【発明の詳細な説明】
ペプチドグリカン単量体（PGM），そのN-アシル誘導体及びその金属錯体の、
生体における免疫抑制状態及び肝抑制状態を補正するための薬剤調製への使用
本発明は、麻酔剤や外科治療での手術侵襲による、あるいはその他の免疫抑制
、免疫不全、肝抑制の状態における免疫抑制（immunosuppresive）効果及び肝抑
制（hepatosuppresive）効果を補正するための薬剤の調製にペプチドグリカン単
量体（PGM）、そのN-アシル誘導体及びその金属錯体を使用し患者の速やかで安
全な回復を達成することに関する。
過去１０年間の臨床的、実験的研究に関する多数の刊行物によって、手術侵襲
及び／又は外科手術において投与される麻酔剤が一時的な免疫抑制を引起し、こ
の免疫抑制は感染症にかかり易くしたり、ガン転移を広げたり、創傷治ゆの障害
になるなどのために患者の生命にとり、危険なものとなり得ることが示されてい
る。発生する免疫抑制は、有毒性を有する麻酔剤、手術侵襲、及び麻酔中の中枢
神経系の一時的麻痺に起因する神経内分泌免疫関係の変化が一緒になって引き起
こすものである（ワトキンス ジェー．（Watkins J.），1980，Br.J.Hosp.Med．23：583-
590.，Vdovic-Sirola M．etal.，1989，In: Immune Consequences of Trauma，S
hocK and Sepsis，p.411-417）。また一方において、麻酔剤の投与と手術侵襲の
後に起こる、肝レベルでの代謝の変化によってある種の効果が引き起こされる。
麻酔剤の肝毒性効果は、ハロゲン化麻酔剤の大多数が肝臓で代謝される事実
（これにより、例えばハロゲン化トリフロロアセチル又は遊離基のような有毒な
中間体が生成する可能性がある）によって説明できるかもしれない（サトウ．エ
ッチ（Satoh H.）ほか，1985，J．Pharm．Exp．Therap．233,857）。疾病素因を
有するヒトでは、これは自己免疫性肝炎を生じる原因となることがある（ヴァー
ガニ ディー（Vergani D.）ほか，1980，N.Engl.J.Med.303,66）。この免疫抑
制及び肝毒性の作用は気管内麻酔で手術された患者に限られず、手術室で働く医
療スタッフにも起こることがあることは強調されなければならない。ハロタンの
慢性被爆は、女性では1.3〜2.0倍多くガンを発生させる模様である（バーデン
ワイ．エム．（Baden Y.M.）ほか，1986，In．Anesthesia，Eds．Miller R.D．N
.Y.，p.730）。手術後の免疫抑制と長期継続的な麻酔剤被爆の後には深刻な結果
を招来する恐れがあることを考慮すると、これを防止しようとする治療上の試み
がおびただしくなられて来たことは驚くにあたらない。即ち、イムノグロブリン
の使用（ニッチェ デー（Nitshe D）ほか，1988，lst Internatinal Congress
on Immune Consequences of Trauma，Shock and Sepsis；0P52），合成ホルモン
の使用（フェイスト イー．（Faist E.）ほか.，1987，Int．J．Clin．Pharm．
Res.7：83-87；ウェイマック ジェー．ピー．（Waymack J.P.）ほか，1985，Ar
ch．Surg．120：43；フェイスト イー.，1989，In Immune Consequences of Tr
auma，Shock and Sepsis，p.509-517），トランスファー因子及びインターフェ
ロンの使用（ジョステン シーエイチ（ Josten Ch.）ほか，1988，lst Interna
tinal Congress on the Immune Consequences of Trauma，Shock and Sepsis；0
P43；Livingston D.H．et al /l
989/In：Immune Consequences of Trauma，Shock and Sepsis，p.551-555），Ｈ
−２レセプター遮断薬（blocker）の使用（ニールセン エイチ．（Nielsen H.
