JPH09507029A

JPH09507029A - 未変性ホエータンパク質濃縮物の製造法

Info

Publication number: JPH09507029A
Application number: JP7517704A
Authority: JP
Inventors: ランジュ，ミシェル; ブヌー，ギュスタボ
Original assignee: イミュノテク、リサーチ、コーポレーション、リミテッド
Priority date: 1993-12-30
Filing date: 1994-12-23
Publication date: 1997-07-15
Also published as: CA2176946A1; WO1995017830A1; EP0739168A1; ZA949789B; NZ278018A; AU1409795A; CA2176946C; TW267095B; PL315195A1; AU692508B2

Abstract

(57)【要約】チーズ製造の副生成物としての未変性ホエータンパク質濃縮物を製造して、血清アルブミン含量が約９％以上であるホエータンパク質濃縮物を提供する、温度および他の因子の制御を含む方法。

Description

【発明の詳細な説明】未変性ホエータンパク質濃縮物の製造法本発明は、血清アルブミン含量が約９％以上のホエータンパク質濃縮物の改良製造法に関する。関連出願本出願は、１９９２年１２月１１日出願の米国連続番号０７／９８９，１８６号の一部継続出願である１９９３年１２月３０日出願の米国連続番号０８／１７５，６３７号の一部継続出願である。これらの出願の内容は、完全な形で引用によって本明細書に包含される。発明の背景および目的１９８２年の初期にはBounousら(1)は、ヒツジ赤血球注射によって測定したところ、食物ホエータンパク質濃縮物(WPC)が哺乳動物の活性な全身性体液性免疫応答を改善することを示した。しかしながら、［欧州でのサルモネラ症が流行した結果１９８８年およびその後数年は］ミルクの高温殺菌を用いたため、免疫応答を改善する市販のホエータンパク質濃縮物の有効性が大幅に減少したことが判った。１９９３年７月２７日付の米国特許第５，２３０，９０２号明細書には、哺乳動物に治療上または予防上有効量の未変性ホエータンパク質濃縮物を経口投与することを特徴とする哺乳動物における体液性免疫応答を改善するまたはグルタチオンの濃度水準を増加させる方法が記載されている。前記関連の米国特許出願の一部継続出願として１９９２年１２月１１日出願の米国特許出願第９８９，１８６号明細書には、未変性ホエータンパク質濃縮物の製造の改良法が提供された。前記の関連出願には、未変性ホエータンパク質濃縮物が増強された免疫作用を有するという発見が記載された。更に、ミルクの従来の高温処理では、熱感受性タンパク質である血清アルブミンが部分的に熱変性することにより、カード中に沈殿することも説明された。前記の関連出願には、安全基準に適合するミルクの熱処理の最低規準を用いてＷＰＣを調製し、高含量の熱に不安定な血清アルブミンを有するホエータンパク質の分配物が得られるようにした実験が記載されている。血清アルブミン（ＢＳＡ）における６−グルタミルシステイン（Ｇｌｕ−Ｃｙs）基/分子の存在および分子の未変性配座に関連する特異的な分子内ジスルフィド結合が、ＷＰＣのグルタチオン（ＧＳＨ）促進活性における重要な因子であることが判った（組織におけるＧＳＨ水準の増大）。それらは、ＷＰＣの有益な効果の基礎となっている共通の通性を表わしていると思われる（２，３）。低水準の熱処理によって生成した食物(dietary)Ｗ．Ｐ．Ｃ．は、全身の体液性免疫応答を改善し、ジメチルヒドラジンのような化学的発癌物質などの発癌物質の効果に対する標的細胞の耐性を増加し、肺炎球菌の感染に対する耐性を向上させ、組織（細胞内）グルタチオンの増加を維持する。本発明の目的は、過度の水準のタンパク質変性のない適度な低細菌水準のホエータンパク質濃縮物を製造する改良法を提供することである。