JPH10300741A - 糖化ヘモグロビンの測定方法 - Google Patents
糖化ヘモグロビンの測定方法Info
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- JPH10300741A JPH10300741A JP10488397A JP10488397A JPH10300741A JP H10300741 A JPH10300741 A JP H10300741A JP 10488397 A JP10488397 A JP 10488397A JP 10488397 A JP10488397 A JP 10488397A JP H10300741 A JPH10300741 A JP H10300741A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヘモグロビンＡ１ｃピークを従来と同様にシ
ャープに表示するとともに、ヘモグロビンＡ０およびそ
の近辺のピークの形状も表示できる糖化ヘモグロビンの
測定方法を提供する。 【解決手段】 液体クロマトグラフィーによる糖化ヘモ
グロビンの測定方法であって、液体クロマトグラフィー
操作により得られるクロマトグラムの表示に際して、全
てのピークの頂点が一つのクロマトグラム内に納まるよ
うに、液体クロマトグラフィー操作中に表示レンジを切
り替えることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方
法。表示レンジを切り替える時期の例としては、ヘモグ
ロビンＡ１ｃピークとヘモグロビンＡ０ピークの間で行
われる。
ャープに表示するとともに、ヘモグロビンＡ０およびそ
の近辺のピークの形状も表示できる糖化ヘモグロビンの
測定方法を提供する。 【解決手段】 液体クロマトグラフィーによる糖化ヘモ
グロビンの測定方法であって、液体クロマトグラフィー
操作により得られるクロマトグラムの表示に際して、全
てのピークの頂点が一つのクロマトグラム内に納まるよ
うに、液体クロマトグラフィー操作中に表示レンジを切
り替えることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方
法。表示レンジを切り替える時期の例としては、ヘモグ
ロビンＡ１ｃピークとヘモグロビンＡ０ピークの間で行
われる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィーによる糖化ヘモグロビンの測定方法に関する。
フィーによる糖化ヘモグロビンの測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】糖化ヘモグロビンとは血液中の糖がその
濃度に比例して赤血球に入った後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、溶血血液試料中の糖化ヘモ
グロビンと非糖化ヘモグロビンの合計に対する糖化ヘモ
グロビンの割合（％）（以下、糖化ヘモグロビン値とい
う）は、過去１〜２カ月間の血液中の平均的な糖濃度を
反映すると言われている。そして血糖値や尿糖値に比べ
生理的要因に左右されにくいので、血液中の糖化ヘモグ
ロビン値は、糖尿病の診断の指標とされ、特に、糖化ヘ
モグロビンのうち、糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（以下、Ｈ
ｂＡ１ｃという）分画を用いたＨｂＡ１ｃ値〔糖化ヘモ
グロビンと非糖化ヘモグロビンの合計に対するＨｂＡ１
ｃの割合（％）〕が、糖尿病の診断の最適な指標として
広く使用されている。
濃度に比例して赤血球に入った後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、溶血血液試料中の糖化ヘモ
グロビンと非糖化ヘモグロビンの合計に対する糖化ヘモ
グロビンの割合（％）（以下、糖化ヘモグロビン値とい
う）は、過去１〜２カ月間の血液中の平均的な糖濃度を
反映すると言われている。そして血糖値や尿糖値に比べ
生理的要因に左右されにくいので、血液中の糖化ヘモグ
ロビン値は、糖尿病の診断の指標とされ、特に、糖化ヘ
モグロビンのうち、糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（以下、Ｈ
ｂＡ１ｃという）分画を用いたＨｂＡ１ｃ値〔糖化ヘモ