）ほか，1988，lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Tr
auma，Shock and Sepsis；0P49），エンドトキシンに対するモノクローナル抗体
の使用（サガワ ティー（Sagawa T.）ほか，1989，In：Immune Consequences o
f Trauma，Shock and Sepsis，p.495-507）；血管作用薬の使用（ションサーテ
ィング エム．（Shontharting M.）ほか，1988，lst Internatinal Congress o
n the Immune Consequences of Trauma，Shock and Sepsis;OP57）；トロンボサ
イト（trombocite）活性化因子拮抗物質の使用（フレッチャー ジェー．アール
．（Fletcher J．R.）ほか，1988，lst Internatinal Congress on the Immune
Consequences of Trauma，Shock and Sepsis;OP56）；並びに種々の免疫調節剤
（modulators）の使用（ショプフ アール．イー.（Schopf R.E.）ほか，1988，
lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Trauma，Shock an
d Sepsis;Tsang K.P．et al./1986/Int.J.Immunopharmacol.8：437;Hadden J.W
．et al./1989/In：lst Internatinal Congress on the Immune Consequences o
f Trauma，Shock and Sepsis，p.509-517）が提案されている。
生物学的活性物質であるペプチドグリカン単量体（ＰＧＭ）が生合成により入
手できるようになり（ユーゴ特許35,040により）、化学的に特定された化合物と
して分離された（Klalc B.Carbohydr．Res.（1982）110：320；ユーゴ特許40,47
2；オーストリア特許明細書362740）。後に、そのＮ−アシル誘導体（ユー
ゴ特許出願Ｐ−626/89；ヨーロッパ特許出願ＥＰ39 00 93）及び金属錯体（ユー
ゴ特許出願Ｐ−1982/86；ヨーロッパ特許出願ＥＰ268271）が製造された。分離
されたこれらの各物質は、水、生理溶液によく溶解し、非毒性で非発熱性である
。これらは、免疫促進性（immunostimulating）、抗転移性（antimetastatic）
及び抗ガン性の活性を示す。
本発明の目的は、ペプチドグリカン単量体（PGM）、一般式（Ｉ）：
〔ここで、Ｒは水素を示し、Ａｃは直鎖状（C2−C18アルキル）カルボン酸基又
は分岐した（C5−C18アルキル）カルボン酸基又は不飽和（C12−C18アルケニル
）カルボン酸基又は芳香族（C7−C12）カルボン酸基を示し、Ｘは水素、アルカ
リ金属、アルカリ土類金属、有機塩基の第４アンモニウム塩を示す〕で表される
そのN-アシル誘導体、及び下記の式（Ia）又は（Ib）で表されるそれらの二価金
属との錯体を、種々の麻酔剤の投与及び／又は外科手術侵襲により誘発される体
液性及び細胞性の免疫抑制状態の補正、敗血病、火傷、身体の極度の疲労、パラ
ネオプラステイカム症候群（paraneoplastic syndorome）等によって誘発される
他の免疫抑制状態及び免疫不全状態の補正、さらに麻酔及び又は手術侵襲によっ
て誘発される生体の肝抑制状態、肝核酸（特に肝タンパク質における）の変化の
停止、並びに免疫抑制及び／又は肝の障害、中毒、肝炎等を伴うその他の状態の
補正のために用いられる薬剤の調製に使用する新規
な用途である：
PGM、そのN-アシル誘導体及びそれらの二価金属塩の従来知られていない活性
を、実験的に誘発させた手術後の免疫抑制のモデルを使って実証的に説明する。
外科手術の大部分がハロゲン化麻酔剤の投与により維持される一般的な気管内
麻酔で行われることを考慮して、ハロタン麻酔（anaesthesia）を手術侵襲を伴
う場合及び伴わない場合について施すことにより、ヒトにおけると同様の免疫抑
制を誘発させることができる実験モデルを設計した。こうして、齢2.5〜３月の
ＢＡＬＢ／ｃマウス（複数）を、ソーダ石灰を入れた密閉した１リットルの代謝
かご（metabolic cages）に入れ、その中に小動物様呼吸装置を使って0.5〜１％
のハロタンを添加した空気を送り込んだ（流量３５０ｍＬ／分）。この麻酔を１
時間維持した。コントロール用の動物（複数）も同じ操作に供したが、但し１時
間流入させる空気にハロタンを添加しなかった。上記マウスのうちのサブグルー
プはハロタン麻酔にのみ供したが、他のサブグループは更に開腹による手術侵襲
にも供した。この手術は該動物をハロタン麻酔に供する前に行うが、短かいエー
テル麻酔をして行った。このグループに対するコントロールで同一条件を維持す
るために、開腹＋ハロタンのためのコントロールのグループにもハロタン麻酔の
直前に短かいエーテル麻酔（ether narcosis）、を施した。体液性及び細胞性の
免疫のコントロールのために、次いで動物を（ａ）ヒツジ赤血球（ＯＥ）で免疫
し、牌臓内のプラーク（plaques）数を感作の４日後に測定した； （ｂ）同種
異系のガン細胞で免疫し、ザルコーマＩ（Ａ／Ｊマウス由来）の増殖と拒絶時間
を測定した；そして（ｃ）父性脾牌細胞で免疫し、供与細胞（ＢＡＬＢ／ｃ）
の受容（ＢＡＬＢ／ｃ×ＣＢＡ）Ｆ1ハイブリッドに対する局所反応を測定する
ようにした。各グループには５〜８匹の動物を使用した。統計的分析はスチュー
デントのｔ−試験で行った。
得られた結果から、ハロタン麻酔自体が体液性及び細胞性免疫に免疫抑制効果
を及ぼすこと（図１）、及び開腹に起因する手術侵襲はこの免疫抑制を高めるこ
と、が実証された。即ち、ヒツジ赤血球で感作したマウスの場合には、ハロタン
麻酔単独では脾臓内のプラーク（ＰＦＣ）形成が４８．５％（ｐ＜０．００１）
について阻止され、開腹の場合にはさらに２７％について阻止された（図１Ａ）
。一方、細胞性免疫が阻害されることは、麻酔単独では同種異系のガンの発生が
１１日目から１４日目に延び、麻酔＋手術侵襲（ｐ＜０．０５）では１４日目か
ら１６日目に延びたことから実証された（図１Ｂ）。ハロタン麻酔自体による細
胞性免疫の阻害は、受容細胞に対する供与細胞の局所応答（ＧＶＨＲ−移植片対
宿主反応）のモデルにより確認された。該応答では、供与細胞の麻酔によって、
父性リンパ球の注入後７日目に膝窩リンパ節レベルに明確な応答減退が誘発され
た。（通常値8.3±1.5から4.０±1.0；P＜0.05）。
体液性免疫応答のハロタン誘発性減退には、骨髄及び脾臓の形成不全、CD4及
びCD8+細胞の割合減少のアセスメント、並びにこの表現型に属さない細胞数の増
加が伴った。（図２）
OEで感作しハロタンで麻酔したマウス中の肝タンパク質と核酸の同時測定によ
って、麻酔のある種の肝抑制活性、並びに該活性の肝のタンパク質、DNA及びRNA
の量、環度の減少に対す
る明確な効果が実証された。（図３）。こうして、適用した実験モデルにおいて
、手術後に麻酔された患者に起こることがあり、
１．（a） 体液性の及び
（b） 細胞性の
免疫抑制；
２．肝抑制効果
の原因となることがある諸症状の大多数を模擬することに成功した。
かかる免疫及び肝の抑制状態においてPGM及びそのアナローグの効果を私達は
さらに試験し、それらの効果を無処理で抑制されていないマウスで比較した。得
られた結果により、PGM及びそのアナローグは手術後の免疫抑制の補正に高い有
