JPH10262655A - New bacillus natto and its acquisition and poly-gamma-glutamic acid produced with new bacillus natto and seasoning utilizing the same - Google Patents
New bacillus natto and its acquisition and poly-gamma-glutamic acid produced with new bacillus natto and seasoning utilizing the sameInfo
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- JPH10262655A JPH10262655A JP9071063A JP7106397A JPH10262655A JP H10262655 A JPH10262655 A JP H10262655A JP 9071063 A JP9071063 A JP 9071063A JP 7106397 A JP7106397 A JP 7106397A JP H10262655 A JPH10262655 A JP H10262655A
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、バチルス・ズブチ
リスに属する新規な納豆菌、およびその取得方法ならび
にその利用に関する。The present invention relates to a novel Bacillus subtilis belonging to Bacillus subtilis, a method for obtaining the same and a use thereof.
【0002】[0002]
【発明が解決しようとする課題】納豆は、大豆に含まれ
る良質の植物性蛋白質が適度に分解されて消化性が良
く、栄養価が高いだけではなく、美味しくかつ安価であ
り、しかも保存性に優れているなどの利点を備えた、優
れたバランス食品である。The natto is not only good in digestibility and high in nutritive value, but also delicious and inexpensive, in addition to having good digestibility by decomposing the high-quality vegetable protein contained in soybean. It is an excellent balanced food with advantages such as being excellent.
【0003】納豆はその粘質性すなわち糸引性が特徴で
あり、熟成が進むにつれ納豆の糸の量およびその粘質性
の強さが増していく。この糸は納豆菌が納豆に含まれる
蛋白質を消化して得られるもので、D−グルタミン酸お
よびL−グルタミン酸からなるポリ−γ−グルタミン酸
を含み、納豆の旨味の成分でもある。[0003] Natto is characterized by its stickiness, that is, stringiness, and the amount of natto yarn and the strength of the stickiness increase as the ripening proceeds. This thread is obtained by Bacillus natto digesting the protein contained in natto, contains poly-γ-glutamic acid composed of D-glutamic acid and L-glutamic acid, and is also a component of natto umami.
【0004】納豆菌が産生するポリ−γ−グルタミン酸
に関して、その分子構造を調べ、D−グルタミン酸とL
−グルタミン酸の割合を明らかにする研究例もある(大
阪市大、伊藤理恵子ら、1996年3月)。The molecular structure of poly-γ-glutamic acid produced by Bacillus natto was examined, and D-glutamic acid and L-glutamic acid were examined.
-There is also a research example that clarifies the ratio of glutamic acid (Osaka City University, Rieko Ito et al., March 1996).
【0005】これらの研究および本発明者らの研究によ
り、現在市販されている通常の納豆の納豆菌が産生する
ポリ−γ−グルタミン酸は、構成単位のうちD−グルタ
ミン酸の割合は約50〜80%であり、しかも納豆の熟
成につれてこの割合が増加することが明らかとなってい
る。しかし、実際に納豆の旨味に関与するのは、ポリ−
γ−グルタミン酸中のL−グルタミン酸のみであり、熟
成につれて増加するD−グルタミン酸は無味である。[0005] From these studies and the study of the present inventors, poly-γ-glutamic acid produced by Bacillus natto of normal natto currently on the market has a D-glutamic acid ratio of about 50 to 80 in the constituent units. %, And it is clear that this ratio increases as natto ripens. However, what actually contributes to the taste of natto is poly-
It is only L-glutamic acid in γ-glutamic acid, and D-glutamic acid, which increases with age, is tasteless.
【0006】本発明の目的は、従来の納豆よりさらに旨
味の増した糸を引く納豆を得ることにある。[0006] It is an object of the present invention to obtain a natto that draws a thread having an even greater flavor than conventional natto.
【0007】本発明の別の目的は、L−グルタミン酸を
多く含む、ポリ−γ−グルタミン酸を得ることおよび得
られたポリ−グルタミン酸を利用して調味料を得ること
にある。Another object of the present invention is to obtain poly-γ-glutamic acid containing a large amount of L-glutamic acid, and to obtain a seasoning using the obtained poly-glutamic acid.
【0008】このために、本発明ではL−グルタミン酸
を多く含む、ポリ−γ−グルタミン酸からなる糸を産生
する納豆菌を得ることをさらに別の目的とする。[0008] For this purpose, it is a further object of the present invention to obtain a Bacillus natto that produces a thread comprising poly-γ-glutamic acid, which contains a large amount of L-glutamic acid.
【0009】[0009]
【課題を解決するための手段】そこで本発明者等は、大
豆中に本来含まれるグルタミン酸あるいはその前駆体
は、すべてL体であることから、納豆菌の菌体内でL−
グルタミン酸がD−グルタミン酸に変換されるメカニズ
ムに着目した。すなわち、菌体内でこのような変換を行
なわない納豆菌は、L−グルタミン酸のみからなるポリ
−γ−グルタミン酸を産生することを想定し、このよう
な納豆菌に関し、鋭意検討を重ねた結果、本発明に至っ
たのである。Therefore, the present inventors have found that glutamic acid or its precursors originally contained in soybeans are all L-forms.
We focused on the mechanism by which glutamic acid is converted to D-glutamic acid. That is, assuming that Bacillus natto that does not perform such conversion in the cells produces poly-γ-glutamic acid consisting only of L-glutamic acid, as a result of intensive studies on such Bacillus natto, This led to the invention.
【0010】本発明に係る新規な納豆菌の要旨とすると
ころは、バチルス・ズブチリスに属し、グルタメ−トラ
セマ−ゼが欠損していることにある。The gist of the novel natto bacterium according to the present invention resides in that it belongs to Bacillus subtilis and lacks glutamase-tracemase.
【0011】本発明に係る新規な納豆菌の要旨とすると
ころは、バチルス・ズブチリスに属し、構成単位の約7
0%以上がL−グルタミン酸であるポリ−γ−グルタミ
ン酸を産生することにある。The gist of the novel natto fungus according to the present invention belongs to Bacillus subtilis and has a structural unit of about 7
0% or more is to produce poly-γ-glutamic acid which is L-glutamic acid.
【0012】本発明に係る新規な納豆菌であって、上記
いずれかの納豆菌は、好ましくは、バチルス・ズブチリ
スに属し、グルタミン酸要求性を示す。[0012] A novel natto bacterium according to the present invention, wherein any of the natto bacterium described above preferably belongs to Bacillus subtilis and exhibits glutamic acid requirement.
【0013】本発明に係るポリ−γ−グルタミン酸の要
旨とするところは、新規な納豆菌により産生され、構成
単位の約70%以上がL−グルタミン酸であることにあ
る。The gist of the poly-γ-glutamic acid according to the present invention is that it is produced by a novel Bacillus natto, and that about 70% or more of its constituent units are L-glutamic acid.
【0014】本発明に係る調味料の要旨とするところ
は、上記のL−グルタミン酸を約70%以上含むポリ−
γ−グルタミン酸を含有することにある。The gist of the seasoning according to the present invention is that a poly-containing seasoning containing about 70% or more of L-glutamic acid is used.
γ-glutamic acid.