グロビンと非糖化ヘモグロビンの合計に対するＨｂＡ１
ｃの割合（％）〕が、糖尿病の診断の最適な指標として
広く使用されている。
【０００３】血液中の糖化ヘモグロビン値の測定は、主
にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により行われ
ている（特公平８−７１９８号公報参照）。図１は、血
液試料をカチオン交換液体クロマトグラフィーにより測
定して得られた典型的なクロマトグラムである。ピーク
１１はヘモグロビンＡ１ａ（以下、ＨｂＡ１ａという）
およびヘモグロビンＡ１ｂ（以下、ＨｂＡ１ｂとい
う）、ピーク１２はヘモグロビンＦ（以下、ＨｂＦとい
う）、ピーク１３はＨｂＡ１ｃおよびピーク１４はヘモ
グロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）である。これら
のピークのうち、ＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＦおよ
びＨｂＡ１ｃは糖化ヘモグロビンであり、ＨｂＡ０は非
糖化ヘモグロビンである。
にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により行われ
ている（特公平８−７１９８号公報参照）。図１は、血
液試料をカチオン交換液体クロマトグラフィーにより測
定して得られた典型的なクロマトグラムである。ピーク
１１はヘモグロビンＡ１ａ（以下、ＨｂＡ１ａという）
およびヘモグロビンＡ１ｂ（以下、ＨｂＡ１ｂとい
う）、ピーク１２はヘモグロビンＦ（以下、ＨｂＦとい
う）、ピーク１３はＨｂＡ１ｃおよびピーク１４はヘモ
グロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）である。これら
のピークのうち、ＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＦおよ
びＨｂＡ１ｃは糖化ヘモグロビンであり、ＨｂＡ０は非
糖化ヘモグロビンである。
【０００４】血液中のＨｂＡ１ｃ値は、上記のクロマト
グラムにおける全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビ
ンピーク＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積に対するＨ
ｂＡ１ｃピーク面積の割合（％）として表される。血液
中のＨｂＡ１ｃ値測定装置は従来より市販されており、
市販のＨｂＡ１ｃ値測定装置においては、測定結果を表
わすに際して、一般に、ＨｂＡ１ｃ値の他にクロマトグ
ラムも表示されるようにされている。クロマトグラムも
表示する理由は、ＨｂＡ１ｃ以外の情報、例えば、Ｈｂ
Ａ１ａ、ＨｂＡ１ｂおよびＨｂＦ等の情報や異常なヘモ
グロビンの情報を提供するためと、クロマトグラフ装置
の管理に影響する重要な情報を提供するためである。
グラムにおける全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビ
ンピーク＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積に対するＨ
ｂＡ１ｃピーク面積の割合（％）として表される。血液
中のＨｂＡ１ｃ値測定装置は従来より市販されており、
市販のＨｂＡ１ｃ値測定装置においては、測定結果を表
わすに際して、一般に、ＨｂＡ１ｃ値の他にクロマトグ
ラムも表示されるようにされている。クロマトグラムも
表示する理由は、ＨｂＡ１ｃ以外の情報、例えば、Ｈｂ
Ａ１ａ、ＨｂＡ１ｂおよびＨｂＦ等の情報や異常なヘモ
グロビンの情報を提供するためと、クロマトグラフ装置
の管理に影響する重要な情報を提供するためである。
【０００５】また、液体クロマトグラフィーによる血液
中の糖化ヘモグロビン値測定において、非糖化ヘモグロ
ビンはＨｂＡ０ピークとして表されるが、このピークは
全ヘモグロビンピークの大部分を占め、健常人において
は全ヘモグロビンピークの約９０％となる。従って、ク
ロマトグラム上ではＨｂＡ０ピーク面積は、ＨｂＡ１ｃ
ピーク面積の１０倍以上の巨大なピークとなる。
中の糖化ヘモグロビン値測定において、非糖化ヘモグロ
ビンはＨｂＡ０ピークとして表されるが、このピークは
全ヘモグロビンピークの大部分を占め、健常人において