効性を示す一方、この効果は無処理の主体では極めて微弱であることが実証され
た。
医学的処方：PGM、そのN-アシル誘導体及び二価金属との錯体又はそれらの混
合物は、当業界で公知である他の非毒性で生理的に許容される物質と組成物の状
態で、静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下に投与してもよい。単位投与量及び形態
は生体の体重、各固体の状態による。PGM、そのN-アシル誘導体及び二価金属と
の錯体は、体重１kg当り５〜５０mgの投与量で投与してよい。
本発明を以下の実施例により説明する。
実施例１麻酔及び手術がなされた動物における体液性免疫抑制のPGM（Ia）による補正
体液性免疫の大きな抑制がハロタン麻酔され開腹されたマウスで起こったこと
がわかったので（図１）、PGMを適用して免疫抑制防止を試験した。このために
、開腹及びOE-感作の直後でかつハロタン麻酔の直前に生理溶液0.05mLに溶かし
たPGMをマウスの腹腔に注射した。表１に示す結果から、麻酔したマウスでPGM（
10mg/kg）はプラーク発生を94.3％（PFC/106）増加させた。一方、ハロタン麻酔
と手術侵襲に供したマウスではPFC発生が生理溶液のみ注射したコントロールに
対して206.4％も刺激され高められた。
表２は、ハロタンの免疫抑制の最良の補正がPGMの少ない投与量で達成されたこ
とを示す。また、麻酔を施せなかったマウスについて同時に行ったPGM効果を調
べたところその効果は免疫抑制されたマウスでのみ奏されたことがわかった。麻
酔しPGMで処理したマウスでみられたプラーク発生の増加には、骨髄細胞の増加
と末梢白血球増加の発想が伴った。
実施例２体液性免疫抑制のPGM-二価金属錯体を用いた補正
生理溶液に溶かしたPGM-Zn錯体を、麻酔した及び麻酔しない、OE-処理マウス
に前記実施例と同投与量（10mg/kg）注射した。実験は３回繰返し行い、いずれ
の調査でもPGM-ZnはPGMに比較して向上した免疫補正活性を示し、麻酔したマウ
スにおいてプラーク発生を生理溶液のみ注射したコントロールに対し73.5％，73
.1％及び101.4％高めた。
これらの効果には、脾臓及び骨髄の細胞増加が伴った。
実施例３PGM-のN-アシル誘導体を用いた体液性免疫抑制の補正
N-ラウロイルPGM-のナトリウム塩（PGM-L-Na）を生理溶液に溶かし麻酔され感
作されたマウスに注射したところ、脾臓にプラーク発生を最良値の２倍に当たる
増加量で引き起こした。（生理溶液を注射したコントロールに対し、109.9％及
び120.9％の増加。）この効果も、麻酔しないマウスでは見られなかった。
実施例４PGM-二価金属錯体及びPGMのN-アシル誘導体を用いた細胞性免疫抑制の補正
PGM及びそのアナローグを局所GVHRて試験した。即ち、それらを父性脾細胞をF
1ハイブリッドの後脚パッド（足裏の肉）中に注射した直後、即ちハロタレ麻酔
の直前に投与した。PGM-Znは注射後７日目に膝窩リンパ節レベルでの応答を高め
る一方、PGM-L-Naは注射後10日目に局所リンパ節で大リンパ細胞の数を明確に増
加させる。（向流式血球計算機（counter-flow cytometer）で評価）ことがわか
った。
実施例５ハロタン麻酔が行われている間の肝抑制に対するPGMによる補正
OE-感作マウスハロタン麻酔を行うと肝のタンパク質及び核酸の数が減少する
ことを見出した（図２）ので、PGMの適用が体液性免疫抑制を伴うこれらの変化
に影響するかどうかを確認することを試みた。表５に示す結果から、PGM少量の
投与により、肝臓内の全測定パラメータ（DNA，RNA及びタンパク質）の増加が明
確に誘発されることが実証された。同時に行った無処理マウスにおけるPGM効果
試験から、PGMの増強効果は麻酔した動物、即ち肝が抑制されたマウスにおいて
のみみられることがわかった。
実施例６麻酔され手術されたマウスにおける、PGM、PGM-二価金属錯体及びPGMのN-アシル 誘導体の肝親和性効果
PGM及びそのアナローグの効果を麻酔をし手術したマウスにおいて試験し、PGM
は該動物の肝臓内でDNA，RNA及びタンパク質の含有量を高めることが確認された
。N-アシル誘導体の肝タンパク質に対する効果は同じ強度であったが、PGM-Znは
PGM単独の場合よりもずっと強く肝タンパク質の会合を剌激し強めた。
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Use of a peptidoglycan monomer (PGM), its N-acyl derivative and its metal complex for the preparation of a drug for correcting the immunosuppressive state and hepatic suppressive state in a living body. Peptidoglycan monomer for the preparation of drugs to correct the immunosuppressive effect and hepatosuppresive effect due to surgical invasion with drugs or surgical treatment, or in other immunosuppressive, immunodeficient, hepatic suppressive conditions (PGM), its N-acyl derivatives and its metal complexes to achieve rapid and safe recovery of patients. Numerous publications on clinical and experimental research over the last decade have shown that anesthetics administered in surgical invasion and / or surgery cause temporary immunosuppression, which renders them susceptible to infections. It has been shown that it can be dangerous and life-threatening for a patient due to cancer, spread of cancer metastasis, obstacle to healing of wound and the like. The immunosuppression that occurs is caused by a combination of toxic anesthetics, surgical invasion, and changes in the neuroendocrine immune relationship that result from temporary paralysis of the central nervous system during anesthesia (Watkins J. ( Watkins J.), 1980, Br.J.Hosp.Med. 23: 583-590., Vdovic-Sirola M. et al., 1989, In: Immune Consequences of Trauma, S hocK and Sepsis, p.411-417). . On the one hand, changes in metabolism at the liver level following administration of anesthetics and surgical insult cause certain effects. The hepatotoxic effect of anesthetics is the fact that the vast majority of halogenated anesthetics are metabolized in the liver, which can lead to toxic intermediates such as halogenated trifluoroacetyl or free radicals. (Satoh H. et al., 1985, J. Pharm. Exp. Therap. 