JPH08500823A - Bystander suppression of retrovirus-related neurological disorders - Google Patents

Bystander suppression of retrovirus-related neurological disorders

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JPH08500823A JP6506519A JP50651993A JPH08500823A JP H08500823 A JPH08500823 A JP H08500823A JP 6506519 A JP6506519 A JP 6506519A JP 50651993 A JP50651993 A JP 50651993A JP H08500823 A JPH08500823 A JP H08500823A
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、バイスタンダー抗原の有効量の投与により、レトロウィルス関連神経疾患に苦しむ哺乳類の治療方法に関する。上記バイスタンダー抗原としては、サプレッサーＴ細胞からトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）を放出させるようなものが選択され、好ましくは、Ｔ細胞の標的を、上記神経疾患の間に細胞障害性攻撃を受ける哺乳類の体内の部位（すなわち神経組織）とせしめるものが選択される。放出されたＴＧＦ−βは細胞障害性攻撃に関与する細胞を抑制し、神経疾患を軽減化する。   (57) [Summary] The present invention relates to a method of treating a mammal suffering from a retrovirus-related neurological disease by administering an effective amount of a bystander antigen. The bystander antigen is selected such that suppressor T cells release transforming growth factor β (TGF-β). Preferably, the target of T cells is attacked by a cytotoxic attack during the neurological disease. The selected body part (ie, nerve tissue) in the body of the mammal receiving the disease is selected. The released TGF-β suppresses cells involved in cytotoxic attack and reduces neurological disease.

Description

【発明の詳細な説明】レトロウィルス関連神経疾患のバイスタンダー抑制 本出願は、Weinerら、米国特許出願第８４３，７５２号、１９９２年２月２８ 日出願；Weinerら、米国特許出願４８７，７３２号、１９９０年３月２日出願、 係属中；Weinerら、米国特許出願４５４，８０６号、１９８９年１２月２０日出 願、係属中、の一部継続出願である。発明の分野 本発明はレトロウィルス関連神経疾患の治療の改良に関連している。特に、本 発明はレトロウィルスによる感染に関連する神経の損傷の治療における、バイス タンダー抗原（すなわち神経組織の破壊に関与する細胞を抑制する抗原）の用途 に関している。発明の背景 レトロウィルスの感染は、神経組織の病変により生じる神経性症状発現に関連 していることか多い。レトロウィルス作因による感染は、多数のＴ細胞を全身的 に活性化できることが知られている。神経親和性のレトロウィルスの感染により 起こる組織破壊は、これらの活性化Ｔ細胞から放出される内因性リンホカインお よびサイトカインを介する非特異的細胞障害性攻撃のためであると理論づけられ ている。このような神経の損傷を誘発することで知られている２種のレトロウィ ルスは、ヒト白血病ウィルスタイプＩ（ＨＴＬＶ−Ｉ）およびヒト免疫不全症ウ ィルス（ＨＩＶ）である。 ヒト白血病ウィルスタィプＩ（ＨＴＬＶ−Ｉ）による感染は、神経障害に関連 しており、ＨＴＬＶ−Ｉ−関連性ミエロパシー（ＨＡＭ）と呼ばれている。この 状態は、以前同定された神経疾患−熱帯性痙性不全対麻痺（toropical spasticp araparesis ）（ＴＳＰ）と同様であると考えられている。これらの状態は、体 肢の衰弱および麻痺、誇大反射、尿／便失禁、軽い末梢感覚喪失、他の神経障害 により特徴づけられる。これらの患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に抗ＨＴＬＶ−Ｉ 抗体およぴＨＴＬＶ−Ｉ抗原が検出された。サザンハイブリダイゼーションおよ びポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）分析は血液中のＨＴＬＶ−ＩとＣＳＦのリンパ 球の存在を確認した。神経性症状は、感染された個体の脳および脊髄中の病変か ら生じると考えられる（Cannら、"Human T-cell Leukemia Virus Types I and I I"，chapter 52 of Virology,Fieldsら(eds)，second edition,Raven Press Ltd .，New York，1990 ）。これらの病変は、おそらく中枢神経系のＨＴＬＶ−Ｉ感 染細胞に対する、細胞障害性の、Ｔ細胞媒介免疫反応により起こるものであると 考えられている（Bhagaviatiら，New Eng.J.Med. 318(18):1141-1147，1988）。 経口（with-oral）コルチコステロイド、非特異的に免疫反応を抑制する薬剤 、による治療は、これらの状態に苦しんでいる患者に対して、いくらかの臨床的 効果をもたらしている。しかしながら、限定された改善がみられるにすぎず、こ のような薬剤は重大な毒性を有する（Cannら、supra）。この毒性は患者の全体 的な免疫抑制を誘発する可能性を含む重大な副作用を引き起こす。換言すれば、 このような薬剤による長期治療は、病原体に対する正常な防御的免疫反応をダウ ンレギュレート（downregulate）し、それにより感染の危険性を増大させる。さ らに、長期の全体的な免疫抑制を受けた患者では、その治療による重大な医学的 合併症、例えば悪性腫瘍、腎臓疾患および糖尿病などが進展する危険性が増大す る。 ＨＩＶは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関与するウィルス作因であるが 、ＨＩＶ感染も末梢神経系（すなわち慢性遠位対称性多発神経障害（chronic di stal symmetric polyneuropathy）、慢性炎症性髄鞘形成多発神経障害（chronic inflammatory myelinating polyneuropathy））および中枢神経系（すなわち空 胞状ミエロパシー（vacuolar myelopathy））の両方に作用する神経障害に関与 している。臨床的特徴は、病変を有する組織によるが、認識欠損（cognitive de ficits）と記憶喪失、痴呆、精神運動の遅延、衰弱、感覚欠損、体肢のけいれん 、誇大反射、尿／便失禁、他の神経疾患を含むことがある（Hirschら、"HIVs: B iologyand Medical Aspects"，chapter 54 of Virology，Fieldsら(eds)，secon d edi tion,Raven Press Ltd.，New York，1990 ）。ＨＩＶ関連性神経疾患の病原論は 、完全には理解されていない。しかしながらＨＩＶ感染により、ＣＮＳ中のサイ トカインのレベルが上昇する。この上昇は、脳組織の免疫細胞化学的分析（Tyor ら，Annals of Neurology 31:349-360，1992）によって報告されているように、 ＨＩＶ陰性個体に比較して、ＨＩＶ陽性個体の脳においては相対的に”免疫活性 ”の状態であることを示していると考えられる。上昇したサイトカインのレベル が上昇した原因は、ＣＮＳ中に移動したＨＩＶ感染マクロファージによる分泌で あるという仮説が立てられている。 ＨＩＶ感染に対する効果的な治療はない。ＡＺＴとしても知られている抗ウィ ルス剤３′アジド-３′-デオキシチミジンによる治療は、日和見感染を減少させ ることが示されており、患者が未症状である時期を延ばすのに効果があるかも知 れない。神経性症状に関して、ＡＺＴは、ＨＩＶ痴呆コンプレックスを幾らか改 善することが報告されているが、この効果はすべてのタイプのＨＩＶ関連神経疾 患に見られるものではない（Yarchoanら、Lancet 1:132-135，1987）。また、Ｈ ＩＶは変異原性が強く、したがってこの治療がどのくらい長く効果を持続させる かは不確実である。さらにＡＺＴが毒性薬剤であるので、該治療は副作用がない わけではなく、しばしば赤血球と白血球の両方の細胞数を減少させる（Hirschら supra）。 他のヌクレオシドアナログによる治療、特にジデオキシシチジン（ｄｄＣ）お よびジデオキシイノシン（ｄｄＩ）はＨＩＶ感染の神経性症状発現に対して陽性 の効果を持つことが示されてきた（Yarchoanら，J.Cell Biochem.suppl.0(14Par t D)p.93,1990）。再び、ＨＩＶの耐性株が発育し、その治療は毒性のために副 作用をおこす。したがってＨＩＶ関連神経疾患のための治療の効果的で毒性のな い方法の必要性は残っている。 同時係属米国特許出願０７／８４３，７５２号、１９９１年２月２８日出願に 開示されているように、本発明者とその共同研究者は、経口による寛容化（tole rization）（または吸入による寛容化）の概念に基づく自己免疫疾患治療に有用 な方法と薬剤組成物を考案した。この方法は、バイスタンダー抗原（以下で定義 する）を寛容剤（tolerizer）として利用するもので、単独或いはいわゆる”共 力薬（synergists）”、すなわちバイスタンダー抗原の寛容化効果を増幅させる 化合物、とともに利用する。バイスタンダー抗原は自己抗原である必要がない、 すなわち疾患誘導（disease-inducing）細胞による攻撃を受ける抗原である必要 がない。バイスタンダー坑原の経口投与は、他の抗原または抗原フラグメントに 特異的な細胞によって受けた組織損傷をなんとか防ぐことができる。この方法を 、自己免疫であると考えられていない病気、例えばレトロウイルス関連神経疾患 などに適用することを可能にすることは、経口による寛容化方法のこの態様であ る。以下で議論するように、バイスタンダー抗原の投与によるＴ細胞活性の抑制 は、非特異的細胞障害性攻撃、例えばレトロウィルス感染に関連した神経組織で 観察されるような攻撃などを軽減化すると考えられている。神経組織への細胞障 害性攻撃を減少させることにより、病変の形成が減少し、かくして神経組織への そのような損傷から起こると考えられている神経疾患を減少させる。この抑制の 細胞メカニズムは以下で議論され、実施例１および２で示されている。レトロウ ィルス関連神経疾患の治療と予防にこの方法を適用することもまた、これらの病 気の病理学における活性化Ｔ細胞の役割を支持する実験データとともに以下で議 論されている。 したがってレトロウィルス関連神経疾患に苦しんでいる個人の症状を治療また は軽減化するために使用される改善方法を提供することが本発明の目的である。 該方法は単独であるいは任意に共力薬および他の免疫調整薬とともに組み合わせ て使用することができるバイスタンダー抗原を含む組成物の使用を含む。発明の要旨 本発明は、ある抗原（「バイスタンダー抗原」と呼ばれるもの）の経口または 経腸投与（あるいは吸入による投与）がサプレッサーＴ細胞の誘引を生すること 、逆に、例えば神経親和性レトロウィルス感染によっておこる、組織の非特異的 細胞障害性攻撃に寄与するＴ細胞を抑制することという予期せぬ、驚くべき発見 に基づくものである。バイスタンダー抗原によって誘引されたＴ細胞は、トラン スフォーミング（transforming）成長因子β（ＴＧＦ-β）の放出を媒介する。 この因子は、非特異的にその領域の全ての免疫細胞の活性を抑制し、組織の細胞 障 害性攻撃に関与するＴ細胞を誘導する。誘引されたサプレッサーＴ細胞を神経細 胞（すなわち脳、脊髄、末梢神経あるいは関連する細胞型）に標的化することに より、これらの組織への細胞障害性損傷を減少させることができる。Ｔ細胞を標 的化する方法は以下で議論する。このようにしてバイスタンダー抗原の経口投与 はレトロウィルス関連神経疾患の治療として用いられることができる。 このタイプの抑制作用メカニズムでは、ＴＧＦ-βを放出するＴ細胞は、神経 組織中の疾患に関与するＴ細胞と同じ抗原を認識する必要がない。ＴＧＦ-βが 放出されるときに、両種の細胞が同じ部位に見いだされることだけが必要である 。これを達成する一つの方法は、バイスタンダー抗原として、（ａ）ＴＧＦ-β を放出させるＴ細胞を誘発する能力をもち、（ｂ）それ自体が攻撃を受けている 神経組織に特異的であるもので、すなわちクラスＩまたはクラスII ＭＨＣから 提供される抗原で、各々ＣＤ８+またはＣＤ４+Ｔ細胞によって認識されるものを 使用することである。こうしてバイスタンダー抗原の経口投与に従って誘発され る（そしてＴ細胞抑制ＴＧＦ-βを放出する）サプレッサーＴ細胞は神経組織に 向かうであろう。ＴＧＦ-βを神経組織に標的化することにより、この領域に配 置されこの組織の損傷に関与するＴ細胞が抑制され、かくして細胞障害性組織損 傷が減少されるであろう。 したがって、本発明の１つの態様は哺乳類のレトロウィルス関連神経疾患の治 療のための方法に関し、その方法は、該疾患の治療のために有効な量のバイスタ ンダー抗原を該哺乳類に投与することを備えたものであって、該抗原は、上記哺 乳類の体内において該細胞障害性反応に関与するＴ細胞をＴＧＦ-βが抑制する 該哺乳類の体内の部位において、Ｔ細胞からのＴＧＦ-βの放出を誘発するもの である。 他の態様において、本発明は薬剤の経口投薬形態において、レトロウィルス関 連神経疾患治療のためにバイスタンダー抗原の有効な量を投与する方法を提供す るものであり、投与された該抗原は、上記哺乳類の体内において該細胞障害性反 応に関与するＴ細胞をＴＧＦ-βが抑制する該哺乳類の体内の部位において、Ｔ 細胞からのＴＧＦ-βの放出を誘発するものである。 さらに他の態様において、本発明は薬剤の吸入投薬形態において、レトロウィ ルス関連神経疾患治療のためにバイスタンダー抗原の有効な量を投与する方法を 提供するものであり、投与された該抗原は、上記哺乳類の体内において該細胞障 害性反応に関与するＴ細胞をＴＧＦ-βが抑制する該哺乳類の体内の部位におい て、Ｔ細胞からのＴＧＦ-βの放出を誘発するものである。図面の簡単な説明 図１は、経口で寛容化された動物から単離したリンパ球の上澄みまたはリンパ 球サブセットによるin vitroにおける増殖反応の抑制を示す棒グラフである。 図２は、抗-トランスフォーミング成長因子-β（ＴＧＦ-β）抗体によるin vi tro における抑制の阻害を示す棒グラフである。 図３は、経口で寛容化された動物から単離されたサプレッサーＴ-細胞の無血 清培養上澄みにおけるＴＧＦ-βの活性を示す棒グラフである。 図４（Ａ−Ｄ）は、経口で寛容化されたＭＢＰ給餌動物および非ＭＢＰ給餌動 物における実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対する、抗-ＴＧＦ-β抗体 と対照血清の効果を示す一連のグラフを示すものである。 図５（Ａ−Ｄ）は、抗-ＴＧＦ-β抗体の、経口で寛容化された動物とその対照 動物における遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応に対する効果を示した一連の棒グラフ を示すものである。 図６（Ａ−Ｃ）は、バイスタンダー抗原の経口投与と、実質的に同時のＭＢＰ を用いた免疫処置に続く選定された抗原の注射とに関係した自己免疫疾患の抑制 を示す一連の図を示したものである。 図７は、このようなバイスタンダー抑制と関連した遅延型過敏症（ＤＴＨ）反 応を示す棒グラフである。 図８は、in vivoでのＥＡＥのバイスタンダー抑制が、ＭＢＰで免疫処置され 、与えられたものと同じ抗原を注射された動物に与えられた、ウシ血清アルブミ ン（ＢＳＡ）、オブアルブミン（ＯＶＡ）およびミエリン塩基性タンパク質（Ｍ ＢＰ）に関係するかどうかを示す棒グラフである。 図９は、バイスタンダー抑制のアドプチブ・トランスファー （adoptive tra nsfer）が、ＣＤ８+サプレッサーＴ-細胞と関係していることを示す棒グラフで あ る。発明の詳細な説明 この明細書に引用された全ての特許出願、特許、および引用文献は、その全体 が参考として取り入れられる。矛盾がある場合は、本明細書中の定義および説明 を含む記述が優先されるであろう。定義 この明細書中で使用された以下の用語は、以下のようにそれらに特有の意味を 有する。 （ａ）“バイスタンダー抗原”あるいは“バイスタンダー”は、タンパク質、 タンパク質フラグメント、ペプチド、糖タンパク質、あるいは他の免疫原物質（ 例えば、免疫応答を引き出すことが可能な物質など）である。そして、それは、 経口あるいは経腸投与（あるいは吸入による投与）により、ＴＧＦ−βを放出す る一因となるサプレッサーＴ細胞を引き出し、それによって、組織の破壊の一因 となる細胞を抑制する。好ましくは、バイスタンダーによって誘発されたサプレ ッサーＴ細胞は、疾患中に攻撃下にあるものと、同じ組織を標的にする。 （ｂ）“バイスタンダー抑制”は、免疫抑制因子であるＴＧＦ−βの放出によ る組織破壊に関与する細胞の抑制である。逆に、この放出はバイスタンダー抗原 の経口摂取あるいは吸入により引き出されたサプレッサーＴ細胞によって媒介さ れ、組織破壊に寄与する細胞が見いだされる部位に漸増される。その結果は、非 特異的細胞障害性反応のダウンレギユレーションである。 （ｃ）“哺乳類”は、ここでは、免疫系を有し、レトロウィルス感染になり得 る生物体と定義する。 （ｄ）“治療”は、レトロウィルス感染でみられる神経疾患を防ぐため（ある いは、臨床的または亜臨床的な発現、例えば組織学的な徴候などを防ぐため）の 予防処理と同様に、このような神経疾患開始後の徴候の治療的抑制または緩和の 両方を含むと意味される。 （ｅ）“共力薬”は、ここでは、バイスタンダー抗原の投与とともに、経口的 にあるいは吸入によって投与したときに、レトロウィルス神経疾患の臨床的（お よび／または組織学的）な発現の抑制を促進向上させる物質として定義される。 また、前文および明細書中の他の箇所で使用されている“とともに（in conjunc tion with）”（また、とともに（in association with）も参照）とは、バイス タンダー抗原の経口あるいはエアロヅル投与の前、実質的には同時、あるいは後 であることを意味する。当然、その共同物質の投与は、最初に投与された物質の 関連した効能が、徐々になくなってしまうほどの長時間間隔をあけて、バイスタ ンダー抗原の投与より先行することもなく、遅れることもないようにすべきであ る。それゆえ、共力薬は、バイスタンダー抗原の投与の前後２４時間以内、好ま しくは１時間以内に投与されるべきである。 （ｆ）“経口”投与は、経口、経腸、あるいは胃内投与を含む。 （ｇ）レトロウィルス関連神経疾患の”特徴”あるいは”徴候”を有する疾患 とは、上記神経疾患に悩まされるのと同じ組織の特異的な炎症に存在する自発的 なあるいは誘発された疾患状態である。 （ｈ）”レトロウィルス関連神経疾患”とは、神経組織（脳、脊髄、末梢神経 、および関連する細胞型、例えば神経膠および内皮細胞など）に存在する病変か ら生じる疾患状態であり、その病変は神経親和性レトロウィルスの感染に対する 免疫応答によりもたらされたＴ細胞によって媒介される非特異的細胞障害性攻撃 の結果である。 （ｉ）”ＨＴＬＶ−Ｉ抗原”または”ＨＩＶ抗原”はウィルス由来タンパク質 またはタンパク質フラグメントであって、経口、経腸、またはエアロゾール投与 により、以下で定義するように本発明の治療方法のための適当な免疫応答をもた らすものである。バイスタンダー抑制の説明 神経組織に特異的なバイスタンダー抗原の経口あるいは吸入による投与は、レ トロウィルス関連神経疾患において効果的な治療であることが予期することなく 発見された。これらの発見に基づきＨＡＭ／ＴＳＰとＨＩＶ関連神経疾患はこの 治療方法にとって良好な候補となる病気であると考えられる。さらにこのような 治療は毒性がなく、ＡＺＴまたはぺンタジアミンなどのレトロウィルス感染個体 の治療のために用いられる他の治療薬を干渉しないであろうと考えられている。 ペンタジアミンは、Pneumocystis carinii肺炎（ＰＣＰ）、ＡＩＤＳ関連日和見 感染の予防に用いられている。 自己抗原およびバイスタンダー抗原の経口投与による自己免疫疾患の抑制の場 合と同様に、レトロウィルス関連神経疾患の抑制はバイスタンダー抗原の経口投 与が媒介する。これは免疫抑制因子、トランスフォーミング（transforming）成 長因子ベータ（ＴＧＦ−β）を放出するサプレッサーＴ細胞の誘発によって引き 起こされる。ＴＧＦ−βはそれを放出するサプレッサー細胞を誘発する抗原にと って特異的なものではない、たとえ、これらのサプレッサーＴ細胞が、経口的に 投与（あるいは吸入）された抗原によって誘発されたとき、ＴＧＦ−βを放出す るものであってもである。組織の細胞障害性破壊に関与する細胞が濃縮された哺 乳類中の部位で、サプレッサーＴ細胞が漸増することにより、ＴＧＦ-βの放出 が疾患誘発細胞近傍で起こり、これらの細胞を抑制（すなわち、シャット・ダウ ン（shuts down））する。これらの“破壊的な”細胞を抑制するＴＧＦ−βの能 力は、破壊的な細胞がそれに特異的であるかもしれない抗原とは無関係である。 破壊的な細胞の抑制を達成するための好ましい方法は、哺乳類への抗原の経口 投与を選ぶことである。そして、前記抗原は、ＴＧＦ−βを放出するサプレッサ ーＴ細胞を誘発させるだけでなく、破壊的な細胞が高濃度で発見される哺乳類の 体の中の部位をこれらのサプレッサーＴ細胞の標的とすることができる。サプレ ッサーＴ細胞にとって、好ましいそして有効な標的は、特別のレトロウィルス関 連神経疾患における細胞障害性攻撃下の組織である。なぜならば、破壊的な細胞 は、その組織の付近に濃縮されているからである。この故に、バイスタンダー抗 原（サプレッサーＴ細胞と特異的な）は、それ自身、攻撃下の組織に特異的な抗 原であることが好ましい。ＨＡＭ／ＴＳＰおよびＨＩＶ関連神経疾患の治療のた めには、バイスタンダー抗原として、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）また はそのフラグメントを使用することが好ましい。さらに好ましくはアミノ酸８４ −９９を含むヒトＭＢＰペプチドを使用する。ＭＢＰは神経組織にのみ排他的に 見られるので、誘引された細胞は、病気中に細胞障害性攻撃を受ける神経系に標 的化されるであろう。ＨＡＭ／ＴＳＰおよびＨＩＶ関連神経疾患の治療のために 用いられるそのほかの好ましいバイスタンダー抗原としてはプロテオリピドタン パク質（ＰＬＰ）またはそのフラグメントがある。ＰＬＰも神経組織の構成成分 であり、そのためこれも誘引されたＴ細胞を細胞障害性攻撃を受けた組織に標的 化するであろう。本発明で使用される可能性のある他のバイスタンダー抗原は、 ＨＴＬＶ−ＩまたはＨＩＶ体に由来する、抗原性を有する免疫優性フラグメント である。そのようなフラグメントは一般的にサイズが小さく、すなわち８ｍｅｒ フラグメントであり、ＨＬＡ−Ａ２．１．のポケットとの相互作用を通して免疫 優性であると同定されることができる（Winterら、J. of Immunology 146:3508- 3512，1991）。ＨＡＭ／ＴＳＰの治療に好ましく使用されるこのタイプの抗原は ＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ−１タンパク質のペプチド２−２５およびそのフラグメン トである。 本発明で使用されるＭＢＰ、ＰＬＰ、あるいはウィルスのペプチドのフラグメ ントは以下に示す実施例１および２のトランスウェル（transwell）システムを 用いて同定する事ができる。大量のＴＧＦ-βの放出を誘発するフラグメントは 本発明で好適に使用される。 本発明による組織特異性バイスタンダー抗原のバイスタンダー抑制の機構を、 より詳細に以下に示す。組織特異性バイスタンダー抗原は、経口投与（あるいは 経腸投与、たとえば胃に直接）されるかあるいは吸入された後、小腸に入り込み 、腸壁下にある免疫細胞の集合体であるパイエル板と呼ばれているものと接触す る。逆に、これらの細胞は、脾臓やリンパ節を含む免疫系と連絡している。その 結果、サプレッサーＴ細胞が誘導され、組織破壊のエリアに漸増していく。前記 エリアは、ＴＧＦ−βの放出がおこる箇所であり、また、前記ＴＧＦ−βは非特 異的であり、Ｔ細胞を活性化するのと同様、Ｂ細胞をダウンレギュレートさせる 。非特異的に周囲の組織を破壊する細胞障害性因子の放出に関与していると考え られているのはこれらの活性化細胞である。これらのＴ細胞の活性をダウンレギ ュレートすることにより、組織破壊は減少する。ＴＧＦ−βの活性の非特異性で あるにもかかわらず、バイスタンダー抗原が攻撃下の組織に特異的であり、損傷 を受けている組織あるいはその近傍で発見される免疫細胞を抑制するという事実 によって、結果として起こる寛容は、レトロウイルス関連神経疾患に対して特異 的である。このメカニズムは、ＨＡＭ／ＴＳＰおよびＨＩＶ関連神経疾患の治療 において、好ましくはＭＢＰまたはそのフラグメントの投与に伴い、細胞障害性 攻撃を受けている神経組織へＴ細胞の反応を標的化するために、利用されるもの である。ＴＧＦ−β ＴＧＦ−βは免疫系の細胞（例えば、ＴまたはＢリンパ球）に影響を及ぼす。 その結果、炎症性の反応にも影響を及ぼす。Ｔ−リンパ球（そして、他の細胞） は、ＴＧＦ−βを生産する。すなわち、免疫系応答の結果（Ｔ−細胞の活性後） 、のカスケードにおいて比較的遅く放出され、ＴおよびＢ細胞の増殖を高度に抑 制する。多数の通常の組織は、ＴＧＦ−βを生産する能力を有する。これらは、 ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞及び活性化大食細胞と同様、ヒトの血小板、胎盤 、ウシの腎臓、骨、ＮＫ細胞を含む。ＴＧＦ−βの分離と、生物的性質は、トラ ンスフオーミング成長因子β 化学、生物学、及び治療学、Piez, K.A. et al., eds.，Ann.N.Y.Acad.Sci.593: 1-217，1990に記載されている。 ＴＧＦ−βは、当初は成長因子として確認されていなかったが、齧歯動物及び ヒトの両方において、Ｂ及びＴ細胞の阻害や、ＣＤ８＋細胞よりも高い、ＣＤ４ ＋細胞の活性の阻害を含む、多数のそして重要な免疫調整特性を有する物質であ ることがすぐに明らかになった。また、ＴＧＦ−βは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ） 、ガンマ・インターフエロン（ＩＮＦ−γ）、ブロック細胞障害性リンパ球活性 のような炎症性のサイトカインを拮抗し、インターロイキン−Ｉ（ＩＬ−１）、 インターロイキン−ＩＩ（ＩＬ−２）のレセプターの誘導を阻害するので、細胞 をこれらサイトカインに対して非反応性とすることが知られている。ＴＧＦ−β は、分子量が２５ｋＤで、多数の鎖間ジスルフィド結合によって結合された２つ の同一の１２．５ｋＤサブユニットから構成されるタンパク質である。そして、 少なくとも、活性および潜伏性の２つの種類のＴＧＦ−βが存在する。活性ＴＧ Ｆ−βは、半減期が短く、小さな容量分布を有しているが、潜伏性ＴＧＦ−βは 、半減期が長く、大きな容量分布を有している。２つのＴＧＦ−βのイソ型が、 ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２として存在する。ＴＧＦ−β１が、バイスタンダー 抑制に関与すると考えられている。バイスタンダー抗原 レトロウィルス関連神経疾患の間攻撃を受けている組織に特異的でない抗原お よびそのフラグメントは、まだバイスタンダー抗原として有用であるが、非毒性 抗原物質の中で、例えば実施例１におけるＯＶＡに対して用いたものと同様な検 定系を使用して同定できる。 本発明におけるバイスタンター抗原として使用される神経組織に特異的な抗原 は、検知可能なＴＧＦ−βを放出させるような抗原の能力をテストすることによ って簡単に同定できる。例えば、ひとつまたはそれ以上の潜在的組織特異的バイ スタンダー抗原は、細胞障害性攻撃の標的である組織から、良く知られた抗原精 製方法を用いて精製される。 バイスタンダー抗原（それらのフラグメント及び類似体も同様に）は、当業者 にはよく知られた技術を用いた、細菌、酵母菌、昆虫（例えばバキュロウィルス ）及び哺乳類の細胞中での、組換えＤＮＡ技術を用いても得ることができる。多 くの潜在的及び実際のバイスタンダー抗原のアミノ酸配列が知られている：例え ば、ＭＢＰ配列を示した補足Ａ、およびTuohy，V.K.ら，J．Immunol. 142: 1523 -1527，1989 （マウスＰＬＰの脳炎誘発性決定基）。 実施例４で特に開示されるものは、本発明の方法においてバイスタンダー抗原 として使用するためのヒトＭＢＰの組換え生産である。組換え生産されたヒトＭ ＢＰ（ｒＭＢＰ）の使用は、ｒＭＢＰが組織から分離されたタンパク質の調製を 特徴づける蛋白分解性フラグメントを欠くので、脳組織から分離されたタンパク 質の使用のために好ましい。さらに組換え技術の使用は、バイスタンダー抗原と して使用されることが望まれる唯一の特異的エピトープの生産に容易に適合され ることができる。 ウシＰＬＰ；ウシ、ヒト、チンパンジー、ラット、マウス、ブタ、ウサギ、モ ルモットＭＢＰのアミノ酸配列を、出版物から引用したものであるが、便宜のた めに補足Ａに示している。 さらに、いくつかの組織特異的抗原が商業的に入手可能である：例えば、ミエ リン塩基性タンパク質。 潜在的バイスタンダーは、適合性をテストされることができる。その抗原を哺 乳類に与えた後、これらの哺乳類の血液またはＣＳＦから、脾臓細胞またはサー キュレーティング（circulating）Ｔ細胞の除去を行う。その細胞は、哺乳類に 与 えたものと同じ抗原でin vitroで刺激することができる。剌激によって誘発され たＴ細胞は、精製され、希釈液はＴＧＦ−β含有量を、例えば、好適な商業的に 入手可能なポリクローナルまたは好ましくはＴＧＦ−βに対するモノクローナル 抗体を用いて、定量的および／または定性的に試験される。あるいは、商業的に 入手可能なミンク肺上皮細胞列を用いた後述の実施例１に示すような他の知られ たＴＧＦ−β検出検定を用いることもできる。ＴＧＦ−β生産の試験のそのよう な方法は、後述の実施例で詳細に説明する。十分なＴＧＦ−βの生産をもたらす これらの抗原は、本発明の治療方法における使用に適するものである。バイスタンダー抗原の用途−投与法（薬用量） 本発明のバイスタンダー抗原に誘引された細胞障害性攻撃の抑制は、経口（ま たは経腸）もしくは吸入投与の広い範囲に渡って投与量依存性であることが予想 される。しかしながら、最小及び最大の有効投与量が存在するであろうことが予 測される。言い換えれば、レトロウィルス関連神経疾患の臨床的及び組織学的徴 候の抑制は、特定の投与量範囲で起こるであろう。しかしながら、関与するレト ロウィルス、治療される哺乳類、治療に使用されるバイスタンダー抗原、および 他のフアクターに応じてこの範囲は異なるであろう。 有効投与量範囲と最適量の確認は、十分当業者にとっての知識の範囲内である 。例えば、哺乳類に対する投与量及びヒト投与量は、比較的低い投与量（例えば １ミリグラム）からはじめて、徐々にそれを増やし（例えば対数的に）、血液中 のＴＧＦ−β量を測定し、及び／または、（例えば１から５で記録したり、また は攻撃の数を測定したり、または患者によって示される神経的症状のタイプに応 して、握り強さ、こわばり、視力等を測定するといった）よく知られた記録方法 に従って疾患の重篤さを記録することにより決定することができる。最適投与量 は、血液中にＴＧＦ−βの最大量を生成するものであり、及び／または、神経疾 患徴候の最大の減退を引き起こすものである。有効な投与量範囲は、治療される べき疾患に特徴的な徴候の少なくともひとつの、少なくとも統計学的に有意義な 希薄化を生ずるものである。そのような方法は、ＨＡＭ／ＴＳＰおよびＨＩＶ関 連神経疾患の治療のためのバイスタンダー抗原の適当な投与量を決定するために 使用されることができる。 本発明は、レトロウィルス関連神経疾患のリスクを受けやすい個人における、 レトロウィルス関連神経疾患の開始の防止にも有利に使用できる。ＨＴＬＶ−Ｉ の感染のスクリーニング方法、ＨＩＶ利用イムノアッセイ、ＰＣＲ技術が開発さ れている。ＨＡＭ／ＴＳＰの進展と、あるＨＬＡハプロタイプとの関連を組み合 わせて、感染による疾患が進展するリスクの高い個人を同定することができる（ Cannら，supra）。ＨＬＡハプロタイプおよびＨＩＶ感染の神経性発現のそのよ うな関連性は知られていないが、神経性疾患はＨＩＶ感染によく見られ、ＨＩＶ 感染患者の２５％−６０％においておこる（Hirschら，supra）。このように高 い頻度で起こることは、ＨＩＶ感染の発現に対する一般的予防治療を正当化する であろう。したがって、本発明はレトロウィルス関連神経疾患の防止への適用を 含む。 神経組織抽出物は、特異的バイスタンダー抗原と同様に使用されることができ る。しかしながら、１つ以上の個人の抗原の投与が好ましい。 したがって、本発明によれば、レトロウィルス関連神経疾患を治療するときに 、神経組織、例えばＭＢＰ、に特異的な抗原の有効量（上述のごとく決定される ）が、経口でまたは吸入により投与されることができる。 本発明者らは、経口投与されたバイスタンダー抗原が、特にＴＧＦ−βの生成 及び／または放出を誘起するエピトープを有していることを見いだした。ＭＢＰ などの免疫優性エピトープは以前に開示されており、これは即ち、患者のＣＤ４ ＋Ｔリンパ球の大多数が認識し、それに応答して増殖するエピトープ、あるいは 患者の抗体の大多数が認識するものである。しかしながら免疫抑制エピトープ、 即ちＴＧＦ−βの生成及びまたは放出を引き起こすものは、本発明者の以前の出 願によってのみ同定されており、それらは本発明のためのバイスタンダー抗原に 好適に用いられるものである。ヒトＭＢＰのためには免疫抑制エピトープは、ペ プチド８４＝９９を含む。従って、これらのエピトープを含むペプチドの、経口 または吸入による投与は、バイスタンダー抑制の誘引において、全抗原の投与よ り特異的であると予想される。そのような免疫抑制エピトープは、本発明におい て使用される他の抗原の中から同定にされることができ、例えばｔａｘまたはｇ ａｇなどのＨＴＬＶ−ＩまたはＨＩＶ由来タンパク質の中である。しかしながら 、免疫抑制エピトープの使用により与えられた特異性は、特異的すぎて特定の患 者には有害であるような反応をもたらす可能性がある。したがって、特定の抗原 に対する患者の感受性が未知である場合、抗原全体を最初に使用するべきであり 、所望の場合、その後に免疫抑制エピトープの治療を行うことができる。 バイスタンダー抗原は、治療の効果を増大させることができる共力薬とともに 投与できる。