JPH092948A - アシルコエンザイムａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式（１）のポリオキシアルキレン化合物を有
効成分とするアシルコエンザイムＡ：コレステロールア
シルトランスフェラーゼ阻害剤、血中コレステロール低
下剤及び動脈硬化症予防治療剤。 【化１】R¹-O-(R²O)_m-H （１） 〔式中、Ｒ¹ は水素原子、炭素数１〜２４のアルキルも
しくはアルケニル基、総炭素数７〜３４のアルキルアリ
ール基又は炭素数２〜２４のアシル基を示し、ｍ個のＲ
² は同一でも異なっていてもよい炭素数２〜４のアルキ
レン基を示し、ｍは２〜３０の数を示す〕 【効果】 ＡＣＡＴ阻害活性が強く、血中コレステロー
ルを低下させ、コレステロールの蓄積を抑制することか
らヒトの動脈硬化症の予防及び治療剤として有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は動脈硬化症の予防に有用
なアシルコエンザイムＡ：コレステロールアシルトラン
スフェラーゼ（以下ＡＣＡＴという）阻害剤及び血中コ
レステロール低下剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】食生活の欧米化に伴って、わが国におけ
る虚血性心疾患の発生頻度は著しく増加している。欧米
型の食生活によって上昇する血中のコレステロール値と
動脈硬化症の関係は、多くの疫学的研究で明らかにされ
てきた。すなわち、血清コレステロール値と虚血性心疾
患発生頻度との間には有意な相関があり、高コレステロ
ール血症を治療することが動脈硬化症、ひいては虚血性
心疾患を予防するといわれている。動脈硬化症は、血管
への脂質蓄積による内膜の肥厚が特徴的な病変である
が、近年粥状動脈硬化症の病巣に、マクロファージ由来
の細胞がコレステロールエステルを脂肪滴として貯蔵し
ている泡沫細胞が観察され、病変の進展に深く関わって
いると推定されている。

【０００３】一方、ＡＣＡＴは、コレステロールの脂肪
酸エステル化酵素であり、本酵素の阻害剤は動脈硬化の
治療薬として期待されている（Ｄｒａｇｏ Ｒ．ｅｔ
ａｌ．，Ｔｉｐｓ １９４，（１２），１９９１）。す
なわち、動脈硬化病変部位の血管壁ではＡＣＡＴ活性が
高くなっており、血管壁へコレステロールエステルが蓄
積していることが報告されている。従って、ＡＣＡＴ活
性抑制作用を有する物質を用いれば、コレステロールの
エステル化を阻害することができ、細胞に存在する遊離
コレステロールは高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）によって、
沈着部位から取り去られ、肝臓に運ばれて代謝されるの
で、病変部位でのコレステロールエステルの蓄積が抑制
され、直接的な抗動脈硬化作用を得ることができる。

【０００４】また、食事中に含まれるコレステロールは
小腸粘膜細胞においてＡＣＡＴによりエステル化された
後、カイロミクロンの成分として血流に放出される。よ
って、ＡＣＡＴ阻害剤を用いれば、食事中のコレステロ
ールの小腸上皮細胞での吸収を阻害することにより、血
中コレステロールを低下させることができるため、その
結果として、動脈硬化を抑制することができる。

【０００５】また、カイロミクロンによって肝臓まで運
ばれたコレステロールエステルはコレステロールエステ
ラーゼで遊離コレステロールに分解された後、肝臓で合
成された遊離コレステロールとともにＡＣＡＴによって
再度コレステロールエステルに変換され、超低比重リポ
蛋白（ＶＬＤＬ）に組み込まれて血中へと放出される。
よって、かかるＡＣＡＴ阻害剤によってコレステロール
のエステル化が阻止されれば、肝臓の遊離コレステロー
ル量が増加し、コレステロール合成系の抑制がかかると
共に、コレステロールの胆汁酸への変換の過程における
律速酵素である７α−水酸化酵素活性が亢進し、コレス
テロールの胆汁酸への異化排泄作用が高まる。