特別な目的は、約９％の血清アルブミンを有しかつ細菌を適度に減少させたホエータンパク質濃縮物を達成する方法を提供することである。この約９％の濃度の血清アルブミンは、前記の改良された全身性体液性免疫応答のような特性に対して組織グルタチオンの増加維持を達成する上で本発明者らの研究に重要であることが判った（文献２および３）。もう一つの目的は、高血清アルブミン含量だけでなく、高含量の他のＧｌｕ− Ｃｙｓ含有タンパク質またはグルタチオン同族体、例えば（Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ａｌａ）をも有するホエータンパク質濃縮物を達成する方法を提供することである。高血清アルブミン含量を得る工程条件を用いることにより、高含量のこれらの他のＧｌｕ−Ｃｙｓ含有タンパク質も得られる。血清アルブミンは、その変性はアルファーラクトアルブミンの変性ほど可逆性ではないので、極めて容易に変性される血清タンパク質である（４）。従って、本発明のもう一つの目的は、温度および他の条件の厳密な制御を維持して血清アルブミンの変性を最小限にすることである。未加工ミルク中のカゼインは、コロイド分散液の形態で存在する。この分散液の粒子は、直径が２０〜２００ｎｍ（ナノメーター）の範囲であり、通常はカゼインミセルと呼ばれる。カゼインの工業的分離法は、ミルクのｐＨを２０℃において等電点（ｐＨ４．６）まで低下させることによる、またはミセルを安定化させるカッパーカゼインの酵素（レンネット）加水分解によるこれらのタンパク質の不安定化に基づいている。酸性アミノ酸同士の反発作用が明らかであるため、ｐＨが低いとウシ血清アルブミンが変性することが示されているので、最初の手順は本来のホエータンパク質の回収には適さない(Haurowitz，1963)（１１）。更に、過度に高温をこの手順で用いると、低ｐＨの変性効果がかなり増加する。第二の手順は、経済的には余り実施可能ではなく、回収されるカゼインは酪農産業で使用するには余り機能的ではないからである。これらの事実および他の経済的状況を考慮すれば、本発明の目的は、チーズ製造に適合する方法段階の組合せを開発することである。チーズは処理されるミルク約１０（重量）％に相当し、ホエーは約９０％に相当し、その０．６〜０．７％はホエータンパク質からなっている。最近の研究（５）は、平均直径が０．２ミクロンの細孔を有する微小濾過膜は脱脂乳からのカゼインミセルを選択的に保持することを示している。しかしながら、この研究はカゼインの分離に集中していた。本発明本発明者らは、本発明の目的を達成する目的で低温緩和法（low temperature lenient techniques）を用いることを提案する。本発明によれば、チーズ、好ましくはチェダーチーズの製造工程の副生成物として血清アルブミン含量が約９％以上である未変性ホエータンパク質濃縮物の製造法であって、 (1) 約４℃を超えない温度におけるミルク中の脂肪含量の低温規格化。この方法により、本発明者らは細菌の成長を減少させ、更にこの方法により脂肪損失および酵素および細菌による代謝が関与する更なる反応を生じる脂肪小球の崩壊が減少する、 (2) ミルク中のタンパク質の実質的な変性が全く起こらなくする条件下での殺菌(pasteurization)、 (3) チーズ生産の前に約３０℃の温度まで冷却、 (4) 約４０℃を超えない温度でのカードおよびホエーの製造、 (5) ホエーからカードの分離、 (6) ホエーから過剰の脂肪の除去、 (7) 必要ならば、ホエー中のタンパク質のほとんどが変性しないようにするのに十分な短時間、高温での殺菌、 (8) ４０℃に近いがこれを実質的に超過しない温度における限外濾過を行って、保持物(retentate)を提供し、これによって液状の最終生成物を提供することができる、 (9) 乾燥粉末が所望な場合には、前記保持物を、好ましくはタンパク質を変性しない温度および時間、凍結乾燥することによって乾燥する、ことを特徴とする方法が提供される。