JPH10114675A - エンドトキシン誘発性疾患治療薬 - Google Patents
エンドトキシン誘発性疾患治療薬Info
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- JPH10114675A JPH10114675A JP8270247A JP27024796A JPH10114675A JP H10114675 A JPH10114675 A JP H10114675A JP 8270247 A JP8270247 A JP 8270247A JP 27024796 A JP27024796 A JP 27024796A JP H10114675 A JPH10114675 A JP H10114675A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 エンドトキシン誘起性疾患、例えば、敗血症
或いはグラム陰性菌症のショック症状を緩和軽減する効
果を持つ医薬組成物の提供。 【解決手段】 ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類、特
に、ヒスタチン５を有効成分とするエンドトキシン誘発
性疾患治療薬。
或いはグラム陰性菌症のショック症状を緩和軽減する効
果を持つ医薬組成物の提供。 【解決手段】 ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類、特
に、ヒスタチン５を有効成分とするエンドトキシン誘発
性疾患治療薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エンドトキシン誘
発性疾患の抑制、治療目的に使用できる医薬組成物、特
に、エンドトキシン(endotoxin) により誘発される疾患
のうち、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の
緩和軽減を目的とした治療に利用できる医薬組成物に関
する。
発性疾患の抑制、治療目的に使用できる医薬組成物、特
に、エンドトキシン(endotoxin) により誘発される疾患
のうち、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の
緩和軽減を目的とした治療に利用できる医薬組成物に関
する。
【０００２】
【従来の技術】リポ多糖（ＬＰＳ： lipopolysaccharid
e ）、具体的にはグラム陰性菌のエンドトキシンは、免
疫学的には、直接免疫系細胞を活性化する菌体成分型ア
ジュバントとして作用し、免疫反応を非選択的に促進す
るとともに、補体第二経路の活性化を果たすことがよく
知られており、これらＬＰＳの生物活性は、主にリピド
Ａと称される部分によることが報告されている。この免
疫反応の非選択的な促進活性に起因して、種々のグラム
陰性菌のエンドトキシンが血液中に混入すると、エンド
トキシンショック、敗血症性ショックにいたる全身性炎
症反応症候群（ＳＩＲＳ）が誘発される。その炎症反応
が進行する過程において、エンドトキシン（ＬＰＳ）と
マクロファージ等の細胞膜上に存在する受容体ＣＤ１４
との結合が重要であると報告されている（J. Immunol.,
150, 285-289 (1993)等）。この際、ＬＰＳとリポ多糖
体結合蛋白質（ＬＢＰ： LPS-binding protein）の複合
体が前記の受容体ＣＤ１４との結合に与り、それに伴い
ＴＮＦ−α（tumor necrosisfactor-α）産生を誘導す
ることが示唆されている（T.R. Martin et al., J. Cli
n. Invest., 90, 2209-2219 (1992)等）。同時に、その
他のサイトカイン類、例えば、ＩＬ−１等の産生が促進
される。
e ）、具体的にはグラム陰性菌のエンドトキシンは、免
疫学的には、直接免疫系細胞を活性化する菌体成分型ア
ジュバントとして作用し、免疫反応を非選択的に促進す
るとともに、補体第二経路の活性化を果たすことがよく
知られており、これらＬＰＳの生物活性は、主にリピド
Ａと称される部分によることが報告されている。この免
疫反応の非選択的な促進活性に起因して、種々のグラム
陰性菌のエンドトキシンが血液中に混入すると、エンド
トキシンショック、敗血症性ショックにいたる全身性炎
症反応症候群（ＳＩＲＳ）が誘発される。その炎症反応
が進行する過程において、エンドトキシン（ＬＰＳ）と
マクロファージ等の細胞膜上に存在する受容体ＣＤ１４
との結合が重要であると報告されている（J. Immunol.,
150, 285-289 (1993)等）。この際、ＬＰＳとリポ多糖
体結合蛋白質（ＬＢＰ： LPS-binding protein）の複合
体が前記の受容体ＣＤ１４との結合に与り、それに伴い
ＴＮＦ−α（tumor necrosisfactor-α）産生を誘導す
ることが示唆されている（T.R. Martin et al., J. Cli
n. Invest., 90, 2209-2219 (1992)等）。同時に、その
他のサイトカイン類、例えば、ＩＬ−１等の産生が促進
される。
【０００３】ＬＰＳのリピドＡ領域に選択的に結合する