は全ヘモグロビンピークの約９０％となる。従って、ク
ロマトグラム上ではＨｂＡ０ピーク面積は、ＨｂＡ１ｃ
ピーク面積の１０倍以上の巨大なピークとなる。
【０００６】ところで、ＨｂＡ１ｃ測定は、測定時間の
短縮化が進み、１検体あたり数分間で測定が可能となっ
ている。測定時間の短縮のためには、ＨｂＡ０の巨大な
ピークをより短時間で溶出させる必要があるため、Ｈｂ
Ａ０の溶出にはＨｂＡ１ｃを溶出させる溶離液よりも溶
出力の大きい溶離液を使用して一気に溶出させる方法が
用いられており、そのためクロマトグラムにおいてはＨ
ｂＡ０ピークのピーク高さは高くなっている。
短縮化が進み、１検体あたり数分間で測定が可能となっ
ている。測定時間の短縮のためには、ＨｂＡ０の巨大な
ピークをより短時間で溶出させる必要があるため、Ｈｂ
Ａ０の溶出にはＨｂＡ１ｃを溶出させる溶離液よりも溶
出力の大きい溶離液を使用して一気に溶出させる方法が
用いられており、そのためクロマトグラムにおいてはＨ
ｂＡ０ピークのピーク高さは高くなっている。
【０００７】糖化ヘモグロビン値測定の液体クロマトグ
ラフィーにおいて、測定結果のクロマトグラムの表示で
は、通常、ＨｂＡ０より先に溶出する各ピークの中で最
大のピーク（健常人ではＨｂＡ１ｃ）の頂点が納まるよ
うに、表示レンジが調節されている。このため、ＨｂＡ
１ｃピークよりも遙に大きいＨｂＡ０ピークは、クロマ
トグラム上では、ピークの頂点は振り切れており、ピー
クの下部のみが表示されている（図１参照）。
ラフィーにおいて、測定結果のクロマトグラムの表示で
は、通常、ＨｂＡ０より先に溶出する各ピークの中で最
大のピーク（健常人ではＨｂＡ１ｃ）の頂点が納まるよ
うに、表示レンジが調節されている。このため、ＨｂＡ
１ｃピークよりも遙に大きいＨｂＡ０ピークは、クロマ
トグラム上では、ピークの頂点は振り切れており、ピー
クの下部のみが表示されている（図１参照）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】前述のように、糖尿病
診断のための血液中のＨｂＡ１ｃ測定において、ＨｂＡ
０ピーク測定の意義は、第一義的にはＨｂＡ１ｃ値算出
のために必要な全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビ
ンピーク＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積を算出する
ためである。
診断のための血液中のＨｂＡ１ｃ測定において、ＨｂＡ
０ピーク測定の意義は、第一義的にはＨｂＡ１ｃ値算出
のために必要な全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビ
ンピーク＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積を算出する
ためである。
【０００９】しかし、ＨｂＡ０ピークの役割は、これに
とどまらず、特にＨｂＡ０ピークが異常を示す場合は、
以下のことが考えられ、そのピーク形状の認識は重要な
意味をもっている。 ＨｂＡ０ピークの溶出する位置には、被験者によって
は異常ヘモグロビンが溶出する場合がある。上記異常ヘ
モグロビンは、重大な疾病の存在を示唆することがあ
る。 ＨｂＡ０ピークの形状が装置上のトラブル等を示唆す
る兆候を示す場合がある。
とどまらず、特にＨｂＡ０ピークが異常を示す場合は、
以下のことが考えられ、そのピーク形状の認識は重要な
意味をもっている。 ＨｂＡ０ピークの溶出する位置には、被験者によって
は異常ヘモグロビンが溶出する場合がある。上記異常ヘ
モグロビンは、重大な疾病の存在を示唆することがあ
る。 ＨｂＡ０ピークの形状が装置上のトラブル等を示唆す
る兆候を示す場合がある。
【００１０】従来のクロマトグラムの表示方法において
は、前述のようにＨｂＡ０ピーク形状の表示はできなか
った（なお、このことは、クロマトグラムにＨｂＡ０ピ
ーク形状をピークの頂点まで表示できないという意味で
あり、従来の測定方法でもＨｂＡ０ピークのピーク面積
は正確に測定されていた）。本発明の目的は、ＨｂＡ１
ｃピークを従来と同様にシャープに表示するとともに、
ＨｂＡ０およびその近辺のピークの形状も表示できる糖
化ヘモグロビンの測定方法を提供することにある。
は、前述のようにＨｂＡ０ピーク形状の表示はできなか
った（なお、このことは、クロマトグラムにＨｂＡ０ピ