ｐＨは、段階１〜８の間中、６以上に保持される。図面の簡単な説明図１は、免疫増強特性を有するホエータンパク質濃縮物を製造するための本発明の方法を図解的に表わしたものである。発明の詳細な説明材料および方法個々のホエータンパク質は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した。濃縮したホエーの試料を１０％２−メルカプトエタノールで還元した後、ｐＨ８（Laemmli緩衝系）で１６％ポリアクリルアミド上に適用した。試料は、それぞれのスロットにタンパク質１０〜２０μｇ（マイクログラム）が収容されるように適用した。電気泳動は、２００ボルトで７０分間行った。結果は、クロマトグラフィによっても確かめた。本発明の方法によるタンパク質変性の程度は、ｐＨ４．６および３０００ｇで窒素溶解度インデックス（ＮＳＩ）によって３回測定した。（Association of O fficial Analytical Chemists(A0AC) 1985、文献６）。これらの実験に用いた方法は文献２に記載したものとは異なり、タンパク質の未変性状態を一層精確に反映している。試料のタンパク質含量（Ｎ×６．３８）および総脂質は、それぞれKjeldahlの標準的方法およびMojonnierの方法によって２回測定した。水分含量は、ＡＯＡＣの方法によって２回測定した（７）。総大腸菌数は、ブリリアント・グリーン中で３７℃で１８時間インキュベーションした後、最確数法(most probable number method)を用いて測定した。総細菌数（好気性中温菌(mesophiles)）は、ＰＣＡ培地中で３２℃で４８時間インキュベーションした後に測定した。これらの方法はいずれも、国際酪農連盟および米国公衆衛生協会によって承認されている。ラクトースは、酵素法によって測定した。規格化(Standardization) 図１について説明すれば、第一段階はミルクの規格化である。これは、ミルクを脱脂(skimming)して所望な脂肪含量とすることを含んでいる。この手順は、２つの理由で用いられる。第一の理由は、最終のチーズの乾燥分に対する脂肪の法定百分率を達成するためである。第二は、チーズの最高収率および品質（ボディーおよびテキスチャー）を達成するためである。チェダーチーズについては、ミルク中の脂肪対カゼインの最適比は脂肪１部対カゼイン０．７部である(Kosikowski)（９）。５０℃〜６５℃の範囲の温度は、脂肪を０．０５％の濃度まで脱脂するのに最も効率的な範囲であるので、通常の実施はこの範囲の温度を用いることであった。しかしながら、本発明者らは、本発明により温度を更に低水準、好ましくは約４℃以下に維持することの方を好むものである。脂肪除去工程の際のこの低温は脂質の酸化を回避するのに必要であり、この脂質の酸化は保存中の時間にわたって継続しやすくかつ悪臭を生成し（脂肪酸の放出）、これが次に不安定なタンパク質の栄養効率には影響することなくコンホメーションを損なうことがある。実施例で用いられる原料ミルクは、下記の組成を有していた。組成タンパク質３．２％脂肪３．６５％ラクトース４．７％。組成物のｐＨは６．６５であった。本願に記載の実施例において、ミルクの規格化は、自動規格化装置（Alfa Lav al, Alfast Model 110）と組合せた低温分離装置（Alfa Laval, CMRPX 714-HGV ）を用いて行った。総ての規格化段階は４℃で行った。（図１）および総ての実施例について、脂肪含量は総ミルクの３．５８％に調整した。脂肪含量の３．５８％は、規格化によれば、下記の計算によるものであった。脂肪％＝タンパク質％×１．１２（最終生成物中）（原料ミルク中）脂肪％＝３．２×１．１２殺菌(PASTEURIZATI0N) 図１による次の段階は殺菌である。本願における実施例では、ミルクの殺菌は、HTST型の熱交換器(Alfa Laval H-10)で１６秒間の保持時間で７２．６℃に設定した後３０℃にフラッシュ冷却(flash cooling)して行った。ほとんどの国では殺菌なしに酪農製品の生産を許可していない。様々な種類の殺菌を用いることができる。ＨＴＳＴ、高温短時間：７２．８℃、１６秒間、ＬＴＬＴ、低温長時間：６５．６℃、３０分間、ＵＨＴ、超高温：１２０℃、数秒間、しかし、タンパク質、特に血清アルブミンの変性に対する効果は、ＬＴＬＴおよびＵＨＴでほとんど明らかである。ミルクの高温殺菌の導入は、２つの異なる目的によって促進された。第一は、欧州において１９８８年中にチーズ関連感染症が報告された結果、ミルクのほとんどの殺菌(near sterilization)を得るためであった。第二の目的は、チーズ製造の際の収率を向上させることであった。実際に、これらの温度では、または前記の殺菌温度より５°以下だけ増加させることにより、ある種のチーズでは収率を増加させることができる点にチーズ製造業者は注目している。本発明の教示によれば、実施とは反対に、超高温は避けるべきである。６５．６℃程度の極めて低い温度に長時間暴露することも回避すべきである。５５℃の低い温度であっても、ウシ血清アルブミン分子の変性(unfolding)が経時的に起こる（Wong & Call、１９８８年）。しかしながら、本発明は６３℃ 〜７５℃の範囲の高温、好ましくは約７２℃を約２０秒間までの短時間用いることができる。温度および時間などの条件は、ミルク中のタンパク質、特に熱に不安定な血清アルブミンおよび他のＧｌｕ−Ｃｙｓ含有タンパク質の変性を回避しなければならないが、このような殺菌条件は、病原菌が許容可能な水準まで殺されまたは減少するようにすべきである。チーズ生産−温度減少図１による次の段階は、チーズ生産である。チーズ生産の予備段階は温度を減少させることである。本発明の実施例によれば、温度は、例えばフラッシュ冷却などによってチーズ製造のための３０℃の温度まで直ちに減少させる。チーズ生産−培養物の添加チーズ製造は発酵工程であるので、本発明者らは乳酸培養物を添加する。これらの培養物およびおよびその代謝物は、主としてチーズの酸性化およびリパインニング(repining)に関与している。チェダーチーズについては、本発明者らは、実施例ではCH. Hansen Laboratoryによって提供される中温菌生物の市販の培養物を用いる。適当な培養物は、Miles Laboratoryのような他の供給元から容易に入手できる。添加された培養物の量は、チェダーに変換されるミルク総量の１％であった。これらの培養物は、チーズ製造のために中温菌である乳酸菌の必要な成長を行うことができる約３０℃まで冷却した後に添加される。これらの細菌の活性は、ミルクのｐＨがｐＨ６より低下することがないように調節される。細菌は生きている有機体であるので、それらの代謝速度は変化することができる。それが速すぎる場合には、ミルクに添加する細菌の量を例えばミルク総量の１％から０．７５％に減少させることができる。細菌が少なければ、生成する酸も少ない。代謝の速度を調節するもう一つの方法は、発酵温度を下げることである。２℃ 下げることが、通常はこの目的に用いられる。チーズ製造のこの予備段階では、通常は塩化カルシウムをミルクに添加して、チーズを製造する際のカードの堅さを増加させる。真の結果は、一層良好な沈殿およびホエー中のチーズカード粒子の損失の減少によるチーズ収率の増加である。しかしながら、本発明者らは、ＢＳＡの変性がカルシウムイオンの存在によって増大することを見いだした。従って、本発明者らは、チーズ製造における通常の実施とは反対にカルシウムイオンの添加を回避する。Shimada & Matsushta、１９８１年（８）の報告も参照される。この種の添加剤は、生成するホエーが本発明に用いられている場合には、チーズの生産中には回避される。収率は、従来の実施においても、チーズに変換されるミルクにミルク誘導体（カゼイン、ホエータンパク質）を添加することによって増加することもできる。この手順は本発明では一般に避けられるが、これはこの手順がホエーのタンパク質含量の品質に影響を及ぼすからである。通常のホエーに見られる各種の画分は改質されて、総タンパク質の単位当たり未変性のウシ血清アルブミンの量が少ないホエータンパク質濃縮物を生じる。チーズ生産−発酵発酵期間（リパインニング時間）は、３０℃の温度の本発明の実施例では１．５時間であった。ｐＨは６．６５から６．５５に減少した。従って、ｐＨの降下は、レンネットを添加する前には０．１であった。チーズ生産−レンネットの添加レンネットは、２０ｍｌ／ミルク１００リットルの割合で添加した。カード形成に要する時間は２５分間であった。使用したレンネットは、CH. Hansens Laboratory製の純粋な子ウシレンネット単一強度であった。量は、２０ｍｌ／ミルク１００リットルであった。温度は３０℃に維持する。レンネットを水でその容積の１０倍に希釈した後、ミルクに添加した。凝固時間は２５分であった。チーズ生産−カードの培養次に、カードを、３０℃の温度で６ｍｍチーズナイフを用いて切断して１辺が６mmの立方体とし、１５分間攪拌した後、加熱処理した。チーズ生産−加熱処理本発明の実施例では、加熱処理を７５分間継続し、連続攪拌を用いた。３０分間で、３８℃のピーク温度に到達した（１．３℃／５分）。この加熱処理期間の後、攪拌を１時間継続した。加熱処理後のホエーのｐＨは６．５であった。４０℃を越える温度を含む総てのチーズ製造段階を回避するのが極めて望ましい。実際には、エメンタールなどの幾つかのチーズを生産するには、５０℃を上回る温度が必要である。この水準まで温度を上昇した後、ホエーを分離し、この温度に維持することは、血清アルブミン含量に不利な影響がある。後攪拌の後、カードをホエーから分離する。ホエーからのカードの分離カードは、この水準でホエーから分離すべきである。成形の際に本発明の目的には、追加のホエーは集められず、この期間中に酸性化としてカードの最終プレス加工によりｐＨは６未満に低下する。ホエーを１／２時間を超えて保持する場合には、これをカードから分離したならばできるだけ速く約４℃まで冷却すべきである。この手順により、乳酸菌の代謝は減少して、酸性度は増加しない。（Ｈ₂Ｏ₂のような）添加剤を、抗細菌薬として用いるべきではない。その代わりに、本発明者らは、細菌の代謝の低温抑制を用いている。ホエーを濃縮する前には、そのｐＨはｐＨ＝６未満にすべきではない。ホエー−脂肪の除去集められたホエーを最初に３８℃で遠心分離機に圧送して、チーズ生産の際に存在した過剰の脂肪を除去する(Alfa-Laval MHMRPX-214TGV)。脂肪の量を、生成ホエー中で０．０６％の濃度まで減少させる。本発明の実施例におけるｐＨは６．４８であった。次にホエーを４℃まで冷却し、限外濾過（Ｕ．Ｆ．）を行うまで保存する。次に、温度を４０℃に上げて、（５０，０００ダルトンのカットオフを有するRomi conカートリッジを用いて）限外濾過を行う。必要であれば、前記の殺菌と同様の条件下で、図１に示すように第二の殺菌を行うことができる。ホエー−殺菌本発明の実施例では、ホエーを殺菌した。この熱処理を主として適用して、ミルクに以前に加えた乳酸菌の活性を制御した。この熱処理は、チーズ製造の際に起こることがある殺菌後汚染を制御するのにも用いられる。限外濾過限外濾過の際に、保持物(retentate)に水を加えてラクトース濃度を減少させ（４．６％）限外濾過からの保持物のラクトース含量が１％未満となるようにすることによってダイアフィルトレーション(diafiltration)を行う。限外濾過の完了後の保持物は、総固形分が１９〜２０％である。限外濾過の条件を、下記の表１に示す。膜フラックスは２〜２1/2度／センチグラード(centigrade)に増加して、植物の容量における同様な増加となる。これは、低温での作業には特別理由はないが、従来の実施ではできるだけ高温で作業するのが有利であることを意味する。この手順の際に他のほとんどの商業的方法で用いられる温度は５０℃である。この水準の温度では、膜を通過するフラックスが一層促進され、従って単位時間当たりおよび単位膜当たりの保持物の生産も一層促進される。本発明の方法では、単位膜当たりの生産が低いという欠点は、膜表面を増加することによって補償される。４０℃を超過しないことの目的は、系における入力および出力の点を微細調整して二点間に熱生成のアンバランスができないようにすることによって、系中で得られる。限外濾過の後に、保持物の温度を４℃まで低下させ、凍結乾燥を開始するまでこの温度に保持する。保持物の組成は、総固形分が約１９〜２０％である。典型的な組成は、下記の通りである。脂肪２．０９％真のタンパク質１５．９１非タンパク質窒素０．０４ラクトース０．８４灰分１．０総固形分１９．８８％所望であれば、限外濾過の後にビタミンおよびフレーバーを保持物に添加することができる。この保持物は最終生成物とされ、液状形態で発売されている。或いは、保持物を濃縮して、下記のような乾燥生成物を提供することができる。ホエー−凍結乾燥凍結乾燥(lyophilization)（凍結乾燥(freeze drying)）によって乾燥生成物を生成するための濃縮は、０℃以下の温度で１５〜１８時間行う。これによって、熱に不安定なタンパク質は変性しない。本発明の実施例では、保持物を凍結乾燥装置に入れる前に−２５℃でブラスト・フリーズを行った。冷却器(condenser)の温度は、凍結乾燥期間の１７時間中 −５０℃に保持した。保持物の微生物計数は、通常の殺菌に適用可能な標準品に匹敵するのが好ましい。これらの標準品は、それぞれの管轄区域で異なっている。例えば、カナダ国、ケベック州では、粉末状ミルク製品の場合には、工場および最終製品のいずれでも総細菌数（好気性中温菌（３２℃））が５０，０００（ｌｏｇ４．６９）未満に維持することを要求している。大腸菌は１０未満となっている。ケベック州の殺菌または発酵されていないミルク製品の工場での細菌数の規格は、２５，０００（ｌｏｇ４．３９）であり、大腸菌数は５である。表２に、上記基準を用いて得たホエータンパク質濃縮粉末物の組成を示す。ある種の因子はホエー濃縮物粉末の通常の生産中には制御することができない。ミルク組成およびチーズ製造工程の各段階のミルクに含まれる細菌代謝の季節変動は、濃縮物の組成に見られる差異に主として関与している。しかしながら、本発明の基準の実施により、血清アルブミンのような一貫して高濃度の熱に不安定なタンパク質を生成し、かつホエータンパク質におけるグルタミルシステイン基が実質的に失われないようにすることを期待することができる。限外濾過および凍結乾燥による濃縮後の粉末状の最終生成物のタンパク質組成および溶解度（表２）は、免疫増強活性の発展および組織ＧＳＨ促進に必須であると本発明者らによってあらかじめに同定された要件、すなわち血清アルブミン濃度が約９％でありかつ変性の程度が最小限であることを満たしている。実施例のそれぞれにおいて、血清アルブミンは９．５％を上回る。表３および表４に、現在市販されているＷ．Ｐ．Ｃ．の血清アルブミンの濃度および幾つかのＷ．Ｐ．Ｃ．製品においてDe Witによって測定された窒素溶解度指数が比較のために示されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年２月５日【補正内容】低水準の熱処理によって生成した食物Ｗ．Ｐ．Ｃ．は、全身性体液性免疫応答を改善し、ジメチルヒドラジンのような化学的発癌物質などの発癌物質の効果に対する標的細胞の耐性を増加し、肺炎球菌の感染に対する耐性を向上させ、組織（細胞内）グルタチオンの増加を維持する。本発明の目的は、過度の水準のタンパク質変性のない適度な低細菌水準のホエータンパク質濃縮物を製造する改良法を提供することである。特別な目的は、約９％の血清アルブミンを有しかつ細菌を適度に減少させたホエータンパク質濃縮物を達成する方法を提供することである。