ＨＡ−１Ａヒトモノクローナル抗体等の中和抗体が、エ
ンドトキシン（ＬＰＳ）によるマクロファージ活性化、
ＴＮＦ−α産生誘発を阻害する目的での応用が提案され
ている（E.J. Ziegler et al., N. Engl. J. Med.,324,
429-436 (1991)）。また、ＬＢＰの部分ペプチド鎖を
用いて、ＬＰＳとＬＢＰとの複合体形成を競争的に阻害
する試み（WO 95/08560 等）もなされている。これらＬ
ＰＳとの結合能を有する中和抗体等を利用するショック
症状の軽減、予防法は、ある程度の効果は達成されるも
のの、例えば、中和抗体については、アレルギーを誘発
する可能性を含む等新たな問題を内在するものである。
このため、アレルギー誘発等の問題を含まないヒト由来
の蛋白質、ペプチドであり、かつＬＰＳとの結合能を有
するものを用いて、エンドトキシン（ＬＰＳ）により誘
発される疾患の抑制、治療目的に使用できる医薬組成物
の提供が望まれている。
ＨＡ−１Ａヒトモノクローナル抗体等の中和抗体が、エ
ンドトキシン（ＬＰＳ）によるマクロファージ活性化、
ＴＮＦ−α産生誘発を阻害する目的での応用が提案され
ている（E.J. Ziegler et al., N. Engl. J. Med.,324,
429-436 (1991)）。また、ＬＢＰの部分ペプチド鎖を
用いて、ＬＰＳとＬＢＰとの複合体形成を競争的に阻害
する試み（WO 95/08560 等）もなされている。これらＬ
ＰＳとの結合能を有する中和抗体等を利用するショック
症状の軽減、予防法は、ある程度の効果は達成されるも
のの、例えば、中和抗体については、アレルギーを誘発
する可能性を含む等新たな問題を内在するものである。
このため、アレルギー誘発等の問題を含まないヒト由来
の蛋白質、ペプチドであり、かつＬＰＳとの結合能を有
するものを用いて、エンドトキシン（ＬＰＳ）により誘
発される疾患の抑制、治療目的に使用できる医薬組成物
の提供が望まれている。
【０００４】耳下腺等から分泌される唾液中に含まれ、
ヒスチジンに富むポリペプチドであるヒスタチン類は、
幾つかの細菌（Streptococcus mutans）、真菌（Candid
a albicans）に対して抗菌作用を示すこと、口腔内にお
ける非免疫的な防御機構に大きく関与するであろうこと
が報告されている（F.G. Oppenheim et al., J. Biol.
Chem.,263, 7472-7477 (1988)等）。加えて、前記の抗
菌作用は、成長阻害或いは殺傷作用によるものであり、
これら微生物の外部細胞膜上にヒスタチンが結合する過
程があるであろうと推定されている。また、グラム陰性
菌に対する抗生物質として知られているポリミキシンＢ
と比較し得る程度のＬＰＳに対する結合能を、ヒスタチ
ンも示すことが報告されている。その殺菌作用を利用
し、口腔内における感染の防止等の応用は提案されてい
るが、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の緩
和軽減を目的とした治療への適用は提案されていない。
ヒスチジンに富むポリペプチドであるヒスタチン類は、
幾つかの細菌（Streptococcus mutans）、真菌（Candid
a albicans）に対して抗菌作用を示すこと、口腔内にお
ける非免疫的な防御機構に大きく関与するであろうこと
が報告されている（F.G. Oppenheim et al., J. Biol.
Chem.,263, 7472-7477 (1988)等）。加えて、前記の抗
菌作用は、成長阻害或いは殺傷作用によるものであり、
これら微生物の外部細胞膜上にヒスタチンが結合する過
程があるであろうと推定されている。また、グラム陰性
菌に対する抗生物質として知られているポリミキシンＢ
と比較し得る程度のＬＰＳに対する結合能を、ヒスタチ
ンも示すことが報告されている。その殺菌作用を利用
し、口腔内における感染の防止等の応用は提案されてい
るが、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の緩
和軽減を目的とした治療への適用は提案されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記の課題
を解決するものであり、本発明の目的は、エンドトキシ
ン（ＬＰＳ）により誘起される疾患、例えば、敗血症或
いはグラム陰性菌症のショック症状を緩和軽減する効果
を持つ医薬組成物、特に、ヒト由来蛋白質を有効成分と
して利用する医薬組成物を提供することにある。
を解決するものであり、本発明の目的は、エンドトキシ
ン（ＬＰＳ）により誘起される疾患、例えば、敗血症或
いはグラム陰性菌症のショック症状を緩和軽減する効果
を持つ医薬組成物、特に、ヒト由来蛋白質を有効成分と
して利用する医薬組成物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヒト唾液
中より単離される種々の可溶性蛋白質の生理活性、特
に、抗菌作用、抗真菌作用等の研究を進め、既に論文
（K. Sugiyama, Experientia, 49, 1095-1097 (1993)）