【0015】上記いずれかに記載の本発明に係る新規な
納豆菌の取得方法の要旨とするところは、Bacillus su
btilisに属する野生株を変異処理する工程;変異処理し
た菌株のうち、完全培地で生育しかつ最少培地で成育し
ない菌を選択する工程;および選択した菌のうちから最
少培地にグルタミン酸を添加した培地で生育する菌をさ
らに選択する工程;を含むことにある。The gist of the novel method for obtaining Bacillus natto according to the present invention described in any of the above is that Bacillus su
a step of mutating a wild strain belonging to btilis; a step of selecting, from the mutated strains, a bacterium that grows on a complete medium and does not grow on a minimal medium; and a medium obtained by adding glutamic acid to the minimal medium from the selected bacteria. And further selecting a bacterium that grows in the above.
【0016】本発明の用語「納豆菌」とは、バチルス・
ズブチリスに属し、ビオチン要求性を示す菌をいい、通
常市販されている納豆の製造に用いられ得る。The term "natto bacterium" in the present invention refers to Bacillus sp.
It refers to a bacterium belonging to subtilis and exhibiting a requirement for biotin, and can be used for production of natto, which is generally commercially available.
【0017】本発明の用語「グルタメ−トラセマ−ゼの
欠損」とは、D−グルタミン酸からL−グルタミン酸へ
の変換あるいはその逆の反応に必要な酵素の完全な欠
如、あるいは一部の欠如をいう。酵素の一部の欠如と
は、具体的には通常の野生株が有する酵素量の約1/2
以下、好ましくは1/5以下の酵素のレベルしか有さな
いことをいう。The term "deficiency of glutamase-tracemase" in the present invention refers to a complete lack or a partial lack of an enzyme required for the conversion of D-glutamic acid to L-glutamic acid or vice versa. . Specifically, the lack of a part of the enzyme specifically means that the amount of the enzyme is about 通常 of the amount of the enzyme that a normal wild strain has
Hereafter, preferably, it has only 1/5 or less enzyme level.
【0018】本発明の用語「グルタミン酸要求性の菌」
とは、菌の生育のために培地中にグルタミン酸を含んで
いる必要がある菌を指す。このような菌はグルタミン酸
を含まない培地では全く生育しないかあるいは十分に生
育できない。The term "glutamic acid-requiring bacterium" of the present invention
The term “bacteria” refers to a bacterium that needs to contain glutamic acid in a medium for the growth of the bacterium. Such a bacterium does not grow at all or cannot grow sufficiently in a medium containing no glutamic acid.
【0019】本発明の用語「野生株」は、通常自然界に
見いだされる表現形質を持つ菌株をいう。As used herein, the term "wild strain" refers to a strain having a phenotypic trait normally found in nature.
【0020】本発明の用語「調味料」には、例えば、う
ま味調味料、トレッシング、マヨネ−ズ、各種のつゆ
類、あるいはタレ類が含まれる。The term "seasoning" in the present invention includes, for example, umami seasoning, tressing, mayonnaise, various soups, and sauces.
【0021】本発明の用語「糸」は、納豆菌を適当に処
理した大豆あるいは培地に植菌したときに産生される粘
質物をいい、本発明では、糸および粘質物とは互換可能
な用語である。[0021] The term "thread" in the present invention refers to a viscous substance produced when inoculated with Bacillus natto on an appropriately treated soybean or medium, and in the present invention, terms interchangeable with thread and viscous substance are used. It is.
【0022】本発明の用語「完全培地」とは、原栄養菌
と栄養要求菌のいずれもが生育できる培地をいい、炭素
源、窒素源、ミネラルなどの微量成分等をすべて含み、
通常酵母抽出物あるいはペプトンなどの有機物を含有す
る。その成分や割合は、当業者の常識の範囲内であれば
特に限定されない。The term "complete medium" in the present invention refers to a medium in which both prototrophic bacteria and auxotrophs can grow, and contains all of trace components such as carbon sources, nitrogen sources, and minerals.
Usually contains organic matter such as yeast extract or peptone. The components and ratios are not particularly limited as long as they are within the range of common knowledge of those skilled in the art.
【0023】本発明の用語「最少培地」は、原栄養菌の
発育に必要な最少の数の栄養素を含む合成培地をいう。
例えば糖類などの炭素源と窒素、および無機化合物を一
定の割合で含んでいる。納豆菌の培養にはビオチンが必
須であるため、最少培地には必ずビオチンが含まれてい
る。As used herein, the term "minimal medium" refers to a synthetic medium that contains the minimum number of nutrients required for the growth of prototrophy.
For example, it contains a carbon source such as a saccharide, nitrogen, and an inorganic compound at a certain ratio. Since biotin is essential for culturing Bacillus natto, the minimum medium always contains biotin.
【0024】本発明の用語「構成単位」とは、ポリ−γ
−グルタミン酸を構成するモノマ−をいう。In the present invention, the term "structural unit" refers to poly-γ
-Refers to a monomer that constitutes glutamic acid.
【0025】さらに、本発明で「構成単位の約70%以
上」とは実質的にポリ−γ−グルタミン酸中のモノマ−
の約7割以上のことを指し、ここで「約」としたのは、
ポリマ−中のモノマ−の割合を測定する時に生じる誤差
等を考慮したものである。Further, in the present invention, "about 70% or more of the constitutional unit" means substantially a monomer in poly-γ-glutamic acid.
About 70% or more of
This takes into account errors and the like that occur when measuring the proportion of monomers in the polymer.
【0026】[0026]
【発明の実施の形態】本発明に係る納豆菌は、公知の納
豆菌を突然変異させることによって得られる変異株から
選択される。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The Bacillus natto according to the present invention is selected from mutants obtained by mutating a known Bacillus natto.
【0027】変異株を得るために使用する納豆菌として
は、例えばBacillus subtilisに属するビオチン要求性
を有する公知の納豆菌がいずれも親株として使用でき
る。その具体例としては、例えば、宮城野納豆菌、高橋
菌、旭川菌、松村菌、および成瀬菌などが挙げられる。As the Bacillus natto used to obtain the mutant strain, any known Bacillus natto belonging to Bacillus subtilis having biotin requirement can be used as a parent strain. Specific examples thereof include Miyagino natto bacteria, Takahashi bacteria, Asahikawa bacteria, Matsumura bacteria, and Naruse bacteria.
【0028】このような納豆菌の培養には、当業者に公
知のいずれの完全培地でも用いられる。例えば、肉エキ
ス、ペプトン、子牛血漿、寒天、ゼラチン、食塩などを
添加した培地、肉汁培地、肉汁寒天培地、肉汁ゼラチン
培地、リトマスミルク、MEM培地、イ−ストエキスト
ラクト培地などが用いられる。For cultivation of such Bacillus natto, any complete medium known to those skilled in the art can be used. For example, a medium supplemented with meat extract, peptone, calf plasma, agar, gelatin, salt, or the like, a broth medium, a broth agar medium, a broth gelatin medium, a litmus milk, a MEM medium, an east extract medium, and the like are used.