233,857). In humans with a predisposition to disease, this may cause autoimmune hepatitis (Vergani D. et al., 1980, N. Engl. J. Med. 303, 66). It should be emphasized that this immunosuppressive and hepatotoxic effect is not limited to patients operated on by endotracheal anesthesia, but may occur on the medical staff working in the operating room. Chronic exposure to halothane appears to cause 1.3 to 2.0 times more cancers in women (Baden YM) et al., 1986, In. Anesthesia, Eds. Miller RD. N.Y., p. 730). It is surprising that therapeutic attempts to prevent this have been rampant, given post-operative immunosuppression and potentially long-term consequences of anesthetic exposure. Does not hit. That is, use of immunoglobulin (Nitshe D, et al., 1988, lst Internatinal Congress on Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis; 0P52), use of synthetic hormone (Faist E., et al., 1987, Int. J. Clin. Pharm. Res. 7: 83-87; Waymack J. P. (Waymack JP) et al., 1985, Arch. Surg. 120: 43; Face Toe., 1989, In Immune. Consequences of Trauma, Shock and Sepsis, p.509-517), Use of transfer factors and interferons (Josten Ch.), 1988, lst Interna tinal Congress on the Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis; 0 P43; Livingston DH. Et al / l 989 / In: Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis, p.551-555), use of H-2 receptor blocker (Nielsen H.) and others , 1988, lst Internatinal Congress on the Immune C onsequences of Trauma, Shock and Sepsis; 0P49), Use of monoclonal antibody against endotoxin (Sagawa T. et al., 1989, In: Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis, p.495-507); Use of drugs (Shontharting M., et al., 1988, lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis; OP57); Use of trombocite activator antagonists (Fletcher J. J. Fletcher J.R. et al., 1988, lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis; OP56); and the use of various immunomodulators (Shopphard. E. (Schopf RE) et al., 1988, lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Trauma, Shock an d Sepsis; Tsang KP. et al./1986/Int. J. Immunopharmacol. 8: 437; Hadden JW. et al./1989/In: lst Internatinal Congress on the Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis, p.509-517). The biologically active substance peptidoglycan monomer (PGM) has become available by biosynthesis (according to Yugo Patent 35,040) and has been isolated as a chemically defined compound (Klalc B. Carbohydr. Res. 1982) 110: 320; Yugo Patent 40,472; Austrian Patent Specification 362740). Later, its N-acyl derivatives (Yugo patent application P-626 / 89; European patent application EP 390093) and metal complexes (Yugo patent application P-1982 / 86; European patent application EP268271) were prepared. Each of these separated substances is well soluble in water and physiological solution, nontoxic and nonpyrogenic. They exhibit immunostimulating, antimetastatic and anti-cancer activity. An object of the present invention is to provide a peptidoglycan