に公表されているとおり、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチ
ン類がグラム陰性菌のエンドトキシン（ＬＰＳ）と強い
結合能を示すことを確認した。更に、このＬＰＳに対す
る結合能に付随して、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類
がＬＰＳの種々の細胞への結合を阻害する作用を有する
こと、加えて、エンドトキシン（ＬＰＳ）により誘起さ
れる疾患、例えば、敗血症或いはグラム陰性菌症のショ
ック症状の緩和軽減する効果に際だっていることを見出
し、本発明を完成するに至った。
中より単離される種々の可溶性蛋白質の生理活性、特
に、抗菌作用、抗真菌作用等の研究を進め、既に論文
（K. Sugiyama, Experientia, 49, 1095-1097 (1993)）
に公表されているとおり、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチ
ン類がグラム陰性菌のエンドトキシン（ＬＰＳ）と強い
結合能を示すことを確認した。更に、このＬＰＳに対す
る結合能に付随して、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類
がＬＰＳの種々の細胞への結合を阻害する作用を有する
こと、加えて、エンドトキシン（ＬＰＳ）により誘起さ
れる疾患、例えば、敗血症或いはグラム陰性菌症のショ
ック症状の緩和軽減する効果に際だっていることを見出
し、本発明を完成するに至った。
【０００７】即ち、本発明は、ヒト由来唾液蛋白質ヒス
タチン類を有効成分として含有する医薬組成物の発明で
あり、具体的には、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類を
有効成分として含有するエンドトキシン誘発性疾患治療
薬である。また、本発明の医薬組成物には、更に、ラク
トフェリンを有効成分として含有せしめてもよく、この
場合、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類の有効量に、相
乗効果を発揮する量のラクトフェリンを添加することが
好ましい。本発明の医薬組成物は、前記エンドトキシン
誘発性疾患のうち、敗血症に適用すると好適である。な
お、本発明の医薬組成物において利用されるヒスタチン
類として、ヒスタチン５、ヒスタチン６又はヒスタチン
３を用いることが好ましい。
タチン類を有効成分として含有する医薬組成物の発明で
あり、具体的には、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類を
有効成分として含有するエンドトキシン誘発性疾患治療
薬である。また、本発明の医薬組成物には、更に、ラク
トフェリンを有効成分として含有せしめてもよく、この
場合、ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類の有効量に、相
乗効果を発揮する量のラクトフェリンを添加することが
好ましい。本発明の医薬組成物は、前記エンドトキシン
誘発性疾患のうち、敗血症に適用すると好適である。な
お、本発明の医薬組成物において利用されるヒスタチン
類として、ヒスタチン５、ヒスタチン６又はヒスタチン
３を用いることが好ましい。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の医薬組成物における主有
効成分であるヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類は、唾液
中に存在するヒスチジンに富むポリペプチドであり、既
にその単離精製法の確立及び一次構造の解明は行われ、
少なくとも１２種類のサブグループの存在が報告されて
いる。既に、報告されているとおり（R.F. Troxler et
al., J. Dent. Res., 69(1), 2-6 (1990) 等）、ヒスタ
チン類は、そのアミノ酸配列の相同性から、ヒスタチン
１及び２、ヒスタチン３〜１２は、それぞれグループを
なしている。即ち、ヒスタチン２はヒスタチン１からペ
プチダーゼにより部分的な酵素消化を受けた断片と考え
られ、ヒスタチン４〜１２は、ヒスタチン３由来の断片
と考えられる。
効成分であるヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類は、唾液
中に存在するヒスチジンに富むポリペプチドであり、既
にその単離精製法の確立及び一次構造の解明は行われ、
少なくとも１２種類のサブグループの存在が報告されて
いる。既に、報告されているとおり（R.F. Troxler et
al., J. Dent. Res., 69(1), 2-6 (1990) 等）、ヒスタ
チン類は、そのアミノ酸配列の相同性から、ヒスタチン
１及び２、ヒスタチン３〜１２は、それぞれグループを
なしている。即ち、ヒスタチン２はヒスタチン１からペ
プチダーゼにより部分的な酵素消化を受けた断片と考え
られ、ヒスタチン４〜１２は、ヒスタチン３由来の断片
と考えられる。
【０００９】これら複数種のヒスタチン類のうち、ヒス
タチン５は、下記のアミノ酸配列（Ｉ）（配列番号：
