JPH09249647A - Ｉｔ−１４３物質、及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】優れた抗菌活性、抗真菌活性及び抗腫瘍活性を
有する化合物、該化合物を有効成分とする抗菌剤、抗真
菌剤及び抗腫瘍剤を提供することを目的とする。 【手段】一般式（１）： 【化１】 （式中、Ｒはメチル基または水素原子を示す。）で表さ
れるＩＴ−１４３物質またはその塩、該物質または薬学
上許容される塩を有効成分とする抗菌剤・抗真菌剤・抗
腫瘍剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なＩＴ−１４３
物質及びそれらの塩に関する。当該物質はともに優れた
抗菌活性、抗真菌活性及び抗腫瘍活性を有しており、抗
菌剤、抗真菌剤及び抗腫瘍剤として有用である。

【０００２】また本発明は、ＩＴ−１４３物質またはそ
れらの薬学上許容される塩を有効成分とする抗菌剤、抗
真菌剤及び抗腫瘍剤に関する。

【０００３】

【従来の技術】ピエリシジンＡ₁−Ａ₄、ピエリシジンＢ
₁−Ｂ₄、ピエリシジンＣ₁−Ｃ₄、ピエリシジンＤ₁−Ｄ₄
〔アグリカルチュラル アンド バイオロジカル ケミ
ストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）４１，８４９−
８５３，１９７７、アグリカルチュラル アンド バイ
オロジカル ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏ１ｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ）４１，８５５−８６２，１９７７）〕など、放線菌
によって生産されるピエリシジン化合物は数多く知られ
ているが、これらはいずれも、その構造上の類似性か
ら、ミトコンドリアの電子伝達系の複合体１を阻害して
殺虫活性を示すものである。

【０００４】最近ではこれらピエリシジン骨格にグルコ
ースやラムノースといった糖の結合した化合物も数多く
見いだされ、抗菌活性や抗腫瘍活性などの報告が相次い
でいる〔ザ ジャーナル オブ アンチバイオティクス
（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ）４０，１４９−１５６，１９８７、ザ ジャーナル
オブ アンチバイオティクス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ４３，１３４１−
１３４３，１９９０）〕。

【０００５】加えて近年の目覚ましい癌遺伝子研究の成
果から、癌遣伝子産物が正常な細胞内情報伝達系の制御
機構を狂わせ、情報伝達の異常亢進を引き起こしている
と考えられるようになった。特にこの情報伝達の一段階
であるイノシトールリン脂質代謝回転（ＰＩ‐ｔｕｒｎ
ｏｖｅｒ）は細胞増殖因子やホルモンによって促進され
るため、これを阻害することで情報の過剰な伝達が抑制
され、抗腫瘍作用が期待される。実際、ピエリシジンＢ
₁のＮ−オキサイド〔ザ ジャーナル オブアンチバイ
オティクス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ）４４，１２８３−１２８５，１９９
１）〕にはこのイノシトールリン脂質代謝回転の阻害活
性があり、こういった意味からピエリシジン系統の化合
物には新たな抗腫瘍剤としての期待が高まっている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、優れ
た抗菌活性、抗真菌活性及び抗腫瘍活性を有し、医薬品
として有用な新規物質、ＩＴ−１４３物質を提供するこ
とにある。

【０００７】また本発明は、ＩＴ−１４３物質またはそ
れらの薬学上許容される塩を有効成分とする抗菌剤、抗
真菌剤及び抗腫瘍剤を提供することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、医薬品と
して有用な新規物質を放線菌の代謝物中に求めて研究を
重ねていたところ、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ）属に属するある菌株が、優れた抗菌活性、
抗真菌活性及び抗腫瘍活性を併せ持つ新規物質ＩＴ−１
４３を産生することを見出して、本発明を完成するに至
った。

【０００９】即ち本発明は、下記一般式（１）：

【００１０】

【化２】

【００１１】（式中、Ｒは水素原子またはメチル基を示
す。）で表されるＩＴ−１４３物質またはその塩に関す
る。本発明において、特に言及する場合を除いて、ＩＴ
−１４３物質という場合には、式（１）中Ｒがメチル基
である物質（以下、ＩＴ−１４３−Ａ物質と称する。）
またはＲが水素原子である物質（以下、ＩＴ−１４３−
Ｂ物質と称する。）のいずれか少なくとも一方を意味す
るものとする。

【００１２】本発明の上記物質（１）は、従来公知のピ
エリシジン化合物に比べて、ピリジン環上の２位の側鎖
の末端に新たな共役二重結合を有し、側鎖をより延長し
た新規な構造を持ち、かつ優れた抗菌作用、抗真菌作用
及び抗腫瘍作用を有する。

【００１３】また本発明は、式（１）で示されるＩＴ−
１４３物質またはそれらの薬学上許容される塩を有効成
分とする抗菌剤、抗真菌剤及び抗腫瘍剤に関する。

【００１４】

【発明の実施の形態】一般式（１）で示される本発明の
ＩＴ−１４３物質は次のような理化学的性質を有する。

【００１５】（１）式（１）中、Ｒがメチル基の場合
（ＩＴ−１４３−Ａ物質） １）性状：淡黄色油状物質 ２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₃ＮＯ₄ ３）分子量：４６９ ４）比旋光度：メタノール中、ｃ＝０．１８の濃度で測
定。 ［α］_D ²⁵＝−１３．９゜ ５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中１４．４μｇ
／ｍｌの濃度で測定のスペクトルを図１に示す。 λｍａｘ(ｎｍ)(ε)：２０４(４５，６００)、２３５
(３４，３００) ６）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法で測定のスペ
クトルを図２に示す。 νｍａｘ(ｃｍ^-1)：３４０１、２９２７、１５８８、１
４７３、１４１３、１３８５、１３５９、１２５０、１
１９１、１１２７、１０４８ ７）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ＦＡＢマススペ
クトルを図３、図４に示す。 ８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：図５に
示す。 ９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：図６に
示す（重クロロホルム中でＴＭＳを基準物質として測
定。）。 10）溶解性：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
酸エチル、ジメチルスルホキシドに可溶。水に不溶。 11）薄層クロマトグラフィー上でのＲｆ値：シリカゲル
プレート６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５７１５（メルク社製）を
用い、展開溶媒としてクロロホルム／アセトン（２０：
１）の場合、Ｒｆ値は０．６７。ベンゼン／酢酸エチル
（１０：１）の場合、Ｒｆ値は０．３９。 12）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）における
保持時間（Ｒｔ）：逆相系シリカゲルカラム（Ｉｎｅｒ
ｔｓｉｌ ＯＤＳ−２，１５０×４．６ｍｍ，Ｉ．
Ｄ．，ＧＬサイエンス社製）を用い、移動相アセトニト
リル／水（７０：３０）、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検
出２１０ｎｍで分析したところ、Ｒｔ３８．０分にピー
クとして検出される。

