JPH09251021A - 肝臓に関する疾患の進行度の測定方法及び測定試薬 - Google Patents
肝臓に関する疾患の進行度の測定方法及び測定試薬Info
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- JPH09251021A JPH09251021A JP6042096A JP6042096A JPH09251021A JP H09251021 A JPH09251021 A JP H09251021A JP 6042096 A JP6042096 A JP 6042096A JP 6042096 A JP6042096 A JP 6042096A JP H09251021 A JPH09251021 A JP H09251021A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 肝疾患患者、特に肝炎ウィルス保持者の肝硬
変または肝癌への進行の早期診断を迅速かつ確実に行う
ことができる方法及び測定試薬を提供すること。 【解決手段】 ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンとモノクローナル抗体との特異的反応
を利用した免疫測定により被検試料中のヒトセルロプラ
スミンまたは活性型セルロプラスミンを測定することか
ら成る肝臓に関する疾患、特にウィルス肝炎の肝硬変等
への進行度を測定する方法および測定試薬を提供する。
変または肝癌への進行の早期診断を迅速かつ確実に行う
ことができる方法及び測定試薬を提供すること。 【解決手段】 ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンとモノクローナル抗体との特異的反応
を利用した免疫測定により被検試料中のヒトセルロプラ
スミンまたは活性型セルロプラスミンを測定することか
ら成る肝臓に関する疾患、特にウィルス肝炎の肝硬変等
への進行度を測定する方法および測定試薬を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、肝臓に関する疾患
の進行状態等を測定する方法および測定試薬に関するも
のである。
の進行状態等を測定する方法および測定試薬に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】肝臓に関する病気を患っている患者、特
に肝炎ウイルスキャリアーの病状の進行状態等を把握す
ることが、予防および治療において必要である。現在、
グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰ
Ｔ）、グルタミンオキザロ酢酸トランスアミナーゼ（Ｇ
ＯＴ）の値が用いられているが、この数値はいずれも病
気が進行し、悪化している状態を示すものである。すな
わち、肝臓の細胞が壊死し、破壊された結果として、数
値が上昇するものであり、早期診断には十分効果を上げ
ることはできない。
に肝炎ウイルスキャリアーの病状の進行状態等を把握す
ることが、予防および治療において必要である。現在、
グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰ
Ｔ）、グルタミンオキザロ酢酸トランスアミナーゼ（Ｇ
ＯＴ）の値が用いられているが、この数値はいずれも病
気が進行し、悪化している状態を示すものである。すな
わち、肝臓の細胞が壊死し、破壊された結果として、数
値が上昇するものであり、早期診断には十分効果を上げ
ることはできない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、肝臓
を患っている患者、特に肝炎ウイルスキャリアーの病状
の進行状態等を把握することを迅速かつ確実に行うこと
ができる測定方法及び測定試薬を提供することである。
を患っている患者、特に肝炎ウイルスキャリアーの病状
の進行状態等を把握することを迅速かつ確実に行うこと
ができる測定方法及び測定試薬を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、先にヒ
トセルロプラスミン活性を中和する能力を有するヒトセ
ルロプラスミンモノクローナル抗体を作製することに成
功し、該モノクローナル抗体を用いてウィルソン病の検
出を高感度かつ確実に行うことに成功した（特開平５−
２６８９８７、特開平６−２６５５４５）。
トセルロプラスミン活性を中和する能力を有するヒトセ
ルロプラスミンモノクローナル抗体を作製することに成
功し、該モノクローナル抗体を用いてウィルソン病の検
出を高感度かつ確実に行うことに成功した（特開平５−
２６８９８７、特開平６−２６５５４５）。
【０００５】本願発明者らは、ヒトセルロプラスミンま
たは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応する抗
体のさらなる有効な利用方法を見いだすべく、鋭意検討
した結果、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセル
ロプラスミンと特異的に反応する抗体とヒトセルロプラ
スミンまたは活性型ヒトセルロプラスミンとの特異的反
