JPH08502525A

JPH08502525A - CETP inhibitor polypeptides, antibodies to synthetic polypeptides, and prophylactic and therapeutic agents for the treatment of anti-atherosclerosis

Info

Publication number: JPH08502525A
Application number: JP7506464A
Authority: JP
Inventors: クシュワハ，ラムプラタップ・エス; マクギル，ヘンリー・シー，ジュニアー; カンダ，パトリック
Original assignee: サウスウエスト・ファンデーション・フォー・バイオメディカル・リサーチ
Priority date: 1993-08-04
Filing date: 1994-08-02
Publication date: 1996-03-19
Also published as: AU683295B2; CA2145767A1; WO1995004755A1; EP0664813A1; EP0664813A4; KR950703580A; AU7552694A

Abstract

(57)【要約】ポリペプチドおよびその類似体はコレステロールエステル転送蛋白質（ＣＥＴＰ）を阻害する。抗アテローム性動脈硬化症組成物は、抗アテローム性動脈硬化症に有効な量のポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む。抗アテローム性動脈硬化症キットは、ポリペプチドを含む少なくとも１ユニットの組成物、少なくとも１つのシリンジおよび少なくとも１つの針を別々の容器に含む。抗体は、本発明のポリペプチド、ヒヒＣＥＴＰ４ｋＤポリペプチド阻害剤、ａｐｏＣ−１の１−３６アミノ酸Ｎ末端フラグメント、修飾ａｐｏＡ−Ｉ（ＭＷ：３１ｋＤ）、または修飾ａｐｏＥ（ＭＷ：４１ｋＤ）に対する特異性を有する。アテローム性動脈硬化症の状態の素因を有する哺乳動物において抗アテローム性動脈硬化症を予防する方法は、哺乳動物に予防上有効量の本発明のポリペプチドを投与することを含み、アテローム性動脈硬化症に罹患した哺乳動物を治療する方法は、治療上有効量の本発明のポリペプチドを投与することを含む。 (57) [Summary] Polypeptides and analogs thereof inhibit the cholesterol ester transfer protein (CETP). The anti-atherosclerosis composition comprises an anti-atherosclerosis effective amount of the polypeptide and a pharmaceutically acceptable carrier. The anti-atherosclerosis kit comprises at least one unit of composition comprising the polypeptide, at least one syringe and at least one needle in separate containers. The antibody has specificity for a polypeptide of the invention, a baboon CETP4kD polypeptide inhibitor, a 1-36 amino acid N-terminal fragment of apoC-1, modified apoA-I (MW: 31kD), or modified apoE (MW: 41kD). Have. A method of preventing anti-atherosclerosis in a mammal predisposed to an atherosclerotic condition comprises administering to the mammal a prophylactically effective amount of a polypeptide of the invention, the method comprising: A method of treating a mammal suffering from a disease comprises administering a therapeutically effective amount of a polypeptide of the invention.

Description

【発明の詳細な説明】ＣＥＴＰ阻害剤ポリペプチド、合成ポリペプチドに対する抗体、および抗アテローム性動脈硬化症治療のための予防薬および治療薬発明の背景本出願は、１９９１年１２月１８日に出願された出願番号第０７／８１１，０４９号の一部継続出願である。本発明に至る仕事は、国立心臓、肺および血液研究所の補助金番号ＨＬ２８９７２およびＨＬ４１２５６号、および契約番号ＨＶ５３０３０号により一部援助された。政府は本願特許について権利を有する。発明の分野本発明は、内因性ヒヒ血漿コレステロールエステル転送蛋白質（ＣＥＴＰ）阻害剤ポリペプチドに関する。より詳細には、本発明はこのポリペプチドの同定および特徴付け、ならびにＣＥＴＰの阻害活性を有する新規合成ぺプチドに関する。内因性阻害ペプチドは、分子量４，０００を有し、それぞれ分子量３１ｋＤおよび４１ｋＤを有する修飾ａｐｏＡ−１およびａｐｏＥの形態で血漿中に存在し、ａｐｏＣ−１のＮ末端フラグメントと共通のアミノ酸配列を有する。本発明はまた、抗アテローム性動脈硬化症組成物、キット、および阻害蛋白質のＮ末端アミノ酸配列に対して生じさせた抗体に関する。本発明の阻害ペプチド、そのフラグメントおよびその類似体は、アテローム性動脈硬化症治療の予防薬および治療薬として有用である。背景の記述アテローム性動脈硬化症は、それに付随する合併症、特に冠状動脈心疾患のため、今日米国において最も広範な健康上の問題の１つである。早期アテローム性動脈硬化症（主として血漿コレステロールレベルの上昇）の発症には、多くの危険因子が関与してきている。コレステロールは心疾患の発生に極めて重大な役割を果たしていると思われるため、ヒトの身体におけるコレステロールの合成、輸送および代謝の研究に対して多大な注意が向けられてきた。特に興味深いことは、血漿リポ蛋白質または血清脂質のレベルと冠状動脈心疾患の発症の危険との関係を確立することである。高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）および低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）は、コレステロールを主としてコレステロールエステル（ＣＥ）の形態で運搬する。しかし、ＬＤＬコレステロールが正の危険因子であり、ＨＤＬコレステロールがむしろより重要な負の危険因子であるといういくつかの兆候がある。これらのリポ蛋白質の正確な機能は完全には確立されていないが、ＨＤＬは末梢細胞からのコレステロールの除去および肝臓へ戻す輸送を担うようである。肝臓では身体から排出されたコレステロールの大部分が除去される。ＬＤＬおよびＨＤＬは、ＣＥおよびトリグリセリド等の一般にゆっくりと加水分解される代謝産物で動脈細胞の壁のライソソームに負荷をかけることにより、心血管疾患の発症における主要な役割を果たすと信じられている。これらの産物は、血漿ＬＤＬにより肝臓および腸から排出される。輸送されるべき脂質の量が、肝臓へ排出するＨＤＬの輸送能力を越える場合には、ＣＥは動脈壁等のある種の重要な領域の細胞中に沈着するようになる。この過負荷は最後に細胞の機能を損ない、このことが続くと細胞は死に至る。継続的な過負荷は、血管壁における細胞破片の蓄積およびアテローム性動脈硬化症斑の形成をもたらす。一方このことは、影響される動脈および／または筋肉の痙攣の妨害を引き起こし、この事象から冠状動脈心疾患または発作の兆候が現れるかもしれない。したがって、血漿中のＨＤＬのレベルは、ヒトおよび実験動物においてアテローム性動脈硬化症を発症する可能性と負に相関している。ＨＤＬのレベルは個体により著しく異なることが示されているが、そのような血漿中のレベルを制御する手段はまだ明らかになっていない。ＣＥＴＰはＣＥをＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬに転送し、これは血漿ＨＤＬレベルの制御に重要な役割を果たしていることが示唆されている。高αリポ蛋白血症患者には、ＬＤＬと明らかに区別される大きなＨＤＬ粒子を高レベルで有する者があることが報告されている。これらの患者からの血漿試料は、ＣＥＴＰ活性を欠失していることが示されている（Koizumi et al.，Atherosclerosis 58 ：175-186（1985））。家族性高αリポ蛋白血症のホモ接合患者は、ＨＤＬからＬＤＬへのＣＥの転送が欠損していることが見いだされている（Yokoyama et al .，Artery 14: 43-51 （1986））。患者血漿からの密度ｄ＞１．２１ｇ／ｍｌの分画は、正常ＨＤＬの実質的なＣＥＴＰ活性を立証した。しかし、ＨＤＬはＣＥＴＰの好ましくない（poor）基質であることが証明されている。ある種の動物の雄親およびその子孫は、異常なリポ蛋白質パターン、例えばＬＤＬとＨＤＬとの中間の密度のリポ蛋白質または大きな高密度リポ蛋白質を有している。これらのリポ蛋白質はＨＤＬ₁、動物表現型は「高ＨＤＬ₁」と名付けられている。例えば、高いまたは低いＨＤＬ₁のいずれかのパターンを有するヒヒの種が知られている。ほとんどの場合、ＨＤＬ₁はＬＤＬとＨＤＬとの間の区別されるピークとしてまたはＨＤＬピークの肩として分離され、高コレステロール、高ラード（ＨＣＨＦ）食餌により誘導される。ＨＤＬ₁の比率は、ヒヒがコレステロールを含むかまたは含まない、ポリ不飽和脂質に富む食餌を与えられたときに減少する。しかし、時には、チャウ（chow）食餌を与えられた高ＨＤＬ₁ヒヒに存在するＨＤＬ₁の量は低い。いくつかの雌ヒヒにおいては、ＨＣＨＦ食餌を与えられたとき血漿ＨＤＬ₁のレベルが増加することが示されている。ＨＣＨＦ食餌を与えられたとき、ヒヒはより高い血漿ＨＤＬレベルも示す。より一般的には、ヒヒならびにヒトにおけるＨＤＬの蓄積は、ＨＤＬから超低密度リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）およびＬＤＬへのＣＥのより遅い転送と関連する。したがって、高ＨＤＬ₁血漿レベルのヒヒは、高αリポ蛋白血症の研究のための優れた動物モデルである。先の研究においては、本発明の発明者の一部は、高ＨＤＬ₁ヒヒにおいてＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬへのＣＥの遅い転送が観察されることを報告している。これは、ＨＤＬおよび中間密度リポ蛋白質（ＩＤＬ）粒子と会合しているＣＥＴＰ蛋白質阻害剤の存在のためであった（Kushwaha et al.，J．P．Lipid Res ．31: 965-974（1990））。ＨＣＨＦ食餌を与えられた高ＨＤＬ₁ヒヒにおけるＨＤＬ₁の蓄積ならびにＨＤＬからＬＤＬへのＣＥの遅い転送が報告されている。ＳｏｎおよびＺｉｌｖｅｒｓｍｉｔにより、同様の蛋白質がヒト血漿においても見いだされている（Son and Zilversmit，B．B．A.，795: 473-480（1984））。ヒト蛋白質は分子量３１，０００を有し、トリアシルグリセロールおよびＣＥの転送を抑制する。ラット、豚および犬を含むいくつかの他の種が、血漿中に容易にＨＤＬ₁を蓄積することが報告されている。クラサワら（Kurasawa et al.，（1985）上掲）は、家族性高αリポ蛋白血症を有するホモ接合患者が、ＨＤＬとＬＤＬとの間のＣＥ転送を欠損していることを報告している（Kurasawa et al.，J．B．Biochem ．98: 1499-1408（1985））。これとは別に、ヨコヤマらは、同一の患者のｄ＞１．２１ｇ／ｍｌの血漿分画は、正常ＨＤＬで試験したときに実質的なＣＥ転送活性を立証したことを報告している（Yokoyama et al.，Artery 14（1）:43-51 （1986））。この患者において蓄積されるＨＤＬ粒子は、通常のＨＤＬ₂よりも実質的に分子量が大きい。ＨＤＬは一般に、その粒子サイズおよび密度によって副分画に分けられる。これらの分画には、ＨＤＬ₁、ＨＤＬ₂およびＨＤＬ₃が含まれる。ＨＤＬ₁は、最も大きい粒子であり、通常は正常ヒトまたはヒト以外の霊長類の血漿には存在しない。ＨＤＬ₂およびＨＤＬ₃は、ヒト血漿の正常成分である。ＨＤＬ₂は、ＨＤＬ₃ より大きく、男と女では異なる。コレステロールの血漿レベルを変化させるために、哺乳動物においてコレステロールの輸送および転送を妨げる多くの試みがなされてきた。例えば次のようなものである。米国特許第４，９８７，１５１号（Taboc）は、アシルコエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）酵素を阻害するトリテルペン誘導体を開示する。ＡＣＡＴは血漿中には存在しない細胞性酵素であり、細胞性コレステロールをエステル化してＣＥを形成する。この酵素は、血漿中に存在するＣＥ転送蛋白質（ＣＥＴＰ）とは異なる。ＣＥＴＰはＡＣＡＴとは異なりＣＥを形成しない。そのかわりに、ＣＥＴＰは異なる血漿リポ蛋白質の間でＣＥを転送する。米国特許第４，６４３，９８８号（Segrest，et al）は、ＨＤＬ中のａｐｏＡ −Ｉを置換しうる両親媒性ペプチドを開示する。ａｐｏＡ−Ｉは、ＨＤＬにおいてＣＥを形成する血漿酵素であるレシチンコレステロール：アシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）酵素を刺激することが知られている。血漿ＣＥＴＰは、これと対比的に、ＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬにＣＥを転送する。したがって、ＣＥＴＰ酵素の機能はＬＣＡＴ酵素の機能ともまた異なる。さらに、Ｓｅｇｒｅｓｔらのペプチドのアミノ酸配列は本発明のＣＥＴＰ阻害剤の配列と異なる。本発明の概要本発明は、ＣＥ転送蛋白質（ＣＥＴＰ）の阻害活性を有する実質的に純粋なポリペプチドに関する。本発明はまた、抗アテローム性動脈硬化症に有効な量の上述のポリペプチド；および薬学的に許容しうる担体を含む、抗アテローム性動脈硬化症組成物に関する。さらに本発明は、少なくとも１ユニットの上述の組成物；少なくとも１つのシリンジ；および少なくとも１つの針を別々の容器に含む、抗アテローム性動脈硬化症キットに関する。本発明はまた、上述のポリペプチド；ヒヒＣＥＴＰポリペプチド阻害剤；ａｐｏＣ−１の１−３６アミノ酸のＮ末端フラグメント；修飾ａｐｏＡ−Ｉ（ＭＷ：３１ｋＤ）；および修飾ａｐｏＥ（ＭＷ：４１ｋＤ）からなる群より選択されるポリペプチドに対する特異性を有する抗体に関する。別の態様においては、本発明はそのような状態の素因を有する哺乳動物における抗アテローム性動脈硬化症を予防する方法に関し、この方法は、哺乳動物に予防上有効量の上述のポリペプチドを投与することを含む。本発明はまた、アテローム性動脈硬化症に罹患した哺乳動物を治療する方法に関し、この方法は、哺乳動物に治療上有効量の上述のポリペプチドを投与することを含む。本発明の他の目的、利点および特徴は、以下の記述から当業者に明らかとなるであろう。好ましい態様の記述本発明は、ヒトにおけるアテローム性動脈硬化症の予防および治療に対する新規かつ自明でない研究法を提供しようとする発明者らによる希望から発生したものである。コレステロールと血漿中および肝臓中のリポ蛋白質の異なる分画との会合に関して知られていることの図式を以下に示す。ＨＤＬ₁、ＶＬＤＬおよびＬＤＬの蓄積（↑）をもたらす代謝段階については上述した。ＨＤＬ₂₊₃は、肝外細胞からコレステロールを集め、次にこれをＬＣＡＴによりエステル化してコレステロールエステル（ＣＥ）を形成し、粒子の核に保存する。ＨＤＬは大きくなり（ＨＤＬ₁）、ａｐｏＥを取り込み粒子に達し、この粒子はＬＤＬレセプター（ＬＤＬ−Ｒ）から肝細胞へと除去される。ＣＥに富むＨＤＬ₁はまた、ＣＥをＶＬＤＬおよびＬＤＬに与える。これはＣＥＴＰにより媒介される。本発明により提供されるもの等のＣＥＴＰ阻害剤が存在するため、ＣＥ転送は遅く（棒）、トリグリセリド（ＴＧ）の相互転送は生じない（Ｘ）。したがって、トリグリセリドに乏しいＨＤＬは、肝トリグリセリドリパーゼ（ＨＴＧＬ）の適当な基質ではない。血漿中にＣＥＴＰ阻害剤が存在するため、ＶＬＤＬおよびＬＤＬは肝臓では得られない。このことの結果として、次に肝臓はＬＤＬレセプターおよび３ヒドロキシ、メチル、グルタリルーコエンザイムＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）シンセターゼの産生を増加させるためにメッセージの発現を増加させる。肝臓におけるＬＤＬレセプターの増加により、ａｐｏＥを含むＬＤＬまたはＨＤＬの取り込みが増加し、このため、肝臓により多くのコレステロールが運ばれる。ＨＭＧ−ＣｏＡシンセターゼの合成の増加により、細胞の必要性をすべて満たすために肝臓におけるコレステロールの合成が増加する。したがって、血漿中におけるＣＥＴＰ阻害剤の存在は、組織によるＶＬＤＬおよび／またはＬＤＬの取り込みならびにコレステロールエステルの沈着を防止するであろう。一般に、高レベルのＨＤＬは抗アテローム性動脈硬化症効果を有するが、一方、高レベルのＬＤＬはアテローム発生の効果を有する。コレステロール等の水に不溶性の化合物の血液中における循環には、粒子の形成を必要とする。不溶性成分、例えばコレステロールエステルおよびトリグリセリドは、粒子の核に詰め込まれ、蛋白質、リン脂質等の極性成分により取り囲まれている。これらの粒子はリポ蛋白質と称され、したがって極性外殻および非極性核を有する。核にＣＥを含むリポ蛋白質の会合は、その大きさおよび密度に依存して、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬおよびＨＤＬと名付けられている。ＶＬＤＬは肝臓から分泌される最大のリポ蛋白質であり、ＶＬＤＬに含まれるトリグリセリドが動脈壁の表面に存在するリポ蛋白質リパーゼ酵素により加水分解された後、ＩＤＬに、続いてＬＤＬに変換される。ＬＤＬはコレステロールエステルを肝外および肝組織に与える主要リポ蛋白質である。ＨＤＬはまた肝臓によって分泌され、大きさおよび密度に基づいてＨＤＬ₂およびＨＤＬ₃に分けられる。ＨＤＬの機能は肝外細胞からコレステロールを取り出し、これをＶＬＤＬおよびＬＤＬを通して、またはａｐｏＥに富む大きいＨＤＬを通して肝臓に運ぶ。これらの大きいＨＤＬ粒子はＨＤＬ₁と称され、血漿中に長時間留まらない。これらはコレステロールエステルをＶＬＤＬおよびＬＤＬに与えた後、肝臓により速やかに除去されるかまたは変換してＨＤＬ₂に戻る。ＨＤＬ₁は正常ヒトまたはヒト以外の霊長類には存在しない。上述したように、ＨＤＬ₁は、ＨＣＨＦ食餌を与えられているヒヒの血漿中では区別しうるバンドとして現れる。知られていることからは、コレステロールエステルは、血流に入るとＬＣＡＴ酵素の助力によりＣＥの形態でＨＤＬと会合するようになる。ＨＣＨＦ栄養ヒヒにおいては、これはＨＤＬ₁−ＣＥ画分として現れる。次にＣＥはＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬに転送され、ＣＥＴＰ酵素の助力によりＶＬＤＬ−ＣＥおよびＬＤＬ−ＣＥを形成する。次にこれらの粒子はＬＤＬレセプター（ＬＤＬ−Ｒ）を通って肝細胞に入る。肝細胞において代謝された後、ＶＬＤＬ −ＣＥは血漿、したがって哺乳動物体の抹消に戻り、ここにおける沈着がアテローム性動脈硬化症を引き起こす可能性がある。本発明により提供されるもの等のＣＥＴＰ阻害剤は、ＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬへのＣＥの転送を遮断する。あるいは、ＣＥとａｐｏＥとの会合およびＬＤＬレセプター（ＬＤＬ−Ｒ）を通して肝臓細胞に入ることのできるＨＤＬ₁ −ＣＥ−ａｐｏＥ粒子の形成を生じる側路が好ましい。ヒヒ以外の種々の種のアポリポ蛋白質Ｃ−Ｉは知られている。ａｐｏＣ−Ｉは５７アミノ酸を含む分子量６６００の単一のポリペプチドである。これは主としてＶＬＤＬおよびＨＤＬに存在する塩基性蛋白質であり、ＨＤＬはこの蛋白質の貯蔵所として働く。一方、ＬＤＬはａｐｏＣ−Ｉをほとんど含まない。最近、ａｐｏＣ−ＩがａｐｏＥをＶＬＤＬから排出させ、そのＬＤＬレセプターへの結合に影響を及ぼすことが示されている。本明細書に記載されるＣＥＴＰ阻害剤ポリペプチドは、ａｐｏＣ−ＩのＮ末端フラグメントと共通の配列を有する。以下に示すように、このフラグメントは少なくとも３６アミノ酸を含む。本発明により提供される内因性ポリペプチド（配列番号１）は、分子量約４０００であり、血漿中でａｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＥと会合するかまたは結合する。このＮ末端の３６アミノ酸を以下に示す。次の配列（配列番号１）の１−３６アミノ酸に対応する配列を有するポリペプチドが、本発明者により合成され、インビトロにおいてＣＥＴＰを阻害することが示された。このペプチドは次の配列を有する。このポリペプチド（配列番号１）の、アミノ酸２８−３６およびアミノ酸１６ −３６のＣ末端フラグメントを含むフラグメントは、５０μｇにおいて限定されたＣＥＴＰ阻害活性を示した。しかし、Ｃ末端アミノ酸２８−３６を含むフラグメントは、２００μｇにおいて、３６アミノ酸ペプチドとほぼ同一のＣＥＴＰ阻害活性を示した。合成ペプチドと対応するアミノ酸１−１５、アミノ酸１−２０およびアミノ酸１−１０を含むＮ末端フラグメントおよびアミノ酸１５−３０等を含む中間フラグメントは、ＣＥＴＰの阻害剤としての活性を有することを示した。配列番号２および配列番号３と名付けられる以下の２つの配列に対応する配列を有するポリペプチドもまた本発明者によって合成され、インビトロにおいてＣＥＴＰの阻害剤であることが示された。以下の２つの配列のうちの第１（配列番号２）は、ペプチドの最初に２つの追加のアミノ酸を有することを除いては配列番号１と同様のヒヒの配列である。以下の２つの配列のうちの第２（配列番号３）は、ヒトの配列であり、配列中の３８アミノ酸のうち７アミノ酸において配列番号２と異なる。ＣＥＴＰの阻害活性を有する本発明のポリペプチドの類似体およびそのフラグメントもまた本発明の一部である。この類似体は、配列中に１またはそれ以上の置換を有するが、依然としてその阻害活性を保持している。ＣＥＴＰの阻害剤として適当な類似体の例は、本発明のペプチドの類似体およびそのフラグメント、例えば以下の指針にしたがって１またはそれ以上のアミノ酸が置換されているものである。置換アミノ酸は、次の群より選択することができる。