【００１６】（２）式（１）中、Ｒが水素原子の場合
（ＩＴ−１４３−Ｂ物質） １）性状：淡黄色油状物質 ２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₄₁ＮＯ₄ ３）分子量：４５５ ４）比旋光度：メタノール中、ｃ＝０．１１の濃度で測
定。 ［α］_D ²⁵＝−２６．３゜ ５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中１１．４μｇ
／ｍｌの濃度で測定のスペクトルを図７に示す。 λｍａｘ(ｎｍ)(ε)：２０４(４７，６００)、２３９
(４８，１００) ６）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法で測定のスペ
クトルを図８に示す。 νｍａｘ(ｃｍ^-1)：３４０１、２９３２、１５８８、１
４７４、１４１３、１３８６、１１９２、１１２７、１
０４８ ７）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：図９、図１０に
示す。 ８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：図１１
に示す。 ９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：図１２
に示す（重クロロホルム中でＴＭＳを基準物質として測
定。）。 10）溶解性：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
酸エチル、ジメチルスルホキシドに可溶。水に不溶。 11）薄層クロマトグラフィー上でのＲｆ値：シリカゲル
プレート６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５７１５（メルク社製）を
用い、展開溶媒としてクロロホルム／アセトン（２０：
１）の場合、Ｒｆ値は０．６３。ベンゼン／酢酸エチル
（１０：１）の場合、Ｒｆ値は０．３７。 12）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）における
保持時間（Ｒｔ）：逆相系シリカゲルカラム（Ｉｎｅｒ
ｔｓｉｌ ＯＤＳ−２，１５０×４．６ｍｍ，Ｉ．
Ｄ．，ＧＬサイエンス社製）を用い、移動相アセトニト
リル／水（７０：３０）、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検
出２１０ｎｍで分析したところ、Ｒｔ２６．９分にピー
クとして検出される。

【００１７】本発明でいう塩としては、ＩＴ−１４３物
質の酸付加塩が例示される。酸付加塩を形成し得る酸と
しては、例えば塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸などの
無機酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、
リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、マロン酸などの有機酸が
例示される。

【００１８】本発明のＩＴ−１４３物質の製造方法は特
に制限されず、一般式（１）に示される構造に基づいて
化学的手法など常法により製造することができる。好ま
しくは、ＩＴ−１４３物質を生産する能力を有する菌
株、より好ましくはＩＴ−１４３−Ａ物質の生産菌また
はＩＴ−１４３−Ｂ物質の生産菌を適当な条件下で培養
することによって製造する方法である。

【００１９】ＩＴ−１４３物質を生産する能力を有する
菌株としては、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）属に属する菌株が挙げられる。

【００２０】本発明は、ストレプトミセス属に属するこ
れらの菌を培養し、培養物を回収することによって得る
ことができるＩＴ−１４３物質をも包含するものであ
る。

【００２１】このストレプトミセス属に属する菌の一例
としては、ストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１４３
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＩＴ−１４３）株
が例示できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和
国四川省合江（Hejiang Sichuan Province）の土壌から
新たに分離したストレプトミセス属に属する菌株であ
り、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に微
生物の表示「Ｓｔｒａｉｎ ｌＴ−１４３」、受託番号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４９５７）として寄託されている。

【００２２】また、本発明はかかるＩＴ−１４３物質を
産生する能力を有するストレプトミセス属に属する菌に
関するものである。

【００２３】かかるＩＴ−１４３株について、インター
ナショナル ジャーナル オブ システィマティック
バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ），１６（３），３１３−３４０（１９
６０）に記載の方法に準じて検討した菌学的性質は次の
通りである。

【００２４】・ストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１
４３株の菌学的性質 （ａ）形態： １）胞子形成菌糸の分枝法；単軸分枝 ２）胞子形成の形態；直状（ｓｔｒａｉｇｈｔ）又は屈
曲状（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｓ）、胞子の形は円筒状 ３）胞子の数；１０胞子以下 ４）胞子の表面構造；平滑（ｓｍｏｏｔｈ） ５）胞子の大きさ；０．４〜０．５×０．５〜０．６μ
ｍ ６）鞭毛胞子の有無；無 ７）胞子のうの有無；無 ８）胞子柄の着生位置；気菌糸 ９）菌核形成性の有無；無。

【００２５】（ｂ）各種培地における生育状態：各種培
地における生育状態を表１及び表２に示す。

【００２６】

【表１】

【００２７】

【表２】

【００２８】分類色名は財団法人日本色彩研究所監修
「標準色彩図表Ａ，１９８１年」で示した。なお、詳細
な色はコンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリ
カ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ａｍｅｒｉｃａ）の「ザ・カラー・ハーモニー・マ
ニュアル（Ｔｈｅ Ｃｏｌｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａ
ｎｕａｌ），第４版，１９８５年」の色コードで（）内
につけ加えた。

【００２９】（ｃ）生理的性質： １）生育温度範囲；２０〜３７℃の温度範囲で良好に生
育する。 ２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃）；陽性 ３）ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地、２０℃）；陰
性 ４）ミルクの凝固（３７℃）；陰性 ５）ミルクのペプトン化（３７℃）；陰性 ６）メラニン様色素の生成；チロシン寒天（ＩＳＰ−
７）培地上、ペプトン・酵母工キス・鉄寒天（ＩＳＰ一
６）培地上、トリプトン・酵母エキス（ＩＳＰ一１）液
体培地中すべての培地で陽性 ７）硫化水素の産生〔ペプトン・酵母エキス・鉄寒天
（ＩＳＰ−６）に０．５％酵母エキスを添加した培
地〕；陽性 ８）澱粉の加水分解（スターチ・無機塩寒天、ＩＳＰ−
４培地）；陽性 ９）硝酸塩の還元（１％硝酸カリウム含有ブイヨン、Ｉ
ＳＰ一８培地）；陰性 10）セルロースの分解；陰性。