応を利用した免疫測定により被検試料中のヒトセルロプ
ラスミンまたは活性型セルロプラスミンを測定すること
から成る肝臓に関する疾患、特にウィルス肝炎の進行度
を迅速かつ確実に行うことを見いだし、本発明をなすに
至った。
たは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応する抗
体のさらなる有効な利用方法を見いだすべく、鋭意検討
した結果、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセル
ロプラスミンと特異的に反応する抗体とヒトセルロプラ
スミンまたは活性型ヒトセルロプラスミンとの特異的反
応を利用した免疫測定により被検試料中のヒトセルロプ
ラスミンまたは活性型セルロプラスミンを測定すること
から成る肝臓に関する疾患、特にウィルス肝炎の進行度
を迅速かつ確実に行うことを見いだし、本発明をなすに
至った。
【０００６】すなわち、本発明は、ヒトセルロプラスミ
ンまたは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応す
る抗体とヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセルロ
プラスミンとの特異的反応を利用した免疫測定により被
検試料中のヒトセルロプラスミンまたは活性型セルロプ
ラスミンを測定することから成る肝臓に関する疾患、特
にウィルス肝炎の進行度を測定する方法を提供する。
ンまたは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応す
る抗体とヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセルロ
プラスミンとの特異的反応を利用した免疫測定により被
検試料中のヒトセルロプラスミンまたは活性型セルロプ
ラスミンを測定することから成る肝臓に関する疾患、特
にウィルス肝炎の進行度を測定する方法を提供する。
【０００７】また、本発明は、ヒトセルロプラスミンま
たは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応するモ
ノクローナル抗体からなる肝臓に関する疾患、特にウィ
ルス肝炎の進行度を測定する測定試薬も提供する。
たは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応するモ
ノクローナル抗体からなる肝臓に関する疾患、特にウィ
ルス肝炎の進行度を測定する測定試薬も提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下、本発明をさらに詳細に説明
する。本発明の試薬として用いられるヒトセルロプラス
ミンまたは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応
する抗体とは、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンと特異的に反応することができれば、
モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であ
ってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。また、
本発明でいうヒトセルロプラスミンは、活性型セルロプ
ラスミン、非活性および不活性なセルロプラスミンの総
称を意味する。
する。本発明の試薬として用いられるヒトセルロプラス
ミンまたは活性型ヒトセルロプラスミンと特異的に反応
する抗体とは、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンと特異的に反応することができれば、
モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であ
ってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。また、
本発明でいうヒトセルロプラスミンは、活性型セルロプ
ラスミン、非活性および不活性なセルロプラスミンの総
称を意味する。
【０００９】本発明の試薬として、好ましく用いられる
ヒトセルロプラスミンモノクローナル抗体はヒトセルロ
プラスミンと特異的に反応する。また、活性型セルロプ
ラスミンモノクローナル抗体は、活性型ヒトセルロプラ
スミンと特異的に反応する、すなわち、活性型ヒトセル
ロプラスミンとは反応するが非活性または不活性型ヒト
セルロプラスミンとは反応しないものである。このよう
なヒトセルロプラスミン抗体として、ヒトセルロプラス
ミンモノクローナル抗体ＩＤ−１（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
（１９９４）ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．２，ｐｐ．１３９−
１４１）であり、このＩＤ−１を産生するハイブリドー
マは工業技術院生命工学工業技術研究所（旧名同院微生
物工業技術研究所）に寄託されており、その受託番号は
ＦＥＲＭＢＰ−４１３３である。また、活性型セルロプ