Ａspに対して、Ｇlu、Ｃ_α−メチルＡsp、およびβ−カルボキシＡsp；Ｖalに対して、isoＶaｌ、norＶal、Ｌeu）およびＣ_α−メチルＶal；Ａlaに対して、Ｇly、β−Ａla、Ｃ_α−メチルＡla、および２−アミノ酪酸；Ｌeuに対して、norＬeu、isoＬeu、およびＣ_α−メチルＬeu；Ｌysに対して、オルニチン、Ａrg、シトルリン、およびＣ_α−メチルＬys；Ｇlyに対して、Ａla、および２−アミノ酪酸；Ａsnに対して、Ｇln、シトルリン、およびＣ_α−メチルＡsn；Ｔrpに対して、Ｐ−ベンゾイルＰhe、Ａrg、およびＣ_α−メチルＴrp；Ｇluに対して、２−アミノアジピン酸、Ａsp、およびＣ_α−メチルＧlu；Ｉleに対して、Ｌeu、norＬeu、およびＣ_α−メチルＩle；Ａrgに対して、Ｌys、ホモＡrg、シトルリン、およびＣ_α−メチルＡrg；Ｇlnに対して、Ａsn、シトルリン、およびＣ_α−メチルＧln；Ｐheに対して、２−アミノ−４−フェニル酪酸、Ｌeu、およびＣ_α−メチルＰhe ；Ｔhrに対して、Ｓer、Ｍet、およびＣ_α−メチルＴhr；Ｓerに対して、Ｔhr、およびＣ_α−メチルＳer；およびＰroに対して、３，４−デヒドロＰro、Ｓer、およびＣ_α−メチルＰro；ならびにこれらの組み合わせ。しかし、当該技術分野において知られているように、置換アミノ酸と同等の性質を有する他の置換を、単独でもしくは他の置換と組み合わせて用いることもできる。すなわち、本発明にしたがって、ＣＥＴＰの阻害活性を有する実質的に純粋なポリペプチドが提供される。本発明の１つの態様においては、このポリペプチドは、高ＨＤＬ₁ヒヒの血漿中に存在する約３１ｋＤの修飾ａｐｏＡ−Ｉポリペプチドまたは次の配列：のペプチドの、このペプチドに対して生じさせた抗体への結合を阻害することができる。他の態様においては、本発明のポリペプチドは高ＨＤＬ₁ヒヒの血漿中に存在する約４ｋＤのＣＥＴＰ阻害ポリペプチドの、次の式：のペプチドに対して生じさせた抗体への結合を阻害することができる。さらに別の態様においては、本発明のポリペプチドは、高ＨＤＬ₁ヒヒの血漿中に存在する約４１ｋＤの修飾ａｐｏＥポリペプチドの、ａｐｏＣ−Ｉの３６アミノ酸Ｎ末端フラグメントまたは次の式：のペプチドに対して生じさせた抗体への結合を阻害することができる。さらにまた別の態様においては、このポリペプチドはａｐｏＣ−Ｉの３６アミノ酸Ｎ末端フラグメントまたは次の式：のペプチドの、修飾ａｐｏＡ−Ｉに対して生じさせた抗体への結合を阻害することができる。好ましいポリペプチドは、次の配列：（配列番号１）の抗４ｋＤペプチド抗体結合阻害フラグメント；および次の群：Ａspに対して、Ｇlu、Ｃａ−メチルＡsp、およびβ−カルボキシＡsp；Ｖalに対して、isoＶal、norＶal、Ｌeu、およびＣａ−メチルＶal；Ａlaに対して、Ｇly、β−Ａla、Ｃａ−メチルＡla、および２−アミノ酪酸；Ｌeuに対して、norＬeu、isoＬeu、およびＣａ−メチルＬeu；Ｌysに対して、オルニチン、Ａrg、シトルリン、およびＣａ−メチルＬys；Ｇlyに対して、Ａla、および２−アミノ酪酸：Ａsnに対して、Ｇln、シトルリン、およびＣａ−メチルＡsn；Ｔrpに対して、Ｐ−ベンゾイルＰhe、Ａrg、およびＣａ−メチルＴrp；Ｇluに対して、２−アミノアジピン酸、Ａsp、およびＣａ−メチルＧlu；Ｔrpに対して、２−アミノアジピン酸、Ａsp、およびＣａ−メチルＴrp；Ｉleに対して、Ｌeu、norＬeu、およびＣａ−メチルＩle；Ａrgに対して、Ｌys、ホモＡrg、シトルリン、およびＣａ−メチルＡrg；Ｇlnに対して、Ａsn、シトルリン、およびＣａ−メチルＧln；Ｐheに対して、２−アミノ−４−フェニル酪酸、Ｌeu、およびＣａ−メチルＰhe ；Ｔhrに対して、Ｓer、Ｍet、およびＣａ−メチルＴhr；Ｓerに対して、Ｔhr、およびＣａ−メチルＳer；およびＰroに対して、３，４−デヒドロＰro、Ｓer、およびＣａ−メチルＰro；ならびにこれらの組み合わせ、より選択される少なくとも１つの置換アミノ酸を有する、（配列番号１）の抗４ｋＤペプチド抗体結合阻害類似体；を有するポリペプチドである。１つの特に好ましい態様においては、このポリペプチドは上述の配列（配列番号１）の１から３６までのアミノ酸を含む。さらに別の特に好ましい態様においては、このペプチドは、アミノ酸１から１７、１から２０、および１から２５を含むペプチドフラグメント（配列番号１）、および抗４ｋＤペプチド抗体／１− ３６アミノ酸ペプチド結合阻害活性を有するこれらのフラグメントからなる群より選択される。さらに別の好ましい態様においては、ペプチドフラグメントは（配列番号１）のアミノ酸１から１８、および１から２８を含むペプチド、および抗４ｋＤペプチド抗体／１−３６アミノ酸ペプチド結合阻害活性を有するこれらのフラグメントからなる群より選択される。また好ましいものは、Ｌys、Ａsp、およびＡsnアミノ酸によるＡrg、Ｇlu、およびＧlnアミノ酸の置換；Ｓer、Ｌeu、Ａlaアミノ酸によるＴhr、Ｉle、Ｇlyアミノ酸の置換；オルニチン、シトルリンおよびαアミノアジピン酸によるＬysおよびＧluアミノ酸の置換を有する、（配列番号１）の類似体である。また好ましいものは、（配列番号１）の次の類似体である。アミノ酸１から１７、１から２０、１から２５、および１から３６、および抗４ｋＤペプチド抗体／１−３６アミノ酸ペプチド結合阻害活性を有するこれらのフラグメントの、任意の対またはすべてのアミノ酸の対を連結する１つまたは複数のアミド結合（− Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）が、チオエーテル結合（−ＣＨ₂−Ｓ−）、エチル（−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−）等のアルキルおよび／またはアミノ（−ＣＨ₂−ＮＨ₂−）結合により置換されているアミノ酸配列を含むポリペプチドである。これらの類似体は、ペプチド（類似体）の抗体１−３６アミノ酸ペプチドへの結合およびＣＥＴＰ阻害活性がある程度保持されている限り、市販されているかまたは当業者に知られる方法により製造することができる。しかしながら、抗体／１−３６アミノ酸ペプチド結合の阻害活性を保持している限り、他の（配列番号１）の類似体もまた本発明の一部である。本発明のＣＥＴＰ阻害ポリペプチドは、蛋白質分解を防止するため、粉体（好ましくは凍結乾燥形態）、溶液（好ましくは−２０℃以下に凍結）等として提供することができる。本発明はまた、抗アテローム性動脈硬化症に有効な量の本発明のポリペプチド；および薬学的に許容される担体を含む、抗アテローム性動脈硬化症組成物を提供する。この組成物を予防手段として用いる場合には、組成物は１０から２００ｍｇ、より好ましくは２０から１００ｍｇのポリペプチドを含む。しかし、他の量もまた適当である。この組成物を治療目的に用いる場合には、存在するポリペプチドの量は好ましくは約１０から４００ｍｇ、より好ましくは約２０から３００ｍｇである。しかし、他の量を用いることもできる。哺乳動物に、好ましくはヒトにペプチドを投与するための、当該技術分野において知られている任意のおよびすべての薬学的に許容しうる担体は、本発明において用いるのに適している。これらは当該技術分野において知られており、本明細書においてさらに記載する必要はない。しかし、例としては、生理食塩水、ヒト血清アルブミンおよびスターチが挙げられる。しかし、他のものを用いることもできる。本発明の組成物は、単位形態で、好ましくは無菌の閉鎖容器中で、より好ましくは密封容器中で提供される。別々の容器に、少なくとも１単位の本発明の抗アテローム性動脈硬化症組成物；少なくとも１つのシリンジ；および少なくとも１つの針を含むキット。典型的には、キットは約１から２０単位の本発明の組成物を含むが、５０単位またはそれ以上を含んでいてもよい。さらにこのキットは、ディスポーザブルのものである場合には、１から２０本、時には５０本またはそれ以上のシリンジ、およびディスポーザブルのものである場合には、１から２０本、時には５０本またはそれ以上の針を含むことができる。キットの成分は無菌の形態で、すなわち、密封し滅菌した包装またはその他の方法により包装して提供される。ディスポーザブルでない場合には、シリンジおよび針は使用と使用との間にオートクレーブすることができる。本発明の組成物は、好ましくは静脈内注射により投与されるが、腹膜内、皮下または筋肉内注射として投与することもできる。ポリペプチドは胃の酸性ｐＨにおいて分解されるであろうことから、経口投与は許容されない。この組成物は、好ましくは約７から９、より好ましくは約８から９のｐＨを有し、ｐＨは当該技術分野において知られているように、塩基、酸または緩衝液を添加することにより調節することができる。本発明はまた、本発明のポリペプチド；ヒヒＣＥＴＰポリペプチド阻害剤およびこれらのフラグメントおよびこれらの類似体；ａｐｏＣ−Ｉの１−３６アミノ酸Ｎ末端フラグメント；修飾ａｐｏＡ−Ｉ（分子量３１ｋＤ）；および修飾ａｐｏＥ（分子量４１ｋＤ）からなる群より選択されるポリペプチドに対して特異性を有する抗体を提供する。本発明の抗体は、当該技術分野において知られているように、哺乳動物において生じさせることができる（Albers，J．J．Hazzard，W．R.，Immunochemical Q uantification of the Human Lp（a）Lipoprotein，Lipids 9：15-26（1974））。典型的には、この抗体はウサギ、ヤギ、羊、豚および鶏において生じさせることができる。しかし、他の哺乳動物を用いることもできる。好ましいものはウサギ抗体である。ポリクローナル抗体もまた好ましい。しかし、当該技術分野において知られている方法によりモノクローナル抗体を製造することもできる（Kohl er，G.，and Milstein，D.，Continuous Cultures of Fused Cells Secreting A ntibody of Predefined Specificity，Natue（London）256：495-497（1975））。１つの好ましい態様においては、本発明の抗体は修飾ａｐｏＡ−Ｉに特異的に結合することができる。別の好ましい態様においては、この抗体は、本発明のヒヒＣＥＴＰ阻害剤ポリペプチドに特異的に結合することができる。他の好ましい態様においては、本発明の抗体は次の配列：および上述のこれらのフラグメントおよびこれらの類似体のポリペプチドに特異的に結合することができる。本発明のまた別の好ましい態様においては、この抗体は修飾ａｐｏＥに特異的に結合することができる。本発明の他の好ましい態様においては、この抗体はまた、ａｐｏＣ−Ｉに、より好ましくはその１−３６のＮ末端フラグメントに特異的に結合することができる。本発明の別の態様においては、アテローム性動脈硬化症の素因を有する哺乳動物においてアテローム性動脈硬化症を予防する方法を提供する。この方法は、哺乳動物に予防上有効量の本発明のポリペプチドまたは上述の抗アテローム性動脈硬化症組成物を投与することを含む。好ましい態様においては、予防の用途のためには、約２から１００ｍｇの量のポリペプチドが投与される。しかし、他の量を投与することもできる。ポリペプチドまたはその組成物は、当該技術分野において知られているように、小容量の担体、例えば０．２から１．５ｍｌの生理食塩水または他の担体中において投与することができる。本発明のポリペプチドは、高血中コレステロールおよび高βリポ蛋白血症に罹患していないが、他の手段により決定してアテローム性動脈硬化症に罹患する危険性を有する集団、特にヒトの集団の一部に静脈内投与することができる。１つのそのような例は決定されている家族性形質であろう。本発明のポリペプチドは連日投与することができる。あるいは、アップジョン社（UpJohn Co．Kalamazoo，MI）により提供されるデポエストラジオール等の、当該技術分野において知られている緩効性組成物として与えられる場合には、より長い間隔で投与することができる。他の態様においては、本発明はアテローム性動脈硬化症に罹患した哺乳動物を治療する方法を提供する。この方法は、哺乳動物に治療上有効量の本発明のポリペプチドを投与することを含む。治療目的として投与される場合には、約１０から４００ｍｇ、より好ましくは２０から３００ｍｇのポリペプチドが注射される。しかし、特定の症例における医師の評価により他の量を投与することもできる。治療的投与の場合には、予防的投与の場合と同様に、ポリペプチドを、他の経路の中でも静脈内に投与することができる。本発明を一般的に説明してきたが、本発明は特定の実施例を参照することによって、より理解することができるであろう。これらの実施例は、例示の目的のためのみに本明細書に記載されるものであり、特にことわらない限り、本発明およびそのいかなる態様をも限定することを意図するものではない。実施例実施例１：動物および食餌これらの研究の血液供与体としては、ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，ＳａｎＡｎｔｏｎｉｏ，Ｔｅｘａｓのヒヒ群落において保持されている成体雄または雌ヒヒ（ｐａｐｉｏ種）を用いた。これらのうち、２４頭は高ＨＤＬ₁表現型を有し、３２頭は低ＨＤＬ₁表現型を有していた（Williams，M．C.，et al.，Detection of Abn ormal Lipoprotein In a Large Colony of Pedigreed Baboons Using High-Perf ormance Gel Exclusion Chromatography，J．Chromat．308：101-109（1984））。高ＨＤＬ₁ヒヒ（ｎ＝１６）の半分をＨＣＨＦ食餌により維持した。この食餌の組成は先に記載されている（Kushwaha，R．S.，et al.，Metabolism of Apoli poprotein B. In Baboons with Low and High Levels of Low Density Lipoprot ein．J．Lipid Res．27：497-507（1986））。低ＨＤＬ₁表現型のヒヒの供与体のほとんどは、チャウ食餌（Purina Monkey C how，Ralston Purina Co.，St．Louis，Missouri）により維持した。このモンキーチャウは低脂肪（総カロリーの１０％）、高炭水化物（総カロリーの６２％）である。さらに、この食事はコレステロール含有量が非常に低い（０．０３ｍｇ／Ｋｃａｌ）。高ＨＤＬ₁ヒヒは、高ＨＤＬ₁表現型を有する２つの雄親（Ｘ１６７２およびＸ１０２）の子孫である。低ＨＤＬ₁ヒヒは、高ＨＤＬ₁表現型を有しなかった多数の雄親の子孫である。ＨＤＬ₁の存在は、先に記載されているように高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により検出した（Williams，et al.，Detectiono f Abnormal Lipoprotein In a Large Colony of Pedigreed Baboons Using High -Performance Gel Exclusion Chromatography，J．Chromatography．308：101-1 09（1984））。実施例２：³ＨコレステロールエステルＨＤＬの調製高および低ＨＤＬ₁ヒヒを１０ｍｇ／ｋｇのケタミンＨＣ１により固定し、採血した。ＥＤＴＡ１ｍｇ／ｍｌを含む試験管に血液を集め、６℃における低速遠心分離により血漿を分離した。血漿を、先に記載されているように、アジ化ナトリウム、クロラムフェニコール、硫酸ゲンタマイシン、フッ化フェニルメチル１ −スルホニルおよびＤＴＮＢにより処理した（Kushwaha，R．S.，et al.，Impai red Plasma CE Transfer with Accumulation of Larger High Density Lipoprot eins in Some Families of Baboons（papio sp.），J．Lipid Res．31：965-973 （1990））。２０から６０μＣｉのトリチル化リノレイン酸コレステロールをエタノールに溶解し、次に血漿に加えた。血漿を窒素でフラッシュして４℃において２０時間インキュベートした。インキュベーションの後、密度勾配超遠心分離（McGill，H．C．et al.，Diet ary Effects on Serum Lipoprotein of Dsylipoproteinemic Baboons with High HDL₁，Atheriosclerosis 6：651-663（1986）；Redgrave，T．G.，et al.，Sepa ration of Plasma Lipoprotein by Density-Gradient Ultracentrifugation，An a．Biochem．65：42-49（1975））によりＨＤＬ₃を単離し、生理食塩水／ＥＤＴＡに対して透析し、ＣＥ転送反応の基質として使用した。アッセイにおいて用いる前に、ＨＤＬ₃中の総コレステロールおよび遊離コレステロール含有量を測定した。実施例３：受容体リポ蛋白質およびＣＥＴＰ源の調製低ＨＤＬ₁ヒヒからのＶＬＤＬ＋ＬＤＬをＨＤＬ₃からのＣＥの受容体として使用した。先に記載されているように（Kushwaha，et al.，（1986）上掲）、１００−２００ｍｌの血液から、逐次的（sequential）超遠心分離によりｄ＜１．０４０ｇ／ｍｌのＶＬＤＬ＋ＬＤＬ分画を単離した。受容体リポ蛋白質中の総コレステロールおよび遊離コレステロール含有量は酵素的方法により測定した（Wako Pure Chemical Co.）（Allain，C．C.，et al.，Enzymatic Determination of T otal Serum Cholesterol，Clin．Chem．20：470-475（1974））。ＶＬＤＬ＋ＬＤＬを分離した後、固体ＫＢｒを加えて底部分画をｄ＝１．２１ｇ／ｍｌに調節し、総リポ蛋白質を超遠心分離により単離した（Kushwaha，et a l.，（1986）上掲）。ｄ＞１．２１ｇ／ｍｌの底部分画も集めた。すべてのリポ蛋白質分画およびｄ＞１．２１ｇ／ｍｌ（ＬＰＤＳ）のリポ蛋白質欠損分画を生理食塩水／ＥＤＴＡに対して透析した。ＬＰＤＳをＣＥＴＰの源として用いた。実施例４：コレステロールエステル転送アッセイ試料のＣＥ転送活性は、先に記載された方法を変更してアッセイした（Kushwa ha，et al.，（1986）上掲）。簡単には、５０−１００μｇの低ＨＤＬ₁ヒヒからのＣＥを含む³ＨＣＥ標識ＨＤＬ₃を、ＬＰＤＳの存在下で、１００−３００μｇのＣＥを含むＶＬＤＬ＋ＬＤＬと共にインキュベートした。受容体リポ蛋白質およびＬＰＤＳは低ＨＤＬ₁ ヒヒ血漿（チャウ食餌）から得た。場合によっては、ＨＤＬ₃はＨＣＨＦ食餌で維持された高ＨＤＬ₁ヒヒから得た。インキュベーションは４℃（対照）および３７℃において４−６時間実施し、試料を氷上に置くことにより終了させた。次にアッセイ混合物を超遠心分離してｄ＞１．０４０ｇ／ｍｌを有するＶＬＤＬ＋ＬＤＬを分離し、先に記載されるようにリポ蛋白質中の放射活性を計数した（Kushwaha，et al.（1986）上掲）。４℃および３７℃においてＨＤＬからＶＬＤＬ＋ＬＤＬに転送された放射活性について観察された相違を、ＬＰＤＳにおけるＣＥＴＰ活性とみなした。時間経過実験により、７時間まで直線的な応答が得られた。同様に、ＣＥＴＰ活性は、ＬＰＤＳ１４０μｌまでは、ＬＤＰＳの増加に対して直線的であり、これは等容量の血漿から得られた。本発明のポリペプチドおよびその合成フラグメント、ならびに適当な合成対照ペプチドを反応混合物に加えて、そのＣＥＴＰ阻害活性を決定した。対照実験と阻害剤ペプチドを用いるアッセイとの差異のパーセンテージを阻害活性として表した。実施例５：阻害ポリペプチドの同定７２時間の超遠心分離により得られた底部非リポ蛋白質分画を、β−メルカプトエタノールによる前処理をせずに１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により蛋白質含有量について分析した（Laemmli，U．K.，Cleavage of Stru ctural Proteins During the Assembly of the Head of Bacteriophage T4，Nat ure 227：680-685（1970））。低分子量アポリポ蛋白質における差異を決定するために、高および低ＨＤＬ₁ ヒヒからの破損させたｄ＜１．２１ｇ／ｍｌのリポ蛋白質を、試料をゲルに負荷する前にβ−メルカプトエタノールによる前処理を行って１５−１９％ＳＤＳ− ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。実施例６：阻害ポリペプチドの電気溶出高ＨＤＬ₁ヒヒ血漿からのｄ＜１．２１ｇ／ｍｌのリポ蛋白質分画をエーテル −エタノールにより破損させ（Floren，C．H.，et al.，Estrogen-Induced Incr ease in Uptake of Cholesterol-Rich Very Low Density Lipoproteins in Perf used Rabbit Liver，Metabolism 30：367-374（1981））、β−メルカプトエタノールを加えた後に１５％ＳＤＳ−ゲル電気泳動により分離した（Laemmli，（1 970）上掲）。低分子量蛋白質のバンドを切り取り、チューブゲル（１５％）上に移した。分子量カットオフ点が１０００である透析チューブをゲルチューブの底部に装着し、電気溶出されるペプチドを受け取った。このようにして電気溶出されたペプチドを透析し、その６６０ｎｍにおける吸収を、同時に電気溶出された既知量の染色アルブミンと比較することにより定量した。実施例７：抗体の製造アポリポ蛋白質は１５％ＳＤＳ−ゲル電気泳動により分離し、染色した（Laem mli，（1970）上掲）。染色されたバンドをニトロセルロース膜上に移した。阻害ポリペプチドに対応するバンドを切り出し（０．０５ｍｇ）、０．５ｍｌの濾過ＤＭＳＯに溶解した。次に０．５ｍｌのフロインドアジュバントを加え、よく混合し、この混合物を２匹のウサギに皮下注射した。３０日後、同様の量の電気溶出された蛋白質バンドによりウサギをブーストした。抗体力価はウエスタンブロッティングにより測定した。ウサギは３回繰り返してブーストした。合成ポリペプチドに対する抗体の製造のためには、５００μｇのポリペプチドを４００μｌのタイターマックス（Titer Max，CytRx Corporation，Atlanta，G A）に溶解し、ウサギに皮下注射した。第２８日に、２００ｐｌのタイターマックス中の合成ペプチド５００μｇによりウサギをブーストした。第４２日に血清を試験した。必要に応じてウサギから血液を取り出して抗血清を得た。実施例８：イムノアフィニティクロマトグラフィーイムノアフィニティカラムは、ＣｎＢｒ−活性化セファロースビーズ（ＰｈａｒｍａｃｉａＣｏ．）を用いて製造した。結合させたリガンドは、抗体を有するウサギの血清から沈殿させたＩｇＧであった。ＩｇＧを沈殿させるために用いた方法は、ＭｃＫｉｎｎｅｙおよびＰａｒｋｉｎｓｏｎにより記載される方法と同様であった（McKinney，M．M．and Parkinson，A.，A Simple Non-Chromatogr aphic Procedure to Purify Immunogloblins From Serum and Ascites Fruid，J ．Immunological Methods 96：271-278（1987））。