【0029】培養は、静置培養、振とう培養などの公知
の方法に従って行なえば良い。培養温度および時間は、
通常の培養と同じでよく、30℃から45℃で培養時間
は1日から5日程度でよい。The culture may be performed according to a known method such as stationary culture or shaking culture. The culture temperature and time
The culture may be the same as the usual culture, and the culture time at 30 ° C. to 45 ° C. may be about 1 day to 5 days.
【0030】突然変異の方法としては、例えば、突然変
異源となる化学合成物質を接触させる方法、遺伝子操作
による方法、X線、紫外線、あるいは光などを照射する
方法など、公知の方法をいずれも採用することができ
る。Examples of the mutation method include any known methods such as a method of contacting a chemically synthesized substance as a mutagen, a method of genetic manipulation, and a method of irradiating with X-rays, ultraviolet rays, or light. Can be adopted.
【0031】突然変異の方法として好適な突然変異源を
菌に接触させる方法とは、例えば、親株である公知の納
豆菌を突然変異源を加えたバッファ−で懸濁すること、
あるいは突然変異源を含む培地で培養することなどをい
う。As a method of mutation, a method of bringing a mutagen into contact with a bacterium is, for example, suspending a known natto bacterium as a parent strain in a buffer containing a mutator,
Alternatively, this means culturing in a medium containing a mutagen.
【0032】変異処理した菌から、グルタメ−トラセマ
−ゼ活性を有さない菌を選択し得る。選択は、例えば完
全培地で生育した菌のうち最少培地には生育しない菌を
当業者に公知の方法で選んだ後、選んだ菌をさらに最少
培地にグルタミン酸を加えた培地に生育する菌を取るこ
とによって行なわれ得る。From the bacteria subjected to the mutation treatment, bacteria having no glutamase-tracemase activity can be selected. Selection is performed, for example, by selecting a bacterium that does not grow on the minimal medium among the bacteria grown on the complete medium by a method known to those skilled in the art, and then taking the bacterium that grows on a medium obtained by adding glutamic acid to the minimal medium. Can be done by
【0033】このようにして得られた当然変異株の具体
例としては、Bacillus subtilisM−28(工業技術院
生命工学工業技術研究所にFERM P−16147な
る寄託番号で寄託されている。以下、M−28とする)
を挙げることができる。M−28は、親株として宮城の
納豆菌を用いて、この宮城の納豆菌を突然変異させて得
られた変異株である。As a specific example of the mutant strain thus obtained, Bacillus subtilis M-28 (deposited with the National Institute of Bioscience and Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology under the deposit number FERM P-16147. -28)
Can be mentioned. M-28 is a mutant strain obtained by mutating this Miyagi natto using Bacillus natto as a parent strain.
【0034】M−28株の菌学的性質を示す。 (a)形態 形 状;桿状 大きさ;2.3〜3.5×0.7〜0.9μm 胞子の有無;有 胞子の大きさ;0.8×1.6〜1.8μm 胞子の形状;楕円状 胞子嚢膨張の有無;無 胞子の部位;中央 グラム染色性;陽性 (b)普通寒天培地での生育状態(25℃で25時間培
養) 形 状;環状 表 面;粗く、皺がある 周縁部;波状 色 相;不透明、クリ−ム (c)ゼラチン穿刺培養 生育の状態;+ 液化;層状 (d)嫌気性寒天培地での生育の有無;− (e)サブロ−蔗糖培地での生育の有無;+ (f)リトマスミルクでの生育の有無;資化した。The bacteriological properties of the M-28 strain are shown. (A) Form Shape; rod size; 2.3 to 3.5 × 0.7 to 0.9 μm presence of spores; spore size; 0.8 × 1.6 to 1.8 μm spore shape Oval spore swelling presence / absence; spore-free site; central Gram staining; positive (b) Growth on normal agar medium (cultured at 25 ° C for 25 hours) Shape; annular surface; rough and wrinkled (C) gelatin puncture culture Growth state; + liquefaction; layered (d) growth on anaerobic agar medium;-(e) growth on sabrose-sucrose medium Presence or absence; + (f) presence or absence of growth in litmus milk;
【0035】凝固することなくカゼインを分解。 (g)生理学的性質 カタラ−ゼ;+ オキシダ−ゼ;+ デンプンの加水分解;+ ゼラチンの加水分解;+ リジン デカルボキシラ−ゼ;− アルギニン ジヒドラ−ゼ;− オルニチン デカルボキシラ−ゼ;− インド−ルの生成;− 硝酸塩の還元;+ エスキュリン;+ ウレア−ゼ;− クエン酸の利用;+ フェニルアラニン デアミナ−ゼ;− 卵黄反応;− グルコ−スからのガスの生成;− アセトインの生成;+ β−ガラクトシダ−ゼ;+ ビオチン要求性;+ グルタミン酸要求性;+ グルタメ−トラセマ−ゼ活性;無Decomposes casein without coagulation. (G) physiological properties catalase; + oxidase; + starch hydrolysis; + gelatin hydrolysis; + lysine decarboxylase;-arginine dihydrase;-ornithine decarboxylase; Formation;-reduction of nitrate; + esculin; + urease;-utilization of citric acid; + phenylalanine deaminase;-egg yolk reaction; -Production of gas from glucose;-Production of acetoin; + β-galactosidase; + Biotin requirement; + Glutamate requirement; + Glutamase-Tracemase activity;
【0036】M−28の菌学的性質は、親株である宮城
野納豆菌の性質とほぼ一致するが、グルタミン酸要求性
を示す点、グルタメ−トラセマ−ゼ活性を有さない点、
構成単位の約70%以上がL−グルタミン酸であるポリ
−γ−グルタミン酸を産生する点において親株とは明確
に区別し得る。The bacteriological properties of M-28 are almost the same as those of the parent strain, Miyagino natto, but show the requirement for glutamate, do not have glutamase-tracemase activity,
It can be clearly distinguished from the parent strain in that it produces poly-γ-glutamic acid in which about 70% or more of the structural units are L-glutamic acid.
【0037】さらに、本発明においては、M−28以外
の変異株も含まれる。その共通の性質は、グルタメ−ト
ラセマ−ゼを全く有さないかあるいは有していても通常
の菌体が有する量の1/2以下、好ましくは1/5以下
であることである。本発明の変異した納豆菌は、構成単
位の約70%以上がL−グルタミン酸であるポリ−γ−
グルタミン酸を産生する。Furthermore, the present invention includes mutants other than M-28. Their common property is that they have no glutamate-tracemase at all, or even if they do, they are at most 1/2 or less, preferably at most 1/5, the amount of normal cells. The mutated Bacillus natto of the present invention has a poly-γ-type in which about 70% or more of the constituent units are L-glutamic acid.
Produces glutamic acid.