ラスミンモノクローナル抗体は、活性型セルロプラスミ
ンモノクローナル抗体ＩＤ−２（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
（１９９４）ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．２，ｐｐ．１３９−
１４１）であり、このＩＤ−２を産生するハイブリドー
マは工業技術院生命工学工業技術研究所（旧名同院微生
物工業技術研究所）に寄託されており、その受託番号は
ＦＥＲＭ ＢＰ−４１４５（微工研菌寄第１２４２１号
より移管）である。
ヒトセルロプラスミンモノクローナル抗体はヒトセルロ
プラスミンと特異的に反応する。また、活性型セルロプ
ラスミンモノクローナル抗体は、活性型ヒトセルロプラ
スミンと特異的に反応する、すなわち、活性型ヒトセル
ロプラスミンとは反応するが非活性または不活性型ヒト
セルロプラスミンとは反応しないものである。このよう
なヒトセルロプラスミン抗体として、ヒトセルロプラス
ミンモノクローナル抗体ＩＤ−１（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
（１９９４）ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．２，ｐｐ．１３９−
１４１）であり、このＩＤ−１を産生するハイブリドー
マは工業技術院生命工学工業技術研究所（旧名同院微生
物工業技術研究所）に寄託されており、その受託番号は
ＦＥＲＭＢＰ−４１３３である。また、活性型セルロプ
ラスミンモノクローナル抗体は、活性型セルロプラスミ
ンモノクローナル抗体ＩＤ−２（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
（１９９４）ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．２，ｐｐ．１３９−
１４１）であり、このＩＤ−２を産生するハイブリドー
マは工業技術院生命工学工業技術研究所（旧名同院微生
物工業技術研究所）に寄託されており、その受託番号は
ＦＥＲＭ ＢＰ−４１４５（微工研菌寄第１２４２１号
より移管）である。
【００１０】上記モノクローナル抗体を用いて、被検試
料中のヒトセルロプラスミンまたは活性型セルロプラス
ミンを検出することにより、肝臓に関する疾患の進行度
を測定することができる。本発明の被検試料としては、
ヒト由来のものであれば限定されないが、ヒト体液また
はヒト排出液を用いることができる。ヒト体液は、ヒト
体内の脈管または組織、細胞の間を満たすすべての液体
の総称であり、具体的には、血液、リンパ液、脳脊髄液
等である。また、ヒト排出液は、ヒト体内から排出され
るすべての液体を意味するが、具体的には、尿、汗又は
涙等である。
料中のヒトセルロプラスミンまたは活性型セルロプラス
ミンを検出することにより、肝臓に関する疾患の進行度
を測定することができる。本発明の被検試料としては、
ヒト由来のものであれば限定されないが、ヒト体液また
はヒト排出液を用いることができる。ヒト体液は、ヒト
体内の脈管または組織、細胞の間を満たすすべての液体
の総称であり、具体的には、血液、リンパ液、脳脊髄液
等である。また、ヒト排出液は、ヒト体内から排出され
るすべての液体を意味するが、具体的には、尿、汗又は
涙等である。
【００１１】被検試料中のヒトセルロプラスミンの検出
は、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセルロプラ
スミンと特異的に反応する抗体とヒトセルロプラスミン
または活性型ヒトセルロプラスミンとの特異的反応を利
用した免疫測定により行うことができる。免疫測定の方
法は周知であり、ポリクローナル抗体とモノクローナル
抗体のサンドイッチ法、モノクローナル抗体とモノクロ
ーナル抗体のサンドイッチ法、金コロイドによる染色
法、凝集法、ラテックス法、化学発光法等、現在用いら
れている抗体による検出法のいずれをも用いることがで
きる。例えば、検体中のヒトセルロプラスミンまたは活
性型ヒトセルロプラスミンの検出は、常法であるサンド
イッチエライザに基づいて行うことができる。すなわ
ち、例えば、ウェルに一次抗体を固相化し、次いで、検
体と一次抗体を反応させ、洗浄後、二次抗体を反応さ
せ、洗浄後、該二次抗体を測定することにより行うこと
ができる。具体的には、一次抗体としては、ヒトセルロ
プラスミンに反応する抗体を用いることができ、二次抗
体としては上記した活性型ヒトセルロプラスミンモノク
ローナル抗体又はヒトセルロプラスミンモノクローナル
抗体を用いることができる。なお、一次抗体と二次抗体
とはこの逆であってもよい。二次抗体の測定は、二次抗
体の由来動物の免疫グロブリンに対する標識抗体（例え
ば酵素標識抗体）を反応させ、その標識物を測定するこ
とにより行うことができる。あるいは、二次抗体として
標識したものを用い、この標識物を測定することによっ
ても行うことができる。
は、ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒトセルロプラ
スミンと特異的に反応する抗体とヒトセルロプラスミン