１）のペプチド鎖からなっており、唾液中の含有量の高
いものの一種である（F.G. Oppenheim, et al., J. Bio
l. Chem., 263, 7472-7477 (1988) 等）。 アミノ酸配列（Ｉ）（配列番号：１）
タチン５は、下記のアミノ酸配列（Ｉ）（配列番号：
１）のペプチド鎖からなっており、唾液中の含有量の高
いものの一種である（F.G. Oppenheim, et al., J. Bio
l. Chem., 263, 7472-7477 (1988) 等）。 アミノ酸配列（Ｉ）（配列番号：１）
【００１０】
【化１】 Asp Ser His Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His 1 5 10 15 Glu Lys His His Ser His Arg Gly Tyr 20 24
【００１１】なお、このヒスタチン５の唾液試料より分
離方法は、公表された文献（Kawasaki, Kuboki et al.,
Eur. J. Biochem.,159, 249 (1986)）に報告されてい
る。ヒスタチン類のエンドトキシン（ＬＰＳ）に対する
結合能に関しては、既に論文（K. Sugiyama, Experient
ia, 49, 1095-1097 (1993)）に報告されているとおり、
例えば、リムルステストにおいて、ＬＰＳ 0.1 ng/mlに
対して、ヒスタチン５ 5 ng/ml以上でゲル化を完全に阻
止すること、ＬＰＳの示す抗補体活性の阻害に関して
も、赤血球溶血反応により評価すると、ＬＰＳのリピド
Ａ 0.1μg に対して、ヒスタチン５ 1.5μg で９０％を
越える阻害効果を示すこと、更には、ＬＰＳのリピドＡ
領域と結合することが知られているポリミキシンＢと対
比させ、二次元拡散実験により、ＬＰＳに対する結合能
を確認したところ、ヒスタチン５15 μg とポリミキシ
ンＢ 20 μg とで同等の複合体形成に伴う沈降が確認さ
れている。また、ヒスタチン５とポリミキシンＢのＬＰ
Ｓの示す抗補体活性の阻害効果も同程度であることも確
認された。
離方法は、公表された文献（Kawasaki, Kuboki et al.,
Eur. J. Biochem.,159, 249 (1986)）に報告されてい
る。ヒスタチン類のエンドトキシン（ＬＰＳ）に対する
結合能に関しては、既に論文（K. Sugiyama, Experient
ia, 49, 1095-1097 (1993)）に報告されているとおり、
例えば、リムルステストにおいて、ＬＰＳ 0.1 ng/mlに
対して、ヒスタチン５ 5 ng/ml以上でゲル化を完全に阻
止すること、ＬＰＳの示す抗補体活性の阻害に関して
も、赤血球溶血反応により評価すると、ＬＰＳのリピド
Ａ 0.1μg に対して、ヒスタチン５ 1.5μg で９０％を
越える阻害効果を示すこと、更には、ＬＰＳのリピドＡ
領域と結合することが知られているポリミキシンＢと対
比させ、二次元拡散実験により、ＬＰＳに対する結合能
を確認したところ、ヒスタチン５15 μg とポリミキシ
ンＢ 20 μg とで同等の複合体形成に伴う沈降が確認さ
れている。また、ヒスタチン５とポリミキシンＢのＬＰ
Ｓの示す抗補体活性の阻害効果も同程度であることも確
認された。
【００１２】なお、アミノ酸配列の相同性の点から、ヒ
スタチン５或いはヒスタチン３とは異なるグループとさ
れるヒスタチン１もその活性は劣るものの、ＬＰＳに対
する結合能を示す。ヒスタチン１は、そのアミノ酸配列
の違いのみでなく、第２番目のアミノ酸残基がリン酸化
されたセリンである点でも、ヒスタチン５等と異なって
いる。アミノ酸配列の違いに加えて、このリン酸化され
たセリンの存在が、活性の違いに関与するとも予測でき
る。特に、リピドＡの如く、リン酸化を受けた骨格を含
む領域との結合において、何らかの影響を与えることが
想定される。従って、脱リン酸化されたヒスタチン１
は、天然のヒスタチン１と結合能の点で相違を生ずるこ
とも想定できる。
スタチン５或いはヒスタチン３とは異なるグループとさ
れるヒスタチン１もその活性は劣るものの、ＬＰＳに対
する結合能を示す。ヒスタチン１は、そのアミノ酸配列
の違いのみでなく、第２番目のアミノ酸残基がリン酸化
されたセリンである点でも、ヒスタチン５等と異なって
いる。アミノ酸配列の違いに加えて、このリン酸化され
たセリンの存在が、活性の違いに関与するとも予測でき
る。特に、リピドＡの如く、リン酸化を受けた骨格を含
む領域との結合において、何らかの影響を与えることが
想定される。従って、脱リン酸化されたヒスタチン１
は、天然のヒスタチン１と結合能の点で相違を生ずるこ
とも想定できる。
【００１３】本発明の医薬組成物に利用できるヒスタチ
ン類としては、ヒスタチン５が最も好ましいが、ヒスタ
チン５のアミノ酸配列を含むヒスタチン３及びヒスタチ
ン６を用いても、ヒスタチン５と同様に好ましい結果が
達成される。即ち、このヒスタチン３及びヒスタチン６
は、ＬＰＳに対する結合においては、ヒスタチン５のア
ミノ酸配列を保持するので、全く遜色がない。また、ヒ
スタチン５のアミノ酸配列を保持する限り、ヒスタチン
