JPH0987284A

JPH0987284A - Antineoplastic material be-42303 strain

Info

Publication number: JPH0987284A
Application number: JP26623295A
Authority: JP
Inventors: Atsushi Hirano; 篤平野; Shigeru Nakajima; 中島　　茂; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Katsuhisa Ojiri; 勝久小尻; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1995-09-20
Filing date: 1995-09-20
Publication date: 1997-03-31

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a new antineoplastic material manifesting antineoplastic effects even in various tumors on which an ordinary antineoplastic agents can not manifest their effects. SOLUTION: This material is a compound expressed in formula (R<1> is OH or a hydrazino; R<2> is H or methyl). This compound is obtained by aerobic culture of a microorganism or its variant, such as streptomyces sp A4230, in a culturing medium like yeast, malt agar and collecting. The culturing condition is at 22-37 deg.C (preferably 26-37 deg.C), at 4-8pH of and for 48-192 hours (preferably 72-144 hours).

Description

Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を有する新規化合物群、その製造法及びその用途並
びに該化合物を産生する微生物に関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention is useful in the field of medicine, and more specifically, it relates to a novel compound group having an antitumor activity by inhibiting the growth of tumor cells, a method for producing the same, a use thereof and the compound. It relates to the microorganisms produced.

【０００２】[0002]

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。2. Description of the Related Art In the field of cancer chemotherapy, many compounds have already been put into practical use as pharmaceuticals. However, its effect on various types of tumors is not always sufficient, and its clinical applicability is complicated as the phenomenon of resistance of tumor cells to these drugs is clinically revealed [47] Article of the General Meeting of the Japanese Cancer Society, 12
Pp. 15-15 (1988) etc.]. Under such circumstances, the development of new antitumor substances is always required in the field of cancer treatment.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a novel antitumor substance which can satisfy the above demand. That is, an object of the present invention is to provide a compound that exhibits an antitumor effect even on various tumors in which existing antitumor substances cannot sufficiently exert an effect.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、一般式
［１］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示すこと
を見いだして本発明を完成した。The present inventors extensively screened secondary microbial metabolites for substances having antitumor activity in order to solve the above-mentioned problems, and as a result, are represented by the general formula [1]. The present invention has been completed by discovering that the compound exhibits an excellent antitumor effect.

【０００５】即ち、本発明は新規な一般式That is, the present invention provides a new general formula

【０００６】[0006]