本発明で使用するための共力薬の非限定的な例としては、大腸菌及 びサルモネラの種々のサブタイプのようなグラム陰性細菌の多くのものからの細 菌性リポ多糖類（ＬＰＳＮシグマ・ケミカル、セント・ルイス、ＭＯ；ディフコ (DIfco)，デトロイト、ＭＩ；バイオモル・レス・ラブス(BIOMOL Res．Labs.)、 プリマス、ＰＡ）、リピドＡ（シグマ・ケミカル、セント・ルイス、ＭＯ；アイ シーエヌ・バイオケミカルズ(ICN Biochemicals)、クリーブランド、ＯＨ；ポリ サイエンス・インク(Polyscience Inc.)、ウェリントン、ＰＡ）、及び、デレス ・ケー(Deres，K.)ら(Nature,342: 561-564，1689)に開示されたように得られる トリパルミトイル−Ｓ−グリカリルシステイニル−セリル−セリン（Ｐ3Ｃ５５ ）に共有結合したペプチド、または、ブラウン・ヴィ(Braun，V.)ら(Biochem.Bi ophvs．Acta 435: 335-337，1976)に開示されたように得られる大腸菌からの「 ブラウンズ(Brauns)」リポタンパクのような免疫調節リポタンパクを含んでいる 。ＬＰＳが好ましく、リピドＡは特に好ましい。リビドＡは、全ＬＰＳ分子より 毒性が低いので、本発明で用いるのは特に好ましい。本発明で用いるＬＰＳは、 グラム陰性細菌から抽出でき、ガラネス(Galanes)ら(Eur. J. Biochem. 9: 245 ，1969)及びスケリー・アール・アール(Skelly，R．R.)ら(Infect. Immun. 23:2 87，1979)の方法を用いて精製できる。 本発明のバイスタンダー抗原の投薬経路は、経口または経腸が好ましい。好ま しい経口または経腸薬剤の製剤は、例えば、本発明のバイスタンター抗原のひと つまたはそれ以上の有効量を含み、有効量の共力薬を含むかまたは含まない丸薬 あるいはカプセルからなる。 一般に、経口または経腸で投与されるとき、バイスタンダー抗原は、単一投与 形態あるいは複数投与形態で投与されてよい。 バイスタンダー抗原とともに投与されるべき有効量の共力薬、例えば、ＬＰＳ またはリピドＡは、１日に、前記哺乳類の体重１ｋｇ当たり、約０．１５から１ ５ｍｇ、好ましくは、１日に前記哺乳類の体重１ｋｇ当たり、０．３から１２ｍ ｇの広い範囲にある。 本発明の他の好ましい実施態様にあっては、本発明の薬剤の製剤または投与形 態は、レトロウィルス関連神経疾患にかかった哺乳類に対して、吸入、好ましく はエアロゾル形態で投与することができる。吸入方式の投与は、鼻の通路ではな く、気管及び肺の粘膜を通すのが好ましい。１９８９年１２月２０日に出願され た審査中の米国特許出願第４５４，４８６号に開示されているように、実験的自 己免疫脳脊髄炎をミエリン塩基性タンパク質で治療し、およびアジュバント関節 炎をコラーゲンで治療する際に効果が見られたように、レトロウィルス関連神経 疾患の治療のためにエアロゾル投与を用いるときには、本発明のバイスタンダー 抗原のより低い量を必要とすることが予想される。エアロヅル投薬形態で投与さ れる本発明のバイスタンダー抗原の量は、１日に、哺乳類の体重１ｋｇ当たり約 ０．１ｍｇから約１５ｍｇであり、任意に、１日に、哺乳類の体重１ｋｇ当たり 約０．１から約１５ｍｇの共力薬を、単一投与形態または複数投与形態で投与し てもよい。投与すべき正確な量は、患者の疾患の段階及び重篤さ、及び患者の肉 体的状態に依存して変化するであろう。 本発明のこの他の実施態様によるバイスタンダー抗原の投与経路は、エアロゾ ルまたは吸入形態である。本発明のバイスタンダー抗原及び関連化合物は、乾燥 粉体粒子として、またはキャリア・ガス（例えば、空気またはＮ2）中に懸濁さ せた噴霧した水溶液として投与することができる。好ましいエアロゾル薬剤の製 剤は、例えば、本発明のバイスタンダー抗原を約１ｍｇから約３００ｍｇ含む生 理学上許容される緩衝水酸化ナトリウム水溶液からなる。 本発明の方法は、例えば、１９８６年１１月２５日に発行された米国特許第４ ，６２４，２５１号、１９７２年１１月２１日に発行された第３，７０３，１７ ３号、１９７１年２月９日に発行された第３，５６１，４４４号、及び１９７１ 年１月１３日に発行された第４，６３５，６２７号に開示されているもののよう な噴霧器を用いて、エアロヅル・スプレーの形態での薬剤組成物の投与に関する ことができる。エアロゾル材料は、治療されるべき主体に吸入される。 ここで開示されるタイプのエアロゾル・デリバリ・システムは、フィッション ズ・コーポレーション(Fisions Corporation) (ベッドフォード(Bedford)、ＭＡ )、シェリング・コープ(Schering Corp.) (ケニルワース(Kenilworth)、ＮＪ)、 及びアメリカン・ファーマシール・カンパニー(American pharmoseal Co.) (バ レンシア(Valencia)、ＣＡ)を含む多くの販売元から入手可能である。 当業者には理解されるだろうが、本発明のバイスタンダー抗原の投与（経口ま たはエアロゾル形態）の、正確な投与量及び頻度は、バイスタンダー抗原の活性 によって決まり、同様に、治療されるべき主体の年齢、体重、肉体的状態、及び 同時投与または他の治療の欠落によって決まる。従って、使用される投与量及び 投与計画の調節は、これらの因子を基に決めなければならず、それは実験的に決 定する必要があるかもしれない。しかし、そのような決定は、ここに含まれるガ イドラインに与えられた定型的実験以上のものを要求しない。実験 以下の実施例は、本発明の範囲を限定することなく本発明を例解するものであ るが、この実施例において次のことが説明される： 実施例１は、自己抗原の経口投与による自己免疫疾患の治療に関するものであ る。この一連の実験は、ＴＧＦ-β１イソタイプの活性の形態はＭＢＰに特異的 なＣＤ４+Ｔ細胞の抑制を媒介し、動物にＭＢＰを給餌することによって誘発さ れるＣＤ８+Ｔ細胞はＴＧＦ-βの放出を引き起こし、抑制の原因はＴＧＦ-βで あることを示している。同じ例によって、攻撃下の組織又は器官に特異的でもな い抗原は、ＴＧＦ-βの放出を引き起こすＴサプレッサー細胞の形成を引き出す ことができることも説明される。このことは、オホアルブミンの経口投与によっ て例解される。しかし、オポアルブミンの問題は、これは苦しめられている組織 に特異的でないため、これ自体は、攻撃に関与している細胞が見出され得る部位 に、Ｔサプレッサー細胞を指し向けることができない。（この問題は実施例２に 譲る。）実施例１は、全ての経口投与された抗原がハイスタンダー型抑制を引き 起こすわけではない（ウシ血清アルブミンは引き起こさない）ことも例解してい る。 最後に、実施例１は、同じ機構（バイスタンダー抑制）がＭＢＰの経口 投与によって実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の抑制において作用しているこ とも説明している。ＥＡＥはマウスおよび他の哺乳類において多発性硬化症（Ｍ Ｓ）のモデルとして研究されている。 実施例２もまた自己免疫疾患の治療に関している。この一連の実験は、バイス タンダー抑制の能力のある抗体は経口投与の際にＴＧＦ-βの放出を引き起こす ことと、さらに、この抗原によって引き出されるサプレッサーＴ細胞が攻撃に関 与する細胞が見出され得る位置に補充され得るならば、それらの疾患を促進する 細胞は抑制されることとを示している。実施例２はまた、ＴＧＦ-βの放出の準 備をするサプレッサーＴ細胞は、抑制が起こるために抑制された細胞に出会う必 要はないことを示している。 非特異的バイスタンダー抗原が効率的なバイスタンダーにされ得る（すなわち 、疾患を促進する細胞の近傍でＴＧＦ-βの放出が起こるように「強いられる」 ）仕方は、同じ抗原を実質的に同時に注射すること（バイスタンダーの経口投与 の前後２４時間以内）によるものである。例えば、ＯＶＡが動物に給餌され、次 いでこれらの動物がＥＡＥを誘発するためにＭＢＰ／ＣＦＡで免疫化されたとき 、ＯＶＡを用いた注射はＥＡＥを抑制することがわかった。これは、動物のリン パ節中のＯＶＡに特異的な細胞（これは、まさにＯＶＡに引き出されるサプレッ サーＴ細胞の様に、ＯＶＡに特異的である）とＥＡＥを促進する細胞（ＯＶＡに 引き出されるサプレッサーＴ細胞はこれを認識しない）との両方の濃度による。 非特異的バイスタンダー抗原は、これらのサプレッサーＴ細胞が、これらが疾患 を促進する細胞を抑制する部位に指し向けられ得るならば、レトロウィルス関連 神経疾患と戦う際にも用いることができるであろう、という意味をこの治療のた めの説明は包含している。 実施例１および２の両方がＥＡＥ、自己免疫疾患モデルシステムの抑制を調べ ているものであるが、これらの実施例は、本発明が直接的に自己免疫疾患を含ま ないにもかかわらず本発明の中心となるデータを提供している。第１に、これら の実験は、バイスタンダー抗原が、投与される抗原に特異的で、この特異性が抗 原への細胞の配置をもたらすサプレッサーＴ細胞を誘発することを立証している 。第２に、Ｔ細胞はバイスタンダー抗原に特異的であるが、これらのＴ細胞から のＴＧＦ−βはその領域の他の免疫細胞の作用を非特異的に抑制することを示し ている。誤指示された免疫抗原を介していると考えられる他の疾患、例えばレト ロウィルス関連神経疾患、が上記方法の使用により治療されることを可能にする ことは、これらの２つのバイスタンダー抗原の態様である。特に、そのような疾 患は、１）ＴＧＦ−βが生産され、２）ファクターを生産するサプレッサーＴ細 胞が、バイスタンダー抗原の適当な選択によって、細胞障害性攻撃を受ける組織 に配置される、という２つのことが起こるバイスタンダー抗原の選択により治療 されることができる。 実施例３は、組換えヒトＭＢＰの生産とその精製について記載している。その タンパク質は、脳組織からの精製ＭＢＰの調製と異なり、高純度形態で、タンパ ク質分解由来のフラグメントの検出なしに、生産される。このｒＭＢＰタンパク 質（またはそのフラグメント）は、本発明の方法を使用するレトロウィルス関連 神経疾患の治療におけるバイスタンダー抗原として有用である。これは、ＴＧＦ −βを生産する（実施例１および２で示されたように）サプレッサーＴ細胞を誘 発するｒＭＢＰの能力、およびこの抗原の、神経組織の構成成分として、細胞障 害性攻撃を受ける組織へ誘発されたＴ細胞を標的化する能力に基づく。 実施例４は、実施例３に記載されたような組換えによって生産されたヒトＭＢ Ｐが、ＭＢＰと特異的に反応することが前に示されたヒトＴ細胞クローンのin v itro増 殖をおこすことを示している。この非常に特異的な生理的活性のテストか らのデータは、組換え生産は、バイスタンダー抗原として作用するＭＢＰ能力を 減少させず、脳組織から抽出され精製されたＭＢＰと実質的に同じ活性を有する ことを示している。 実施例５は、感染されたＴ細胞がin vitroで自然発生的に増殖する能力、およ びこの増殖が誘発される非感染差遺贈で直接の細胞接触を介して誘発される能力 によって示された、ＨＡＭ／ＴＳＰでの活性化されたＴ細胞の役割を確認してい る。この非感染Ｔ細胞での増殖の誘導は、感染されたクローンがホルムアルデヒ ドで固定されたとき、または照射されたときでもおこる。ＣＮＳ中での炎症反応 を開始するための脳−血管障壁を越えることができるのは活性化Ｔ細胞であって 、その他のＴ細胞でないので、そのような多くの活性化Ｔ細胞は、レトロウィル ス関連神経疾患の進展において重要であると考えられる。この炎症反応は正確に は、本発明に従ったバイスタンダー抗原の経口投与により誘発されるサプレッサ ーＴ細胞により阻害されるものである。 （実施例１：ミエリン塩基性タンパク質への経口寛容化によって生じたサプレッ サーＴ細胞は、抗原特異性の触発に続くＴＧＦ-βの放出によるin vitro及びinv ivoの 両方の免疫応答を抑制する） 下記の実験において、次の材料及び方法が用いられた。 動物． メスの生後６−８週のルイス(Lewis)ラットをハーラン-スプレイグ ドーリーインク(Harlan-Sprague Dawley Inc.) （インディアナポリス，ＩＮ） から入手した。動物は任意に標準飼料及び水を与えて飼育した。 抗原． １９９０年３月２日に出願された米国特許出願第０７／４８７，７３ ２号に開示されている、デイブラー(Deibler)他(Prep.Biochem. 2:13 9，1972) の修正された方法によって、モルモットのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ） を脳組織から精製した。ゲル電気泳動及びアミノ酸分析によって、タンパク質含 有量及び純度を確かめた。 試薬． 用いられた商業的試薬は次の通りである：モノクローナルマウス抗ラ ットＩＮＦγ中和抗体（アムゲンバイオロジカルズ(Amgen Biologicals)，サウ ザンドオークス(Thousand Oaks)，ＣＡ）；モノクローナルハムスター抗マウス ＴＮＦα＋β抗体（ゲンザイム(Genzyme)，ボストン，ＭＡ）；ポリクローナル ウサギ抗ＴＧＦ-β1+2中和抗体（アールアンド ディー システムズ，インク(R &D Systems, Inc.)，ミネアポリス，ＭＮ），及びインドメタシン（シグマ(Sig ma)，セントルイス，ＭＯ）。ＴＧＦ-βのタイプ１イソ型タンパク質に関して特 異的なシチメンチヨウ抗血清を、前記したように（ダニエルプール，ディー．(D anielpour, D.)他，J.Cell.Physiol.138: 79-86,1989)調製した。 経口寛容の誘発． １８ケージのステンレス鋼動物給餌針（トーマス サイエ ンティフィック(Thomas Scientific)，スウィーズボロー(Swedesboro)，ＮＪ） を用いた胃の挿管によって、１ｍｌのＰＢＳに１ｍｇのＭＢＰを溶解したもの又 はＰＢＳのみをラットに給餌した。最後の給餌を免疫処置の２日前とし、２-３ 日の 間隔で５回動物に給餌した。この目的は、寛容を誘発することであった。 上澄みによる増殖応答のin vitro抑制． 最後の給餌の７-１４日後に脾臓細 胞を取り除き、この脾臓をステンレス鋼のメッシュに押し通して単一細胞の懸濁 物を調製した。上澄みを調製するために、５ｘ１０6細胞/mlの濃度の脾臓細胞を 、１０mlの増殖媒体中のＭＢＰ(５０μg/ml)を用いてin vitroで刺激した。増殖 媒体は、２ｘ１０5Ｍの２-メルカプトエタノール、１％のピルビン酸ナトリウム 、１％のペニシリンとストレプトマイシン、１％のグルタミン、１％のヘペス（ ＨＥＰＥＳ）緩衝剤、１％の非必須アミノ酸、及び１％の自己由来の血清を補っ た、ＲＰＭＩ１６４０（ギブコ(GIBCO)，グランド アイランド(Grand Island) ，ＮＹ）からなる。２４時間で上澄みを収集し、前に記したように１００μlを ２．５ｘ１０4のＭＢＰ特異性Ｔ細胞に加え、増やし、維持して（ベン-ナン，エ イ．(Ben-Nun，A.)他，Eur.J.Immunol.11：１９５−１９９，１９８１）、そし て１００μlの増殖媒体中で５ｘ１０5の照射された(２５００rad)胸腺細胞を用 いて培養した。丸底の９６ウエル(well)のプレート（コスター(Costar)，ケンブ リッジ，ＭＡ）中で実験を３度行った。湿された６％ＣＯ2及び９４％空気の雰 囲気を有するインキュベーター中で３７℃で７２時間細胞を培養し、培養の最後 の１８時間の間、１μＣｉの3Ｈチミジンを用いてそれぞれのウエルをパルスし た(pulsed)。培養をマルチハーべスター(multiharvester)を用いてファイバーグ ラスフィルター上に収集し、標準液体シンチレーションの技術を用いて計数した 。 この目的は、経口寛容化の際に生成する可溶の因子に関する検定系を設定する ことであった。 Ｔ細胞サブセットの精製． クルイクシャンク(Cruikshank)(J.Immunol. 138: 3817-3823,1987)の修正された方法に従って、磁気ビーズを用いて負の選択をす ることによって、リンパ球サブセットを減少させた。脾臓細胞を、氷上で３０分 間、マウス抗ラットＣＤ８、ＣＤ４又はＢ細胞モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ） （それぞれ、クローンＯＸ／８、Ｗ３／２５、又はＯＸ／３３、セロテック／バ イオプロダクツ(Serotec/Bioproducts)，インディアナポリス，ＩＮ、より商業 的に入手可能）の１：１０の希釈物を用いてインキュベートし、２度洗浄し 、次に、ヤギ抗マウスＩｇＧが共有結合的に付着した、４．５μm（Ｍ−４５０ ）の平均直径を有する、予備洗浄した磁気粒子（ダイナルインク(Dynal Inc.)， フォートリー(Fort Lee)，ＮＪ）に加えた。用いられた磁気ビーズの量は、概算 される標的細胞の個数の１０倍となるように計算された。この細胞を、１０ml丸 底試験管(ヌンク(Nunc))中の、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補った０．５ml のＲＰＭＩ１６４０中で、このビーズを用いて、５分毎に穏やかに振りながら、 氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーションの後、このビーズ／細 胞懸濁物を５mlの媒体で洗浄し、この細胞-ｍＡｂ−ビーズ複合体を、磁気粒子 コンセントレーター(concentrator) (ダイナル-ＭＰＣ-１)を２分間用いて、強 力な磁場中で標識されていない細胞から分離した。上澄みを取り除き、この手順 を２回繰り返して非付着の部分を得た。このＴ細胞及びＢ細胞を減少させた集団 の細胞は、間接流動細胞計測法で示されたものによれば、＞９５％ＣＤ４+ＣＤ ８-、ＣＤ４-ＣＤ８+、Ｎ又はＣＤ４+ＣＤ８+、又はＣＤ４+ＣＤ８+ＯＸ／３３- （Ｂ細胞を減少させたもの）であった。ＭＢＰを給餌された、あるいは対照を給 餌された動物からの脾臓の集団全体（５ｘ１０6細胞）を、血清の無い増殖媒体 １ml中で、ＭＢＰ（５０μg/ml)の存在下で培養した。減少された集団を、２． ５ｘ１０6細胞/mlの濃度で培養した。２４時間後に上澄みを収集し、１００μl を上述したようにレスポンダー(responder)細胞に加えた。 この目的は、どのＴ細胞がバイスタンダー抑制に関わっていたかを決定するた めに、Ｔ細胞の特異的サブセットを単離することであった。 抗サイトカイン抗体を用いた上澄みの処置． ＭＢＰを給餌された、及び対照 の動物からの脾臓細胞（増殖媒体中で５ｘ１０6/ml）を、ＭＢＰ(５０μg/ml)の 存在下で、インターフェロンーガンマ（ＩＮＦγ）、ＴＧＦ-β、腫瘍壊死因子（ ＴＮＦ）α＋βに抗する中和する抗体と共に、又はインドメタシンと共に、７２ 時間インキュベートした。抗体は（１：２５０，１：５００，１：１０００）の 濃度の範囲で試験され、インドメタシンは０．５−１μg/mlの濃度で試験された 。２４時間後に、上澄みを収集し、遊離の抗体又は抗体-サイトカイン複合体を 、磁化できる重合体のビーズ（ダイナビーズ(Dynabeads)，ダイナルインク，フ ォート リー，ＮＪ）を用いて除去した。抗イムノグロブリン抗体と対にし たビーズを３０分間、４ｘ１０7ビーズ/mlの濃度でインキュベートし（それぞれ の試料について２回行った）、そしてリアバク(Liabakk)他(Scand. J. Immunol ．30 ：６４１，１９８９）の修正された方法によって、ダイナル磁性粒子コンセ ントレーター（ダイナル，ＭＰＣ-１）を用いて除去した。 これらの実験の目的は、経口寛容化に際して生成された可溶性のサイトカイン を検討することであった。 血清の無い培養の上澄み中のＴＧＦ-βの測定． 血清の無い培養の上澄みを 、前に記されたように（ケーリ(Kehri)他J.Exp.Med.163:1037-1050，1986；ワー ル(Wahl)他J.Immunol.145:2514-2419,1990)収集した。簡潔に言えば、モジュレ ーター細胞を、増殖媒体中でＭＢＰ(５ｃμl/ml)を用いて８時間最初に培養した 。その後で、細胞を３回洗浄し、７２時間の培養の残り時間で血清の無い媒体中 で再懸濁し、収集し、次いで検定するまで氷結した。上澄み中のＴＧＦーβの含 有量およびイソ型タンパク質のタイプの決定を、ダニエルプール他（上述）によ ってミンクの肺上皮細胞列(cell line)（アメリカンタイプ培養コレクション(Am erican Type Culture Collection)，ベセズダ(Bethesda)， ＭＤ ♯ＣＣＬ-６ ４）を用いて行い、前に記されたように（ダニエルプール他 成長因子(Growth Factors)2 ：61-71，1990)によるサンドイッチ(Sandwich)免疫検定法（ＳＥＬＩ ＳＡ）の検定によって確定した。前もって試料を酸で活性化しない検定によって 、パーセント活性ＴＧＦ-βを決定した。 これらの実験の目的は、経口的に寛容化された動物から得られたＴ細胞によっ て生成されたＴＧＦ-βのイソ型タンパク質を測定し決定することであった。動 物の免疫処置 ． 実質的なＥＡＥ疾患状態を誘発するために、ルイスラットを、 左のフードパッド(food pad)内に、５０μl中の２５μgのＭＢＰであって、４mg /mlのヒト型結核菌（ディフコ(Difco)）を含有する同体積の完全フロイントアジ ュバント中で乳化されたものを用いて、免疫化した。 抗ＴＧＦ-β抗血清および対照血清のin vivo投与． タイプ１イソ型タンパク 質に特異的なシチメンチョウ抗ＴＧＦ-β抗血清をin vivo実験のために用いた。 これは前に調製され、特定されたものである（ダニエルプール他，１９９０，上 述）。注射の前に血清を５６℃で３０分間熱不活性化した。様々な濃度（最 終体積１００μlまでＰＢＳ中で希釈された、１２．５、２５、又は５０μl）の 抗ＴＧＦ-β抗血清又は対照シチメンチョウ血清を用いて、ＭＢＰ／ＣＦＡ免疫 処置に関して−２、０、＋２、＋４、＋６日目に５回、動物（グループあたり５ 匹）の腹腔内（Ｉ．Ｐ．）に注射した。１μgの抗血清は、Ｉ-ＴＧＦ-β１のＡ ５４９細胞に対する結合の活性４mg/mlを遮断した（ダニエルプール他，１９９ ０，上述）。経口寛容化された動物と、経口寛容化なしでＥＡＥを発達させる動 物との両方に対して、in vivo処置を与えた。 これらの実験は、in vivoでの経口寛容誘発に関する抗ＴＧＦ-β抗血清の効果 を検討し、ＴＧＦ−β活性が廃棄されるかどうかを確かめるために実施された。 臨床評価． in vitro検定と臨床上の疾患との相関性を検討するために、見え ないようにした(blinded)仕方で毎日、ＥＡＥの徴候に関して動物を評価した。 ＥＡＥの臨床上の重症度(severity)は、次のように採点された： ０，疾患なし ；１，尾の弱り；２，後脚の麻痺；３，後脚の対麻痺、失禁；４，四肢麻痺；５ ，死亡。疾患の持続期間は、各動物に関して、疾患の始まり（通常、免疫処置後 第１０又は１１日）から完全な回復又は死亡までの合計日数を数えて測定した。 遅延型過敏症（ＤＴＨ）検査． 耳中の皮下に、ＰＢＳ中の２５μgのＭＢＰ を注射して、ＤＴＨを検査した。測微計カリパス（ミツトヨ、日本）を用いて、 見えないようにした観測者によって、免疫性テスト(challenge)の前及び４８時 間後に、厚さを測定した。免疫性テストの前後の耳の厚さにおける変化を、各動 物に関して記録し、その結果を各実験グループ±ＳＥＭに関する平均として現し た。 ＤＴＨ応答を観測した。なぜなら、これらは、ＥＡＥがそうであるように、Ｃ Ｄ４+Ｔ細胞によって仲介されるからである。 統計的分析． ワン−テイルド(one-tailed)スチューデントｔ-検定を用いて 平均の比較を行い、グループ間の疾患の発生率を比較する際にカイ二乗解析（当 該技術において通常の知識を有する者に公知のもの）を用いた。 ＭＢＰに経口寛容化され、ＭＢＰによってin vitroで刺激されたラットからの Ｂ細胞又はＴ細胞サブセットを減少した脾細胞から収集された上澄みが、ＭＢ Ｐ系(line)を抑制することができるかどうか決定するために、実験を行った。図 １に示された通り、ＭＢＰ系の増殖の減少は、ＭＢＰを給餌した、及びＭＢＰを 用いてin vitroで刺激された動物からの、Ｂ細胞欠如又はＣＤ４欠如脾細胞から の、上澄みの追加と共に起こった。ウシ血清アルブミンン（ＢＳＡ）を給餌され た動物の細胞からの、又はＭＢＰを給餌された動物より得られたＣＤ８欠如脾細 胞からの上澄みを用いた場合は、抑制は起こらなかった。このことは、抑制が給 餌された抗原と、必要なサプレッサーＴ細胞とに特異的であることを示唆してい る。 公知のサイトカインが抑制を媒介することに関与しているかどうかを決定する ために、サプレッサー活性を有すると仮定されるサイトカインに対する中和抗体 を、抑制を排除するために上澄みに加えた。図２に示されたように、ウサギ抗Ｔ ＧＦーβ抗体は、投与量に依存するように、上澄みによって媒介される抑制を排 除した。ＩＮＦγ、ＴＮＦ-α+βに対する中和抗体について、又はインドメタシ ン、プロスタグランジン遮断薬、が加えられたときは、抑制に関する効果は見ら れなかった。抗ＴＧＦ-β抗体が、ＭＢＰ特異性のレスポンダーＴ細胞系に直接 加えられたときは、抑制は起こらなかった（データは示されていない）。このこ とは、ＴＧＦ-βが、図１で観察された抑制に関与し、可溶性因子によることを 示唆している。 ＭＢＰを給餌され、ＭＢＰを用いてin vitroで刺激された動物からの脾臓の細 胞の上澄み中のＴＧＦーβの存在を直接的に説明するために、血清のない状態で 上澄みを収集し、上述のようにＴＧＦーβに関して直接的に検定した。図３に示 されたように、ＴＧＦーβは、ＭＢＰの不在下ではなく、存在下で、in vitroで 刺激された、ＭＢＰを給餌された動物からの脾臓細胞によって分泌された。さら に、ＴＧＦ-βは、オボアルブミン（ＯＶＡ）を給餌された動物からの脾細胞が 、ＯＶＡを用いてin vitroで刺激された時にも分泌された。ＴＧＦ-β１又はＴ ＧＦ-β２のいずれかに特異的な遮断する抗体を用いる特定のＳＥＬＩＳＡ検定 を用いて、ＴＧＦ-βがＴＧＦ-β１のイソタイプのものであることがさらに説明 された。また、分泌されたＴＧＦ-βは、潜伏性の形態というよりむしろ活性の 形態にあるものであった。ＭＢＰを用いて給餌されin vitroで刺激されたグルー プにおけ るＴＧＦ-βの量は、６．８±１．７ng/mlで、活性の形態で６８±９％を有して いた。ＯＶＡグループにおいて、ＴＧＦ-βの量は、６．１±１．０ng/mlで、活 性の形態で６５±９％を有していた。ＭＢＰを給餌され、Ｔ細胞増殖の非特異的 誘導物質、コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ-Ａ）、を用いて刺激された動物の脾臓細 胞からの上澄み中では観察されたなかった。もっとも、少量(２．１±０．４５n g/ml)の潜伏性のＴＧＦ-βは観察された。 ＴＧＦ-β１が、ＭＢＰへの経口寛容化によるＥＡＥの抑制においても役割を 演じるかどうかを決定するために、シチメンチヨウ抗ＴＧＦ-β１抗血清をin vi vo で投与した。図４Ａに示されたように、動物がＰＢＳ又は対照シチメンチョウ 血清を注射された場所に、第１３日目に、３．２-３．５の間の最大疾患重症度 で、対照動物中に麻痺のＥＡＥが発達した。ＭＢＰを用いた経口寛容化によって 、ＰＢＳ又は対照シチメンチョウ血清を注射した動物中のＥＡＥの重症度は著し く減少した（図４Ｃ）。５０μlの対照血清で５回処置された動物中の最大疾患 重症度は３．２±０．２で、５０μlの対照血清で５回処置された経口寛容化さ れた動物中では１．０±０．２（ｐ＜０．００１）であった。図４Ｄに示された ように、抗ＴＧＦ-β１抗血清でのin vivo処置によって、投与量依存の仕方での ＭＢＰの経口投与によって誘発された保護は廃棄された；５０μlの抗ＴＧＦ-β １抗血清で５回処置された経口寛容化された動物における最大重症度は、１．０ ±０．２に対して３．７±０．２であった（ｐ＜０．００１、グループＣに対し てグループＤ）。図４Ｂに示されたように、ＭＢＰへ経口寛容化されなかった抗 ＴＧＦ-β１抗血清で処置された動物中での疾患の投与量依存の増大があったこ とが注目される。疾患の開始はより早期であり、回復は遅れ、そして疾患の重症 度はより大きかった（３．２±０．２に対して４．５±０．２、グループＡに対 してグループＢ、ｐ＜０．０１）。 遅延型過敏症（ＤＴＨ）の応答は、ＥＡＥの臨床上の道程と相関があり、ＭＢ Ｐへのin vivoでの細胞の免疫の手段として使われる（ブロド，エス．エイ．(Br od，S．A.)他Ann.Neurol．29:615-622，1991：コウリー，エス．ジエイ．(Khour y,S．J.)他，Cell.Immunol．131:302-310,1990)。耳中の皮下に、ＰＢＳ中の２ ５μgのＭＢＰを注射して、図４に記載された同じグループにおいて、ＤＴＨ応 答を検査した。免疫性テストの前及び４８時間後に、厚さを測定した。免疫性テ ストの前後の耳の厚さにおける変化を各動物に関して記録し、その結果を各実験 グループ±ＳＥＭに関する平均として現した。 図５（Ａ-Ｄ）に示されたように、顕著なＤＴＨ応答がＥＡＥを被る動物中に 発達し、ＤＴＨ応答はＭＢＰの経口投与によって抑制された。抑制されたＤＴＨ 応答は、投与量依存の仕方で、in vivo抗ＴＧＦ−β１処置によって廃棄された （１．４±０．３に対して２．１±０．３：ｐ＜０．０１、対照血清に対して ５０μlの抗ＴＧＦーβで５回注射された動物中）。 上記の結果より、ＭＢＰへの経口寛容化によって誘発されるＥＡＥの抑制にお いて及び自発的に起こるＥＡＥからの回復において、内因性のＴＧＦーβ１によ って演じられる免疫調節の役割についての証拠が与えられる。ＴＧＦーβの特徴 が進化において高度に保存されるということを考慮すれば、実験動物中でのＴＧ Ｆーβの免疫抑制効果はヒトにおけるその効果と同様であると予想される。 （実施例２：抗原の経口投与後の抗原駆動のバイスタンダー抑制） 下記の実験において、以下の原料及び方法を用いた。 動物． メスの生後６−８週のルイスラットをハーランースプレイグ ドーリ ーインク（インディアナポリス，ＩＮ）から入手した。動物は任意に標準飼料及 び水を与えて飼育した。 抗原． 上記実施例１で述べられているデイブラー他（上述）を修正した方法 によって、モルモットのＭＢＰを脳組織から精製し、ゲル電気泳動によって純度 を確かめた。オボアルブミン（ＯＶＡ）及びＢＳＡを、シグマケミカルカンパニ ー(Sigma Chemical Co.)（セントルイス，ＭＯ）から購入し、キーホール リン ペット(keyhole limpet)のヘモシアニン（ＫＬＨ）をカルバイオケム ベーリン グコープ(Calbiochem Behring Corp.)（ラ・ジョラ(La Jolla)，ＣＡ）から購入 した。 動物の免疫処置． 実質的なＥＡＥ疾患状態を誘発するために、動物を、足蹠 内に、２５μｇのＭＢＰであって、４mg/mlのヒト型結核菌（ディフコ ラブズ( Difco Labs)，デトロイト，ＭＩ）を含有する同体積のＣＦＡ中で乳化されたも の を用いて、免疫処置した。in vivoバイスタンダー抑制実験のために、ＭＢＰＣ ＦＡを用いた最初の免疫処置の８時間後に、５０-３００μgの二次的抗原ＯＶＡ 、ＢＳＡ、又はＫＬＨを、１００μl ＰＢＳ中で同じ足銃の皮下に注射した。 臨床評価． バイスタンダー抑制の臨床上の発現の、上述したin vitro検定と の相関性を示すために、見えないようにした仕方で毎日、ＥＡＥの徴候に関して 動物を評価した。ＥＡＥの臨床上の重症度は、次のように採点された： ０，疾 患なし；１，尾の弱り；２，後脚の麻痺；３，後脚の対麻痺、失禁；４，四肢麻 痺；５，死亡。各実験グループ（７）に関して、前に述べたように、平均最大臨 床重症度を計算した。グループ間の疾患の発生率を比較するために、一末端のス チューデントｔ-検定及びカイ二乗解析を用いて統計的解析を行った。 経口寛容の誘発． １８ケージのステンレス鋼動物給餌針（トーマス サイエ ンティフィック，スウィーズボロー，ＮＪ）を用いた胃の挿管によって、１mlの ＰＢＳに１mgのＭＢＰ、ＯＶＡ、ＢＳＡ又はＫＬＨを溶解したものを、又はＰＢ Ｓのみを動物に給餌した。最後の給餌を免疫処置の２日前とし、２-３日の間隔 で５回（総投与量５mg）動物に給餌した。 遅延型過敏症（ＤＴＨ）検査． 耳中の皮下に、ＰＢＳ中の５０μgのＭＢＰ 又はＯＶＡを注射して、ＤＴＨを検査した。ＭＢＰは左耳に注射され、ＯＶＡは 同じ動物の右耳に注射された。測微計カリパス（ミツトヨ、宇都宮、日本）を用 いて、免疫性テストの前及び４８時間後に、見えないようにした仕方で、０．０ １インチの単位で厚さを測定した。免疫性テストの前後の耳の厚さにおける変化 を各動物に関して記録し、その結果を各実験グループ±ＳＥＭに関する平均とし て表した；各グループは５匹の動物からなる。 トランスウエル(Transwell)培養． 孔の大きさが０．４μmのポリカーボネー ト半透膜で隔離された２つの隔室からなり、直径が２４．５mmの、双室トランス ウエル培養システム（コスター，ケンブリッジ，ＭＡ）を用いた。２つの室は１ mm離れており、細胞どうしが直接接触することなく、細胞がごく接近して共にイ ンキュベートされるようになっている。トランスウエル培養中での増殖の応答のin vitro 抑制を測定するために、前に述べられたように（ベン-ナン，エイ.他 ，Eur．J．Immuno．11：195,1981)増大され維持された、５ｘ１０4のＭＢＰ又は ＯＶＡ特異性の系統の細胞を、下部ウエルにある６００μlの増殖媒体中の、１ ０6の照射された（２,５００rad）胸腺細胞を用いて培養した。経口で寛容化さ れたラット又は対照（ＢＳＡを給餌されたもの）からの牌臓細胞を、上部ウエル に加えた（２００μI中に５ｘ１Ｏ5細胞）。最後の給餌から７-１４日後に脾臓 細胞を取り除き、この脾臓をステンレス鋼のメッシユに押し通して単一細胞の懸 濁物を調製した。ＭＢＰ及びＯＶＡ（５０μg/ml）を、２０μｌの体積で加えた 。モジュレーター細胞は半透膜によってレスポンダー細胞から隔離されるので、 照射は不要である。いくつかの実験においては、モジュレーター細胞をレスポン ダー細胞と共に下部ウエル中に加え、この場合には、培養中に置かれる直前に、 モジュレーター細胞を照射した（１,２５０rad）。増殖媒体は、２ｘ１０5Ｍの ２-メルカプトエタノール、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリンと ストレプトマイシン、１％のグルタミン、１％のヘペス緩衝剤、１％の非必須ア ミノ酸、及び１％の自己由来の血清を補った、ＲＰＭＩ１６４０（ギブコ，グラ ンド アイランド，ＮＹ）からなる。各トランスウエルは、４倍にされた。この トランスウエルを湿された６％ＣＯ2及び９４％空気の雰囲気中で、７２時間イ ンキュベートした。培養の５４時間後、４μＣｉの［3Ｈ］チミジンを用いてそ れぞれの下部ウエルを短期間標識し、７２時間後に、ファイバーグラスフィルタ ー上に収穫して、標準液体シンチレーションの技術を用いて計数するために、丸 底の９６ウエルのプレート（コスター）中の３つのウエルに、分割して播種した 。 パーセント抑制＝１００ｘ（１−モジユレーターで培養された△cpmレスポンダ ー／レスポンダーの△cpm）。 バイスタンダー抑制の間に生成された可溶性の因子を検討し、この課程での抑 制の転移を監視するために、このトランスウエルシステムを用いた。 Ｔ細胞サブセットの精製． クルイクシャンク、上述、の修正された方法に従 って、磁気ビーズを用いて負の選択をすることによって、Ｔ細胞サブセットを減 少させた。