monomer (PGM), a general formula (I): [Wherein R represents hydrogen, Ac represents a linear (C 2 -C 18 alkyl) carboxylic acid group, a branched (C 5 -C 18 alkyl) carboxylic acid group, or an unsaturated (C 12 -C 18 alkenyl) ) A carboxylic acid group or an aromatic (C 7 -C 12 ) carboxylic acid group, and X represents hydrogen, an alkali metal, an alkaline earth metal, or a quaternary ammonium salt of an organic base] Derivatives and humoral and cellular immunity induced by administration of various anesthetics and / or surgical invasion of complexes with divalent metals represented by the following formula (Ia) or (Ib) Correction of suppression status, correction of other immunosuppressive status and immunodeficiency status induced by septic disease, burns, excessive body fatigue, paraneoplastic syndorome, etc., and further by anesthesia and / or surgical invasion Induced hepatic depression of the body, It is a novel use for the preparation of a drug used for stopping the alteration of liver nucleic acid (particularly in liver protein), and for immunosuppression and / or correction of other conditions associated with liver damage, poisoning, hepatitis and the like. : The previously unknown activity of PGM, its N-acyl derivatives and their divalent metal salts is demonstrated empirically using a model of experimentally induced postoperative immunosuppression. Considering that the majority of surgery is performed with general endotracheal anesthesia maintained by administration of halogenated anesthetic, halothane anesthesia (anaesthesia) is performed with or without surgical invasion. , Designed an experimental model capable of inducing similar immunosuppression in humans. In this way, BALB / c mice (ages) aged 2.5 to 3 months were placed in a closed 1 liter metabolic cages containing soda lime, and 0.5 to 1% of them were placed using a small animal-like breathing apparatus. The air to which halothane was added was sent in (flow rate: 350 mL / min). This anesthesia was maintained for 1 hour. Control animals were also subjected to the same procedure, except that halothane was not added to the air flow for 1 hour. While a subgroup of the above mice was subjected to halothane anesthesia only, other subgroups were also subjected to surgical invasion by laparotomy. This surgery was performed prior to subjecting the animals to halothane anesthesia, but with short ether anesthesia. In order to maintain the same conditions in the control for this group, the control group for laparotomy + halothane was also given a short ether narcosis immediately before halothane anesthesia. For control of humoral and cellular immunity, the animals were then (a) immunized with sheep red blood cells (OE) and the number of plaques in the spleen was measured 4 days after sensitization; (b). Immunization with allogeneic cancer cells and proliferation and rejection time of Sarcoma I (from A / J mice) were measured; and (c) immunization with paternal splenic cells and acceptance of donor cells (BALB / c) ( The local reaction to the BALB / c × CBA) F 1 hybrid was measured. Five to eight animals were used in each group. Statistical analysis was performed by Student's t-test. The results obtained demonstrate that halothane anesthesia itself exerts an immunosuppressive effect on humoral and cell-mediated immunity (FIG. 1), and that surgical invasion