簡単には、ウサギ血清５ｍｌを酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で４倍に希釈した。カプリル酸６２５μｌを滴加してアルブミンおよび非ＩｇＧ蛋白質を沈殿させた。不溶性物質を１０，０００×ｇで３０分間遠心分離することにより除去した。上清をリン酸緩衝生理食塩水と混合し、１Ｎ水酸化ナトリウムによりｐＨを７．４に調節した。この溶液を４℃まで冷却し、硫酸アンモニウムを加えて最終濃度４５％として、ＩｇＧを沈殿させた。遠心分離により沈殿物をペレットとして回収し、リン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した。ＩｇＧを１００容量のリン酸緩衝生理食塩水中で一夜透析し、次に酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．３）に溶解し、ＣｎＢｒ−活性化セファロースビーズ３ｇに結合させ、使用するまでトリス−生理食塩水（ｐＨ７．４）中で保存した。血漿８ｍｌをトリス−生理食塩水緩衝液中でＩｇＧ結合ビーズと共に、穏やかに回転させながら一夜インキュベートした。次に、ＣｈｅｕｎｇおよびＡｌｂｅｒｓにより記載されるように、カラムをトリス生理食塩水結合用緩衝液および酢酸ナトリウム緩衝液で洗浄した（Cheung，M．C.，and Albers，Distribution of High Density Lipoprotein Particles with Different Apolipoprotein Composi tion：Particles with A-I and A-II and Particles with A-I But No A-II，J ．Lipid Res．23：747-753（1982））。結合した蛋白質を０．１Ｍ酢酸（ｐＨ３．０）で溶出し、１ｍｌのアリコートを集め、２８０ｎｍの読みを測定してピークを可視化した。直ちに、蛋白質分画をリン酸緩衝生理食塩水に対して透析し、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動により分離した。実施例９：イムノブロッティングＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルにより分離した蛋白質をイモビロンＰシート（Immobilon-P sheet，Millipore，Bedford，MA）上に移した。非特異的部位のブロッキング後、このシートを阻害ペプチドに対する抗体と共にインキュベートした。シートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシドを含む第２抗体と共に再びインキュベートした。３−アミノ−９−エチルカルボゾール、メタノールおよび過酸化水素を含むホウ酸緩衝液を加えて発色させた。実施例１０：アミノ酸分析および配列決定蛋白質の染色バンドをイモビロンＰシート上に移した。選択されたバンドを切り出し、５０％プロピオン酸、５０％１２ＮＨＣｌにより１３５℃において２時間加水分解した。各々の試料のアミノ酸分析は、システムゴールド（System G old）ソフトウエアを備えたモデル６３００アミノ酸分析器（Beckman Co.，Palo Alto，CA）を用いて実施した。同一のバンドを、モデル４７７Ａ蛋白質シークエンサー（Applied Biosystems ，Foster City，CA）を用いて配列決定した。実施例１１：合成ペプチドの製造ペプチドは、ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより記載されているようにして、固相ペプチド合成により合成した（Barany，G．and Merrifield，R ．B.，The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology；Gross，E．and Meinehof er，J.，eds．Vol．2，Academic Press，New York，pp．1-284（1980））。１−３６アミノ酸合成ペプチドは、固体支持体に取り付けたアミノ酸のαカルボキシル基を用いてＣ末端からＮ末端に向かって組み立て、次にＨＰＬＣで特徴付けを行った。実施例１２：データ分析以下の実施例に示される値は平均値であり、平均値±標準偏差として与えられる。これらの値は、分散分析を用いて比較し、有意な差異が検出された場合にはこれらの値をダンカン多範囲試験（Dancan's Multiple Range Test，Duncan，D ．B.，Multiple Range and Multiple F Tests，Biometrics 11：1-12（1955））を用いて比較した。実施例１３：下澄分画からの蛋白質の特徴付けリポ蛋白質を拡張的に、例えば７２時間または繰り返し超遠心分離した場合、ＨＤＬからＣＥＴＰ阻害活性が消失した。超遠心分離後、阻害活性は下澄（infr anatant）分画に見いだされた。蛋白質を特徴付けるため、下澄分画（ｄ＜１．２１ｇ／ｍｌ）を、β−メルカプトエタノールの不在下で１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。高ＨＤＬ₁ヒヒからの下澄分画には、アルブミン、ａｐｏＡ−Ｉよりわずかに大きい蛋白質およびａｐｏＥより大きい他の蛋白質が含まれていた。レーンＡおよびＢは、それぞれ高および低ＨＤＬ₁ヒヒからの非リポ蛋白質分画を示す。蛋白質バンド１、３および５は、それぞれアルブミン、ａｐｏＥおよびａｐｏＡ− Ｉに対応する。それぞれ１と３、および３と５との間の分子量である蛋白質バンド２および４は、それぞれ分子量４１，０００および３１，０００の蛋白質に対応する。高ＨＤＬ₁ヒヒからの蛋白質試料は、アルブミン、分子量４１，０００の蛋白質および分子量３１，０００の蛋白質に対応するバンドのみを示した。分子量は同様のゲルで分離した標準蛋白質を用いて決定した（ゲルの写真は示されていない）。低ＨＤＬ₁ヒヒからの下澄分画もこれらの蛋白質を含んでいたが、それに加えて、ａｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＥも含まれていた。ａｐｏＡ−Ｉ領域にある両方の蛋白質をａｐｏＡ−Ｉに対する抗体を用いるイムノブロッティングにより同定した。同様に、ａｐｏＥ領域にある両方の蛋白質をａｐｏＥに対する抗体を用いるイムノブロッティングにより同定した。ａｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＥを用いるイムノブロッティングにより検出された蛋白質の分子量は、約４ｋＤの差異を示した（写真は示されていない）。ａｐｏＡ−Ｉの推定分子量は約２７，５００であり、修飾ａｐｏＡ−Ｉの推定分子量は約３１，０００である。同様に、ａｐｏＥの推定分子量は約３７，０００であり、修飾ａｐｏＥの推定分子量は約４１，０００である。ａｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＥの両方とも分子量約４，０００の蛋白質により修飾されていた。実施例１４：高ＨＤＬ₁ヒヒの血漿中のＣＥＴＰ阻害剤ペプチドの検出分子量４，０００の共通ポリペプチドがａｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＥの両方を修飾しているか否かを決定するために、β−メルカプトエタノールを用いる１８％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により、高および低ＨＤＬ₁ヒヒからｄ＜１．２１ｇ／ｍｌの血漿リポ蛋白質を分離した。高ＨＤＬ₁ヒヒからのリポ蛋白質からは、低ＨＤＬ₁ヒヒからのリポ蛋白質よりも多量の４ｋＤ蛋白質が検出された（ゲルの写真は示されていない）。この４ｋＤポリペプチドがＣＥ転送を阻害するか否かを決定するために、ポリペプチドおよびアルブミンをゲルから電気溶出し、上述の実施例４において記載したように、低ＨＤＬ₁ヒヒからのリポ蛋白質とともにＣＥ転送アッセイ混合物中において増加濃度で用いた。アルブミンはＨＤＬからＶＬＤＬ＋ＬＤＬへのＣＥの転送には影響を及ぼさなかった。一方、４ｋＤのポリペプチドは、ＣＥＴＰ活性を有意に阻害した（結果は示されていない）。実施例１５：アフィニティクロマトグラフィーによるポリペプチドの特徴付け高ＨＤＬ₁ヒヒから得られたリポ蛋白質から単離された４ｋＤポリペプチドに対するウサギ抗体を製造した。この抗体を用いてイムノアフィニティカラムを調製した。ｄ＜１．２１ｇ／ｍｌのリポ蛋白質をイムノアフィニティカラムに通した。結合したリポ蛋白質を０．１Ｍ酢酸により溶出し、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド還元ゲルで分離した。４ｋＤおよび３１ｋＤのポリペプチドおよび４１ｋＤポリペプチドに対応する小バンドが検出された。カラムに結合したペプチド（１００ｐｇ）は、低ＨＤＬ₁ヒヒからのＣＥＴＰアッセイにおいて、ＣＥの転送を３１．３±１．４％（平均値士ＳＥ，ｎ＝３）で阻害した。一方、高ＨＤＬ₁ヒヒからのアッセイにＩｇＧを添加すると、ＣＥ転送は４４．３±１．５％（ｎ＝３）増加したが、低ＨＤＬ₁ヒヒからのＣＥ転送には影響を及ぼさなかった。実施例１６：４ｋＤ阻害ポリペプチドの配列データバンクとの比較配列データバンク（Sequence Data Bank，Reardon，W．R．and Lipman，D．J. ，PNAS（USA）85：2444-2448（1988））を用いて、このポリペプチドの配列を既知の蛋白質の配列と比較し、ヒトおよびカニクイザルのａｐｏＣ−Ｉと１００％のホモロジーを有することを見いだした。次にこの配列をヒヒからのａｐｏＣ−Ｉと比較し、１００％のホモロジーを有することを見いだした（Dr．Hixon，Southwest Foundation for Biomedical Res earch からの私的情報）。実施例１７：合成ペプチドを用いる阻害ポリペプチドの特徴付け分子量に基づき、４ｋＤポリペプチドは約３６アミノ酸を含むことが決定された。ａｐｏＣ−Ｉ配列のＣ末端から始まる３つのペプチドを合成した。第１のペプチドは９アミノ酸を含み、第２のペプチドは２１アミノ酸を含み、第３のペプチドは３６アミノ酸を含んでいた。３６アミノ酸ペプチドは分子量４，０００のポリペプチドと同様のアミノ酸配列を有しており、他の２つは合成ペプチドのＣ末端から始まるフラグメントであった。これらのペプチド５０μｇを用いて、上述の実施例４に記載されるように、低ＨＤＬ₁ヒヒのリポ蛋白質とともにＣＥＴＰアッセイを行った。分子量１，９００の可溶性らせんペプチドを対照として用いた。３６アミノ酸ポリペプチドはＨＤＬからＶＬＤＬおよびＬＤＬへのＣＥ転送を有意に（ｐ＜０．０１）阻害したが、他のポリペプチドおよび対照ペプチドは阻害しなかった。実施例１８：３６アミノ酸阻害ペプチドに対する抗体実施例７に記載されるように、３６アミノ酸阻害ペプチドに対する抗体をウサギで製造し、イムノブロッティングに使用した。得られた抗体は、４ｋＤペプチドならびに高ＨＤＬ₁ヒヒのリポ蛋白質からの３１ｋＤポリペプチドを認識した。高および低ＨＤＬ₁ヒヒの血漿にａｐｏＣ−Ｉおよび４ｋＤポリペプチドの両方が存在するか否かを決定するために、両方の表現型からのリポ蛋白質を１０％ＳＤＳゲル電気泳動で分離してイムノブロッティングを行った。高ＨＤＬ₁ヒヒからの試料のイムノブロッティングにより、２つの蛋白質のバンドが抗体で検出された。低ＨＤＬ₁ヒヒからの試料においては、単一のバンドのみが検出された。さらに、合成ペプチドの等電点電気泳動パターンは、このペプチドがいくぶん塩基性の蛋白質であることを示唆している。実施例１９：種々のペプチドフラグメントによるＣＥＴＰ阻害上述の実施例４に記載されるように、ＨＤＬ₁ヒヒ血漿、３ＨＨＤＬおよびＶＬＤＬ＋ＬＤＬ担体を用いて、交換を媒介するＣＥＴＰ酵素の存在下にＣＥ転送アッセイを行った。反応は３７℃および４℃（対照）において２重に行った。以下の表１に結果を示す。実施例２０：合成ＣＥＴＰ阻害ペプチドによるヒトからのＣＥＴＰの阻害本発明者らにより記載された方法により、ヒト血漿からのコレステロールエステル転送活性をアッセイした（Kushwaha R．S.，Rainwater D．L.，Williams S. C.，Getz G．S.，and McGill H．C.，Jr.，Impaired Plasma Cholesteryl Este r Transfer with Accumulation of Large High Density Lipoproteins in Some Families of Baboons（Papio sp.），J．Lipid Res．31：965-973（1990））。簡単には、低ＨＤＬ₁ヒヒからの［³Ｈ］コレステロールエステル標識ＨＤＬ（コレステロールエステル１０μｇ，比活性３−４×１０⁶ｄｐｍ／ｍｇコレステロールエステル）を、ヒヒからの５０−１００μｇのＶＬＤＬ＋ＬＤＬコレステロールエステルとインキュベートした。インキュベーションは、ヒトから得た１００μｌのリポ蛋白質欠損血清（ＬＰＤＳ）および２ｍＭのＤＴＮＢの存在下において実施した。アッセイの総容量は１ｍｌであった。インキュベーションは４℃ および３７℃において１−２時間行った。インキュベーションの終わりに、４０ μｌのヘパリン（５０００単位／ｍｌ）、０．５ｍｌの血漿および６０μｌの１ＭＭｎＣｌ₂をこの順序で加えた。混合物をボルテックスし、氷上で０．５時間インキュベートし、１０分間遠心分離した。シンチレーション分光計により上清分画の放射活性を測定した。４℃と３７℃との差異がＣＥＴＰ媒介性転送を表すものと考えた。同時に、合成ＣＥＴＰ阻害ペプチド（３８アミノ酸のヒヒａｐｏＣ−Ｉ末端ペプチド，Ａla-Ｐro-Ａsp-Ｖal-Ｓer-Ｓer-Ａla-Ｌeu-Ａsp-Ｌys- Ｌeu-Ｌys-Ｇlu-Ｐhe-Ｇly-Ａsn-Ｔhr-Ｌeu-Ｇlu-Ａsp-Ｌys-Ａla-Ｔrp-Ｇlu-Ｖ al-Ｉle-Ａsn-Ａrg-Ｉle-Ｌys-Ｇln-Ｓer-Ｇlu-Ｐhe-Ｐro-Ａla-Ｌys-Ｔhr（配列番号２））の存在下で、各々のセットのヒトＣＥＴＰインキュベーションを実施し、ＣＥＴＰ阻害剤の存在下におけるＨＤＬからＶＬＤＬ＋ＬＤＬへのコレステロールエステルの転送を測定した。場合によっては、合成ＣＥＴＰ阻害剤は３８アミノ酸のヒトａｐｏＣ−Ｉ末端ペプチド（Ｔhr-Ｐro-Ａsp-Ｖal-Ｓer-Ｓer- Ａla-Ｌeu-Ａsp-Ｌys-Ｌeu-Ｌys-Ｇlu-Ｐhe-Ｇly-Ａsn-Ｔhr-Ｌeu-Ｇlu-Ａsp-Ｌ ys-Ａla-Ａrg-Ｇlu-Ｌeu-Ｉle-Ｓer-Ａrg-Ｉle-Ｌys-Ｇln-Ｓer-Ｇlu-Ｌeu-Ｓer -Ａla-Ｌys-Ｍet（配列番号３））と同様であった。これらの実験の結果を以下の表に示す。実施例２１：［³Ｈ］ＨＤＬコレステロールエステル標識ＨＤＬ、ＶＬＤＬ＋ＬＤＬ、ＬＰＤＳ（ヒト）の調製方法［³Ｈ］コレステロールエステル標識ＨＤＬおよび受容体リポ蛋白質（ｄ＜１．０４５ｇ／ｍｌ）は、発明者らにより記載されたようにして調製した（Kushwa haet al.，J．Lipid Res．31： 965-973（1990））。低ＨＤＬヒヒをケタミンＨＣｌ（１０ｍｇ／ｋｇ）で固定した後に採血した。血液をＥＤＴＡ（ｌｍｇ／ｍｌ）を含む試験管に集め、６℃における低速遠心分離により血漿を分離した。血漿はただちにアジ化ナトリウム（０．２ｇ／ｌ）、硫酸ゲンタマイシン（０．１ｇ／ｌ）、クロラムフェニコール（０．０５ｇ／１）およびフッ化フェニルメチルスルホニル（０．５ｍＭ）により処理した。エタノールに溶解したトリチル化オレイン酸コレステロール（２０μＣｉ／ｍｌ）を血漿に加えた。血漿を窒素でフラッシュして、４℃において２０時間インキュベートした。インキュベーションの後、密度勾配超遠心分離（Kushwaha，et al.,1990）によりＨＤＬを単離し、通常の生理食塩水／ＥＤＴＡ（０．００１Ｍ）に対して透析し、コレステロールエステル転送反応の基質として使用した。ＶＬＤＬ＋ＬＤＬ（ｄ＜１．０４５ｇ／ｍｌ）およびＬＰＤＳは、発明者らによって記載されたように、２から４頭のヒヒから得た１００−２００ｍｌの血液から逐次的超遠心分離により単離した（ Kushwaha，et al.，1990）。総コレステロールおよび遊離コレステロールおよびＨＤＬおよびＶＬＤＬ＋ＬＤＬは酵素的アッセイを用いて測定した（Wako Pure Chemical Co.）。実施例２２：ヒトＣＥＴＰの単離方法ヒトＣＥＴＰを単離するために、ヒト対象から血液（５−１０ｍｌ）を得てＥＤＴＡ（１ｍｇ／ｍｌ）を含む試験管に入れた。低速遠心分離により血漿を得た。血漿を氷上に保存し、血漿１ｍｌあたり４０μｌのヘパリン（５０００単位／ｍ１）および血漿１ｍｌあたり６０μｌの１ＭＭｎＣｌ₂を加えることによりＬＤＬを沈殿させた。血漿をボルテックスして氷上で１５分間インキュベートした。インキュベーションの後、遠心分離により上清を回収した。この工程を２回繰り返し、血漿中のＶＬＤＬ＋ＬＤＬを完全に沈殿させた。次に、上清に１ｍｌあたり８０μｌ／ｍｌの１０％硫酸デキストランを加え、１５分間インキュベートした。この混合物を遠心分離し、上清を集め、ＣＥＴＰの源として用いた。【配列表】配列番号：１配列の長さ：３６アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：ぺプチド配列配列番号：２配列の長さ：３８アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：ぺプチド配列配列番号：３配列の長さ：３８アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：ぺプチド配列 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION CETP Inhibitor Polypeptides, Antibodies to Synthetic Polypeptides, and Prophylactic and Therapeutic Agents for the Treatment of Antiatherosclerosis Background of the Invention This application was filed on December 18, 1991. It is a continuation-in-part application of the applied application number 07 / 811,049. The work leading to the present invention was supported in part by National Heart, Lung and Blood Institute Grant Nos. HL28972 and HL41256, and Contract No. HV53030. The government has rights in this patent. FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to endogenous baboon plasma cholesterol ester transfer protein (CETP) inhibitor polypeptides. More specifically, the invention relates to the identification and characterization of this polypeptide, as well as novel synthetic peptides having CETP inhibitory activity. The endogenous inhibitory peptide has a molecular weight of 4,000 and is present in plasma in the form of modified apoA-1 and apoE having a molecular weight of 31 kD and 41 kD, respectively, and has an amino acid sequence in common with the N-terminal fragment of apoC-1. . The invention also relates to anti-atherosclerosis compositions, kits, and antibodies raised against the N-terminal amino acid sequence of the inhibitory protein. The inhibitory peptides, fragments thereof and analogs thereof of the present invention are useful as prophylactic and therapeutic agents for the treatment of atherosclerosis. Background Description Atherosclerosis is one of the most widespread health problems in the United States today due to its associated complications, particularly coronary heart disease. Many risk factors have been implicated in the development of early atherosclerosis (mainly elevated plasma cholesterol levels). As cholesterol appears to play a crucial role in the development of heart disease, much attention has been paid to the study of cholesterol synthesis, transport and metabolism in the human body. Of particular interest is establishing a relationship between plasma lipoprotein or serum lipid levels and the risk of developing coronary heart disease. High density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) carry cholesterol primarily in the form of cholesterol esters (CE). However, there are some indications that LDL cholesterol is a positive risk factor and HDL cholesterol is a rather more important negative risk factor. Although the exact function of