６の如く、ヒスタチン３に含まれるアミノ酸配列の一部
を欠くものも、同様に利用することができる。
ン類としては、ヒスタチン５が最も好ましいが、ヒスタ
チン５のアミノ酸配列を含むヒスタチン３及びヒスタチ
ン６を用いても、ヒスタチン５と同様に好ましい結果が
達成される。即ち、このヒスタチン３及びヒスタチン６
は、ＬＰＳに対する結合においては、ヒスタチン５のア
ミノ酸配列を保持するので、全く遜色がない。また、ヒ
スタチン５のアミノ酸配列を保持する限り、ヒスタチン
６の如く、ヒスタチン３に含まれるアミノ酸配列の一部
を欠くものも、同様に利用することができる。
【００１４】一方、ラクトフェリン（ラクトトランスフ
ェリン）は、哺乳類の数種のミルクに見出される鉄結合
性糖蛋白質であり、ヒト血清中に存在するβ1 −鉄結合
グロブリンであるトランスフェリンとは化学的、免疫学
的性質が異なることが知られている。そのペプチド部分
のアミノ酸配列が異なっているともされている。また、
その役割の点でも、ラクトフェリンは、赤血球へ鉄分を
輸送する過程に関与すると考えられているが、血清トラ
ンスフェリンは、血中の鉄と結合し、骨髄や肝臓の再生
成組織へ運ぶ働きをするものとされている。
ェリン）は、哺乳類の数種のミルクに見出される鉄結合
性糖蛋白質であり、ヒト血清中に存在するβ1 −鉄結合
グロブリンであるトランスフェリンとは化学的、免疫学
的性質が異なることが知られている。そのペプチド部分
のアミノ酸配列が異なっているともされている。また、
その役割の点でも、ラクトフェリンは、赤血球へ鉄分を
輸送する過程に関与すると考えられているが、血清トラ
ンスフェリンは、血中の鉄と結合し、骨髄や肝臓の再生
成組織へ運ぶ働きをするものとされている。
【００１５】ヒスタチン類自体は、ヒト由来の蛋白質で
あるので、勿論毒性を示さず、連続的に投与を行うに際
して、この蛋白質に対する抗体生成等の好ましからざる
抗原性に起因する免疫反応を引き起こすことはない。ラ
クトフェリンに関しても、通常経口的に摂取するミルク
中に含まれる蛋白質であるので、好ましくない抗原性を
示すことはない。
あるので、勿論毒性を示さず、連続的に投与を行うに際
して、この蛋白質に対する抗体生成等の好ましからざる
抗原性に起因する免疫反応を引き起こすことはない。ラ
クトフェリンに関しても、通常経口的に摂取するミルク
中に含まれる蛋白質であるので、好ましくない抗原性を
示すことはない。
【００１６】下記の実施例に示すとおり、ラクトフェリ
ンを併用することにより、ヒスタチン類の有する、エン
ドトキシン（ＬＰＳ）により誘起される疾患、例えば、
敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の緩和軽減
する効果を格段に向上することが可能である。この際、
併用するラクトフェリンの用量は、低い用量でよく、即
ち、ラクトフェリン自体を投与する際には、効果が僅か
であるが、ヒスタチン類を同時に用いることで相乗的に
治療効果の格段の向上を果たす用量を用いるのが好まし
い。
ンを併用することにより、ヒスタチン類の有する、エン
ドトキシン（ＬＰＳ）により誘起される疾患、例えば、
敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症状の緩和軽減
する効果を格段に向上することが可能である。この際、
併用するラクトフェリンの用量は、低い用量でよく、即
ち、ラクトフェリン自体を投与する際には、効果が僅か
であるが、ヒスタチン類を同時に用いることで相乗的に
治療効果の格段の向上を果たす用量を用いるのが好まし
い。
【００１７】本発明の医薬組成物において、有効成分と
して利用されるヒスタチン５を初めとするヒスタチン
類、並びにラクトフェリンは、いずれも水溶性に富む蛋
白質であるため、両者とも容易に注射剤等、血管内投与
に利用される液剤に調製することができる。エンドトキ
シン誘発性疾患は、全身性免疫反応に伴う疾患であるた
め、静脈注射、点滴等の血管内投与されるのが通常であ
る。本発明の医薬組成物の用量は、患者の年齢、性別、
体重に応じて、また投与の目的、症状の軽重に従って異
なるが、通常、ヒスタチン類として１回血中濃度 0.2〜
10.0μＭに相当する量を１日１〜数回血管内投与する。
また、併用するラクトフェリンの用量は、前述するとお
り、相乗効果を発揮する量とするのが好ましい。一般
に、ヒスタチン類の用量１回量血中濃度 0.2〜3.0 μＭ
に相当する量に対して、ラクトフェリンの用量を１回量
血中濃度 5〜50μg/mlに相当する量の範囲等に選択する
ことが好ましい。
して利用されるヒスタチン５を初めとするヒスタチン
類、並びにラクトフェリンは、いずれも水溶性に富む蛋
白質であるため、両者とも容易に注射剤等、血管内投与
に利用される液剤に調製することができる。エンドトキ
シン誘発性疾患は、全身性免疫反応に伴う疾患であるた
め、静脈注射、点滴等の血管内投与されるのが通常であ
る。本発明の医薬組成物の用量は、患者の年齢、性別、
体重に応じて、また投与の目的、症状の軽重に従って異
なるが、通常、ヒスタチン類として１回血中濃度 0.2〜
10.0μＭに相当する量を１日１〜数回血管内投与する。
また、併用するラクトフェリンの用量は、前述するとお