ーク形状をピークの頂点まで表示できないという意味で
あり、従来の測定方法でもＨｂＡ０ピークのピーク面積
は正確に測定されていた）。本発明の目的は、ＨｂＡ１
ｃピークを従来と同様にシャープに表示するとともに、
ＨｂＡ０およびその近辺のピークの形状も表示できる糖
化ヘモグロビンの測定方法を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明の糖化ヘモグロビ
ンの測定方法は、液体クロマトグラフィーによる糖化ヘ
モグロビンの測定方法であって、液体クロマトグラフィ
ー操作により得られるクロマトグラムの表示に際して、
全てのピークの頂点が一つのクロマトグラム内に納まる
ように、液体クロマトグラフィー操作中に表示レンジを
切り替えることを特徴とする。
ンの測定方法は、液体クロマトグラフィーによる糖化ヘ
モグロビンの測定方法であって、液体クロマトグラフィ
ー操作により得られるクロマトグラムの表示に際して、
全てのピークの頂点が一つのクロマトグラム内に納まる
ように、液体クロマトグラフィー操作中に表示レンジを
切り替えることを特徴とする。
【００１２】本発明の方法において用いられる液体クロ
マトグラフのシステムの一例を図２に示した。溶離液１
ａおよび１ｂが溶離液切り替えバルブ２ａおよび２ｂに
よりどちらかに切り替えられて、送液ポンプ３により試
料導入装置４を経由して、カラム恒温槽５中に納められ
た、充填剤入り分離カラム６に入り、この分離カラム６
により試料中の各成分が分離される。分離された各成分
は検出器７によって、例えば、吸光度を測定する等によ
って検出され、検出された各ピークはコントローラ９内
においてデータ処理され、ピーク面積などが計算され
る。計算結果およびクロマトグラムは、プリンタ８によ
りプリントアウトされる。また、コントローラ９は図２
において破線で示したように、検出器７およびプリンタ
８に接続するだけでなく、溶離液切り替えバルブ２ａお
よび２ｂ、送液ポンプ３、試料導入装置４およびカラム
恒温槽５に接続されて、それぞれの装置の動作も制御し
ている。
マトグラフのシステムの一例を図２に示した。溶離液１
ａおよび１ｂが溶離液切り替えバルブ２ａおよび２ｂに
よりどちらかに切り替えられて、送液ポンプ３により試
料導入装置４を経由して、カラム恒温槽５中に納められ
た、充填剤入り分離カラム６に入り、この分離カラム６
により試料中の各成分が分離される。分離された各成分
は検出器７によって、例えば、吸光度を測定する等によ
って検出され、検出された各ピークはコントローラ９内
においてデータ処理され、ピーク面積などが計算され
る。計算結果およびクロマトグラムは、プリンタ８によ
りプリントアウトされる。また、コントローラ９は図２
において破線で示したように、検出器７およびプリンタ
８に接続するだけでなく、溶離液切り替えバルブ２ａお
よび２ｂ、送液ポンプ３、試料導入装置４およびカラム
恒温槽５に接続されて、それぞれの装置の動作も制御し
ている。
【００１３】本発明の方法において用いられる充填剤と
しては、公知のカチオン交換充填剤が用いられる。例え
ば、基材となる粒子に、カルボキシル基、スルホン酸基
などのカチオン交換能を有する官能基が導入された充填
剤が挙げられる。上記基材としては、ポリマー系基材
（例えば、ポリスチレン、ポリアクリレート等の合成高
分子微粒子；ポリアミノ酸、多糖類等の天然高分子微粒
子など）、無機系基材（例えば、シリカ粒子など）など
が挙げられる。上記官能基を導入する方法としては、例
えば、上記の官能基を有するモノマーを材料として重合
する；基材となる粒子を調製した後、官能基を有する低
分子化合物を化学反応によって結合させるなどの方法が
挙げられる。充填剤の平均粒径としては、１〜２０μｍ
が好ましい。
しては、公知のカチオン交換充填剤が用いられる。例え
ば、基材となる粒子に、カルボキシル基、スルホン酸基
などのカチオン交換能を有する官能基が導入された充填
剤が挙げられる。上記基材としては、ポリマー系基材
（例えば、ポリスチレン、ポリアクリレート等の合成高
分子微粒子；ポリアミノ酸、多糖類等の天然高分子微粒
子など）、無機系基材（例えば、シリカ粒子など）など
が挙げられる。上記官能基を導入する方法としては、例
えば、上記の官能基を有するモノマーを材料として重合
する；基材となる粒子を調製した後、官能基を有する低