these lipoproteins has not been fully established, HDL appears to be responsible for the removal of cholesterol from peripheral cells and its transport back to the liver. The liver removes most of the cholesterol excreted from the body. LDL and HDL are believed to play a major role in the development of cardiovascular disease by loading lysosomes in the walls of arterial cells with generally slowly hydrolyzed metabolites such as CE and triglycerides. These products are excreted from the liver and intestine by plasma LDL. When the amount of lipid to be transported exceeds the transport capacity of HDL to be excreted in the liver, CE becomes deposited in cells in certain important areas such as the arterial wall. This overload ultimately impairs cell function, which in turn leads to cell death. Continued overload results in the accumulation of cell debris in the vessel wall and the formation of atherosclerotic plaques. On the other hand, this causes a blockage of the affected arterial and / or muscle spasms, which may show signs of coronary heart disease or stroke. Therefore, the level of HDL in plasma is negatively correlated with the potential for developing atherosclerosis in humans and experimental animals. Although the levels of HDL have been shown to vary significantly from individual to individual, the means by which such plasma levels are controlled remains unclear. CETP transfers CE from HDL to VLDL and LDL, which has been suggested to play an important role in controlling plasma HDL levels. It has been reported that some patients with hyper-alpha lipoproteinemia have high levels of large HDL particles that are clearly distinguished from LDL. Plasma samples from these patients have been shown to lack CETP activity (Koizumi et al., Atherosclerosis 58: 175-186 (1985)). Homozygous patients with familial hyper-alpha lipoproteinemia have been found to lack CE transfer from HDL to LDL (Yokoyama et al., Artery 14: 43-51 (1986)). Fractions with density d> 1.21 g / ml from patient plasma demonstrated substantial CETP activity of normal HDL. However, HDL has proven to be a poor substrate for CETP. The sire and offspring of certain animals have aberrant lipoprotein patterns, such as lipoproteins of intermediate density between LDL and HDL or large high density lipoproteins. These lipoproteins are HDL ₁ , The animal phenotype is "high HDL ₁ It is named. For example, high or low HDL ₁ Baboon species having any of the following patterns are known. Most often HDL ₁ Is separated as a distinctive peak between LDL and HDL or as the shoulder of the HDL peak and is induced by a high cholesterol, high lard (HCHF) diet. HDL ₁ Of baboons decreases when baboons are fed a diet rich in polyunsaturated lipids, with or without cholesterol. However, at times, high HDL fed chow diet ₁ HDL present in the baboon ₁ Is low. Plasma HDL in some baboons when fed with HCHF diet ₁ Have been shown to increase in level. Baboons also show higher plasma HDL levels when fed the HCHF diet. More generally, HDL accumulation in baboons and humans is associated with slower transfer of CE from HDL to very low density lipoproteins (VLDL) and LDL. Therefore, high HDL ₁ Plasma levels of baboons are an excellent animal model for the study of hyper-alpha lipoproteinemia. In previous work, some of the inventors of the present invention found that high HDL ₁ We report that slow transfer of CE from HD L to VLDL and LDL is observed in baboons. This was due to the presence of CETP protein inhibitors associated with HDL and intermediate density lipoprotein (IDL) particles (Kushwaha et al., JP Lipid Res. 31: 965-974 (1990). )). High HDL fed the HCHF diet ₁ HDL in the baboon ₁ Accumulation and slow transfer of CE from HDL to LDL has been reported. Similar proteins have been found in human plasma by Son and Zilversmit (Son and Zilversmit, BBA, 795: 473-480 (1984)). Human protein has a molecular weight of 31,000 and suppresses the transfer of triacylglycerol and CE. Several other species, including rat, pig and dog, readily HDL in plasma. ₁ Have been reported to accumulate. Kurasawa et al., (1985) supra, have reported that homozygous patients with familial hyperalphalipoproteinemia lack CE transfer between HDL and LDL. (Kurasawa et al., JB Biochem. 98: 1499-1408 (1985)). Separately, Yokoyama et al. Reported that a plasma fraction of d> 1.21 g / ml of the same patient demonstrated substantial CE transfer activity when tested on normal HDL (Yokoyama). et al., Artery 14 (1): 43-51 (1986)). The HDL particles that accumulate in this patient are normal HDL ₂ It has a substantially higher molecular weight. HDL is generally divided into subfractions by its particle size and density. These fractions include HDL ₁ , HDL ₂ And HDL ₃ Is included. HDL ₁ Are the largest particles and are not normally present in normal human or non-human primate plasma. HDL ₂ And HDL ₃ Is a normal component of human plasma. HDL ₂ Is HDL ₃ Larger, different for men and women. Many attempts have been made to interfere with cholesterol transport and transfer in mammals to alter plasma levels of cholesterol. For example: US Pat. No. 4,987,151 (Taboc) discloses triterpene derivatives that inhibit the acylcoenzyme A: cholesterol acyltransferase (ACAT) enzyme. ACAT is a cellular enzyme that is not present in plasma and esterifies cellular cholesterol to form CE. This enzyme is distinct from the CE transfer protein (CETP) present in plasma. CETP does not form CE, unlike ACAT. Instead, CETP transfers CE between different plasma lipoproteins. US Pat. No. 4,643,988 (Segrest, et al) discloses amphipathic peptides capable of substituting apoA-I in HDL. ApoA-I is known to stimulate the lecithin cholesterol: acyl transferase (LCAT) enzyme, a plasma enzyme that forms CE in HDL. Plasma CETP, in contrast, transfers CE from HDL to VLDL and LDL. Therefore, the function of the CETP enzyme also differs from that of the LCAT enzyme. Moreover, the amino acid sequence of the peptide of Segrest et al. Differs from that of the CETP inhibitors of the invention. SUMMARY OF THE INVENTION The present invention relates to a substantially pure polypeptide having inhibitory activity for CE transfer protein (CETP). The present invention also relates to an anti-atherosclerosis composition comprising an anti-atherosclerosis effective amount of the above-mentioned polypeptide; and a pharmaceutically acceptable carrier. The present invention further relates to an anti-atherosclerosis kit comprising at least one unit of the above composition; at least one syringe; and at least one needle in separate containers. The invention also consists of the above-mentioned polypeptide; a baboon CETP polypeptide inhibitor; an N-terminal fragment of 1-36 amino acids of apoC-1; modified apoA-I (MW: 31 kD); and modified apoE (MW: 41 kD). An antibody having specificity for a polypeptide selected from the group. In another aspect, the invention relates to a method of preventing anti-atherosclerosis in a mammal predisposed to such a condition, which method comprises administering to the mammal a prophylactically effective amount of a polypeptide as described above. Including doing. The present invention also relates to a method of treating a mammal suffering from atherosclerosis, which method comprises administering to said mammal a therapeutically effective amount of a polypeptide as described above. Other objects, advantages and features of the invention will be apparent to those skilled in the art from the following description. DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention arose from the desire by the inventors to provide new and non-obvious approaches to the prevention and treatment of atherosclerosis in humans. A schematic of what is known about the association of cholesterol with different fractions of lipoproteins in plasma and liver is shown below. HDL ₁ , The metabolic steps leading to the accumulation of VLDL and LDL (↑) were described above. HDL _{2 + 3} Collects cholesterol from extrahepatic cells which is then esterified with LCAT to form cholesterol ester (CE) and stored in the core of the particle. HDL becomes large (HDL ₁ ), Takes up apoE and reaches the particles, which are cleared from the LDL receptor (LDL-R) into hepatocytes. HDL rich in CE ₁ Also contributes CE to VLDL and LDL. This is mediated by CETP. Due to the presence of CETP inhibitors such as those provided by the present invention, CE transfer is slow (bar) and no triglyceride (TG) reciprocal transfer occurs (X). Therefore, triglyceride-poor HDL is not a suitable substrate for liver triglyceride lipase (HTGL). VLDL and LDL are not available in the liver due to the presence of CETP inhibitors in plasma. As a result of this, the liver in turn increases the expression of the message in order to increase the production of the LDL receptor and 3-hydroxy, methyl, glutalylucoenzyme A (HMG-CoA) synthetase. Increased LDL receptors in the liver result in increased uptake of LDL or HDL, including apoE, thus bringing more cholesterol to the liver. Increased synthesis of HMG-CoA synthetase increases cholesterol synthesis in the liver to meet all cell needs. Thus, the presence of CETP inhibitors in plasma will prevent VLDL and / or LDL uptake by tissues and cholesterol ester deposition. In general, high levels of HDL have anti-atherosclerotic effects, while high levels of LDL have atherosclerotic effects. The circulation of water-insoluble compounds such as cholesterol in the blood requires the formation of particles. Insoluble components such as cholesterol esters and triglycerides are packed in the core of the particles and surrounded by polar components such as proteins, phospholipids and the like. These particles are called lipoproteins and thus have a polar shell and a non-polar core. The association of CE-containing lipoproteins in the nucleus is termed VLDL, IDL, LDL and HDL, depending on their size and density. VLDL is the largest lipoprotein secreted by the liver, and the triglyceride contained in VLDL is hydrolyzed by the lipoprotein lipase enzyme present on the surface of the arterial wall, and then converted to IDL and subsequently to LDL. LDL is the major lipoprotein that contributes cholesterol esters to extrahepatic and hepatic tissues. HDL is