脾臓細胞を、氷上で３０分間、マウス抗ラットＣＤ８、又はＣＤ４、 ｍＡｂｓ（クローンＯＸ／８又はＷ３／２５、セロテック／バイオプロダクツ ，インディアナポリス，ＩＮ）の１：１００の希釈物を用いてインキュベートし 、２度洗浄し、次に、ヤギ抗マウスＩｇＧが共有結合的に付着した、４５０ミク ロン（Ｍ-４５０）の平均直径を有する、予備洗浄した磁気粒子（ダイナルイン ク，フォート リー，ＮＪ）に加えた。用いられた磁気ビーズの量は、概算され る標的細胞の個数の１０倍となるように計算された。この細胞を、１０ml丸底試 験管（ヌンク，ロスキルド(Roskilde)，デンマーク）中の、１０％ ＦＣＳを補 った０．５mlのＲＰＭＩ１６４０中で、このビーズを用いて、５分毎に穏やかに 振りながら、氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーションの後、こ のビーズ／細胞懸濁物を５mlの媒体で洗浄し、細胞-ｍＡＢ-ビーズ複合体を、磁 気粒子コンセントレーター（ダイナル-ＭＰＣ-１）を２分間用いて、強力な磁場 中で標識されていない細胞から分離した。上澄みを取り除き、この手順を２回繰 り返して非付着の部分を得た。この減少させた集団中のＴ細胞は、間接流動細胞 計測法で示されたものによれば、９５％ＣＤ４+ＣＤ８-又はＣＤ８+ＣＤ４-であ った。 疾患抑制の養子移入．バイスタンダー抑制の間に起こる疾患抑制の養子移入を 監視するために、ドナーラットに、１mgのＭＢＰ、ＯＶＡ又はＫＬＨのいずれか を２日に５回の間隔で給餌し、最後の給餌から７-１４日目に殺した。脾臓細胞 を収穫し、増殖媒体中で同一抗原（５０μg/ml）を用いてin vitroで７２時間イ ンキュベートした。細胞を腹腔内に注射した： 全脾臓集団に対して１０8細胞 、又はＣＤ８あるいはＣＤ４を減少された集団に対して５-６ｘ１０7細胞。受容 体の動物を、養子移入の前に照射し（２５０rad）、養子移入の６時間後にＭＢ Ｐ／ＣＦＡで免疫処置し、８時間のちに５０μgのＯＶＡで免疫性テストを行っ た。 細胞どうしの直接の接触が、in vitro抑制が起こるために必要であるかどうか を決定するために、トランスウエルシステム（上記）を用いた。この結果は、以 下の表１に示されている。 表１に示されているように、ＭＢＰを給餌された動物からの照射された脾細胞 が下部ウエル中でＭＢＰ系と共にインキュベートされたとき、増殖の抑制があっ た（系２）が、一方、ＰＢＳを給餌された動物（系３）からの脾細胞では抑制は 観察されなかった。モジュレーター細胞が半透膜によってレスポンダー細胞から 隔離されたときには、仮想的に理想的な抑制が観察された（系４及び５）。この ように、抑制は、トランスウエルの膜を通して拡散する因子又は可溶性の因子に よって仲介されているように思われる。従って、バイスタンダー抑制は、ＥＡＥ 中での経口寛容化の誘発において効能があるように思われる。 ５ｘ１０4ＭＢＰ系細胞＋ＭＢＰ（５０μg/ml）を、抗体を与える細胞（ＡＰＣ ）としての、１０6の照射された（２,５００rad）胸腺細胞と共に下部ウエル中 においた。ＭＢＰ又はＰＢＳを給餌された動物からの脾臓のモジュレーター細胞 （５ｘ１０5）を、上部又は下部ウエルのいずれかに加えた。下部ウエルに加え られたモジュレーター細胞を照射した（１,２５０rad）。加えられたＭＢＰの無 いＭＢＰ系のバックグラウンド計数は、１,０００と２，０００cpmとの間であっ た。 トランスウエルシステムで観察されたin vitro抑制が、モジュレーターとレス ポンダー細胞との間の、同様の抗体特異性を必要とするかどうかを決定するため に、ＯＶＡ系を下部ウエル中に置いた。この結果は、以下の表２に示されている 。 表２に表されているように、上部ウエルに置かれたＭＢＰを給餌された動物か らのモジュレーター細胞は、ＭＢＰの不在下ではなく存在下で、下部ウエル中で のＯＶＡ系を抑制することができた（系２及び３）。ＰＢＳを給餌された動物か らのモジュレーターに加えられたＭＢＰは、ＯＶＡ系を抑制しなかった（系４） 。逆に、ＯＶＡの存在下で、ＯＶＡを給餌された動物からのモジュレーター細胞 を用いた場合には、ＭＢＰ系の抑制が見られた（系７）。どちらのウエル中のト ランスウエルに加えられた可溶性の抗体も、膜を横切って拡散し、従ってin viv o で起こり得ると同様に両方のウエルに存在していたことが注目される。 ５ｘ１０4ＭＢＰ又はＯＶＡ系細胞を、ＡＰＣとしての、１０6の照射された（２ ，５００rad）胸腺細胞と共に下部ウエル中においた。ＭＢＰ、ＯＶＡ又はＰＢ Ｓを給餌された動物からのモジュレーター細胞（５ｘ１０5）を、上部ウエルに 加えた。加えられたＭＢＰ又はＯＶＡの無いＭＢＰ及びＯＶＡ系のバックグラウ ンド計数は、１，０００と２，０００cpmとの間であった。 上記in vitroバイスタンダー抑制とin vivoの場合との関係を決定するために 、ＥＡＥモデルにおいて一連の実験を行った。ラットにＯＶＡ（１mg、１０日間 で５回）を給餌し、次いで足蹠中にＭＢＰ／ＣＦＡで免疫処置し、８時間後に同 じ足蹠中にＯＶＡを注射した。図６Ａに示されたように、ＭＢＰ／ＣＦＡでの免 疫処置の８時間後の足蹠中への注射は、予想されたように、ＥＡＥには影響を及 ぼさなかった。平均最大臨床疾患重症度は、免疫処置されたＭＢＰ／ＣＦＡに関 して３.９±０.２であり、皮下に与えられたＯＶＡを用いた場合３.８±０.１で あった。しかし、ＭＢＰ／ＣＦＡで免疫処置される前にＯＶＡを給餌された動物 で、その後にＯＶＡが足蹠の皮下に与えられたものにおいては、ＥＡＥの抑制が ＭＢＰの給餌と同様に起こった（図６Ｂ）；ＯＶＡを給餌され、加えてＯＶＡを 皮下に与えられたものにおける疾患重症度は０.９±０.２であり、ＭＢＰを給餌 されたものにおいては１.１±０.１であり、そしてＯＶＡを給餌されＫＬＨを皮 下に与えられたもの（対照グループ）においては３.９±０.１であった（ｐ＜０ .００１、対照に対してＯＶＡ及びＭＢＰを給餌されたもの）。従って、ＭＢＰ ／ＣＦＡを用いた免疫処置によって誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞はバイスタンダー 抗原、この場合ＯＶＡ、の経口投与によって誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞によって 放出されたＴＧＦ-βによってダウンレギュレートされた(down regulated)。Ｍ ＢＰ／ＣＦＡに加え、ＯＶＡが皮下に与えれた後に、ＫＬＨが与えられた、ＯＶ Ａを給餌された動物においては、ＥＡＥの抑制は観察されず（図６Ｃ）、疾患の 重症度は、それぞれ３.７±０.１及び３.８±０.２であった。これらの実験によ り、トランスウエル システム中でのin vitroでみられるものと同様のin vivo の効果が説明された。特に、ある抗原への経口寛容化によって生じたモジュレー ター細胞は、寛容化する抗原が存在するときに、異なる抗原の特異性を有する細 胞を抑制できる。 in vivoバイスタンダーシステムにおいて相関性が存在するかどうかを決定し 、バイスタンダー効果と関連して起こる感作の程度を決定するために、ＤＴＨ応 答を測定した。ＭＢＰに対する抑制されたＤＴＨ応答は、ＭＢＰを給餌された動 物及びＯＶＡを給餌されたものであって、続いてＭＢＰ／ＣＦＡに加えてＯＶＡ で免疫処理されたものの両方で観察された（図７）。ＫＬＨやＢＳＡなどの、他 の抗原の経口投与は、これらの動物でのＭＢＰに対するＤＴＨ応答に影響を及ぼ ざなかった。ＯＶＡを給餌し、次いでＭＢＰ／ＣＦＡと共にＯＶＡを皮下に注射 することによっては、ＤＴＨによって測定されるＯＶＡに対する免疫応答は生じ なかった。 ＯＶＡに独特なものが、観察されるin vivoバイスタンダー抑制に関与する可 能性を排するために、ＭＢＰ／ＣＦＡ免疫処置の後にＢＳＡが給餌され次いで皮 下に与えられる、同様の実験を行った。図８に示されたように、ＭＢＰ／ＣＦＡ で免疫処置をし次いでＢＳＡ（バイスタンダー抗原）を皮下に与える前の、ＢＳ Ａの経口投与は、ＯＶＡを用いた場合にみられたものと同様に、ＥＡＥを抑制し た。ＢＳＡに関連するＥＡＥの抑制が、二次的な抗原が投与量３００μgで皮下 に与えられたときにのみ観察され、一方ＯＶＡを用いた場合には、投与量５０μ gで抑制が起こったことは注目される。 図９に示されたように、ＭＢＰ又はＯＶＡを給餌された動物からの脾臓細胞は 、自然のままの受容体中に保護を養子移入し、これはＭＢＰ／ＣＦＡで免疫処置 され、皮下にはＯＶＡが与えられた。さらに、養子移入された抑制は、ＣＤ４+ 細胞の減少ではなく、ＣＤ８+（サプレッサーＴ細胞）の減少によって廃棄され た。ＫＬＨを給餌した動物からの脾臓細胞を、ＭＢＰ／ＣＦＡに加えてＯＶＡで 免疫処置をした動物へ養子移入した場合には、保護は観察されなかった。 （実施例３：組換え体の発現及びＭＢＰの精製） ヒトのＭＢＰ（ATCC，Rockville,HDより購入）をコードするcＤＮＡを制限末 端を処理したＰＣＲ標的として用い、メチオニンをコードするＡＴＧで始まるｃ ＤＮＡフラグメントをｐＥＴ−３ａの誘導体である原核発現ベクターｐＡＥＤ４ （Studierら，Methods in Enzvmology 185: 6089, 1990）に結合させ、ｐＨＯ− ＭＢＰ．Ｔ７を生産した。Ｅ．ｃｏｌｉホストＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ（ Novagen，Madison，WI）を１００μg／mlのアンピシリンと２０μg／mlのクロラ ムフェニコールとの中で形質転換し、培養してＯ.Ｄ.600＝０．５とした。培養 は１．０mM ＩＰＴＧとなるようにし、さらに１００μg／mlのアンピシリンを加 えた。さらに３h培養し、４℃に冷やし、収集して氷温のＳＴＥ（１５０mM Ｎ ａＣｌ、５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、および１０mMのＥＤＴＡを含有し、ｐＨ＝ ７．４のＩＸＳＴＥ）で一度洗浄した。細胞ペレットをＳＴＥに０．４％ Ｔｒ ｉｔｏｎ−Ｘ１００と０．２％のデオキシコール酸ナトリウムを加えた液５ｍＩ で、１００ml培養分を懸濁させた。完全に溶菌するために細胞を−２０℃にて一 晩凍結し、氷上に溶かし、０．２mMＰＭＳＦ、１μg／mlロイペプチン、２Ｕ ／mlアプロチニン（aprotinin）及び１０mMのＭｇＣｌ2となるようにした。ＤＮ Ａｓｅｌを４０μg／ml、ＲＮＡｓｅを１０μg／mlまで加えた。この溶液をさら に３０分間氷冷した。不溶なフラクションを４℃にて２０，０００ｘｇの遠心処 理を３０分間おこなって調製した。得られた封入体を０．５％のＴｒｉｔｏｎ− Ｘ１００を含有する氷温のＳＴＥを用いて２度洗浄し、８Ｍ尿素、１mM ＥＤＴ Ａ、１mM ＤＤＴ、０．２mM ＰＭＳＦを含むｐＨ＝８．０、５０mMのＴｒｉｓ −ＨＣｌ中にて再懸濁させた。 組換えＭＢＰを精製するには、１リットルの培養につき１．０mg等量の予め平 衡化させたＣＭ−５２セルロース（Whatmann，Hillsboro，IL）を試料に加え、 ４℃にて一晩振盪した。脳ＭＢＰについて以前記載されているように（Deibler ら，Prep．Biochem 2:139-165，1972）、セルロース−ＭＢＰを２Ｍ尿素／０． ０２Ｍグリシン酸ナトリウム／０．０２Ｍ ＮａＣｌでpH＝１１．０のものを２ ０容量用いて２度洗浄し、脱イオン化蒸留水を２０容量用いて２度洗浄し、５mM ＨＣｌを２０容量用いて２度洗浄し、１００mM ＨＣｌを２０容量用いて溶離さ せた。Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ−１０濃縮剤（Amicon，Beverly，MA）を使用して 溶離液を濃縮し、ＢＳＡ蛋白質検定法（Pierce，Rockford，IL）を使用して定量 した。試料を１ ＸＬａｅｍｍｌｉ試料緩衝液（Laemmi，Nature 222:680-685） に調製し、１２．５％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドケル上で電気泳動した。２ つ調製したケルをクーマジーブルーで染色するかまたはニトロセルロースに移し （Towbinら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 76:4350-4354，1979）、ＭＢＰのア ミノ酸残基１３０−１３７（Boeringer Mannheim，Indianapolis，IN）に対する マウスのモノクローナル抗体（ＩｇＧ1）と共にインキュベートした。アルカリ ンホスファターゼ（Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA）と共役したロバ の抗−マウスＩｇＧと共にインキュベートした後、一段階ＢＣＩＰ／ＮＢＴ溶液 （Kirkegaard＆Perry Laboratories，Gaithersburg，MD）を用いてブロットを現 像した。現像から、組換え生産されたＭＢＰには、脳組織から分離したＭＢＰに 存在する蛋白分解性フラグメントのコンタミがないことが示された。 （実施例４：組換え生産されたＭＢＰの生体活性） 生体活性を知るため、実施例３の組換え蛋白質（γ−ＭＢＰ）を、ＭＢＰと特 異的に反応することが既に示されているヒトのＴ細胞クローンを使用してin vit ro 増殖検定によって試験した。Ｔ細胞（クローンＯＢ．１Ａ１２．８）を３連で 、放射線を照射した抗原表現細胞（ＡＰＣ）を９６−ウェルマイクロタイタープ レート（96-well microtiter plates）において７２時間塗布し、最後の１８時 間は２ｕＣｉ［3Ｈ］−チミジンでパルスした。自己由来の（autologous）末梢 血液単核細胞（ＰＢＭＣ）もしくはＴ細胞ラインを０、０．１、もしくは１．０ μMのＭＢＰペプチド（アミノ酸８４−１０２）、脳ＭＢＰ、もしくはγ−ＭＢ Ｐでパルスすることによって、ＡＰＣを調製した。ＡＰＣを用いない場合は、ペ プチド、脳ＭＢＰ、もしくはγ−ＭＢＰを示した濃度で培養に添加した（LaSall eら，J.Immunol. 147:774-780，1991）。結果を下記の表３に示す。 表３に示したように、Ｔ細胞クローンＯｂ．１Ａ１２．８は、脳より精製され るＭＢＰと同様に、特異的にかつ使用量依存的に、ＡＰＣｓにより提供されるＭ ＢＰペプチド８４−１０２に反応した。γＭＢＰを用いてクローンをパルスした ところ、同様に細胞を刺激する結果となり、まず細胞が蛋白質を認識してこれと 反応し、次に組換え蛋白質が増殖検定において、少なくとも元の（native）蛋白 質と同程度には効果的であることを証明することになった。この結果は、ＭＢＰ のＴ細胞認識に関与する原理的決定因子は、一次構造であり、高次構造もしくは アセチル化やリン酸化のような翻訳後修飾（post-translational modification ）ではないことを示している。興味深いことには、細胞をＡＰＣｓを含まない同 じ濃度の抗原と共にインキュベートしたところ、いずれのＭＢＰｓでも使用量が より多い時に明白な（３０％）刺激が見られた。 （実施例５：ＨＡＭ／ＴＳＰ・・ＴHTLV-I−Ｔ細胞活性化における活性化Ｔ細胞の 役割） 「ＣＤ４+及びＣＤ８のＨＴＬＶ−Ｉ感染Ｔ細胞クローンの自然発生的Ｔ細胞増 殖」 ＨＡＭ／ＴＳＰの２人の患者（患者ＤＵ、４８クローン：患者Ｐｒ、４５クロ ーン）の血液から一連のＴ細胞クローンを得た。患者ＤＵからの４０Ｔ細胞クロ ーンのうち７つは、ＰＣＲ法によるとＨＴＬＶ−Ｉ ｐｏｌ領域に対して陽性で あり、このことはこれらのクローンがウィルスに感染していることを示している 。６つのクローン（Ｄｕ．４、Ｄｕ．７、Ｄｕ．２０、Ｄｕ．２６、Ｄｕ．３４ 、及びＤｕ．４３）上でゲノムＤＮＡのサザンブロット分析を行ないＨＴＬＶ− Ｉプロウィルス及びクロナリティ（clonality）のあることを確認した。これら Ｔ細胞クローンは、同種異系の支持細胞（allogenic feeder cells）がクローン 化及び拡大に用いられたように、in vivo感染したＴ細胞の例である。５つのＨ ＴＬＶ−Ｉ感染したクローンはＣＤ４+であるが、１つのクローン（Ｄｕ．７） はＣＤ８+であり、ＣＤ４及びＣＤ８集団（populations）のいずれもがin vivo でＨＴＬＶ−Ｉにより感染され得ることを証明している（表４）。被験者Ｐｒか らの２４クローンのうち８つは、ウェスタンブロット法によるＨＴＬＶ−Ｉ抗原 に対してと同様にＰＣＲ法によればＨＴＬＶ−Ｉ ｔａｘ ｍＲＮＡに対しても陽 性であった。いずれの試験もウィルス感染を検査するものである（データ示さず ）。これらのクローンが自己由来の支持細胞を使用することによって得られたこ とから、Ｔ細胞クローンのin vitro感染は回避し得ない。 感染したＴ細胞クローン、及び感染していないＴ細胞クローンの生育特性を調 べた。全てのクローンを分裂促進因子（mitogen）と支持細胞とを用いて、連続 的に生育させるために、１０〜１４日の間隔をおいて再刺激した。しかしながら 、最後の刺激の後、分裂促進因子とインターロイキン−２（ＩＬ−２）のないと ころで７〜１０日間培養し、増殖するのはＨＴＬＶ−Ｉ感染したＴ細胞クローン のみであることが判明し、これは“自然発生的クローン化増殖”と呼ばれる現象 である（表４）。こうして、これらのＴ細胞は、活性化され、しかし形質転換さ れてはいない細胞の生育特性を示した。注目すべきは、クローンＤｕ．４３がＰ ＣＲ法によるとＨＴＬＶ−Ｉｐｏｌ領域に対して陽性であったが、自然発生的に 増殖はしなかったことである（表４）。ケノムＤＮＡのサザンブロット分析によ って、ＨＴＬＶ−Ｉプロウィルスケノムの存在が確認された。しかしながら、ノ ーザンブロット法によってはこのクローン中にウィルス性ｍＲＮＡは全く検知さ れなかった。 「ＨＴＬＶ−Ｉ感染したＴ細胞により誘導される休止Ｔ細胞の増殖」 ＨＡＭ／ＴＳＰをもつ患者の血液中に、多数の活性化したＴ細胞が発見された （Itoyamaら，Neurology 38:1302，1988; Jacobsonら，Ann．Neurol. 23(supp.) :S196，1988）ことから、ＨＴＬＶ−Ｉ感染したＴ細胞が自己由来のＴ細胞を誘 導して増殖させるか否か、試験を行なった。放射線照射されたかまたは固定され た、ＨＴＬＶ−Ｉ感染したＴ細胞クローンは、感染していないクローンと異なり 、自己由来の血液Ｔ細胞または同種異系の健常な被験者からの血液Ｔ細胞の増殖 を誘導することが判明した（表５及び６）。ＨＴＬＶ−Ｉ感染しているが、しか しＨＡＭ／ＴＳＰ患者から分離されたものではない対照のＴ細胞クローン、Ｃ９ １／ＰＬ及びＨＵＴ−１０２には、各々、穏やかな誘導能力が見られるか、また は全く見られない（表５）。固定されたＨＴＬＶ−Ｉ感染Ｔ細胞クローンの休止 血液Ｔ細胞の増殖を誘導する能力によって、溶解性因子ではなく細胞表面の構造 が増殖開始の引金として重要であることが示された。さらに、細胞にとって、血 液脳関門を越えるためにＴ細胞の活性化は必要であることが示されたように、Ｈ ＡＭ／ＴＳＰに苦しむ患者のＣＮＳ中に見られる炎症性の反応におけるＴ細胞の 機能を分析するにあたっては、この活性化は意義深いものである。 ＨＡＭ／ＴＳＰの患者ＤｕからのＴ細胞クローンを、フィトヘマグルチニン（ ＰＨＡ）及びＩＬ−２と共に単細胞クローン化することによって確立した。タロ ーンについて、ＰＣＲ法により、ｐｏｌ領域の増幅を、またサザンブロット法に より、ＨＴＬＶ−Ｉプロウィルスケノムの存在を調べた。［3Ｈ］チミジン取込 みによって、自然発生的増殖を定量した。* Ｔ細胞クローンＤｕ．４３では、自然発生的増殖は見られないが、ＨＴＬＶ− Ｉプロウィルスゲノムが組込まれていることが判った（ゲノムサザンブロットに よる）。しかし、ウィルスＲＮＡはないことが判った（ノーザンブロットによる ）。ＮＤは定量されず。 ヒト（Ｈｕｍ）、ウシ（Ｂｏｖ）、ラビット（Ｒａｂ）、モルモット（ＧＰｉ ｇ）、ラット（ＲａｔＳ）、及びニワトリ（Ｃｈｉｃ）中枢神経系組織由来のミ エリン塩基性タンパク質のアミノ酸配列。使用した速度ＢＰは、１４ｋＤａＢＰ （ラットスモール、またはＲａｔＳ）であり、それはＢＰ遺伝子の６番目のエク ソンによってコードされる残基１１８−１５９の欠損を有している。ヒトの１８ ．５及び１７．２ｋＤａの両方のＢＰ遺伝子形態が使用された。後者は、ＢＰ遺 伝子の５番目のエクソンによりコードされる１０７−１１７残基（下線部）の欠 損を有する。配列は、各種からの相同残基が垂直に並び、互いに容易に比較でき るように並べた。このシステムは、種の間に見られる欠損及び付加を調節し、異 なる分子間に合計１７７の潜在的部位を許容する。括弧内の残基配列は、まだ確 定していない。Detailed Description of the InventionBystander suppression of retrovirus-related neurological disorders   This application is based on Weiner et al., US Patent Application No. 843,752, February 28, 1992. Date application; Weiner et al., US Patent Application No. 487,732, filed March 2, 1990, Pending; Weiner et al., US Patent Application No. 454,806, issued Dec. 20, 1989. It is a partial continuation application of the request, pending.Field of the invention   The present invention relates to improved treatment of retrovirus-related neurological disorders. Especially books The invention provides a vice in the treatment of nerve damage associated with infection by retroviruses. Use of tander antigens (ie, antigens that suppress cells involved in the destruction of nervous tissue) It is related toBackground of the Invention   Retrovirus infection is associated with neurological manifestations caused by lesions in nervous tissue There are many things I do. Infection by retrovirus causes systemic inoculation of large numbers of T cells It is known that it can be activated. By infection with a neurotrophic retrovirus The tissue destruction that occurs is dependent on the endogenous lymphokine and the release from these activated T cells. And non-specific cytotoxic attack via cytokines and ing. Two retroviruses known to induce such nerve damage Rus is a human leukemia virus type I (HTLV-I) and human immunodeficiency virus. Virus (HIV).   Infection with human leukemia virus type I (HTLV-I) is associated with neuropathy And is called HTLV-I-related myelopathy (HAM). this The condition is based on a previously identified neurological disorder-tropical spastic paraplegia. araparesis) (TSP). These states are Limb weakness and paralysis, hypertrophic reflex, urinary / fecal incontinence, mild peripheral sensory loss, other neuropathy Characterized by: Anti-HTLV-I was found in the cerebrospinal fluid (CSF) of these patients. Antibodies and HTLV-I antigen were detected. Southern hybridization and And polymerase chain reaction (PCR) analysis of HTLV-I and CSF lymph in blood. The existence of a sphere was confirmed. Is the neurological condition a lesion in the brain and spinal cord of an infected individual? (Cann et al., "Human T-cell Leukemia Virus Types I and I I ", chapter 52 ofVirology, Fields et al. (Eds), second edition, Raven Press Ltd ., New York, 1990). These lesions are probably the central nervous system HTLV-I sense. It is caused by a cytotoxic T cell-mediated immune response to stained cells. Considered (Bhagaviati et al.,New Eng.J.Med. 318(18): 1141-1147, 1988).   Oral (with-oral) corticosteroids, non-specific drugs that suppress immune responses Treatment with, has shown some clinical benefit to patients suffering from these conditions. It has an effect. However, only limited improvement can be seen, Drugs such as have significant toxicity (Cann et al.,supra). This toxicity affects the entire patient Causes serious side effects, including the potential to induce general immunosuppression. In other words, Long-term treatment with such agents will reduce the normal protective immune response to pathogens. Downregulate, thereby increasing the risk of infection. It In addition, in patients who have received long-term global immunosuppression, the treatment is associated with significant medical consequences. Increased risk of developing complications such as malignancy, kidney disease and diabetes It   HIV is a viral agent involved in acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) , HIV infection also affects the peripheral nervous system (ie, chronic distal symmetric polyneuropathy). stal symmetric polyneuropathy), chronic inflammatory myelination polyneuropathy  inflammatory myelinating polyneuropathy) and central nervous system (ie empty Involved in neuropathy affecting both hydatidiform myelopathy are doing. The clinical features depend on the tissue with the lesion, but cognitive deficit (cognitive de ficits) and memory loss, dementia, psychomotor delay, weakness, sensory deficits, cramps in limbs , Hyperreflexia, urinary / fecal incontinence, and other neurological disorders (Hirsch et al., "HIVs: B iologyand Medical Aspects ", chapter 54 ofVirology, Fields et al. (Eds), secon d edi tion, Raven Press Ltd., New York, 1990). Pathogenesis of HIV-related neurological diseases , Not fully understood. However, due to HIV infection, rhinos in the CNS The level of tocaine rises. This increase is due to immunocytochemical analysis of brain tissue (Tyor ,Annals of Neurology 31: 349-360, 1992), Relatively "immunoreactive" in the brain of HIV-positive individuals compared to HIV-negative individuals It is thought that it shows that it is in the state of ". The cause of the increase in the secretion was secretion by HIV-infected macrophages that migrated into the CNS It is hypothesized that there is.   There is no effective treatment for HIV infection. Anti-wi, also known as AZT Treatment with the lusu drug 3'azido-3'-deoxythymidine reduces opportunistic infections Have been shown to be effective, and may be effective in prolonging the time that patients are asymptomatic. Not. With regard to neurological symptoms, AZT modified the HIV dementia complex to some extent. Although reportedly good, this effect has been shown to affect all types of HIV-related neurological disease. Not seen in patients (Yarchoan et al.,Lancet 1: 132-135, 1987). Also, H IV is highly mutagenic, so how long does this treatment last? Is uncertain. Moreover, since AZT is a toxic drug, the treatment has no side effects However, it often reduces both red and white blood cell numbers (Hirsch et al.  supra).   Treatment with other nucleoside analogues, especially dideoxycytidine (ddC) And dideoxyinosine (ddI) are positive for neurological manifestations of HIV infection (Yarchoan et al., J. Cell Biochem.suppl.0 (14Par t D) p. 93, 1990). Again, a resistant strain of HIV develops and its treatment is secondary to virulence. To act. Therefore, an effective and non-toxic treatment for treatment of HIV-related neurological disorders The need for good methods remains.   