【００３０】（ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴ
トリーブ寒天、ＩＳＰ−９培地）：Ｄ−グルコース、イ
ノシトール、Ｄ−ガラクトース、溶性澱粉、デキストリ
ン、グリセロール及びマルトースを利用してよく発育す
る。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュクロー
ス、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノ
ース、ラフィノース及びサリシンは利用できない。

【００３１】（ｅ）菌体組成：日本放線菌学会編「放線
菌の同定実験法，６２−７０頁，１９８５年」に記載の
薄層クロマトグラフィー法により全菌体中の酸加水分解
物を分析した結果、ＬＬ−型のジアミノピメリン酸が検
出された。

【００３２】以上の菌学的性質、特に基生菌糸より多数
の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、細胞壁組成のア
ミノ酸がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、鞭毛胞子や
胞子のう等を形成しない性質を有することから、本菌株
はストレプトミセス属に属することが明らかである。よ
って本菌株をストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１４
３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＩＴ−１４３）
と称することとした。

【００３３】本発明のＩＴ−１４３物質は、例えば上記
ストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１４３株又はその
変異株等のストレプトミセス属に属する各種のＩＴ−１
４３物質を生産し得る菌を適当な培地で培養し、次に培
養物から本発明物質を含む粗抽出物を得、そこからＩＴ
−１４３物質を単離、精製することにより製造すること
ができる。

【００３４】本発明は、このようなＩＴ−１４３物質の
製造方法に関するものでもある。上記微生物の培養は通
常一般の微生物の培養に準じて行われるが、好ましくは
液体培養による振盪培養法、通気撹拌培養法等の好気的
条件下で行なわれる。

【００３５】培養に用いられる培地としては、ＩＴ−１
４３物質を生産し得る菌が利用できる栄養源を含有する
培地であればよく、各種の合成培地、天然培地等のいず
れをも用いることができる。培地の炭素源としてはグル
コース、シュクロース、フラクトース、グリセリン、デ
キストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティープ・リカ
ー、有機酸等を単独又は二種以上組み合わせたものが；
窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素な
どの有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等
の無機窒素源を単独又は二種以上組み合わせたものが用
いられる。また、培地にはナトリウム塩、カリウム塩、
マグネシウム塩、リン酸塩、その他重金属塩等を必要に
応じて適宜添加してもよい。

【００３６】なお、培地の発泡の著しい時は、例えば大
豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラ
デカノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、
各種シリコン化合物などの消泡剤を適宜培地中に添加す
ることもできる。

【００３７】培地のｐＨは中性付近とするのが好まし
い。

【００３８】培養温度はＩＴ−１４３物質を生産し得る
菌が良好に生育する温度、通常２０〜３７℃、好ましく
は２５〜３０℃付近に保つのがよい。培養時間は、液体
振盪培養及び通気撹拌培養のいずれの場合も５日間程度
が好ましい。

【００３９】上述した各種の培養条件は、使用微生物の
種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、またそ
れぞれに応じて上記範囲から最適条件を適宜選択、調節
することができる。

【００４０】培養物からのＩＴ−１４３物質を含む粗抽
出物の分離は、発酵生産物を採取する一般的な方法に準
じて行うことができ、例えば溶媒抽出、液体交換、クロ
マトグラフィー、結晶化等の通常の手段を単独又は二種
以上を任意の順序に組み合わせて用いることができる。

【００４１】より詳しくは、以下の方法を用いることが
できる。すなわち、上記培養により生産されるＩＴ−１
４３物質は主として培養菌体中に存在するので、常法に
従い、まず濾過、遠心分離等を行って、培養濾液と菌体
固形分とを分離し、得られたＩＴ−１４３物質を含む菌
体固形分についてメタノール、アセトン等の溶媒を用い
てＩＴ−１４３物質の溶出を行う。次いで、減圧下に溶
媒を留去すればＩＴ−１４３物質を含む粗濃縮液を得る
ことができる。この粗濃縮液に酢酸エチル、クロロホル
ム、ブタノール等の水と混合しない有機溶媒を加えてＩ
Ｔ−１４３物質を有機溶媒層に転溶させ、得られた溶媒
層に芒硝を加えて脱水した後、溶媒を減圧下で留去すれ
ばＩＴ−１４３物質を含む粗抽出物を得ることができ
る。更に培養濾液についても同様の操作をすれば粗抽出
物を得ることができる。また、必要に応じて水酸化ナト
リウム又は塩酸にてｐＨを調節したり、工業用食塩を加
えることにより、抽出効率を高くしたり、エマルジョン
生成防止などの方法を講じることができる。

【００４２】更に、粗抽出物からＩＴ−１４３物質を単
離、精製するためには、通常の脂溶性低分子物質の単
離、精製手段、例えば活性炭、シリカゲル、アルミナ、
マクロポーラス非イオン系吸着樹脂等の吸着剤による種
々の吸着クロマトグラフィーまたはＯＤＳ−結合型シリ
カゲル等を用いる逆相クロマトグラフィー等が使用でき
る。これらのうち、溶出溶媒にクロロホルム、酢酸エチ
ル、クロロホルム／メタノール、クロロホルム／アセト
ン、酢酸エチル／ベンゼン等の混合溶媒系を用いるシリ
カゲルクロマトグラフィー、及びアセトニトリル／水、
メタノール／水等の混合溶媒系を溶出に用いる逆相クロ
マトグラフィーが特に好ましい。また、更に精製を必要
とする場合には、上記クロマトグラフィーを繰り返し行
うか又は溶出溶媒としてクロロホルム、メタノール等を
用いたセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）
によるゲル濾過クロマトグラフィー等を適宜組み合わせ
て行うことにより、高純度のＩＴ−１４３物質を得るこ
とができる。

