【発明の詳細な説明】
新規な非環式、硫黄含有ペプチド
本発明は、ナトリウム排泄増加作用をもち、低下された塩基度をもつ新規な非
環式、硫黄含有ペプチド、それらの製造方法、および薬物における、特に血圧降
下剤としてのそれらの使用に関する。
刊行物では、ＡＮＰ受容体について２つの一般的クラス、グアニル酸シクラー
ゼに結合するもの（Ａ／Ｂ受容体）およびグアニル酸シクラーゼに結合しないも
の（Ｃ受容体）を開示している。Ａ受容体およびＢ受容体は、サイズが１２０〜
１４０ｋＤＡであり、貫膜領域をもち、そして特定のグアニル酸シクラーゼを通
してｃＧＭＰ系（細胞内）に対するＡＮＰ効果（細胞外）を仲介する一種のタン
パク質である。両受容体タイプは、高い親和力でＡＮＰに結合するのに対し、Ｂ
ＮＰおよびＣＮＰに対する親和力は異なる。
ＡＮＰ Ａ／Ｂ受容体は、例えば、内皮細胞、平滑血管筋細胞において、また
糸球体の脈管膜および上皮細胞において生じる。生物学的に無症候性のＣ受容体
、６４ｋＤＡの貫膜タンパク質のホモダイマーは、腎皮質に、また血管、内皮お
よび平滑筋細胞に広がっている。
Ｃ受容体リガンドでは、もしそれらのコア配列が保持されるならば、親和力を
失わずに広範囲に亙ってサイズを低下させ得ることは、周知である。生体内での
所見によると、Ｃ受容体が、クリアランス機能を遂行していることが示された。
麻酔されたり、または意識のあるラットへのＣ−ＡＮＦ（４−２３）の注入は、
内因性ＡＮＰ血漿レベルにおける可逆的増加と、血圧の低下を引き起こす（この
関連では、Maack et al.，
Science 238 (1987)，675-678；Maack et al．In.：Bio1ogical and molecular
aspects of atrial factors，edited by P．Needleman，New York 1988，p.57-7
6,参照）。これらの効果は、ＡＮＰ（１−２８）の注入によって誘発される効果
に匹敵する。
１５個のアミノ酸まで端を切り取られたＡＮＰ分子を表すＣ受容体リガンドが
、存在することが、同様に知られている。
また、これと関連して、コア配列Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（
ＲＩＤＲＩ）が，受容体の親和力に必須であることも知られている（この関連で
は、Lewicki et al．米国特許第4,757,048号、参照）。
本発明によるペプチドにおいて、最初のアルギニンの位置は、非塩基性、環式
アミノ酸により占められており、それが、驚くべきことに、親和力における大き
な増大をもたらす。
本発明は、一般式（Ｉ）の、少なくとも１つの硫黄含有基をもつ新規な非環式
ペプチドおよびそれらの塩に関する。
Ｒ1−ＣＯ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｇ−Ｒ2 (I)
式中、
Ａは、直接結合を表すか、または式
［式中、ａ，ｂ，ｄおよびｆは、同一かまたは異なるものであり、数字１もし
くは２を示し、
ｅは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ3は、水素、炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキル、またはア
ミノ保護基を示し、
Ｒ4およびＲ5は、同一かまたは異なるものであり、水素もしくはメチルを示す
か、または
Ｒ4およびＲ5は、一緒になって５もしくは６員の飽和炭素環式環を形成するか
、または
Ｒ4は、水素を示し、そして
Ｒ5は、炭素原子３〜８個をもつシクロアルキルまたは炭素原子６〜１０個を
もつアリールまたは水素を示すか、または炭素原子８個までをもつ直鎖もしくは
分枝アルキルを示すが、
この場合、アルキルは、シアノ、メルカプト、ヒドロキシル、グアニジルによ
るか、炭素原子６個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルチオによるか、または
式−ＮＲ6Ｒ7もしくはＲ8−ＯＣ−（式中、Ｒ6およびＲ7は、互いに独立して
、水素、ホルミル、各場合炭素原子８個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルも
しくはアシル、フェニルまたはアミノ保護基を表し、Ｒ8は、ヒドロキシル、ベ
ンジルオキシ、炭素原子６個までをもつアルコキシ、炭素原子３〜６個をもつシ
クロアルキルオキシ、または上記基−ＮＲ6Ｒ7を示す）の基によって、場合によ
り置換されているか、
あるいは、アルキルは、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトロ、炭素原子８個まで
をもつアルコキシによるかまたは基−ＮＲ6Ｒ7（式中、Ｒ6
およびＲ7は、上記意味をもつ）によって順次、置換される炭素原子３〜８個
をもつシクロアルキルによるかまたは炭素原子６〜１０個をもつアリールによっ
て、場合により置換されているか、
あるいはアルキルは、適当な−ＮＨ官能性が、炭素原子６個までをもつアルキ
ルによるか、アミノ保護基によって場合により保護されている５〜６員の窒素含
有複素環もしくはインドリルによって、場合により置換されている］
のアミノ酸残基を表し、
Ｂは、式
［式中、ｊは、数字０，１，２，３もしくは４を示し、
Ｒ9は、水素、ヒドロキシル保護基、または炭素原子６個までをもつ直鎖もし
くは分枝アシルを示し、
ｇは、数字１，２もしくは３を示す］の基を表し、
Ｄ，ＥおよびＧは、同一かまたは異なるものであり、上記Ｂの意味をもつか、ま
たは式
［式中、ｅ’は、上記ｅの意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり
、
ＲI0は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり、
Ｒ11およびＲ12は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものである］の基を表し、
Ｒ1は、炭素原子６個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを表すか、ピリジル
もしくはキノリルを表すか、または式
［式中、Ｒ13は、水素、または炭素原子６個までをもつアルキルか、または硫
黄保護基を示し、
ｈは、数字１、２、３もしくは４を示し、
ｉおよびｋは、同一かまたは異なるものであり、数字０もしくは１を示し、
Ｒ14およびＲ15は、同一かまたは異なるものであり、水素、または炭素原子６
個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキル、フェニルまたはアミノ保護基を示し、
Ｒ16は、上記Ｒ5の意味をもち、後者とは同一かまたは異なるものであり、
ｌおよびｌ’は、同一かまたは異なるものであり、数字１もしくは２を示し、
ｍ，ｎ，ｏおよびｐは、同一かまたは異なるものであり、数字０，１もしくは２
を示し、
Ｒ17は、ハロゲン、ヒドロキシルもしくはアミノによって、同一でも異ってい
ても、３回まで場合により置換されている炭素原子６〜１０個をもつアリールを
示し、
Ｒ18は、炭素原子６個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキル、フェニルまたは
ナフチルを示し、
ｑは、数字０もしくは１を示す］の基を表し、
Ｒ2は、式
［式中、ｒは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ19は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであ
り、
Ｒ20およびＲ21は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものであり、
ｓは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ22およびＲ23は、同一かまたは異なるものであり、そしてアミノ保護基、水
素、または炭素原子３〜６個をもつシクロアルキル、フェニル、ピリジルまたは
−ＣＯ−ＮＨ2基によって、場合により置換されている炭素原子８個までをもつ
直鎖もしくは分枝アルキルを示す］の基を表し、
基Ａ，Ｄ，ＥもしくはＧの少なくとも１つについて、硫黄含有アミノ酸残基を表
すか、Ｒ1について、硫黄含有官能基を示すことを必須とする。
一般式（Ｉ）の本発明による化合物は、数個の不斉炭素原子を有する。それら
は、互いに独立して、ＤもしくはＬ型で存在し得る。本発明は、光学的鏡像体、
並びに異性体もしくはラセミ体の混合物を包含する。基Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＧ
は、互いに独立して、光学的に純粋に、好ましくはＬ型で存在するのが好ましい
。本発明の目的のためのアミノ保護基は、ペプチド化学において使用される慣用
のアミノ保護基である。
それらは、好ましくは、ベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベン
ジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４
−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニ
ル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニ
ル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカル
ボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニ
ル、ブトキシカル
ボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、アリルオキ
シカルボニル、ビニルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル
、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、シクロヘキソキシカル
ボニル、１，１−ジメチルエトキシカルボニル、アダマンチルカルボニル、フタ
ロイル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロ
−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、メンチルオキシカルボニル、フェノキシカル
ボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボ
ニル、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、２−クロロアセチル、
２−ブロモアセチル、２，２，２−トリフルオロアセチル、２，２，２−トリク
ロロアセチル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４
−ニトロベンゾイル、フタルイミド、イソバレロイル、またはベンジルオキシメ
チレン、４−ニトロベンジル、２，４−ジニトロベンジルまたは４−ニトロフェ
ニルを含む。
本発明の目的のために、生理学的に受容できる塩が好適である。本発明による
化合物の生理学的に受容できる塩は、鉱酸、カルボン酸もしくはスルホン酸によ
る本発明による物質の塩であってもよい。特に好適な例は、塩酸、臭化水素酸、
硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石
酸、クエン酸、フマール酸、マレイン酸もしくは安息香酸による塩である。
本発明の目的のための塩は、付加的に、金属塩、好ましくは一価の金属塩およ
びアンモニウム塩である。例えば、ナトリウム、カリウム、リチウムのようなア
ルカリ金属塩およびアンモニウム塩が、好適である。
上記定義の範囲にはいるヒドロキシル保護基は、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェニ
ルシリル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔ
ｅｒｔ−ブチルージメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリフ
ェニルシリル、トリメチルシリルエトキシカルボニル、ベンジル、２−ニトロベ
ンジル、４−ニトロベンジル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−メト
キシベンジル、ホルミル、アセチル、トリクロロアセチル、２，４−ジメトキシ
ベンジル、メチルチオメチル、メトキシエトキシメチル、［２−（トリメチルシ
リル）エトキシ］メチル、ベンゾイル、４−メチルベンゾイル、４−ニトロベン
ゾイル、４−フルオロベンゾイル、４−クロロベンゾイルもしくは４−メトキシ
ベンゾイルを含むシリーズからの保護基を、一般に表す。アセチル、ベンゾイル
、ベンジルもしくはメチルベンジルが、好適である。
上記定義の範囲にはいる硫黄保護基は、一般に、アセトアミドメチル、トリフ
ェニルメチル（トリチル）、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メトキシべンジル、ｎ−ブ
チルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ジフェニルメチル、ジフェニル−４−ピリジ
ルメチル、４−メチルベンジル、３，４−ジメチルベンジル、ベンジルもしくは
４−ピコリルを含むシリーズからの保護基を表す。トリフェニルメチル、ｔｅｒ
ｔ−ブチルおよびアセトアミドメチルが、好適である。
一般式（Ｉ）
Ａが、直接結合を表すか、または式
［式中、ａ，ｂ，ｄおよびｆは、同一かまたは異なるものであり、数字１もし
くは２を示し、
ｅは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ3は、水素、メチル、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）もしくはｔｅｒｔ−
ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）を示し、
Ｒ4およびＲ5は、同一かまたは異なるものであり、水素もしくはメチルを示す
か、または
Ｒ4およびＲ5は、一緒になってシクロペンチルもしくはシクロヘキシル環を形
成するか、または
Ｒ4は、水素を示し、そして
Ｒ5は、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニルもしくは水素を示すか、
または炭素原子６個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを示すが、
この場合、アルキルは、シアノ、メルカプト、ヒドロキシル、グアニジルによ
るか、または炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルチオによるか、
または式−ＮＲ6Ｒ7もしくはＲ8−ＯＣ−［式中、Ｒ6およびＲ7は、互いに独立
して、水素、ホルミル、ベンジルオキシカルボニル、または各場合炭素原子４個
までをもつ直鎖もしくは分枝
アルキルもしくはアシル、またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）を
表し、Ｒ8は、ヒドロキシル、ベンジルオキシ、炭素原子４個までをもつアルコ
キシ、炭素原子３〜６個をもつシクロアルキル、または上記基−ＮＲ6Ｒ7を示す
］の基によって、場合により置換されているか、
あるいはアルキルは、フッ素、ヒドロキシル、ニトロまたは炭素原子４個まで
をもつアルコキシにによって、順次、置換され得るシクロヘキシル、ナフチルも
しくはフェニルによって置換されているか、
あるいはアルキルは、適当な−ＮＨ官能性が、炭素原子４個までをもつアルキ
ルによるか、アミノ保護基によって場合により保護されているインドリル、イミ
ダゾリル、ピリジル、トリアゾリルもしくはピラゾリルによって、置換されてい
る］のアミノ酸残基を表し、
Ｂが、式
［式中、ｊは、数字０，１，２もしくは３を示し、
Ｒ9は、水素、ベンジル、ベンゾイルもしくは炭素原子６個までをもつ直鎖も
しくは分枝アシルを示し、
ｇは、数字１，２もしくは３を示す］の基を表し、
Ｄ，ＥおよびＧが、同一かまたは異なるものであり、上記Ｂの意味をもつか、ま
たは式
［式中、ｅ’は、上記ｅの意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり
、
Ｒ10は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり、
Ｒl1およびＲ12は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものである］の基を表し、
Ｒ1が、炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを表すか、またはピ
リジルもしくはキノリルを表すか、または式
［式中、Ｒ13は、水素、Ｃ原子１〜４個をもつアルキル、アセトアミドメチル
またはトリチル基を示し、
ｈは、数字１、２もしくは３を示し、
ｉおよびｋは、同一かまたは異なるものであり、数字０もしくは１を示し、
Ｒ14およびＲ15は、同一かまたは異なるものであり、水素または炭素原子４個
までをもつ直鎖もしくは分枝アルキル、フェニル、ベンジルオキシカルボニル（
Ｚ）またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを示し、
Ｒ16は、上記Ｒ5の意味をもち、後者とは同一かまたは異なるものであり、
ｌおよびｌ’は、同一かまたは異なるものであり、数字１もしくは２を示し、
ｍ，ｎ，ｏおよびｐは、同一かまたは異なるものであり、数字０，１もしくは２
を示し、
Ｒ17は、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシルもしくはアミノによって、同一で
も異っていても、２回まで場合により置換されているフェニルもしくはナフチル
を示し、
Ｒ18は、炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルまたはフェニルを
示し、
ｑは、数字０もしくは１を示す］の基を表し、
Ｒ2が、式
［式中、ｒは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ19は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり、
Ｒ20およびＲ21は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものであり、
ｓは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ22およびＲ23は、同一かまたは異なるものであり、そしてベンジルオキシカ
ルボニル（Ｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ピバロイル、水素、またはシ
クロペンチル、シクロヘキシル、フェニルもしくはピリジルによって、場合によ
り置換されている炭素原子６個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを示す］の
基を表し、
基Ａ，Ｄ，Ｅ、ＧもしくはＲ1の少なくとも１つについて、硫黄含有基を示すこ
とを必須とする］の式（Ｉ）の化合物およびその塩が好ましい。
一般式（Ｉ）の、
Ａが、直接結合を表すか、または式
［式中、ｆは、数字１もしくは２を示し、
ｅは、数字０もしくは１を示し、
Ｒ3は、水素、メチル、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）もしくはｔｅｒｔ−
ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）を示し、
Ｒ4およびＲ5は、同一かまたは異なるものであり、水素もしくはメチルを示す
か、または
Ｒ4およびＲ5は、一緒になってシクロペンチルもしくはシクロヘキシル環を形
成するか、または
Ｒ4は、水素を示し、そして
Ｒ5は、シクロペンチル、シクロヘキシルもしくは水素を示すか、または炭素
原子５個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを示すが、この場合、アルキルは
、シアノ、ヒドロキシル、グアニジルによるか、または式−ＮＲ6Ｒ7もしくはＲ8
−ＣＯ−（式中、Ｒ6およびＲ7は、互いに独立して、水素、炭素原子４個まで
をもつ直鎖もしくは分枝アルキル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）ま
たはブチルを表し、
Ｒ8は、ヒドロキシル、ベンジルオキシ、炭素原子３個までをもつアルコキシ
、または上記基−ＮＲ6Ｒ7を示す）の基によって、場合により置換されているか
、
あるいはアルキルは、フッ素、ヒドロキシル、塩素または炭素原子４個までを
もつアルコキシにによって、順次、置換され得るシクロヘキシル、ナフチルもし
くはフェニルによって置換されているか、
あるいはアルキルは、ＮＨ官能性が、メチル、ベンジルオキシメチレンもしく
はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）によって場合により保護されている
インドリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジルもしくはピラゾリルによっ
て、置換されている］のアミノ酸残基
を表し、
Ｂが、式
［式中、ｊは、数字０，１，２もしくは３を示し、
Ｒ9は、水素、ベンジルもしくは炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝ア
シルを示し、
ｇは、数字１，２もしくは３を示す］の基を表し、
Ｄ，ＥおよびＧが、同一かまたは異なるものであり、上記Ｂの意味をもつか、ま
たは式
［式中、ｅ’は、上記ｅの意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり
、
Ｒ10は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり、
Ｒ1lおよびＲ12は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものである］の基を表し、
Ｒ1が、炭素原子４個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを表すか、またはピ
リジルもしくはキノリルを表すか、または式
［式中、Ｒ13は、水素、Ｃ原子１〜４個をもつアルキル、アセトアミドメチル
またはトリチル基を示し、
ｈは、数字１もしくは２を示し、
ｉおよびｋは、同一かまたは異なるものであり、数字０もしくは１を示し、
Ｒ14およびＲ15は、同一かまたは異なるものであり、水素または炭素原子４個
までをもつ直鎖もしくは分枝アルキル、フェニル、ベンジル
オキシカルボニル（Ｚ）またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを示し、
Ｒ16は、上記Ｒ5の意味をもち、後者とは同一かまたは異なるものであり、
ｌおよびｌ’は、同一かまたは異なるものであり、数字１もしくは２を示し、
ｍ，ｎ，ｏおよびｐは、同一かまたは異なるものであり、数字０，１もしくは２
を示し、
Ｒ17は、フッ素、塩素もしくは臭素によって、同一でも異っていても、２回ま
で場合により置換されているフェニルもしくはナフチルを示し、
Ｒl8は、炭素原子３個までをもつ直鎖もしくは分枝アルキルを示し、
ｑは、数字０もしくは１を示す］の基を表し、
Ｒ2が、式
［式中、ｒは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ19は、上記Ｒ3の意味をもち、後者と同一かまたは異なるものであり、
Ｒ20およびＲ21は、上記Ｒ4およびＲ5の意味をもち、後者と同一かまたは異な
るものであり、
ｓは、数字０，１もしくは２を示し、
Ｒ22およびＲ23は、同一かまたは異なるものであり、そしてベンジルオキシカ
ルボニル（Ｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ピバロイル、水素、またはシ
クロペンチル、シクロヘキシル、フェニルもしく
はピリジルによって、場合により置換されている炭素原子６個までをもつ直鎖も
しくは分枝アルキルを示す］の基を表し、
この場合、常に、基Ａ，Ｄ，Ｅ、ＧもしくはＲ1の少なくとも１つは、硫黄含有
基を示す］の式（Ｉ）の化合物およびその塩が特に好ましい。
さらに、一般式（Ｉ）の本発明による化合物の製造方法が見出されたが、その
方法は、末端のＲ2が、遊離アミド基を表す場合において、
［Ａ］一般式（ＩＩ），（ＩＩＩ），（ＩＶ），（Ｖ）および（ＶＩ）
Ｌ−Ａ−ＯＨ (II)、 Ｍ−Ｂ−ＯＨ (III)、
Ｑ−Ｄ−ＯＨ (IV)、 Ｔ−Ｅ−ＯＨ (V) および
Ｖ−Ｇ−ＯＨ (VI)
［式中、Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＧは、前記意味をもち、Ｌ，Ｍ，Ｑ，ＴおよびＶ
は、前記アミノ保護基の一つ、好ましくはＦｍｏｃを表す］
の特定のアミノ酸配列を、固相上の前記特定の配列のアミン官能性の連続的およ
び／または平行的脱ブロッキング化と活性化によって、式（ＶＩＩ）
Ｒ1−ＣＯ2Ｈ (VII)
［式中、Ｒ1は、前記意味をもつ］
の遊離酸の形態にある化合物と一緒にし、そしてその化合物の先頭の基に結合さ
せるか、あるいは
［Ｂ］一般式（ＶＩＩＩ）
Ｒ1−ＣＯ−Ｗ−ＯＨ (VIII)
［式中、Ｒ1は、前記意味をもち、Ｗは、前記基Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅおよび／または
Ｇの１つまたは複数個を表す］
の化合物を、ペプチド化学における常法により、塩基および／または補
助剤の存在下、不活性溶媒中でアミン官能性を脱ブロッキング化し、そしてカル
ボン酸を活性化することによって、一般式（ＩＸ）
Ｙ−Ｒ2 (IX)
［式中、Ｒ2は、前記意味をもち、そしてＹは、水素を表すか、または前記アミ
ノ保護基の１つを表すか、特にＷに応じて、前記基Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅおよび／また
はＧの１つを表すかのいずれかである］
の化合物と反応させ、
次いで置換基Ｒ1およびＲ2が、適切であれば、常法によって変化される、ことを
特徴とする。
本発明による方法は、次の式によって示すことができる。
方法Ａ：
方法Ｂ：
適切な溶媒は、反応条件下で変化しない通常の有機溶媒である。これらは、好
ましくは、１，３−ジメチルテトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミドン（ＤＭＰＨ
）、１−メチルピロリドン、エーテル類、例えばジエチルエーテル、グリコール
モノメチルもしくはジメチルエーテル、ジオキサンもしくはテトラヒドロフラン
、またはベンゼン、トルエン、キシレン、シクロヘキサンもしくは石油フラクシ
ョンのような炭化水素類、または塩化メチレン、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ク
ロロホルム、四塩
化炭素のようなハロゲン化炭化水素類、または、ジメチルスルホキシド、ジメチ
ルホルムアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミド、酢酸エチル、ピリジン、トリ
エチルアミンまたはピコリン、のような有機溶媒を包含する。同様に、該溶媒の
混合物を使用することも可能である。ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジメチ
ルホルムアミドもしくは１−メチルピロリドンが、特に好適である。
方法［Ａ］における個々の活性化および結合段階のために好適なものは、ジメ
チルホルムアミド、メタン、ジエチルエーテルおよび氷酢酸である。
洗浄（方法［Ａ］）および結晶化（方法［Ｂ］）に好適に使用される溶剤は、
アルコール類、例えばメタノール、エタノールもしくはｎ−プロパノール、塩化
メチレンのようなハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、氷酢酸、ギ酸、およびエ
ーテル類、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルである。
メタノール、氷酢酸およびジエチルエーテルは、樹脂を洗浄するために好適で
ある。
方法［Ａ］において使用される塩基および／または補助剤は、ピペリジン、ジ
イソプロピルエチルアミンおよびテトラフルオロホウ酸 ２−（１Ｈ−ベンゾト
リアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムである。
方法［Ｂ］は、一般に、場合により活性化された形で存在する遊離カルボキシ
ル基をもつ１個または複数個のアミノ酸グルーピングからなる適切な断片と、遊
離アミノ基をもつ１個または複数個のアミノ酸グルーピングからなる補足的断片
との反応による、適切なより大きい断片の調
製によって起きる；続いて、保護基について適切である場合には、除去されたり
、他の保護基によって置換されることが可能である。
特定のペプチド結合に好適に使用される補助剤は、縮合剤であり、特に、カル
ボキシル基が、無水物として活性化されるならば、また塩基であってもよい。こ
のために使用される適切なものは、カルボジイミド類、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジエ
チルー、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルー、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド、塩酸Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイ
ミド、メト−ｐ−トルエンスルホン酸Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（２−モルホ
リノエチル）カルボジイミド（ＣＭＣＴ）、またはカルボニルジイミダゾールの
ようなカルボニル化合物類、または３−硫酸２−エチル−５−フェニル−１，２
−オキサゾリウムもしくは過塩素酸２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキ
サゾリウムのような１，２−オキサゾリウム化合物類、または２−エトキシ−１
−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンのようなアシルアミノ化合物
類、または無水ｎ−プロピルホスホン酸、またはクロロギ酸イソブチル、または
ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホ
スホニウムもしくはテトラフルオロホウ酸２−（１−ベンゾトリアゾール−１−
イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、のような慣用の縮合剤であ
る。
方法［Ａ］は、一般に、温度範囲１０℃〜３５℃、好ましくは２５℃で起きる
。方法［Ｂ］は、一般に、温度範囲−３０℃〜３５℃、好ましくは−２０℃〜２
５℃で起きる。
一般式（ＩＩ），（ＩＩＩ），（ＩＶ），（Ｖ），（ＶＩ）、（ＶＩＩ）およ
び（ＶＩＩａ）の化合物は、実質的に既知であり、そして場合
により活性化された形で存在する遊離カルボキシル基をもつ１個または複数個の
アミノ酸グルーピングからなる適切な断片と、遊離アミノ基をもつ１個または複
数個のアミノ酸グルーピングからなる補足的断片との反応によって、そして適切
なより大きい断片とのこの方法の繰り返しによって、調製することができる；続
いて、保護基について適切である場合には、除去されたり、他の保護基によって
置換されることが可能である。
特定のペプチド結合および式（ＶＩＩ）および（ＩＸ）の残基の導入に好適に
使用される補助剤は、縮合剤であり、特に、カルボキシル基が、無水物として活
性化される場合には、また塩基であってもよい。このために使用される適切なも
のは、カルボジイミド類、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−、Ｎ，Ｎ’−ジイソプ
ロピルー、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、塩酸Ｎ−（３−ジメチ
ルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド、メト−ｐ−トルエンス
ルホン酸Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド
（ＣＭＣＴ）、またはカルボニルジイミダゾールのようなカルボニル化合物類、
または３−硫酸２−エチル−５−フェニル−１，２−オキサゾリウムもしくは過
塩素酸２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムのような１，２−
オキサゾリウム化合物類、または２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，
２−ジヒドロキノリンのようなアシルアミノ化合物類、または無水ｎ−プロピル
ホスホン酸、またはクロロギ酸イソブチル、またはヘキサフルオロリン酸ベンゾ
トリアゾリルオキシートリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムもしくはテトラフ
ルオロホウ酸２−（１−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テ
トラメチルウロニ
ウム、のような慣用の縮合剤である。
反応は、大気圧下および加圧もしくは減圧下の両方で（例えば０．５〜５ｂａ
ｒ）、好ましくは大気圧下で実施され得る。
一般式（ＩＩ），（ＩＶ），（Ｖ），（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の化合物は、
実質的に既知であるか、常法によって調製することができる。
一般式（ＶＩＩ）および（ＩＸ）の化合物は、ある場合に既知であるか、また
は基ＷおよびＹが、また前記置換基Ｂを含む場合には、ある場合において新規で
あるが、次に、特に方法［Ａ］で詳述したように、ペプチド化学において常用さ
れる方法によって調製することができる。
本発明による化合物は、予期し得なかった価値ある薬理効果スペクトルを示す
。それらは、心臓の収縮性、平滑筋の緊張力および電解質と液のバランスに影響
を与える。
それ故、それらは、病的に変化した血圧および心不全の治療、および動脈硬化
性疾患のための薬物として使用することができる。
さらに、それらは、腎不全、肝硬変、腹水症、肺浮腫、脳浮腫、妊娠の浮腫も
しくは緑内障の治療のために使用することができる。
ＡＮＰ受容体リガンド：生体内試験
試験は、水以外の給餌を、前の晩に停止した雄のウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）
ラット（３００〜３５０ｇ）を用いて実施された。その動物は、チオペンタール
（１００ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）により麻酔された。気管切開の後、カテーテル
が、血圧の測定のために大腿動脈中に、また物質の投与のために大腿の静脈中に
挿入された。尿は、膀胱カテーテルを通して得られた。ラットの直腸温度は、加
温ランプによって３７．５±１℃に保たれた。その処置の終わりに、生理食塩水
５ｍｇ／ｋｇの注入
を受けたラットは、続いて、試験を通じて注入速度１．２ｍｌ／ｈの連続的注入
を受けた。手術的処置が、平衡状態まで１時間続けられて、その後ナトリウムの
定量のための尿の収集およびｃＧＭＰ排泄が開始された。各２０分間、２回の対
照採取の後、試験されるべき物質が、生理食塩水中の溶液として、６０分間注入
された。その試験は、１群当たり６動物により実施された。
ＡＮＰ Ｃ受容体試験の実験方法
約１０4ｈＡＮＰ Ｃ受容体を導入されたＣＨＯ細胞が、実験開始２日前に、
ミクロタイタープレートの１穴当たり接種される。培地は、実験開始前に吸引に
よって除去され、結合培地（ＤＭＥＭ／０．１％ＢＳＡ）１００ｐｌで置換され
る。続いて、前希釈された試験物質（最大１．０％ＤＭＳＯ）５０μｌおよび12 5
Ｉ−ＡＮＰ（最終濃度約３ｘ１０-11ｍｏｌ／ｌ）２５，０００ｃｐｍを含む結
合培地１００μｌが添加される。３７℃６０分間インキュベーション後、インキ
ュベーション培地が、吸引によって除去され、そして細胞が、氷冷ＤＭＥＭで２
回洗浄され、続いて、０．２ＭＮａＯＨ／１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００ ５０μｌ
中で、一夜溶解される。細胞溶解液は、水１００μｌで希釈され、ファーマシ−
Ｔトレー（ｐｈａｒｍａｃｙ Ｔ ｔｒａｙ）中に移され、そしてシンチレータ
ー２５０μｌが、Ｂｅｔａｐｌａｔｅカウンターにおいてシンチレーションカウ
ントするために添加される。
生データは、ＫiおよびＩＣ50値計算のために、コンピュータープログラムを
用いて解析される（Ｋi：使用された放射活性に対して修正されたＩＣ50値；
ＩＣ50：試験されるべき物質が、放射性リガンドの特異的結合の約５０％阻害を
もたらす濃度）。
エンケファリナーゼ活性の測定
アッセイ混合液は、エンドペプチダーゼ２４．１１ １１０μｌの容量で、ト
リス／ＨＣｌバッファーｐＨ７．４中ＫＣｌ ２５ｍｍｏｌ／ｌを含有する。酵
素濃度は、ラットにおける基質ＡＮＰ１０３−１２６（Bacham Biochemica）が
、実験期間中６０％分解されるように選択される。３７℃で５分間予備循環した
後、試験されるべき物質を、１０％ＤＭＳＯ中１０μｌの容量で添加する。３７
℃、３０分間インキュベーション後、２０％トリクロロ酢酸２０μｌおよびアセ
トニトリル５０μｌを添加して、反応を停止する。１０分後、１５０００ｇで３
分間、遠心を行い、上澄液５０μｌ中に残留するＡＮＰ１０３−１２６の量を、
ＨＰＬＣによって定量する。試験生成物の代わりに、１０％ＤＭＳＯ１０μｌを
含むサンプルを、比較のために使用する。
ＨＰＬＣ分析は、ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ ５μｍを充填されたミクロボア（
ｍｉｃｒｏｂｏｒｅ）カラムにおいて実施される。プレカラム（４．６ｘ１０ｍ
ｍ）は、ＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂＲＰ−１８（５μｍ）を含む。移動相Ａ：０．１
％Ｖ／Ｖ Ｈ3ＰＯ4中ＮａＣｌＯ4 ０．１ｍｏｌ／ｌ；移動相Ｂ：流速０．５
ｍｌ／ｍｉｎで４分間にアセトニトリル濃度勾配２２−５０％Ｂ、２０５ｎｍに
おける検出。
新規な活性物質は、既知の方法で、錠剤、コーティング錠、丸剤、顆粒剤、エ
アゾル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤および液剤のような通常の製剤に、不活性
な、無毒な薬学的に適切な添加剤もしくは溶媒を用いて変換することができる。
治療学的に有効な化合物は、これらの製剤中に、各場合、全混合物の重量で約０
．５〜９０％の濃度において、すなわち指示された用量範囲に達するために十分
な量において、存在する必
要がある。
製剤は、例えば、適切であれば乳化剤および／または分散剤を用いて、溶媒お
よび／または担体により活性物質を増量することによって調製されるが、例えば
、もし水が希釈剤として使用される場合には、場合により補助溶媒として有機溶
媒を使用することができる。
投与は、慣用の方法、好ましくは経口的もしくは非経口的に、特別には舌下に
もしくは静脈内に行われる。
一般に、静脈内投与で有効な結果を達成するためには、約０，００１〜１ｍｇ
／体重ｋｇ、好ましくは約０．０１〜０．５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与すること
が有利であることが証明されており、また経口投与の場合には、用量は、約０．
０１〜２０ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／体重ｋｇである。
それにもかかわらず、場合により、特に体重もしくは用法、薬物に対する個人
の反応、剤形の性質および投与される時間もしくは間隔に関連して、特定された
量とは差がでることも必要になろう。かくして、ある場合には、上記の最小量未
満による投与で十分なこともあり、反対に、他の場合には、述べられた上限を超
えねばならないこともある。比較的多量の投与においては、１日にわたり数回の
分割投与をすることが望ましいであろう。
使用されたＴＬＣ系
移動相：
I: 石油エーテル／ＥＡ 1:1
II: CH2Cl2／メタノール 85:15
III: CH2Cl2／メタノール／氷酢酸／水 65:25:4:6
IV: CH2Cl2／メタノール 95:5
V: CH2Cl2／メタノール 90:10
Va: CH2Cl2／メタノール／氷酢酸 90:10:0.05
Vb: CH2Cl2／メタノール／NH3 90:10:0.1
VI: ヘキサン／酢酸エチル 1:1
固定相: シリカゲル
使用されたＨＰＬＣ系
移動相Ａ：水９００ｍｌ中アセトニトリル１００ｍｌ；０．０５％ＴＦＡ添加
移動相Ｂ：水１００ｍｌ中アセトニトリル９００ｍｌ；０．０５％ＴＦＡ添加
濃度勾配１：ＡからＢへ１５分で、流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ
濃度勾配２：ＡからＢへ８分で、流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム： ＲＰ１８（１０μｍ）（Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰＢ１０，
１５０ｍｍｘ３．９ｍｍ）
使用された略語
ＴＦＡ： トリフルオロ酢酸
ＥＡ： 酢酸エチル
ＤＭＦ： ジメチルホルムアミド
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＴＢＴＵ：テトラフルオロホウ酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−
１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム
ＢＯＣ： １，１−ジメチルエトキシカルボニル
出発化合物
方法Ｂ
実施例Ｉ
Ｓ−β−（１，１−ジメチルエトキシ）アスパルチル−Ｎα−（δ−［１，１
−ジメチルエトキシカルボニル］）−Ｓ−オルニチン−２−メチルブチルアミド
（ペプチド化学における慣用法によって得られるＮα−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｓ−β−（１，１−ジメチルエトキシ）アスパルチル−Ｎα−（δ−［１，
１−ジメチルエトキシカルボニル］）−Ｓ−オルニチン−２−メチルブチルアミ
ドから出発）
出発化合物３．５２ｇ（５．８ｍｍｏｌ）を、メタノール６０ｍｌに溶解する
。アルゴン下で、活性炭上へのＰｄの１０％懸濁物７５０ｍｇを、続いてギ酸ア
ンモニウム１．８ｇ（２９ｍｍｏｌ）を添加する。不均質な混合液を、弱いアル
ゴン気流下で、１時間還流して加熱する。冷却後、ケイソウ土を通して吸引濾過
し、濾液を濃縮する。その残渣を、トリクロロメタンおよび水の間で分配する。
有機相を、高真空下で濃縮する。表題の化合物２．６９ｇを得る。
Ｒｆ（ＩＩＩ）：０．７（ＴＭＤ，ニンヒドリン）
実施例ＩＩ
１，１−ジメチルエトキシカルボニル−ｐ−アミノフェニル酢酸
ｐ−アミノフェニル酢酸４０ｇ（２６５ｍｍｏｌ）を、ジオキサン／Ｈ2Ｏ（
１／１）５００ｍｌに溶解する。その溶液を、２ＮＮａＯＨでｐＨ１０に調節す
る。次に、二炭酸ビス（１，１−ジメチルエチル）１１６ｇ（５３０ｍｍｏｌ）
を導入し、そのｐＨを、さらに２ＮＮａＯＨを添加して、ｐＨ１０に保つ。２０
時間後、ジオキサンをロータリーエバポレーターにおいて除去し、過剰の二炭酸
ビス（１，１−ジメチルエチル）を、ｐＨ１０でジエチルエーテルによる抽出に
よって除去する。飽和ＫＨＳＯ4水溶液でｐＨ２．０に酸性化した後、結晶形の
生成物を、吸引濾別し、冷水で洗浄する。ＫＯＨ上で乾燥後、得られる表題の化
合物の収量は、５８．３ｇである。
Ｒｆ（ＩＩ）＝０．６３。
実施例ＩＩＩ
Ｎα−１，１−ジメチルエトキシカルボニル−Ｓ−プロリル−Ｎα−Ｓ−イソ
ロイシン ベンジルエステル
Ｎα−１，１−ジメチルエトキシカルボニルプロリン６１．３ｇ（２８５ｍｍ
ｏｌ）を、ＴＢＴＵ １００．８ｇ（３１．４ｍｍｏｌ）と混合し、ＤＭＦ１０
０ｍｌ中に溶解する。活性化のために、ＤＩＥＡ １０９ｍｌ（６２．７ｍｍｏ
ｌ）を添加する。Ｓ−イソロイシン ベンジルエステル塩酸塩１０７ｇ（４１５
ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中に溶解する。３０分後、２つの溶液を併せて、１２時間
撹拌する。濃縮後、残渣を、
ＥＡに採取し、洗浄（１０％ＮａＨＣＯ3溶液で２回、Ｈ2Ｏで１回、飽和ＫＨＳ
Ｏ4溶液で３回）する。Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮する。生成物を、堅い泡とし
て得る。その粗生成物を、移動相として、石油エーテル／ＥＡ混合液７：１→１
：１の１時間かけての濃度勾配、流速３０ｍｌ／ｍｉｎを用いて、シリカゲルカ
ラム（６０ｘ１０ｃｍ）で精製する。純粋な生成物９８ｇを得る。
Ｒｆ（Ｉ）：０．４８。
実施例ＩＶ
Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシン ベンジルエステル、塩酸塩
実施例ＩＩＩからの化合物 ７６．１ｇ（１８２ｍｍｏｌ）を、氷酢酸中ＨＣ
ｌ溶液（１．５Ｎ）の４８０ｍｌ（７２０ｍｍｏｌ）と混合する。室温で１時間
後、その混合液を濃縮し、ジオキサンで採取し、さらに３回濃縮する。その残渣
を、Ｈ2Ｏから凍結乾燥すると、白色泡状物質７７．２ｇを得る。ＢＯＣの脱離
の完了は、ＮＭＲ分光法によって確認された。
実施例Ｖ
ｐ−（１，１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノフェニルアセチル−Ｎα
−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシン ベンジルエステル
実施例ＩＩからの化合物 ２０．８ｇ（８２．８ｍｍｏｌ）を、ＴＢＴＵ ２
７．７ｇ（８６．３ｍｍｏｌ）と混合する。その混合物を、ＤＩＥＡ３６ｍｌ（
２０７ｍｍｏｌ）を添加したＤＭＦ２００ｍｌ中に溶解する。３０分後、ＤＭＦ
中に溶解した実施例ＩＶからの化合物２．４５ｇ（６９ｍｍｏｌ）を添加する。
１２時間後、その混合液を、実施例ＩＩＩに記載したように精製する。表題の化
合物２４．１ｇを得る。
Ｒｆ（ＩＶ）＝０．４。
実施例ＶＩ
ｐ−（１，１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノフェニルアセチル−Ｎα
−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシン
実施例Ｖからの化合物２４．１ｇ（４３．７ｍｍｏｌ）を、メタノール２５０
ｍｌに溶解し、活性炭上Ｐｄの１０％懸濁物１ｇを添加する。その不均質混合物
を、Ｈ2 ３．６ｂａｒ下で１ ｌ Ｐａｒｒ装置において、４時間水素化する
。反応終結後、その混合液を吸引濾過し、溶媒を蒸発する。堅い泡状生成物１８
．５ｇを得る。
Ｒｆ（Ｖｂ）＝０．５。
実施例ＶＩＩ
ｐ−（１，１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノフェニルアセチル−Ｎα
−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシニル−Ｎα−Ｓ−（β−［１，１−ジメ
チルエトキシ］アスパルチル）−Ｎα−Ｓ−（δ−［１，１−ジメチルエトキシ
カルボニル］）オルニチン−２−メチルブチルアミド
実施例ＶＩからの化合物 １８．５ｇ（４０．１ｍｍｏｌ）を、ＴＢＴＵ １
４．１８ｇ（４４．１ｍｍｏｌ）と混合する。その混合物を、ＤＩＥＡ１０．５
ｍｌ（６０．１５ｍｍｏｌ）を添加したＤＭＦ２００ｍｌ中に溶解する。３０分
後、実施例Ｉからの化合物１９．９ｇ（４２．１ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。
１２時間の結合時間後、精製を、実施例ＩＩＩに記載したように実施する。表題
の化合物３０ｇを得る。
Ｒｆ（ＩＶ）＝０．４。
実施例ＶＩＩＩ
ｐ−アミノフェニルアセチル−Ｎα−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシニ
ル−Ｎα−Ｓ−（β−［１，１−ジメチルエトキシ］アスパルチル）−Ｎα−Ｓ
−（δ−［１，１−ジメチルエトキシカルボニル］）オルニチン−２−メチルブ
チルアミド塩酸塩
実施例ＶＩＩからの化合物３０ｇ（３２．７ｍｍｏｌ）を、実施例ＩＶに記載
したように反応させて、表題の化合物２９．５ｇを得る。
Ｒｆ（Ｖａ）＝０．４５。
実施例ＩＸ
４−チア−５，５，５−トリフェニルペンタン酸
３−メルカプトプロピオン酸８．７ｍｌ（１００ｍｍｏｌ）を、トリクロロメ
タン１４０ｍｌ中に溶解する。１−メチルピペリジン１２．１ｍｌ（１００ｍｍ
ｏｌ）、続いて、トリクロロメタン５０ｍｌ中塩化トリチル４１．８１ｇ（１５
０ｍｍｏｌ）溶液を滴下する。１時間後、抽出（５％ＮａＨＣＯ3溶液で２回；
Ｈ2Ｏで１回；飽和ＫＨＳＯ4溶液で１回）を実施し、続いて、中性までＨ2Ｏで
洗浄する。有機相を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濃縮する。その残渣を、１時間でジ
クロロメタン／メタノール２５：１→９：１の濃度勾配を用いて、シリカゲル（
３０ｘ８ｃｍ）でクロマトグラフィーを行う。表題の化合物１６．１６ｇを得る
。
Ｒｆ（Ｖ）＝０．６８。
実施例Ｘ
４−チア−５，５，５−トリフェニルペンタノイル−Ｎα−Ｓ−フェニルアラ
ニン ベンジルエステル
０℃において、実施例ＩＸからの化合物 ５ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）を、ＴＢ
ＴＵ ４．８ｇ（１５．０６ｍｍｏｌ）と混合し、そして、ＤＩＥＡ３．７５ｍ
ｌ（２１．５ｍｍｏｌ）を添加したＤＭＦ８０ｍｌ中に溶解する。フェニルアラ
ニン ベンジルエステル塩酸塩４．６ｇ（１５．８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中に溶
解し、ＤＩＥＡ２．７５ｍｌ（１５．７ｍｍｏｌ）を添加する。その溶液を０℃
に冷却し、第１の溶液に添加する。５時間後、精製を、実施例ＩＩＩに記載した
ように実施する。表題の化合物７．８ｇを得る。
Ｒｆ（Ｖ）＝０．５。
実施例ＸＩ
４−チア−５，５，５−トリフェニルペンタノイル−Ｎα−Ｓ−フェニルアラ
ニン
実施例Ｘからの化合物５ｇ（８．５ｍｍｏｌ）を、ジオキサン３０ｍｌに溶解
し、Ｈ2Ｏ１４ｍｌを添加する。その混合液を、０℃に冷却し、０℃において、
Ｈ2Ｏ１０ｍｌ中ＬｉＯＨｘＨ2Ｏ ５３０ｍｇ（１２．８ｍｍｏｌ）溶液を添加
する。その混合液を、ＲＴまで放置し、４８時間加水分解する。次いで、ジオキ
サンを蒸発させる。残渣を、ｐＨ１０においてジエチルエーテルで２回、そして
ｐＨ２においてＥＡで３回抽
出する。Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して、表題の化合物３．０ｇを得る。
Ｒｆ（Ｖａ）＝０．５４。
調製実施例
実施例１（方法Ａ）
Ｓ−（２−アセチルチオメチル−３−フェニル）プロパノイル−グリシニル−
グリシニル−Ｓ−プロリル−Ｓ−イソロイシニル−Ｓ−アスパルチル−Ｓ−アル
ギニル−Ｓ−イソロイシンアミド
合成は、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ ９０ Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｚｅｒにおいて実施される。合成用カラムは、乾燥Ｔｅｎｔａｇｅｌ
−Ｓ−ＮＨ2樹脂１．６ｇを充填する。装填後、そのカラムに、流速２０ｍｌ／
ｍｉｎで逆流してＤＭＦを満たす。正常流に転換後、平衡は、１０ｍｌ／ｍｉｎ
で５分間実施される。アミノ酸単位の９バイアルが、次のように満たされる：
合成は、次のように実施される：
１．アミノ酸単位
Ｆｍｏｃ−アミノ酸を、ＤＭＦ中０．６Ｍジイソプロピルエチルアミン溶液の
６．４ｍｌ中に、ＴＢＴＵとともに溶解する。その溶媒をピペットで注入後、ピ
ペッティング針で、１０秒間アルゴンを吹き込むことによって、２２回の混合操
作を実施する。
２．自動合成
Ｆｍｏｃ保護基を除去するために、ＤＭＦ中０．５Ｎピペリジン溶液を用いて
、７分間、流速７ｍｌ／ｍｉｎにおいて、その樹脂を洗浄する。ピペリジンを、
流速７ｍｌ／ｍｉｎでＤＭＦを用いる洗浄によって洗い出す。ピペッティング針
の内外をＤＭＦで洗浄し、活性化されたＦｍｏ
ｃ−アミノ酸を、サンプルループ（ｌｏｏｐ）中にピペッティングする。サンプ
ル６．４ｍｌ全部を収集した後、サンプルループの内容物を、減速された流速（
６．４ｍｌ／ｍｉｎ）でそのシステムにポンプで送る。次に、１．１分後、ポン
プによる循環を、流速７ｍｌ／ｍｉｎで６０分間実施する。結合期間を完了後、
ＤＭＦでの洗浄除去を、流速７ｍｌ／ｍｉｎで１０分間実施する。これと平行し
て、ピペッティング針の内外を洗浄し、合成の次の段階に備える。
合成サイクルの完了後、樹脂を、合成カラムから流出させ、１．メタノール
３ｘ７５ｍｌ、２．氷酢酸２ｘ７５ｍｌ、３．メタノール３ｘ７５ｍｌ、４．ジ
エチルエーテル３ｘ７５ｍｌを用いて、フリット（ｆｒｉｔ）上で洗浄する。デ
シケーター中で乾燥して、ペプチド樹脂２．０１ｇを得る。洗浄段階における容
量は、より大きいバッチに対しては、対応して増量される。
その樹脂を、ＴＦＡ、チオアニソール、ジチオトレイトール、フェノールおよ
び水（５：５：２．５：５：２）の混合液２０ｍｌとともにインキュベートし、
室温で１時間切り離す。
次いで、ＴＦＡ／ペプチド溶液を、吸引して濾取し、その樹脂を各回ＴＦＡ５
０ｍｌで３回洗浄する。
その濾液を、２０倍量のジエチルエーテルと混合し、生成物を沈殿させる。遠
心（３０００ｒｐｍ、５分）後、遠心分離物を、ジエチルエーテルで洗浄し、再
び、遠心分離し、デシケーター中で乾燥する。
ポリペプチドを、アセトニトリル１００ｍｌおよびＨ2Ｏ ９００ｍｌの混合
液１０ｍｌ中に溶解する。それを、調製用ＡｂｉｍｅｄＨＰＬＣシステムにおい
て、２５０ｘ３２ｍｍのカラムのＬｉｃｈｒｏｓｏｒ
ｂＲＰ−１８（１０μｍ）で分離する。移動相は、Ａ（アセトニトリル１００ｍ
ｌおよび水９００ｍｌ／ＴＦＡ０．５ｍｌ）およびＢ（アセトニトリル９００ｍ
ｌおよび水１００ｍｌ／ＴＦＡ０．５ｍｌ）である。濃度勾配液を、流速３０ｍ
ｌ／ｍｉｎで流す（図１、参照）。
ペプチド１７８ｍｇを得る（Ｒｆ＝７．４３）。
実施例２
Ｓ−（２−メルカプトメチル−３−フェニル）プロパノイル−グリシニル−グ
リシニル−Ｓ−プロリル−Ｓ−イソロイシニル−Ｓ−アスパルチル−Ｓ−アルギ
ニル−Ｓ−イソロイシンアミド
実施例Ｉからの化合物３５０ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を、メタノール１４ｍ
ｌに溶解する。エチルメルカプタン３５０μｌの添加後、加水分解を、Ｈ2Ｏ
５ｍｌ中ＬｉＯＨｘＨ2Ｏ ２０ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）により実施する。Ｒ
Ｔで４時間後、その混合液を中和し、実施例１において述べた調製用ＨＰＬＣシ
ステムで分離する。表題の化合物２３０ｍｇを得る。
Ｒｆ＝６．２１。
（方法［Ｂ］）
実施例３
４−チア−５，５，５−トリフェニルペンタノイル−Ｎα−Ｓ−フェニルアラ
ニル−ｐ−アミノフェニルアセチル−Ｎα−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイ
シニル−Ｎα−Ｓ−（β−［１，１−ジメチルエトキシ］アスパルチル）−Ｎα
−Ｓ−（δ−［１， １−ジメチルエトキシカルボニル］）オルニチン−２−メ
チルブチルアミド
実施例ＸＩからの化合物 ３．０ｇ（６．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＢＴＵ ２．
１３ｇ（６．６６ｍｍｏｌ）と混合し、そして、ＤＭＦ２０ｍｌ中に溶解する。
その溶液を、ＤＩＥＡ１．０５ｍｌ（１．５ｍｍｏｌ）を添加して、活性化する
。実施例ＶＩＩＩからの化合物６．０５ｇ（６．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中に溶
解し、活性化された溶液に添加する。室温で２４時間後、精製を、実施例ＩＩＩ
に記載したように実施する。表題の化合物５．０６ｇを得る。
実施例４
３−メルカプトプロパノイル−Ｎα−Ｓ−フェニルアラニル−ｐ−アミノフェ
ニルアセチル−Ｎα−Ｓ−プロピル−Ｎα−Ｓ−イソロイシニル−Ｎα−Ｓ−ア
スパルチル−Ｎα−Ｓ−オルニチン−２−メチルブチルアミド
実施例３からの化合物５ｇを、８５％ＴＦＡ、５％Ｈ2Ｏ、５％ｐ−クレゾー
ルおよび５％ジチオトレイトールの混合液３０ｍｌ中に溶解する。２時間後、そ
の溶液を、冷ジエチルエーテル２．５ ｌに添加する。ペプチドを、遠心によっ
て除去し、遠心分離物を、ＨＶ下でエーテル・
フリーにする。粗ペプチドを、２０％アセトニトリル／Ｈ2Ｏに溶解し、３０分
間に２０％→６０％アセトニトリルの濃度勾配により調製用ＨＰＬＣシステムで
分離する。表題の化合物２．５ｇを得る。
Detailed Description of the Invention
Novel acyclic, sulfur-containing peptide
The present invention has the effect of increasing the excretion of sodium, and is a novel non-toxic agent with reduced basicity.
In cyclic, sulphur-containing peptides, processes for their production, and in drugs, especially blood pressure lowering
Regarding their use as laxatives.
In the publication, there are two general classes of ANP receptors, guanylate cycler.
Those that bind zease (A / B receptors) and those that do not bind guanylate cyclase
(C receptor) of US Pat. A receptor and B receptor have a size of 120-
It is 140kDA, has a transmembrane region and is capable of translocating specific guanylyl cyclases
A type of protein that mediates the ANP effect (extracellular) on the cGMP system (intracellular)
It is a pak quality. Both receptor types bind ANP with high affinity, whereas B
The affinities for NP and CNP are different.
ANP A / B receptors are, for example, in endothelial cells, smooth vascular muscle cells, and
It occurs in the glomerular vascular membrane and epithelial cells. Biologically asymptomatic C receptor
, A 64kDA transmembrane protein homodimer is found in the renal cortex, blood vessels, and endothelium.
And spread to smooth muscle cells.
With C receptor ligands, if their core sequences are retained, the affinity
It is well known that size can be reduced extensively without loss. In vivo
The findings showed that the C receptor performed a clearance function.
Infusion of C-ANF (4-23) into anesthetized or conscious rats
Causes a reversible increase in endogenous ANP plasma levels and a decrease in blood pressure.
In connection, Maack et al.,
Science238 (1987), 675-678; Maack et al. In .: Bio1ogical and molecular
aspects of atrial factors, edited by P. Needleman, New York 1988, p.57-7
6, see). These effects were induced by the injection of ANP (1-28).
Equal to.
A C receptor ligand representing an ANP molecule truncated to 15 amino acids
, Is also known to exist.
Also in connection with this, the core sequence Arg-Ile-Asp-Arg-Ile (
RIDRI is also known to be essential for receptor affinity (in this context)
Lewicki et al. See U.S. Pat. No. 4,757,048).
In the peptides according to the invention, the position of the first arginine is non-basic, cyclic
It is occupied by amino acids which, surprisingly, are large in affinity.
Result in a large increase.
The invention relates to novel acyclic compounds of the general formula (I) having at least one sulfur-containing group.
It relates to peptides and their salts.
R1-CO-A-B-D-E-G-R2 (I)
In the formula,
A represents a direct bond or is a formula
[Wherein a, b, d and f are the same or different and the number 1
Kubo shows 2,
e indicates the number 0, 1 or 2,
R3Is hydrogen, linear or branched alkyl having up to 4 carbon atoms, or
Represents a mino protecting group,
RFourAnd RFiveAre the same or different and represent hydrogen or methyl
Or
RFourAnd RFiveTogether form a 5- or 6-membered saturated carbocyclic ring?
, Or
RFourRepresents hydrogen, and
RFiveIs cycloalkyl having 3 to 8 carbon atoms or 6 to 10 carbon atoms
With aryl or hydrogen, or straight chain with up to 8 carbon atoms or
Shows a branched alkyl,
In this case, alkyl can be cyano, mercapto, hydroxyl, guanidyl.
By a straight-chain or branched alkylthio having up to 6 carbon atoms, or
Formula-NR6R7Or R8-OC- (in the formula, R6And R7Independent of each other
, Hydrogen, formyl, also straight-chain or branched alkyl with up to 8 carbon atoms in each case
Preferably represents an acyl, phenyl or amino protecting group, R8Is hydroxyl,
Benzyloxy, alkoxy having up to 6 carbon atoms, silane having 3 to 6 carbon atoms
Chloroalkyloxy or the above group -NR6R7Depending on the
Has been replaced,
Alternatively, alkyl can be hydroxyl, halogen, nitro, up to 8 carbon atoms.
With alkoxy or with the group --NR6R7(In the formula, R6
And R7Have the above meanings) 3 to 8 carbon atoms which are sequentially substituted by
By cycloalkyl with or by aryl with 6-10 carbon atoms.
And, in some cases, has been replaced,
Alternatively, an alkyl is an alkyi with the appropriate --NH functionality having up to 6 carbon atoms.
5- or 6-membered nitrogen-containing compounds, optionally protected by amino groups or amino protecting groups.
Optionally substituted by a heterocycle or indolyl]
Represents the amino acid residue of
B is the formula
[In the formula, j represents the number 0, 1, 2, 3 or 4,
R9Is hydrogen, a hydroxyl protecting group, or a straight chain with up to 6 carbon atoms
Represents a branched acyl,
g represents the number 1, 2, or 3],
D, E and G are the same or different and have the meaning of B above, or
Or formula
[Wherein e'has the meaning of e above and is the same as or different from the latter
,
RI0Is the above R3Meaning the same as or different from the latter,
R11And R12Is the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is a group of
R1Represents a straight-chain or branched alkyl having up to 6 carbon atoms, or is pyridyl
Or represents quinolyl or a formula
[Wherein, R13Is hydrogen, or an alkyl having up to 6 carbon atoms, or a sulfur
Shows a yellow protecting group,
h indicates the number 1, 2, 3 or 4,
i and k are the same or different and represent the numbers 0 or 1,
R14And RFifteenAre the same or different and are hydrogen or carbon atom 6
Represents a linear or branched alkyl, phenyl or amino protecting group having up to
R16Is the above RFiveMeaning the same as or different from the latter,
l and l'are the same or different and represent the numbers 1 or 2,
m, n, o and p are the same or different and are the numbers 0, 1 or 2
Indicates that
R17Are the same or different depending on the halogen, hydroxyl or amino.
Even an aryl having 6 to 10 carbon atoms optionally substituted up to 3 times
Shows,
R18Is a straight-chain or branched alkyl having up to 6 carbon atoms, phenyl or
Shows naphthyl,
q represents the number 0 or 1],
R2Is the expression
[In the formula, r represents the number 0, 1 or 2,
R19Is the above R3Meaning the same as or different from the latter
,
R20And Rtwenty oneIs the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is something
s represents the number 0, 1 or 2,
Rtwenty twoAnd Rtwenty threeAre the same or different, and an amino protecting group, water
Elementary or cycloalkyl having 3 to 6 carbon atoms, phenyl, pyridyl or
-CO-NH2With up to 8 carbon atoms, optionally substituted by groups
Represents a straight chain or branched alkyl] group,
Represents a sulfur-containing amino acid residue for at least one of the groups A, D, E or G.
Suka, R1For, it is essential to show a sulfur-containing functional group.
The compounds according to the invention of the general formula (I) have several asymmetric carbon atoms. Those
May exist in the D or L form independently of each other. The present invention provides an optical enantiomer,
And a mixture of isomers or racemates. Groups A, B, D, E and G
Preferably exist independently of each other and are optically pure, preferably in the L form.
. Amino protecting groups for the purposes of the present invention are conventional protecting groups used in peptide chemistry.
Is an amino-protecting group of.
They are preferably benzyloxycarbonyl, 3,4-dimethoxybenzene.
Diloxycarbonyl, 3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4
-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl
4-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl
2-nitro-4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, methoxycar
Bonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl
Le, butoxical
Bonyl, isobutoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, allyloxy
Sicarbonyl, vinyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl
, 3,4,5-trimethoxybenzyloxycarbonyl, cyclohexoxy
Bonyl, 1,1-dimethylethoxycarbonyl, adamantylcarbonyl, lid
Royl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2,2,2-trichloro
-Tert-butoxycarbonyl, menthyloxycarbonyl, phenoxycal
Bonyl, 4-nitrophenoxycarbonyl, fluorenyl-9-methoxycarbo
Nyl, formyl, acetyl, propionyl, pivaloyl, 2-chloroacetyl,
2-bromoacetyl, 2,2,2-trifluoroacetyl, 2,2,2-tric
Loloacetyl, benzoyl, 4-chlorobenzoyl, 4-bromobenzoyl, 4
-Nitrobenzoyl, phthalimide, isovaleroyl, or benzyl oxime
Tylene, 4-nitrobenzyl, 2,4-dinitrobenzyl or 4-nitrofe
Including nil.
Physiologically acceptable salts are suitable for the purposes of the present invention. According to the invention
Physiologically acceptable salts of compounds are derived from mineral acids, carboxylic acids or sulphonic acids.
It may also be a salt of the substance according to the invention. Particularly suitable examples are hydrochloric acid, hydrobromic acid,
Sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid,
Benzene sulfonic acid, naphthalene disulfonic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, tartar
Salts with acids, citric acid, fumaric acid, maleic acid or benzoic acid.
Salts for the purposes of the present invention additionally comprise metal salts, preferably monovalent metal salts and
And ammonium salts. For example, sodium, potassium, lithium
Lucari metal salts and ammonium salts are preferred.
A hydroxyl protecting group falling within the scope of the above definition is tert-butoxydiphenyi
Rusilyl, trimethylsilyl, triethylsilyl, triisopropylsilyl, t
ert-butyl-dimethylsilyl, tert-butyldiphenylsilyl, trif
Phenylsilyl, trimethylsilylethoxycarbonyl, benzyl, 2-nitrobe
Benzyl, 4-nitrobenzyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 4-meth
Xybenzyl, formyl, acetyl, trichloroacetyl, 2,4-dimethoxy
Benzyl, methylthiomethyl, methoxyethoxymethyl, [2- (trimethyloxymethyl
Ryl) ethoxy] methyl, benzoyl, 4-methylbenzoyl, 4-nitroben
Zoyl, 4-fluorobenzoyl, 4-chlorobenzoyl or 4-methoxy
Protecting groups from the series including benzoyl are generally represented. Acetyl, benzoyl
, Benzyl or methylbenzyl are preferred.
Sulfur protecting groups falling within the above definition are generally acetamidomethyl, trif
Phenylmethyl (trityl), tert-butyl, 4-methoxybenzil, n-bu
Tylthio, tert-butylthio, diphenylmethyl, diphenyl-4-pyridy
Lumethyl, 4-methylbenzyl, 3,4-dimethylbenzyl, benzyl or
Represents a protecting group from the series including 4-picolyl. Triphenylmethyl, ter
t-Butyl and acetamidomethyl are preferred.
General formula (I)
A represents a direct bond or a formula
[Wherein a, b, d and f are the same or different and the number 1
Kubo shows 2,
e indicates the number 0, 1 or 2,
R3Is hydrogen, methyl, benzyloxycarbonyl (Z) or tert-
Represents butoxycarbonyl (BOC),
RFourAnd RFiveAre the same or different and represent hydrogen or methyl
Or
RFourAnd RFiveTogether form a cyclopentyl or cyclohexyl ring
Or
RFourRepresents hydrogen, and
RFiveRepresents cyclopentyl, cyclohexyl, phenyl or hydrogen, or
Or a straight or branched alkyl having up to 6 carbon atoms,
In this case, alkyl can be cyano, mercapto, hydroxyl, guanidyl.
Or by a straight-chain or branched alkylthio having up to 4 carbon atoms,
Or formula-NR6R7Or R8-OC- [in the formula, R6And R7Are independent of each other
And hydrogen, formyl, benzyloxycarbonyl, or in each case 4 carbon atoms
Straight or branched with up to
Alkyl or acyl, or tert-butoxycarbonyl (BOC)
Represent, R8Is hydroxyl, benzyloxy, alkene having up to 4 carbon atoms
Xy, cycloalkyl having 3 to 6 carbon atoms, or the above group -NR6R7Indicates
] Optionally substituted by a group of
Alternatively, alkyl is fluorine, hydroxyl, nitro or up to 4 carbon atoms.
Cyclohexyl and naphthyl, which may be sequentially substituted by an alkoxy having
Or is it replaced by phenyl,
Alternatively, an alkyl is an alkyi with the appropriate --NH functionality having up to 4 carbon atoms.
Indolyl, imido, optionally protected by an amino protecting group or by an amino protecting group.
Substituted by dazolyl, pyridyl, triazolyl or pyrazolyl
The amino acid residue of
B is the formula
[In the formula, j represents the number 0, 1, 2, or 3,
R9Is hydrogen, benzyl, benzoyl or even a straight chain having up to 6 carbon atoms
Or a branched acyl,
g represents the number 1, 2, or 3],
D, E and G are the same or different and have the meaning of B above, or
Or formula
[Wherein e'has the meaning of e above and is the same as or different from the latter
,
RTenIs the above R3Meaning the same as or different from the latter,
Rl1And R12Is the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is a group of
R1Represents a straight chain or branched alkyl having up to 4 carbon atoms, or
Represents or is represented by lysyl or quinolyl
[Wherein, R13Is hydrogen, alkyl having 1 to 4 C atoms, acetamidomethyl
Or represents a trityl group,
h indicates the number 1, 2 or 3,
i and k are the same or different and represent the numbers 0 or 1,
R14And RFifteenAre the same or different and are hydrogen or four carbon atoms
Linear or branched alkyl having up to, phenyl, benzyloxycarbonyl (
Z) or tert-butoxycarbonyl,
R16Is the above RFiveMeaning the same as or different from the latter,
l and l'are the same or different and represent the numbers 1 or 2,
m, n, o and p are the same or different and are the numbers 0, 1 or 2
Indicates that
R17Are identical by fluorine, chlorine, bromine, hydroxyl or amino.
Phenyl or naphthyl optionally substituted up to twice, even if different
Indicates that
R18Is a linear or branched alkyl or phenyl having up to 4 carbon atoms
Shows,
q represents the number 0 or 1],
R2But the expression
[In the formula, r represents the number 0, 1 or 2,
R19Is the above R3Meaning the same as or different from the latter,
R20And Rtwenty oneIs the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is something
s represents the number 0, 1 or 2,
Rtwenty twoAnd Rtwenty threeAre the same or different, and benzyloxyca
Rubonyl (Z), tert-butoxycarbonyl, pivaloyl, hydrogen, or cis.
Optionally with clopentyl, cyclohexyl, phenyl or pyridyl
Represents a straight-chain or branched alkyl having up to 6 carbon atoms, which is substituted with
Represents a group,
Groups A, D, E, G or R1At least one of the
Are essential] and the compounds of formula (I) and salts thereof are preferred.
Of the general formula (I),
A represents a direct bond or a formula
[In the formula, f represents the number 1 or 2,
e represents the number 0 or 1,
R3Is hydrogen, methyl, benzyloxycarbonyl (Z) or tert-
Represents butoxycarbonyl (BOC),
RFourAnd RFiveAre the same or different and represent hydrogen or methyl
Or
RFourAnd RFiveTogether form a cyclopentyl or cyclohexyl ring
Or
RFourRepresents hydrogen, and
RFiveRepresents cyclopentyl, cyclohexyl or hydrogen, or carbon
A straight-chain or branched alkyl having up to 5 atoms is provided, where alkyl is
, Cyano, hydroxyl, guanidyl or of the formula-NR6R7Or R8
-CO- (In the formula, R6And R7Are, independently of each other, hydrogen, up to 4 carbon atoms
A straight-chain or branched alkyl with tert-butoxycarbonyl (BOC) or
Or butyl,
R8Is hydroxyl, benzyloxy, alkoxy with up to 3 carbon atoms
Or the above group -NR6R7Is optionally substituted by a group of
,
Alternatively, alkyl may be fluorine, hydroxyl, chlorine or up to 4 carbon atoms.
Cyclohexyl and naphthyl, which can be sequentially substituted with alkoxy
Is substituted by phenyl,
Alternatively, the alkyl may have an NH functionality of methyl, benzyloxymethylene or
Is optionally protected by tert-butoxycarbonyl (BOC)
By indolyl, imidazolyl, triazolyl, pyridyl or pyrazolyl
Are substituted] amino acid residues
Represents
B is the formula
[In the formula, j represents the number 0, 1, 2, or 3,
R9Is hydrogen, benzyl or a straight or branched chain containing up to 4 carbon atoms.
Showing sill,
g represents the number 1, 2, or 3],
D, E and G are the same or different and have the meaning of B above, or
Or formula
[Wherein e'has the meaning of e above and is the same as or different from the latter
,
RTenIs the above R3Meaning the same as or different from the latter,
R1lAnd R12Is the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is a group of
R1Represents a straight chain or branched alkyl having up to 4 carbon atoms, or
Represents or is represented by lysyl or quinolyl
[Wherein, R13Is hydrogen, alkyl having 1 to 4 C atoms, acetamidomethyl
Or represents a trityl group,
h indicates the number 1 or 2,
i and k are the same or different and represent the numbers 0 or 1,
R14And RFifteenAre the same or different and are hydrogen or four carbon atoms
Straight or branched alkyl with up to, phenyl, benzyl
Oxycarbonyl (Z) or tert-butoxycarbonyl,
R16Is the above RFiveMeaning the same as or different from the latter,
l and l'are the same or different and represent the numbers 1 or 2,
m, n, o and p are the same or different and are the numbers 0, 1 or 2
Indicates that
R17May be the same or different twice with fluorine, chlorine or bromine.
Represents optionally substituted phenyl or naphthyl,
Rl8Represents a straight chain or branched alkyl having up to 3 carbon atoms,
q represents the number 0 or 1],
R2But the expression
[In the formula, r represents the number 0, 1 or 2,
R19Is the above R3Meaning the same as or different from the latter,
R20And Rtwenty oneIs the above RFourAnd RFiveMeaning the same as or different from the latter
Is something
s represents the number 0, 1 or 2,
Rtwenty twoAnd Rtwenty threeAre the same or different, and benzyloxyca
Rubonyl (Z), tert-butoxycarbonyl, pivaloyl, hydrogen, or cis.
Clopentyl, cyclohexyl, phenyl
Is also a straight chain having up to 6 carbon atoms, optionally substituted by pyridyl
Or a branched alkyl group],
In this case, the groups A, D, E, G or R are always1At least one of the sulfur-containing
Embedded image embedded image compounds of formula (I) and salts thereof are particularly preferred.
Furthermore, a process for the preparation of compounds according to the invention of general formula (I) has been found,
The method is such that when the terminal R2 represents a free amide group,
[A] General formulas (II), (III), (IV), (V) and (VI)
L-A-OH (II), M-B-OH (III),
Q-D-OH (IV), T-E-OH (V) and
VG-OH (VI)
[Wherein A, B, D, E and G have the above-mentioned meanings, and L, M, Q, T and V
Represents one of the amino protecting groups, preferably Fmoc]
Of the specific amino acid sequence of
And / or parallel deblocking and activation to give formula (VII)
R1-CO2H (VII)
[Wherein, R1Has the above meaning]
With a compound in the free acid form of and attached to the leading group of that compound.
Or
[B] General formula (VIII)
R1-CO-W-OH (VIII)
[Wherein, R1Has the above-mentioned meaning, and W is the above-mentioned group A, B, D, E and / or
Represents one or more of G]
Of a compound of
Deblock the amine functionality in an inert solvent in the presence of a co-agent, and calcine
By activating the boric acid, the general formula (IX)
Y-R2 (IX)
[Wherein, R2Has the above-mentioned meaning, and Y represents hydrogen, or
Represents one of the above protecting groups or, depending on W in particular, the groups A, B, D, E and / or
Is any one of G]
React with the compound of
Then the substituent R1And R2Is, if appropriate, modified by conventional methods
Features.
The method according to the invention can be shown by the following formula:
Method A:
Method B:
Suitable solvents are the customary organic solvents which do not change under the reaction conditions. These are good
More preferably, 1,3-dimethyltetrahydro-2 (1H) -pyrimidone (DMPH
), 1-methylpyrrolidone, ethers such as diethyl ether, glycol
Monomethyl or dimethyl ether, dioxane or tetrahydrofuran
, Or benzene, toluene, xylene, cyclohexane or petroleum flux
Hydrocarbons such as hydrogen chloride, methylene chloride, dichloroethane (DCE),
Loloform, tetrasalt
Halogenated hydrocarbons such as carbon dioxide, dimethylsulfoxide, dimethyl
Ruformamide, hexamethylphosphoric triamide, ethyl acetate, pyridine, tri
Includes organic solvents such as ethylamine or picoline. Similarly, the solvent
It is also possible to use mixtures. Dichloromethane, dichloroethane, dimethyl
Ruformamide or 1-methylpyrrolidone are particularly preferred.
Suitable for the individual activation and binding steps in method [A] are
Tylformamide, methane, diethyl ether and glacial acetic acid.
Suitable solvents for washing (method [A]) and crystallization (method [B]) are
Alcohols such as methanol, ethanol or n-propanol, chloride
Halogenated hydrocarbons such as methylene, ethyl acetate, glacial acetic acid, formic acid, and ether.
Ethers such as diethyl ether and diisopropyl ether.
Methanol, glacial acetic acid and diethyl ether are suitable for washing the resin.
is there.
Bases and / or auxiliaries used in method [A] are piperidine, di-
Isopropylethylamine and tetrafluoroboric acid 2- (1H-benzoto
Riazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium.
Method [B] generally involves the free carboxy, optionally present in the activated form.
A suitable fragment consisting of one or more amino acid groupings with
A complementary fragment consisting of one or more amino acid groupings with isolated amino groups
A suitable larger fragment by reaction with
Caused by production; subsequently removed, if appropriate for protecting groups
, Can be substituted by other protecting groups.
Auxiliaries preferably used for specific peptide bonds are condensing agents, in particular
The voxyl group may also be a base provided it is activated as an anhydride. This
Suitable used for are carbodiimides such as N, N'-die
Tiru, N, N'-diisopropyl-, N, N'-dicyclohexylcarbodiyl
Mido, N- (3-dimethylaminoisopropyl) -N'-ethylcarbodiyl hydrochloride
Mido, meto-p-toluenesulfonic acid N-cyclohexyl-N '-(2-morpho
Rinoethyl) carbodiimide (CMCT), or carbonyldiimidazole
Such carbonyl compounds, or 3-ethyl 2-sulfate-5-phenyl-1,2
-Oxazolium or 2-tert-butyl-5-methylisooxy perchlorate
1,2-Oxazolium compounds such as sazolium, or 2-ethoxy-1
-Acylamino compounds such as ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline
, Or n-propylphosphonic anhydride, or isobutyl chloroformate, or
Benzotriazolyloxy hexafluorophosphate-tris (dimethylamino) pho
Sulfonium or tetrafluoroborate 2- (1-benzotriazole-1-
A conventional condensing agent such as yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium.
It
Method [A] generally occurs in the temperature range 10 ° C to 35 ° C, preferably 25 ° C.
. Method [B] generally comprises a temperature range of -30 ° C to 35 ° C, preferably -20 ° C to 2
It happens at 5 ° C.
Formulas (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII) and
(VIIa) are substantially known, and in some cases
With one or more free carboxyl groups present in activated form by
Appropriate fragments consisting of amino acid groupings and one or more amino acids with free amino groups.
And by reaction with a complementary fragment consisting of several amino acid groupings
Can be prepared by repeating this method with any larger fragment;
And if it is appropriate for the protecting group, it may be removed or replaced by another protecting group.
Can be replaced.
Suitable for the introduction of specific peptide bonds and residues of formula (VII) and (IX)
The auxiliary agent used is a condensing agent, and in particular, the carboxyl group is activated as an anhydride.
When activated, it may also be a base. The proper one used for this
Is a carbodiimide such as N, N'-diethyl-, N, N'-diisopropene.
Ropiro, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethyl) hydrochloride
Luaminoisopropyl) -N'-ethylcarbodiimide, meto-p-toluene
Rufonic acid N-cyclohexyl-N '-(2-morpholinoethyl) carbodiimide
(CMCT), or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole,
Or 3-ethyl 2-sulfate-5-phenyl-1,2-oxazolium or persulfate
1,2-such as 2-tert-butyl-5-methylisoxazolium chlorate
Oxazolium compounds, or 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,
Acylamino compounds such as 2-dihydroquinoline or anhydrous n-propyl
Phosphonic acid, or isobutyl chloroformate, or benzohexafluorophosphate
Triazolyloxy-tris (dimethylamino) phosphonium or tetraf
Luoroboric acid 2- (1-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-thero
Tramethyluroni
Conventional condensing agents such as um.
The reaction is carried out both under atmospheric pressure and under increased or reduced pressure (for example 0.5 to 5 ba).
r), preferably under atmospheric pressure.
The compounds of general formulas (II), (IV), (V), (VI) and (VII) are
It is substantially known or can be prepared by a conventional method.
The compounds of the general formulas (VII) and (IX) are known in some cases, or
Is new in some cases if the groups W and Y also contain said substituents B.
However, it is commonly used in peptide chemistry, especially as detailed in method [A].
Can be prepared by the method described above.
The compounds according to the invention show an unforeseeable, valuable spectrum of pharmacological effects.
. They influence the contractility of the heart, the tone of smooth muscles and the balance of electrolytes and fluids.
give.
Therefore, they are used to treat pathologically altered blood pressure and heart failure, and arteriosclerosis.
It can be used as a drug for sexual disorders.
In addition, they are also associated with renal failure, cirrhosis, ascites, pulmonary edema, cerebral edema, edema of pregnancy.
It can be used for the treatment of glaucoma.
ANP receptor ligands: in vivo studies
The test was conducted by a male Wistar who stopped feeding other than water the night before.
It was performed using rats (300-350 g). The animal is thiopental
Anesthetized with (100 mg / kg ip). After tracheostomy, catheter
In the femoral artery for blood pressure measurements and in the femoral vein for substance administration.
Was inserted. Urine was obtained through a bladder catheter. The rectal temperature in rats is
It was kept at 37.5 ± 1 ° C by a warm lamp. At the end of the procedure, saline
5 mg / kg infusion
The rats that received the treatment were then continuously infused at an infusion rate of 1.2 ml / h throughout the test.
Received. The surgical procedure is continued for 1 hour to equilibrium, after which sodium
Collection of urine for quantification and cGMP excretion was initiated. 20 minutes each, 2 pairs
After harvesting, the substance to be tested is infused for 60 minutes as a solution in saline.
Was done. The test was performed with 6 animals per group.
Experimental method for ANP C receptor test
About 10FourCHO cells transfected with hANP C receptor were
Inoculate per well of a microtiter plate. The medium should be aspirated before starting the experiment.
Thus removed and replaced with 100 pl of binding medium (DMEM / 0.1% BSA)
It Subsequently, 50 μl of prediluted test substance (up to 1.0% DMSO) and12 Five
I-ANP (final concentration about 3x10-11mol / l) Containing 25,000 cpm
100 μl of combined medium is added. After incubation at 37 ℃ for 60 minutes,
Incubation medium was removed by aspiration and cells were washed with ice-cold DMEM.
Washed twice, followed by 50 μl 0.2 M NaOH / 1% Triton X100
Inside, dissolved overnight. The cell lysate was diluted with 100 μl of water, and
Transferred into T tray (pharmacy T tray), and scintillator
-250 μl of scintillation cow at Betaplate counter
Is added to control
Raw data is KiAnd IC50Use a computer program to calculate the value
Parsed using (Ki: IC corrected for radioactivity used50value;
IC50: The substance to be tested inhibits about 50% of the specific binding of the radioligand
Concentration to bring).
Measurement of enkephalinase activity
The assay mixture had a volume of 110 μl of endopeptidase 24.11,
Contains 25 mmol / l KCl in squirrel / HCl buffer pH 7.4. Fermentation
The substrate concentration of ANP103-126 (Bacham Biochemica) in rats was
, Selected to be 60% degraded during the experiment. Pre-circulated at 37 ° C for 5 minutes
The substance to be tested is then added in a volume of 10 μl in 10% DMSO. 37
After incubation at 30 ° C for 30 minutes, 20 μl of 20% trichloroacetic acid and acetone were added.
The reaction is stopped by adding 50 μl of trinitrile. 10 minutes later, 3 at 15000g
Centrifuge for 5 minutes to determine the amount of ANP103-126 remaining in 50 μl of the supernatant.
Quantify by HPLC. 10 μl of 10% DMSO instead of test product
The containing sample is used for comparison.
HPLC analysis showed that Hypersil ODS 5 μm filled microbore (
microbore) column. Pre-column (4.6x10m
m) contains Lichrosorb RP-18 (5 μm). Mobile phase A: 0.1
% V / V H3POFourMedium NaClOFour 0.1 mol / l; mobile phase B: flow rate 0.5
Acetonitrile concentration gradient of 22-50% B, 205 nm for 4 minutes at ml / min
Detection.
The novel active substances can be prepared by known methods in the form of tablets, coated tablets, pills, granules,
Inactive in conventional formulations such as azoles, syrups, emulsions, suspensions and solutions
It can be converted using a non-toxic pharmaceutically suitable additive or solvent.
The therapeutically active compound is present in these preparations in each case in an amount of about 0 by weight of the total mixture.
． Sufficient to reach the indicated dose range at concentrations of 5-90%, ie
Must exist in any amount
It is necessary.
The formulation may be formulated with a solvent and an emulsifier and / or dispersant, if appropriate.
And / or is prepared by extending the active substance with a carrier, for example
, If water is used as a diluent, it may optionally be used as an organic solvent as a cosolvent.
A medium can be used.
Administration is by conventional methods, preferably orally or parenterally, especially sublingually.
Or it is performed intravenously.
Generally, about 0.001 to 1 mg to achieve effective results with intravenous administration
/ Kg body weight, preferably about 0.01-0.5 mg / kg body weight
Has proven to be advantageous, and in the case of oral administration, the dose is about 0.
The amount is 01 to 20 mg / kg body weight, preferably 0.1 to 10 mg / kg body weight.
Nevertheless, in some cases, especially with respect to weight or usage, drugs
Response, the nature of the dosage form and the time or interval of administration
It may be necessary to make a difference from the quantity. Thus, in some cases, the minimum amount
Full dosing may be sufficient, on the contrary, in other cases, the stated upper limit may be exceeded.
There are some things you have to do. In relatively large doses, several times daily
It may be desirable to give divided doses.
TLC system used
Mobile phase:
I: Petroleum ether / EA 1: 1
II: CH2Cl2/ Methanol 85:15
III: CH2Cl2/ Methanol / glacial acetic acid / water 65: 25: 4: 6
IV: CH2Cl2/ Methanol 95: 5
V: CH2Cl2/ Methanol 90:10
Va: CH2Cl2/ Methanol / glacial acetic acid 90: 10: 0.05
Vb: CH2Cl2/ Methanol / NH3 90: 10: 0.1
VI: Hexane / ethyl acetate 1: 1
Stationary phase: silica gel
HPLC system used
Mobile phase A: 100 ml of acetonitrile in 900 ml of water; addition of 0.05% TFA
Mobile phase B: 900 ml of acetonitrile in 100 ml of water; addition of 0.05% TFA
Concentration gradient 1: A to B in 15 minutes, flow rate 1.5 ml / min
Concentration gradient 2: from A to B in 8 minutes, flow rate 1.5 ml / min
Column: RP18 (10 μm) (Vydac218TPB10,
(150 mm x 3.9 mm)
Abbreviations used
TFA: trifluoroacetic acid
EA: ethyl acetate
DMF: dimethylformamide
DIEA: diisopropylethylamine
TBTU: 2- (1H-benzotriazole-tetrafluoroborate-
1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium
BOC: 1,1-dimethylethoxycarbonyl
Starting compound
Method B
Example I
S-β- (1,1-dimethylethoxy) aspartyl-Nα- (δ- [1,1
-Dimethylethoxycarbonyl])-S-ornithine-2-methylbutyramide
(Nα-benzyloxycarboni obtained by conventional methods in peptide chemistry
Ru-S-β- (1,1-dimethylethoxy) aspartyl-Nα- (δ- [1,
1-dimethylethoxycarbonyl])-S-ornithine-2-methylbutylami
Depart from Do)
3.52 g (5.8 mmol) of the starting compound are dissolved in 60 ml of methanol.
. Under argon, 750 mg of a 10% suspension of Pd on activated carbon was added, followed by formic acid acetate.
1.8 g (29 mmol) of ammonium is added. A heterogeneous mixture is
Heat under reflux for 1 hour under a gon stream. After cooling, suction filtration through diatomaceous earth
And concentrate the filtrate. The residue is partitioned between trichloromethane and water.
The organic phase is concentrated under high vacuum. 2.69 g of the title compound are obtained.
Rf (III): 0.7 (TMD, ninhydrin)
Example II
1,1-dimethylethoxycarbonyl-p-aminophenylacetic acid
40 g (265 mmol) of p-aminophenylacetic acid was added to dioxane / H.2O (
1/1) Dissolve in 500 ml. Adjust the solution to pH 10 with 2N NaOH
It Next, 116 g (530 mmol) of bis (1,1-dimethylethyl) dicarbonate.
Is introduced and its pH is maintained at pH 10 by adding more 2N NaOH. 20
After hours, dioxane was removed on a rotary evaporator to remove excess dicarbonate.
Bis (1,1-dimethylethyl) at pH 10 for extraction with diethyl ether
Therefore, it is removed. Saturated KHSOFourAfter acidification to pH 2.0 with an aqueous solution, the crystalline form
The product is filtered off with suction and washed with cold water. After drying over KOH, the title compound obtained is
The yield of the compound is 58.3 g.
Rf (II) = 0.63.
Example III
Nα-1,1-dimethylethoxycarbonyl-S-prolyl-Nα-S-iso
Leucine benzyl ester
Nα-1,1-dimethylethoxycarbonylproline 61.3 g (285 mm
ol) was mixed with 100.8 g (31.4 mmol) of TBTU, and DMF10
Dissolve in 0 ml. For activation, 109 ml of DIEA (62.7 mmo
l) is added. 107 g of S-isoleucine benzyl ester hydrochloride (415
mmol) is dissolved in DMF. After 30 minutes, combine the two solutions for 12 hours
Stir. After concentration, the residue is
Collect in EA and wash (10% NaHCO 332 times with solution, H2Saturated KHS once with O
OFourSolution 3 times). Na2SOFourDry with and concentrate. Turn the product into a firm foam
Get The crude product was used as a mobile phase, petroleum ether / EA mixed solution 7: 1 → 1.
: 1 using a concentration gradient over 1 hour and a flow rate of 30 ml / min.
Purify on ram (60 x 10 cm). 98 g of pure product are obtained.
Rf (I): 0.48.
Example IV
S-propyl-Nα-S-isoleucine benzyl ester, hydrochloride
76.1 g (182 mmol) of the compound from Example III was treated with HC in glacial acetic acid.
1 solution (1.5 N) mixed with 480 ml (720 mmol). 1 hour at room temperature
After that, the mixture is concentrated, taken up with dioxane and concentrated three more times. The residue
To H2Lyophilization from O gives 77.2 g of white foam. Desorption of BOC
Was confirmed by NMR spectroscopy.
Example V
p- (1,1-dimethylethoxycarbonyl) aminophenylacetyl-Nα
-S-propyl-Nα-S-isoleucine benzyl ester
20.8 g (82.8 mmol) of the compound from Example II was added to TBTU 2
Mix with 7.7 g (86.3 mmol). 36 ml of DIEA (
207 mmol) dissolved in 200 ml of DMF. 30 minutes later, DMF
2.45 g (69 mmol) of the compound from Example IV dissolved therein are added.
After 12 hours, the mixture is purified as described in Example III. Change of title
24.1 g of compound are obtained.
Rf (IV) = 0.4.
Example VI
p- (1,1-dimethylethoxycarbonyl) aminophenylacetyl-Nα
-S-propyl-Nα-S-isoleucine
24.1 g (43.7 mmol) of the compound from Example V were added to methanol 250
Dissolve in ml and add 1 g of a 10% suspension of Pd on activated carbon. The heterogeneous mixture
To H2 Hydrogenate in 1 l Parr apparatus under 3.6 bar for 4 hours
. After the reaction has ended, the mixture is suction filtered and the solvent is evaporated. Rigid foamy product 18
． 5 g are obtained.
Rf (Vb) = 0.5.
Example VII
p- (1,1-dimethylethoxycarbonyl) aminophenylacetyl-Nα
-S-propyl-Nα-S-isoleucinyl-Nα-S- (β- [1,1-dim
Cylethoxy] aspartyl) -Nα-S- (δ- [1,1-dimethylethoxy
Carbonyl]) Ornithine-2-methylbutyramide
18.5 g (40.1 mmol) of the compound from Example VI was added to TBTU 1
Mix with 4.18 g (44.1 mmol). The mixture was mixed with DIEA 10.5
Dissolve in 200 ml of DMF with the addition of ml (60.15 mmol). 30 minutes
Afterwards a solution of 19.9 g (42.1 mmol) of the compound from Example I is added.
After a binding time of 12 hours, purification is carried out as described in Example III. title
30 g of the compound of
Rf (IV) = 0.4.
Example VIII
p-Aminophenylacetyl-Nα-S-propyl-Nα-S-isoleucine
Le-Nα-S- (β- [1,1-dimethylethoxy] aspartyl) -Nα-S
-(Δ- [1,1-Dimethylethoxycarbonyl]) ornithine-2-methylbu
Tilamide hydrochloride
30 g (32.7 mmol) of the compound from Example VII are described in Example IV.
Reaction as above affords 29.5 g of the title compound.
Rf (Va) = 0.45.
Example IX
4-thia-5,5,5-triphenylpentanoic acid
8.7 ml (100 mmol) of 3-mercaptopropionic acid was added to trichloromethane.
Dissolve in 140 ml of tan. 12.1 ml of 1-methylpiperidine (100 mm
ol), followed by 41.81 g (15%) trityl chloride in 50 ml trichloromethane.
0 mmol) solution is added dropwise. After 1 hour, extract (5% NaHCO 33Twice with solution;
H2Once with O; saturated KHSOFourSolution once) followed by H 2 until neutral.2At O
Wash. Dry the organic phase (Na2SOFour) And concentrate. The residue was
Chloromethane / methanol 25: 1 → 9: 1 using a gradient of silica gel (
Chromatography at 30 x 8 cm). 16.16 g of the title compound are obtained
.
Rf (V) = 0.68.
Example X
4-Thia-5,5,5-triphenylpentanoyl-Nα-S-phenylara
Nin benzyl ester
At 0 ° C., 5 g (14.3 mmol) of the compound from Example IX was added to TB
Mix with 4.8 g of TU (15.06 mmol) and DIEA 3.75 m
Dissolve in 80 ml of DMF with the addition of 1 (21.5 mmol). Phenylara
Dissolve 4.6 g (15.8 mmol) of nin benzyl ester hydrochloride in DMF.
Dissolve and add 2.75 ml (15.7 mmol) of DIEA. The solution at 0 ° C
Cool to and add to the first solution. After 5 hours, purification was described in Example III.
To carry out. 7.8 g of the title compound are obtained.
Rf (V) = 0.5.
Example XI
4-Thia-5,5,5-triphenylpentanoyl-Nα-S-phenylara
Nin
Dissolve 5 g (8.5 mmol) of the compound from Example X in 30 ml dioxane.
And H2Add 14 ml O. The mixture is cooled to 0 ° C. and at 0 ° C.
H2LiOHxH in O10ml2O 530 mg (12.8 mmol) solution was added
To do. The mixture is left to RT and hydrolyzed for 48 hours. Then Geoki
Evaporate the sun. The residue is washed twice with diethyl ether at pH 10 and
Extract 3 times with EA at pH 2
Put out. Na2SOFourDry over and concentrate to give 3.0 g of the title compound.
Rf (Va) = 0.54.
Preparation examples
Example 1(Method A)
S- (2-acetylthiomethyl-3-phenyl) propanoyl-glycinyl-
Glycinyl-S-prolyl-S-isoleucinyl-S-aspartyl-S-ar
Guinyl-S-isoleucine amide
The synthesis was carried out by Milligen 90 Continuous Flow Syn.
performed in the thesizer. The column for synthesis is dried Tentagel
-S-NH2Fill with 1.6 g of resin. After loading, the column was loaded with a flow rate of 20 ml /
Backflow at min to fill DMF. Equilibrium is 10 ml / min after conversion to normal flow
For 5 minutes. Nine vials of amino acid units are filled as follows:
The synthesis is carried out as follows:
1. Amino acid unit
Fmoc-amino acid in a 0.6 M solution of diisopropylethylamine in DMF.
Dissolve with TBTU in 6.4 ml. After injecting the solvent with a pipette,
Twenty-two mixing operations were performed by bubbling argon through the petting needle for 10 seconds.
Carry out the work.
2. Automatic synthesis
To remove the Fmoc protecting group, use 0.5N piperidine solution in DMF.
Wash the resin for 7 minutes at a flow rate of 7 ml / min. Piperidine
Wash out by washing with DMF at a flow rate of 7 ml / min. Pipetting needle
The inside and outside of Fmo was washed with DMF to activate Fmo.
The c-amino acid is pipetted into the sample loop. Sump
After collecting all 6.4 ml of the sample loop, the contents of the sample loop are
Pump to the system at 6.4 ml / min). Then 1.1 minutes later,
Circulation is performed for 60 minutes at a flow rate of 7 ml / min. After completing the combining period,
Washing off with DMF is carried out for 10 minutes at a flow rate of 7 ml / min. Parallel to this
The inside and outside of the pipetting needle are washed to prepare for the next stage of synthesis.
After completion of the synthesis cycle, the resin was drained from the synthesis column. Methanol
3 × 75 ml, 2. Glacial acetic acid 2 × 75 ml, 3. Methanol 3 × 75 ml, 4. The
Wash on the frit with 3 × 75 ml of ethyl ether. De
Dry in a siccer to obtain 2.01 g of peptide resin. Volume at the washing stage
The amount is correspondingly increased for larger batches.
The resin was treated with TFA, thioanisole, dithiothreitol, phenol and
Incubate with 20 ml of a mixture of water and water (5: 5: 2.5: 5: 2),
Cut off at room temperature for 1 hour.
The TFA / peptide solution is then aspirated and filtered and the resin is washed with TFA5 each time.
Wash 3 times with 0 ml.
The filtrate is mixed with 20 volumes of diethyl ether to precipitate the product. Distant
After the heart (3000 rpm, 5 minutes), the centrifuge was washed with diethyl ether and re-washed.
, Centrifuge and dry in a dessicator.
Polypeptide is added to 100 ml of acetonitrile and H2Mix 900 ml of O
Dissolve in 10 ml of liquid. Place it in a preparative Abimed HPLC system
Lichrosor with 250 x 32 mm column
Separate with bRP-18 (10 μm). The mobile phase is A (acetonitrile 100 m
1 and water 900 ml / TFA 0.5 ml) and B (acetonitrile 900 m)
1 and 100 ml of water / 0.5 ml of TFA). Flow the concentration gradient solution at 30m
Flow at 1 / min (see Figure 1).
178 mg of peptide are obtained (Rf = 7.43).
Example 2
S- (2-mercaptomethyl-3-phenyl) propanoyl-glycinyl-g
Lysinyl-S-prolyl-S-isoleucinyl-S-aspartyl-S-argi
Nyl-S-isoleucine amide
350 mg (0.37 mmol) of the compound from Example I were added to 14 m of methanol.
dissolve in 1. After addition of 350 μl of ethyl mercaptan, hydrolysis is2O
LiOHxH in 5 ml2Performed with 20 mg O (0.48 mmol). R
After 4 hours at T, the mixture was neutralized and the preparative HPLC column described in Example 1 was used.
Separate with stem. 230 mg of the title compound are obtained.
Rf = 6.21.
(Method [B])
Example 3
4-Thia-5,5,5-triphenylpentanoyl-Nα-S-phenylara
Nyl-p-aminophenylacetyl-Nα-S-propyl-Nα-S-isolloy
Cinyl-Nα-S- (β- [1,1-dimethylethoxy] aspartyl) -Nα
-S- (δ- [1,1-dimethylethoxycarbonyl]) ornithine-2-me
Cylbutyramide
3.0 g (6.05 mmol) of the compound from Example XI was added to TBTU 2.
Mix with 13 g (6.66 mmol) and dissolve in 20 ml DMF.
The solution is activated by adding 1.05 ml (1.5 mmol) of DIEA.
. Dissolve 6.05 g (6.4 mmol) of the compound from Example VIII in DMF.
Dissolve and add to the activated solution. After 24 hours at room temperature, purification was carried out according to Example III.
Perform as described in. 5.06 g of the title compound is obtained.
Example 4
3-Mercaptopropanoyl-Nα-S-phenylalanyl-p-aminophen
Nylacetyl-Nα-S-propyl-Nα-S-isoleucinyl-Nα-S-a
Spartyl-Nα-S-ornithine-2-methylbutyramide
5 g of the compound from Example 3 was added to 85% TFA, 5% H2O, 5% p-cresol
Dissolve in 30 ml of a mixture of sodium chloride and 5% dithiothreitol. 2 hours later
Is added to 2.5 l of cold diethyl ether. Centrifuge the peptide
And remove the centrifuge under HV with ether.
Free The crude peptide was added to 20% acetonitrile / H2Dissolve in O, 30 minutes
On a preparative HPLC system with a gradient of 20% to 60% acetonitrile in between
To separate. 2.5 g of the title compound is obtained.
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(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
Ｃ０７Ｋ 7/06
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，
ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，Ｍ
Ｇ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ
，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ
(72)発明者 ドレツセル， ユルゲン
ドイツ連邦共和国デー―42115ブツペルタ
ール・クラウデイウスベーク９
(72)発明者 ボイク， マルテイン
ドイツ連邦共和国デー―40699エルクラー
ト・トリルス７
(72)発明者 タイス， グートルン
ドイツ連邦共和国デー―42329ブツペルタ
ール・ベデイングハウスシユトラーセ13
(72)発明者 シユタシユ， ヨハネス−ペーター
ドイツ連邦共和国デー―42651ブツペルタ
ール・アルフレート―ノベル―シユトラー
セ109
(72)発明者 ヒルト−デイートリヒ， クラウデイア
ドイツ連邦共和国デー―42115ブツペルタ
ール・クラウデイウスベーク９
(72)発明者 ビシヨフ， エルビン
ドイツ連邦共和国デー―42115ブツペルタ
ール・パールケシユトラーセ73─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI C07K 7/06 (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR , IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AU, BB, BG, BR, BY, CA, CZ, FI, HU, JP, KP, KR, KZ, LK, MG, MN, MW, NO, NZ, PL, RO, RU, SD, SK, UA, US , VN (72) Inventor Dretzell, Jürgen Germany Day 4212115 Butspertal Claudiusbeek 9 (72) Inventor Boyk, Marteinde Federal Republic of Germany Day 40699 Erkrath Trilus 7 (72) Inventor Tais, Gutrun Federal Republic of Germany Day 42329 Butupertal Bedinghaus Schutlerse 13 (72) Inventor Siyuthashiu, Johannes-Peter Federal Republic of Germany Day -42651 Butspertal Alfred-Nobel-Schiutraße 109 (72) Inventor Hirdt-Deichrich, Claudia Day of the Federal Republic of Germany-42115 Butspertal Claudeiusbeek 9 (72) Inventor Bisijov, Erbin Day of the Federal Republic of Germany ―42115 Butuperthal Pearl Keshiyutrase 73