【化４】［式中、Ｒ₁はヒドロキシ基またはヒドラジノ基を、Ｒ₂
は水素原子またはメチル基を示す］で表される化合物、
その製法及び用途、並びに一般式［１Ａ］の化合物を産
生する能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関するものである。以
下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３
０３類の物理化学的な性状を示す。ここで、一般式
［１］のＲ₁がヒドロキシ基であり、Ｒ₂がメチル基であ
る化合物をＢＥ−４２３０３Ａ、Ｒ₁がヒドロキシ基で
あり、Ｒ₂が水素原子である化合物をＢＥ−４２３０３
Ｂ、Ｒ₁がヒドラジノ基であり、Ｒ₂がメチル基である化
合物をＢＥ−４２３０３Ｃ、Ｒ₁がヒドラジノ基であ
り、Ｒ₂が水素原子である化合物をＢＥ−４２３０３Ｄ
とそれぞれ称する。下記にＮＭＲ測定における略号の意
味を示す。ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットｂｒ：ブロードＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＢＥ−４２３０３Ａの物理化学的性状性状；白色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₃₀Ｈ₄₀Ｏ₅Ｎ₂ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して：実測値５０９．３０４８計算値５０９．３０１６比旋光度；［α］²⁰ _D ＝＋３７２°（ｃ１．０，
ＣＨＣｌ₃ −ＣＨ₃ＯＨ／６：１）紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）；２７８（３２０００）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３３１
９，２９５２，２９２５，２８６３，１７１１，１６
７６，１６５１，１６２０，１５９７，１５４５，１４
５２，１３４６，１２５２，１０５７，１００３，９６
６融点；２５０ ℃ （分解）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃−Ｃ
Ｄ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ：６．９９（２Ｈ，
ｍ），６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），６．
２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），５．３７（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，９．３Ｈｚ），５．２
０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，８．８Ｈｚ，
４．９Ｈｚ），３．６０（２Ｈ，ｍ），２．８４
〜２．９６（２Ｈ，ｍ），２．８４（３Ｈ，ｓ），
２．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，
１１．７Ｈｚ，＜０．５Ｈｚ），２．５６（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，９．３Ｈｚ），２．４０
（１Ｈ，ｍ），２．３０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１
６．６Ｈｚ，１２．２Ｈｚ，４．４Ｈｚ），２．２
０（１Ｈ，ｍ），１．９７〜２．１５（４Ｈ，
ｍ），１．９１（１Ｈ，ｍ），１．８２（１
Ｈ，ｍ），１．４６〜１．５４（２Ｈ，ｍ），
１．３１（１Ｈ，ｍ），１．１０〜１．２６（２
Ｈ，ｍ），１．０６（１Ｈ，ｍ），０．９６
（１Ｈ，ｍ），０．８５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ），０．７７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），
０．７５（１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃
−ＣＤ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ；２０２．２
（ｓ），１９４．９（ｓ），１８６．５
（ｓ），１７２．８（ｓ），１６５．８
（ｓ），１３７．５（ｄ），１３６．７
（ｄ），１３５．９（ｄ），１３３．６
（ｄ），１３２．２（ｄ），１２９．０
（ｄ），１００．８（ｓ），６６．０（ｄ），
６５．５（ｄ），５４．７（ｄ），５２．７
（ｄ），５１．５（ｄ），４８．３（ｄ），
４３．７（ｄ），４０．５（ｔ），３８．６
（ｔ），３８．１（ｔ），３３．２（ｔ），２
６．７（ｔ），２６．１（ｑ），２５．８
（ｔ），２４．３（ｔ），２１．４（ｔ），１
７．０（ｑ），１２．１（ｑ）溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒および水に
難溶。酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水
（１０：２：０．１）］ＢＥ−４２３０３Ｂの理化学的性状性状；白色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₂₉Ｈ₃₉Ｏ₅Ｎ₂ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して：実測値４９５．２８７４計算値４９５．２８５９紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）；２７７（３８０００）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３３２
６，２９５４，２９４８，１７１８，１６４８，１６１
２，１５９６，１５５８，１４５６，１３４４，１２
５３，１０６０，１００４，９６０融点；２５０ ℃ （分解）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃
−ＣＤ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ；７．０２（２
Ｈ，ｍ），６．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈ
ｚ），６．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），
５．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，８．８
Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈ
ｚ，８．８Ｈｚ，５．４Ｈｚ），３．７７（１Ｈ，
ｍ），３．５５（１Ｈ，ｍ），２．９３（１
Ｈ，ｍ），２．８９（１Ｈ，ｍ），２．７８（１
Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．８Ｈ
ｚ，８．８Ｈｚ），２．３５〜２．５０（２Ｈ，
ｍ），２．００〜２．３０（５Ｈ，ｍ），１．８
７（１Ｈ，ｍ），１．８２（１Ｈ，ｍ），１．
５９（１Ｈ，ｍ），１．５３（１Ｈ，ｍ），１．
２０〜１．３８（３Ｈ，ｍ），１．０８（１Ｈ，
ｍ），１．００（１Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ
ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝
７．３Ｈｚ），０．８０（１Ｈ，ｍ）溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒および水に
難溶。酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質Ｒｆ値；０．２８［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０：２：０．１）］ＢＥ−４２３０３Ｃの理化学的性状性状；黄褐色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₃₀Ｈ₄₃Ｏ₄Ｎ₄ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して：実測値５２３．３２６２計算値５２３．３２８４比旋光度；［α］²⁰ _D ＝＋２００° （ｃ０．
２，ＣＨＣｌ₃−ＣＨ₃ＯＨ／６：１）紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）；２０２（１５０００），２４５（ｓ
ｈ），２８５（２４０００），３４５（ｓｈ）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1 ）３
４２３，２９４８，２８６３，１６５０，１６２
５，１５９２，１５００，１４４８，１４３０，
１４００，１２７０，１２５３，１０５３，
１００２，９７０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ；１１．４（１Ｈ，ｓ），７．３１（１Ｈ，
ｂｒｓ），７．１０（２Ｈ，ｍ），６．５２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ），６．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
４．６Ｈｚ），５．５６（２Ｈ，ｍ），３．９５（２
Ｈ，ｓ），３．６２（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝４．３Ｈ
ｚ），３．５６（１Ｈ，ｍ），３．３８（１Ｈ，ｄｄ
ｄ，Ｊ＝１２．２，１０．７，４．３Ｈｚ），３．
１３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１０．７Ｈ
ｚ，４．９Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｍ），２．９８
（１Ｈ，ｍ），２．８８（３Ｈ，ｓ），２．６１（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，８．６Ｈｚ），２．
５４（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｍ），２．０６
〜２．１８（３Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｍ），１．
９２（２Ｈ，ｍ），１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５９
（１Ｈ，ｍ），１．２５〜１．４５（３Ｈ，ｍ），
１．１４（１Ｈ，ｍ），１．０４（１Ｈ，ｍ），０．９
４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８６（３
Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．８５（１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃） δｐｐｍ；２００．９（ｓ），１９５．２
（ｓ），１７３．２（ｓ），１７２．８
（ｓ），１６６．６（ｓ），１３７．７
（ｄ），１３６．２（ｄ），１３５．０（ｄ），
１３３．２（ｄ），１３３．０（ｄ），１２
９．６（ｄ），９３．６（ｓ），６５．８
（ｄ），６５．２（ｄ），５３．３（ｄ），
５２．９（ｄ），５１．４（ｄ），４８．５
（ｄ），４３．４（ｄ），４０．９（ｔ），
３８．７（ｔ），３８．６（ｔ），２９．１
（ｔ），２６．３（ｑ），２６．２（ｔ），
２５．４（ｔ），２５．１（ｔ），２２．２
（ｔ），１７．４（ｑ），１２．４（ｑ）溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に溶け易
く、水に溶けにくい。Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０：２：０．１）］ＢＥ−４２３０３Ｄの理化学的性状性状；黄褐色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₄Ｎ₄ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て：実測値５０９．３１３２計算値５０９．３１２８比旋光度；［α］²⁰ _D ＝＋１４８° （ｃ
０．２，ＣＨＣｌ₃−ＣＨ₃ＯＨ／６：１）紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）；２０２（１４０００），２４８（ｓ
ｈ），２８５（２４０００），３４５（ｓｈ）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４
２４，２９５０，２８６１，１６４３，１６２
５，１５８９，１５００，１４５０，１４２７，
１３９０，１３０５，１２５１，１０６０，
１０００，９７０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ；１１．４（１Ｈ，ｓ），７．５８（１
Ｈ，ｂｒｓ），７．１０（２Ｈ，ｍ），６．５１
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０），６．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１５．０），５．５４（２Ｈ，ｍ），
５．４６（１Ｈ，ｂｒｓ），３．９９（２Ｈ，
ｓ），３．８４（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝４．８Ｈ
ｚ），３．５７（１Ｈ，ｍ），３．４０（１Ｈ，
ｄｔ，Ｊ＝１１．８，４．４Ｈｚ），３．１４
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１１．８，４．５），３．０５
（１Ｈ，ｍ），２．９８（１Ｈ，ｍ），２．６２
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．７，８．６Ｈｚ），
２．５５（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｍ），
２．０２〜２．２０（４Ｈ，ｍ），１．８８
（２Ｈ，ｍ），１．７６（１Ｈ，ｍ），１．５９
（１Ｈ，ｍ），１．５１（１Ｈ，ｍ），１．
４０（１Ｈ，ｍ），１．３３（１Ｈ，ｍ），
１．１４（１Ｈ，ｍ），１．０５（１Ｈ，ｍ），
０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．
８６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．８５
（１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃） δｐｐｍ；２０１．０（ｓ），１９６．４
（ｓ），１７５．２（ｓ），１７４．０
（ｓ），１６６．６（ｓ），１３７．６
（ｄ），１３６．３（ｄ），１３５．１（ｄ），
１３２．９（ｄ），１２９．５（ｄ），９３．２
（ｓ），６５．９（ｄ），６０．０（ｄ），
５３．５（ｄ），５２．８（ｄ），５１．５
（ｄ），４８．６（ｄ），４３．４（ｄ），
４０．８（ｔ），３８．９（ｔ），３８．６
（ｔ），２９．１（ｔ），２８．５（ｔ），２
６．１（ｔ），２５．３（ｔ），２２．６
（ｔ），１７．４（ｑ），１２．３（ｑ）溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に溶け易
く、水に溶けにくい。Ｒｆ値；０．５０［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０：２：０．１）］ＢＥ−４２３０３類の抗腫瘍作用抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−４２３０３類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液
とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地
（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２０ｍ
Ｍの２−メルカプトエタノールを含む）５０μｌを９６
穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％
ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液を５０μｌを加え、
３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定
法により対照群と比較した。マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏ
ｎ２６に対する抗腫瘍試験は、ＢＥ−４２３０３類を
ジメチルスルホキシドに溶解した後ジメチルスルホキシ
ドで逐次希釈してから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地に加え検液とした。１ｘ１０³個の腫瘍
細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地）１００μｌを９６穴マイクロプレート
に分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した
後に上記の検液１００μｌを加え、３７℃で７２時間、
５％ＣＯ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定
し、０．４％スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭ
トリス液を用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍ
を対照波長として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して
対照群と比較した。その結果、ＢＥ−４２３０３類は両
腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止活性を示し、５０％増殖
阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。更に、Ｂ
Ｅ−４２３０３類のヒト腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を
試験管内で試験した。細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−
１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−
４５を使用し、細胞培養用培地は、全ての腫瘍細胞共
に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用い、
上記のマウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６と同様の方法
を用いて測定した。その結果、ＢＥ−４２３０３類はヒ
ト腫瘍細胞に対しても強い増殖阻害活性を示し、その５
０％増殖阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。Embedded image[Wherein, R₁Is a hydroxy group or a hydrazino group, R₂
Represents a hydrogen atom or a methyl group],
Its production method and use, and production of the compound of general formula [1A]
The ability to grow Streptomyces
myces). Less than
The novel antitumor substance BE-423 according to the present invention is described below.
The physicochemical properties of 03 are shown. Where the general formula
R of [1]₁Is a hydroxy group, R₂Is a methyl group
Compound of BE-42303A, R₁Is a hydroxy group