【０００６】このように、ＡＣＡＴ阻害剤を用いれば、
食事中のコレステロールの小腸からの吸収を阻害するこ
とにより、また、肝臓でのコレステロールの再エステル
化を抑制し、更にコレステロールの異化排泄促進作用に
より血中コレステロールを低下させることができ、動脈
硬化を予防又は治療することができる。

【０００７】このような背景からＡＣＡＴ阻害物質の探
索が行なわれており、微生物が産生するＡＣＡＴ阻害物
質がいくつか知られているが、これらの物質は作用及び
安全性の両面を考慮すると未だ満足できるものではなか
った。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
はＡＣＡＴ阻害活性が高く、安全性に問題がなく、血中
コレステロール低下剤、動脈硬化症予防治療剤として有
用な医薬を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】かかる実情において本発
明者らは、ＡＣＡＴ活性阻害作用を有する物質の探索を
続けた結果、意外にもポリオキシアルキレン化合物がＡ
ＣＡＴ阻害作用、コレステロールエステル蓄積抑制作用
及び血中コレステロール低下作用を有し、医薬として有
用であることを見出し、本発明を完成するに至った。

【００１０】すなわち、本発明は次式（１）

【００１１】

【化４】R¹-O-(R²O)_m-H （１）

【００１２】〔式中、Ｒ¹ は水素原子、炭素数１〜２４
のアルキルもしくはアルケニル基、総炭素数７〜３４の
アルキルアリール基又は炭素数２〜２４のアシル基を示
し、ｍ個のＲ² は同一でも異なっていてもよい炭素数２
〜４のアルキレン基を示し、ｍは２〜３０の数を示す〕

【００１３】で表されるポリオキシアルキレン化合物を
有効成分とするアシルコエンザイムＡ：コレステロール
アシルトランスフェラーゼ阻害剤を提供するものであ
る。

【００１４】また、本発明は上記ポリオキシアルキレン
化合物（１）を有効成分とする血中コレステロール低下
剤を提供するものである。

【００１５】更にまた、本発明は上記ポリオキシアルキ
レン化合物（１）を有効成分とする動脈硬化症予防治療
剤を提供するものである。

【００１６】本発明に用いられるポリオキシアルキレン
化合物は、上記一般式（１）で表されるものであるが、
当該式中Ｒ¹ で示される炭素数１〜２４のアルキル又は
アルケニル基としては直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び
アルケニル基のいずれでもよいが炭素数１〜２４の直鎖
又は分岐鎖のアルキル基がより好ましく、炭素数１０〜
２０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が特に好ましい。こ
のようなアルキル基の例としては、メチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ペンチル
基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、
デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、
テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘ
プタデシル基、オクタデシル基等が挙げられる。

【００１７】また、総炭素数７〜３４のアルキルアリー
ル基としては、総炭素数７〜３４のアルキルフェニル及
びアルキルナフチル基が挙げられ、このうち総炭素数１
０〜２０のアルキルフェニル基及び総炭素数１４〜２４
のアルキルナフチル基がより好ましい。かかるアルキル
アリール基の具体例としては、メチルフェニル基、エチ
ルフェニル基、プロピルフェニル基、イソプロピルフェ
ニル基、ブチルフェニル基、ヘキシルフェニル基、オク
チルフェニル基、デシルフェニル基、ドデシルフェニル
基、テトラデシルフェニル基、ヘキサデシルフェニル
基、メチルナフチル基、エチルナフチル基、プロピルナ
フチル基、イソプロピルナフチル基、ブチルナフチル
基、ヘキシルナフチル基、オクチルナフチル基、デシル
ナフチル基等が挙げられる。