分子化合物を化学反応によって結合させるなどの方法が
挙げられる。充填剤の平均粒径としては、１〜２０μｍ
が好ましい。
【００１４】本発明の方法において用いられる溶離液
は、一般のカチオン交換液体クロマトグラフィー用の緩
衝液などが用いられる。例えば、リン酸、塩酸、酢酸、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの無機酸や無機
塩基またはその塩；クエン酸、フタル酸などの有機酸ま
たはその塩など；これらの混合物が挙げられる。また、
複数の溶離液を切り替えて用いて測定時間の短縮化を図
ることも可能である。
は、一般のカチオン交換液体クロマトグラフィー用の緩
衝液などが用いられる。例えば、リン酸、塩酸、酢酸、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの無機酸や無機
塩基またはその塩；クエン酸、フタル酸などの有機酸ま
たはその塩など；これらの混合物が挙げられる。また、
複数の溶離液を切り替えて用いて測定時間の短縮化を図
ることも可能である。
【００１５】本発明の方法によって測定される試料は、
溶血された血液であり、例えば、血液抗凝固剤（例え
ば、フッ化ナトリウムなど）が収容された採血管により
採血された全血血液を、溶血剤（トリトンＸ−１００な
どの界面活性剤を含む緩衝液など）で５０〜３００倍程
度に溶血・希釈したものが挙げられる。測定試料の液体
クロマトグラフへの注入量は１０〜３００μｌ程度が適
当である。
溶血された血液であり、例えば、血液抗凝固剤（例え
ば、フッ化ナトリウムなど）が収容された採血管により
採血された全血血液を、溶血剤（トリトンＸ−１００な
どの界面活性剤を含む緩衝液など）で５０〜３００倍程
度に溶血・希釈したものが挙げられる。測定試料の液体
クロマトグラフへの注入量は１０〜３００μｌ程度が適
当である。
【００１６】図３は、本発明の方法を用いて、試料とし
て健常人血液を測定した場合のクロマトグラムである。
図３において、ピーク１１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１
ｂ、ピーク１２はＨｂＦ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃおよ
びピーク１４はＨｂＡ０である。このクロマトグラム
は、ピーク１４のＨｂＡ０の溶出直前で表示レンジを切
り替えＨｂＡ０のピークの頂点がクロマトグラムのフル
スケールに入るように調整することにより得られたもの
である。
て健常人血液を測定した場合のクロマトグラムである。
図３において、ピーク１１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１
ｂ、ピーク１２はＨｂＦ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃおよ
びピーク１４はＨｂＡ０である。このクロマトグラム
は、ピーク１４のＨｂＡ０の溶出直前で表示レンジを切
り替えＨｂＡ０のピークの頂点がクロマトグラムのフル
スケールに入るように調整することにより得られたもの
である。
【００１７】本発明の方法は、具体的には、例えば、以
下のような作業により行う。 まず、ピーク１３（ＨｂＡ１ｃ）およびピーク１４
（ＨｂＡ０）の間の谷１５を検出する。 次に、谷１５以前に溶出した各ピークの頂点の高さを
検出し、最大のピークを検出する。 上記の最大のピークがおさまるように、谷１５以前の
フルスケールを決定する。 次に、谷１５より後に溶出した各ピーク（例えば、通
常は、ＨｂＡ０ピークのみであるが、異常ヘモグロビン
が存在する場合は複数のピークがある）の頂点の高さを
検出し、最大のピークを検出する。 上記の最大のピークがおさまるように、谷１５より後
のフルスケールを決定し、表示レンジを切り替える。こ
れにより、谷１５より後のクロマトグラムが縮小され
る。
下のような作業により行う。 まず、ピーク１３（ＨｂＡ１ｃ）およびピーク１４
（ＨｂＡ０）の間の谷１５を検出する。 次に、谷１５以前に溶出した各ピークの頂点の高さを
検出し、最大のピークを検出する。 上記の最大のピークがおさまるように、谷１５以前の
フルスケールを決定する。 次に、谷１５より後に溶出した各ピーク（例えば、通
常は、ＨｂＡ０ピークのみであるが、異常ヘモグロビン
が存在する場合は複数のピークがある）の頂点の高さを