【0038】さらに、M−28のようにグルタミン酸要
求性を示す菌と、復帰変異によりグルタミン酸要求性が
なくなった菌の両方が本発明の新規な納豆菌に含まれ
る。グルタミン酸は、グルタメ−トラセマ−ゼが欠如し
ていても別の経路でつくられ得る。従って、本発明の方
法に従って、グルタミン酸要求性をマ−カ−にして選択
した変異納豆菌のなかでも、グルタメ−トラセマ−ゼ活
性欠如の表現型を残したままグルタミン酸要求性の表現
型のみが復帰変異により消失する場合がある。このよう
な菌は本発明に好都合に用いられる。Furthermore, both the bacterium that requires glutamic acid, such as M-28, and the bacterium that no longer requires glutamic acid due to reversion are included in the novel natto bacteria of the present invention. Glutamate can be made by an alternative route, even in the absence of glutamase-tracemase. Therefore, among the mutant Bacillus natto selected according to the method of the present invention with the glutamate auxotrophy as a marker, only the glutamate auxotrophic phenotype is restored while the phenotype lacking glutamate-tracemase activity remains. It may disappear due to mutation. Such bacteria are advantageously used in the present invention.
【0039】このようにして得られた変異納豆菌は、納
豆の製造に好ましく用いられる。変異した納豆菌を使っ
た納豆の製造は、通常の当業者に公知の方法により行な
われる。The mutant natto thus obtained is preferably used for producing natto. The production of natto using the mutated Bacillus natto is carried out by a method known to a person skilled in the art.
【0040】例えば、大豆を水に漬け、加熱する。加熱
した大豆を適当に冷まして、変異納豆菌をそれぞれ植菌
し、適当な時間、例えば一晩、静置する。大豆の加熱
は、例えば加圧蒸気にて10分から30分間蒸煮するこ
とによってもできるし、直接加熱することによっても達
成され得る。植菌後は、例えば30℃〜50℃の温度の
下で12〜80時間程度培養することができる。For example, soybeans are immersed in water and heated. The heated soybeans are cooled appropriately, inoculated with mutant Bacillus natto, and allowed to stand for an appropriate time, for example, overnight. The heating of soybeans can be achieved, for example, by steaming with pressurized steam for 10 to 30 minutes or by direct heating. After inoculation, the cells can be cultured at a temperature of, for example, 30 ° C to 50 ° C for about 12 to 80 hours.
【0041】このようにして得られた納豆に含まれる粘
質物すなわち糸は、ポリ−γ−グルタミン酸であり、そ
の構成単位の約70%以上、好ましくは約80%以上は
L−グルタミン酸である。The mucilage contained in the natto thus obtained, that is, the thread, is poly-γ-glutamic acid, and about 70% or more, preferably about 80% or more of its constituent units is L-glutamic acid.
【0042】納豆に含まれる糸の成分の構成単位を確認
するためには、まず、糸の分離をすることが必要であ
る。糸の分離には、例えば、水による洗い出し、エタノ
−ルによる精製、遠心分離による分離、あるいはこれら
の組み合わせが好適に用いられる。In order to confirm the constituent units of the components of the yarn contained in natto, it is necessary to first separate the yarn. For separation of the yarn, for example, washing with water, purification by ethanol, separation by centrifugation, or a combination thereof is suitably used.
【0043】具体的には、例えば、納豆から水で糸を洗
い出し、さらにエタノ−ルを適当量、例えば全体の70
%になるようにいれて、糸をガラス棒などで巻き取るか
遠心分離を行なうかして抽出する。Specifically, for example, the yarn is washed out of natto with water, and an appropriate amount of ethanol is added, for example, 70% of the total amount.
%, And the yarn is extracted by winding it with a glass rod or the like or by centrifugation.
【0044】得られた納豆の糸を、当業者に公知の手
段、例えば酸処理による加水分解を行ない、中和する。
加水分解液を試料として、グルタミン酸とLグルタミン
酸の量を測定する。The obtained natto yarn is neutralized by hydrolysis known to those skilled in the art, for example, by acid treatment.
Using the hydrolyzed solution as a sample, the amounts of glutamic acid and L-glutamic acid are measured.
【0045】グルタミン酸の量の測定には、例えば、ニ
ンヒドリン比色法、ペ−パ−クロマト法、HPLCが好
ましく用いられる。For measurement of the amount of glutamic acid, for example, ninhydrin colorimetry, paper chromatography, and HPLC are preferably used.
【0046】測定にHPLCを用いる場合、カラムは、
タンパク質あるいはアミノ酸の分離に好適ないずれのカ
ラムでも用い得る。例えば、Shodex Asahi
pak ES502C(昭和電工株式会社製)などが用
いられ、抽出は水、あるいは温湯が好ましく用いられ得
る。検出には、当業者に公知の検出用のいずれのカラム
も用いることができる。When HPLC is used for the measurement, the column is
Any column suitable for separating proteins or amino acids can be used. For example, Shodex Asahi
For example, pak ES502C (manufactured by Showa Denko KK) is used, and water or hot water can be preferably used for extraction. For detection, any column for detection known to those skilled in the art can be used.
【0047】L−グルタミン酸の量の測定には、酵素法
が好ましく用いられるがこれに限定されない。酵素法と
しては、例えば、L−グルタミン酸を含む試料に、L−
グルタミン酸のみを基質とする酵素を作用させて、得ら
れた反応液の吸光度を測定する。この吸光度からL−グ
ルタミン酸の量を算出する。For measuring the amount of L-glutamic acid, an enzymatic method is preferably used, but not limited thereto. As an enzymatic method, for example, L-glutamic acid is added to a sample containing L-glutamic acid.
An enzyme using only glutamic acid as a substrate is allowed to act, and the absorbance of the obtained reaction solution is measured. The amount of L-glutamic acid is calculated from the absorbance.
【0048】L−グルタミン酸の量の酵素法による測定
は、市販のキットを用いても容易に行ない得る。例えば
このキットは、べ−リンガ−マンハイム株式会社製のF
キットである。The amount of L-glutamic acid can be easily measured by an enzymatic method using a commercially available kit. For example, this kit is an F-type manufactured by Behringer Mannheim.
It is a kit.
【0049】変異株は、野生株より多い割合でL−グル
タミン酸を含む糸、すなわちポリ−γ−グルタミン酸を
産生することがわかる。It can be seen that the mutant strain produces a thread containing L-glutamic acid at a higher ratio than the wild strain, that is, poly-γ-glutamic acid.
【0050】変異納豆菌の性質を特定するためにグルタ
メ−トラセマ−ゼ活性を測定する。To determine the nature of the mutant Bacillus natto, glutamase-transasease activity is measured.
【0051】グルタメ−トラセマ−ゼの測定方法は、例
えば、D−グルタミン酸からL−グルタミン酸に変化す
る割合を測定する方法であり得る。The method for measuring glutamase trasemase can be, for example, a method for measuring the rate of change from D-glutamic acid to L-glutamic acid.
【0052】具体的には、例えば変異納豆菌あるいは野
生株を適当に取り、水に懸濁して破砕し、細胞抽出液を
得る。この抽出液を適当に希釈し、そのうちの一部をD
−グルタミン酸を含む溶液に入れ、適温で数時間反応さ
せた後、L−グルタミン酸の量を測定する。L−グルタ
ミン酸の量は、例えばF−キットで測定できる。Specifically, for example, a mutant Bacillus natto or a wild strain is appropriately taken, suspended in water and crushed to obtain a cell extract. This extract is diluted appropriately and a part of it is
-Put in a solution containing glutamic acid, react at an appropriate temperature for several hours, and then measure the amount of L-glutamic acid. The amount of L-glutamic acid can be measured, for example, with an F-kit.