also secreted by the liver and is based on size and density. ₂ And HDL ₃ It is divided into The function of HDL is to take cholesterol from extrahepatic cells and transport it to the liver through VLDL and LDL or through a large apoE-rich HDL. These large HDL particles are HDL ₁ It does not stay in plasma for a long time. They are rapidly cleared or converted by the liver after feeding cholesterol esters to VLDL and LDL to HDL. ₂ Return to HDL ₁ Is not present in normal humans or nonhuman primates. As mentioned above, HDL ₁ Appear as distinct bands in the plasma of baboons fed the HCHF diet. It is known that cholesterol esters become associated with HDL in the form of CE upon entry into the bloodstream with the help of the LCAT enzyme. In HC HF nutritional baboons, this is HDL ₁ -Appears as CE fraction. CE is then transferred from HDL to VLDL and LDL, forming VLDL-CE and LDL-CE with the help of the CETP enzyme. These particles then enter hepatocytes through the LDL receptor (LDL-R). After being metabolized in hepatocytes, VLDL-CE returns to the plasma, and thus to the peripheral body of the mammal, where deposition may cause atherosclerosis. CETP inhibitors such as those provided by the present invention block the transfer of CE from HDL to VLDL and LDL. Alternatively, HDL that can enter liver cells through the association of CE with apoE and the LDL receptor (LDL-R) ₁ A bypass that results in the formation of -CE-apoE particles is preferred. Apolipoprotein CI of various species other than baboons is known. ApoC-I is a single polypeptide with a molecular weight of 6600 containing 57 amino acids. It is a basic protein mainly present in VLDL and HDL, which acts as a reservoir for this protein. On the other hand, LDL contains almost no apoC-I. Recently, apoC-I has been shown to excrete apoE from VLDL and affect its binding to the LDL receptor. The CETP inhibitor polypeptides described herein have a sequence in common with the N-terminal fragment of apoC-I. As shown below, this fragment contains at least 36 amino acids. The endogenous polypeptide provided by the present invention (SEQ ID NO: 1) has a molecular weight of approximately 4000 and associates with or binds to apoA-I and apoE in plasma. The 36 amino acids at the N-terminus are shown below. A polypeptide having a sequence corresponding to amino acids 1-36 of the following sequence (SEQ ID NO: 1) was synthesized by the present inventors and shown to inhibit CETP in vitro. This peptide has the following sequence: Fragments of this polypeptide (SEQ ID NO: 1), including the C-terminal fragments of amino acids 28-36 and amino acids 16-36, showed limited CETP inhibitory activity at 50 μg. However, the fragment containing the C-terminal amino acids 28-36 showed almost the same CETP inhibitory activity as the 36 amino acid peptide at 200 μg. It was shown that the synthetic peptide and the corresponding N-terminal fragment containing amino acids 1-15, amino acids 1-20 and amino acids 1-10 and intermediate fragments containing amino acids 15-30 etc. have activity as inhibitors of CETP. Polypeptides having sequences corresponding to the following two sequences, designated SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3, were also synthesized by the present inventors and shown to be inhibitors of CETP in vitro. The first of the two sequences below (SEQ ID NO: 2) is a baboon sequence similar to SEQ ID NO: 1 except that it has two additional amino acids at the beginning of the peptide. The second of the following two sequences (SEQ ID NO: 3) is a human sequence and differs from SEQ ID NO: 2 in 7 of the 38 amino acids in the sequence. Analogues of the polypeptides of the invention having CETP inhibitory activity and fragments thereof are also part of the invention. This analog has one or more substitutions in the sequence but still retains its inhibitory activity. Examples of analogues suitable as inhibitors of CETP are analogues of the peptides of the invention and fragments thereof, for example those in which one or more amino acids have been substituted according to the following guidelines. The substituted amino acid can be selected from the following groups. Glu, C for Asp _α -Methyl Asp, and β-carboxy Asp; for Val, isoVal, norVal, Leu) and C _α -Methyl Val; against Ala, Gly, β-Ala, C _α -Methyl Ala, and 2-aminobutyric acid; for Leu, norLeu, isoLeu, and C _α -Methyl Leu; for Lys, ornithine, Arg, citrulline, and C _α -Methyl Lys; for Gly, Ala, and 2-aminobutyric acid; for Asn, Gln, citrulline, and C _α -Methyl Asn; for Trp, P-benzoyl Phe, Arg, and C _α -Methyl Trp; for Glu, 2-aminoadipic acid, Asp, and C _α -Methyl Glu; for Ile, Leu, norLeu, and C _α -Methyl Ile; for Arg, Lys, homo Arg, citrulline, and C _α -Methyl Arg; Asn, Citrulline, and C for Gln _α -Methyl Gln; for Phe, 2-amino-4-phenylbutyric acid, Leu, and C _α -Methyl Phe; for Thr, Ser, Met, and C _α -Methyl Thr; for Ser, Thr, and C _α -Methyl Ser; and Pro to 3,4-dehydro Pro, Ser, and C _α -Methyl Pro; as well as combinations thereof. However, as is known in the art, other substitutions having similar properties to the substituted amino acid can be used alone or in combination with the other substitutions. That is, according to the present invention, there is provided a substantially pure polypeptide having CETP inhibitory activity. In one aspect of the invention, the polypeptide has high HDL. ₁ A modified apoA-I polypeptide of about 31 kD present in baboon plasma or the following sequence: Can inhibit the binding of this peptide to antibodies raised against this peptide. In another aspect, the polypeptides of the invention have high HDL. ₁ A CETP inhibitory polypeptide of approximately 4 kD present in baboon plasma has the following formula: Binding to an antibody raised against the peptide can be inhibited. In yet another aspect, the polypeptides of the invention have high HDL. ₁ A 36 amino acid N-terminal fragment of apoC-I of a modified apoE polypeptide of approximately 41 kD present in baboon plasma or the following formula: Binding to an antibody raised against the peptide can be inhibited. In yet another embodiment, the polypeptide is a 36 amino acid N-terminal fragment of apoC-I or the following formula: Binding of the peptide of E. coli to an antibody raised against modified apoA-I can be inhibited. Preferred polypeptides have the following sequences: (SEQ ID NO: 1) anti-4 kD peptide antibody binding-inhibiting fragment; and the following groups: Glu, Ca-methyl Asp, and β-carboxy Asp for Asp; isoVal, norVal, Leu, and Ca for Val. -Methyl Val; for Ala, Gly, β-Ala, Ca-methyl Ala, and 2-aminobutyric acid; for Leu, norLeu, isoLeu, and Ca-methyl Leu; for Lys, ornithine, Arg, Citrulline and Ca-methyl Lys; for Gly, Ala, and 2-aminobutyric acid: For Asn, Gln, citrulline, and Ca-methyl Asn; For Trp, P-benzoyl Phe, Arg, and Ca. -Methyl Trp; for Glu, 2-aminoadipic acid, Asp, and Ca-methyl Glu; for Trp, 2-aminoadipic acid, Asp, and Ca-methyl Trp; I for le, Leu, norLeu, and Ca-methyl Ile; for Arg, Lys, homo Arg, citrulline, and Ca-methyl Arg; for Gln, Asn, citrulline, and Ca-methyl Gln; for Phe In contrast, 2-amino-4-phenylbutyric acid, Leu, and Ca-methyl Phe; for Thr, Ser, Met, and Ca-methyl Thr; for Ser, Thr, and Ca-methyl Ser; and Pro. Against 3,4-dehydroPro, Ser, and Ca-methylPro; and combinations thereof, having at least one substituted amino acid selected from (SEQ ID NO: 1) anti-4 kD peptide antibody binding inhibitory analogs A polypeptide having a body; In one particularly preferred embodiment, the polypeptide comprises amino acids 1 to 36 of the above sequence (SEQ ID NO: 1). In yet another particularly preferred embodiment, the peptide comprises a peptide fragment comprising amino acids 1-17, 1-20, and 1-25 (SEQ ID NO: 1), and an anti-4kD peptide antibody / 1-36 amino acid peptide binding inhibitory activity. Is selected from the group consisting of these fragments having In yet another preferred embodiment, the peptide fragment comprises a peptide comprising amino acids 1 to 18 and 1 to 28 of (SEQ ID NO: 1) and those fragments having anti-4kD peptide antibody / 1-36 amino acid peptide binding inhibitory activity. Is selected from the group consisting of Also preferred are Ars, Glu, and Gln amino acid substitutions with Lys, Asp, and Asn amino acids; Thr, Ile, Gly amino acid substitutions with Ser, Leu, and Ala amino acids; It is an analog of (SEQ ID NO: 1) with a Glu amino acid substitution. Also preferred are the following analogs of (SEQ ID NO: 1). Amino acids 1 to 17, 1 to 20, 1 to 25, and 1 to 36, and any or all amino acid pairs of the anti-4 kD peptide antibody / 1-36 amino acid peptide bond-inhibiting activity. The one or more amide bonds (-C (O) -NH-) connecting to each other are thioether bonds (-CH ₂ -S-), ethyl (-CH ₂ -CH ₂ -) And other alkyl and / or amino (-CH ₂ -NH ₂ -) A polypeptide comprising an amino acid sequence replaced by a bond. These analogs are commercially available or can be prepared by methods known to those skilled in the art, so long as the binding of the peptide (analog) to the antibody 1-36 amino acid peptide and the CETP inhibitory activity are retained to some extent. . However, other (SEQ ID NO: 1) analogs are also part of the invention, so long as they retain the inhibitory activity of the antibody / 1-36 amino acid peptide bond. The CETP-inhibiting polypeptide of the present invention can be provided as a powder (preferably freeze-dried form), a solution (preferably frozen at −20 ° C. or lower), etc. in order to prevent proteolysis. The present invention also provides an anti-atherosclerosis composition comprising an anti-atherosclerosis effective amount of the polypeptide of the present invention; and a pharmaceutically acceptable carrier. When this composition is used as a prophylactic measure, the composition comprises 10 to 200 mg, more preferably 20 to 100 mg of polypeptide. However, other amounts are also suitable. When this composition is used for therapeutic purposes, the amount of polypeptide present is preferably about 10 to 400 mg, more preferably about 20 to 300 mg. However, other amounts can be used. Any and all pharmaceutically acceptable carriers known in the art for administering peptides to mammals, preferably humans, are