または活性型ヒトセルロプラスミンとの特異的反応を利
用した免疫測定により行うことができる。免疫測定の方
法は周知であり、ポリクローナル抗体とモノクローナル
抗体のサンドイッチ法、モノクローナル抗体とモノクロ
ーナル抗体のサンドイッチ法、金コロイドによる染色
法、凝集法、ラテックス法、化学発光法等、現在用いら
れている抗体による検出法のいずれをも用いることがで
きる。例えば、検体中のヒトセルロプラスミンまたは活
性型ヒトセルロプラスミンの検出は、常法であるサンド
イッチエライザに基づいて行うことができる。すなわ
ち、例えば、ウェルに一次抗体を固相化し、次いで、検
体と一次抗体を反応させ、洗浄後、二次抗体を反応さ
せ、洗浄後、該二次抗体を測定することにより行うこと
ができる。具体的には、一次抗体としては、ヒトセルロ
プラスミンに反応する抗体を用いることができ、二次抗
体としては上記した活性型ヒトセルロプラスミンモノク
ローナル抗体又はヒトセルロプラスミンモノクローナル
抗体を用いることができる。なお、一次抗体と二次抗体
とはこの逆であってもよい。二次抗体の測定は、二次抗
体の由来動物の免疫グロブリンに対する標識抗体（例え
ば酵素標識抗体）を反応させ、その標識物を測定するこ
とにより行うことができる。あるいは、二次抗体として
標識したものを用い、この標識物を測定することによっ
ても行うことができる。
【００１２】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。 実施例１ 一次抗体としてのヒトセルロプラスミンモノクローナル
抗体ＩＤ−１を９６ウェルマイクロプレートに固定し
た。固定は、３μｇ／ｍｌの抗体溶液を各ウェルに１０
０μｌづつ入れ、３０℃、１．５時間インキュベートす
ることにより行った。次いで、ウェルを０．０５％Ｔｗ
ｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した。次い
で、ガゼイン溶液（雪印社製）を４倍希釈し、その希釈
液を各ウェルに３００μｌづつ入れ、３０℃、２時間又
は４℃、一夜インキュベートすることによりブロッキン
グを行った。上記と同様に洗浄を行った後、１５の検体
（測定試料）（肝炎ウィルスキャリアーの血清の１００
０倍希釈及び１００００倍希釈）を１００μｌづつ各ウ
ェルに入れ、３０℃で１．５時間インキュベートした。
また、検量線を作成するために、標準ヒトセルロプラス
ミン溶液（０、１０、２０、３０、４０、５０ｎｇ／ｍ
ｌ）を１００μｌづつ各ウェルに入れ、同様にインキュ
ベートした。上記と同様に洗浄後、二次抗体として、１
０μｇ／ｍｌ濃度のペルオキシダーゼ標識ヒトセルロプ
ラスミンポリクローナル抗体溶液（ヒトセルロプラスミ
ンポリクローナル抗体はケミコン社製）１００μｌづつ
各ウェルに加え、３０℃で１．５時間インキュベートし
た。上記と同様に洗浄後、ＡＢＴＳ（２，２−アジノ−
ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸ジ
アンモニウム塩；住友ベークライト社製）溶液を１００
μｌづつ各ウェルに加え、３０℃で１０分間反応させ
た。反応停止液を１００μｌづつ各ウェルに加え、波長
４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、セルロプラスミン
の量を定量した。測定結果は第１表の通りである。
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。 実施例１ 一次抗体としてのヒトセルロプラスミンモノクローナル
抗体ＩＤ−１を９６ウェルマイクロプレートに固定し
た。固定は、３μｇ／ｍｌの抗体溶液を各ウェルに１０
０μｌづつ入れ、３０℃、１．５時間インキュベートす
ることにより行った。次いで、ウェルを０．０５％Ｔｗ
ｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳで３回洗浄した。次い
で、ガゼイン溶液（雪印社製）を４倍希釈し、その希釈
液を各ウェルに３００μｌづつ入れ、３０℃、２時間又
は４℃、一夜インキュベートすることによりブロッキン
グを行った。上記と同様に洗浄を行った後、１５の検体
（測定試料）（肝炎ウィルスキャリアーの血清の１００
０倍希釈及び１００００倍希釈）を１００μｌづつ各ウ
ェルに入れ、３０℃で１．５時間インキュベートした。
また、検量線を作成するために、標準ヒトセルロプラス
ミン溶液（０、１０、２０、３０、４０、５０ｎｇ／ｍ
ｌ）を１００μｌづつ各ウェルに入れ、同様にインキュ
ベートした。上記と同様に洗浄後、二次抗体として、１
０μｇ／ｍｌ濃度のペルオキシダーゼ標識ヒトセルロプ
ラスミンポリクローナル抗体溶液（ヒトセルロプラスミ
ンポリクローナル抗体はケミコン社製）１００μｌづつ
各ウェルに加え、３０℃で１．５時間インキュベートし
た。上記と同様に洗浄後、ＡＢＴＳ（２，２−アジノ−
ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸ジ
アンモニウム塩；住友ベークライト社製）溶液を１００
μｌづつ各ウェルに加え、３０℃で１０分間反応させ
た。反応停止液を１００μｌづつ各ウェルに加え、波長