Yes, R₂BE-42303 is a compound in which is a hydrogen atom.
B, R₁Is a hydrazino group, and R₂Is a methyl group
The compound is BE-42303C, R₁Is a hydrazino group
R₂BE-42303D is a compound in which is a hydrogen atom.
Respectively. The abbreviations used in NMR measurement are
Show the taste. s: singlet d: doublet t: triplet q: quartet m: multiplet br: broad J: coupling constant Hz: physicochemical properties of Hertz BE-42303A properties: white amorphous solid or crystal molecular formula; C₃₀H₄₀O_FiveN₂ Mass spectrometry; [High resolution FAB-MS] (M + H)⁺ When
Then: Actual value 509.3048 Calculated value 509.3016 Specific optical rotation; [α]²⁰ _D = + 372 ° (c 1.0,
CHCl_Three -CH_ThreeOH / 6: 1) UV absorption spectrum; λmax [MeOH, nm]
(Ε); 278 (32000) red external absorption spectrum; (KBr, cm^-1) 331
9,2952,2925,2863,1711,16
76,1651, 1620, 1597, 1545, 14
52, 1346, 1252, 1057, 1003, 96
6 Melting point; 250 ° C (decomposition)¹ H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three-C
D_ThreeOD / 6: 1) δppm: 6.99 (2H,
m), 6.28 (1H, d, J = 14.2 Hz), 6.
20 (1H, d, J = 14.2Hz), 5.37 (1
H, dd, J = 15.1 Hz, 9.3 Hz), 5.2
0 (1H, ddd, J = 15.1Hz, 8.8Hz,
4.9 Hz), 3.60 (2H, m), 2.84
~ 2.96 (2H, m), 2.84 (3H, s),
2.70 (1H, ddd, J = 13.2Hz,
11.7 Hz, <0.5 Hz), 2.56 (1H,
dd, J = 10.7 Hz, 9.3 Hz), 2.40
(1H, m), 2.30 (1H, ddd, J = 1
6.6 Hz, 12.2 Hz, 4.4 Hz), 2.2
0 (1H, m), 1.97 to 2.15 (4H,
m), 1.91 (1H, m), 1.82 (1
H, m), 1.46 to 1.54 (2H, m),
1.31 (1H, m), 1.10 to 1.26 (2
H, m), 1.06 (1H, m), 0.96
(1H, m), 0.85 (3H, d, J = 6.3H
z), 0.77 (3H, t, J = 7.3 Hz),
0.75 (1H, m)¹³ C-NMR spectrum (100 MHz, CDCl_Three
-CD_ThreeOD / 6: 1) δppm; 202.2
(S), 194.9 (s), 186.5
(S), 172.8 (s), 165.8
(S), 137.5 (d), 136.7
(D), 135.9 (d), 133.6
(D), 132.2 (d), 129.0
(D), 100.8 (s), 66.0 (d),
65.5 (d), 54.7 (d), 52.7
(D), 51.5 (d), 48.3 (d),
43.7 (d), 40.5 (t), 38.6
(T), 38.1 (t), 33.2 (t), 2
6.7 (t), 26.1 (q), 25.8
(T), 24.3 (t), 21.4 (t), 1
7.0 (q), 12.1 (q) Solubility; in organic solvents such as dimethyl sulfoxide and water
Insoluble. Distinction between acidic, neutral and basic substances; Neutral substance Rf value; 0.53 [Kieselgel 60F manufactured by Merck & Co., Inc.
₂₅₄Used and developed solvent: chloroform / methanol / water
(10: 2: 0.1)] Physicochemical properties of BE-42303B Properties: White amorphous solid or crystal Molecular formula: C₂₉H₃₉O_FiveN₂ Mass spectrometry; [High resolution FAB-MS] (M + H)⁺ When
Then: measured value 495.2874 calculated value 495.2859 ultraviolet absorption spectrum; λ max [MeOH, nm]
(Ε); 277 (38000) red external absorption spectrum; (KBr, cm^-1) 332
6,2954, 2948, 1718, 1648, 161
2,1596, 1558, 1456, 1344, 12
53,1060,1004,960 Melting point; 250 ° C (decomposition)¹ 1 H-NMR spectrum (400 MHz, CDCl_Three
-CD_ThreeOD / 6: 1) δppm; 7.02 (2
H, m), 6.34 (1H, d, J = 14.2H
z), 6.23 (1H, d, J = 14.2 Hz),
5.40 (1H, dd, J = 15.1Hz, 8.8
Hz), 5.25 (1H, ddd, J = 15.1H
z, 8.8 Hz, 5.4 Hz), 3.77 (1H,
m), 3.55 (1H, m), 2.93 (1
H, m), 2.89 (1H, m), 2.78 (1
H, m), 2.62 (1H, dd, J = 10.8H
z, 8.8 Hz), 2.35 to 2.50 (2H,
m), 2.00 to 2.30 (5H, m), 1.8
7 (1H, m), 1.82 (1H, m), 1.
59 (1H, m), 1.53 (1H, m), 1.
20-1.38 (3H, m), 1.08 (1H,
m), 1.00 (1H, m), 0.88 (3H
d, J = 6.4 Hz), 0.80 (3H, t, J =
7.3 Hz), 0.80 (1H, m) Solubility; in organic solvents such as dimethyl sulfoxide and water
Insoluble. Distinction between acidic, neutral and basic substances; Neutral substance Rf value; 0.28 [Merck Kieselgel 60F₂₅₄
Used / developing solvent: chloroform / methanol / water (1
0: 2: 0.1)] Physicochemical properties of BE-42303C; yellow-brown amorphous solid or crystal molecular formula; C₃₀H₄₃O_FourN_Four Mass spectrometry; [High resolution FAB-MS] (M + H)⁺ When
Then: Measured value 523.3262 Calculated value 523.3284 Specific optical rotation; [α]²⁰ _D = + 200 ° (c 0.
2, CHCl_Three-CH_ThreeOH / 6: 1) UV absorption spectrum; λmax [MeOH, nm]
(Ε); 202 (15000), 245 (s
h), 285 (24000), 345 (sh) red external absorption spectrum; (KBr, cm^-1 ) 3
423, 2948, 2863, 1650, 162
5, 1592, 1500, 1448, 1430,
1400, 1270, 1253, 1053
1002,970¹ 1 H-NMR spectrum (500 MHz, CDCl_Three)
δppm; 11.4 (1H, s), 7.31 (1H,
brs), 7.10 (2H, m), 6.52 (1H,
d, J = 13.7 Hz), 6.27 (1H, d, J = 1)
4.6Hz), 5.56 (2H, m), 3.95 (2
H, s), 3.62 (1H, brt, J = 4.3H
z), 3.56 (1H, m), 3.38 (1H, dd
d, J = 12.2, 10.7, 4.3 Hz), 3.
13 (1H, ddd, J = 12.2Hz, 10.7H
z, 4.9 Hz), 3.06 (1H, m), 2.98
(1H, m), 2.88 (3H, s), 2.61 (1
H, dd, J = 11.0 Hz, 8.6 Hz), 2.
54 (1H, m), 2.23 (1H, m), 2.06
˜2.18 (3H, m), 2.05 (1H, m), 1.
92 (2H, m), 1.66 (1H, m), 1.59
(1H, m), 1.25 to 1.45 (3H, m),
1.14 (1H, m), 1.04 (1H, m), 0.9
4 (3H, d, J = 6.7Hz), 0.86 (3
H, t, J = 7.3 Hz), 0.85 (1H, m)¹³ C-NMR spectrum (125 MHz, CDC
l_Three) Δppm; 200.9 (s), 195.2
(S), 173.2 (s), 172.8
(S), 166.6 (s), 137.7
(D), 136.2 (d), 135.0 (d),
133.2 (d), 133.0 (d), 12
9.6 (d), 93.6 (s), 65.8
(D), 65.2 (d), 53.3 (d),
52.9 (d), 51.4 (d), 48.5
(D), 43.4 (d), 40.9 (t),
38.7 (t), 38.6 (t), 29.1
(T), 26.3 (q), 26.2 (t),
25.4 (t), 25.1 (t), 22.2
(T), 17.4 (q), 12.4 (q) Solubility; easily soluble in organic solvents such as dimethyl sulfoxide
It is hardly soluble in water. Rf value: 0.53 [Kieselgel 60F manufactured by Merck & Co., Inc.₂₅₄
Used / developing solvent: chloroform / methanol / water (1
0: 2: 0.1)] Physicochemical properties of BE-42303D; yellow-brown amorphous solid or crystal molecular formula; C₂₉H₄₁O_FourN_Four Mass spectrometry; [High resolution FAB-MS] (M + H)⁺age
Measured value 509.3132 Calculated value 509.3128 Specific optical rotation; [α]²⁰ _D = + 148 ° (c
0.2, CHCl_Three-CH_ThreeOH / 6: 1) UV absorption spectrum; λmax [MeOH, nm]
(Ε); 202 (14000), 248 (s
h), 285 (24000), 345 (sh) red external absorption spectrum; (KBr, cm^-1) 34
24, 2950, 2861, 1643, 162
5, 1589, 1500, 1450, 1427,
1390, 1305, 1251, 1060,
1,000, 970¹ 1 H-NMR spectrum (500 MHz, CDCl_Three)
δppm; 11.4 (1H, s), 7.58 (1
H, brs), 7.10 (2H, m), 6.51
(1H, d, J = 15.0), 6.27 (1H,
d, J = 15.0), 5.54 (2H, m),
5.46 (1H, brs), 3.99 (2H,
s), 3.84 (1H, brt, J = 4.8H
z), 3.57 (1H, m), 3.40 (1H,
dt, J = 11.8, 4.4 Hz), 3.14.
(1H, dt, J = 11.8, 4.5), 3.05
(1H, m), 2.98 (1H, m), 2.62
(1H, dd, J = 10.7, 8.6Hz),
2.55 (1H, m), 2.23 (1H, m),
2.02 to 2.20 (4H, m), 1.88
(2H, m), 1.76 (1H, m), 1.59
(1H, m), 1.51 (1H, m), 1.
40 (1H, m), 1.33 (1H, m),
1.14 (1H, m), 1.05 (1H, m),
0.94 (3H, d, J = 6.4Hz), 0.
86 (3H, t, J = 7.3Hz), 0.85
(1H, m)¹³ C-NMR spectrum (125 MHz, CDC
l_Three) Δppm; 201.0 (s), 196.4
(S), 175.2 (s), 174.0
(S), 166.6 (s), 137.6
(D), 136.3 (d), 135.1 (d),
132.9 (d), 129.5 (d), 93.2
(S), 65.9 (d), 60.0 (d),
53.5 (d), 52.8 (d), 51.5
(D), 48.6 (d), 43.4 (d),
40.8 (t), 38.9 (t), 38.6
(T), 29.1 (t), 28.5 (t), 2
6.1 (t), 25.3 (t), 22.6
(T), 17.4 (q), 12.3 (q) Solubility; easily soluble in organic solvents such as dimethyl sulfoxide
It is hardly soluble in water. Rf value: 0.50 [Kieselgel 60F manufactured by Merck & Co., Inc.₂₅₄
Used / developing solvent: chloroform / methanol / water (1
0: 2: 0.1)] Antitumor effect of BE-42303s Experimental mouse tumor cells of antitumor substance BE-42303s
Tested in vitro to determine its growth inhibitory effect against
Was done. Antitumor against mouse leukemia cell P388
The action test was conducted by using BE-42303s in dimethyl sulfoxy
Dissolved in dimethylsulfoxide and serially diluted with dimethylsulfoxide.
From RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum (2
Containing 0 mM 2-mercaptoethanol)
And 1x10^ThreeCell culture medium containing single tumor cells
(RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum, 20 m
M 2-mercaptoethanol (50 μl) for 96
Dispense into a microwell plate at 37 ° C for 24 hours, 5%
CO₂After culturing below, add 50 μl of the above test solution,
72% at 37 ° C, 5% CO₂MTT measurement after culturing under
The method was compared with the control group. Mouse colon cancer cell colo
Anti-tumor studies against n26 have tested BE-42303s.
After dissolving in dimethyl sulfoxide
After dilution with RPMI, RPMI containing 10% fetal bovine serum
A test solution was added to the 1640 medium. 1x10^ThreeTumor
Cell culture medium containing cells (RPM containing 10% fetal bovine serum)
I1640 medium) 100 μl in 96-well microplate
And 37% for 24 hours at 5% CO₂Cultured under
Thereafter, 100 µl of the above test solution was added, and the mixture was added at 37 ° C for 72 hours.
5% CO₂After culturing under the conditions, fix with 50% trichloroacetic acid
And after staining with 0.4% sulforhodamine B, 10 mM
The dye was extracted from the cells using Tris solution. 450 nm
Measure the absorbance at 550 nm with
It was compared with the control group. As a result, BE-42303s are both
50% growth against tumor cells
Inhibitory concentration (IC₅₀) Was as shown in Table 1. Furthermore, B
Antitumor activity of E-42303s against human tumor cells
Tested in vitro. The cells are human colon cancer cells DLD-
1. Human lung cancer cell PC-13 and human gastric cancer cell MKN-
45, and the cell culture medium was used for all tumor cells.
RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum was used as
The same method as the above mouse colon cancer cell colon 26
Was measured using. As a result, BE-42303s are
Showing strong growth inhibitory activity against tumor cells
0% growth inhibitory concentration (IC₅₀) Was as shown in Table 1.