suitable for use in the present invention. These are known in the art and need not be described further herein. However, examples include saline, human serum albumin and starch. However, other ones can be used. The compositions of the invention are provided in unit form, preferably in sterile closed containers, more preferably in sealed containers. A kit comprising, in separate containers, at least one unit of the anti-atherosclerotic composition of the invention; at least one syringe; and at least one needle. Typically, the kit will contain about 1 to 20 units of the composition of the invention, but may contain 50 units or more. In addition, the kit may include 1 to 20, sometimes 50 or more syringes if disposable, and 1 to 20, sometimes 50 or more syringes if disposable. It can include a needle. The components of the kit are provided in sterile form, that is, in a sealed and sterile package or otherwise packaged. If not disposable, the syringe and needle can be autoclaved between uses. The compositions of the invention are preferably administered by intravenous injection, but can also be administered as intraperitoneal, subcutaneous or intramuscular injection. Oral administration is not acceptable as the polypeptide will be degraded at the acidic pH of the stomach. The composition preferably has a pH of about 7 to 9, more preferably about 8 to 9, the pH being adjusted by the addition of bases, acids or buffers as is known in the art. can do. The invention also provides a polypeptide of the invention; a baboon CETP polypeptide inhibitor and fragments and analogs thereof; a 1-36 amino acid N-terminal fragment of apoC-I; a modified apoA-I (molecular weight 31 kD); and a modification. An antibody having specificity for a polypeptide selected from the group consisting of apoE (molecular weight 41 kD) is provided. The antibodies of the invention can be raised in mammals as is known in the art (Albers, J. J. Hazzard, WR, Immunochemical Quantification of the Human Lp (a) Lipoprotein. , Lipids 9: 15-26 (1974)). Typically, this antibody can be raised in rabbits, goats, sheep, pigs and chickens. However, other mammals can be used. Preferred is a rabbit antibody. Polyclonal antibodies are also preferred. However, it is also possible to produce monoclonal antibodies by methods known in the art (Kohler, G., and Milstein, D., Continuous Cultures of Fused Cells Secreting Entity of Predefined Specificity, Nature (London) 256. : 495-497 (1975)). In one preferred embodiment, the antibodies of the invention are capable of specifically binding modified apoA-I. In another preferred embodiment, the antibody is capable of specifically binding to a baboon CETP inhibitor polypeptide of the invention. In another preferred embodiment, the antibody of the invention has the following sequence: And can specifically bind to the polypeptides of these fragments and analogs thereof described above. In another preferred aspect of the invention, the antibody is capable of specifically binding modified apoE. In another preferred aspect of the invention, the antibody is also capable of specifically binding apoC-I, more preferably the 1-36 N-terminal fragment thereof. In another aspect of the invention, there is provided a method of preventing atherosclerosis in a mammal predisposed to atherosclerosis. The method comprises administering to the mammal a prophylactically effective amount of a polypeptide of the invention or an anti-atherosclerotic composition as described above. In a preferred embodiment, the polypeptide is administered in an amount of about 2 to 100 mg for prophylactic use. However, other amounts can be administered. The polypeptide or composition thereof can be administered in a small volume of carrier, such as 0.2 to 1.5 ml saline or other carrier, as is known in the art. Polypeptides of the invention are not afflicted with high blood cholesterol and hyper-β lipoproteinemia, but are at risk of afflicted with atherosclerosis as determined by other means, particularly human populations. Can be administered intravenously in a portion of. One such example would be the familial trait being determined. The polypeptide of the present invention can be administered daily. Alternatively, it may be given at longer intervals when given as a slow release composition known in the art, such as depoestradiol provided by UpJohn Co. Kalamazoo, MI. it can. In another aspect, the invention provides a method of treating a mammal suffering from atherosclerosis. The method comprises administering to the mammal a therapeutically effective amount of a polypeptide of the invention. When administered for therapeutic purposes, about 10 to 400 mg, more preferably 20 to 300 mg of polypeptide is injected. However, other doses may be administered as determined by the physician in the particular case. For therapeutic administration, the polypeptide can be administered intravenously, among other routes, as for prophylactic administration. Although the present invention has been generally described, the present invention may be better understood by reference to specific embodiments. These examples are described herein for illustrative purposes only and are not intended to limit the invention or any aspect thereof unless otherwise stated. Examples Example 1: Animals and Diets Blood donors for these studies included adult male or female baboons (pa pio species) retained in a baboon community of Southwest Foundation on for Biomedical Research, San Antonio, Texas. Using. Of these, 24 have high HDL ₁ Has a phenotype, 32 HDL low ₁ It had a phenotype (Williams, MC, et al., Detection of Abn ormal Lipoprotein In a Large Colony of Pedigreed Baboons Using High-Perf ormance Gel Exclusion Chromatography, J. Chromat. 308: 101-109 ( 1984)). High HDL ₁ Half of the baboons (n = 16) were maintained on the HCHF diet. The composition of this diet has been previously described (Kushwaha, RS, et al., Metabolism of Apolipoprotein B. In Baboons with Low and High Levels of Low Density Lipoprot ein. J. Lipid Res. 27: 497. -507 (1986)). Low HDL ₁ Most of the phenotypic baboon donors were maintained by the chow diet (Purina Monkey C how, Ralston Purina Co., St. Louis, Missouri). This Monkey Chow is low in fat (10% of total calories) and high in carbohydrates (62% of total calories). Furthermore, this diet has a very low cholesterol content (0.03 mg / Kcal). High HDL ₁ Baboons are high HDL ₁ Progeny of two sire with phenotype (X1672 and X102). Low HDL ₁ Baboons are high HDL ₁ Offspring of many sire parents who did not have a phenotype. HDL ₁ Was detected by high performance liquid chromatography (HPLC) as previously described (Williams, et al., Detection of f Abnormal Lipoprotein In a Large Colony of Pedigreed Baboons Using High -Performance Gel Exclusion Chromatography, J. Chromatography. 308: 101-1 09 (1984)). Example 2: ³ Preparation of H cholesterol ester HDL High and low HDL ₁ Baboons were fixed with 10 mg / kg ketamine HC1 and blood was collected. Blood was collected in a test tube containing 1 mg / ml of EDTA, and plasma was separated by low speed centrifugation at 6 ° C. Plasma was treated with sodium azide, chloramphenicol, gentamicin sulfate, phenylmethyl 1-sulfonyl fluoride and DTNB as previously described (Kushwaha, RS, et al., Impai red. Plasma CE Transfer with Accumulation of Larger High Density Lipoprot eins in Some Families of Baboons (papio sp.), J. Lipid Res. 31: 965-973 (1990). 20 to 60 μCi of tritylated cholesterol linoleate was dissolved in ethanol and then added to plasma. Plasma was flushed with nitrogen and incubated at 4 ° C for 20 hours. After incubation, density gradient ultracentrifugation (McGill, HC et al., Dietary Effects on Serum Lipoprotein of Dsylipoproteinemic Baboons with High HDL) ₁ Atheriosclerosis 6: 651-663 (1986); Redgrave, T .; G., et al., Separation of Plasma Lipoprotein by Density-Gradient Ultracentrifugation, An a. Biochem. 65: 42-49 (1975)) by HDL ₃ Was isolated, dialyzed against saline / EDTA and used as a substrate for the CE transfer reaction. HDL before use in the assay ₃ The total and free cholesterol content in the was measured. Example 3: Preparation of Receptor Lipoprotein and CETP Source Low HDL ₁ VLDL + LDL from baboons in HDL ₃ Used as a receptor for CE. As described previously (Kushwaha, et al., (1986) supra) from 100-200 ml of blood by sequential ultracentrifugation, d <1.0 40 g / ml VLDL + LDL content. The picture was isolated. Total and free cholesterol contents in receptor lipoproteins were measured by an enzymatic method (Wako Pure Chemical Co.) (Allain, CC, et al., Enzymatic Determination of Total Serum Cholesterol, Clin. Chem. 20: 470-475 (1974)). After separating VLDL + LDL, solid KBr was added to adjust the bottom fraction to d = 1.21 g / ml and total lipoprotein was isolated by ultracentrifugation (Kushwaha, et al., (1986). Posted). A bottom fraction of d> 1.21 g / ml was also collected. All lipoprotein fractions and d> 1.21 g / ml (LPDS) lipoprotein deficient fraction were dialyzed against saline / EDTA. LPDS was used as the source of CETP. Example 4: Cholesterol ester transfer assay The CE transfer activity of samples was assayed by modifying the method previously described (Kushwa ha, et al., (1986) supra). Briefly, low HDL of 50-100 μg ₁ Including CE from baboons ³ H CE labeled HDL ₃ Were incubated with VLDL + LDL containing 100-300 μg CE in the presence of LPDS. Receptor lipoprotein and LPDS have low HDL ₁ Obtained from baboon plasma (Chow diet). In some cases, HDL ₃ High HDL maintained in the HCHF diet ₁ Got from a baboon. Incubations were performed at 4 ° C (control) and 37 ° C for 4-6 hours and terminated by placing the samples on ice. The assay mixture was then ultracentrifuged to separate VLDL + LDL with d> 1.040 g / ml and the radioactivity in lipoproteins was counted as previously described (Kushwaha, et al. (1986)). Posted). The observed difference in radioactivity transferred from HDL to VLDL + LDL at 4 ° C and 37 ° C was considered as CETP activity in LPDS. The time course experiment gave a linear response up to 7 hours. Similarly, CETP activity was linear with increasing LDPS up to 140 μl LPDS, which was obtained from an equal volume of plasma. The polypeptides of the invention and synthetic