検出し、最大のピークを検出する。 上記の最大のピークがおさまるように、谷１５より後
のフルスケールを決定し、表示レンジを切り替える。こ
れにより、谷１５より後のクロマトグラムが縮小され
る。
【００１８】上記の〜までの作業は、これらの作業
をプログラムしたコンピュータを用いたデータ処理によ
り、自動的に行うことができる。
をプログラムしたコンピュータを用いたデータ処理によ
り、自動的に行うことができる。
【００１９】また、予め谷１５の出現する時間が分かっ
ていれば、予め表示レンジ切り替えを行う時間を設定し
ておくことも可能である。
ていれば、予め表示レンジ切り替えを行う時間を設定し
ておくことも可能である。
【００２０】また、表示レンジの切り替えはマニュアル
操作により行われてもよい。
操作により行われてもよい。
【００２１】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明するが、本発
明はこれに限定されるものではない。
を挙げることにより、本発明を詳細に説明するが、本発
明はこれに限定されるものではない。
【００２２】実施例１ 液体クロマトグラフシステムとして図２のシステムとし
た。送液ポンプ３としては、島津製作所社製、ＬＣ−９
Ａとし、試料導入装置４としては、積水化学工業社製、
ＡＳＵ−４２０とし、カラム６としては、カチオン交換
充填剤入りカラムである、積水化学工業社製、Ｍｉｃｒ
ｏｎｅｘ Ａ１ｃ ＨＳ−II（φ６×７５ｍｍ）とし、
検出器７としては、島津製作所社製、ＳＰＤ−６ＡＶと
し、コントローラ９内のデータ処理装置としては、島津
製作所社製、クロマトパックＣ−Ｒ１６Ａとした。
た。送液ポンプ３としては、島津製作所社製、ＬＣ−９
Ａとし、試料導入装置４としては、積水化学工業社製、
ＡＳＵ−４２０とし、カラム６としては、カチオン交換
充填剤入りカラムである、積水化学工業社製、Ｍｉｃｒ
ｏｎｅｘ Ａ１ｃ ＨＳ−II（φ６×７５ｍｍ）とし、
検出器７としては、島津製作所社製、ＳＰＤ−６ＡＶと
し、コントローラ９内のデータ処理装置としては、島津
製作所社製、クロマトパックＣ−Ｒ１６Ａとした。
【００２３】液体クロマトグラフィーの測定条件は、以
下のようにした。 溶離液：溶離液Ａ（１００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ６）
と溶離液Ｂ（３００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ７）とし、
測定開始（測定試料の液体クロマトグラフへの注入終了
時）より０〜３分まで溶離液Ａ１００％を流し、３〜６
分まで溶離液Ｂ１００％を流し、６〜１０分まで溶離液
Ａ１００％を流した。流速は１．５ｍｌ／分とし、検出
は波長４１５ｎｍの吸光度を測定することにより行っ
た。測定試料としては、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製、Ｌｙｐｈ
ｏｃｈｅｃｋ ＨｅｍｏｇｌｏｂｉｎＡ２ Ｃｏｎｔｒ
ｌを、溶血液（０．１重量％濃度でＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１
００を含むリン酸緩衝液：ｐＨ７）で１００倍に希釈し
たものを用いた。
下のようにした。 溶離液：溶離液Ａ（１００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ６）
と溶離液Ｂ（３００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ７）とし、
測定開始（測定試料の液体クロマトグラフへの注入終了
時）より０〜３分まで溶離液Ａ１００％を流し、３〜６
分まで溶離液Ｂ１００％を流し、６〜１０分まで溶離液
Ａ１００％を流した。流速は１．５ｍｌ／分とし、検出
は波長４１５ｎｍの吸光度を測定することにより行っ
た。測定試料としては、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製、Ｌｙｐｈ
ｏｃｈｅｃｋ ＨｅｍｏｇｌｏｂｉｎＡ２ Ｃｏｎｔｒ
ｌを、溶血液（０．１重量％濃度でＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１
００を含むリン酸緩衝液：ｐＨ７）で１００倍に希釈し
たものを用いた。