【０００７】[0007]

【表１】上述したようにＢＥ−４２３０３類はマウス及びヒトの
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本
発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有
用である。ＢＥ−４２３０３類の製造法について説明す
る。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ
の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物
質ＢＥ−４２３０３類を生産するものならばいずれで
も良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙
げられる。１．形態Ａ４２３０３株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生岐および菌糸の分断は認められない。気菌
糸上には胞子の連鎖（１０〜５０個、時としてそれ以
上）を作り、その形態は、らせん状である。胞子の表面
は平滑で大きさが１．０〜０．８Ｘ０．６〜０．４ μ
ｍの卵形であり、胞子のう、鞭毛胞子、および菌核等の
特殊な器官は観察されない。２．各種寒天平板培地における培養性状各種寒天平板培地において、２８℃、１４日間培養した
結果を第２表に示す。第２表[Table 1] As described above, BE-42303s show a remarkable growth-inhibitory effect on mouse and human tumor cells. Therefore, the present invention is useful as an antitumor agent for mammals including humans. A method for producing BE-42303s will be described. Antitumor substances BE-42303A and B of the present invention
Any microorganism or mutant strain thereof may be used as long as it produces the antitumor substance BE-42303, and examples thereof include microorganisms having the following mycological properties. 1. Morphology The A42303 strain forms aerial hyphae and basal hyphae that are well elongated and branched, and no division of the hyphae and hyphae is observed. On the aerial mycelium, a spore chain (10 to 50, sometimes more) is formed, and its morphology is spiral. The surface of spores is smooth and the size is 1.0-0.8 x 0.6-0.4 μ.
It has an oval shape of m, and no special organs such as sporangia, flagella spores, and sclerotia are observed. 2. Table 2 shows the results of culturing on various agar plates at 28 ° C for 14 days. Table 2

【０００８】[0008]

【表２】３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養）１５℃：生育せず１８℃：生育不良、気菌糸形成せず２２℃：生育良好、気菌糸形成僅少２６℃：生育良好、気菌糸形成僅少２９℃：生育非常に良好、気菌糸形成良好３４℃：生育非常に良好、気菌糸形成良好３７℃：生育良好、気菌糸形成僅少４１℃：生育不良、気菌糸形成せず４８℃：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陽性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（６）食塩耐性食塩含有量７％以下で生育（チロシン寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。炭素源の利用能
の結果を第３表に示す。[Table 2] 3. Growth temperature (yeast / malt agar medium, cultivated for 14 days) 15 ° C: No growth 18 ° C: Poor growth, no aerial mycelia formation 22 ° C: Good growth, few aerial mycelia formation 26 ° C: Good growth, few aerial mycelia formation 29 ° C: Very good growth, aerial mycelial formation 34 ° C: Very good growth, aerial mycelial formation 37 ° C: Good growth, few aerial mycelial formation 41 ° C: Poor growth, no aerial mycelial formation 48 ° C: Grow No 4. Physiological properties (1) Gelatin liquefaction positive (glucose / peptone / gelatin medium) (2) Starch hydrolysis positive (starch / inorganic salt agar medium) (3) Skim milk powder coagulation negative (skimmed milk medium) (4) 4. Non-fat dry milk peptone positive (Skim milk medium) (5) Melanin-like pigment formation negative (6) Salt tolerance Grows with salt content of 7% or less (Tyrosine agar medium) Utilization of carbon source Using Pridham Godleybe agar as a basal medium, the following sugars were added and cultured at 28 ° C for 14 days. The results of carbon source availability are shown in Table 3.

【０００９】[0009]

【表３】６．細胞壁組成ＬＬ−ジアミノピメリン酸とグリシンが検出された。[Table 3] 6. Cell wall composition LL-diaminopimelic acid and glycine were detected.

【００１０】以上の菌学的諸性質よりＡ４２３０３株は
放線菌ストレプトミセス属に属すると考えられる。した
がってＡ４２３０３株をストレプトミセスエスピー
Ａ４２３０３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．
Ａ４２３０３）と称することとした。尚、本菌株は通
商産業省工業技術院生命工学工学技術研究所に寄託され
ており、受託番号はＦＥＲＭＰ−１４７０６である。
本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３Ａおよ
びＢを生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは
紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスター
ド、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ
−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ生産菌
を変異させた微生物である。本発明のＢＥ−４２３０３
ＡおよびＢを製造するにあたり、ＢＥ−４２３０３Ａお
よびＢの生産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的に
発育させることにより、ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢを
含む培養物が得られる。栄養源としては、放線菌の栄養
源として公知のものが使用できる。例えば、炭素源とし
ては、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶
糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物として
用いられる。窒素源としては、市販されている大豆粉、
コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、乾燥
酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミー
ル、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は
硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用いられ
る。無機塩としては、市販されている炭酸カルシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、臭
化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸塩など
を使用することができる。その他必要に応じて、鉄、マ
ンガン、亜鉛、コバルト、モリブデン酸などの重金属塩
を微量添加することもできる。また、発泡の激しい場合
には消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油などの植
物油、オクタデカノールなどの高級アルコール類、各種
シリコン化合物などを適宜添加してもよい。これらのも
の以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−４２３０３Ａお
よびＢの生産に役立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリ
ノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナトリウムなどであ
れば、いずれも使用することができる。培養方法として
は、一般の微生物代謝産物の生産方法と同様に行なえば
よく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養の場合
は、静置培養、攪拌培養、振とう培養又は通気培養など
のいずれを実施してもよいが、特に振盪培養又は深部通
気攪拌培養が望ましい。培養温度は２２〜３７℃が適当
であるが、好ましくは２６〜３７℃である。好ましい培
地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は４８時間〜１
９２時間、好ましくは７２時間〜１４４時間であ
る。培養物から目的とするＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ
を採取するには、微生物の生産する代謝物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。ＢＥ−
４２３０３ＡおよびＢは培養濾液中及び菌体中に存在す
るので、培養濾液または菌体より通常の分離手段、例え
ば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着もしくは分配
クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを単独又は組
み合わせて行なうことにより精製できる。好ましい分離
精製の例として次の方法が挙げられる。まず培養液を濾
過し、菌体を得る。得られた菌体をメタノールまたはア
セトンなどの有機溶媒を用いて抽出する。得られた粗抽
出物について、水／２ーブタノン分配を行ない、２ーブ
タノンを留去後得られる抽出物についてシリカゲルクロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノールで溶出）な
どを行なうことにより、ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢを
粉末もしくは固体として得ることができる。本発明の式
［１］で表される化合物のうちＲ₁がヒドロキシ基
である化合物のヒドロキシ基は、化学の分野で通常用い
られる方法によってヒドラジノ基に変換することができ
る。ＢＥ−４２３０３Ａは、ＢＥ−４２３０３Ｃに、Ｂ
Ｅ−４２３０３Ｂは、ＢＥ−４２３０３Ｄにそれぞれ変
換することができる。本発明の化合物ＢＥ−４２３０
３類は腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮する
が、本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形
態としては各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセ
ル剤、散剤、顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例
えば溶液もしくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤
が挙げられる。固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コールもしくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。これらの錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤及び粉末などの固形製剤は一般的には０．
１〜１００重量％、好ましくは５〜１００重量％の有効
成分を含む。液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤もしくは注射剤などの形態
として製造される。特に、非経口的に筋肉内注射、静脈
注射又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤として
は、例えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉
注射用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、
静脈内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリ
ウムなどの水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び
静脈内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられ
る。これらの注射剤はあらかじめ溶解したもののほか、
粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたものを用時溶
解する形態もとり得る。これらの注射液は通常、０．１
〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含
む。又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤などの液剤
は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。本発明の化
合物の実際に好ましい投与量は、使用される化合物の種
類、配合された組成物の種類、適用頻度及び治療すべき
特定部位、宿主及び腫瘍によって変化することに注意す
べきである。例えば、１日あたりの成人の投与量は、経
口投与の場合、１０〜５００ｍｇであり、非経口投
与、好ましくは静脈注射の場合、１日あたり、１０〜１
００ｍｇである。なお、投与回数は投与方法及び症状
によって異なるが、１回ないし５回である。以下に、実
施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこ
れら実施例のみに限定されるものではない。From the above-mentioned mycological characteristics, the A42303 strain is considered to belong to the genus Streptomyces of actinomycete. Therefore, the A42303 strain is treated with Streptomyces sp.
A42303 (Streptomyces sp.
A42303). The strain has been deposited at the Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, and the deposit number is FERM P-14706.
The mutant strains of the microorganisms that produce the antitumor substances BE-42303A and B used in the present invention are treated by irradiation with, for example, X-rays or ultraviolet rays, such as nitrogen mustard, azaserine, nitrous acid, 2-aminopurine or N.
-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
Treatment with a mutagen such as (NTG), phage contact,
It is a microorganism obtained by mutating BE-42303A and B-producing bacteria by a commonly used bacterial species conversion treatment method such as transformation, transduction or conjugation. BE-42303 of the present invention
In producing A and B, a culture strain containing BE-42303A and B is obtained by inoculating a nutrient source-containing medium with a strain producing BE-42303A and B and allowing the strain to grow aerobically. As the nutrient source, those known as the nutrient source for actinomycetes can be used. For example, as a carbon source, commercially available glucose, maltose, starch, sucrose, molasses, dextrin, or the like is used alone or as a mixture. As the nitrogen source, commercially available soybean flour,
Corn stay liquor, meat extract, yeast extract, dry yeast, cottonseed flour, peptone, wheat germ, fish meal, meat meal, defatted rice bran, defatted meat-and-bone meal, inorganic ammonium salts or sodium nitrate are used alone or as a mixture. . As the inorganic salt, commercially available calcium carbonate,
Sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, sodium bromide, sodium borate or various phosphates can be used. In addition, if necessary, trace amounts of heavy metal salts such as iron, manganese, zinc, cobalt, and molybdic acid can be added. In the case of severe foaming, for example, vegetable oils such as soybean oil or linseed oil, higher alcohols such as octadecanol, various silicon compounds, and the like may be appropriately added as antifoaming agents. Other than these, any of those that are utilized by the producing bacterium and useful for the production of BE-42303A and B, such as 3- (N-morpholino) propanesulfonic acid or sodium borate, can be used. . The culturing method may be the same as the method for producing a general microbial metabolite, and may be a solid culture or a liquid culture. In the case of liquid culture, any of static culture, stirring culture, shaking culture, and aeration culture may be performed, but shaking culture or deep aeration stirring culture is particularly desirable. The culture temperature is appropriately 22 to 37 ° C, preferably 26 to 37 ° C. The preferable medium pH is in the range of 4 to 8, and the culture time is 48 hours to 1
92 hours, preferably 72 hours to 144 hours. BE-42303A and B of interest from culture
In order to collect, the separation means usually used for collecting from the metabolite produced by the microorganism is appropriately used. BE-
Since 42303A and 42303A are present in the culture filtrate and the bacterial cells, the usual separation means from the culture filtrate or the bacterial cells, such as the solvent extraction method, the ion exchange resin method or the adsorption or partition chromatography method and the gel filtration method, is used alone. Alternatively, the purification can be carried out in combination. Preferred examples of separation and purification include the following methods. First, the culture solution is filtered to obtain cells. The obtained bacterial cells are extracted with an organic solvent such as methanol or acetone. The obtained crude extract was partitioned with water / 2-butanone, and the extract obtained after distilling off 2-butanone was subjected to silica gel chromatography (eluted with chloroform / methanol) to powder BE-42303A and B. Alternatively, it can be obtained as a solid. The hydroxy group of the compound represented by the formula [1] of the present invention in which R ₁ is a hydroxy group can be converted to a hydrazino group by a method usually used in the field of chemistry. BE-42303A, BE-42303C, B
E-42303B can be converted into BE-42303D, respectively. Compound of the invention BE-4230
Class 3 inhibits the growth of tumor cells and exerts an antitumor effect, but various forms can be selected as an administration form when the compound of the present invention is used as an antitumor agent, for example, tablets, capsules, powders, Examples include oral agents such as granules or solutions, or sterilized liquid parenteral agents such as solutions or suspensions. Solid preparations can be produced as they are in the form of tablets, capsules, granules or powders, or they can be produced using appropriate additives. Such additives include sugars such as lactose or glucose, for example, starches such as corn, wheat or rice, fatty acids such as stearic acid, inorganic salts such as magnesium metasilicate aluminate or anhydrous calcium phosphate, for example polyvinyl Synthetic polymers such as pyrrolidone or polyalkylene glycol; fatty acid salts such as calcium stearate or magnesium stearate; alcohols such as stearyl alcohol or benzyl alcohol; synthetic cellulose derivatives such as methylcellulose, carboxymethylcellulose, ethylcellulose or hydroxypropylmethylcellulose , Other,
Examples of commonly used additives such as water, gelatin, talc, vegetable oil, and gum arabic are included. Solid preparations such as tablets, capsules, granules and powders generally have a particle size of 0.
It contains 1 to 100% by weight, preferably 5 to 100% by weight of the active ingredient. The liquid preparation uses appropriate additives usually used in liquid preparations such as water, alcohols or plant-derived oils such as soybean oil, peanut oil or sesame oil, and is in the form of suspension, syrup or injection. Manufactured as. In particular, when administered parenterally by intramuscular injection, intravenous injection or subcutaneous injection, suitable solvents include, for example, distilled water for injection, lidocaine hydrochloride aqueous solution (for intramuscular injection), physiological saline, glucose aqueous solution, ethanol,
Examples include liquids for intravenous injection (for example, an aqueous solution of citric acid and sodium citrate) or electrolyte solutions (for intravenous drip and intravenous injection), or a mixed solution thereof. In addition to these pre-dissolved injections,
It may be in the form of a powder or a powder to which an appropriate additive is added and dissolved at the time of use. These injections are usually 0.1
-10% by weight, preferably 1-5% by weight of active ingredient. Liquid preparations such as suspensions or syrups for oral administration contain 0.5 to 10% by weight of the active ingredient. It should be noted that the actual preferred dosage of the compounds of the present invention will vary depending on the type of compound used, the type of composition formulated, the frequency of application and the particular site to be treated, the host and the tumor. For example, the daily dose for adults is 10 to 500 mg for oral administration, and 10 to 1 mg per day for parenteral administration, preferably intravenous injection.
It is 00 mg. The number of administrations varies depending on the administration method and symptoms, but is 1 to 5 times. Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

【００１１】[0011]

BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

【００１２】[0012]

【Example】

実施例１：ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢの発酵製造斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４２３０３株をグル
コース０．１％、デキストリン２．０％、魚粉０．５
％、グルテンミール１．０％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、
硫酸亜鉛０．００００８％、塩化カルシウム０．０５
％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第一銅０．０００
０４％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト
０．００００４％、ほう酸ナトリウム０．００００８
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からな
る培地（ｐＨ６．８）１１０ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の三角フラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間、
回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養
液を２ｍｌずつ上記の培地を１１０ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の三角フラスコ１００本に接種し２８℃で１２０
時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。
このようにして得られた培養液（１０Ｌ）から濾過に
より菌体を分離し、この菌体にメタノール６Ｌを加え、
数時間攪拌後、菌体を濾去し、メタノール抽出液を得
た。メタノール抽出液のメタノールを減圧下に留去し、
残渣にヘキサン３Ｌ、メタノール２Ｌを加えて抽出し
た。再びメタノール抽出液を減圧下に留去した。更に残
渣に２ーブタノン３Ｌ、水１Ｌを加えて抽出した後、２
ーブタノン抽出液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲ
ルのクロマト塔（３．５Ｘ７０ｃｍ）にかけ、クロロ
ホルム／メタノール／水の混合溶媒（２０：１：０．１
→５：１：０．１）で順次溶出した。溶出した活性画分
を減圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４２３０３Ａを含む固体
４００ｍｇ、ＢＥ−４２３０３Ｂを含む固体３２０ｍｇ
をそれぞれ得た。実施例２：ＢＥ−４２３０３Ａの製造実施例１で得られたＢＥ−４２３０３Ａを含む混合物４
００ｍｇをクロロホルム２ｍｌとメタノール２ｍ
ｌに溶解し、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
製，３．５Ｘ５５ｃｍ，溶出；クロロホルム：メタノ
ール／１：１）のクロマト用カラムにかけて精製
し、目的の分画を減圧下に濃縮した。次いでクロマトレ
ックスＯＤＳカラム（富士シリシア社製、ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｒｅｘ^TM ＯＤＳＤＵ３０５０ＭＴ，４．０
Ｘ５０ｃｍ）にかけ、０．１％のりん酸を含む８
２％メタノールを移動相とする液体クロマトグラフィー
に付し、ＢＥ−４２３０３Ａを含む画分を得た。その画
分を減圧下に約半分まで濃縮し、４℃、終夜で放置し結
晶化を行った後、濾過、洗浄することによりによりＢＥ
−４２３０３Ａの白色粉末を４６ｍｇ得た。実施例３：ＢＥ−４２３０３Ｂの製造実施例１で得られたＢＥ−４２３０３Ｂを含む混合物３
２０ｍｇに、ジメチルスルホキシド１０ｍｌを加え
攪拌後濾過した。得られた濾液に水５０ｍｌを加えて
凍結させた後、凍結乾燥により溶媒を留去した。次いで
クロロホルム／メタノール／りん酸（１：１：０．０
２）の溶液１０ｍｌを加え、可溶部についてトヨパ
ールＨＷ−４０（東ソー社製，２．５Ｘ７０ｃｍ、溶
出；クロロホルム：メタノール：りん酸＝１：１：０．
０２）のカラムにかけて、ＢＥ−４２３０３Ｂを含む画
分を得た。その画分を４℃、終夜で放置し結晶化を行っ
た後、濾過、洗浄することにより、ＢＥ−４２３０３Ｂ
の白色粉末を４６ｍｇ得た。実施例４：ＢＥ−４２３０３Ｃの製造実施例２で得られたＢＥ−４２３０３Ａ１５ｍｇと抱
水ヒドラジン１．４７ｍｇをジメチルホルムアミド２．
０ｍｌ中に加え、４０℃、１時間攪拌後、更に５０℃、
１時間反応させた。反応を進めるために、抱水ヒドラジ
ンを反応２時間後に０．５８ｍｇ、３．５時間後に０．
２８ｍｇを加え、また反応２時間後、反応温度を６０℃
にして、更に４時間反応させた。得られた反応液を濃縮
乾固した後、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
社製，１．５Ｘ９０ｃｍ）のクロマト塔にかけメタノ
ールで溶出した。目的物を含む画分を濃縮乾固してＢＥ
−４２３０３Ｃの黄褐色固体を６．０ｍｇ得た。実施例５：ＢＥ−４２３０３Ｄの製造実施例３で得られたＢＥ−４２３０３Ｂ１５ｍｇと抱
水ヒドラジン１．６７ｍｇをジメチルホルムアミド１．
０ｍｌ中に加え、６０℃、１．５時間反応させた。得ら
れた反応液を濃縮乾固した後、セファデックスＬＨ−２
０（ファルマシア社製，１．５Ｘ９０ｃｍ）のクロマト
塔にかけメタノールで溶出した。目的物を含む画分を濃
縮乾固してＢＥ−４２３０３Ｄの黄褐色固体を７．３ｍ
ｇ得た。以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、本発
明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものではな
い。製剤例１本物質（ＢＥ−４２３０３Ｂ）１０部重質酸化マグネシウム１５部乳糖７５部を均一に混合して、３５０μｍ以下の散剤とする。この
散剤をカプセル容器に入れカプセル剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−４２３０３Ｂ）４５部澱粉１５部乳糖１６部結晶性セルロース２１部ポリビニルアルコール３部蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これに
シロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を
加えて糖衣錠を作製した。Example 1: Fermentation production of BE-42303A and B Actinomycete A42303 strain inoculated on slope soft agar medium was glucose 0.1%, dextrin 2.0%, fish meal 0.5.
%, Gluten meal 1.0%, yeast extract 0.1%, sodium chloride 0.1%, magnesium sulfate 0.05%,
Zinc sulfate 0.00008%, calcium chloride 0.05
%, Ferrous sulfate 0.0002%, cuprous chloride 0.000
04%, manganese chloride 0.00004%, cobalt chloride 0.00004%, sodium borate 0.00008
%, Ammonium molybdate 0.00024%, 3-
500 m containing 110 ml of a medium (pH 6.8) consisting of 0.5% (N-morpholino) propanesulfonic acid
Inoculate four 1-liter Erlenmeyer flasks at 28 ° C for 72 hours,
Culture was performed on a rotary shaker (180 rotations per minute). 500m containing 110ml of the above medium, 2ml each of this culture
Inoculate 100 Erlenmeyer flasks at 28 ℃ at 120 ℃
Cultivated on a rotary shaker (180 rpm) for a period of time.
The cells were separated from the thus obtained culture solution (10 L) by filtration, and 6 L of methanol was added to the cells,
After stirring for several hours, bacterial cells were filtered off to obtain a methanol extract. The methanol of the methanol extract was distilled off under reduced pressure,
The residue was extracted with 3 L of hexane and 2 L of methanol. The methanol extract was again distilled off under reduced pressure. Further, 3 L of 2-butanone and 1 L of water were added to the residue for extraction, and then 2
-The butanone extract was concentrated under reduced pressure, the residue was applied to a silica gel chromatography column (3.5 x 70 cm), and a mixed solvent of chloroform / methanol / water (20: 1: 0.1) was added.
→ 5: 1: 0.1) were used for sequential elution. The eluted active fraction was concentrated to dryness under reduced pressure to give a solid containing 400 mg of BE-42303A and a solid containing 320 mg of BE-42303B.
Respectively obtained. Example 2: Preparation of BE-42303A Mixture 4 containing BE-42303A obtained in Example 1
00 mg of chloroform 2 ml and methanol 2 m
It was dissolved in 1 and purified by applying to a chromatography column of Sephadex LH-20 (Pharmacia, 3.5 × 55 cm, elution; chloroform: methanol / 1: 1), and the target fraction was concentrated under reduced pressure. Next, Chromatolex ODS column (made by Fuji Silysia, chroma
torex ^™ ODS DU3050MT, 4.0
X 50 cm) and containing 0.1% phosphoric acid 8
Liquid chromatography was performed using 2% methanol as a mobile phase to obtain a fraction containing BE-42303A. The fraction was concentrated under reduced pressure to about half, left at 4 ° C. overnight for crystallization, and then filtered and washed to obtain BE.
46 mg of white powder of -42303A was obtained. Example 3: Preparation of BE-42303B Mixture 3 containing BE-42303B obtained in Example 1
To 20 mg, 10 ml of dimethyl sulfoxide was added, and the mixture was stirred and filtered. After 50 ml of water was added to the obtained filtrate to freeze it, the solvent was distilled off by freeze-drying. Then chloroform / methanol / phosphoric acid (1: 1: 0.0
10 ml of the solution of 2) was added to the soluble portion, Toyopearl HW-40 (manufactured by Tosoh Corporation, 2.5 × 70 cm, elution; chloroform: methanol: phosphoric acid = 1: 1: 0.
02) and the fraction containing BE-42303B was obtained. The fraction was left overnight at 4 ° C. for crystallization, and then filtered and washed to give BE-42303B.
46 mg of a white powder of Example 4: Preparation of BE-42303C 15 mg of BE-42303A obtained in Example 2 and 1.47 mg of hydrazine hydrate were added to dimethylformamide.2.
Add to 0 ml, stir at 40 ° C for 1 hour, then add 50 ° C,
The reaction was performed for 1 hour. To proceed the reaction, hydrazine hydrate was added at 0.58 mg after 2 hours of the reaction, and at 0.8% after 3.5 hours.
28 mg was added, and after 2 hours of reaction, the reaction temperature was 60 ° C.
The reaction was continued for 4 hours. The obtained reaction solution was concentrated to dryness, then, applied to a Sephadex LH-20 (Pharmacia, 1.5 × 90 cm) chromatographic column and eluted with methanol. The fraction containing the target substance is concentrated to dryness and BE
6.0 mg of tan solid of -42303C was obtained. Example 5: Production of BE-42303D 15 mg of BE-42303B obtained in Example 3 and 1.67 mg of hydrazine hydrate were added to dimethylformamide 1.
It was added to 0 ml and reacted at 60 ° C. for 1.5 hours. The obtained reaction solution was concentrated to dryness, and then Sephadex LH-2
The mixture was applied to a 0 (Pharmacia, 1.5 × 90 cm) chromatographic column and eluted with methanol. The fraction containing the desired product was concentrated to dryness to obtain a yellowish brown solid of BE-42303D at 7.3 m.
g was obtained. Formulation examples of the compound of the present invention are shown below, but the formulation of the compound of the present invention is not limited to this formulation example. Formulation example 1 This substance (BE-42303B) 10 parts Heavy magnesium oxide 15 parts Lactose 75 parts are uniformly mixed to obtain a powder having a particle size of 350 μm or less. This powder was placed in a capsule container to obtain a capsule. Formulation Example 2 This substance (BE-42303B) 45 parts Starch 15 parts Lactose 16 parts Crystalline cellulose 21 parts Polyvinyl alcohol 3 parts Distilled water 30 parts After uniform mixing, crush granulation and drying, then sieving and diametral Granules having a size of 1410 to 177 μm were prepared. Formulation Example 3 A granule was prepared in the same manner as in Formulation Example 2, and then 96 parts of this granule was added with 3 parts of calcium stearate and compression-molded to prepare a tablet having a diameter of 10 mm. Formulation Example 4 To 90 parts of the granule obtained by the method of Formulation Example 2 was added 10 parts of crystalline cellulose and 3 parts of calcium stearate and compression molding was performed to obtain a tablet having a diameter of 8 mm, and then syrup gelatin, A sugar-coated tablet was prepared by adding a precipitated calcium carbonate mixed suspension.