り、相乗効果を発揮する量とするのが好ましい。一般
に、ヒスタチン類の用量１回量血中濃度 0.2〜3.0 μＭ
に相当する量に対して、ラクトフェリンの用量を１回量
血中濃度 5〜50μg/mlに相当する量の範囲等に選択する
ことが好ましい。
【００１８】本発明の医薬組成物のエンドトキシン誘発
性疾患に対する発症の抑制緩和の作用は、エンドトキシ
ン（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージからのＴＮＦ
−α産生の閾値を著しく低下させるＬＰＳ／ＬＢＰ複合
体の形成を抑制することによると予測される。即ち、ヒ
スタチン類、特にヒスタチン５等は、ＬＰＳのリピドＡ
領域と選択的かつ速やかに結合するので、前記のＬＰＳ
／ＬＢＰ複合体形成を競争的に阻害することができ、そ
れに伴いＬＰＳ／ＬＢＰ複合体がマクロファージ細胞膜
上の受容体ＣＤ１４に結合する過程を抑制できる。ま
た、ＬＰＳとヒスタチン類の結合した複合体は、もはや
マクロファージ細胞膜上の受容体ＣＤ１４等に結合する
能力が極度に劣るため、ＴＮＦ−α産生を始め、その他
炎症性液性因子の産生が引き起こされない。このような
機構により、過剰な免疫反応とそれに引き続き起こる種
々のショック症状への進行が抑えられると考えられる。
性疾患に対する発症の抑制緩和の作用は、エンドトキシ
ン（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージからのＴＮＦ
−α産生の閾値を著しく低下させるＬＰＳ／ＬＢＰ複合
体の形成を抑制することによると予測される。即ち、ヒ
スタチン類、特にヒスタチン５等は、ＬＰＳのリピドＡ
領域と選択的かつ速やかに結合するので、前記のＬＰＳ
／ＬＢＰ複合体形成を競争的に阻害することができ、そ
れに伴いＬＰＳ／ＬＢＰ複合体がマクロファージ細胞膜
上の受容体ＣＤ１４に結合する過程を抑制できる。ま
た、ＬＰＳとヒスタチン類の結合した複合体は、もはや
マクロファージ細胞膜上の受容体ＣＤ１４等に結合する
能力が極度に劣るため、ＴＮＦ−α産生を始め、その他
炎症性液性因子の産生が引き起こされない。このような
機構により、過剰な免疫反応とそれに引き続き起こる種
々のショック症状への進行が抑えられると考えられる。
【００１９】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものでは
ない。
明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものでは
ない。
【００２０】（実施例１）マウス敗血症モデルを利用し
て、ＬＰＳ致死毒性に対するヒスタチン５投与による延
命効果を検証した。用いた系は、エンドトキシンショッ
クモデルとしてよく知られている、Propionibacterium
acnes (P. acnes)を予め前投与しておき、ＬＰＳ量１〜
10μg/bodyの投与でエンドトキシンショックを誘導する
実験系である（MINOPHAGEN MEDICALREVIEW, 1995 JUL 4
0(4) 42-45 等）。この系では、前投与したP. acnesの
刺激によりＴｈ１細胞が誘導を受け、このＴｈ１細胞か
ら産生されるＴＮＦ−γがマクロファージに作用して、
活性化マクロファージが誘導されている。この活性化マ
クロファージはＬＰＳに対する応答性を獲得しているた
め、少量のＬＰＳ投与に反応して、ＴＮＦ−α、ＩＬ−
１等を過剰産生する。この過剰産生されたＴＮＦ−α、
ＩＬ−１等の作用で、ショック症状が誘発される。
て、ＬＰＳ致死毒性に対するヒスタチン５投与による延
命効果を検証した。用いた系は、エンドトキシンショッ
クモデルとしてよく知られている、Propionibacterium
acnes (P. acnes)を予め前投与しておき、ＬＰＳ量１〜
10μg/bodyの投与でエンドトキシンショックを誘導する
実験系である（MINOPHAGEN MEDICALREVIEW, 1995 JUL 4
0(4) 42-45 等）。この系では、前投与したP. acnesの
刺激によりＴｈ１細胞が誘導を受け、このＴｈ１細胞か
ら産生されるＴＮＦ−γがマクロファージに作用して、
活性化マクロファージが誘導されている。この活性化マ
クロファージはＬＰＳに対する応答性を獲得しているた
め、少量のＬＰＳ投与に反応して、ＴＮＦ−α、ＩＬ−
１等を過剰産生する。この過剰産生されたＴＮＦ−α、
ＩＬ−１等の作用で、ショック症状が誘発される。
【００２１】前記のエンドトキシンショックモデルに対
して、ＬＰＳ投与の２時間前にヒスタチン５を投与し、
ＬＰＳ投与後２４時間経過時における生存率を、ヒスタ
チン非投与（参照群）と比較した。なお、本試験では、
ヒスタチン５を含む被験試料として、ヒト唾液100 μl/
bodyを血管内投与した。また、ヒスタチン５等の肝臓に
おける代謝を遅らせる目的で、ＬＰＳ投与の際、ＬＰＳ
1μg/bodyとガラクトサミン30 mg/kgを同時に血管内投
与した。ヒスタチン５の投与群では、生存個体数は４／
５であったが、非投与群では、生存個体数は０／５であ
った。
して、ＬＰＳ投与の２時間前にヒスタチン５を投与し、
ＬＰＳ投与後２４時間経過時における生存率を、ヒスタ