【0053】変異処理した納豆菌は、通常の完全培地あ
るいはグルタミン酸を含む最少培地などの通常のいずれ
の培地でも培養することができる。このような培地で培
養した場合でもL−グルタミン酸を多く含むポリ−γ−
グルタミン酸を産生する。The mutated Bacillus natto can be cultured in any ordinary medium such as an ordinary complete medium or a minimal medium containing glutamic acid. Even when cultured in such a medium, poly-γ-rich L-glutamic acid is contained.
Produces glutamic acid.
【0054】好ましくは、L−グルタミン酸を多く含む
培地で変異納豆菌を培養してL−グルタミン酸を多く含
むポリ−γ−グルタミン酸の製造を行う。Preferably, the mutant Bacillus natto is cultured in a medium rich in L-glutamic acid to produce poly-γ-glutamic acid rich in L-glutamic acid.
【0055】本発明の変異納豆菌を取得する方法、その
納豆菌の産生する糸のポリ−γ−グルタミン酸の取得、
およびその利用方法などを以下の実施例に示すが、変異
処理の方法、使用される培地など、本発明はその趣旨を
逸脱しない範囲内で、当業者の知識に基づき種々なる改
良、修正、変形を加えた態様で実施し得るものである。A method for obtaining the mutant Bacillus natto of the present invention, obtaining poly-γ-glutamic acid from a thread produced by the Bacillus natto,
In the following examples, and methods for using the same, the method of mutation treatment, the medium to be used, etc., within the scope not departing from the gist, various improvements, corrections, modifications based on the knowledge of those skilled in the art Can be implemented.
【0056】[0056]
【実施例】次に、本発明に係る納豆菌の取得、納豆菌と
産生される粘質物の性質、およびその粘質物の利用につ
いての実施例及び比較例を説明する。なお、%は特に指
定がない限り重量%を表わす。Next, examples and comparative examples of obtaining the Bacillus natto according to the present invention, the properties of the slime produced with the Bacillus natto, and utilization of the slime are described. In addition,% represents weight% unless otherwise specified.
【0057】実施例1 野生の納豆菌に変異を誘導する処理を施し、グルタミン
酸要求性の変異株を得た。Example 1 A mutant strain requiring glutamic acid was obtained by subjecting a wild natto fungus to a treatment for inducing mutation.
【0058】まず、酵母抽出物0.5%、ペプトン1
%、グルコ−ス1%を含み、0.1Mリン酸バッファ−
でpH7.0に調整した液体栄養培地(以下「液体培
地」という)で培養した宮城野納豆菌を、10、000
rpmにて10分間遠心分離で集菌した。First, yeast extract 0.5%, peptone 1
%, Glucose 1%, 0.1M phosphate buffer-
Natto cultivated in a liquid nutrient medium (hereinafter referred to as "liquid medium") adjusted to pH 7.0 with 10,000
The cells were collected by centrifugation at 10 minutes at rpm.
【0059】この菌を、0.5mg/mlのN−メチル
−N’−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(NTG)を
含む1/10Mリン酸バッファ−(pH6.8)に懸濁
し、氷冷しながら30分放置した。次に、遠心分離で菌
を集め、1/10Mリン酸バッファ−で3回洗浄してN
TGを洗い落した。その後上述の液体培地で35℃で2
時間培養し、再び遠心分離にて集菌し、バッファ−で洗
浄した後、5℃で保存した。This bacterium was suspended in 1/10 M phosphate buffer (pH 6.8) containing 0.5 mg / ml of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG), and cooled on ice. For 30 minutes. Next, the bacteria were collected by centrifugation, washed three times with 1/10 M phosphate buffer, and
TG was washed off. Then, at 35 ° C in the above liquid medium, 2
After culturing for an hour, the cells were collected again by centrifugation, washed with a buffer, and stored at 5 ° C.
【0060】変異処理によって得た菌を、酵母抽出物
0.5%、ペプトン1%、グルコ−ス1%、および寒天
1.5%を含みpH7.1のバッファ−で調製した平板
完全培地に、35℃にて一晩生育させた後、生育したコ
ロニ−を最少培地にレプリカした。最少培地は、グルコ
−ス 0.5%、 (NH4 ) 2 SO4 0.2%、K2 H
PO4 0.5%、クエン酸ナトリウム0.1%、MgS
O4 0.02%、ビオチン0.001%、および寒天2
%をpH7.0に調製したものであった。レプリカした
培地上の菌と完全培地上の菌とを比較して、最少培地に
生育していない菌32004株を完全培地上から選択し
た。選択した菌を最少培地にL−グルタミン酸を加えた
培地上に植菌し、35℃にて一晩静置した。この結果培
地上に生育している菌を、グルタミン酸要求性を示す変
異納豆菌として87株取得した。The bacterium obtained by the mutation treatment was transferred to a complete plate medium containing 0.5% yeast extract, 1% peptone, 1% glucose and 1.5% agar and prepared with a pH 7.1 buffer. After growing overnight at 35 ° C., the grown colonies were replicated on a minimal medium. The minimum medium is 0.5% glucose, 0.2% (NH 4 ) 2 SO 4 , K 2 H
PO 4 0.5%, sodium citrate 0.1%, MgS
O 4 0.02% biotin 0.001%, and agar 2
% Was adjusted to pH 7.0. By comparing the bacteria on the replicated medium with the bacteria on the complete medium, strain 32004 that did not grow on the minimal medium was selected from the complete medium. The selected bacteria were inoculated on a minimal medium supplemented with L-glutamic acid and allowed to stand at 35 ° C. overnight. As a result, 87 strains of bacteria growing on the culture medium were obtained as mutant natto bacteria showing glutamic acid requirement.
【0061】実施例2 実施例1で得られた納豆菌を用いて、納豆を製造し、そ
の粘質物である糸の分析を行なった。Example 2 Using the Bacillus natto obtained in Example 1, natto was produced, and its viscous material, thread, was analyzed.
【0062】丸大豆を水洗いし、一晩水に漬け、121
℃にて15分間加熱した。加熱した大豆を適当に冷まし
て、実施例1で得た納豆菌をそれぞれ植菌し、40℃に
て、一晩静置した。この時、丸大豆をそれぞれ200g
ずつ、原料として用いた。この納豆から水400gで糸
を洗い出した。さらにエタノ−ルを全体の70%になる
ようにいれて糸をガラス棒で巻き取るか遠心分離を行な
うかして抽出した。Wash soybeans and soak in water overnight
Heated at ℃ ° C for 15 minutes. The heated soybeans were cooled appropriately, the natto bacteria obtained in Example 1 were inoculated, and left at 40 ° C. overnight. At this time, 200 g of whole soybeans
Each was used as a raw material. The thread was washed out from the natto with 400 g of water. Further, ethanol was added so as to make up 70% of the whole, and the yarn was extracted by winding it with a glass rod or by centrifugation.