Co-pending US Patent Application 07 / 843,752, filed February 28, 1991 As disclosed, the inventor and co-workers have found that oral tolerization (tole rization) (or tolerization by inhalation) useful for treating autoimmune diseases A new method and pharmaceutical composition were devised. This method uses bystander antigens (defined below) Is used as a tolerizer and is used alone or as a so-called Amplifies the tolerizing effect of synergists, or bystander antigens Used with compounds. Bystander antigens need not be self-antigens, That is, it must be an antigen that is attacked by disease-inducing cells There is no. Oral administration of Bystander Antigen can be applied to other antigens or antigen fragments. It can somehow prevent the tissue damage caused by specific cells. This way , Diseases not considered to be autoimmune, eg retrovirus-related neurological disorders It is this aspect of the oral tolerization method that makes it possible to apply such as It As discussed below, inhibition of T cell activity by administration of bystander antigens Is a neural tissue associated with non-specific cytotoxic attacks, such as retroviral infection. It is believed to reduce observed attacks. Cell damage to nerve tissue By reducing the harmful attack, the formation of lesions is reduced and thus to the nervous tissue. It reduces the neurological disorders that are believed to result from such damage. Of this restraint The cellular mechanism is discussed below and shown in Examples 1 and 2. Retro Applying this method to the treatment and prevention of virus-related neurological disorders is also associated with these diseases. Discussed below with experimental data supporting the role of activated T cells in qi pathology Has been debated.   Therefore, it can treat and / or treat the symptoms of individuals suffering from retrovirus-related neurological disorders. It is an object of the present invention to provide an improved method used to mitigate. The method may be used alone or optionally in combination with synergists and other immunomodulators. Use of a composition comprising a bystander antigen that can be used asSummary of the invention   The present invention relates to the oral administration of certain antigens (called "bystander antigens") or Enteral administration (or administration by inhalation) induces suppressor T cells , Conversely, nonspecific tissue, caused by, for example, neurotrophic retrovirus infection Unexpected and surprising discovery of suppressing T cells that contribute to cytotoxic attack It is based on. T cells attracted by bystander antigens Mediates the release of transforming growth factor β (TGF-β). This factor non-specifically suppresses the activity of all immune cells in the area, causing tissue cells to Obstacle Induces T cells involved in a harmful attack. The suppressor T cells attracted to the nerve cells Cells (ie brain, spinal cord, peripheral nerves or related cell types) Can reduce cytotoxic damage to these tissues. Target T cells How to do this is discussed below. In this way oral administration of bystander antigens Can be used as a treatment for retrovirus-related neurological disorders.   In this type of inhibitory mechanism, TGF-β-releasing T cells It is not necessary to recognize the same antigen as T cells involved in disease in tissues. TGF-β It is only necessary that cells of both species be found at the same site when released . One way to achieve this is as a bystander antigen: (a) TGF-β It has the ability to induce T cells to release, and (b) itself is under attack Specific to neural tissue, ie from class I or class II MHC Provided antigen, each CD8+Or CD4+What is recognized by T cells Is to use. Thus, it is provoked by oral administration of bystander antigens. Suppressor T cells that release (and release T cell-suppressing TGF-β) enter neural tissue Will go. By targeting TGF-β to neural tissue, it was targeted to this region. T cells that are placed in and involved in the damage of this tissue are suppressed and thus cytotoxic tissue loss. Wounds will be reduced.   Accordingly, one aspect of the invention is the treatment of mammalian retrovirus-related neurological disorders. A method for treating a disease, the method comprising: administering an effective amount of Vista for treating the disease. A mammal antigen is administered to said mammal, said antigen comprising: TGF-β suppresses T cells involved in the cytotoxic reaction in the body of mammals Inducing TGF-β release from T cells at a site in the body of the mammal Is.   In another aspect, the invention provides a retroviral composition in a pharmaceutical oral dosage form. Provide a method of administering an effective amount of a bystander antigen for the treatment of a neurological disorder The administered antigens are toxic to the cytotoxic antigens in the mammalian body. TGF-β suppresses T cells involved in It induces the release of TGF-β from cells.   In yet another aspect, the invention provides an inhalation dosage form of a medicament, comprising a retrovirus How to administer an effective amount of a bystander antigen for the treatment of lupus-related neurological disorders The antigen is administered, and the administered antigen causes the cytotoxicity in the body of the mammal. TGF-β suppresses T cells involved in harmful reactions at a site in the mammalian body Thus inducing the release of TGF-β from T cells.Brief description of the drawings   FIG. 1 shows the supernatant or lymph of lymphocytes isolated from orally tolerized animals. By sphere subsetin vitro2 is a bar graph showing the suppression of proliferative response in.   FIG. 2 shows an anti-transforming growth factor-β (TGF-β) antibody.in vi tro 3 is a bar graph showing inhibition of inhibition in.   FIG. 3. Blood free suppressor T-cells isolated from orally tolerized animals. It is a bar graph which shows the activity of TGF-β in a clear culture supernatant.   FIG. 4 (A-D) shows orally tolerized MBP-fed animals and non-MBP fed animals. -TGF-β antibody against experimental allergic encephalomyelitis (EAE) in animals 3 is a series of graphs showing the effects of the and control sera.   FIG. 5 (A-D) is an orally tolerized animal of anti-TGF-β antibody and its control. A series of bar graphs showing effects on delayed type hypersensitivity (DTH) response in animals Is shown.   FIG. 6 (A-C) shows MBP at substantially the same time as oral administration of bystander antigen. Of autoimmune disease associated with injection of selected antigens following immunization with sucrose FIG. 4 is a series of diagrams showing the above.   Figure 7 shows the delayed hypersensitivity (DTH) response associated with such bystander suppression. It is a bar graph showing a response.   FIG. 8 shows that bystander suppression of EAE in vivo was immunized with MBP. , Bovine serum albumi given to animals injected with the same antigen as given. (BSA), ovalbumin (OVA) and myelin basic protein (M 3 is a bar graph showing whether it is related to BP).   Figure 9 shows the adaptive transfer of bystander suppression. nsfer) has a CD8+In a bar chart showing the relationship with suppressor T-cells Ah ItDetailed Description of the Invention   All patent applications, patents, and references cited in this specification are Is taken as a reference. In case of conflict, the definitions and explanations herein. Descriptions containing will take precedence.Definition   The following terms used in this specification have their specific meanings as follows: Have.   (A) "bystander antigen" or "bystander" is a protein, Protein fragments, peptides, glycoproteins, or other immunogenic substances ( For example, a substance capable of eliciting an immune response). and it is, Releases TGF-β by oral or enteral administration (or administration by inhalation) Elicit suppressor T cells that contribute to Suppress the cells that become. Preferably, bystander-induced supplements The sarsar T cells target the same tissues that are under attack during the disease.   (B) "Bystander suppression" is due to the release of the immunosuppressive factor TGF-β. It is the suppression of cells involved in tissue destruction. Conversely, this release is a bystander antigen Mediated by suppressor T cells elicited by ingestion or inhalation of And are recruited to sites where cells that contribute to tissue destruction are found. The result is a non- Downregulation of specific cytotoxic reactions.   (C) The "mammal" now has an immune system and can become retrovirally infected. It is defined as a living organism.   (D) “Treatment” is to prevent the neurological disease seen with retroviral infection Or to prevent clinical or subclinical manifestations, such as histological signs) Similar to prophylactic treatment, the therapeutic inhibition or alleviation of symptoms after initiation of such neurological disorders It is meant to include both.   (E) “Synergistic drug” means, here, by oral administration together with administration of a bystander antigen. When administered by inhalation or by inhalation And / or histological) expression is defined as a substance that promotes and improves suppression. Also, as used in the preamble and elsewhere in the specification (in conjunc "action with)" (see also in association with) is a vice Before, substantially at the same time, or after administration of tander antigen orally or Aerozuru Means that. Of course, the administration of that co-substance After a long time such that the related effects gradually disappear, Do not precede or lag the administration of the It Therefore, synergists are preferred within 24 hours before and after administration of bystander antigens. It should be administered within 1 hour.   (F) "oral" administration includes oral, enteral, or intragastric administration.   (G) Diseases having "characteristics" or "signs" of retrovirus-related neurological diseases Refers to the spontaneous inflammation present in the specific inflammation of the same tissue suffering from the above neurological disorders. Or an induced disease state.   (H) "Retrovirus-related neurological disease" means neural tissue (brain, spinal cord, peripheral nerves). , And related cell types such as glial and endothelial cells) Is a disease state that arises from infection with neurotrophic retroviruses. Nonspecific cytotoxic attack mediated by T cells mediated by immune responses Is the result of.   (I) "HTLV-I antigen" or "HIV antigen" is a virus-derived protein Or protein fragments, administered orally, enterally, or aerosol Has an appropriate immune response for the therapeutic methods of the invention as defined below. It is a thing.Bystander suppression explained   Administration of bystander antigens specific to nerve tissue by oral or inhalation Unexpectedly to be an Effective Treatment in Torovirus-related Neurological Diseases It's been found. Based on these findings, HAM / TSP and HIV-related neurological diseases It is considered to be a good candidate for treatment. More like this Treatment is non-toxic and individuals infected with retroviruses such as AZT or pentadiamine It is believed that it will not interfere with other therapeutic agents used for the treatment of. Pentadiamine isPneumocystis cariniiPneumonia (PCP), AIDS related opportunism It is used to prevent infection.   A place to suppress autoimmune diseases by oral administration of autoantigens and bystander antigens Similar to that in the control of retrovirus-related neurological disorders, oral administration of bystander antigens Mediation. This is an immunosuppressive factor, transforming component. Triggered by induction of suppressor T cells that release long factor beta (TGF-β) woken up. TGF-β becomes an antigen that induces suppressor cells to release it. Is not specific, even if these suppressor T cells Releases TGF-β when induced by administered (or inhaled) antigen Even one. Lactose enriched for cells involved in cytotoxic destruction of tissues Release of TGF-β by recruitment of suppressor T cells at sites in milk Occur near the disease-causing cells and suppress these cells (ie, shut down). (Shuts down)). The ability of TGF-β to suppress these “destructive” cells The force is independent of the antigen to which the disrupting cell may be specific.   The preferred method for achieving destructive cell suppression is oral administration of the antigen to a mammal. The choice is administration. The antigen is a suppressor that releases TGF-β -Mammalian not only induces T cells but also finds destructive cells in high concentrations Sites in the body can be targeted by these suppressor T cells. Supple Preferred and effective targets for sssa T cells are specific retroviral functions. It is a tissue under cytotoxic attack in continuous neuropathies. Because the disruptive cells Is concentrated near the tissue. Because of this, bystander resistance The source (specific for suppressor T cells) is itself an anti-specific agent for the tissue under attack. It is preferably raw. Treatment of HAM / TSP and HIV related neurological disorders As a bystander antigen, myelin basic protein (MBP) or Preferably uses its fragment. More preferably amino acid 84 Human MBP peptides including -99 are used. MBP is exclusively for neural tissue As seen, the attracted cells are targeted to the nervous system, which is subject to cytotoxic attack during the disease. Will be targeted. For the treatment of HAM / TSP and HIV-related neurological disorders Other preferred bystander antigens used are proteolipid tan. There is protein (PLP) or fragments thereof. PLP is also a component of nerve tissue And thus also target the attracted T cells to the tissue under cytotoxic attack. Will change. Other bystander antigens that may be used in the present invention include: Immunodominant fragment with antigenicity, derived from HTLV-I or HIV body Is. Such fragments are generally small in size, ie 8 mer Fragment, HLA-A2.1. Through interaction with the pocket of Can be identified as dominant (Winter et al., J. of Immunology 146: 3508- 3512, 1991). Antigens of this type preferably used for the treatment of HAM / TSP are Peptide 2-25 of HTLV-1 Tax-1 protein and its fragment It is   The MBP, PLP, or viral peptide fragments used in the present invention The transwell system of Examples 1 and 2 shown below Can be used to identify. The fragments that trigger the release of large amounts of TGF-β are It is preferably used in the present invention.   The mechanism of bystander suppression of the tissue-specific bystander antigen according to the present invention is More details are given below. Tissue-specific bystander antigen is administered orally (or Enter the small intestine after enteral administration (eg directly to the stomach) or after inhalation Contact with what is called the Peyer's patch, which is a collection of immune cells under the intestinal wall It Conversely, these cells communicate with the immune system, including the spleen and lymph nodes. That As a result, suppressor T cells are induced and gradually increase in the area of tissue destruction. The above The area is where TGF-β is released, and the TGF-β is a non-specific area. Heterologous, down-regulating B cells as well as activating T cells . Thought to be involved in the release of cytotoxic factors that nonspecifically destroy surrounding tissues It is these activated cells that have been identified. Downregulate the activity of these T cells By structuring, tissue destruction is reduced. With non-specificity of TGF-β activity Despite the fact that bystander antigens are specific to the tissues under attack and damage The fact that it suppresses immune cells found in or near the tissue being treated Resulting tolerance is specific for retrovirus-related neurological disorders Target. This mechanism is used to treat HAM / TSP and HIV-related neurological disorders , Preferably with the administration of MBP or a fragment thereof, Used to target T cell responses to attacked neural tissue Is.TGF-β   TGF-β affects cells of the immune system, such as T or B lymphocytes. As a result, it also affects the inflammatory response. T-lymphocytes (and other cells) Produces TGF-β. The result of the immune system response (after T-cell activation) It is released relatively slowly in the cascade of, and highly suppresses T and B cell proliferation. Control. Many normal tissues are capable of producing TGF-β. They are, Human platelets, placenta as well as CD4 + and CD8 + T cells and activated macrophages , Bovine kidney, bone, NK cells. The isolation and biological properties of TGF-β are Transforming growth factor β Chemistry, biology, and therapeutics, Piez, K.A. et al.,   eds.,Ann.NYAcad.Sci.593: 1-217, 1990.   