Ala Val Ala Val Val Ile Pro Cys Ile Leu Ser Leu Cys Ile Leu Val 290 295 300 Leu Val Tyr Thr Ile Phe Gln Phe Lys Asn Lys Thr Arg Pro Ser Ala 305 310 315 320 Cys His Leu Leu

【００５２】（２）配列番号：３に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３０塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：３： GGATAAACTG AAAGCTTAGC GTGAACGTGG 30

【００５３】（２）配列番号：４に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２４塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：４： CAGCTGTACG ACCCCAGCCT AGGG 24

【００５４】（２）配列番号：５に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３６塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：５： CGAGGTGAAT TCGCCACCAT GCCCCAGGAC GATCTC 36

【００５５】（２）配列番号：６に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３０塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：６： CTAGAACTAG TTTATAGTAG GTGACAGGCT 30

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト・ＨＣＥ３Ｐ８３のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図２へ続く）。

【図２】 ヒト・ＨＣＥ３Ｐ８３のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図３へ続く）。

【図３】 ヒト・ＨＣＥ３Ｐ８３のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図４へ続く）。

【図４】 ヒト・ＨＣＥ３Ｐ８３のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図３から続く）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＡＭ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＡＭ ＡＣＶ ＡＣＶ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/40 16/40 Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21 1/21 5/10 9/50 9/50 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/68 Ａ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 アン・ロマニック・アーノルド アメリカ合衆国19097ペンシルベニア州ウ ィンウッド、ドーバー・ロード807番 (72)発明者 ウスマン・シャボン アメリカ合衆国19081ペンシルベニア州ス ワースモアー、サウス・スワースモアー・ アベニュー225番

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：２のポリペプチドもしくはそ
   の対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
   に対してその全長にわたり少なくとも８０％の同一性を
   有するヌクレオチド配列または上記ヌクレオチド配列に
   対して相補的なヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレ
   オチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項１のポ
   リヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一
   性を有するものである請求項１のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるものである請求項３のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 コードしているヌクレオチド配列が配列
   番号：２のポリペプチドまたはそのフラグメントをコー
   ドしているものである請求項１のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくと
   も１５個の連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチ
   ドプローブまたはプライマー。
7. 【請求項７】 適合する宿主細胞中に存在する場合に、
   配列番号：２のポリペプチドまたはそのフラグメントを
   コードしているヌクレオチド配列に対してその全長にわ
   たり少なくとも８０％の同一性を有するＨＣＥ３Ｐ８３
   ポリペプチドまたはそのフラグメントを生成する能力の
   ある発現系を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７の発現系を含む宿主細胞。
9. 【請求項９】 ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたはフラ
   グメントの製造方法であって、該ポリペプチドまたはフ
   ラグメントの生成に十分な条件下で請求項８の宿主を培
   養することを特徴とする方法。
10. 【請求項１０】 該ポリペプチドまたはフラグメントが
    該細胞の表面に発現される請求項９の方法。
11. 【請求項１１】 請求項１０の方法により製造される細
    胞。
12. 【請求項１２】 ポリペプチドまたはフラグメントを培
    地から回収することをさらに特徴とする請求項９の方
    法。
13. 【請求項１３】 請求項７の発現系で宿主細胞を形質転
    換またはトランスフェクションして、適当な培養条件下
    で宿主細胞がＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたはそのフ
    ラグメントを生成するようにすることを特徴とする、Ｈ
    ＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたはそのフラグメントを生
    成する細胞の製造方法。
14. 【請求項１４】 配列番号：２に含まれるアミノ酸配列
    に対してその全長にわたり少なくとも８０％同一である
    アミノ酸配列を含むＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたは
    そのフラグメント。
15. 【請求項１５】 配列番号：２のアミノ酸配列またはそ
    のフラグメントを含む請求項１４のポリペプチド。
16. 【請求項１６】 請求項１２の方法により製造されるＨ
    ＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドまたはフラグメント。
17. 【請求項１７】 請求項１４のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプ
    チドに免疫特異的な抗体。
18. 【請求項１８】 増強されたＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチ
    ド活性が必要な対象の治療方法であって、 （ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアゴニス
    トを対象に投与すること；および／または（ｂ）インビ
    ボで該ポリペプチド活性を生じさせる形態のＨＣＥ３Ｐ
    ３８ポリヌクレオチドを対象に与えることを特徴とする
    方法。
19. 【請求項１９】 ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド活性の阻
    害が必要な対象の治療方法であって、 （ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアンタゴ
    ニストを対象に投与すること；および／または（ｂ）該
    ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の発現
    を阻害する核酸分子を対象に投与すること；および／ま
    たは（ｃ）リガンドを求めて該ポリペプチドと競争する
    治療上有効量のポリペプチドを対象に投与することを特
    徴とする方法。
20. 【請求項２０】 対象中のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド
    の発現または活性に関連した対象における疾病またはか
    かる疾病に対する感受性の診断方法であって、 （ａ）該対象のゲノム中の該ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチ
    ドをコードしているヌクレオチド配列中の変異の存在ま
    たは不存在を決定すること；および／または（ｂ）該対
    象由来の試料中のＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド発現の存
    在または量を分析することを特徴とする方法。
21. 【請求項２１】 （ａ）請求項１１の細胞を候補化合物
    と接触させること；ついで、 （ｂ）該候補化合物の該細胞への結合能を評価すること
    を特徴とする、ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドに結合する
    化合物の同定方法。
22. 【請求項２２】 候補化合物が細胞表面におけるＨＣＥ
    ３Ｐ８３ポリペプチドの活性化により発生するシグナル
    を生じさせるかどうかを決定することをさらに特徴と
    し、該シグナルを発生させる候補化合物がアゴニストで
    あると同定される、請求項２１の方法。
23. 【請求項２３】 請求項２２の方法により同定されるア
    ゴニスト。
24. 【請求項２４】 細胞を該ＨＣＥ３Ｐ８３ポリペプチド
    に対する既知アゴニストと接触させること；次いで、 該アゴニストにより発生するシグナルが該候補化合物の
    存在下において減少するかどうかを決定することをさら
    に特徴とし、該シグナルを減少させる候補化合物が該Ｈ
    ＣＥ３Ｐ８３ポリペプチドに対するアンタゴニストであ
    ると同定される、請求項２１の方法。
25. 【請求項２５】 請求項２４の方法により同定されるア
    ンタゴニスト。