チン非投与（参照群）と比較した。なお、本試験では、
ヒスタチン５を含む被験試料として、ヒト唾液100 μl/
bodyを血管内投与した。また、ヒスタチン５等の肝臓に
おける代謝を遅らせる目的で、ＬＰＳ投与の際、ＬＰＳ
1μg/bodyとガラクトサミン30 mg/kgを同時に血管内投
与した。ヒスタチン５の投与群では、生存個体数は４／
５であったが、非投与群では、生存個体数は０／５であ
った。
【００２２】この結果より、ヒスタチン５は、予めＬＰ
Ｓに対する応答性を獲得した活性化マクロファージが誘
導されている系においても、ＬＰＳ投与により誘起され
る重篤なショック症状を軽減緩和する効果を示すことが
判る。
Ｓに対する応答性を獲得した活性化マクロファージが誘
導されている系においても、ＬＰＳ投与により誘起され
る重篤なショック症状を軽減緩和する効果を示すことが
判る。
【００２３】（実施例２）前記するマクロファージへの
ＬＰＳ結合に対するヒスタチン５の阻害効果が、ラクト
フェリンを並行して投与することを検証する目的で、類
似する機構により、細胞上にＬＰＳ結合が起こると考え
られる繊維芽細胞へのＬＰＳ結合に対する、ヒスタチン
５とラクトフェリンの単独による阻害効果と、併用によ
る格段の阻害効果の向上を検証した。
ＬＰＳ結合に対するヒスタチン５の阻害効果が、ラクト
フェリンを並行して投与することを検証する目的で、類
似する機構により、細胞上にＬＰＳ結合が起こると考え
られる繊維芽細胞へのＬＰＳ結合に対する、ヒスタチン
５とラクトフェリンの単独による阻害効果と、併用によ
る格段の阻害効果の向上を検証した。
【００２４】評価系は、歯肉繊維芽細胞へのフルオレセ
インイソチオシアネート(FITC)−ＬＰＳの結合に対する
ヒスタチン５とラクトフェリンの阻害活性を、フローサ
イトメトリーにより結合FITC-LPS量の減少を測定した。
なお、測定結果を基に、阻害率として算定した。表１
に、ラクトフェリンを単独で添加した際の阻害活性を、
表２に、ヒスタチン５を単独で添加した際の阻害活性を
示す。
インイソチオシアネート(FITC)−ＬＰＳの結合に対する
ヒスタチン５とラクトフェリンの阻害活性を、フローサ
イトメトリーにより結合FITC-LPS量の減少を測定した。
なお、測定結果を基に、阻害率として算定した。表１
に、ラクトフェリンを単独で添加した際の阻害活性を、
表２に、ヒスタチン５を単独で添加した際の阻害活性を
示す。
【００２５】
【表１】
【００２６】
【表２】 ヒスタチン５添加量（μＭ） 阻害率（％） ０．０５ ８ ０．１ ９ ０．２ ３０ ０．４ ３７ ０．８ ３２ １．６ ３３ ３．１２５ ４２ ６．２５ ４９
【００２７】前記の結果に示されるとおり、ヒスタチン
５及びラクトフェリンともに、歯肉繊維芽細胞へのＬＰ
Ｓ結合に対する阻害活性を示すことが確認された。次い
で、ラクトフェリンを併用することにより、ヒスタチン
５の阻害活性が格段に高まることを検証した。即ち、前
記表１に示されるラクトフェリン単独では、阻害率が低
いラクトフェリン添加量５μg/mlを並行して添加した
際、歯肉繊維芽細胞へのＬＰＳ結合に対する阻害率に対
するヒスタチン５添加量依存性を測定した。表３に、ラ
クトフェリン併用の有無による違いを対比して示す。
５及びラクトフェリンともに、歯肉繊維芽細胞へのＬＰ
Ｓ結合に対する阻害活性を示すことが確認された。次い
で、ラクトフェリンを併用することにより、ヒスタチン
５の阻害活性が格段に高まることを検証した。即ち、前
記表１に示されるラクトフェリン単独では、阻害率が低
いラクトフェリン添加量５μg/mlを並行して添加した
際、歯肉繊維芽細胞へのＬＰＳ結合に対する阻害率に対
するヒスタチン５添加量依存性を測定した。表３に、ラ
クトフェリン併用の有無による違いを対比して示す。
【００２８】
【表３】 ヒスタチン５添加量（μＭ） 阻害率（％） ラクトフェリン無 ラクトフェリン有 ０．０５ ８ ３９ ０．１ ９ ４７ ０．２ ３０ ４４ ０．４ ３７ ４３ ０．８ ３２ ４３ １．６ ３３ ６３ ３．１２５ ４２ ５３ ６．２５ ４９ ４５
【００２９】表３に示すとおり、ラクトフェリン５μg/
mlを併用することにより、阻害率は格段に向上してお
り、特に最大の阻害率を示すヒスタチン５の添加量は、
1.6 μＭとなっていることが判る。即ち、ヒスタチン５
の添加量が３μＭ以下の範囲で少量のラクトフェリンを
併用することによる阻害活性の向上が著しい結果と解さ
れる。この範囲においては、明らかに相乗的と認められ
る阻害活性の向上が観測された。
mlを併用することにより、阻害率は格段に向上してお
り、特に最大の阻害率を示すヒスタチン５の添加量は、
1.6 μＭとなっていることが判る。即ち、ヒスタチン５
の添加量が３μＭ以下の範囲で少量のラクトフェリンを
併用することによる阻害活性の向上が著しい結果と解さ
れる。この範囲においては、明らかに相乗的と認められ
る阻害活性の向上が観測された。
【００３０】この併用による阻害率の格段の向上の機構
は判然とはしないが、ヒスタチン５は、ＬＰＳのリピド
Ａの領域に作用するが、ラクトフェリンはヒスタチン５
とは異なる機構でＬＰＳと相互作用、結合を行い、その
違いに起因して、ヒスタチン５のＬＰＳへの結合を触媒