TGF-β was not initially identified as a growth factor, but it was found in rodents and Inhibition of B and T cells and higher CD4 than CD8 + cells in both humans Is a substance with numerous and important immunomodulatory properties, including inhibition of + cell activity It soon became clear that In addition, TGF-β is a tumor necrosis factor (TNF) , Gamma interferon (INF-γ), block cytotoxic lymphocyte activity Antagonizes inflammatory cytokines such as interleukin-I (IL-1), Cells that inhibit the induction of interleukin-II (IL-2) receptors Is known to be non-responsive to these cytokines. TGF-β Has a molecular weight of 25 kD and is linked by a number of interchain disulfide bonds. Is a protein composed of the same 12.5 kD subunit of. And There are at least two types of TGF-β, active and latent. Active TG F-β has a short half-life and a small volume distribution, but latent TGF-β , Has a long half-life, and has a large capacity distribution. Two TGF-β isoforms It exists as TGF-β1 and TGF-β2. TGF-β1 is a bystander It is believed to be involved in suppression.Bystander antigen   Antigens and non-specific for tissues under attack during retrovirus-related neurological disorders. And its fragments are still useful as bystander antigens, but non-toxic Among the antigenic substances, for example, the same tests as those used for OVA in Example 1 were performed. It can be identified using a standard system.   An antigen specific to nerve tissue used as a bystander antigen in the present invention By testing the ability of the antigen to release detectable TGF-β. Can be easily identified. For example, one or more potential tissue-specific Standard antigens are well known antigenic sperm from tissues that are the target of cytotoxic attack. Purified using the manufacturing method.   Bystander antigens (as well as fragments and analogs thereof) are known to those of skill in the art. Bacteria, yeasts, insects (eg baculovirus) using well-known techniques for ) And in mammalian cells using recombinant DNA technology. Many The amino acid sequences of many potential and actual bystander antigens are known: for example For example, Supplement A showing the MBP sequence, and Tuohy, V.K. et al.J. Immunol. 142: 1523 -1527,1989 (Encephalitis-inducing determinant of mouse PLP).   Specifically disclosed in Example 4 is the bystander antigen in the method of the invention. Is a recombinant production of human MBP for use as. Recombinantly produced human M The use of BP (rMBP) allows the preparation of proteins in which rMBP is isolated from tissue. A protein isolated from brain tissue that lacks the proteolytic fragment that characterizes it. Preferred for quality use. Furthermore, the use of recombinant technology has Easily adapted to produce the only specific epitope desired to be used as Can be   Bovine PLP; bovine, human, chimpanzee, rat, mouse, pig, rabbit, mouse The amino acid sequence of lumot MBP is quoted from the publication for convenience. This is shown in Supplement A.   In addition, some tissue-specific antigens are commercially available: for example, Mie Phosphorus basic protein.   Potential bystanders can be tested for suitability. The antigen After feeding to mammals, spleen cells or sir from the blood or CSF of these mammals. Removal of circulating T cells. That cell Giving With the same antigen asin vitroCan be stimulated. Triggered by a rage The T cells were purified and the diluent had a TGF-β content of, for example, a suitable commercially available Available polyclonal or preferably monoclonal against TGF-β The antibody is used to test quantitatively and / or qualitatively. Or commercially Other known methods using the available mink lung epithelial cell lines as described in Example 1 below. Other TGF-β detection assays can also be used. Such as the test of TGF-β production Such a method will be described in detail in Examples below. Results in sufficient TGF-β production These antigens are suitable for use in the therapeutic methods of the present invention.Bystander Antigen Use-Administration Method (Dose)   Suppression of the cytotoxic attack elicited by the bystander antigens of the present invention is orally (or Or enteral) or expected to be dose-dependent over a wide range of administration by inhalation Is done. However, it is anticipated that there will be minimum and maximum effective doses. Measured. In other words, the clinical and histological manifestations of retrovirus-related neurological disease. Inhibition of symptoms will occur over a particular dose range. However, Leto involved Rovirus, the mammal to be treated, the bystander antigen used in the treatment, and This range will vary depending on other factors.   Confirmation of the effective dose range and the optimum amount is well within the knowledge of those skilled in the art. . For example, for mammals and humans, lower dosages (eg, Start in 1 milligram) and gradually increase (eg logarithmically) in blood Of TGF-β of the present invention and / or (for example, recording from 1 to 5 or Measures the number of attacks or responds to the type of neurological condition presented by the patient. Well known recording methods such as measuring grip strength, stiffness, visual acuity, etc. Can be determined by recording the severity of the disease according to. Optimal dose Produces the maximum amount of TGF-β in the blood, and / or It causes the greatest decline in symptoms. Effective dose range is treated At least one of the symptoms characteristic of the disease to be statistically significant It causes dilution. Such methods are used in HAM / TSP and HIV To determine the appropriate dose of bystander antigen for the treatment of communicative disorders Can be used.   The present invention, in individuals susceptible to the risk of retrovirus-related neurological disorders, It can also be used advantageously to prevent the onset of retrovirus-related neurological disorders. HTLV-I Infection screening method, HIV-based immunoassay, and PCR technology have been developed. Have been. Combine the evolution of HAM / TSP with the association of an HLA haplotype In addition, individuals at high risk of developing disease due to infection can be identified ( Cann et al., Supra). HLA haplotypes and that of neuronal manifestations of HIV infection Although no such association is known, neurological disorders are common in HIV infection and It occurs in 25% -60% of infected patients (Hirsch et al., Supra). So high Infrequent justification warrants general preventive treatment for the onset of HIV infection Will. Therefore, the present invention has application in the prevention of retrovirus-related neurological disorders. Including.   Nerve tissue extracts can be used as well as specific bystander antigens It However, administration of one or more individual antigens is preferred.   Therefore, according to the present invention, when treating a retrovirus-related neurological disease, , An effective amount of an antigen specific for neural tissue, eg MBP (determined as described above) ) Can be administered orally or by inhalation.   The present inventors have shown that orally administered bystander antigen specifically produces TGF-β. And / or have epitopes that induce release. MBP Immunodominant epitopes such as have been previously disclosed, that is, that + An epitope that is recognized by the majority of T lymphocytes and proliferates in response to it, or It is the one recognized by the majority of patient antibodies. However, immunosuppressive epitopes, That is, what causes the production and / or release of TGF-β is the same as that of the present inventors. They have been identified only by wish and they are identified as bystander antigens for the present invention. It is preferably used. For human MBP, immunosuppressive epitopes are Includes peptide 84 = 99. Therefore, oral administration of peptides containing these epitopes Or administration by inhalation is more than administration of whole antigen in the induction of bystander suppression. Expected to be more specific. Such immunosuppressive epitopes are present in the present invention. Can be identified among other antigens used, eg tax or g Among HTLV-I or HIV derived proteins such as ag. However The specificity conferred by the use of immunosuppressive epitopes is too specific for a particular disease. Can cause reactions that are harmful to humans. Therefore, a specific antigen If the patient's susceptibility to is unknown, the whole antigen should be used first. If desired, subsequent immunosuppressive epitope therapy can be performed.   Bystander antigens, along with synergists that can increase the efficacy of treatment Can be administered. Non-limiting examples of synergists for use in the present invention include E. coli and From many of the Gram-negative bacteria, such as various subtypes of Salmonella and Salmonella. Bacterial lipopolysaccharide (LPSN Sigma Chemical, St. Louis, MO; Difco (DIfco), Detroit, MI; BIOMOL Res. Labs., Plymouth, PA), Lipid A (Sigma Chemical, St. Louis, MO; Eye ICN Biochemicals, Cleveland, OH; Poly Science, Inc. (Polyscience Inc., Wellington, PA), and Deres ・ Deres, K. et al.Nature,342: 561-564, 1689). Tripalmitoyl-S-glycalyl cysteinyl-seryl-serine (P3C55 ) Or a peptide covalently bound to Braun, V. et al.Biochem.Bi ophvs. Acta  435: 335-337, 1976) from E. coli obtained as disclosed in Contains immunomodulatory lipoproteins such as "Brauns" lipoproteins . LPS is preferred and lipid A is particularly preferred. Libido A is better than all LPS molecules It is particularly preferred for use in the present invention because of its low toxicity. The LPS used in the present invention is It can be extracted from Gram-negative bacteria and isEur. J. Biochem. 9: 245 , 1969) and Skelly R. R. et al.Infect. Immun. twenty three: 2 87, 1979).   The route of administration of the bystander antigen of the present invention is preferably oral or enteral. Preferred Formulations of new oral or enteral agents include, for example, human bystantiator antigens of the invention Pills with one or more effective doses, with or without an effective amount of synergist Or it consists of capsules.   Generally, when administered orally or enterally, the bystander antigen is a single dose. It may be administered in a form or multiple dose forms.   An effective amount of synergist to be administered with the bystander antigen, eg LPS Or Lipid A is about 0.15 to 1 per kg body weight of the mammal per day. 5 mg, preferably 0.3 to 12 m / kg body weight of said mammal per day in a wide range of g.   In another preferred embodiment of the present invention, a pharmaceutical formulation or dosage form of the agent of the present invention The condition is preferably inhaled, preferably in mammals with a retrovirus-related neurological disease. Can be administered in aerosol form. Inhaled dosing is not by the nasal passages However, it is preferable to pass through the mucous membrane of the trachea and lungs. Filed on December 20, 1989 As disclosed in pending U.S. Patent Application No. 454,486. Treating autoimmune encephalomyelitis with myelin basic protein and adjuvant joints Retrovirus-related nerves have been shown to be effective in treating inflammation with collagen. When using aerosol administration for the treatment of disease, a bystander of the invention is used. It is expected that lower amounts of antigen will be required. Administered in aerodrug dosage form The amount of bystander antigen of the present invention is about 1 kg / kg of mammal body weight per day. 0.1 mg to about 15 mg, optionally per kg body weight of the mammal per day About 0.1 to about 15 mg of synergist in single or multiple dosage forms May be. The exact amount to be administered depends on the stage and severity of the patient's disease and the patient's meat. It will change depending on the physical condition.   The route of administration of the bystander antigen according to this other embodiment of the invention is Or inhaled form. The bystander antigens and related compounds of the invention are dried As powder particles or as a carrier gas (eg air or N 22) Suspended in It can be administered as a sprayed aqueous solution. Manufacture of preferred aerosol drugs The agent may be, for example, a live drug containing about 1 mg to about 300 mg of the bystander antigen of the present invention. It consists of a buffered sodium hydroxide solution that is physically acceptable.   The method of the present invention is described, for example, in US Pat. , 624, 251 No. 3,703,17 issued on November 21, 1972. No. 3, No. 3,561,444, issued on February 9, 1971, and 1971. As disclosed in No. 4,635,627, issued January 13, 2014 Administration of a pharmaceutical composition in the form of an aerosol spray using various atomizers be able to. Aerosol material is inhaled by the subject to be treated.   Aerosol delivery systems of the type disclosed here are Fisions Corporation (Bedford, MA) ), Schering Corp. (Kenilworth, NJ), And the American pharmoseal Co. It is available from many commercial sources, including Valencia, CA.   As will be appreciated by those in the art, administration of the bystander antigens of the invention (orally or The exact dose and frequency of the bystander antigen As well as the age, weight, physical condition, and physical condition of the subject to be treated. Depends on lack of co-administration or other treatment. Therefore, the dose used and Adjustments to the dosing regimen should be based on these factors, which should be determined experimentally. May need to be fixed. However, such decisions are not No more demanding than routine experimentation given to Idrain.Experiment   The following examples illustrate the invention without limiting the scope of the invention. However, in this example the following is explained:   Example 1 relates to the treatment of autoimmune diseases by oral administration of self-antigens. It In this series of experiments, the active form of the TGF-β1 isotype was specific to MBP. CD4+It mediates T cell suppression and is induced by feeding animals with MBP. CD8+T cells cause the release of TGF-β, and the cause of suppression is TGF-β. It indicates that there is. The same example would not be specific to the tissue or organ under attack. Antigen induces the formation of T suppressor cells that cause the release of TGF-β It also explains what you can do. This is due to oral administration of ovalbumin. Be illustrated. But the problem with opoalbumin is that this is a distressed tissue. It is not specific to, and is therefore a site where cells involved in the attack can be found. Moreover, it is not possible to target T suppressor cells. (This problem is described in Example 2. Give over. ) Example 1 shows that all orally administered antigens elicit highstander type suppression. It also illustrates that it does not (not bovine serum albumin) It Finally, Example 1 shows that the same mechanism (bystander suppression) was used for MBP oral It is effective in suppressing experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) by administration. Also explained. EAE is associated with multiple sclerosis (M) in mice and other mammals. S) is being studied as a model.   