【0063】このようにして得られた納豆の糸0.2g
に1NのHClを2ml入れて、糸の加水分解を行なっ
た後、1NのNaOHを2mlで中和した。この加水分
解液に水1mlを加え5mlとし、グルタミン酸とLグ
ルタミン酸の量を測定するための試料とした。0.2 g of the natto yarn thus obtained
After 2 ml of 1N HCl was added thereto to hydrolyze the yarn, 1N NaOH was neutralized with 2 ml. 1 ml of water was added to the hydrolyzed solution to make 5 ml, which was used as a sample for measuring the amounts of glutamic acid and L-glutamic acid.
【0064】(1)全グルタミン酸の量の測定 試料を水で5倍希釈した後、希釈した試料を10μlず
つHPLCにかけ、試料中の全グルタミン酸の量を調べ
た。カラムは、Shodex SUGAR SC110
1を用い、抽出は水で行なった。このときの流速は、
1.0ml/分、カラムの温度は80℃であった。検出
には、Shodex RI SE−61を使用した。こ
の結果を図1に示す。(1) Measurement of the amount of total glutamic acid After diluting the sample with water five-fold, the diluted sample was subjected to HPLC in increments of 10 μl to determine the amount of total glutamic acid in the sample. The column was Shodex SUGAR SC110
1 and extraction was performed with water. The flow velocity at this time is
The column temperature was 80 ° C. at 1.0 ml / min. Shodex RI SE-61 was used for detection. The result is shown in FIG.
【0065】(2)L−グルタミン酸の量の測定 試料を水で5倍に希釈した後、そのうちの200μl
に、Fキット(べ−リンガ−マンハイム株式会社製)の
溶液1(リン酸カリウム/トリエタノ−ルアミンバッフ
ァ−、pH8.6)600μl、溶液2(ジアフォラ−
ゼ、β−NAD、および安定剤)を200μl、溶液3
(インドニトロテラゾリウムクロライド)を200μお
よび水1800μ加えた。この混合液を、25℃にて2
分間反応させた。波長492nmにて吸光度を測定し
た。その値をE1 とした。(2) Measurement of the amount of L-glutamic acid After diluting the sample 5 times with water, 200 μl of the sample was diluted.
Then, 600 μl of solution 1 (potassium phosphate / triethanolamine buffer, pH 8.6) of F kit (manufactured by Boehringer Mannheim Co., Ltd.) and solution 2 (diaphora)
, Β-NAD and stabilizer), 200 μl, solution 3
(Indonitroterazolium chloride) and 200 μl of water were added. This mixture is added at 25 ° C. for 2 hours.
Allowed to react for minutes. The absorbance was measured at a wavelength of 492 nm. And its value as E 1.
【0066】その後、この溶液に溶液4(グルタメ−ト
デヒドロゲナ−ゼ)を30μl入れ、25℃、15分間
反応させた後、再び波長492nmにて吸光度を測定
し、その値をE2 とした。Thereafter, 30 μl of solution 4 (glutamate dehydrogenase) was added to this solution, and reacted at 25 ° C. for 15 minutes. The absorbance was measured again at a wavelength of 492 nm, and the value was defined as E 2 .
【0067】水200μlを出発物質として同様にE1
とE2 とを測定し、これをブランクの値とした。Similarly, E 1 was used starting from 200 μl of water.
And E 2 and the measured, which was the value of the blank.
【0068】試料およびブランクのE1 およびE2 を基
にして、L−グルタミン酸量を測定した。すなわち、△
E=(試料E2 −試料E1 )−(ブランクE2 −ブラン
クE 1 )とし、L−グルタミン酸量を0.112×△E
(mg/ml)にて算出した。E of Sample and Blank1And ETwoBased on
Then, the amount of L-glutamic acid was measured. That is, △
E = (Sample ETwo-Sample E1)-(Blank ETwo−Bran
Qu E 1) And the amount of L-glutamic acid is 0.112 × ΔE
(Mg / ml).
【0069】このようにして得られた変異納豆菌のうち
代表的な菌を200gの大豆に植えた時の産生される糸
の量、ポリ−γ−グルタミン酸の全グルタミン酸量、L
−グルタミン酸量、および全グルタミン酸に対するL−
グルタミン酸の割合を表1、表2、および表3に示す。
なお、納豆の糸の重量は、糸の乾燥重量のことである。The amount of thread produced when a representative bacterium among the mutant natto bacteria thus obtained was planted in 200 g of soybean, the total glutamic acid content of poly-γ-glutamic acid, L
-Glutamic acid amount and L- based on total glutamic acid
The proportions of glutamic acid are shown in Tables 1, 2 and 3.
The weight of the natto yarn is the dry weight of the yarn.
【0070】[0070]
【表1】 [Table 1]
【0071】[0071]
【表2】 [Table 2]
【0072】[0072]
【表3】 [Table 3]
【0073】この結果、得られたすべての変異株は、野
生株より多い割合でL−グルタミン酸を含む糸、すなわ
ちポリ−γ−グルタミン酸を産生することがわかった。As a result, it was found that all of the obtained mutants produced a thread containing L-glutamic acid at a higher ratio than the wild-type strain, that is, poly-γ-glutamic acid.
【0074】実施例3 実施例1で得られた納豆菌の変異株のグルタメ−トラセ
マ−ゼ活性を測定した。Example 3 The mutant natto strain obtained in Example 1 was measured for glutamase-transasease activity.
【0075】野生株およびそれぞれのグルタミン酸要求
株を1白金耳取り、1mlの水に懸濁して破砕し、細胞
抽出液を得た。この抽出液を10倍希釈し、そのうちの
1mlを1mg/mlのD−グルタミン酸を含む4ml
の溶液に入れ、30℃にて2時間反応させた後、L−グ
ルタミン酸の量を測定した。L−グルタミン酸の量は実
施例2と同様にして測定した。その結果、すべての変異
納豆菌のグルタメ−トラセマ−ゼ活性は、全くないかあ
るいは野生株の1/2以下、好ましくは1/5以下であ
った。この結果を表4に示す。A wild strain and each glutamic acid-requiring strain were picked up with one platinum loop, suspended in 1 ml of water and disrupted to obtain a cell extract. This extract was diluted 10-fold, and 1 ml of it was diluted with 4 ml containing 1 mg / ml D-glutamic acid.
After reacting at 30 ° C. for 2 hours, the amount of L-glutamic acid was measured. The amount of L-glutamic acid was measured in the same manner as in Example 2. As a result, all the mutant Bacillus natto had no glutamate-tracemase activity, or 1 / or less, preferably 1/5 or less of the wild strain. Table 4 shows the results.
【0076】[0076]
【表4】 [Table 4]
【0077】実施例4 実施例2で得られた納豆の糸の構成成分であるポリ−γ
−グルタミン酸の分子量の測定を行った。Example 4 Poly-γ which is a component of the natto yarn obtained in Example 2
-The molecular weight of glutamic acid was measured.