【００１８】また、炭素数２〜２４のアシル基として
は、炭素数２〜２４のアルカノイル又はアルケノイル基
が挙げられ、このうち炭素数１０〜２０のアルカノイル
又はアルケノイル基がより好ましい。かかるアシル基の
具体例としてはアセチル基、プロピオニル基、ヘキサノ
イル基、オクタノイル基、デカノイル基、ドデカノイル
基、テトラデカノイル基、ヘキサデカノイル基、オクタ
デカノイル基、オレオイル基等が挙げられる。

【００１９】Ｒ² としては、エチレン基、トリメチレン
基、プロピレン基、テトラメチレン基が挙げられるが、
エチレン基及びプロピレン基がより好ましく、プロピレ
ン基が特に好ましい。また、エチレン基とプロピレン基
が混在していてもよい。

【００２０】ｍは２〜３０の数を示すが、２〜２０が特
に好ましい。

【００２１】一般式（１）で表されるポリオキシアルキ
レン化合物のうち、下記一般式（２）で表される化合物
が特に好ましい。

【００２２】

【化５】R^1a-O-(R^2aO)_m-H （２）

【００２３】〔式中、Ｒ^1aは水素原子又は炭素数１〜２
４のアルキル基を示し、ｍ個のＲ^2aはプロピレン基又は
プロピレン基とエチレン基の混在を示し、ｍは２〜３０
の数を示す〕

【００２４】かかるポリオキシアルキレン化合物（１）
はそのアルキル基の疎水作用と末端の水酸基に由来する
親水作用を有するが故に界面活性剤等としても使用され
る物質である。本物質は微生物に対する毒性がほとんど
認められず、その増殖特性にも影響を与えないので、発
酵工業等においても使用されている。また、ポリオキシ
アルキレン化合物（１）は後記実施例に示すように優れ
たＡＣＡＴ阻害作用細胞内へのコレステロールエステル
蓄積抑制作用及び血中コレステロール低下作用を有する
ので、血中コレステロール低下剤及び動脈硬化症予防治
療剤として有用である。

【００２５】本発明の医薬は、ポリオキシアルキレン化
合物（１）を単独で或いは他の薬効成分（例えば、他の
作用機序を有する抗動脈硬化用薬）とともに、更に必要
に応じて薬学的に許容される担体とともに経口的又は注
射等の非経口的に投与されるが、経口的に投与されるの
が好ましい。

【００２６】経口的な製剤としては例えば錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、粉末剤、トローチ剤、シロップ剤などが
挙げられる。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、トロ
ーチ剤などの固型の組成物においてはデンプン、ラクト
ース、カルボキシメチルセルロース、沈降炭酸カルシウ
ムなどの賦形剤；アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラ
チン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
などの結合剤；アルギン酸、コーンスターチなどの崩壊
剤；ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、軽
質無水ケイ酸などの滑沢剤；サッカロースなどの甘味
剤；メントールなどのフレーバー剤などを含有させるこ
とができる。シロップ剤などの液状の組成物においては
ソルビトール、ゼラチン、メチルセルロース、植物油、
乳化剤のほか甘味剤、フレーバー剤、着色剤などを含有
させることができる。これら製剤中には１〜９５重量％
のポリオキシアルキレン化合物（１）を含有するのが望
ましい。

【００２７】また、本発明の医薬の投与量は、症状、体
重、投与経路等によって異なるが、経口投与の場合ポリ
オキシアルキレン化合物（１）として成人１日あたり１
０〜１，５００mgを１〜数回に分けて投与するのが好ま
しい。