Example 2 also relates to the treatment of autoimmune diseases. This series of experiments Antibodies capable of suppressing tander cause TGF-β release upon oral administration In addition, suppressor T cells elicited by this antigen are involved in the attack. Promotes those diseases if the donating cells can be recruited to locations where they can be found The cells are shown to be suppressed. Example 2 also relates to the release of TGF-β. Prepared suppressor T cells must encounter suppressed cells in order for suppression to occur. It shows that there is no point.   Non-specific bystander antigens can be made efficient bystanders (ie , "Forced" to cause TGF-β release in the vicinity of disease-promoting cells ) The method is to inject the same antigen at substantially the same time (bystander oral administration). Within 24 hours). For example, if OVA is fed to an animal, And when these animals were immunized with MBP / CFA to induce EAE , OVA injection was found to suppress EAE. This is the animal phosphorus OVA-specific cells in the paranode (this is the suppressor that is exactly elicited by OVA. Cells that are specific to OVA, such as Sir T cells, and cells that promote EAE (to OVA) Suppressor T cells that are drawn do not recognize this) and both. Non-specific bystander antigens are those suppressor T cells that If it could be directed to a site that suppresses cells that promote This treatment has the implication that it could also be used in combating neurological disorders. The explanation above is included.   Both Examples 1 and 2 test for inhibition of EAE, an autoimmune disease model system. However, these examples show that the present invention directly includes autoimmune diseases. Nonetheless, it provides the core data of the present invention. First, these Experiments showed that bystander antigens were specific to the antigen administered and this specificity Demonstrates Inducing Suppressor T Cells That Cause Placement of Cells in the Primary . Second, T cells are specific for bystander antigens, but from these T cells Showed that TGF-β of Escherichia coli non-specifically inhibits the action of other immune cells in that region ing. Other disorders thought to be mediated by misdirected immune antigens, such as reto Allows rovirus-related neurological disorders, to be treated by use of the above methods That is an aspect of these two bystander antigens. In particular, such a ship Patients have 1) TGF-β production and 2) Factor-producing suppressor T cells. Cells that undergo cytotoxic attack by proper selection of bystander antigens Treatment by selection of bystander antigens Can be done.   Example 3 describes the production of recombinant human MBP and its purification. That Unlike the preparation of purified MBP from brain tissue, proteins are It is produced without the detection of fragments derived from the degradation of the cumula. This rMBP protein Quality (or fragment thereof) is related to retrovirus using the method of the invention. It is useful as a bystander antigen in the treatment of neurological diseases. This is TGF Induce suppressor T cells (as shown in Examples 1 and 2) to produce -β The ability of rMBP to emit and cytotoxicity of this antigen as a constituent of neural tissue. It is based on the ability to target induced T cells to tissues that are subject to harmful attack.   Example 4 is a recombinantly produced human MB as described in Example 3. P of human T cell clones previously shown to specifically react with MBPin v increase itro It indicates that breeding occurs. Is this a very specific physiological activity test? These data show that recombinant production shows the ability of MBP to act as a bystander antigen. Does not decrease and has substantially the same activity as MBP extracted and purified from brain tissue It is shown that.   Example 5 shows that infected T cellsin vitroThe ability to grow spontaneously, and Ability to induce the proliferation of non-infectious animals via direct cell contact Confirms the role of activated T cells in HAM / TSP as demonstrated by It Induction of proliferation in this non-infected T cell requires that the infected clone be formaldehyde. It also occurs when it is fixed in place or irradiated. Inflammatory reaction in the CNS It is activated T cells that are able to cross the brain-vascular barrier to initiate , Many other activated T cells are retroviral because they are not other T cells. It is thought to be important in the development of neurological disorders related to spleen. This inflammatory response is exactly Is a suppressor induced by oral administration of a bystander antigen according to the present invention. -Inhibited by T cells. Example 1: Suppressor produced by oral tolerization to myelin basic protein Sir T cells rely on antigen-specific triggering followed by TGF-β releasein vitro andAndinv ivo Suppresses both immune responses)   The following materials and methods were used in the experiments below.   animal． Harlan-Sprague female 6-8 week old Lewis rats Dolly Inc. (Harlan-Sprague Dawley Inc.) (Indianapolis, IN) Obtained from. Animals were raised on standard chow and water ad libitum.   antigen． US patent application Ser. No. 07 / 487,73 filed March 2, 1990 Dibler et al. (No. 2)Prep.Biochem. 2:13 9, 1972) Guinea pig myelin basic protein (MBP) by a modified method of Was purified from brain tissue. Protein content was determined by gel electrophoresis and amino acid analysis. The quantity and purity were confirmed.   reagent． The commercial reagents used are as follows: Monoclonal mouse anti-rabbit Anti-INF gamma neutralizing antibody (Amgen Biologicals, Sau Thousand Oaks, CA); Monoclonal hamster anti-mouse TNFα + β antibody (Genzyme, Boston, MA); polyclonal Rabbit anti-TGF-β1 + 2Neutralizing antibody (R & D Systems, Inc. (R  & D Systems, Inc.), Minneapolis, MN, and indomethacin (Sigma ma), St. Louis, MO). Special features regarding TGF-β type 1 isoform proteins A heterogeneous turkey antiserum was prepared as previously described (Daniel Poole, Dee. anielpour, D.) and others,J.Cell.Physiol.138: 79-86, 1989).   Induction of oral tolerance． 18 Cage Stainless Steel Animal Feeding Needle (Thomas Saier (Tomas Scientific, Swedesboro, NJ) By dissolving 1 mg of MBP in 1 ml of PBS by gastric intubation with Fed the rats with PBS only. The last feeding was 2 days before immunization 2-3 Of the day Animals were fed 5 times at intervals. The purpose was to induce tolerance.   In vitro suppression of proliferative response by supernatant.  Spleen cells 7-14 days after the last feeding Remove the vesicles and push the spleen through a stainless steel mesh to suspend single cells. Was prepared. 5x10 to prepare the supernatant6Splenocytes at a concentration of cells / ml With MBP (50 μg / ml) in 10 ml growth mediumin vitroI was stimulated. Proliferation Medium is 2x10FiveM 2-mercaptoethanol, 1% sodium pyruvate 1% penicillin and streptomycin, 1% glutamine, 1% hepes ( HEPES) buffer, supplemented with 1% non-essential amino acids, and 1% autologous serum Also, RPMI1640 (GIBCO, Grand Island) , NY). Collect the supernatant at 24 hours and add 100 μl as previously described. 2.5x10FourMBP-specific T cells, expanded and maintained (Ben-Nan, et al. I. (Ben-Nun, A.) and others,Eur.J.Immunol.11: 195-199, 1981), and 5 x 10 in 100 μl growth mediumFiveOf irradiated (2500 rad) thymocytes And cultured. Round bottom 96-well plate (Costar, Ken Experiments were performed three times in Ridge, MA). 6% CO wet2And 94% air atmosphere Incubate the cells for 72 hours at 37 ° C in an incubator with an atmosphere and 1 μCi for 18 hours3Pulse each well with H-thymidine (Pulsed). Fiber culture is performed using a multi-harvester. Collected on a lath filter and counted using standard liquid scintillation techniques .   The purpose of this is to establish an assay system for soluble factors produced during oral tolerization. Was that.   Purification of T cell subsets． Cruikshank (J. Immunol. 138: 3817-3823, 1987) and negative selection using magnetic beads. Reduced the lymphocyte subset. Spleen cells on ice for 30 minutes , Mouse anti-rat CD8, CD4 or B cell monoclonal antibody (mAbs) (Clone OX / 8, W3 / 25, or OX / 33, Serotech / Ba Io Products (Serotec / Bioproducts), Indianapolis, IN, more commercial Commercially available) and washed twice. Next, goat anti-mouse IgG was covalently attached, 4.5 μm (M-450 ) Prewashed magnetic particles (Dynal Inc., Fort Lee, NJ). Approximate amount of magnetic beads used It was calculated to be 10 times the number of target cells to be treated. 10 ml of this cell 0.5 ml supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) in bottom tube (Nunc) In RPMI1640, using the beads, gently shaking every 5 minutes, Incubated on ice for 30 minutes. After incubation, The cell suspension was washed with 5 ml of medium and the cell-mAb-bead complex was washed with magnetic particles. Using a concentrator (Dynal-MPC-1) for 2 minutes, Separated from unlabeled cells in a strong magnetic field. Remove the supernatant and follow this procedure Was repeated twice to obtain a non-adhered portion. This T cell and B cell depleted population Cells were> 95% CD4 by indirect flow cytometry.+CD 8-, CD4-CD8+, N or CD4+CD8+, Or CD4+CD8+OX / 33- (Decreased B cells). MBP fed or control fed Whole population of spleens from fed animals (5 x 106Cells), serum-free growth medium Cultured in 1 ml in the presence of MBP (50 μg / ml). The reduced population is 2. 5x106Cultured at a concentration of cells / ml. Supernatant was collected after 24 hours and 100 μl Were added to the responder cells as described above.   This aim was to determine which T cells were involved in bystander suppression The purpose was to isolate a specific subset of T cells.   AntiTreatment of supernatant with cytokine antibodies． MBP fed and control Spleen cells (5 x 106/ ml) of MBP (50 μg / ml) In the presence of interferon-gamma (INFγ), TGF-β, tumor necrosis factor ( 72 with a neutralizing antibody against TNF) α + β or with indomethacin Incubated for hours. The antibody is (1: 250, 1: 500, 1: 1000) Tested in a range of concentrations, indomethacin tested at a concentration of 0.5-1 μg / ml . Twenty-four hours later, the supernatant was collected for free antibody or antibody-cytokine complex. , Magnetizable polymer beads (Dynabeads, Dynal ink, flux Waters, NJ). Paired with anti-immunoglobulin antibody Beads for 30 minutes, 4x107Incubate at a concentration of beads / ml (each Of the sample), and Liabakk et al. (Scand. J. Immunol . 30 : 641, 1989) by a modified method of dyneal magnetic particle consensus. It was removed by using a Torator (Dynal, MPC-1).   The purpose of these experiments was to analyze the soluble cytokines produced during oral tolerization. Was to consider.   Measurement of TGF-β in serum-free culture supernatant． Serum-free culture supernatant , As previously noted (Kehri et al.J.Exp.Med.163: 1037-1050, 1986; Wahl and othersJ. Immunol. 145: 2514-2419, 1990) Collected. In short, the module Cultivated cells were initially cultured for 8 hours with MBP (5 cμl / ml) in growth medium . After that, the cells were washed 3 times and left in serum-free medium for the remaining time of 72 hours of culture. Resuspended in, collected and then frozen until assayed. Containing TGF-β in the supernatant Determination of abundance and isoform protein types was performed by Daniel Poole et al. (Supra). Mink lung epithelial cell line (American Type Culture Collection (Am erican Type Culture Collection), Bethesda, MD # CCL-6 4) as previously described (Daniel Poole et al.Growth factor Factors) 2 : 61-71, 1990) Sandwich immunoassay (SELI SA). By an assay that does not activate the sample in advance with acid , Percent active TGF-β was determined.   The purpose of these experiments was to depend on T cells obtained from orally tolerized animals. Was to measure and determine the TGF-β isoform protein produced.Movement Immunization of things ． To induce a substantial EAE disease state, Lewis rats were In the left food pad, 25 μg of MBP in 50 μl, 4 mg / mlMycobacterium tuberculosisAn equal volume of complete Freund's horse mackerel containing Difco Immunization was carried out with the one emulsified in Tubant.   In vivo administration of anti-TGF-β antiserum and control serum． Type 1 isoform protein Quality-specific turkey anti-TGF-β antiserumin vivoUsed for the experiment. It has been previously prepared and identified (Daniel Poole et al., 1990, supra). Statement). Serum was heat inactivated at 56 ° C for 30 minutes prior to injection. Various concentrations (maximum 12.5, 25, or 50 μl) diluted in PBS to a final volume of 100 μl) MBP / CFA immunization with anti-TGF-β antiserum or control turkey serum 5 times on day -2, 0, +2, +4, +6 for treatment, animals (5 per group) The mice were injected intraperitoneally (IP). 1 μg of antiserum is A of I-TGF-β1 The binding activity to 549 cells was blocked at 4 mg / ml (Daniel Poole et al., 199). 0, above). Orally tolerized animals and motility to develop EAE without oral tolerization For both things andin vivoI gave you a table.   These experimentsin vivoOf anti-TGF-β antiserum on oral tolerance induction in rats Was performed to determine if TGF-β activity was abolished.   Clinical evaluation．in vitro testTo examine the correlation between clinical and clinical disease. Animals were evaluated daily for signs of EAE in a blinded manner. The clinical severity of EAE was scored as follows: 0, no disease ; 1, weakness of the tail; 2, paralysis of the hind legs; 3, paraplegia of the hind legs, incontinence; 4, quadriplegia; 5 ,death. The duration of the disease depends on the onset of the disease (usually after immunization) for each animal. The total number of days from the 10th or 11th day) to complete recovery or death was counted and measured.   Delayed type hypersensitivity (DTH) test． Subcutaneously in the ear, 25 μg of MBP in PBS Was tested for DTH. Using a micrometer caliper (Mitutoyo, Japan), Before the immunity test (challenge) and at 48 o'clock by the observer who made it invisible After a short time, the thickness was measured. The change in ear thickness before and after the immunity test was measured by each movement. The results were expressed as the mean for each experimental group ± SEM. It was   The DTH response was observed. Because these are C, as EAE is It is mediated by D4 + T cells.   Statistical analysis． Using one-tailed Student's t-test Chi-square analysis (the present Those known to those having ordinary skill in the art) were used.   Orally tolerated by MBP and by MBPin vitroFrom stimulated rat Supernatants collected from splenocytes depleted in B cells or T cell subsets were Experiments were performed to determine if the P line could be suppressed. Figure As shown in 1, the decrease in proliferation of the MBP system was caused by feeding MBP and make use ofin vitroFrom B cell-deficient or CD4-deficient splenocytes from animals stimulated with It happened with the addition of the supernatant. Fed bovine serum albumin (BSA) CD8-deficient spleen cells obtained from cells of different animals or obtained from animals fed with MBP No inhibition occurred when using the supernatant from the vesicles. This means that Suggested to be specific for the fed antigen and required suppressor T cells It   Determine if known cytokines are involved in mediating suppression Neutralizing antibodies against cytokines hypothesized to have suppressor activity in order to Was added to the supernatant to eliminate suppression. As shown in FIG. 2, rabbit anti-T GF-β antibody eliminates supernatant-mediated suppression in a dose-dependent manner. Removed. About neutralizing antibody against INFγ, TNF-α + β , A prostaglandin blocker was added, no effect on inhibition was observed. I couldn't. Anti-TGF-β antibody directly binds to MBP-specific Responder T cell line No repression occurred when added (data not shown). this child Means that TGF-β is involved in the suppression observed in FIG. 1 and is due to a soluble factor. Suggests.   