【0078】まず、200gの大豆から得られた納豆を
水約500gで洗い糸を取った。この糸にエタノ−ルを
全量の70%になるように入れ、遠心分離で粘質物を取
った。エタノ−ルを用いたこの操作を何回か繰り返し、
精製した糸を得た。この分子量を測定するため、Sho
dex PROTEIN KW−802.5を用いてH
PLCによるゲルろ過を行った。分子量のマ−カ−とし
てガイタメ−トデヒドロゲナ−ゼ(分子量290,00
0)、ラクテ−トデヒドロゲナ−ゼ(分子量142,0
00)、エノラ−ゼ(分子量67,000)、アデニレ
−トキナ−ゼ(分子量32,000)、チトクロ−ムc
(分子量12,4000)を用い、各リテンションタイ
ムより分子量を算出した。First, natto obtained from 200 g of soybeans was washed with about 500 g of water to obtain a washing thread. Ethanol was added to this yarn so as to be 70% of the total amount, and a viscous substance was removed by centrifugation. This operation using ethanol is repeated several times,
A purified yarn was obtained. To measure this molecular weight, Sho
H using dex PROTEIN KW-802.5
Gel filtration by PLC was performed. Gaitamate dehydrogenase (molecular weight 290,00) as a molecular weight marker
0), lactate dehydrogenase (molecular weight 142,0
00), enolase (molecular weight: 67,000), adenylate tokinase (molecular weight: 32,000), cytochrome c
(Molecular weight: 12,4000), and the molecular weight was calculated from each retention time.
【0079】その結果、強度に糸を引くものおよび普通
に糸を引く納豆に含まれるポリ−γ−グルタミン酸の分
子量は、300,000近くの高分子域であった。一
方、糸の引きが弱く、納豆としては糸の引きが不十分で
あったものに含まれるポリ−γ−グルタミン酸の分子量
は、10,000以下であった。As a result, the molecular weight of the poly-γ-glutamic acid contained in the natto which was strongly threaded and the natto which was normally threaded was in the high molecular range near 300,000. On the other hand, the molecular weight of poly-γ-glutamic acid contained in the natto which had poor thread pulling due to weak thread pulling was 10,000 or less.
【0080】実施例5 実施例1で得られた変異処理した納豆菌の1つを、特殊
な培地で液体培養してL−グルタミン酸を多く含むポリ
−γ−グルタミン酸の製造を行った。Example 5 One of the mutated Bacillus natto obtained in Example 1 was liquid-cultured in a special medium to produce poly-γ-glutamic acid containing a large amount of L-glutamic acid.
【0081】宮城野納豆菌の野生株および実施例1で得
られた納豆菌の1つを、グルコ−ス5%、ポリペプトン
3%、酵母抽出物0.5%、グルタミン酸1%を含み、
pH7.0に調整した液体培地(培地1)およびマルト
−ス5%、ポリペプトン3%、酵母抽出物0.5%、グ
ルタミン酸1%を含みpH7.0に調整した液体培地
(培地2)で培養した。培地は、それぞれ100mlず
つ用い、培養は、400℃にて12時間行なった。培養
後の液にエタノ−ルを70%になるように添加し、ガラ
ス棒で培養液に含まれる糸を巻き取った。A wild strain of Miyagino natto and one of the natto obtained in Example 1 were prepared by adding 5% glucose, 3% polypeptone, 0.5% yeast extract and 1% glutamic acid,
Culture in a liquid medium (medium 1) adjusted to pH 7.0 and a liquid medium (medium 2) adjusted to pH 7.0 containing maltose 5%, polypeptone 3%, yeast extract 0.5%, glutamic acid 1%. did. 100 ml of each medium was used, and the culture was performed at 400 ° C. for 12 hours. Ethanol was added to the liquid after the cultivation so that the concentration became 70%, and the thread contained in the culture liquid was wound up with a glass rod.
【0082】糸の構成成分であるポリ−γ−グルタミン
酸の構造を解析するため、得られた糸を1NのNaOH
で中和して、実施例2と同様にして全グルタミン酸の量
とL−グルタミン酸の量とを測定し、L−グルタミン酸
の割合を調べた。To analyze the structure of poly-γ-glutamic acid which is a component of the yarn, the obtained yarn was treated with 1N NaOH.
Then, the amount of total glutamic acid and the amount of L-glutamic acid were measured in the same manner as in Example 2, and the ratio of L-glutamic acid was examined.
【0083】この結果、培地1から得られた糸の重量
は、野生株で0.62g、変異株で1.03gであっ
た。糸のL−グルタミン酸の割合は、野生株が52.6
%、変異株が90.5%であった。培地2から得られた
糸の重量は、野生株で0.71g、変異株で1.12g
であった。糸のL−グルタミン酸の割合は、野生株が5
1.5%、変異株が90.6%であった。As a result, the weight of the yarn obtained from the culture medium 1 was 0.62 g for the wild strain and 1.03 g for the mutant strain. The ratio of L-glutamic acid in the thread was 52.6 in the wild strain.
% And 90.5% of mutants. The weight of the yarn obtained from the culture medium 2 was 0.71 g for the wild strain and 1.12 g for the mutant strain.
Met. The ratio of L-glutamic acid in the thread was 5 in the wild strain.
1.5% and 90.6% mutants.
【0084】従って、本発明の変異株は、L−グルタミ
ン酸を多く含む培地から多量の糸を産生し、さらにその
糸は構成成分のほとんどがL−グルタミン酸であること
がわかった。Therefore, it was found that the mutant strain of the present invention produced a large amount of thread from a medium containing a large amount of L-glutamic acid, and that the thread contained mostly L-glutamic acid.
【0085】実施例6 変異した納豆菌が産生する納豆の糸を利用して、旨味の
強い調味料を作った。Example 6 A seasoning with a strong umami was produced using natto yarn produced by a mutated Bacillus natto.
【0086】丸大豆を水洗いし、一晩水に漬け、121
℃にて15分間加熱した。加熱した大豆200gを適当
に冷まして、実施例1で得た納豆菌M−28を植菌し、
40℃にて、一晩静置した。次に、この納豆から水40
0gで糸を洗い出した。さらにエタノ−ルを全体の70
%になるようにいれて糸をガラス棒で巻き取って抽出し
た。Wash the whole soybeans and soak in water overnight.
Heated at ℃ ° C for 15 minutes. 200 g of heated soybeans were cooled appropriately and inoculated with the Bacillus natto M-28 obtained in Example 1,
It was left at 40 ° C. overnight. Next, from this natto water 40
The thread was washed out with 0 g. Furthermore, ethanol was added to the total amount of 70%.
%, And the yarn was wound up with a glass rod and extracted.
【0087】上記の方法で得られた納豆の糸をドレッシ
ングの材料として用いた。すなわち、酢、しょうゆ、サ
ラダ油、およびコショウを混合し、ここに化学調味料や
アミノ酸添加物のかわりとして、全体の1%になるよう
に納豆の糸を入れた。比較のために、同様にして得た野
生株を用いて作った納豆の糸を入れてドレッシングを作
った。このようにして得られたドレッシングの中にL−
グルタミン酸がどの程度含まれているかを、実施例2の
方法で調べた。この結果を表に示す。The natto yarn obtained by the above method was used as a dressing material. That is, vinegar, soy sauce, salad oil, and pepper were mixed, and natto thread was added so as to be 1% of the whole instead of the chemical seasoning and the amino acid additive. For comparison, a dressing was made by inserting a natto thread made using a wild strain obtained in the same manner. In the dressing thus obtained, L-
The amount of glutamic acid was examined by the method of Example 2. The results are shown in the table.