【００２８】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるもので
はない。

【００２９】実施例１ （ラット由来ＡＣＡＴに対する阻害作用）ＡＣＡＴ活性
に対する影響は、ラット肝臓のミクロゾーム蛋白画分よ
り調製した粗酵素を用い、（¹⁴Ｃ）−オレオイルＣｏＡ
を基質に、内因性のコレステロールから（¹⁴Ｃ）−コレ
ステリルオレエートを生成させる反応をインビトロで行
なうことにより調べた。すなわち、培養上清を試料とす
るときの反応液組成は、２０μｌのミクロゾーム蛋白
（１．８３mg／ml）、２０μｌの（¹⁴Ｃ）−オレオイル
ＣｏＡ（５μＣｉ／ml、ＢＳＡ：９６nmol／ml）、９０
μｌの１００mMリン酸緩衝液（５mMのジチオスレイトー
ルを含む、pH７．４）、２０μｌの培養上清液、合計１
５０μｌからなる。一方、被検体を試料とする時の反応
液組成は、２０μｌのミクロゾーム蛋白（１．８３mg／
ml）、２０μｌの（¹⁴Ｃ）−オレオイルＣｏＡ（５μＣ
ｉ／ml、ＢＳＡ：９６nmol／ml）、１０６μｌの１００
mMリン酸緩衝液（５mMのジチオスレイトールを含む、pH
７．４）、４μｌのメタノール或いはジメチルスルホキ
シドに溶解した試料、合計１５０μｌからなる。

【００３０】なお、反応は３７℃で行ない、所定の反応
時間（通常１８分間）終了後、５．６５mlのクロロホル
ム：メタノール（２：１）を添加して反応を停止したの
ち、０．０４Ｎの塩酸水溶液０．９８ml及びキャリアー
としてコレステリルオレエートを加え、２０分間振盪機
で抽出したのち、１晩冷暗所に放置した。翌日、分離し
たクロロホルム下層全量を抜き取り、これを窒素気流下
に乾燥させ、残った上層にホルチの分配溶液下層５．６
５mlを加えて再度抽出した。これを１晩暗所に放置した
後、下層全量を抜き取り、先に乾固したクロロホルム下
層画分と合わせて乾固した。

【００３１】次に、これを２００μｌのクロロホルムに
溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィーＧ６０プレ
ート（アルミニウムシート）に全量塗布した。これをジ
エチルエーテル：石油エーテル（１０：１９０）で１０
cm展開した後、オートラジオグラフィーを行ない、生成
した（¹⁴Ｃ）−コレステリルオレエートを確認した。次
にこの部分を切りとって、トルエン中で各試料共５分間
の液体シンチレーションカウンティングあるいはベータ
スコープ（ベータ・ジェン社製）によって３０分間放射
活性を測定した。得られた結果を図１に示す。図１中の
各試料は次の通りである。

【００３２】試料１：ポリオキシプロピレンポリオキシ
エチレンアルキルエーテル（アデカノールＬＧ２９４，
旭電化） 試料２：ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンポリ
オキシエチレン（プルロニック，旭電化） 試料３：ポリプロピレングリコール（平均分子量７０
０）

【００３３】更に、分子量が７４２のポリオキシプロピ
レンポリオキシエチレンアルキルエーテル化合物（アデ
カノールＬＧ２９４を酢酸エチル：アセトン＝９５：５
の混合溶媒にてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに
より分画した物質）のＡＣＡＴを５０％阻害する濃度
（ＩＣ₅₀）は７０nMであった。

【００３４】実施例２ （マクロファージに対するコレステロールエステル蓄積
抑制作用）マクロファージに対するコレステロールエス
テル蓄積抑制作用は、マウスのマクロファージ樹立細胞
であるＪ７７４．１株を用いて行なった。

【００３５】内皮細胞や平滑筋細胞におけるＬＤＬの代
謝は細胞内の過剰の遊離コレステロールによって、ＬＤ
Ｌレセプターのダウンレギュレーションがかかるが、マ
クロファージにおいては変性ＬＤＬの取り込みは、スカ
ベンジャーレセプター経由による。この経路はレギュレ
ーションがかからないためコレステロールエステルが無
制限に蓄積してゆく。