的に促進する作用を果たしていることを示唆する結果と
も考えられる。
は判然とはしないが、ヒスタチン５は、ＬＰＳのリピド
Ａの領域に作用するが、ラクトフェリンはヒスタチン５
とは異なる機構でＬＰＳと相互作用、結合を行い、その
違いに起因して、ヒスタチン５のＬＰＳへの結合を触媒
的に促進する作用を果たしていることを示唆する結果と
も考えられる。
【００３１】
【発明の効果】本発明の医薬組成物は、ヒスタチン類、
特にヒスタチン５を有効成分として、エンドトキシン
（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージからのＴＮＦ−
α産生の閾値を著しく低下させるＬＰＳ／ＬＢＰ複合体
の形成を抑制することができ、ＴＮＦ−α産生を始め、
その他炎症性液性因子の産生を有効に抑制する効果をも
つ。従って、エンドトキシン（ＬＰＳ）の由来する細菌
の種類に依らず、かつ広範なＬＰＳにより誘起される疾
患、例えば、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症
状の緩和軽減する効果を発揮する。
特にヒスタチン５を有効成分として、エンドトキシン
（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージからのＴＮＦ−
α産生の閾値を著しく低下させるＬＰＳ／ＬＢＰ複合体
の形成を抑制することができ、ＴＮＦ−α産生を始め、
その他炎症性液性因子の産生を有効に抑制する効果をも
つ。従って、エンドトキシン（ＬＰＳ）の由来する細菌
の種類に依らず、かつ広範なＬＰＳにより誘起される疾
患、例えば、敗血症或いはグラム陰性菌症のショック症
状の緩和軽減する効果を発揮する。
【００３２】
配列番号：１ 配列の長さ：２４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Asp Ser His Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His 1 5 10 15 Glu Lys His His Ser His Arg Gly Tyr 20 ２４
Claims (4)
- 【請求項１】 ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類を有効
成分として含有するエンドトキシン誘発性疾患治療薬。 - 【請求項２】 更に、ラクトフェリンを有効成分として
含有する請求項１記載のエンドトキシン誘発性疾患治療
薬。 - 【請求項３】 エンドトキシン誘発性疾患が敗血症であ
る請求項１又は２記載のエンドトキシン誘発性疾患治療
薬。 - 【請求項４】 ヒト由来唾液蛋白質ヒスタチン類がヒス
タチン５、ヒスタチン６又はヒスタチン３である請求項
１又は２記載のエンドトキシン誘発性疾患治療薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8270247A JPH10114675A (ja) | 1996-10-11 | 1996-10-11 | エンドトキシン誘発性疾患治療薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8270247A JPH10114675A (ja) | 1996-10-11 | 1996-10-11 | エンドトキシン誘発性疾患治療薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10114675A true JPH10114675A (ja) | 1998-05-06 |
Family
ID=17483603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8270247A Pending JPH10114675A (ja) | 1996-10-11 | 1996-10-11 | エンドトキシン誘発性疾患治療薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10114675A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7323442B2 (en) | 2001-02-15 | 2008-01-29 | Meiji Dairies Corporation | Agents for alleviating symptoms accompanied by inflammation |
-
1996
- 1996-10-11 JP JP8270247A patent/JPH10114675A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7323442B2 (en) | 2001-02-15 | 2008-01-29 | Meiji Dairies Corporation | Agents for alleviating symptoms accompanied by inflammation |
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