fragments thereof, as well as the appropriate synthetic control peptide, were added to the reaction mixture to determine its CETP inhibitory activity. The percentage difference between the control experiment and the assay using the inhibitor peptide was expressed as the inhibitory activity. Example 5: Identification of inhibitory polypeptide The bottom non-lipoprotein fraction obtained by ultracentrifugation for 72 hours contained protein by 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis without pretreatment with β-mercaptoethanol. The amount was analyzed (Laemmli, UK, Cleavage of Structural Proteins During the Assembly of the Head of Bacteriophage T4, Nature 227: 680-685 (1970)). High and low HDL to determine differences in low molecular weight apolipoproteins ₁ Broken d <1.21 g / ml lipoproteins from baboons were separated by 15-19% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis with β-mercaptoethanol pretreatment prior to loading the sample on the gel. . Example 6: Electroelution of inhibitory polypeptides High HDL ₁ The lipoprotein fraction of d <1.21 g / ml from baboon plasma was destroyed by ether-ethanol (Floren, CH, et al., Estrogen-Induced Incr ease in Uptake of Cholesterol-Rich Very Low Density Lipoproteins. In Perf used Rabbit Liver, Metabolism 30: 367-374 (1981)), β-mercaptoethanol was added and then separated by 15% SDS-gel electrophoresis (Laemmli, (1970) supra). The low molecular weight protein band was cut out and transferred onto a tube gel (15%). A dialysis tube with a molecular weight cut-off point of 1000 was attached to the bottom of the gel tube to receive the electroeluted peptide. The peptide thus electroeluted was dialyzed and its absorption at 660 nm was quantified by comparing it with a known amount of simultaneously electroeluted stained albumin. Example 7: Production of antibody Apolipoprotein was separated by 15% SDS-gel electrophoresis and stained (Laem mli, (1970), supra). The stained band was transferred onto a nitrocellulose membrane. The band corresponding to the inhibitory polypeptide was excised (0.05 mg) and dissolved in 0.5 ml filtered DMSO. Then 0.5 ml Freund's adjuvant was added, mixed well and the mixture was injected subcutaneously into two rabbits. After 30 days, rabbits were boosted with a similar amount of electroeluted protein band. The antibody titer was measured by Western blotting. The rabbit was boosted three times. For the production of antibodies to the synthetic polypeptide, 500 μg of the polypeptide was dissolved in 400 μl of Titer Max (CytRx Corporation, Atlanta, GA) and injected subcutaneously into rabbits. On day 28, rabbits were boosted with 500 μg of synthetic peptide in 200 pl TiterMax. Serum was tested on day 42. Blood was taken from the rabbits as needed to obtain antiserum. Example 8: Immunoaffinity Chromatography Immunoaffinity columns were prepared using CnBr-activated Sepharose beads (Pharmacia Co.). The bound ligand was IgG precipitated from antibody bearing rabbit serum. The method used to precipitate IgG was similar to the method described by McKinney and Parkinson (McKinney, M.M. and Parkinson, A., A Simple Non-Chromatogr aphic Procedure to Purify Immunogloblins From Serum and Ascites Fruid, J. Immunological Methods 96: 271-278 (1987)). Briefly, 5 ml of rabbit serum was diluted 4-fold with acetate buffer (pH 4.0). Albumin and non-IgG proteins were precipitated by the dropwise addition of 625 μl caprylic acid. Insoluble material was removed by centrifugation at 10,000 xg for 30 minutes. The supernatant was mixed with phosphate buffered saline and the pH was adjusted to 7 with 1N sodium hydroxide. Adjusted to 4. The solution was cooled to 4 ° C. and ammonium sulfate was added to a final concentration of 45% to precipitate IgG. The precipitate was recovered as a pellet by centrifugation and resuspended in phosphate buffered saline. IgG was dialyzed overnight in 100 volumes of phosphate buffered saline, then dissolved in sodium acetate buffer (pH 8.3), bound to 3 g of CnBr-activated Sepharose beads, and Tris-saline until used. Stored in (pH 7.4). 8 ml of plasma was incubated with IgG-conjugated beads in Tris-saline buffer overnight with gentle rotation. The column was then washed with Tris saline binding buffer and sodium acetate buffer as described by Cheung and Albers (Cheung, MC, and Albers, Distribution of High Density Lipoprotein Particles with). Different Apolipoprotein Compilation: Particles with AI and A-II and Particles with AI But No A-II, J. Lipid Res. 23: 747-753 (1982)). Bound protein was eluted with 0.1 M acetic acid (pH 3.0), 1 ml aliquots were collected and the peak was visualized by measuring the 280 nm reading. Immediately, the protein fraction was dialyzed against phosphate buffered saline and separated by electrophoresis on a 15% SDS-polyacrylamide gel. Example 9: Immunoblotting Proteins separated by SDS-polyacrylamide gel were transferred onto Immobilon-P sheet (Immobilon-P sheet, Millipore, Bedford, MA). After blocking non-specific sites, the sheet was incubated with an antibody against the inhibitory peptide. The sheet was washed and reincubated with a second antibody containing horseradish peroxide. Color was developed by adding a borate buffer containing 3-amino-9-ethylcarbazole, methanol and hydrogen peroxide. Example 10: Amino Acid Analysis and Sequencing Stained bands of proteins were transferred onto Immobilon P sheets. Selected bands were excised and hydrolyzed with 50% propionic acid, 50% 12N HCl at 135 ° C. for 2 hours. Amino acid analysis of each sample was performed using a Model 6300 Amino Acid Analyzer (Beckman Co., Palo Alto, CA) equipped with System Gold software. Identical bands were sequenced using a model 477A protein sequencer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Example 11: Preparation of synthetic peptides Peptides were synthesized by solid phase peptide synthesis as described by Barany and Merrifield (Barany, G. and Merrifield, R.B., The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology; Gross, E. and Meinhofer, J., eds. Vol. 2, Academic Press, New York, pp. 1-284 (1980)). The 1-36 amino acid synthetic peptide was assembled from the C-terminus to the N-terminus using the α-carboxyl group of amino acids attached to a solid support and then characterized by HPLC. Example 12: Data analysis The values shown in the examples below are mean values and are given as mean values ± standard deviation. These values were compared using analysis of variance, and when significant differences were detected, these values were compared to the Duncan's Multiple Range Test (Duncan, D.B., Multiple Range and Multiple F Tests). , Biometrics 11: 1-12 (1955)). Example 13: Characterization of proteins from the supernatant fraction When the lipoproteins were extensively, eg 72 h or repeatedly ultracentrifuged, the HDL had no CETP inhibitory activity. After ultracentrifugation, inhibitory activity was found in the infr anatant fraction. To characterize the protein, the supernatant fraction (d <1.21 g / ml) was separated by 10% SDS polyacrylamide gel electrophoresis in the absence of β-mercaptoethanol. High HDL ₁ The supernatant fraction from baboons contained albumin, a protein slightly larger than apoA-I and other proteins larger than apoE. Lanes A and B are high and low HDL, respectively. ₁ The non-lipoprotein fraction from the baboon is shown. Protein bands 1, 3 and 5 correspond to albumin, apoE and apoA-I, respectively. Protein bands 2 and 4, with molecular weights between 1 and 3 and 3 and 5, respectively, correspond to proteins with molecular weights of 41,000 and 31,000, respectively. High HDL ₁ The protein sample from the baboon showed only the bands corresponding to albumin, a protein with a molecular weight of 41,000 and a protein with a molecular weight of 31,000. The molecular weight was determined using a standard protein separated on a similar gel (gel picture not shown). Low HDL ₁ The supernatant fraction from baboons also contained these proteins, but in addition apoA-I and apoE. Both proteins in the apoA-I region were identified by immunoblotting with an antibody against apoA-I. Similarly, both proteins in the apoE region were identified by immunoblotting with an antibody against apoE. The molecular weights of the proteins detected by immunoblotting with apoA-I and apoE showed a difference of about 4 kD (photograph not shown). The estimated molecular weight of apoA-I is about 27,500 and the estimated molecular weight of modified apoA-I is about 31,000. Similarly, the estimated molecular weight of apoE is about 37,000 and the estimated molecular weight of modified apoE is about 41,000. Both apoA-I and apoE were modified by a protein having a molecular weight of about 4,000. Example 14: High HDL ₁ Detection of CETP Inhibitor Peptides in Baboon Plasma 18% SDS-using β-mercaptoethanol to determine whether a common polypeptide of 4,000 molecular weight modified both apoA-I and apoE. High and low HDL by polyacrylamide gel electrophoresis ₁ Plasma lipoproteins with d <1.21 g / ml were isolated from baboons. High HDL ₁ Low HDL from lipoproteins from baboons ₁ A higher amount of 4 kD protein was detected than lipoprotein from baboons (gel picture not shown). To determine if this 4 kD polypeptide inhibits CE transfer, the polypeptide and albumin were electroeluted from the gel and low HDL was added as described in Example 4 above. ₁ Used at increasing concentrations in the CE transfer assay mixture with lipoproteins from baboons. Albumin did not affect the transfer of CE from HDL to VLDL + LDL. On the other hand, the 4 kD polypeptide significantly inhibited CETP activity (results not shown). Example 15: Characterization of polypeptides by affinity chromatography High HDL ₁ Rabbit antibodies against a 4kD polypeptide isolated from baboon derived lipoproteins were prepared. An immunoaffinity column was prepared using this antibody. Lipoproteins with d <1.21 g / ml were passed through the immunoaffinity column. The bound lipoprotein was eluted with 0.1 M acetic acid and separated on a 15% SDS-polyacrylamide reducing gel. Small bands corresponding to the 4 kD and 31 kD polypeptides and the 41 kD polypeptide were detected. The peptide bound to the column (100 pg) was low in HDL. ₁ In the CETP assay from baboons, CE transfer was inhibited by 31.3 ± 1.4% (mean SE, n = 3). On the other hand, high HDL ₁ When IgG was added to the assay from baboons, CE transfer was 44. 