【００３６】そこで、¹⁴Ｃでラベルしたコレステロール
とホスファチジルコリンからなるリポソームをマクロフ
ァージ細胞に取り込ませ、粗面小胞体に存在するＡＣＡ
Ｔに作用させることにより、被検体が細胞内コレステロ
ールエステルの蓄積を抑制するか否かを調べた。

【００３７】マクロファージ細胞を１０％牛胎児血清及
びペニシリン５０Ｕ／ml、ストレプトマイシン５０μｇ
／mlを加えたＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬社製）
にて、２日間、５％ＣＯ₂ の条件にてインキュベートし
た。次いで、トリプシン処理を行ない、ウェルの底面に
付着している細胞を剥がして細胞懸濁液とした後、細胞
を上記新鮮培地で洗浄し、２４穴のマルチプルウェルプ
レート（コーニング社製 ２５８２０−２４）に１ウェ
ル当たり２×１０⁶ 個／mlの細胞溶液７５０μｌを播種
した。３７℃、５％ＣＯ₂ の条件下で３７時間培養した
後に前記新鮮培地と交換し、更に８０μｇのコレステロ
ール（０．４μＣｉの（³Ｈ）−コレステロールを含
む）と１６０μｇのホスファチジルコリンを含んだ０．
３Ｍのグルコース溶液４０μｌ及び被検試料を溶解した
メタノール溶液１０μｌを添加して、１２時間培養し
た。これらの操作は無菌的に行なった。

【００３８】培養終了後、血清を含まないＲＰＭＩ １
６４０培地を使用して底面に付着している細胞を５回駒
込ピペットで洗浄した後、１mlのイソプロパノールを添
加して細胞内のコレステロール及び生成したコレステロ
ールエステルを抽出した。この抽出液をシリカゲル薄層
クロマトグラフィー（メルク社製 Ａｒｔ．５５５３）
に全量塗布し、ヘキサン：エーテル：ギ酸（８０：２
０：２）にて展開した後、オートラジオグラフィーを行
なった。次に、³Ｈでラベルされたコレステロールエス
テル及びコレステロール部分を切り取り、液体シンチレ
ーションカウンターにて放射活性を測定し、対照と比較
してコレステロールエステル蓄積抑制率を得た。その結
果実施例１で用いた分子量７４２のポリオキシプロピレ
ンポリオキシエチレンアルキルエーテルの５０％コレス
テロールエステル蓄積抑制濃度（ＩＣ₅₀値）は０．９μ
Ｍであった。

【００３９】実施例３ ラットに対する血清コレステロール低下作用 ５週齢のＳＤラット（１２０〜１５０ｇ、１群１０匹）
を使用して、実施例１及び実施例２に記載したポリプロ
ピレンアルキルエーテル化合物のラットにおける血清コ
レステロール低下作用を検討した。対照群には、船橋農
場製Ｆ−２食にコレステロール１．５％、コール酸０．
５％、ヤシ油１０％、ショ糖１０％を添加した飼料を、
高脂血漿誘導食として自由摂食させた。一方、ポリオキ
シアルキレン化合物（被検試料）投与群には上記組成の
高脂血漿誘導食に実施例１及び２記載の分子量７４２の
ポリオキシプロピレンポリオキシエチレンアルキルエー
テル化合物０．０１％を添加した飼料を自由摂食させ
た。また、高脂血漿誘導食からコレステロールを除外し
た飼料を自由摂食させた普通食群についても同様に試験
した。試験方法は、これらの飼料を３日間自由摂食させ
た後、４日目にネンブタール麻酔下に下大動脈より採血
し、血清を採取した後、血清コレステロールはデタミナ
ＴＣ５５５キット（協和メデックス製）、ＨＤＬコレス
テロールはデタミナＨＤＬキット（協和メデックス製）
にて定量した。得られたデータの統計処理は、ダネット
の検定にて行った。