【0088】[0088]
【表5】 [Table 5]
【0089】さらに、このドレッシングの官能検査を行
なったところ、従来のドレッシングに比べ、より旨味の
強いドレッシングができた。Further, when the dressing was subjected to a sensory test, it was found that the dressing had a stronger taste than the conventional dressing.
【0090】[0090]
【発明の効果】本発明によれば、グルタメ−トラセマ−
ゼ欠損の新規な納豆菌を得ることができる。According to the present invention, glutamase trasema-
A novel natto-deficient natto bacterium can be obtained.
【0091】本発明によれば、構成単位としてL−グル
タミン酸の割合が多いポリ−γ−グルタミン酸を産生す
る納豆菌を得ることができる。According to the present invention, Bacillus natto producing poly-γ-glutamic acid having a large proportion of L-glutamic acid as a constituent unit can be obtained.
【0092】本発明によれば、上記いずれかの納豆菌で
あって、さらにグルタミン酸要求性の新規な納豆菌を得
ることができる。According to the present invention, any of the above Bacillus natto, and a novel Bacillus natto requiring glutamic acid can be obtained.
【0093】さらに、本発明によれば、このような変異
納豆菌を利用して、従来の納豆よりうま味の増した納豆
を得ることができる。Further, according to the present invention, natto having an increased umami taste can be obtained by using such a mutant natto.
【0094】さらに、本発明によれば、L−グルタミン
酸を多く含むポリ−γ−グルタミン酸を得ることができ
る。Further, according to the present invention, poly-γ-glutamic acid containing a large amount of L-glutamic acid can be obtained.
【0095】さらに、本発明によれば、構成単位として
L−グルタミン酸を多く含むポリ−γ−グルタミン酸を
得ることができ、さらにそれを利用してうま味の強い調
味料をつくることができる。Further, according to the present invention, poly-γ-glutamic acid containing a large amount of L-glutamic acid as a constitutional unit can be obtained, and a seasoning having a strong umami can be produced by using it.
【0096】[0096]
【図1】本発明の変異納豆菌が産生するグルタミン酸の
量を示す図である。FIG. 1 is a graph showing the amount of glutamic acid produced by the mutant Bacillus natto of the present invention.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 FI //(C12N 1/20 C12R 1:125) (C12P 13/00 C12R 1:125) ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on front page (51) Int.Cl. 6 Identification symbol FI // (C12N 1/20 C12R 1: 125) (C12P 13/00 C12R 1: 125)
Claims (7)
lis )に属し、グルタメ−トラセマ−ゼが欠損している
ことを特徴とする新規な納豆菌。1. Bacillus subtiris (Bacillus subti)
nat), which is deficient in glutamase-tracemase.
lis )に属し、構成単位の約70%以上がL−グルタミ
ン酸であるポリ−γ−グルタミン酸を産生することを特
徴とする新規な納豆菌。2. Bacillus subtilis (Bacillus subti)
lis), wherein about 70% or more of the structural units produce poly-γ-glutamic acid, which is L-glutamic acid.
lis )に属し、グルタミン酸要求性を示すことを特徴と
する請求項1または2のいずれかに記載の新規な納豆
菌。3. Bacillus subtiris (Bacillus subti)
lis), and exhibit glutamic acid auxotrophy.
バチラス・ズブチリス(Bacillus subtilis)FERM
P−16147。4. A Bacillus subtilis FERM deficient in glutamase trasemase.
P-16147.
新規な納豆菌の取得方法であって、 バチルス・ズブチリスに属する野生株を変異処理する工
程;変異処理した菌株のうち、完全培地で生育しかつ最
少培地で生育しない菌を選択する工程; および選択し
た菌のうちから最少培地にグルタミン酸を添加した培地
で生育する菌をさらに選択する工程を含む、新規な納豆
菌の取得方法。5. The method for obtaining a novel Bacillus natto according to any one of claims 1 to 4, wherein the wild-type strain belonging to Bacillus subtilis is subjected to mutation treatment; A step of selecting a bacterium that grows on the medium and does not grow on the minimal medium; and a step of further selecting, from the selected bacteria, a bacterium that grows on a medium obtained by adding glutamic acid to the minimal medium.
の約70%以上がL−グルタミン酸であることを特徴と
するポリ−γ−グルタミン酸。6. Poly-γ-glutamic acid produced by a novel Bacillus natto, wherein about 70% or more of the constituent units are L-glutamic acid.
酸を含有することを特徴とする調味料。7. A seasoning comprising the poly-γ-glutamic acid according to claim 6.
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JP9071063A JPH10262655A (en) | 1997-03-25 | 1997-03-25 | New bacillus natto and its acquisition and poly-gamma-glutamic acid produced with new bacillus natto and seasoning utilizing the same |
Applications Claiming Priority (1)
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JP9071063A JPH10262655A (en) | 1997-03-25 | 1997-03-25 | New bacillus natto and its acquisition and poly-gamma-glutamic acid produced with new bacillus natto and seasoning utilizing the same |
Publications (1)
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JPH10262655A true JPH10262655A (en) | 1998-10-06 |
Family
ID=13449704
Family Applications (1)
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JP9071063A Abandoned JPH10262655A (en) | 1997-03-25 | 1997-03-25 | New bacillus natto and its acquisition and poly-gamma-glutamic acid produced with new bacillus natto and seasoning utilizing the same |
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JP (1) | JPH10262655A (en) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003289853A (en) * | 2002-04-02 | 2003-10-14 | Asahimatsu Shokuhin Kk | Bacillus natto having high productivity of glutamic acid and natto having high glutamic acid content produced by using the bacterial strain |
WO2008029504A1 (en) * | 2006-09-04 | 2008-03-13 | Ajinomoto Co., Inc. | Flavor improver |
KR100849617B1 (en) | 2007-03-30 | 2008-07-31 | 주식회사 창성테크 | Vitamin beverage of fermented soybeans and preparation method of thereof |
JP2009007234A (en) * | 2007-05-31 | 2009-01-15 | Ajinomoto Co Inc | Method for preventing solidification of salts |
JP4918173B1 (en) * | 2011-09-13 | 2012-04-18 | あづま食品株式会社 | New natto bacteria and natto produced using this |
CN109609408A (en) * | 2018-12-27 | 2019-04-12 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | One plant of gamma-polyglutamic acid superior strain and the method for preparing gamma-polyglutamic acid is carried out liquid fermentation using the bacterial strain |
-
1997
- 1997-03-25 JP JP9071063A patent/JPH10262655A/en not_active Abandoned
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP4574103B2 (en) * | 2002-04-02 | 2010-11-04 | 旭松食品株式会社 | Glutamic acid high productivity natto strain and natto with high glutamic acid content produced using the same |
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CN109609408A (en) * | 2018-12-27 | 2019-04-12 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | One plant of gamma-polyglutamic acid superior strain and the method for preparing gamma-polyglutamic acid is carried out liquid fermentation using the bacterial strain |
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