【００２４】表示レンジの切り替えは時間設定により行
った。すなわち、測定開始（測定試料の液体クロマトグ
ラフへの注入終了時）から５分後にレンジを１／５に縮
小した。得られたクロマトグラムを図４に示した。図４
において、ピーク１１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１ｂ、
ピーク１２はＨｂＦ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃ、ピーク
１６はＨｂＡ０およびヘモグロビンＡ２、ピーク１７は
ヘモグロビンＳおよびヘモグロビンＣをそれぞれ表す。
図４から分かるように、表示レンジが切り替えられたこ
とにより、ＨｂＡ０ピークの形状が表示されるととも
に、異常ヘモグロビンであるヘモグロビンＡ２、ヘモグ
ロビンＳおよびヘモグロビンＣの形状が表示された。
った。すなわち、測定開始（測定試料の液体クロマトグ
ラフへの注入終了時）から５分後にレンジを１／５に縮
小した。得られたクロマトグラムを図４に示した。図４
において、ピーク１１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１ｂ、
ピーク１２はＨｂＦ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃ、ピーク
１６はＨｂＡ０およびヘモグロビンＡ２、ピーク１７は
ヘモグロビンＳおよびヘモグロビンＣをそれぞれ表す。
図４から分かるように、表示レンジが切り替えられたこ
とにより、ＨｂＡ０ピークの形状が表示されるととも
に、異常ヘモグロビンであるヘモグロビンＡ２、ヘモグ
ロビンＳおよびヘモグロビンＣの形状が表示された。
【００２５】比較例１ 実施例１における、表示レンジの切り替えを行わなかっ
たことの他は、実施例１と同様に操作した。得られたク
ロマトグラムを図５に示した。図５において、ピーク１
１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１ｂ、ピーク１２はＨｂ
Ｆ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃ、ピーク１８はＨｂＡ０、
ヘモグロビンＡ２、ヘモグロビンＳおよびヘモグロビン
Ｃからなる未分離のピークである。図５より表示レンジ
が切り替えられないと、ＨｂＡ０近辺のピークの分離状
態が確認できないことが分かる。
たことの他は、実施例１と同様に操作した。得られたク
ロマトグラムを図５に示した。図５において、ピーク１
１はＨｂＡ１ａおよびＨｂＡ１ｂ、ピーク１２はＨｂ
Ｆ、ピーク１３はＨｂＡ１ｃ、ピーク１８はＨｂＡ０、
ヘモグロビンＡ２、ヘモグロビンＳおよびヘモグロビン
Ｃからなる未分離のピークである。図５より表示レンジ
が切り替えられないと、ＨｂＡ０近辺のピークの分離状
態が確認できないことが分かる。
【００２６】
【発明の効果】本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法の
構成は、上記の通りであり、この方法を用いると、Ｈｂ
Ａ１ｃピークを従来と同様にシャープに表示するととも
に、ＨｂＡ０およびその近辺のピークの形状も表示でき
る糖化ヘモグロビンの測定方法を提供する。従って、本
発明で得られたクロマトグラムより、糖尿病の診断が可
能であるとともに、異常ヘモグロビンの関連する疾病の
診断等が容易となる可能性がある。
構成は、上記の通りであり、この方法を用いると、Ｈｂ
Ａ１ｃピークを従来と同様にシャープに表示するととも
に、ＨｂＡ０およびその近辺のピークの形状も表示でき
る糖化ヘモグロビンの測定方法を提供する。従って、本
発明で得られたクロマトグラムより、糖尿病の診断が可
能であるとともに、異常ヘモグロビンの関連する疾病の
診断等が容易となる可能性がある。
【図１】従来の糖化ヘモグロビンの測定方法で得られた
クロマトグラムである。
クロマトグラムである。
【図２】本発明で用いられる液体クロマトグラフのシス
テムの一例を示す説明図である。
テムの一例を示す説明図である。
【図３】本発明の糖化ヘモグロビンの測定方法で得られ
たクロマトグラムである。
たクロマトグラムである。
【図４】実施例１で得られたクロマトグラムである。
【図５】比較例１で得られたクロマトグラムである。