【００４０】図２は、その結果であり、対照群のラット
は高脂血漿誘導食の投与により血清コレステロール値は
５３５ml／dlにまで上昇しているのに比べて、ポリオキ
シアルキレン化合物投与群のラットでは血清コレステロ
ール値が２１６mg／dlしか上昇しておらず、危険率１％
以下で有意に血清コレステロールの上昇抑制効果が認め
られた。一方、コレステロール非添加食を摂食させた普
通食群の血清コレステロール値は１１６mg／dlであった
ことから、０．０１％のポリオキシアルキレン化合物は
対照群（高脂血漿誘導食投与群）に比べて７６％もの血
清コレステロール値上昇抑制効果を示すことが明らかと
なった。また、普通食群の血清ＨＤＬコレステロール値
は約５０mg／dlであるが、コレステロール投与群（対照
群）のＨＤＬコレステロール値は約１５mg／dlにまで低
下する。しかしながら、被検試料を投与した群では約２
３mg／dlと対照群に比べて危険率５％で有意にＨＤＬコ
レステロール値の低下を抑制した（図３）。なお、餌の
摂食量並びに体重の増加量については、対照群に比べて
普通食群及び被検試料投与群のいずれにも有意な差は認
められなかった。

【００４１】

【表１】 製剤例１（錠剤） ポリオキシプロピレンポリオキシエチレン ４０ｇ アルキルエーテル（分子量７４２） ラクトース ３６０ｇ ステアリン酸タルク ４０ｇ デンプン ６０ｇ

【００４２】以上を混合機で混和し、打錠して０．５ｇ
の錠剤１０００個を得た。

【００４３】

【発明の効果】本発明の有効成分はＡＣＡＴ阻害活性が
強く、血中コレステロールを低下させ、コレステロール
の蓄積を抑制することからヒトの動脈硬化症の予防及び
治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ポリオキシアルキレン化合物のＡＣＡＴ阻害作
用を示す図である。

【図２】ポリオキシアルキレン化合物の血清コレステロ
ール低下作用を示す図である。

【図３】ポリオキシアルキレン化合物の血清ＨＤＬコレ
ステロールに対する作用を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 和田 康江 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内 (72)発明者 森 稚恵 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内 (72)発明者 渡辺 常一 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内 (72)発明者 横倉 輝男 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（１） 【化１】R¹-O-(R²O)_m-H （１） 〔式中、Ｒ¹ は水素原子、炭素数１〜２４のアルキルも
   しくはアルケニル基、総炭素数７〜３４のアルキルアリ
   ール基又は炭素数２〜２４のアシル基を示し、ｍ個のＲ
   ² は同一でも異なっていてもよい炭素数２〜４のアルキ
   レン基を示し、ｍは２〜３０の数を示す〕で表されるポ
   リオキシアルキレン化合物を有効成分とするアシルコエ
   ンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ
   阻害剤。
2. 【請求項２】 式（１） 【化２】R¹-O-(R²O)_m-H （１） 〔式中、Ｒ¹ は水素原子、炭素数１〜２４のアルキルも
   しくはアルケニル基、総炭素数７〜３４のアルキルアリ
   ール基又は炭素数２〜２４のアシル基を示し、ｍ個のＲ
   ² は同一でも異なっていてもよい炭素数２〜４のアルキ
   レン基を示し、ｍは２〜３０の数を示す〕で表されるポ
   リオキシアルキレン化合物を有効成分とする血中コレス
   テロール低下剤。
3. 【請求項３】 式（１） 【化３】R¹-O-(R²O)_m-H （１） 〔式中、Ｒ¹ は水素原子、炭素数１〜２４のアルキルも
   しくはアルケニル基、総炭素数７〜３４のアルキルアリ
   ール基又は炭素数２〜２４のアシル基を示し、ｍ個のＲ
   ² は同一でも異なっていてもよい炭素数２〜４のアルキ
   レン基を示し、ｍは２〜３０の数を示す〕で表されるポ
   リオキシアルキレン化合物を有効成分とする動脈硬化症
   予防治療剤。