caused by laparotomy enhances this immunosuppression. Thus, in mice sensitized with sheep red blood cells, halothane anesthesia alone prevented plaque (PFC) formation in the spleen for 48.5% (p <0.001) and an additional 27% for laparotomy. (FIG. 1A). On the other hand, inhibition of cell-mediated immunity means that the development of allogeneic cancer was prolonged from the 11th day to the 14th day with anesthesia alone, and from the 14th day to 16th with anesthesia + surgical invasion (p <0.05). This was demonstrated by the extension to the day (Fig. 1B). Inhibition of cell-mediated immunity by halothane anesthesia itself was confirmed by a model of the local response of donor cells to recipient cells (GVHR-graft versus host response). In the response, anesthesia of donor cells induced a clear diminished response at popliteal lymph node levels 7 days after injection of paternal lymphocytes. (Usually 8.3 ± 1.5 to 4.0 ± 1.0; P <0.05). Halothane-induced decline of the humoral immune response was accompanied by bone marrow and spleen dysplasia, an assessment of a reduced proportion of CD4 and CD8 + cells, and an increase in the number of cells not belonging to this phenotype. (Fig. 2) Liver-suppressing activity of anesthesia, and the amount of liver protein, DNA and RNA, and the degree of circulatory activity of the anesthesia by simultaneous measurement of liver protein and nucleic acid in OE-sensitized mice anesthetized with halothane. A clear effect on the reduction of (Figure 3). Thus, in the applied experimental model, this may occur in patients anesthetized after surgery, (A) humoral and (b) cellular immunosuppression; We succeeded in simulating the majority of the symptoms that may cause the liver depressant effect. We further tested the effects of PGM and its analogs in such immune and hepatic suppressive conditions and compared their effects in naive, unsuppressed mice. The results obtained demonstrate that PGM and its analogs are highly effective in correcting postoperative immunosuppression, while this effect is extremely weak in untreated subjects. Medical formulations: PGM, its N-acyl derivatives and complexes with divalent metals or mixtures thereof may be administered intravenously in the form of other non-toxic, physiologically acceptable substances and compositions known in the art. It may be administered intraperitoneally, intraperitoneally, intramuscularly and subcutaneously. The unit dose and form depend on the body weight of the living body and the state of each individual. PGM, its N-acyl derivative and a complex with a divalent metal may be administered at a dose of 5 to 50 mg / kg body weight. The invention is illustrated by the examples below. Example 1 Correction of humoral immunosuppression in anesthetized and operated animals by PGM (Ia) It was found that large suppression of humoral immunity occurred in halothane-anesthetized and laparotomized mice (FIG. 1). To test immunosuppression. For this purpose, mice were injected intraperitoneally with PGM in 0.05 mL of physiological solution immediately after laparotomy and OE-sensitization and immediately before halothane anesthesia. From the results shown in Table 1, PGM (10 mg / kg) increased plaque generation by 94.3% (PFC / 10 6 ) in anesthetized mice. On the other hand, in mice subjected to halothane anesthesia and surgical invasion, PFC