3 ± 1.5% (n = 3) increase, but low HDL ₁ It did not affect CE transfer from baboons. Example 16: Comparison with Sequence Data Bank of 4 kD Inhibitory Polypeptide Sequence Data Bank (Sequence Data Bank, Reardon, WR and Lipman, DJ, PNAS (USA) 85: 2444-2448 (1988)) Was used to compare the sequence of this polypeptide with that of a known protein and was found to have 100% homology with human and cynomolgus monkey apoC-I. This sequence was then compared to apoC-I from baboons and found to have 100% homology (Dr. Hixon, private information from the Southwest Foundation for Biomedical Research). Example 17: Characterization of Inhibitory Polypeptides Using Synthetic Peptides Based on molecular weight, it was determined that the 4kD polypeptide contains about 36 amino acids. Three peptides were synthesized starting from the C-terminus of the apoC-I sequence. The first peptide contained 9 amino acids, the second peptide contained 21 amino acids and the third peptide contained 36 amino acids. The 36 amino acid peptide had a similar amino acid sequence to the 4,000 molecular weight polypeptide, the other two were fragments starting from the C-terminus of the synthetic peptide. 50 μg of these peptides were used to reduce low HDL as described in Example 4 above. ₁ CETP assay was performed with baboon lipoproteins. A soluble helical peptide with a molecular weight of 1,900 was used as a control. The 36 amino acid polypeptide significantly (p <0.01) inhibited CE transfer from HDL to VLDL and LDL, while other polypeptides and control peptide did not. Example 18: Antibodies to 36 amino acid inhibitory peptides Antibodies to 36 amino acid inhibitory peptides were prepared in rabbits and used for immunoblotting as described in Example 7. The antibody obtained was a 4 kD peptide as well as high HDL. ₁ It recognized a 31 kD polypeptide from the baboon lipoprotein. High and low HDL ₁ To determine whether both apoC-I and 4kD polypeptides were present in baboon plasma, lipoproteins from both phenotypes were separated by 10% SDS gel electrophoresis and immunoblotted. High HDL ₁ By immunoblotting of samples from baboons, two protein bands were detected with the antibody. Low HDL ₁ Only a single band was detected in the sample from baboons. Furthermore, the isoelectric focusing pattern of the synthetic peptide suggests that this peptide is a somewhat basic protein. Example 19: CETP inhibition by various peptide fragments HDL as described in Example 4 above. ₁ CE transfer assays were performed using baboon plasma, 3H HDL and VLDL + LDL carriers in the presence of the CETP enzyme that mediates exchange. Reactions were performed in duplicate at 37 ° C and 4 ° C (control). The results are shown in Table 1 below. Example 20: Inhibition of CETP from humans by synthetic CETP inhibiting peptides Cholesterol ester transfer activity from human plasma was assayed by the method described by the inventors (Kushwaha RS, Rainwater DL, Williams SC, Getz G.S., and McGill H.C., Jr., Impaired Plasma Cholesteryl Ester Transfer with Accumulation of Large High Density Lipoproteins in Some Families of Baboons (Papio sp.), J. Lipid Res. 31: 965-973 (1990)). Easy to use, low HDL ₁ From the baboon ³ H] Cholesterol ester labeled HDL (cholesterol ester 10 μg, specific activity 3-4 × 10 ⁶ dpm / mg cholesterol ester) was incubated with 50-100 μg VLDL + LDL cholesterol ester from baboons. Incubations were performed in the presence of 100 μl lipoprotein deficient serum (LPDS) obtained from humans and 2 mM DTNB. The total volume of the assay was 1 ml. Incubation was carried out at 4 ° C and 37 ° C for 1-2 hours. At the end of the incubation, 40 μl heparin (5000 units / ml), 0.5 ml plasma and 60 μl 1 M MnCl. ₂ Were added in this order. The mixture was vortexed, incubated on ice for 0.5 hour and centrifuged for 10 minutes. Radioactivity of the supernatant fraction was measured by scintillation spectroscopy. The difference between 4 ° C and 37 ° C was considered to represent CETP-mediated transfer. At the same time, a synthetic CETP inhibitor peptide (38 amino acid baboon apoC-I terminal peptide, Ala-Pro-Asp-Val-Ser-Ser-Ala-Leu-Asp-Lys-Leu-Lys-Glu-Phe-Gly-Asn-). Thr-Leu-Glu-Asp-Lys-Ala-Trp-Glu-Val-Ile-Asn-Arg-Ile-Lys-Gln-Ser-Glu-Phe-Pro-Ala-Lys-Thr (SEQ ID NO: 2)) Each set of human CETP incubations was carried out in the presence of CTP to measure cholesterol ester transfer from HDL to VLDL + LDL in the presence of CETP inhibitors. In some cases, the synthetic CETP inhibitor is a 38 amino acid human apoC-I terminal peptide (Thr-Pro-Asp-Val-Ser-Ser-Ala-Leu-Asp-Lys-Leu-Lys-Glu-Phe-Gly-. Asn-Thr-Leu-Glu-Asp-Lys-Ala-Arg-Glu-Leu-Ile-Ser-Arg-Ile-Lys-Gln-Ser-Glu-Leu-Ser-Ala-Lys-Met (SEQ ID NO: 3 )) Was the same. The results of these experiments are shown in the table below. Example 21: [ ³ [H] HDL Cholesterol ester labeled HDL, VLDL + L DL, LPDS (human) preparation method [ ³ [H] cholesterol ester labeled HDL and receptor lipoproteins (d <1.045 g / ml) were prepared as described by the inventors (Kushwa ha et al., J. Lipid Res. 31: 965-973). (1990)). Low HDL baboons were fixed with ketamine HCl (10 mg / kg) and then bled. Blood was collected in a tube containing EDTA (1 mg / ml) and plasma was separated by low speed centrifugation at 6 ° C. Plasma was immediately treated with sodium azide (0.2 g / l), gentamicin sulfate (0.1 g / l), chloramphenicol (0.05 g / 1) and phenylmethylsulfonyl fluoride (0.5 mM). Tritylated cholesterol oleate (20 μCi / ml) dissolved in ethanol was added to plasma. Plasma was flushed with nitrogen and incubated at 4 ° C for 20 hours. After incubation, HDL was isolated by density gradient ultracentrifugation (Kushwaha, et al., 1990), dialyzed against normal saline / EDTA (0.001M) and used as a substrate for the cholesterol ester transfer reaction. did. VLDL + LDL (d <1.045 g / ml) and LPDS were isolated by sequential ultracentrifugation from 100-200 ml blood from 2-4 baboons as described by the inventors (Kushwaha , Et al., 1990). Total and free cholesterol and HDL and VLDL + LDL were measured using an enzymatic assay (Wako Pure Chemical Co.). Example 22: Method for Isolating Human CETP To isolate human CETP, blood (5-10 ml) was obtained from a human subject and placed in a tube containing EDTA (1 mg / ml). Plasma was obtained by low speed centrifugation. Plasma was stored on ice, 40 μl heparin (5000 units / ml) per ml plasma and 60 μl 1 M MnCl per ml plasma. ₂ Was added to precipitate LDL. Plasma was vortexed and incubated on ice for 15 minutes. After the incubation, the supernatant was collected by centrifugation. This step was repeated twice to completely precipitate VLDL + LDL in plasma. Next, 80 µl / ml of 10% dextran sulfate was added to the supernatant, and the mixture was incubated for 15 minutes. This mixture was centrifuged and the supernatant was collected and used as the source of CETP. [Sequence Listing] SEQ ID NO: 1 Sequence length: 36 Amino acid Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear sequence type: Peptide sequence SEQ ID NO: 2 Sequence length: 38 Amino acid Sequence type: Amino acid Chain number: Single-stranded topology: Linear sequence type: Peptide sequence SEQ ID NO: 3 Sequence length: 38 Amino acid Sequence type: Amino acid Chain number: Single-stranded topology: Linear sequence type: Peptide sequence

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者カンダ，パトリックアメリカ合衆国テキサス州78284，サン・アントニオ，チャーチヒル・エステイツ 15051─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page (72) Inventor Kanda, Patrick San Francisco, Texas 78284 Antonio, Church Hill Estates 15051

Claims

[Claims] 1. A substantially pure polypeptide having the inhibitory activity of a cholesterol ester transfer protein, which comprises the following peptides: A polypeptide comprising at least a portion of a peptide selected from the group consisting of: 2. The cholesterol ester transfer protein-inhibiting polypeptide according to claim 1, which is in a freeze-dried form. 3. Anti-atherosclerosis effective amounts of the following polypeptides: An anti-atherosclerosis composition comprising at least a portion of a polypeptide selected from the group consisting of: and a pharmaceutically acceptable carrier. 4. An anti-atherosclerosis kit comprising in a separate container at least 10 to 400 mg of the composition of claim 3; at least one syringe; and at least one needle. 5. The following polypeptides: An antibody having specificity for a polypeptide comprising at least a portion of a polypeptide selected from the group consisting of: 6. The antibody according to claim 5, which is a polyclonal antibody. 7. The antibody according to claim 5, which can specifically bind to the modified apoA-I. 8. The antibody according to claim 5, which can specifically bind to a baboon CETP inhibitor protein. 9. The antibody according to claim 5, which can specifically bind to the modified apoE. 10. The antibody according to claim 5, which can specifically bind to apoC-I. 11. A method of preventing anti-atherosclerosis in a mammal predisposed to an atherosclerotic condition, wherein the mammal has a prophylactically effective amount of the following peptides: A method comprising administering a polypeptide comprising at least a portion of a peptide selected from the group consisting of: 12. The method of claim 11, wherein the polypeptide is administered in an amount of about 10 to 200 mg. 13. The method of claim 11, wherein the polypeptide is administered intravenously. 14. The method according to claim 11, wherein the mammal is a human. 15. A method of treating a mammal suffering from atherosclerosis, wherein the mammal has a therapeutically effective amount of the following peptides: A method comprising administering a polypeptide comprising at least a portion of a peptide selected from the group consisting of: 16. 16. The method of claim 15, wherein the polypeptide is administered in an amount of about 10 to 400 mg. 17． 16. The method of claim 15, wherein the polypeptide is administered intravenously. 18. 16. The method of claim 15, wherein the mammal is a human.