【００４３】なお、精製工程中、ＩＴ−１４３物質の存
在確認はシリカゲル，セルロース等の薄相クロマトグラ
フィーを用い、各種展開溶媒で展開させた後、紫外吸収
（２５４ｎｍ）による蛍光発色によって検出する方法と
逆相系シリカゲル等の充填カラムを用いた高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて検出する方法とを
併用して行うのが好ましい。

【００４４】又、ヒト鼻咽喉癌由来の株化培養ＫＢ細胞
を３日間薬剤（ＩＴ−１４３物質を含有し得る組成物）
と接触させたときの殺細胞効果を調べることによって
も、ＩＴ−１４３物質の存在を確認することができる。

【００４５】本発明のＩＴ−１４３物質またはそれらの
薬学上許容される塩は、それ単独でもしくは薬学的に許
容される種々の添加剤とともに、抗菌剤、抗真菌剤また
は抗腫瘍剤として用いることができる。

【００４６】ＩＴ−１４３物質には、異性体として鏡像
異性体（エナンチオマー）が存在し、本発明の抗菌剤、
抗真菌剤または抗腫瘍剤には、その異性体のいずれか一
種、もしくはそれらが混合して含まれていてもよい。

【００４７】本発明でいう薬学的に許容される塩として
は、例えば塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸
の塩、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リ
ンゴ酸、酒石酸、クエン酸、マロン酸等の有機酸の塩な
どが挙げられる。

【００４８】本発明の抗菌剤、抗真菌剤または抗腫瘍剤
の組成は特に制限されることなく、目的に応じて調製す
ることができる。その形態も特に制限されるものではな
く、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、乳剤
等の経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等の外用
剤、点眼剤などの種々の形態が例示される。

【００４９】注射剤として調製する場合、添加剤を適当
量配合してもよく、添加剤としてはｐＨ調整剤、緩衝
剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などが例示され
る。該製剤は、静脈内、筋肉内、皮下または腹腔内に投
与される。また、経口剤として調製する場合の添加剤と
しては、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、矯臭剤、矯
味剤などが挙げられ、坐剤として調製する場合の添加剤
としては、基剤、界面活性剤などが、また軟膏剤として
調製する場合の添加剤としては、ワセリン、流動パラフ
ィン等の基剤、安定化剤、湿潤剤、保存剤などが挙げら
れる。貼付剤を製造する場合は、通常の支持体に上記軟
膏等を常法により塗布すればよい。支持体としては、
綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布や軟質塩化ビ
ニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるい
は発泡体シートが適当である。

【００５０】上記添加剤としては、各々の製剤を調製す
る際に通常使用される添加剤のすべてが挙げられ、これ
らの適当な量が用いられる。

【００５１】上記の各種製剤中に配合される有効成分で
あるＩＴ−１４３物質またはこれらの薬理学上許容され
る塩の量は、適応症、投与される患者の症状、年齢、性
別、体重、投与形態などに応じて適宜選択することがで
き、通常１日０．００５〜２０ｍｇを１回または２〜４
回程度に分けて投与することができる。

【００５２】

【実施例】以下に実施例を挙げて更に具体的に本発明を
説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定され
るものではない。

【００５３】

【実施例１】 ＩＴ−１４３−Ａ物質またはＩＴ−１４３−Ｂ物質の取
得方法（１） （ａ）培養工程 グルコース０．５％、可溶性澱粉２．４％、牛肉エキス
０．３％、酵母エキス０．５％、ペプトン０．５％、コ
ーン・スティープ・リカー０．４％、塩化コバルト０．
００２％、炭酸カルシウム０．４％よりなる培地（ｐＨ
７．２）１００ｍｌを５００ｍｌ容の三角フラスコに分
注し、滅菌（１２１℃，１５分間）後、ストレプトミセ
ス エスピー．ＩＴ−１４３株（受託番号ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−４９５７）を一白金耳接種し、２７℃で３日間振盪
培養した（毎分２２０回転、振幅７ｃｍ）。次にグルコ
ース１．０％、酵母エキス０．４％、麦芽エキス１．０
％、ファーマメディア１．０％よりなる培地（ｐＨ７．
３）を５００ｍｌ容の三角フラスコに１００ｍｌずつ分
注し、滅菌（１２１℃，１５分間）後、上記の種菌を５
％（ｖ／ｖ）の割合で加え、２７℃で５日間回転振盪培
養した（２２０回転、振幅７ｃｍ）。

【００５４】（ｂ）分離工程 培養終了後、直ちに培養液を遠心（２８００回転，５
℃，１０分間）分離後、濾液部分と菌体部分に分離し
た。得られた培養濾液（８．７リットル，ｐＨ８．４）
を希塩酸でｐＨ８．０に調整し、酢酸エチル（１６．５
リットル）で２回撹拌抽出した。また菌体部分はアセト
ン（２リットル）で２回撹拌抽出し、濃過（２８００回
転，５℃，１０分間）後、このアセトン抽出液を減圧濃
縮してアセトンを留去し、酢酸エチル（９リットル）で
３回撹拌抽出した。更にこの２つの酢酸エチル抽出液を
合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮して、
黄褐色油状の粗抽出物（４．３ｇ）を得た。

【００５５】（ｃ）単離、精製工程 上記粗抽出物をクロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、シリ
カゲル（メルク社製「キーゼルゲル」、２６．０×６．
２ｃｍ，ｉ．ｄ．）カラムに吸着させ、溶出溶媒クロロ
ホルム／アセトン（１００：０−２：１）を用いた段階
溶出法にて溶出した。溶出画分の薄相クロマトグラフィ
ー法での検出並びにＫＢ細胞に対する殺細胞効果を調べ
ることにより、ＩＴ−１４３−Ａ物質及びＩＴ−１４３
−Ｂ物質を含む活性画分を確認した。この活性画分を集
め、溶媒を留去後乾固して、淡黄色油状物質（１３５９
ｍｇ）を得た。

【００５６】得られた油状物質をメタノール（１０ｍ
ｌ）に溶解し、その一部をＯＤＳ結合型シリカゲルカラ
ム（山善社製「ＹＭＣ−ＯＤＳ」、５０．０×１．５ｃ
ｍ，ｉ．ｄ）に吸着させ、加圧下、溶出溶媒アセトニト
リル／水（７０：３０）及びアセトニトリル／水（８
０：２０）の組成を用いる段階溶出を行った。溶出画分
を前述したＨＰＬＣ法並びにＫＢ細胞に対する殺細胞効
果で検出した結果、ＩＴ−１４３−Ａ物質はアセトニト
リル／水（８０：２０）で溶出され、ＩＴ−１４３−Ｂ
物質はアセトニトリル／水（７０：３０）で溶出され
た。

【００５７】各物質の溶出画分をそれぞれ集め、有機溶
媒を減圧下留去した後、水溶液を凍結乾燥し、淡黄色油
状のＩＴ−１４３−Ａ物質（４．０ｍｇ）、及び淡黄色
油状のＩＴ−１４３−Ｂ物質（２．４ｍｇ）を得た。

【００５８】

【実施例２】 ＩＴ−１４３−Ａ物質またはＩＴ−１４３−Ｂ物質の取
得方法（２） （ａ）培養工程 グリセロール２．０％、デキストリン２．０％、酵母エ
キス０．３％、ソイトン１．０％、硫酸アンモニウム
０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地（ｐＨ
７．０）を５００ｍｌ容の三角フラスコに１００ｍｌず
つ分注し、滅菌（１２１℃，１５分聞）後、実施例１に
示したと同様の方法で得られた種菌を１．５％（ｖ／
ｖ）の割合で加え、２７℃で５日間回転振盪培養した
（２２０回転、振幅７ｃｍ）。

【００５９】（ｂ）分離工程 培養終了後、直ちに培養液を遠心分離（２８００回転，
５℃，１０分間）し、濾液部分と菌体部分に分離した。
得られた菌体をアセトン（１２リットル）で３回撹拌抽
出し、このアセトン抽出液を減圧濃縮してアセトンを留
去した後、酢酸エチル（６リットル）で３回撹拌抽出し
た。この酢酸エチル抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、減圧濃縮して、黄褐色油状の粗抽出物（１１．２
ｇ）を得た。

【００６０】（ｃ）単離、精製工程：上記粗抽出物をク
ロロホルム（１５ｍｌ）に溶解し、シリカゲル（メルク
社製「キーゼルゲル」、４７．０×７．５ｃｍ，ｉ．
ｄ．）カラムに吸着させ、クロロホルムで溶出した。溶
出画分の薄相クロマトグラフィー法での検出並びにＫＢ
細胞に対する殺細胞効果を調べることにより、ＩＴ−１
４３−Ａ物質及びＩＴ−１４３−Ｂ物質を含む活性画分
を確認した。この活性画分を集め、溶媒を留去後乾固し
て、淡黄色油状物質（７．７ｇ）を得た。

【００６１】得られた油状物質をメタノール（１５ｍ
ｌ）に溶解し、その一部をＯＤＳ結合型シリカゲル（山
善社製「ＹＭＣ−ＯＤＳ」、３３．０×５．０ｃｍ，
ｉ．ｄ）カラムに吸着させ、常圧にて、溶出溶媒アセト
ニトリル／水（７５：２５）、（８０：２０）及び（９
０：１０）の組成比からなる段階溶出を行った。溶出画
分を前述したＨＰＬＣ法並びにＫＢ細胞に対する殺細胞
効果で検出した結果、ＩＴ−１４３−Ａ物質はアセトニ
トリル／水（９０：１０）て溶出され、ＩＴ−１４３−
Ｂ物質はアセトニトリル／水（８０：２０）で溶出され
た。各物質を含むそれぞれの溶出画分を集め有機溶媒を
減圧下留去し、水溶液を酢酸エチル（１５０ｍｌ）でそ
れぞれ３回抽出した。

【００６２】この結果ＩＴ−１４３−Ａ物質（３５．９
ｍｇ）、ＩＴ−１４３−Ｂ物質（３７．３ｍｇ）を得
た。

【００６３】

【試験例】本発明のＩＴ−１４３−Ａ物質、ＩＴ−１４
３−Ｂ物質の抗菌・抗真菌活性及び抗腫瘍活性は次の通
りである。

【００６４】

【薬理試験例１】 −抗菌・抗真菌活性− 本発明物質の各種細菌・真菌類に対する最小発育阻止濃
度（ＭＩＣ）を系列寒天平板希釈法により測定した。

【００６５】すなわち、細菌類（Micrococcus luteus A
TCC 10240、細胞数１０⁶個／ｍｌ）に対してはミュラー
・ヒントン（Ｍａｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ）寒天培地
（Ｄｉｆｃｏ社製）で、３７℃、１８時聞培養後の最小
発育阻止濃度（ＭＩＣ，μｇ／ｍｌ）をもって表示し
た。また真菌類（Aspergillus fumigatus Hl1-20, BSL4
1, BCL70，Ttichophyton rubrum IFO 5807：細胞数１０
⁶個／ｍｌ）については、サブロー（Ｓａｂｏｕｒａｕ
ｄ）寒天培地（日水製薬社製）で、３０℃、４２時聞培
養後の最小発育阻止濃度をもって表示した。

【００６６】ＩＴ−１４３−Ａ物質の結果を表３に示
す。

【００６７】

【表３】

【００６８】また、ＩＴ−１４３−Ｂ物質については、
Micrococcus luteus ATCC 10240 における最小発育阻止
濃度が６．２５μｇ／ｍｌであった。

【００６９】

【薬理試験例２】 −抗腫瘍活性− 本発明のＩＴ−１４３−Ａ物質、ＩＴ−１４３−Ｂ物質
のヒト鼻咽喉癌由来の株化培養細胞（ＫＢ細胞）に対す
る５０％増殖抑制濃度（ＩＣ₅₀）を測定した。すなわ
ち、ヒト鼻咽喉癌由来ＫＢ細胞（２×１０³細胞／ｗｅ
ｌｌ）を１０％仔牛血清を添加したイーグルズ ミニマ
ル エッセンシャル メディウム（Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍ
ｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ，Ｉ
ＣＮ ＦＬＯＷ社製）を用い、炭酸ガスインキュべ一タ
ー（５％ＣＯ₂）中３７℃で一晩培養した。本発明化合
物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解後、１０
ｎｇ／ｍｌから１×１０^-3ｎｇ／ｍｌまでの濃度になる
ように添加し、３日間培養後、クリスタルバイオレット
で染色し、無処理群との比較によりＩＣ₅₀値を求めた。

【００７０】その結果、ＩＴ−１４３−Ａ物質及びＩＴ
−１４３−Ｂ物質のＩＣ₅₀値はそれぞれ０．３６ｎｇ／
ｍｌ及び１．１ｎｇ／ｍｌであった。

【００７１】

【発明の効果】本発明のＩＴ−１４３物質（ＩＴ−１４
３−Ａ物質、ＩＴ−１４３−Ｂ物質）はともに優れた抗
菌活性、抗真菌活性及び抗腫瘍活性を有する新規化合物
であり、抗菌剤及び抗腫瘍剤といった医薬品として有用
である。また、当該物質は抗腫瘍活性を持つことから抗
ウイルス活性をも有すると考えられ、抗ウイルス剤とし
ても有用である。また、本発明は、有用な抗菌剤、抗真
菌剤及び抗腫瘍剤を提供する。本発明で用いるストレプ
トミセス属に属する菌は、かかる医学上有用な化合物を
産生する能力を有する有用な菌株である。

【００７２】なお、本発明には以下の実施態様も含まれ
る。 （１）ＩＴ−１４３物質を生産し得るストレプトミセス
属に属する菌 （２）ストレプトミセス属に属するＩＴ−１４３物質の
生産菌 （３）ストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１４３（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＩＴ−１４３）株である
ＩＴ−１４３物質の生産菌 （４）上記（１）〜（３）のいずれかに記載の菌を培養
し、培養物からＩＴ−１４３物質を採取することを特徴
とするＩＴ−１４３物質の製造方法。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＩＴ−１４３−Ａ物質の紫外線吸収スペクトル
（メタノール中１４．４μｇ／ｍｌ濃度での測定）を示
す。

【図２】ＩＴ−１４３−Ａ物質の赤外線吸収スペクトル
（ＫＢｒ錠剤法使用）を示す。

【図３】ＩＴ−１４３−Ａ物質のＦＡＢ−ＭＳスペクト
ル（ポジティブ［Ｍ＋Ｈ］⁺）を示す（Solvent：MeOH、
Matrix：m-NBA）。

【図４】ＩＴ−１４３−Ａ物質のＦＡＢ−ＭＳスペクト
ル（ネガティブ［Ｍ−Ｈ］^-）を示す（Solvent：MeOH、
Matrix：m-NBA）。

【図５】ＩＴ−１４３−Ａ物質の¹Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル（４００ＭＨｚ）を示す。

【図６】ＩＴ−１４３−Ａ物質の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクト
ル（１００ＭＨｚ）を示す。

【図７】ＩＴ−１４３−Ｂ物質の紫外線吸収スペクトル
（メタノール中１１．４μｇ／ｍｌ濃度での測定）を示
す。

【図８】ＩＴ−１４３−Ｂ物質の赤外線吸収スペクトル
（ＫＢｒ錠剤法使用）を示す。

【図９】ＩＴ−１４３−Ｂ物質のＦＡＢ−ＭＳスペクト
ル（ポジティブ［Ｍ＋Ｈ］⁺）を示す（Solvent：MeOH、
Matrix：m-NBA）。

【図１０】ＩＴ−１４３−Ｂ物質のＦＡＢ−ＭＳスペク
トル（ネガティブ［Ｍ−Ｈ］^-）を示す（Solvent：MeO
H、Matrix：m-NBA）。

【図１１】ＩＴ−１４３−Ｂ物質の¹Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（４００ＭＨｚ）を示す。

【図１２】ＩＴ−１４３−Ｂ物質の¹³Ｃ−ＮＭＲスペク
トル（１００ＭＨｚ）を示す。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成９年３月１３日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１１】（式中、Ｒは水素原子またはメチル基を示
す。）で表されるＩＴ−１４３物質またはそれらの塩に
関する。本発明において、特に言及する場合を除いて、
ＩＴ−１４３物質という場合には、式（１）中Ｒがメチ
ル基である物質（以下、ＩＴ−１４３−Ａ物質と称す
る。）またはＲが水素原子である物質（以下、ＩＴ−１
４３−Ｂ物質と称する。）のいずれか少なくとも一方を
意味するものとする。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１２

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１２】本発明の上記物質（１）は、従来公知のピ
エリシジン化合物に比べて、ピリジン環上の６位の側鎖
の末端に新たな共役二重結合を有し、側鎖をより延長し
た新規な構造を持ち、かつ優れた抗菌作用、抗真菌作用
及び抗腫瘍作用を有する。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１５】（１）式（１）中、Ｒがメチル基の場合
（ＩＴ−１４３−Ａ物質） １）性状：淡黄色油状物質 ２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₃ＮＯ₄ ３）分子量：４６９ ４）比旋光度：メタノール中、ｃ＝０．１８の濃度で測
定。 ［α］_D ²⁵＝−１３．９゜ ５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中１４．４μｇ
／ｍｌの濃度で測定のスペクトルを図１に示す。 λｍａｘ(ｎｍ)(ε)：２０４(４５，６００)、２３５
(３４，３００) ６）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法で測定のスペ
クトルを図２に示す。 νｍａｘ(ｃｍ^-1)：３４０１、２９２７、１５８８、１
４７３、１４１３、１３８５、１３５９、１２５０、１
１９１、１１２７、１０４８ ７）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ＦＡＢマススペ
クトルを図３、図４に示す。 ８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：図５に
示す。 ９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：図６に
示す（重クロロホルム中でＴＭＳを基準物質として測
定。）。 10）溶解性：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
酸エチル、ジメチルスルホキシドに可溶。水に不溶。 11）薄層クロマトグラフィー上でのＲｆ値：シリカゲル
プレート６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５７１５（メルク社製）を
用い、展開溶媒としてクロロホルム／アセトン（２０：
１）の場合、Ｒｆ値は０．６７。ベンゼン／酢酸エチル
（１０：１）の場合、Ｒｆ値は０．３９。 12）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）における
保持時間（Ｒｔ）：逆相系シリカゲルカラム（Ｉｎｅｒ
ｔｓｉｌ ＯＤＳ−２，１５０×４．６ｍｍ，ｉ．
ｄ．，ＧＬサイエンス社製）を用い、移動相アセトニト
リル／水（７０：３０）、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検
出２１０ｎｍで分析したところ、Ｒｔ３８．０分にピー
クとして検出される。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１６】（２）式（１）中、Ｒが水素原子の場合
（ＩＴ−１４３−Ｂ物質） １）性状：淡黄色油状物質 ２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₄₁ＮＯ₄ ３）分子量：４５５ ４）比旋光度：メタノール中、ｃ＝０．１１の濃度で測
定。 ［α］_D ²⁵＝−２６．３゜ ５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中１１．４μｇ
／ｍｌの濃度で測定のスペクトルを図７に示す。 λｍａｘ(ｎｍ)(ε)：２０４(４７，６００)、２３９
(４８，１００) ６）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法で測定のスペ
クトルを図８に示す。 νｍａｘ(ｃｍ^-1)：３４０１、２９３２、１５８８、１
４７４、１４１３、１３８６、１１９２、１１２７、１
０４８ ７）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：図９、図１０に
示す。 ８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：図１１
に示す。 ９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：図１２
に示す（重クロロホルム中でＴＭＳを基準物質として測
定。）。 10）溶解性：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
酸エチル、ジメチルスルホキシドに可溶。水に不溶。 11）薄層クロマトグラフィー上でのＲｆ値：シリカゲル
プレート６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５７１５（メルク社製）を
用い、展開溶媒としてクロロホルム／アセトン（２０：
１）の場合、Ｒｆ値は０．６３。ベンゼン／酢酸エチル
（１０：１）の場合、Ｒｆ値は０．３７。 12）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）における
保持時間（Ｒｔ）：逆相系シリカゲルカラム（Ｉｎｅｒ
ｔｓｉｌ ＯＤＳ−２，１５０×４．６ｍｍ，ｉ．
ｄ．，ＧＬサイエンス社製）を用い、移動相アセトニト
リル／水（７０：３０）、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検
出２１０ｎｍで分析したところ、Ｒｔ２６．９分にピー
クとして検出される。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２１】このストレプトミセス属に属する菌の一例
としては、ストレプトミセス エスピー．ＩＴ−１４３
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＩＴ−１４３）株
が例示できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和
国四川省合江（Hejiang Sichuan Province）の土壌から
新たに分離したストレプトミセス属に属する菌株であ
り、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に微
生物の表示「Ｓｔｒａｉｎ ＩＴ−１４３」、受託番号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４９５７）として寄託されている。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２６】

【表１】

【手続補正７】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２９】（ｃ）生理的性質： １）生育温度範囲；２０〜３７℃の温度範囲で良好に生
育する。 ２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃）；陽性 ３）ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地、２０℃）；陰
性 ４）ミルクの凝固（３７℃）；陰性 ５）ミルクのペプトン化（３７℃）；陰性 ６）メラニン様色素の生成；チロシン寒天（ＩＳＰ−
７）培地上、ペプトン・酵母工キス・鉄寒天（ＩＳＰ−
６）培地上、トリプトン・酵母エキス（ＩＳＰ−１）液
体培地中すべての培地で陽性 ７）硫化水素の産生〔ペプトン・酵母エキス・鉄寒天
（ＩＳＰ−６）に０．５％酵母エキスを添加した培
地〕；陽性 ８）澱粉の加水分解（スターチ・無機塩寒天、ＩＳＰ−
４培地）；陽性 ９）硝酸塩の還元（１％硝酸カリウム含有ブイヨン、Ｉ
ＳＰ−８培地）；陰性 10）セルロースの分解；陰性。

【手続補正８】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３０】（ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴ
トリーブ寒天、ＩＳＰ−９培地）：Ｄ−グルコース、イ
ノシトール、Ｄ−ガラクトース、溶性澱粉、デキストリ
ン、グリセロール及びマルトースを利用してよく発育す
る。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュクロー
ス、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノ
ース、ラフィノース及びサリシンは利用できない。

【手続補正９】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３５】培養に用いられる培地としては、ＩＴ−１
４３物質を生産し得る菌が利用できる栄養源を含有する
培地であればよく、各種の合成培地、天然培地等のいず
れをも用いることができる。培地の炭素源としてはグル
コース、シュクロース、フルクトース、グリセリン、デ
キストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティープ・リカ
ー、有機酸等を単独又は二種以上組み合わせたものが；
窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素な
どの有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等
の無機窒素源を単独又は二種以上組み合わせたものが用
いられる。また、培地にはナトリウム塩、カリウム塩、
マグネシウム塩、リン酸塩、その他重金属塩等を必要に
応じて適宜添加してもよい。

【手続補正１０】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４３】なお、精製工程中、ＩＴ−１４３物質の存
在確認はシリカゲル，セルロース等の薄層クロマトグラ
フィーを用い、各種展開溶媒で展開させた後、紫外吸収
（２５４ｎｍ）による蛍光発色によって検出する方法と
逆相系シリカゲル等の充填カラムを用いた高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて検出する方法とを
併用して行うのが好ましい。

【手続補正１１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５４】（ｂ）分離工程 培養終了後、直ちに培養液を遠心（２８００回転，５
℃，１０分間）分離後、濾液部分と菌体部分に分離し
た。得られた培養濾液（８．７リットル，ｐＨ８．４）
を希塩酸でｐＨ８．０に調整し、酢酸エチル（１６．５
リットル）で２回攪拌抽出した。また菌体部分はアセト
ン（２リットル）で２回攪拌抽出し、５℃下で２８００
回転の遠心処理を１０分間行った後、得られたアセトン
抽出液を減圧濃縮してアセトンを留去し、酢酸エチル
（９リットル）で３回攪拌抽出した。更にこの２つの酢
酸エチル抽出液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水
後、減圧濃縮して、黄褐色油状の粗抽出物（４．３ｇ）
を得た。