４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、セルロプラスミン
の量を定量した。測定結果は第１表の通りである。
【００１３】実施例２ 一次抗体として活性型ヒトセルロプラスミン抗体ＩＤ−
２を用いた以外は、実施例１と全く同様に測定を行い、
活性型セルロプラスミンの量を定量した。測定結果は第
１表の通りである。
２を用いた以外は、実施例１と全く同様に測定を行い、
活性型セルロプラスミンの量を定量した。測定結果は第
１表の通りである。
【００１４】参考例１ ＧＯＴ及びＧＰＴの測定は紫外部測定法（臨床検査法提
要（平成５年８月第３０版 ｐｐ．６５７−６６０）に
より測定した。測定結果は、第１表の通りである。
要（平成５年８月第３０版 ｐｐ．６５７−６６０）に
より測定した。測定結果は、第１表の通りである。
【００１５】第１表の結果に基づき、セルロプラスミン
とＧＯＴの値を測定試料１、２、３について比較してみ
ると、図１の通りである。測定試料１、２、３の結果
は、ＧＯＴは正常域を示しながら、セルロプラスミン濃
度については正常域外の値を示す。この後、これらの試
料の肝炎ウィルスキャリアーの患者が肝硬変等の肝臓疾
患に進行したことを確認した。すなわち、ウィルス肝炎
の進行度をセルロプラスミン濃度の測定により把握でき
た。
とＧＯＴの値を測定試料１、２、３について比較してみ
ると、図１の通りである。測定試料１、２、３の結果
は、ＧＯＴは正常域を示しながら、セルロプラスミン濃
度については正常域外の値を示す。この後、これらの試
料の肝炎ウィルスキャリアーの患者が肝硬変等の肝臓疾
患に進行したことを確認した。すなわち、ウィルス肝炎
の進行度をセルロプラスミン濃度の測定により把握でき
た。
【００１６】
【表１】
【００１７】
【発明の効果】本発明により、肝臓に関する疾患、特に
ウィルス肝炎の進行度を迅速かつ確実に行うことができ
る。
ウィルス肝炎の進行度を迅速かつ確実に行うことができ
る。
【図１】 本発明の実施例１により得られたセルロプラ
スミン量とＧＯＴの比較図。
スミン量とＧＯＴの比較図。
Claims (7)
- 【請求項１】 ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンと特異的に反応する抗体とヒトセルロ
プラスミンまたは活性型ヒトセルロプラスミンとの特異
的反応を利用した免疫測定により被検試料中のヒトセル
ロプラスミンまたは活性型セルロプラスミンを測定する
ことから成る肝臓に関する疾患の進行度を測定する方
法。 - 【請求項２】 抗体がモノクローナル抗体であることを
特徴とする請求項１記載の測定方法 - 【請求項３】 肝臓に関する疾患がウィルス肝炎である
ことを特徴とする請求項１記載の測定方法。 - 【請求項４】 被検試料がヒト体液またはヒト排出液で
あることを特徴とする請求項１ないし請求項３記載の測
定方法。 - 【請求項５】 ヒトセルロプラスミンまたは活性型ヒト
セルロプラスミンと特異的に反応する抗体からなる肝臓
に関する疾患の進行度を測定する測定試薬。 - 【請求項６】 抗体がモノクローナル抗体であることを
特徴とする請求項５記載の測定試薬。 - 【請求項７】 肝臓に関する疾患がウィルス肝炎である
ことを特徴とする請求項５の測定試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6042096A JPH09251021A (ja) | 1996-03-18 | 1996-03-18 | 肝臓に関する疾患の進行度の測定方法及び測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6042096A JPH09251021A (ja) | 1996-03-18 | 1996-03-18 | 肝臓に関する疾患の進行度の測定方法及び測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09251021A true JPH09251021A (ja) | 1997-09-22 |
Family
ID=13141705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6042096A Pending JPH09251021A (ja) | 1996-03-18 | 1996-03-18 | 肝臓に関する疾患の進行度の測定方法及び測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09251021A (ja) |
-
1996
- 1996-03-18 JP JP6042096A patent/JPH09251021A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
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|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20041019 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |