【発明の詳細な説明】
狭窄症を抑止するためのミコフェノール酸、
ミコフェノール酸モフェチルまたはそれらの誘導体の使用
発明の分野
本発明は、特にミコフェノール酸または関連化合物、特にミコフェノール酸モ
フェチルの投与により、外科処置に伴う狭窄症を予防する方法、特に血管形成術
に伴う再狭窄症の予防に関する。
背景情報
ミコフェノール酸は、ペニシリウム・ブレビコンパクタムの発酵液中に見い出
された弱活性抗生物質である。ミコフェノール酸に関連する化合物類、および炎
症疾患、自己免疫疾患、ウイルス疾患、ガン、および／または同種移植変片拒絶
反応の予防のための処置におけるそれらの使用は、米国特許第4,686,234号；4,7
25,622号；4,727,069号；4,748,173号；4,753,935号；4,786,637号；4,808,592
号；4,861,776号；4,868,153号；4,948,793号；4,952,579号；4,959,387号およ
び4,992,467号に開示されており、これらは全て本明細書に参照して組み込んで
ある。
ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルまたは医薬的に許容され得る
それらの塩または誘導体は、下記の一般構造式の１つを有する。
式１の化合物：
およびそれらの医薬的に許容され得る塩類：ここで、
Ｒ1は、Ｈまたは１ないし６の炭素原子を有する低級アルキルであり；
Ｒ2は、Ｈ、１ないし６の炭素原子を有する低級アルキル、または−フェニル
−４−ＣＯ2Ｒ3であって、Ｒ3はＨ、１ないし６の炭素原子を有する低級アルキ
ルまたは医薬的に許容され得るカチオンであり；
Ｒ4およびＲ5は、それそれ独立して、Ｈまたは１ないし６の炭素原子を有する
低級アルキルであり；
Ｘ1およびＹ1は、それそれ独立して、ＯまたはＳであり；そして
ｑは、１−６の整数である。
または、式２の化合物：
およびそれらの医薬的に許容され得る塩類：ここで、
Ａは、酸素または硫黄であり；
Ａ1は、酸素または硫黄であり；
ｑは、０−６の整数であり；
Ｒ2は、アルキル、ハロアルキルまたは−ＮＲ4Ｒ5であって、
Ｒ4およびＲ5は、独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキ
ル、所望によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、クロロカルボニル、スルホ
ニルアミノ、ニトロ、シアノ、フェニル、アルキル、アシル、アルコキシカルボ
ニル、アシルアミノ、ジアルキルアミノ、またはジアルキルアミノエトキシカル
ボニルで一置換されているフェニル、所望によりヒドロキシ、カルボキシ、ニト
ロまたはアルキルで二置換されているフェニル、または所望によりジアルキルア
ミノで置換されているベンジルであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルまたは医薬的に許容され得るカチオンである、
からなる群から選択され：
ＱおよびＱ1は、独立して、Ｈまたは−ＣＯ2Ｒ3てあり；そして
Ｚ1は、１Ｈ−テトラゾリル、−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨＯ、−ＣＮ、−Ｃ(Ｏ)Ａ2
Ｒ6および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8から選択され、ここで
Ａ2は、酸素または硫黄であり；
Ｒ6は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、所望により置換された
フェニル、所望により置換されたベンジルまたは医薬的に許容され得るカチオン
であり；さらに
Ｒ7およびＲ8は、独立して、Ｈ、アルキルまたはシクロアルキルであるか、ま
たはＲ7およびＲ8は、一緒になって、−(ＣＨ2)2Ｏ(ＣＨ2)2−、−(ＣＨ2)4また
は−(ＣＨ2)5−であるが、
ただし、Ｒ1およびＲ6のいずれもが、Ｈであり、ＡおよびＡ2が酸素であること
は出来ない。
または式Ａの化合物：
およびそれらの医薬的に許容され得る塩、
ここで、Ｚは、水素または−Ｃ(Ｏ)Ｒであり、
Ｒは、低級アルキルまたはアリールである。
または式Ｉの化合物：
およびそれらの医薬的に許容され得る塩、
ここで、
ｍは、２から４の整数であり；
Ｚは、下記の式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)から選択され：
(ａ)
式中：
Ｒ1は、水素、アダマンチルなどのシクロアルキルを含む７またはそれ以上の
炭素原子を有するアルキル、または−ＮＲ2Ｒ3であって、ここでＲ2は、水素ま
たは低級アルキルであり、Ｒ3は、水素、低級アルキル、−フェニル−４−ＣＯ2
Ｒ2または医薬的に許容され得るカチオンである；
(ｂ)
式中：
Ｒ4は、水素、アルキル、アリールまたは−ＮＲ2Ｒ3である；
(ｃ)
式中：
ｎは、０から６の整数であり、
Ｒ5は、水素、低級アルキル、または医薬的に許容され得るカチオンである；
(ｄ)
式中：
Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素または−ＣＯ2Ｒ5であり；さらに
Ｙは、炭素原子４ないし６の低級アルキレンまたは炭素原子３ないし５の低級
アルキレンであり、−Ｏ−、−Ｓ−または
ここで、Ｒ8は、水素または炭素原子１ないし５のアルキルである。
または式IIの化合物：
ここで：
ｍは、２から４の整数であり；
Ｚ1は、水素または−Ｃ(Ｏ)Ｒ9であって、
Ｒ9は、低級アルキルまたはアリールである；および
Ｙ1は、炭素原子４ないし６の低級アルキレンまたは炭素原子３ないし５の低
級アルキレンであり、−Ｏ−、−Ｓ−または
ここで、Ｒ8は、水素または炭素原子１ないし５のアルキルであるが；
ただし、ｍが２のとき、Ｙ1は、−(ＣＨ2)2−Ｏ−(ＣＨ2)2−を含まないことを
除く。
ミコフェノール酸モフェチル、即ち、ミコフェノール酸のモルホリノエチルエ
ステルは、米国特許第4,753,935号（予め、参照して組み込んである）に記載さ
れており、化学名Ｅ−６−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−６−メトキシ
−７−メチル−３−オキソ−５−イソベンゾフラニル）−４−メチル−４−ヘキ
セン酸モルホリノエチルを有する。これは、慢性同種移植片拒絶反応を含む同種
移植片拒絶反応を予防するのに有効であることが示されている。
狭窄症は、血管壁の肥厚により血管内腔が狭くなる症状であり、管壁の細胞（
結合組織細胞、特に平滑筋細胞）と循環する血液成分との間の複雑な相互作用に
関係しており、結果として血流の制限を伴う。狭窄症は、代表的には、外科的処
置中（例えば、バイパス外科手術におけるような血管壁に縫い糸を通す際に、お
よびバルーン、レーザーまたはその他のいずれかによる血管形成術中）に管壁の
内皮の内表面層または下部層を損傷することと関連している。血管形成術は、障
害（例えば、プラク）を除去し、その結果、圧縮された血管を広げるもの、即ち
、狭窄症の処置である。その処置は、内皮の内表面または下部にある層に損傷を
与えることがよくあり、初期管細胞増殖、特に平滑筋細胞（損傷へ応答する細胞
型の１つ）および他の結合組織細胞の初期増殖を誘発し、さらに、対応する内腔
を狭くしながら管壁の肥厚化、いわゆる再狭窄症を引き起こす。
外科処置に伴う狭窄症または再狭窄症を妨げる処置を提供することが、長い間
求められて来たが、今回、驚くべきことに、ミコフェノール酸または関連化合物
、特にミコフェノール酸モフェチルの有効量を投与することにより、かかる処置
が
達成され得ることを見い出した。
発明の概要
本発明の１つの実施態様は、狭窄症を処置するために、ミコフェノール酸また
はミコフェノール酸モフェチルまたはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘
導体を治療上有効量使用することに関する。
本発明の別の実施態様は、血管形成術またはバイパス外科手術を完遂するため
に、ミコフェノール酸またはミコフェノール酸モフェチルまたはそれらの医薬的
に許容され得る塩または誘導体を予防的投与を含む治療上有効量使用することに
関する。
本発明の更に別の実施態様は、ミコフェノール酸またはミコフェノール酸モフ
ェチルまたはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘導体を増殖抑止量投与す
ることにより、血管壁の損傷に伴う血管内膜、特に平滑筋細胞の増殖を抑止する
ことに関する。
本発明の更に別の実施態様は、医薬的に許容され得る非毒性賦形剤およびミコ
フェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルまたはそれらの医薬的に許容され得
る塩または誘導体の治療上有効量を含んでなる、狭窄症の処置用医薬組成物に関
する。
本発明の好ましい実施態様では、血管形成術または心臓バイパス外科処置に伴
う狭窄症または再狭窄症を抑止するため、ミコフェノール酸モフェチルまたはそ
れらの医薬的に許容され得る塩を、経口的に投与する。
発明の詳細な説明
定義および一般的パラメーター
下記の定義は、本明細書中で本発明を記述するために用いた様々な用語の意味
および範囲を説明および定義するために記載する。
本明細書で使用するとき、用語“アルキル”は、炭素および水素のみを含有す
る完全に飽和した一価ラジカルを表しており、環状、分枝状または直鎖状ラジカ
ルであることができる。この用語は、更に、メチル、エチル、ｔ−ブチル、ペン
チル、ヘプチル、ピバリノレ、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどのラジ
カ
ルにより、例示されるものである。
用語“低級アルキル”は、炭素原子１ないし６の一価アルキルラジカルを表す
。この用語は、更に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル（または２−メチルプロピル）、イソアミル、ペン
チルおよびイソペンチルなどのラジカルにより、例示されるものである。
用語“アルキレン”は、炭素および水素のみを含有する完全に飽和した二価ラ
ジカルを表しており、分枝状または直鎖状ラジカルであることができる。この用
語は、更に、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、ｔ−ブチレン、ｉ−ペンチ
レン、およびｎ−ヘプチレンなどのラジカルにより、例示されるものである。
用語“アルコキシ”は、基−ＯＲ、ここでＲは上記に定義した低級アルキルで
ある、を表す。
用語“アリール”は、単環（例えば、フェニル）または二縮合環（例えば、ナ
フチル）を有する置換または非置換の一価不飽和芳香族炭素環式ラジカルを表す
。
用語“アシル”は、有機酸に基づくラジカル、例えば、−Ｃ(Ｏ)Ｒ1、ここで
Ｒ1はアルキルまたはアリールである、を表す。
本明細書で使用するとき、用語“ハロ”は、フルオロ、ブロモ、クロロおよび
ヨードを表す。
本明細書に記載した化合物類および中間体類の分離および精製は、所望ならば
、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラ
フィーまたは厚層クロマトグラフィーまたはこれらの方法の組み合わせなどの適
切な分離または精製方法により、達することができる。
“医薬的に許容され得る塩”は、無機または有機酸から誘導される任意の塩で
あることができる。用語“医薬的に許容され得るアニオン”は、このような塩の
アニオンを表す。塩およびアニオンは、生物学的にまたはその他に望ましく無い
もの以外から選択される。これらの塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸（スルフェー
トおよびビスルフェート塩を与える）、硝酸、リン酸および同等物などの無機酸
、および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸
、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、
桂
皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホ
ン酸、サリチル酸および同種物などの有機酸で形成される。
本明細書で使用するとき、用語“処置”または“処置する”は、哺乳類におけ
る疾病のあらゆる処置を意味し：
（ｉ）疾病を予防する、即ち、疾病の臨床的症状が発生しないようにすること
；
（ii）疾病を抑止する、即ち、臨床的症状の進行を抑止すること；および／ま
たは
（iii）疾病を和らげる、即ち、臨床的症状の緩解を引き起こすこと
を含む。
本明細書で使用するとき、用語“有効量”または“治療上有効量”は、取り扱
われている疾病状態に対する処置を提供するに十分な投与量を意味する。これは
、患者、疾病および達成される処置によって、変化するものである。
本明細書で使用するとき、用語“狭窄症”は、文脈または特定の記載が別の意
味を示している場合を除いて、“再狭窄症”を含むものと理解されるべきである
。
本明細書で使用するとき、用語“誘導体”は、全て本明細書に参照して組み込
んである米国特許第4,686,234号；4,725,622号；4,727,069号；4,748,173号；4,
753,935号；4,786,637号；4,808,592号；4,861,776号；4,868,153号；4,948,793
号；4,952,579号；4,959,387号および4,922,467号に記載されているように、ミ
コフェノール酸の構造に基づき、その二環式環の４位の、または側鎖のカルボン
酸上の−ＯＨの代わりに置換基を有する、化合物（例えば、米国特許第4,748,17
本発明方法に使用される化合物の供給源
ミコフェノール酸は、例えば、ミズーリ州、セント・ルイスのシグマ・ケミカ
ル・カンパニーから入手できる。
ミコフェノール酸モフェチルまたはＥ−６−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロ
キシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキソ−５−イソベンゾフラニル）−４
−メチル−４−ヘキセン酸モルホリノエチルは、予め本明細書に参照して組み込
んである、米国特許第4,753,935号に記載されているとおり、生成、処方および
投
与され得る。
ミコフェノール酸およびミコフェノール酸モフェチルの医薬的に許容され得る
塩または誘導体は、全て本明細書に参照して組み込んである、米国特許第4,686,
234号；4,725,622号；4,727,069号；4,748,173号；4,753,935号；4,786,637号；
4,808,592号；4,861,776号；4,868,153号；4,948,793号；4,952,579号;4,959,38
7号および4,922,467号に記載されているとおり、生成、処方および投与され得る
。
有用性、試験および投与
一般的有用性
本発明の方法において使用される化合物類は、イノシンモノホスフェートデヒ
ドロゲナーゼを阻害し、その結果としてＤＮＡ合成および細胞増殖に必要なデオ
キシグアノシントリホスフェートを消耗するように作用して、平滑筋細胞を含む
細胞の増殖を阻害する。この化合物類は、血管損傷に対する増殖応答、例えば、
血管壁の損傷に伴う狭窄症を抑止するのに有用である。
特に、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルまたはそれらの医薬的
に許容され得る塩または誘導体を、予防的に、および／または血管壁の内皮また
は下部層の損傷に関連する外科処置（例えば、内皮細胞の除去または内皮細胞へ
与える損傷に関する処理）後に、患者に投与する。本発明の方法において使用さ
れる化合物類は、効力を上げるために他の活性剤と共に投与する必要はないが、
そのような付加的な活性剤を使用することもできる。
試験
イン・ビトロでの狭窄症処置活性は、平滑筋細胞の増殖阻害により示される。
これは、ヒト動脈平滑筋細胞増殖アッセイにより確立された。ヒト平滑筋細胞は
、培地中で成長させる。試験群は、新鮮な培地中に試験化合物を選択濃度加えて
試験する。両方の群に、放射性同位体標識、２μＣiトリチウム化チミジン（3Ｈ
ＴｄＲ）を与える。２４時間後、細胞を集め、ＤＮＡ中に取り込まれた標識の量
をシンチレーションによりカウントする。これを試験群と対照群とで比較するが
、その量は、細胞増殖に比例している。平滑筋増殖の阻害は、試験群が対照群よ
り低
い放射性同位体カウントを有している場合に、認められる。増殖を５０％（ＩＣ50
）まで阻害するのに要する試験化合物の濃度と、増殖を９５％以上まで阻害す
るのに要する試験化合物の濃度を測定する。
イン・ビボでの狭窄症処置活性は、動脈狭窄症のラットモデルにおいて示され
る。試験群を、試験化合物で処理するが、これは左頚動脈に損傷を与える６日前
に始め、損傷を与えた後１４日間続ける。試験群を、試験化合物を含まない媒体
を与えた対照群と比較する。左動脈の１０mm長の断片に空気を穏やかに灌流する
ことにより、損傷を生じさせる。右動脈は、無傷のままにしておく。動脈の横断
片（１０μm）を各対象の左右両方の動脈から取り、その血管壁（血管内皮、内
膜、中膜）の面積を測定する。血管の増殖量は、損傷を与えた左頚動脈の平均面
積から無傷の右頚動脈の平均面積を引いて計算する。試験群が対照群よりも低い
増殖を示す場合、血管増殖の減少が立証される。
投与
ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルおよびそれらの医薬的に許容
され得る塩および誘導体は、例えば、予め本明細書に参照して組み込んである米
国特許第4,753,935号および第4,922,467号に記載されているように、同様の有用
性を与える薬剤類に対して容認されているあらゆる形式および処方により、投与
できる。
投与は、例えば、錠剤類、坐薬類、丸薬類、カプセル類、粉末類、溶液類、懸
濁液類、乳液類、クリーム類、ローション類、エアロゾル類、軟膏類、ゲル類ま
たは同種物などの、固体、半固体、凍結乾燥粉末または液体投与形態で、例えば
、経口的、経鼻的、非経口的または局所的に行うことができ、好ましくは、正確
な用量を簡単に投与するのに適したユニット用量形態である。組成物は、常用の
医薬担体または賦形剤および有効化合物（ミコフェノール酸、ミコフェノール酸
モフェチルまたはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘導体）を含むもので
あり、更に、他の薬剤類、製剤担体類、アジュバント類などを含んでいても良い
。
一般に、本発明の化合物類は、治療上有効量、即ち、処置を有効とするに十分
な用量で投与され、その量は、処置される個体および症状によって変わる。本発
明において、治療上有効量とは、血管傷害に対する細胞増殖応答を阻害するもの
である。好ましくは、約０．３μＭないし１０．０μＭの原形質濃度、最も好ま
しくは、約１．０μＭが、治療上有効量であり、これは、増殖抑止量である。
上記した症状の場合、好ましい投与方法は、苦痛の程度に合わせて調整できる
便利なデイリー用量用法を用いる経口投与である。このような経口投与のために
は、医薬的に許容され得る非毒性組成物は、例えば、医薬用マンニトール、ラク
トース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セ
ルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムおよび同等物
などの通常採用される賦形剤のいずれかを含めることにより、調製される。この
ような組成物は、溶液類、懸濁液類、錠剤類、丸薬類、カプセル類、粉末類、遅
延放出製剤類および同種物の形態をとる。
好ましくは、この組成物は、丸薬または錠剤の形態をとるものであり、従って
、組成物は、有効成分と共に、ラクトース、スクロース、リン酸二カルシウムお
よび同種物などの希釈剤、澱粉またはそれらの誘導体などの錠剤分解物質、ステ
アリン酸マグネシウムおよび同種物などの潤滑剤、および澱粉、アカシアゴム、
ポリビニルピロリドン、ゼラチン、セルロースおよびそれらの誘導体および同種
物などの結合剤を含有するものである。
医薬的に投与可能な液体組成物は、例えば、上記の活性化合物（約０．５％な
いし約２０％）および所望の医薬用アジュバントを、例えば、水、生理食塩水、
水性デキストロース、グリセロール、エタノールおよび同種物に溶解、懸濁等し
て、それによって溶液または懸濁液を生成することにより、調製され得る。
所望ならば、投与すべき医薬組成物は、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリ
ン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン等などの湿潤剤または乳化剤
、ｐＨ緩衝剤および同種物などの非毒性補助物質を少量含有していても良い。
このような投与形態を調製する実際の方法は、知られており、また、当業者に
は自明である。例えば、レミントンズ・ファーマシュウティカル・サイエンシィ
ズ、第１６版（マック・パブリッシング・カンパニー、イーストン、ペンシルバ
ニア、１９８０）参照。投与されるべき組成物は、いずれにしても、本発明の教
示に従い投与した場合に、処置される特定の症状を軽減するのに医薬上有効な量
の活性化合物量を含有するものである。
治療上有効なデイリー経口投与用量は、下は０．０２mg／体重kg程度から約１
００mg／体重kg）好ましくは約２５mg／体重kgから約６０mg／体重kgである。静
脈投与の用量も同様である。ミコフェノール酸モフェチルは、同種移植片拒絶反
応を予防するために、処置しようとする患者および同種移植片に合わせ、約２５
mg／体重kgから約６０mg／体重kgのデイリー用量に相当する、１臼当たり２．０
、３．０、３．５および４．０グラムの経口用量で投与する。同様の用法用量が
、本発明の各処置法においても有効である。
実施例
下記の製剤および実施例は、当業者が本発明をより明確に理解および実施でき
るためのものである。これらは、本発明の範囲を限定するものではなく、単に本
発明を例示説明および代表するものと理解されるべきである。
実施例１
本実施例は、活性化合物、例えば、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフ
ェチル、またはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘導体、例えば、Ｅ−６
−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキ
ソ−５−イソベンゾフラニル）−４−メチル−４−ヘキセン酸モルホリノエチル
塩酸塩を含有する、経口投与用の代表的な医薬製剤の調製を例示説明するもので
ある。
成分 カプセル当たりの量、mg
有効化合物 ２００
ラクトース、噴霧乾燥物 １４８
ステアリン酸マグネシウム ２
上記成分を混合して、ゼラチン硬カプセル内に入れる。
実施例２
本実施例は、有効化合物、例えば、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフ
ェチル、またはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘導体、例えば、Ｅ−６
−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキ
ソ−
５−イソベンゾフラニル）−４−メチル−４−ヘキセン酸モルホリノエチル塩酸
塩を含有する、経口投与用の別の代表的な医薬製剤の調製を例示説明するもので
ある。
成分 カプセル当たりの量、mg
有効化合物 ４００
トウモロコシ澱粉 ５０
ラクトース １４５
ステアリン酸マグネシウム ５
上記成分を十分に混合し、圧縮して単一に刻まれた錠剤にする。
実施例３
本実施例は、有効化合物、例えば、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフ
ェチル、またはそれらの医薬的に許容され得る塩または誘導体、例えば、Ｅ−６
−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキ
ソ−５−イソベンゾフラニル）−４−メチル−４−ヘキセン酸モルホリノエチル
塩酸塩を含有する、代表的な医薬製剤の調製を例示説明するものである。
成分
有効化合物 １．０ｇ
フマル酸 ０．５ｇ
塩化ナトリウム ２．０ｇ
メチルパラベン ０．１ｇ
グラニュー糖 ２５．５ｇ
ソルビトール（７０％溶液） １２．８５ｇ
ヴィーガムＫ １．０ｇ
（ヴァンダービルト・カンパニー）
香料 ０．０３５ml
色素 ０．５mg
蒸留水 適量を加えて１００ml
とする。
実施例４
ヒト動脈平滑筋増殖アッセイを利用するイン・ビボ活性の測定
ヒト平滑筋細胞、ＡＧ１１５４５（コリエル・セル・リポジトリーから入手）
を低濃度（２．５×１０4細胞／ml）で２４ウェルプレート（１０％ウシ胎児血
清を含有するダルベッコの修飾イーグル培地）に置いた。細胞を４８時間成長さ
せた。次いで、ミコフェノール酸（０．０１μＭ、０．１μＭ、１．０μＭおよ
び１０μＭ）を（対照のウェルを除いて）加えた。細胞を２４時間成長させ、そ
の後、ＴＣＡ沈殿を用いて集めた。ＤＮＡに組み込まれた標識の量をシンチレー
ションによりカウントし、試験ウェルと対照ウェルを比較した。その結果から、
イン・ビトロでの平滑筋細胞増殖を５０％（ＩＣ50）まで、および９５％以上ま
で減少させるのに有効なミコフェノール酸濃度を測定した。
この方法で試験した場合、ミコフェノール酸は、約０．３μＭのＩＣ50を有し
た。濃度１．０μＭは、平滑筋細胞増殖を９５％以上まで阻害した。このことは
、ミコフェノール酸が、外科処置を受けるヒト患者における狭窄症または再狭窄
症を抑止するのに有用であることを示すものである。
ミコフェノール酸の代わりにミコフェノール酸の医薬的に許容され得る塩また
は非エステル誘導体を用い、同様に操作し、同様の平滑筋細胞増殖低減活性が得
られる。このことは、これらのミコフェノール酸の医薬的に許容され得る塩およ
び非エステル誘導体が、外科処置を受けるヒト患者における狭窄症または再狭窄
症を抑止するのに有用であることを示すものである。
ヒトにおける、０．３ないし１０μＭのミコフェノール酸濃度は、約２５ない
し約６０mg／kgのミコフェノール酸モフェチルのデイリー経口用量で処置するこ
とにより、容易に到達できる。このことは、ミコフェノール酸モフェチル、その
医薬的に許容され得る塩およびミコフェノール酸のエステル誘導体が、外科処置
を受けるヒト患者における、狭窄症または再狭窄症の抑止に有用であることを示
すものである。
実施例５
ラット動脈狭窄症モデルを利用するイン・ビボ活性の測定
試験物質
ミコフェノール酸モフェチルを、ＳＳＶ、即ち、水中０．５％カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム、０．９％ＮaＣｌ、０．４％トゥイーン８０、および
０．９％ベンジルアルコールからなる媒体中に懸濁する。
動物
３〜４月齢の３５０±２５グラムの雄スプラーグ・ダウレーラット（Ｃrl、Ｃ
Ｄ（登録商標）（ＳＤ）ＢＲ）を用いた。動物は、個別に飼育し、齧歯動物の標
準的食事を与えた。
処置法
ラット３０匹の実験群を、ミコフェノール酸モフェチル３０mg／kgの１日用量
を等量２回に分け、６時間間隔を空けて経口的に処置した。新内膜増殖を引き起
こすため、頚動脈に損傷を与える６日前に処置を始め、損傷を与えた後１４日間
処置を続けた。ラット３０匹の対照群は、同様にして、ＳＳＶ媒体単独で処置し
た。
動脈損傷モデル
各ラットの左頚動脈を、フィッシュマン，ＪＡ等、“エンドテリアル・リジェ
ネレーション・イン・ザ・ラット・カロチド・アーテリー・アンド・ザ・シグニ
フィカンス・オブ・エンドテリアル・デニュデーション・イン・ザ・パソゲネシ
ス・オブ・ミオインティマル・シッケニング”、ラボラトリー・インベスティゲ
ーション、１９７５年、３２巻、３３９−３５１頁に記載の技術を用いて、損傷
させた。
各動物に５８％ケタミン（フォルト・ドッジ・ラボラトリーズ、アイオワ）６
０mg／kg）および４２％キシラジン（ロイド・ラボラトリーズ、アイオワ）１０
mg／kgの混合物を投与することにより、麻酔した。その後、左の共通の頸動脈の
遠位の１０mm長の部分を開いた。絹のタイを置き、開いた動脈の各端でゆるく結
紮した。タイロード溶液（シグマ）を含有するシリンジに付けた３０ゲージの針
を用いて、穿刺部位をそれぞれの結紮の近くに作った。次に、これらの穴からタ
イロード溶液を灌流させ、分離した血管から血液を濯いだ。次いで、同じ穴から
空気を２５ml／分の速度で３分間静かに灌流させ、動脈を損傷させた。結紮部位
を凝固させ、結紮を取り除き、傷を閉じた。この操作により、内皮の侵食、並び
に血管壁の下にある血管内膜および中膜の破壊を生じた。
損傷後１４日で、動物を屠殺した。左と右の両方の頸動脈を除去し、１０％ホ
ルマリン、次いで、３０％スクロースに取り、３日後、新内膜増殖についてマウ
ンティングし、スコアリングした。
新内膜増殖の分析
再回収した動脈を４分の１に切り取り、４つの切片を一緒にして、オプティマ
ム・カッティング・テンペラチャー(Ｏ.Ｔ.Ｃ.)化合物（マイルス、インディア
ナ）の単一ブロックに埋め込んだ。ブロックから、それぞれ１０μＭ厚の１５の
動脈横断片を、マイクロトーム／クリオスタット（マイルス、インディアナ）を
用いて−２０℃で細片化し、その後、ヘマトキシリン−エオシンで染色した。染
色した動脈横断片を、シグマスキャン（ヤンデル・サイエンティフィック、コー
ト・マデラ、カリフォルニア）でプログラムされたコンピューターに接続したデ
ジタルボード上、顕微鏡で投影した。電子ペンを用いて、投影した動脈壁内部お
よび外部の輪郭を描き、左（損傷を与えた）と右（対照）両方の動脈の平均横断
面面積を、１５の動脈横断片の断片１、４、７、１０および１３から電子的に算
定した。各ラットに対する平滑筋増殖の最終面積を、損傷させた動脈の平均面積
から対照の動脈の平均面積を引くことにより計算した。全スコアリングは、横断
片が試験または対照ラットに由来するのか、または損傷させた動脈または無傷の
動脈に由来するのかどうか知らされていない調査員によって無作為に行われた。
統計学的分析
パラメトリック非対ｔ−試験とノンパラメトリックマン・ウィットニーＵ試験
の両方を用いて、ミコフェノール酸モフェチル処置した群とＳＳＶ媒体処置した
対照群とを比較し、平均病片サイズの有意な減少があるかどうかを測定した。
結果
３０mg／kgのミコフェノール酸モフェチルは、損傷後１４日で、空気潅流誘導
化血管壁損傷に対する血管増殖応答を著しく低減させ、下記の平均横断面面積を
与え：
損傷した動脈 無傷の動脈
ミコフェノール酸モフェチル １７７２±２９５mm2 １１７６±１０３mm2
ＳＳＶ媒体対照 ２２８９±５３２mm2 １１８６±６９mm2
下記の血管増殖平均面積（無傷の動脈の面積から損傷させた動脈の面積を引く）
を与えた：
血管増殖
ミコフェノール酸モフェチル ５４６±２８０mm2
ＳＳＶ媒体対照 １１０３±５３３mm2
これは、新内膜増殖における５１％の減少に相当した（ｐ＜０．０５）。
考察
ミコフェノール酸モフェチルは、イン・ビボでの血管損傷後の、新内膜増殖を
５１％まで阻害する。このことは、ミコフェノール酸モフェチルが、外科処置を
受けるヒト患者における狭窄症または再狭窄症を抑止するのに有用であることを
示すものである。
ミコフェノール酸モフェチルの代わりにミコフェノール酸またはそれらの医薬
的に許容され得る塩または誘導体、またはミコフェノール酸モフェチルの医薬的
に許容され得る塩または誘導体を用いて、この操作を繰り返すことにより、同様
の新内膜増殖阻害が観察される。ミコフェノール酸およびそれらの医薬的に許容
され得る塩および誘導体、およびミコフェノール酸モフェチルの医薬的に許容さ
れ得る塩および誘導体は、外科処置を受けるヒト患者における狭窄症または再狭
窄症を抑止するのに有用である。
本発明は、本発明の特定の実施態様を参照して記述したが、当業者には、本発
明の真の精神および範囲から離れることなく、様々な変化を施すことも出来、同
種物で置き換えることも出来ることを理解されるべきである。更に、本発明の目
的、精神および範囲に対して、多くの修飾をなし、特定の状況、材料、組成物、
プロセス、プロセス段階または数段階を適用することもできる。これらの修飾は
、
全て添付の請求の範囲内であると意図されるものである。Detailed Description of the Invention
Mycophenolic acid to prevent stenosis,
Use of mycophenolate mofetil or derivatives thereof
Field of the invention
The present invention is particularly directed to mycophenolic acid or related compounds, especially mycophenolic acid
Method of preventing stenosis associated with surgery by administration of fetil, especially angioplasty
Prevention of restenosis associated with
Background information
Mycophenolic acid was found in the fermentation broth of Penicillium brevicompactum.
It is a weakly active antibiotic. Compounds related to mycophenolic acid, and flames
Disease, autoimmune disease, viral disease, cancer, and / or allograft rejection
Their use in treatments for the prevention of reactions is described in US Pat. No. 4,686,234; 4,7.
25,622; 4,727,069; 4,748,173; 4,753,935; 4,786,637; 4,808,592
No .; 4,861,776; 4,868,153; 4,948,793; 4,952,579; 4,959,387 and
And 4,992,467, all of which are incorporated herein by reference.
is there.
Mycophenolic acid, mycophenolate mofetil or pharmaceutically acceptable
The salts or derivatives have one of the following general structural formulas:
Compound of Formula 1:
And their pharmaceutically acceptable salts:
R1Is H or lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms;
R2Is H, lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms, or -phenyl
-4-CO2R3And R3Is H, a lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms
Or a pharmaceutically acceptable cation;
RFourAnd RFiveHave, each independently, H or 1 to 6 carbon atoms
Lower alkyl;
X1And Y1Are each independently O or S; and
q is an integer of 1-6.
Alternatively, the compound of formula 2:
And their pharmaceutically acceptable salts:
A is oxygen or sulfur;
A1Is oxygen or sulfur;
q is an integer of 0-6;
R2Is alkyl, haloalkyl or -NRFourRFiveAnd
RFourAnd RFiveAre independently H, alkyl, haloalkyl, cycloalkyl
Optionally halogen, hydroxy, carboxy, chlorocarbonyl, sulfo
Nylamino, nitro, cyano, phenyl, alkyl, acyl, alkoxycarbo
Nyl, acylamino, dialkylamino, or dialkylaminoethoxycarb
Phenyl mono-substituted with bonyl, optionally hydroxy, carboxy, nit
Or phenyl disubstituted with alkyl or alkyl, or optionally dialkyl
Benzyl substituted with mino;
R3Is H, alkyl or a pharmaceutically acceptable cation,
Selected from the group consisting of:
Q and Q1Are independently H or --CO2R3Yes; and
Z1Is 1H-tetrazolyl, -CH2OH, -CHO, -CN, -C (O) A2
R6And -C (O) NR7R8Selected from here
A2Is oxygen or sulfur;
R6Is H, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, optionally substituted
Phenyl, optionally substituted benzyl or a pharmaceutically acceptable cation
And further
R7And R8Are independently H, alkyl or cycloalkyl, or
Or R7And R8Together,-(CH2)2O (CH2)2-,-(CH2)FourAlso
Is-(CH2)Five−, But
However, R1And R6Are both H, A and A2Is oxygen
I can't.
Or a compound of formula A:
And a pharmaceutically acceptable salt thereof,
Where Z is hydrogen or -C (O) R,
R is lower alkyl or aryl.
Or a compound of formula I:
And a pharmaceutically acceptable salt thereof,
here,
m is an integer from 2 to 4;
Z is selected from the following formulas (a), (b), (c) or (d):
(a)
In the formula:
R1Is 7 or more including hydrogen, cycloalkyl such as adamantyl
Alkyl having a carbon atom, or -NR2R3And here R2Is hydrogen
Or is lower alkyl, R3Is hydrogen, lower alkyl, -phenyl-4-CO2
R2Or a pharmaceutically acceptable cation;
(b)
In the formula:
RFourIs hydrogen, alkyl, aryl or -NR2R3Is;
(c)
In the formula:
n is an integer from 0 to 6,
RFiveIs hydrogen, lower alkyl, or a pharmaceutically acceptable cation;
(d)
In the formula:
R6And R7Are independently hydrogen or --CO2RFiveAnd further
Y is lower alkylene having 4 to 6 carbon atoms or lower alkylene having 3 to 5 carbon atoms
Alkylene, -O-, -S- or
Where R8Is hydrogen or alkyl of 1 to 5 carbon atoms.
Or a compound of formula II:
here:
m is an integer from 2 to 4;
Z1Is hydrogen or -C (O) R9And
R9Is lower alkyl or aryl; and
Y1Is a lower alkylene having 4 to 6 carbon atoms or a lower alkylene having 3 to 5 carbon atoms.
A secondary alkylene, -O-, -S- or
Where R8Is hydrogen or alkyl of 1 to 5 carbon atoms;
However, when m is 2, Y1Is-(CH2)2-O- (CH2)2-Do not include
except.
Mycophenolate mofetil, that is, morpholinoethyl ether of mycophenolic acid.
Stell is described in US Pat. No. 4,753,935, previously incorporated by reference.
Chemical name E-6- (1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy
-7-Methyl-3-oxo-5-isobenzofuranyl) -4-methyl-4-hex
With morpholinoethyl senoate. This is an allograft involving chronic allograft rejection
It has been shown to be effective in preventing graft rejection.
Stenosis is a symptom of narrowing the lumen of a blood vessel due to thickening of the blood vessel wall.
For complex interactions between connective tissue cells, especially smooth muscle cells, and circulating blood components
Involved, with consequent limitation of blood flow. Stenosis is typically a surgical procedure.
Placement (for example, when threading a suture through the vessel wall, as in bypass surgery).
And during the angioplasty with either a balloon, laser or other)
It is associated with damaging the inner surface layer or lower layer of the endothelium. Angioplasty is an obstacle
Removes harm (eg, plaque) and thus widens the compressed blood vessels, ie
, Treatment of stenosis. The procedure damages the inner or inner layers of the endothelium.
Often given to early tube cell proliferation, especially smooth muscle cells (cells that respond to damage
Type 1) and other connective tissue cells to induce early proliferation and, in addition, a corresponding lumen
While narrowing the tube wall causes thickening of the tube, so-called restenosis.
Providing a treatment that prevents stenosis or restenosis associated with surgical procedures has long been a concern.
It has been sought after, but this time, surprisingly, mycophenolic acid or related compounds
, Such treatment by administering an effective amount of mycophenolate mofetil
But
I have found that it can be achieved.
Summary of the invention
One embodiment of the present invention provides for the treatment of stenosis with mycophenolic acid or
Is mycophenolate mofetil or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof.
It relates to the use of therapeutically effective amounts of conductors.
Another embodiment of the invention is for completing angioplasty or bypass surgery.
, Mycophenolic acid or mycophenolate mofetil or their pharmaceutical
To use a therapeutically effective amount of a salt or derivative that is pharmaceutically acceptable, including prophylactic administration
Concerned.
Yet another embodiment of the present invention is a mycophenolic acid or mycophenolic acid morph.
Ethyl or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof
Suppresses the proliferation of the intima of the blood vessel, especially smooth muscle cells, due to damage to the blood vessel wall
Regarding things.
Yet another embodiment of the present invention is a pharmaceutically acceptable non-toxic excipient and myco
Phenolic acid, mycophenolate mofetil or their pharmaceutically acceptable
A pharmaceutical composition for the treatment of stenosis, comprising a therapeutically effective amount of a salt or derivative.
To do.
In a preferred embodiment of the invention, angioplasty or cardiac bypass surgery is involved.
To prevent stenosis or restenosis, mycophenolate mofetil or its
These pharmaceutically acceptable salts are administered orally.
Detailed Description of the Invention
Definitions and general parameters
The following definitions mean the meanings of various terms used to describe the invention herein.
And to describe and define ranges.
As used herein, the term "alkyl" contains only carbon and hydrogen.
It represents a fully saturated monovalent radical that is cyclic, branched or linear
Can be le. The term also refers to methyl, ethyl, t-butyl, pen
Radicals such as chill, heptyl, pivalinole, cyclopentyl and cyclohexyl
Mosquito
Is exemplified by
The term "lower alkyl" refers to a monovalent alkyl radical of 1 to 6 carbon atoms.
. This term is further defined as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl.
, T-butyl, i-butyl (or 2-methylpropyl), isoamyl, pen
It is exemplified by radicals such as tyl and isopentyl.
The term "alkylene" refers to a fully saturated divalent radical containing only carbon and hydrogen.
It represents dicar and can be a branched or linear radical. For this
The term further includes methylene, ethylene, n-propylene, t-butylene, i-pentyl.
It is exemplified by radicals such as len and n-heptylene.
The term "alkoxy" refers to the group -OR, where R is lower alkyl as defined above.
There is.
The term “aryl” refers to a single ring (eg phenyl) or a bi-fused ring (eg naphthyl).
Represents a substituted or unsubstituted monounsaturated aromatic carbocyclic radical having
.
The term "acyl" refers to radicals based on organic acids, such as -C (O) R.1,here
R1Represents alkyl or aryl.
The term "halo", as used herein, includes fluoro, bromo, chloro and
Represents iodine.
Separation and purification of the compounds and intermediates described herein can be carried out if desired.
, Eg, filtration, extraction, crystallization, column chromatography, thin layer chromatography
Fees or thick-layer chromatography or a combination of these methods.
It can be achieved by a careful separation or purification method.
"Pharmaceutically acceptable salt" is any salt derived from an inorganic or organic acid.
Can be The term "pharmaceutically acceptable anion" refers to such salts.
Represents an anion. Salts and anions are biologically or otherwise undesirable
Selected from other than the ones. These salts include hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid (sulfate
Acid and bisulfate salts), inorganic acids such as nitric acid, phosphoric acid and the like.
, And acetic acid, propionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malic acid
, Malonic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid,
Katsura
Cynamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfo
Formed with organic acids such as acids, salicylic acid and the like.
As used herein, the term "treatment" or "treating" refers to mammals.
Means any treatment of the following diseases:
(I) Preventing the disease, that is, preventing the clinical manifestation of the disease from occurring.
;
(Ii) deterring the disease, ie, deterring the progression of clinical symptoms; and / or
Or
(Iii) To alleviate the disease, that is, to cause remission of clinical symptoms
including.
As used herein, the term "effective amount" or "therapeutically effective amount" is the term
It refers to a dosage sufficient to provide treatment for the disease state being investigated. this is
It will vary depending on the patient, the disease and the treatment achieved.
As used herein, the term "stenosis" is used in context or in a specific description otherwise.
It should be understood to include "restenosis" unless it is tasting
.
As used herein, the term "derivative" is incorporated by reference herein in its entirety.
U.S. Pat. Nos. 4,686,234; 4,725,622; 4,727,069; 4,748,173; 4,
753,935; 4,786,637; 4,808,592; 4,861,776; 4,868,153; 4,948,793
No. 4,952,579; 4,959,387 and 4,922,467.
Based on the structure of cophenolic acid, the 4-position or side-chain carboxylic acid of the bicyclic ring
Compounds having a substituent in place of -OH on the acid (e.g., U.S. Pat. No. 4,748,17
Sources of compounds used in the method of the invention
Mycophenolic acid is commercially available, for example, from Sigma Chemica, St. Louis, Missouri.
Available from Le Company.
Mycophenolate mofetil or E-6- (1,3-dihydro-4-hydro
Xy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofuranyl) -4
-Methyl-4-hexenoic acid morpholinoethyl is incorporated in advance with reference to the present specification.
As described in U.S. Pat.No. 4,753,935,
Throw
Can be given.
Pharmaceutically acceptable mycophenolic acid and mycophenolate mofetil
Salts or derivatives are all incorporated by reference herein, U.S. Pat.
234; 4,725,622; 4,727,069; 4,748,173; 4,753,935; 4,786,637;
4,808,592; 4,861,776; 4,868,153; 4,948,793; 4,952,579; 4,959,38
Can be produced, formulated and administered as described in Nos. 7 and 4,922,467
.
Utility, testing and administration
General utility
The compounds used in the method of the invention are inosine monophosphate decine.
It inhibits drogenase and, as a result, is required for DNA synthesis and cell growth.
Contains smooth muscle cells by acting to deplete xyguanosine triphosphate
Inhibits cell growth. The compounds are proliferative responses to vascular injury, such as
It is useful for suppressing stenosis associated with damage to the blood vessel wall.
In particular, mycophenolic acid, mycophenolate mofetil or their pharmaceuticals
Acceptable salts or derivatives are used prophylactically and / or endothelium of the vascular wall or
Is a surgical procedure (eg, removal of endothelial cells or
After treatment for damage caused), the patient is administered. Used in the method of the invention
Compounds do not need to be administered with other active agents to increase potency,
It is also possible to use such additional activators.
test
In vitro stenosis treatment activity is shown by inhibition of smooth muscle cell proliferation.
This was established by the human arterial smooth muscle cell proliferation assay. Human smooth muscle cells
, Grow in medium. The test group was prepared by adding the test compound to a selective concentration in fresh medium.
test. Both groups were labeled with radioisotope, 2 μCi tritiated thymidine (3H
TdR) is given. After 24 hours, cells were collected and the amount of label incorporated into the DNA
Are counted by scintillation. Compare this between the test group and the control group
, Its amount is proportional to cell proliferation. Inhibition of smooth muscle proliferation is better in the test group than in the control group.
Low
Approved if it has a high radioisotope count. Proliferation 50% (IC50
) And the concentration of the test compound required to inhibit
The concentration of test compound required to measure
In vivo stenosis treatment activity has been demonstrated in a rat model of arterial stenosis.
It The test group is treated with test compound, which is 6 days before injury to the left carotid artery
, And continue for 14 days after the injury. Test group as vehicle containing no test compound
Is compared with the control group given. Gently perfuse a 10 mm long segment of the left artery with air
This causes damage. The right artery is left intact. Crossing artery
A piece (10 μm) was taken from both the left and right arteries of each subject, and the vascular wall (vascular endothelium, internal
Membrane, media) area is measured. The amount of blood vessel growth is the average plane of the damaged left carotid artery.
Calculated by subtracting the mean area of the intact right carotid artery from the product. Test group is lower than control group
If it shows proliferation, a decrease in blood vessel proliferation is evidenced.
Administration
Mycophenolic acid, mycophenolate mofetil and their pharmaceutically acceptable
Salts and derivatives that can be prepared are, for example, rice previously incorporated by reference herein.
Similar utility as described in national patents 4,753,935 and 4,922,467
Administered by any accepted form and formulation for sex-giving drugs
it can.
Administration may be, for example, tablets, suppositories, pills, capsules, powders, solutions, suspensions.
Suspensions, emulsions, creams, lotions, aerosols, ointments, gels
In solid, semi-solid, lyophilized powder or liquid dosage forms, such as
Can be carried out orally, nasally, parenterally or topically, and preferably
It is a unit dosage form suitable for easy administration of different doses. The composition is conventional
Pharmaceutical carriers or excipients and active compounds (mycophenolic acid, mycophenolic acid
Mofetil or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof)
And may further contain other drugs, pharmaceutical carriers, adjuvants, etc.
.
Generally, the compounds of this invention are therapeutically effective, ie, sufficient to effect treatment.
Different doses, which will vary with the individual being treated and the condition. Starting
In the context of the invention, a therapeutically effective amount is one that inhibits the cell proliferative response to vascular injury.
Is. Preferably, a plasma concentration of about 0.3 μM to 10.0 μM, most preferably
Preferably, about 1.0 μM is a therapeutically effective amount, which is a growth arresting amount.
In the case of the above-mentioned symptoms, the preferable administration method can be adjusted according to the degree of pain.
Oral administration using a convenient daily dosage regimen. For such oral administration
Is a non-toxic pharmaceutically acceptable composition, for example, pharmaceutical mannitol, lactose.
Tose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, talc, ce
Lulose, glucose, gelatin, sucrose, magnesium carbonate and the like
It is prepared by including any of the commonly employed excipients such as this
Such compositions include solutions, suspensions, tablets, pills, capsules, powders,
It takes the form of extended release formulations and the like.
Preferably the composition is in the form of pills or tablets, thus
The composition contains lactose, sucrose, dicalcium phosphate and the active ingredient.
And similar substances, disintegrating substances such as starch or their derivatives, and starch.
Lubricants such as magnesium formate and the like, and starch, acacia gum,
Polyvinylpyrrolidone, gelatin, cellulose and their derivatives and the like
It contains a binder such as a product.
Pharmaceutically administrable liquid compositions include, for example, the active compounds described above (about 0.5%
About 20%) and the desired pharmaceutical adjuvant, eg, water, saline,
Dissolve, suspend, etc. in aqueous dextrose, glycerol, ethanol and similar substances
And thereby producing a solution or suspension.
If desired, the pharmaceutical composition to be administered may be, for example, sodium acetate, monolaurate.
Wetting agents or emulsifiers such as sorbitan acid salt and triethanolamine oleate
, Small amounts of non-toxic auxiliary substances such as pH buffering agents and the like.
The actual methods for preparing such dosage forms are known and known to those skilled in the art.
Is self-evident. For example, Remington's Pharmaceuticals Scientific
, 16th Edition (Mac Publishing Company, Easton, PA)
Near, 1980). The composition to be administered is, in any event, the teaching of the invention.
A pharmaceutically effective amount for alleviating the particular condition being treated when administered as indicated.
Of the active compound.
The therapeutically effective daily oral dose is about 0.02 mg / kg body weight to about 1
00 mg / kg body weight) preferably about 25 mg / kg body weight to about 60 mg / kg body weight. Stillness
The same applies to the dose for pulse administration. Mycophenolate mofetil is anti-allograft rejection
Approximately 25 to match patient and allograft to be treated to prevent response
Equivalent to daily dose of mg / kg body weight to about 60 mg / kg body weight 2.0 per mortar
, 3.0, 3.5 and 4.0 grams oral doses. Similar dosage
It is also effective in each treatment method of the present invention.
Example
The following formulations and examples will enable those skilled in the art to more clearly understand and practice the present invention.
It is for the purpose. They do not limit the scope of the invention, they are merely
It should be understood that the invention is illustrative and representative.
Example 1
This example describes active compounds such as mycophenolic acid, mycophenolic acid morphs.
Ethyl, or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof, such as E-6
-(1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxy
So-5-isobenzofuranyl) -4-methyl-4-hexenoic acid morpholinoethyl
It illustrates the preparation of a representative pharmaceutical formulation for oral administration containing a hydrochloride salt.
is there.
component Amount per capsule, mg
Active compound 200
Lactose, spray dried product 148
Magnesium stearate 2
The above ingredients are mixed and placed in a gelatin hard capsule.
Example 2
This example describes active compounds such as mycophenolic acid, mycophenolic acid morphs.
Ethyl, or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof, such as E-6
-(1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxy
Source
5-Isobenzofuranyl) -4-methyl-4-hexenoic acid morpholinoethyl hydrochloric acid
It illustrates the preparation of another representative pharmaceutical formulation for oral administration containing a salt.
is there.
component Amount per capsule, mg
Effective compound 400
Corn starch 50
Lactose 145
Magnesium stearate 5
The above ingredients are mixed intimately and compressed into single scored tablets.
Example 3
This example describes active compounds such as mycophenolic acid, mycophenolic acid morphs.
Ethyl, or a pharmaceutically acceptable salt or derivative thereof, such as E-6
-(1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxy
So-5-isobenzofuranyl) -4-methyl-4-hexenoic acid morpholinoethyl
1 illustrates the preparation of a representative pharmaceutical formulation containing the hydrochloride salt.
component
Effective compound 1.0g
Fumaric acid 0.5g
Sodium chloride 2.0g
Methylparaben 0.1g
Granulated sugar 25.5g
Sorbitol (70% solution) 12.85 g
Veegum K 1.0g
(Vanderbilt Company)
Fragrance 0.035 ml
Dye 0.5 mg
Distilled water 100ml with appropriate amount
And
Example 4
Measurement of in vivo activity using the human arterial smooth muscle proliferation assay
Human smooth muscle cells, AG11545 (obtained from the Coriel Cell Repository)
Low concentration (2.5 × 10Four24-well plate (10% fetal bovine blood) in cells / ml
In Dulbecco's modified Eagle's medium containing clear water). Allow cells to grow for 48 hours
Let Then, mycophenolic acid (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM and
And 10 μM) (except for control wells). Allow the cells to grow for 24 hours and
Afterwards, it was collected using TCA precipitation. The amount of label incorporated into the DNA is scintillated.
The test wells were compared with the control wells. From the result,
50% proliferation of smooth muscle cells in vitro (IC50), And 95% or more
The concentration of mycophenolic acid effective to reduce the concentration was measured.
When tested by this method, mycophenolic acid has an IC of about 0.3 μM.50Have
It was A concentration of 1.0 μM inhibited smooth muscle cell proliferation by 95% or more. This is
, Mycophenolic Acid, Stenosis or Restenosis in Human Patients Undergoing Surgery
It is useful for deteriorating the disease.
Instead of mycophenolic acid, a pharmaceutically acceptable salt of mycophenolic acid or
Is a non-ester derivative and the same procedure was performed to obtain similar smooth muscle cell proliferation-reducing activity.
To be This means that these mycophenolic acids and pharmaceutically acceptable salts and
And non-ester derivatives cause stenosis or restenosis in human patients undergoing surgery
It is useful for deteriorating the disease.
There is about 25 mycophenolic acid concentration of 0.3 to 10 μM in humans
Be treated with a daily oral dose of mycophenolate mofetil of about 60 mg / kg.
And can be reached easily. This means that mycophenolate mofetil, its
Pharmaceutically acceptable salts and ester derivatives of mycophenolic acid
Useful in controlling stenosis or restenosis in human patients undergoing treatment
It is something.
Example 5
Measurement of in vivo activity using rat arterial stenosis model
Test substance
Mycophenolate mofetil was added to SSV, ie 0.5% carboxymethyi in water.
Soluble cellulose, 0.9% NaCl, 0.4% Tween 80, and
Suspend in a medium consisting of 0.9% benzyl alcohol.
animal
350 ± 25 grams of male Sprague Dawley rats (Crl, C, 3-4 months old)
D (registered trademark) (SD) BR) was used. Animals should be individually housed and rodent marked.
He was given a quasi-meal.
Remedy
Experimental group of 30 rats, daily dose of mycophenolate mofetil 30 mg / kg
Were treated in two equal doses and treated orally with 6 hour intervals. Causes neointimal proliferation
To scrub, start treatment 6 days before carotid injury and 14 days after injury
The treatment was continued. A control group of 30 rats was similarly treated with SSV vehicle alone.
It was
Arterial injury model
The left carotid artery of each rat was analyzed by Fishman, JA, et al.
Nation in the Rat Carotide Artery and the Signi
The Ficus of Endotheranial Dedication in the Pasogenesi
S of Mio Intimal Sickening ", Laboratory Investige
, 1975, 32, 339-351.
Let
58% ketamine for each animal (Fault Dodge Laboratories, Iowa) 6
0 mg / kg) and 42% xylazine (Lloyd Laboratories, Iowa) 10
Anesthesia was given by administration of the mg / kg mixture. Then the left common carotid artery
The distal 10 mm long section was opened. Place a silk tie and tie it loosely at each end of the open artery.
Ligated. A 30 gauge needle attached to a syringe containing Tyrode's solution (Sigma)
A puncture site was made near each ligature using. Then tap through these holes
The Irode's solution was perfused and the separated blood vessels were rinsed with blood. Then from the same hole
Air was gently perfused for 3 minutes at a rate of 25 ml / min to damage the artery. Ligation site
Was allowed to solidify, the ligature was removed and the wound was closed. By this operation, endothelium erosion and alignment
At that time, destruction of the intima and media underlying the vessel wall occurred.
Animals were sacrificed 14 days after injury. Remove both left and right carotid arteries and remove 10%
Lumarin, then 30% sucrose, 3 days later
And scored.
Analysis of neointimal proliferation
The recollected artery is cut into quarters and the four sections are combined and
Mu Cutting Temperature (OTC) compound (Miles, India
Embedded in a single block. From the block, 15 of each 10 μM thick
Transarterial fragment, microtome / cryostat (Miles, Indiana)
It was minced with -20 ° C and then stained with hematoxylin-eosin. Dyeing
Colored transverse arterial sections were scanned using Sigma Scan (Yandel Scientific, Co
To Madera, California) connected to a programmed computer
It was projected with a microscope on a digital board. Using an electronic pen, project inside the artery wall
And external contoured, mean transverse of both left (damaged) and right (control) arteries
The surface area is calculated electronically from fragments 1, 4, 7, 10 and 13 of 15 transverse artery fragments.
Decided The final area of smooth muscle proliferation for each rat is the average area of injured arteries.
Was calculated by subtracting the mean area of control arteries from. All scoring crosses
Pieces derived from test or control rats, or damaged arteries or intact
It was randomized by investigators who were unaware of whether it originated from the arteries.
Statistical analysis
Parametric unpaired t-test and non-parametric Mann Witney U test
Both were used with mycophenolate mofetil treated group and SSV vehicle treated
The control group was compared to determine if there was a significant reduction in mean disease size.
result
30 mg / kg mycophenolate mofetil induces air perfusion 14 days after injury
Markedly reduces the vascular proliferative response to vascularized vessel wall damage and
Give:
Damaged artery Intact movementpulse
Mycophenolate mofetil 1772 ± 295mm2 1176 ± 103 mm2
SSV medium control 2289 ± 532mm2 1186 ± 69 mm2
Average area of vascular growth below (area of intact artery minus area of damaged artery)
Gave:
Blood vessel growth
Mycophenolate mofetil 546 ± 280mm2
SSV medium control 1103 ± 533mm2
This corresponded to a 51% reduction in neointimal proliferation (p <0.05).
Consideration
Mycophenolate mofetil promotes neointimal proliferation following vascular injury in vivo.
Inhibits up to 51%. This means that mycophenolate mofetil is
To be useful in deterring stenosis or restenosis in receiving human patients
It is shown.
Mycophenolic acid or their pharmaceuticals instead of mycophenolate mofetil
Acceptable salt or derivative, or mycophenolate mofetil pharmaceutical
By repeating this procedure with an acceptable salt or derivative of
Inhibition of neointimal proliferation is observed. Mycophenolic acid and their pharmaceutically acceptable
Salts and derivatives, and pharmaceutically acceptable mycophenolate mofetil
Possible salts and derivatives are stenosis or restenosis in human patients undergoing surgery.
It is useful for controlling stenosis.
Although the present invention has been described with reference to particular embodiments of the invention, those skilled in the art will appreciate that
It is possible to make various changes without departing from the true spirit and scope of Ming.
It should be understood that seeds can also be substituted. Further, the eye of the present invention
Makes many modifications to the physical, spiritual, and scope of a particular situation, material, composition,
It is also possible to apply processes, process steps or several steps. These modifications are
,
All are intended to be within the scope of the claims appended hereto.