【手続補正１２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５５】（ｃ）単離、精製工程 上記粗抽出物をクロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、シリ
カゲル（メルク社製「キーゼルゲル」、２６．０×６．
２ｃｍ，ｉ．ｄ．）カラムに吸着させ、溶出溶媒クロロ
ホルム／アセトン（１００：０−２：１）を用いた段階
溶出法にて溶出した。溶出画分の薄層クロマトグラフィ
ー法での検出並びにＫＢ細胞に対する殺細胞効果を調べ
ることにより、ＩＴ−１４３−Ａ物質及びＩＴ−１４３
−Ｂ物質を含む活性画分を確認した。この活性画分を集
め、溶媒を留去後乾固して、淡黄色油状物質（１３５９
ｍｇ）を得た。

【手続補正１３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５６】得られた油状物質をメタノール（１０ｍ
ｌ）に溶解し、その一部をＯＤＳ結合型シリカゲルカラ
ム（山善社製「ＹＭＣ−ＯＤＳ」、５０．０×１．５ｃ
ｍ，ｉ．ｄ．）に吸着させ、加圧下、溶出溶媒アセトニ
トリル／水（７０：３０）及びアセトニトリル／水（８
０：２０）の組成を用いる段階溶出を行った。溶出画分
を前述したＨＰＬＣ法並びにＫＢ細胞に対する殺細胞効
果で検出した結果、ＩＴ−１４３−Ａ物質はアセトニト
リル／水（８０：２０）で溶出され、ＩＴ−１４３−Ｂ
物質はアセトニトリル／水（７０：３０）で溶出され
た。

【手続補正１４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５８】

【実施例２】 ＩＴ−１４３−Ａ物質またはＩＴ−１４３−Ｂ物質の取
得方法（２） （ａ）培養工程 グリセロール２．０％、デキストリン２．０％、酵母エ
キス０．３％、ソイトン１．０％、硫酸アンモニウム
０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地（ｐＨ
７．０）を５００ｍｌ容の三角フラスコに１００ｍｌず
つ分注し、滅菌（１２１℃，１５分間）後、実施例１に
示したと同様の方法で得られた種菌を１．５％（ｖ／
ｖ）の割合で加え、２７℃で５日間回転振盪培養した
（２２０回転、振幅７ｃｍ）。

【手続補正１５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００６０】（ｃ）単離、精製工程：上記粗抽出物をク
ロロホルム（１５ｍｌ）に溶解し、シリカゲル（メルク
社製「キーゼルゲル」、４７．０×７．５ｃｍ，ｉ．
ｄ．）カラムに吸着させ、クロロホルムで溶出した。溶
出画分の薄層クロマトグラフィー法での検出並びにＫＢ
細胞に対する殺細胞効果を調べることにより、ＩＴ−１
４３−Ａ物質及びＩＴ−１４３−Ｂ物質を含む活性画分
を確認した。この活性画分を集め、溶媒を留去後乾固し
て、淡黄色油状物質（７．７ｇ）を得た。

【手続補正１６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００６１】得られた油状物質をメタノール（１５ｍ
ｌ）に溶解し、その一部をＯＤＳ結合型シリカゲル（山
善社製「ＹＭＣ−ＯＤＳ」、３３．０×５．０ｃｍ，
ｉ．ｄ．）カラムに吸着させ、常圧にて、溶出溶媒アセ
トニトリル／水（７５：２５）、（８０：２０）及び
（９０：１０）の組成比からなる段階溶出を行った。溶
出画分を前述したＨＰＬＣ法並びにＫＢ細胞に対する殺
細胞効果で検出した結果、ＩＴ−１４３−Ａ物質はアセ
トニトリル／水（９０：１０）で溶出され、ＩＴ−１４
３−Ｂ物質はアセトニトリル／水（８０：２０）で溶出
された。各物質を含むそれぞれの溶出画分を集め有機溶
媒を減圧下留去し、水溶液を酢酸エチル（１５０ｍｌ）
でそれぞれ３回抽出した。

【手続補正１７】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００６５】すなわち、細菌類（Micrococcus luteus A
TCC 10240、細胞数１０⁶個／ｍｌ）に対してはミュラー
・ヒントン（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ）寒天培地
（Ｄｉｆｃｏ社製）で、３７℃、１８時間培養後の最小
発育阻止濃度（ＭＩＣ，μｇ／ｍｌ）をもって表示し
た。また真菌類（Aspergillus fumigatus Hl1-20, BSL4
1, BCL70，Trichophyton rubrum IFO 5807：細胞数１０
⁶個／ｍｌ）については、サブロー（Ｓａｂｏｕｒａｕ
ｄ）寒天培地（日水製薬社製）で、３０℃、４２時間培
養後の最小発育阻止濃度をもって表示した。

【手続補正１８】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００６７】

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 ウ レイ 徳島県徳島市川内町加賀須野463−10 (72)発明者 ウ ユン 徳島県徳島市川内町加賀須野463−10

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（１）： 【化１】 （式中、Ｒはメチル基または水素原子を示す。）で表さ
   れるＩＴ−１４３物質またはそれらの塩。
2. 【請求項２】ストレプトミセス属に属する菌を培養し、
   培養物を回収することによって得ることができる請求項
   １記載のＩＴ−１４３物質またはそれらの塩。
3. 【請求項３】ストレプトミセス属に属する菌が、ストレ
   プトミセス エスピー．ＩＴ−１４３（Ｓｔｒｅｐｔｏ
   ｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＩＴ−１４３）株であることを特徴
   とする請求項２記載のＩＴ−１４３物質またはそれらの
   塩。
4. 【請求項４】請求項１乃至３のいずれかに記載のＩＴ−
   １４３物質またはそれらの薬学上許容される塩を有効成
   分とする抗菌剤。
5. 【請求項５】請求項１乃至３のいずれかに記載のＩＴ−
   １４３物質またはそれらの薬学上許容される塩を有効成
   分とする抗真菌剤。
6. 【請求項６】請求項１乃至３のいずれかに記載のＩＴ−
   １４３物質またはそれらの薬学上許容される塩を有効成
   分とする抗腫瘍剤。