generation was stimulated and increased by 206.4% as compared with the control injected with physiological solution alone. Table 2 shows that the best correction of halothane immunosuppression was achieved at low doses of PGM. In addition, when the PGM effect was examined at the same time for the unanesthetized mouse, it was found that the effect was exhibited only in the immunosuppressed mouse. The increased plaque development observed in anesthetized and PGM-treated mice was accompanied by an increase in bone marrow cells and peripheral leukocyte increase. Example 2 PGM-Zn complex dissolved in a corrected physiological solution using PGM- divalent metal complex for humoral immunosuppression was anesthetized and not anesthetized in OE-treated mice at the same dose (10 mg / mg) injected). The experiment was repeated 3 times, and in any of the investigations, PGM-Zn showed improved immunocorrection activity compared to PGM, and plaque development in anesthetized mice was 73.5%, 73.1% of the control injected with physiological solution only. And increased by 101.4%. These effects were accompanied by an increase in spleen and bone marrow cells. Example 3 Correction of humoral immunosuppression using PGM- N-acyl derivative When sodium salt of N-lauroyl PGM- (PGM-L-Na) was dissolved in physiological solution and injected into anesthetized and sensitized mice , Induced plaque development in the spleen with an increase of twice the best value. (109.9% and 120.9% increase over controls injected with physiological solution.) This effect was also not seen in unanesthetized mice. Example 4 Correction of cellular immunosuppression using PGM-divalent metal complexes and N-acyl derivatives of PGM PGM and its analogs were tested in topical GVHR. That is, they were administered immediately after injection of paternal splenocytes into the hind leg pad of the F 1 hybrid (meat of the sole of the foot), that is, just prior to halothane anesthesia. PGM-Zn enhances the response at popliteal lymph node level 7 days after injection, while PGM-L-Na distinctly increases the number of large lymph cells in regional lymph nodes 10 days after injection. (Evaluated with a counter-flow cytometer). Example 5 PGM-corrected hepatic inhibition during halothane anesthesia We found that OE-sensitized mouse halothane anesthesia reduced the number of liver proteins and nucleic acids (Fig. 2). We sought to determine whether application affected these changes associated with humoral immunosuppression. The results shown in Table 5 demonstrate that administration of a small amount of PGM clearly induces an increase in all measurement parameters (DNA, RNA and protein) in the liver. From the PGM effect test in untreated mice performed at the same time, it was found that the potentiating effect of PGM was observed only in anesthetized animals, that is, mice in which the liver was suppressed. Example 6 Hepatophilic effect of PGM , PGM-divalent metal complex and N-acyl derivative of PGM in anesthetized and operated mice The effect of PGM and its analogs was tested in anesthetized and operated mice, It was confirmed to increase the content of DNA, RNA and protein in the liver of the animal. Although the effect of N-acyl derivatives on liver proteins was of equal intensity, PGM-Zn stimulated and enhanced liver protein association much more strongly than PGM alone.