【００１３】[0013]

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４２３０３類
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。INDUSTRIAL APPLICABILITY The BE-42303s described in the present invention show a strong growth-suppressing effect on mouse and human tumor cells, and are therefore useful as therapeutic agents for cancer in the field of medicine.

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者小尻勝久茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内 (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification number Office reference number FI technical display location C12R 1: 465) (C12P 17/18 C12R 1: 465) (72) Inventor Katsuhisa Kojiri Okubo, Tsukuba, Ibaraki No. 3 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Tsukuba Research Laboratories (72) Inventor Hiroyuki Suda No. 3 Okubo, Tsukuba City, Ibaraki Pref.

Claims

[Claims]

1. A general formula: [Wherein, R ₁ represents a hydroxy group or a hydrazino group, and R ₂ represents a hydrogen atom or a methyl group].

2. Streptomyces
es) belongs to the genus and has the general formula [In the formula, R _1a represents a hydroxy group, R ₂ represents a hydrogen atom or a methyl group] A microorganism or a mutant strain thereof having the ability to produce the compound represented by the general formula [1A] is cultured. General formula [1A] characterized by collecting a compound
A method for producing a compound represented by the formula:

3. The method according to claim 2, wherein the microorganism or its mutant strain is Streptomyces sp.

4. An antitumor agent comprising the compound according to claim 1 as an active ingredient.

5. A general formula: [In the formula, R _1a represents a hydroxy group and R ₂ represents a hydrogen atom or a methyl group] A microorganism having the ability to produce a compound or a mutant strain thereof.

6. The microorganism is Streptomyces sp.
A42303 (Streptomyces sp. A)
42303), or the mutant strain thereof.