Fed with MBP, using MBPin vitroSpleen from animals stimulated with In the absence of serum to directly explain the presence of TGF-β in the supernatant of vesicles Supernatants were collected and assayed directly for TGF-β as described above. Shown in Figure 3 As described above, TGF-β is present in the presence of MBP, but not in the absence thereof.in vitroso Secreted by splenocytes from stimulated, MBP-fed animals. Further In addition, TGF-β was found in splenocytes from animals fed ovalbumin (OVA). , Using OVAin vitroIt was also secreted when stimulated by. TGF-β1 or T Specific SELISA assay using blocking antibodies specific for any of GF-β2 To further explain that TGF-β is an isotype of TGF-β1 Was done. Also, secreted TGF-β is active rather than a latent form. It was in the form. Fed with MBPin vitroGlue stimulated by In The amount of TGF-β was 6.8 ± 1.7 ng / ml, with 68 ± 9% in active form. I was there. In the OVA group, the amount of TGF-β was 6.1 ± 1.0 ng / ml, Had 65 ± 9% in the sexual form. MBP-fed, non-specific for T cell proliferation Spleen cells of animals stimulated with an inducer, Concanavalin A (Con-A) It was not observed in the supernatant from the cells. However, a small amount (2.1 ± 0.45n g / ml) latent TGF-β was observed.   TGF-β1 also plays a role in suppressing EAE by oral tolerance to MBP In order to determine whether to perform, the turmeric anti-TGF-β1 antiserumin vi vo Was administered. As shown in FIG. 4A, the animals were PBS or control turkeys. Where the serum was injected, on day 13, maximum disease severity between 3.2-3.5 , A paralytic EAE developed in control animals. By oral tolerization with MBP The severity of EAE in animals injected with PBS, PBS or control turkey serum was significant. Decreased (Fig. 4C). Maximum disease in animals treated 5 times with 50 μl of control serum Oral tolerization with severity of 3.2 ± 0.2 and 5 treatments with 50 μl of control serum Was 1.0 ± 0.2 (p <0.001) in the treated animals. Shown in FIG. 4D , With anti-TGF-β1 antiserumin vivoDepending on the treatment, in a dose-dependent manner The protection induced by oral administration of MBP was abolished; 50 μl of anti-TGF-β The maximum severity in orally tolerized animals treated 5 times with 1 antiserum was 1.0 3.7 ± 0.2 for ± 0.2 (p <0.001, for group C Group D). As shown in FIG. 4B, anti-oral tolerance to MBP was not observed. There was a dose-dependent increase in disease in animals treated with TGF-β1 antiserum. Will be noticed. Disease onset is earlier, recovery is delayed, and disease severity The degree was greater (4.5 ± 0.2 vs. 3.2 ± 0.2, group A vs. Group B, p <0.01).   Delayed type hypersensitivity (DTH) response correlates with the clinical course of EAE To Pin vivoUsed as a means of immunizing cells in (Brod, S.A. (Br od, S. A.) OtherAnn.Neurol. 29:615-622, 1991: Cowry, S. Jay. (Khour y, S. J.) and others,Cell.Immunol. 131:302-310, 1990). Subcutaneously in the ear, 2 in PBS Injecting 5 μg of MBP in the same group described in FIG. I examined the answer. Thickness was measured before and 48 hours after the immunity test. Immune te The change in ear thickness before and after strike was recorded for each animal and the results were recorded for each experiment. Expressed as the mean for groups ± SEM.   As shown in Figure 5 (A-D), a marked DTH response was observed in animals suffering from EAE. Developed and the DTH response was suppressed by oral administration of MBP. Suppressed DTH The response is dose-dependentin vivo antiDiscarded by TGF-β1 treatment   (2.1 ± 0.3 vs 1.4 ± 0.3: p <0.01 vs control serum (In animals injected 5 times with 50 μl of anti-TGF-β).   From the above results, it can be seen that the suppression of EAE induced by oral tolerization to MBP is suppressed. And in spontaneous recovery from EAE by endogenous TGF-β1 Evidence is given for the role of immunoregulatory played by. Characteristics of TGF-β Considering that is highly conserved in evolution, TG in experimental animals The immunosuppressive effect of F-β is expected to be similar to its effect in humans. (Example 2: Bystander suppression of antigen drive after oral administration of antigen)   The following materials and methods were used in the experiments described below.   animal． Female 6-8 week old Lewis rats were harvested with Harlan Sprague Dawley. -Ink (Indianapolis, IN). Animals are fed standard diet and The animals were reared with water and water.   antigen． A modified method of Dibler et al. (Described above) described in Example 1 above. Guinea pig MBP was purified from brain tissue by and purified by gel electrophoresis. I confirmed. Ovalbumin (OVA) and BSA were added to Sigma Chemical Company Keyhole phosphorus, purchased from (Sigma Chemical Co.) (St. Louis, MO) Hemocyanin (KLH) of pet (keyhole limpet) is added to Calbiochem Berlin. Purchased from Calbiochem Behring Corp. (La Jolla, CA) did.   Immunization of animals． To induce a substantial EAE disease state, animals were placed in the footpad. In which, 25 μg of MBP and 4 mg / mlMycobacterium tuberculosis(Difco Loves ( Difco Labs), Detroit, MI) emulsified in the same volume of CFA of Were used for immunization.in vivoMBPC for bystander suppression experiments 8 hours after the first immunization with FA, 50-300 μg of secondary antigen OVA , BSA, or KLH were injected subcutaneously in the same paw in 100 μl PBS.   Clinical evaluation． Clinical manifestations of bystander suppression, described abovein vitroTest and Daily in a blinded manner to show the correlation of Animals were evaluated. The clinical severity of EAE was scored as follows: 0 No disease; 1, weakness in the tail; 2, paralysis of the hind legs; 3, paraplegia of the hind legs, incontinence; 4, hemiplegia Paralysis; 5, death. For each experimental group (7), the average maximum Bed severity was calculated. To compare the incidence of disease between groups, Statistical analysis was performed using Student's t-test and chi-square analysis.   Induction of oral tolerance． 18 Cage Stainless Steel Animal Feeding Needle (Thomas Saier 1 ml of gastric intubation using an intelligent (Switzborough, NJ) 1 mg of MBP, OVA, BSA or KLH dissolved in PBS, or PB Animals were fed S only. Last feeding 2 days before immunization, 2-3 days interval The animals were fed 5 times (total dose 5 mg).   Delayed type hypersensitivity (DTH) test． Subcutaneously in the ear, 50 μg MBP in PBS Alternatively, OVA was injected to check for DTH. MBP was injected into the left ear and OVA The same animal was injected in the right ear. For micrometer calipers (Mitutoyo, Utsunomiya, Japan) And in a blinded manner before and 48 hours after the immunity test, 0.0 Thickness was measured in units of 1 inch. Changes in ear thickness before and after immunological testing Was recorded for each animal and the results were taken as the mean for each experimental group ± SEM Each group consisted of 5 animals.   Transwell culture． Polycarbonate with a pore size of 0.4 μm A twin-chamber transformer with 24.5 mm diameter consisting of two compartments separated by a semi-permeable membrane A well culture system (Costar, Cambridge, MA) was used. 2 rooms are 1 mm apart, and the cells are in close proximity to each other without direct contact with each other. It is supposed to be incubated. Of the growth response in transwell culturesin vitro To measure inhibition, as previously mentioned (Ben-Nan, A. et al. ,Eur. J. Immuno. 11: 195, 1981) increased and maintained 5x10FourMBP or Cells of OVA-specific lineage were added to 1 well in 600 μl growth medium in the lower well. 06Of the irradiated (2,500 rad) thymocytes were cultured. Orally tolerated Spleen cells from slaughtered rats or controls (BSA-fed) were used in the upper wells. (5x10 in 200 μI)Fivecell). Spleen 7-14 days after the last feeding Remove the cells and push the spleen through a stainless steel mesh to suspend the single cells. A suspension was prepared. MBP and OVA (50 μg / ml) were added in a volume of 20 μl . Since modulator cells are separated from responder cells by a semipermeable membrane, Irradiation is unnecessary. In some experiments, modulator cells were In the lower well with Darr cells, in this case just before being placed in culture, The modulator cells were irradiated (1,250 rad). Growth medium is 2x10FiveM's 2-mercaptoethanol, 1% sodium pyruvate, 1% penicillin Streptomycin, 1% glutamine, 1% hepes buffer, 1% non-essential RPMI 1640 (Gibco, Gras) supplemented with mino acid and 1% autologous serum. Land Island, NY). Each transwell was quadrupled. this 6% CO moistened Transwell2And in an atmosphere of 94% air for 72 hours Incubated. After 54 hours of culture, 4 μCi [[3H] Thymidine Label each bottom well for a short time and after 72 hours, use fiberglass filters. Harvested on a plate and counted for counting using standard liquid scintillation techniques. Three wells in a bottom 96-well plate (Costar) were seeded in split . Percent Suppression = 100x (1-cpm Responder cultured in Modulator -/ Responder △ cpm).   We examined the soluble factors produced during bystander suppression and suppressed this process. This transwell system was used to monitor control transfer.   Purification of T cell subsets． Follow the modified method of Klyukshank, above We then reduced T cell subsets by negatively selecting with magnetic beads. I reduced it. Spleen cells were placed on ice for 30 minutes with mouse anti-rat CD8, or CD4, mAbs (clone OX / 8 or W3 / 25, Serotech / Bioproducts) , Indianapolis, IN) with a 1: 100 dilution Washed twice, then 450 Miku with goat anti-mouse IgG covalently attached. Ron (M-450) pre-washed magnetic particles (Dynal In) Ku, Fort Lee, NJ). The amount of magnetic beads used was estimated It was calculated to be 10 times the number of target cells. This cell is a 10 ml round bottom test. Supplement 10% FCS in test tubes (Nunc, Roskilde, Denmark) In 0.5 ml RPMI 1640 using this beads gently every 5 minutes Incubate on ice for 30 minutes with shaking. After incubation, Cells / mAB-beads complex was washed with 5 ml of medium and the Using a particle concentrator (Dynal-MPC-1) for 2 minutes, a strong magnetic field Separated from unlabeled cells in. Remove the supernatant and repeat this procedure twice. It returned and the non-adhesion part was obtained. T cells in this reduced population are indirect flow cells According to the measurement method, 95% CD4+CD8-Or CD8+CD4-And It was.   Adoptive transfer of disease control． Adoptive transfer of disease control that occurs during bystander control Donor rats were dosed with 1 mg of either MBP, OVA or KLH for monitoring. Were fed 5 times every 2 days and killed 7-14 days after the last feeding. Spleen cells Harvested using the same antigen (50 μg / ml) in growth mediumin vitroFor 72 hours Incubated. Cells were injected intraperitoneally: 10 for total spleen population8cell , Or 5-6x10 for populations with reduced CD8 or CD47cell. Acceptance Body animals were irradiated (250 rad) prior to adoptive transfer and MB 6 hours after adoptive transfer. Immunize with P / CFA, and after 8 hours, conduct an immunological test with 50 μg of OVA. It was   Direct contact between cellsin vitroWhether suppression is necessary for it to occur The Transwell system (above) was used to determine This result is It is shown in Table 1 below.   Irradiated splenocytes from MBP-fed animals as shown in Table 1. There was inhibition of growth when the cells were incubated with the MBP system in the lower wells. (Line 2), while suppression was observed in splenocytes from PBS-fed animals (line 3) Not observed. Modulator cells from responder cells via a semipermeable membrane When isolated, virtually ideal suppression was observed (lines 4 and 5). this As such, inhibition is due to factors that diffuse through the transwell membrane or soluble factors. Therefore, it seems that they are mediated. Therefore, bystander suppression is EAE Appears to be effective in inducing oral tolerization in. 5x10FourMBP cells + MBP (50 μg / ml) are added to cells that give antibodies (APC ) As 106In the lower well with irradiated (2,500 rad) thymocytes I smelled it. Spleen modulator cells from animals fed with MBP or PBS (5x10Five) Was added to either the top or bottom wells. In addition to the lower well The modulator cells were irradiated (1,250 rad). No added MBP The background count of the MBP system was between 1,000 and 2,000 cpm. It was   Observed with Transwell systemin vitroSuppression but modulator and less To determine if they require similar antibody specificity with the ponder cells The OVA system was placed in the lower well. The results are shown in Table 2 below. .   Whether the animals were fed MBP placed in the upper well, as shown in Table 2. Of the modulator cells in the lower well in the presence of MBP but not in the presence of MBP. It was possible to suppress the OVA system (systems 2 and 3). Is the animal fed with PBS? MBP added to these modulators did not suppress the OVA system (system 4) . Conversely, modulator cells from OVA-fed animals in the presence of OVA Inhibition of the MBP system was observed when was used (System 7). In which well Soluble antibody added to Lancewell also diffuses across the membrane, thusin viv o It is noted that it was present in both wells as it could occur in. 5x10FourMBP or OVA cells were used as APCs for 106Of the (2 , 500 rad) in the lower well with thymocytes. MBP, OVA or PB Modulator cells (5x10 5) from S-fed animalsFive) To the upper well added. MBP and OVA-based background without added MBP or OVA Band counts were between 1,000 and 2,000 cpm.   the abovein vitroBystander suppressionin vivoTo determine the relationship with , EAE model performed a series of experiments. OVA in rats (1 mg, 10 days 5 times) and then immunized with MBP / CFA in the footpads, 8 hours later OVA was injected into the footpad. As shown in Figure 6A, exemption with MBP / CFA Injection into the footpads 8 hours after epidemic treatment affected EAE, as expected. I didn't miss it. Mean maximum clinical disease severity is related to immunized MBP / CFA 3.9 ± 0.2, and when OVA given subcutaneously was used, it was 3.8 ± 0.1. there were. However, animals fed OVA before being immunized with MBP / CFA And then, in the case where OVA was given subcutaneously in the foot pad, EAE was suppressed. Similar to MBP feeding (Fig. 6B); fed OVA, plus OVA Severity of disease given subcutaneously was 0.9 ± 0.2, and MBP was fed. In those treated with, it was 1.1 ± 0.1, and KLH was fed with OVA. In the one given below (control group) 3.9 ± 0.1 (p <0 0.001, those fed OVA and MBP relative to controls). Therefore, MBP CD4 + T cells induced by immunization with / CFA are bystander By CD8 + T cells induced by oral administration of the antigen, in this case OVA It was down regulated by released TGF-β. M OV given subcutaneously followed by KLH in addition to BP / CFA, OV No suppression of EAE was observed in animals fed A (FIG. 6C) The severity was 3.7 ± 0.1 and 3.8 ± 0.2, respectively. According to these experiments In the Transwell systemin vitroSimilar to that found inin vivo The effect of was explained. In particular, the modulation produced by oral tolerization of an antigen T cells are cells that have different antigenic specificities in the presence of tolerizing antigens. Cells can be suppressed.   