この約９％の濃度の血清アルブミンは、前記の改良された全身性体液性免疫応答のような特性に対して組織グルタチオンの増加維持を達成する上で本発明者らの研究に重要であることが判った（文献２および３）。もう一つの目的は、高血清アルブミン含量だけでなく、高含量の他のシスチンおよびＧｌｕ−Ｃｙｓ含有タンパク質またはグルタチオン同族体、例えば（Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ａｌａ）をも有するホエータンパク質濃縮物を達成する方法を提供することである。高血清アルブミン含量を得る工程条件を用いることにより、高含量のこれらの他のＧｌｕ−Ｃｙｓ含有タンパク質も得られる。血清アルブミンは、その変性はアルファ−ラクトアルブミンの変性ほど可逆性ではないので、極めて容易に変性される血清タンパク質である(4)。従って、本発明のもう一つの目的は、温度および他の条件の厳密な制御を維持して血清アルブミンの変性を最小限にすることである。請求の範囲１４．多量のシスチンを含有するタンパク質（血清アルブミン、α−ラクトアルブミンおよびラクトフェリン）の生物学的に有効な量を含む未変性ホエータンパク質濃縮物の製造のための、請求項１３に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．チーズ製造工程の副生成物として約９％以上の血清アルブミン含量を有する未変性ホエータンパク質濃縮物の製造法であって、 (1) ミルク中の脂肪含量の低温規格化、 (2) ミルク中のタンパク質が実質的に変性しない条件下でのチーズ製造の前の殺菌、 (3) カルシウムイオンを添加しないでチーズ生産の前の冷却、 (4) 約４０℃を超えない温度でのチーズカードおよびホエーの製造、 (5) ホエーからカードの分離、 (6) ホエーから過剰の脂肪の除去、 (7) 必要ならば、ミルク中のタンパク質が実質的に変性しないようにするのに十分な短時間、高温での殺菌、 (8) ４０℃付近であるが実質的に４０℃を超過しない温度で限外濾過して保持物を提供すること、の段階を含んでなり、ｐＨを段階１〜８を通して６以上に保持することを特徴とする、方法。２．保持物を、タンパク質を変性しない温度および時間で乾燥する、請求項１に記載の方法。３．低温規格化が約４℃の温度においてである、請求項１に記載の方法。４．殺菌は約７０°〜７５℃の温度で２０秒未満である、請求項１に記載の方法。５．チーズ製造の前の殺菌の後に約３０℃の温度にフラッシュ冷却する、請求項１に記載の方法。６．限外濾過にダイアフィルトレーションが伴い、保持物中のラクトース濃度を１％未満に低下させる、請求項１に記載の方法。７．保持物を凍結乾燥によって濃縮する、請求項２に記載の方法。８．カードの最終的な成形およびプレス加工の際に、追加のホエーは収集されない、請求項１に記載の方法。９．保持物を凍結乾燥する、請求項１に記載の方法。１０．チーズカードがチェダーチーズカードである、請求項１に記載の方法。１１．ミルクへの塩化カルシウムの添加を行わない、請求項１に記載の方法。１２．限外濾過からの保持物が、固形物含量が約１９〜２０％である最終液状生成物である、請求項１に記載の方法。１３．グルタミルシステイン基を有するタンパク質の生物学的に有効な量を含む未変性ホエータンパク質濃縮物の製造法であって、ミルクの低温規格化、殺菌、カードおよびホエーの形成、ホエーの分離、前記グルタミルシステイン基が実質的に損失しない時間および温度の条件下でかつ濃縮前にｐＨが６以上でホエーを濾過濃縮および乾燥することを特徴とする、方法。１４．血清アルブミンの変性を引き起こすカルシウム化合物の添加を行わない、請求項１３に記載の方法。１５．カードを成形して最終的にプレス加工する前にホエーを予備プレスする、請求項１３に記載の方法。１６．未変性ホエータンパク質濃縮物が、少なくとも９％の血清アルブミン濃縮物を有する、請求項１３に記載の方法。