１ａ、１ｂ 溶離液 ２ａ、２ｂ 溶離液切り替えバルブ ３ 送液ポンプ ４ 試料導入装置 ５ カラム恒温槽 ６ 分離カラム ７ 検出器 ８ プリンタ ９ コントローラ
Claims (1)
- 【請求項１】 液体クロマトグラフィーによる糖化ヘモ
グロビンの測定方法であって、液体クロマトグラフィー
操作により得られるクロマトグラムの表示に際して、全
てのピークの頂点が一つのクロマトグラム内に納まるよ
うに、液体クロマトグラフィー操作中に表示レンジを切
り替えることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10488397A JPH10300741A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10488397A JPH10300741A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10300741A true JPH10300741A (ja) | 1998-11-13 |
Family
ID=14392592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10488397A Pending JPH10300741A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10300741A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001022077A1 (fr) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Methode de separation de l'hemoglobine a2 |
| EP2413135A1 (en) | 2010-07-26 | 2012-02-01 | Arkray, Inc. | Method and apparatus for displaying a chromatogram |
| WO2015029254A1 (ja) * | 2013-09-02 | 2015-03-05 | 株式会社島津製作所 | クロマトグラフ用データ処理装置及び方法 |
| JP2017053875A (ja) * | 2016-12-26 | 2017-03-16 | 株式会社島津製作所 | クロマトグラフ用データ処理装置及び方法 |
-
1997
- 1997-04-22 JP JP10488397A patent/JPH10300741A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001022077A1 (fr) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Methode de separation de l'hemoglobine a2 |
| US6488857B1 (en) * | 1999-09-24 | 2002-12-03 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Method of separating hemoglobin A2 |
| EP2413135A1 (en) | 2010-07-26 | 2012-02-01 | Arkray, Inc. | Method and apparatus for displaying a chromatogram |
| JP2012047733A (ja) * | 2010-07-26 | 2012-03-08 | Arkray Inc | クロマトグラムの表示方法 |
| WO2015029254A1 (ja) * | 2013-09-02 | 2015-03-05 | 株式会社島津製作所 | クロマトグラフ用データ処理装置及び方法 |
| JP6065981B2 (ja) * | 2013-09-02 | 2017-01-25 | 株式会社島津製作所 | クロマトグラフ用データ処理装置及び方法 |
| JP2017053875A (ja) * | 2016-12-26 | 2017-03-16 | 株式会社島津製作所 | クロマトグラフ用データ処理装置及び方法 |
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