【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項
【提出日】１９９３年２月１０日
【補正内容】
請求の範囲
１．ペプチドグリカン単量体（PGM）の、一般式（Ｉ）：
〔ここで、Ｒは水素を示し、Acは直鎖状（C2-C18アルキル）カルボン酸基又は分
岐した（C5-C18アルキル）カルボン酸基又は不飽和（C12-C18アルケニル）カル
ボン酸基又は芳香族（C7-C12）カルボン酸基を示し、Ｘは水素、アルカリ金属、
アルカリ土類金属、有機塩基の第４アンモニウム塩を示す〕で表されるＮ−アシ
ル誘導体、及び下記の式（Ia）又は（Ib）で表されるそれらの二価金属との錯体
を、他の通常の非毒性で生理学的に許容される物質とともに、生体の免疫抑制状
態及び肝抑制状態の補正のために用いられる薬剤調製への使用：[Procedure Amendment] Patent Law Article 184-7, Paragraph 1 [Submission Date] February 10, 1993 [Amendment Content] Claims 1. The general formula (I) of the peptidoglycan monomer (PGM): [Wherein R represents hydrogen, Ac represents a linear (C 2 -C 18 alkyl) carboxylic acid group or a branched (C 5 -C 18 alkyl) carboxylic acid group or unsaturated (C 12 -C 18 alkenyl) ) A carboxylic acid group or an aromatic (C 7 -C 12 ) carboxylic acid group, and X represents hydrogen, an alkali metal, an alkaline earth metal, or a quaternary ammonium salt of an organic base]. , And a complex with a divalent metal represented by the following formula (Ia) or (Ib) together with other usual non-toxic and physiologically acceptable substances, immunosuppressive state of the living body and liver suppression Use in drug preparation used for correction of condition:
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(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＡ
ＡＤＤ
ＡＤＲ
Ｃ０７Ｋ 9/00 8318−4Ｈ
Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＤ
ＡＣＳ
ＡＤＲ
ＡＢＥ
(72)発明者 ラドシェヴィッチ−スタシッチ，ビセルカ
クロアチア共和国，51000 リイェカ ア.
マミチャ 12
(72)発明者 シュシュコヴィッチ，ボジダール
クロアチア共和国，41000 ザグレブ ト
ゥシュカネッツ 57 ツ
(72)発明者 ナウムスキ，ラドミーラ
クロアチア共和国，41000 ザグレブ エ
ルリチョーヴァ ９／ペトゥナイスト
(72)発明者 ルカヴィーナ，ダニイェル
クロアチア共和国，51000 リイェカ デ
ジュマノーヴァ ８─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI A61K 38/00 ADA ADD ADR C07K 9/00 8318-4H A61K 37/02 ADD ACS ADR ABE (72) Inventor Rad Sevich-Stashic, Viserka Croatia, 51000 Rijeka A. Mamicha 12 (72) Inventor Shushkovich, Bozidar Croatia, 41000 Zagreb Tuscanets 57 (72) Inventor Naumski, Radomira Croatia, 41000 Zagreb El Lichova 9 / Petunist (72) Inventor Lucavina, Danjeel Croatia, 51000 Rijeka de Jumanova 8