in vivoTo determine whether there is a correlation in the , The DTH response to determine the degree of sensitization that occurs in connection with the bystander effect. The answer was measured. The suppressed DTH response to MBP is associated with MBP-fed animals. Food and OVA, followed by OVA in addition to MBP / CFA It was observed in both of those immunized with (Fig. 7). Others such as KLH and BSA Oral Administration of Antigens of E. coli Affects the DTH Response to MBP in These Animals I didn't. Feed OVA and then subcutaneously inject OVA with MBP / CFA By producing an immune response against OVA as measured by DTH There wasn't.   Unique to OVA is observedin vivoMay be involved in istander suppression To eliminate potency, BSA is fed after MBP / CFA immunization and then skin A similar experiment, given below, was performed. As shown in FIG. 8, MBP / CFA BS before immunization with BSA and subcutaneous administration of BSA (bystander antigen) Oral administration of A suppressed EAE, similar to that seen with OVA. It was Suppression of EAE associated with BSA is achieved by subcutaneous administration of secondary antigen at a dose of 300 μg Was observed only when given O.V. It is noted that the suppression occurred in g.   As shown in FIG. 9, splenocytes from animals fed with MBP or OVA were , Adoptively transfer protection into pristine receptors, which is immunized with MBP / CFA And received OVA subcutaneously. In addition, the adopted controls were CD4+ CD8, not cell loss+Discarded due to (suppressor T cell) depletion It was Splenocytes from KLH-fed animals were added to MBP / CFA plus OVA. No protection was observed when adoptively transferred to immunized animals. (Example 3: Expression of recombinant and purification of MBP)   Restriction of cDNA encoding human MBP (purchased from ATCC, Rockville, HD) C as a methionine-encoding ATG, used as an end-treated PCR target The DNA fragment is a prokaryotic expression vector pAED4 which is a derivative of pET-3a. (Studier et al.Methods in Enzvmology 185: 6089, 1990), pHO- MBP. Produced T7. E. FIG. coli host BL21 (DE3) pLysS ( Novagen, Madison, WI) 100 μg / ml ampicillin and 20 μg / ml chlora Transformed with muphenicol, cultured and OD.600= 0.5. culture To 1.0 mM IPTG, and add 100 μg / ml ampicillin. I got it. Incubate for an additional 3 h, cool to 4 ° C, collect, and collect on ice-cold STE (150 mM N containing aCl, 50 mM Tris-HCl, and 10 mM EDTA, pH = It was washed once with IXSTE of 7.4). Cell pellet on STE 0.4% Tr 5 ml of a solution containing iton-X100 and 0.2% sodium deoxycholate Then, a 100 ml culture was suspended. For complete lysis, cells should be incubated at -20 ° C Freeze overnight, thaw on ice, 0.2 mM PMSF, 1 μg / ml leupeptin, 2 U / Ml aprotinin and 10 mM MgCl 22So that DN Asel was added up to 40 μg / ml and RNAse up to 10 μg / ml. Add this solution It was ice-cooled for 30 minutes. The insoluble fraction was centrifuged at 20,000 xg at 4 ° C. The preparation was carried out for 30 minutes. The resulting inclusion body was treated with 0.5% Triton- Washed twice with ice-cold STE containing X100, 8M urea, 1 mM EDT A containing 1 mM DDT, 0.2 mM PMSF, pH = 8.0, 50 mM Tris -Resuspended in HCl.   In order to purify recombinant MBP, 1.0 mg equivalent of preparative Add equilibrated CM-52 cellulose (Whatmann, Hillsboro, IL) to the sample, Shake overnight at 4 ° C. As previously described for brain MBP (Deibler ,Prep. Biochem 2: 139-165, 1972), cellulose-MBP was added to 2M urea / 0. 02M sodium glycinate / 0.02M NaCl with pH = 11.0 2 Wash twice with 0 volumes, twice with 20 volumes of deionized distilled water, 5 mM Wash twice with 20 volumes of HCl and elute with 20 volumes of 100 mM HCl. I let you. Using Centriprep-10 Concentrate (Amicon, Beverly, MA) Concentrate eluate and quantify using BSA protein assay (Pierce, Rockford, IL) did. The sample was placed in 1 X Laemmli sample buffer (Laemmi,Nature 222: 680-685) Prepared and electrophoresed on 12.5% SDS-polyacrylamide gel. Two Prepared Kel was stained with Coomassie blue or transferred to nitrocellulose. (Towbin et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4350-4354, 1979), MBP For mino acid residues 130-137 (Boeringer Mannheim, Indianapolis, IN) Mouse monoclonal antibody (IgG1). alkali Donkey conjugated with phosphatase (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) One-step BCIP / NBT solution after incubation with anti-mouse IgG (Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD). I made a statue. The MBP produced recombinantly from the development is the MBP separated from the brain tissue. It was shown that there was no contamination of the proteolytic fragment present. (Example 4: Bioactivity of recombinantly produced MBP)   In order to know the biological activity, the recombinant protein of Example 3 (γ-MBP) was designated as MBP. Using a human T cell clone that has previously been shown to respond differentlyin vit ro Tested by proliferation assay. T cells (clone OB.1A12.8) in triplicate , Irradiated antigen expressing cells (APC) 96-well microtiter Rate (96-well microtiter plates) for 72 hours, last at 18:00 2uCi [3Pulsed with [H] -thymidine. Autologous peripheral Blood mononuclear cell (PBMC) or T cell line 0, 0.1, or 1.0 μM MBP peptide (amino acids 84-102), brain MBP, or γ-MB APCs were prepared by pulsing with P. If you do not use APC, Peptide, brain MBP, or γ-MBP was added to the culture at the indicated concentrations (LaSall e et al.J. Immunol. 147: 774-780, 1991). The results are shown in Table 3 below.   As shown in Table 3, T cell clone Ob. 1A12.8 is purified from the brain MPC provided by APCs in a specific and dose-dependent manner similar to MBP Reacted to BP peptide 84-102. Clones were pulsed with γMBP However, the result is that the cells are stimulated in the same way, and the cells first recognize the protein and Reacted, and then the recombinant protein was tested in a proliferation assay for at least the native protein. It proved to be as effective as quality. This result is MBP Is the primary determinant involved in T cell recognition of the Post-translational modification such as acetylation and phosphorylation ) Is not shown. Interestingly, cells were cloned without APCs. When incubated with the same concentration of antigen, the amount of MBPs used was Clear (30%) irritation was seen at higher times. (Example 5: HAM / TSP ... THTLV-I-Of activated T cells in T cell activation role) "CD4+And CD8 HTLV-I-infected T cell clones with spontaneous T cell expansion Breeding "   Two patients with HAM / TSP (patient DU, 48 clones: patient Pr, 45 A series of T-cell clones were obtained from the blood. 40 T cell clones from patient DU Seven of the clones were positive for the HTLV-I pol region by PCR. Yes, this indicates that these clones are infected with the virus . 6 clones (Du.4, Du.7, Du.20, Du.26, Du.34) , And Du. 43) Southern blot analysis of genomic DNA was performed on HTLV- It was confirmed to have I provirus and clonality. these T cell clones are clones of allogenic feeder cells As used inin vivoThis is an example of an infected T cell. 5 H TLV-I infected clone is CD4+However, one clone (Du.7) Is CD8+And both CD4 and CD8 populationsin vivo Have demonstrated that they can be infected by HTLV-I (Table 4). Subject Pr 8 of these 24 clones were HTLV-I antigen by Western blotting In the same manner as described above, the PCR method was used to detect HTLV-I tax mRNA. It was sex. Both tests test for virus infection (data not shown) ). These clones were obtained by using autologous feeder cells. From the T cell clonein vitro feelingDyeing cannot be avoided.   Control growth characteristics of infected and non-infected T cell clones. Sticky. All clones were serially cloned using mitogen and feeder cells. Were restimulated at 10-14 days intervals for proper growth. However , After the last stimulation, without mitogen and interleukin-2 (IL-2) HTLV-I-infected T cell clones that are cultivated for about 7 to 10 days and proliferate It turned out only to be a phenomenon called "spontaneous clonal expansion" (Table 4). Thus, these T cells were activated but not transformed. It showed the growth characteristics of untreated cells. It should be noted that the clone Du. 43 is P According to the CR method, it was positive for the HTLV-Ipol region, but spontaneously It did not grow (Table 4). By Southern blot analysis of Kenom DNA Therefore, the existence of the HTLV-I provirus chenom was confirmed. However, No viral mRNA was detected in this clone by Northern blotting. I couldn't. "Proliferation of resting T cells induced by HTLV-I infected T cells"   Large numbers of activated T cells found in blood of patients with HAM / TSP (Itoyama et al.Neurology 38: 1302, 1988; Jacobson et al.,Ann. Neurol. twenty three(supp.) : S196, 1988), HTLV-I-infected T cells attract autologous T cells. A test was conducted to determine whether or not to induce and proliferate. Irradiated or fixed In addition, HTLV-I-infected T cell clones differ from uninfected clones , Proliferation of autologous blood T cells or blood T cells from healthy allogeneic subjects Was found to induce (Tables 5 and 6). HTLV-I infected, but only C9, a control T cell clone not isolated from a HAM / TSP patient 1 / PL and HUT-102 each have a mild inducing ability, and Is not seen at all (Table 5). Resting of fixed HTLV-I infected T cell clones Due to its ability to induce blood T cell proliferation, cell surface structures rather than lytic factors Has been shown to be important as a trigger for the initiation of proliferation. Furthermore, for cells, blood As shown by the need for T cell activation to cross the liquid-brain barrier, H Of T cells in the inflammatory response seen in the CNS of patients suffering from AM / TSP In the analysis of function, this activation is significant.   T cell clones from HAM / TSP patient Du were treated with phytohemagglutinin ( Established by single cell cloning with PHA) and IL-2. Taro Amplification of the pol region by PCR and Southern blotting The presence of the HTLV-I provirus chenom was investigated. [3H] Thymidine incorporation Spontaneous growth was quantified by means of a microscope.* T cell clone Du. 43, no spontaneous growth is seen, but HTLV- It was revealed that the I provirus genome was integrated ( According to). However, it was found that there was no viral RNA (by Northern blot ). ND is not quantified.   Human (Hum), Bovine (Bov), Rabbit (Rab), Guinea pig (GPi) g), rat (RatS), and chicken (Chic) central nervous system tissues. Amino acid sequence of Erin basic protein. The speed BP used is 14 kDaBP (Rat small, or RatS), which is the sixth exon of the BP gene. It has a deletion of residues 118-159 encoded by Son. Human 18 ． Both the 5 and 17.2 kDa BP gene forms were used. The latter is the BP remains Deletion of residues 107-117 (underlined) encoded by the fifth exon of the gene Have a loss. The sequences are vertically aligned with homologous residues from various species, allowing easy comparison with each other. It arranged like this. This system regulates defects and additions found between species and Allowing a total of 177 potential sites between each molecule. The residue sequence in parentheses is I haven't decided.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 14/435 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ， ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI C07K 14/435 (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR , IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CZ, DE, DK, ES, FI, GB, HU, JP, KP, KR, KZ, LK, LU, MG, MN, MW, NL, NO , NZ, PL, RO, RU, SD, SE, SK, UA, VN

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．哺乳類におけるレトロウィルス関連神経疾患の治療方法であって、該疾患の 治療のために有効な量のバイスタンダー抗原を上記哺乳類に投与することを備え 、上記抗原はサプレッサーＴ細胞からのトランスフォーミング成長因子β（ＴＧ Ｆ−β）の放出を誘発し、上記ＴＧＦ−βは上記疾患に特徴的な組織損傷に関与 するＴ細胞を抑制することを特徴とする上記方法。 ２。上記バイスタンダー抗原が、上記疾患の間に損傷を受ける神経組織に特異的 なものであることを特徴とする請求の範囲第１項の方法。 ３．上記バイスタンダーが上記哺乳類に経口で投与されることを特徴とする請求 の範囲第１項の方法。 ４．上記バイスタンダーが上記晴乳類に吸入で投与されることを特徴とする請求 の範囲第１項の方法。 ５．上記バイスタンダー抗原が経口または吸入で投与され； 上記経口または吸入で投与されるバイスタンダー抗原が、ＴＧＦ−βを放出さ せるサプレッサーＴ細胞を誘発し； 上記方法はまた、さらに上記哺乳類に同じバイスタンダー抗原を非経口で投与 することを備え、これにより上記サプレッサーＴ細胞が、上記哺乳類の体内にお いて組織損傷に関与するＴ細胞が見いだされる部位と同じ部位を、標的とするこ とを特徴とする請求の範囲第１項の方法。 ６．上記疾患は、ＨＡＭ、ＴＳＰ、およびＨＩＶ関連神経疾患よりなる群から選 択され、 上記バイスタンダー抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、抗原、その断片、お よびこれらのうちの任意の２つの組み合わせよりなる群から選択されることを特 徴とする請求の範囲第１項の方法。 ７．上記バイスタンダー抗原と組み合わせて、上記疾患を治療するために有効な 量の共力薬を、上記哺乳類に投与することをさらに備えたことを特徴とする請求 の範囲第１項の方法。 ８．上記バイスタンダー抗原が薬剤の経口投薬形態で投与され、 該形態は、上記疾患を治療するために有効な量のバイスタンダー抗原と、薬学 的に許容される担体または希釈剤を含み、 上記抗原はサプレッサーＴ細胞からのトランスフォーミング成長因子β（ＴＧ Ｆ−β）の放出を誘発し、上記ＴＧＦ−βは上記疾患に特徴的な組織損傷に関与 するＴ細胞を抑制することを特徴とする請求の範囲第１項の方法。 ９．上記バイスタンダー抗原が、上記疾患の間に損傷を受ける神経組織に特異的 なものであることを特徴とする請求の範囲第８項の方法。 １０．上記疾患は、ＨＡＭ、ＴＳＰ、およびＨＩＶ関連神経疾患よりなる群から 選択され、 上記バイスタンダー抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、プロテオリビドタン パク質、ＨＴＬＶ−Ｉ抗原、ＨＩＶ抗原、その断片、およびこれらのうちの任意 の２つの組み合わせよりなる群から選択されることを特徴とする請求の範囲第８ 項の方法。 １１．上記バイスタンダー抗原と組み合わせて、上記疾患を治療するために有効 な量の共力薬を、上記哺乳類に投与することをさらに備えたことを特徴とする請 求の範囲第８項の方法。 １２．上記バイスタンダー抗原が薬剤の吸入投薬形態で投与され、 該形態は、上記疾患を治療するために有効な量のバイスタンダー抗原と、薬学 的に許容される担体または希釈剤を含み、 上記抗原はサプレッサーＴ細胞からのトランスフォーミング成長因子β（ＴＧ Ｆ−β）の放出を誘発し、上記ＴＧＦ−βは上記疾患に特徴的な組織損傷に関与 するＴ細胞を抑制することを特徴とする請求の範囲第１項の方法。 １３．上記バイスタンダー抗原が、上記疾患の間に損傷を受ける神経組織に特異 的なものであることを特徴とする請求の範囲第１２項の方法。 １４．上記疾患は、ＨＡＭ、ＴＳＰ、およびＨＩＶ関連神経疾患よりなる群から 選択され、 上記バイスタンダー抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、プロテオリピドタン パク質、その断片、およびこれらのうちの任意の２つの組み合わせよりなる群か ら選択されることを特徴とする請求の範囲第１２項の方法。 １５．上記バイスタンダー抗原と組み合わせて、上記疾患を治療するために有効 な量の共力薬を、上記哺乳類に投与することをさらに備えたことを特徴とする請 求の範囲第１２項の方法。[Claims] 1. A method of treating a retrovirus-related neurological disease in a mammal, the method comprising: Comprising administering to said mammal a therapeutically effective amount of a bystander antigen , The above-mentioned antigen is a transforming growth factor β (TG F-β) is induced and the TGF-β is involved in the tissue damage characteristic of the disease. The method as described above, which comprises suppressing T cells that 2. The bystander antigen is specific to nerve tissue damaged during the disease The method according to claim 1, characterized in that 3. The bystander is orally administered to the mammal. The method of paragraph 1 of the. 4. The bystander is administered to the fine mammal by inhalation. The method of paragraph 1 of the. 5. The bystander antigen is administered orally or by inhalation;   The bystander antigen administered orally or by inhalation releases TGF-β. Induce suppressor T cells to be induced;   The method also includes administering the same bystander antigen parenterally to the mammal. The suppressor T cell is contained in the body of the mammal. Targeting the same site where the T cells involved in tissue damage are found. The method of claim 1, wherein: 6. The disease is selected from the group consisting of HAM, TSP, and HIV-related neurological disease. Selected,   The bystander antigens are myelin basic protein, antigens, fragments thereof, and And selected from the group consisting of a combination of any two of these. The method of claim 1 as a claim. 7. Effective in combination with the bystander antigen to treat the above diseases The method further comprising administering an amount of synergist to the mammal. The method of paragraph 1 of the. 8. The bystander antigen is administered in an oral dosage form of the drug,   The form comprises a bystander antigen in an amount effective to treat the above diseases, Pharmaceutically acceptable carrier or diluent,   The above-mentioned antigen is a transforming growth factor β (TG F-β) is induced and the TGF-β is involved in the tissue damage characteristic of the disease. 2. The method according to claim 1, which comprises suppressing T cells that act. 9. The bystander antigen is specific to nerve tissue damaged during the disease 9. The method of claim 8 wherein the method is 10. The disease is from the group consisting of HAM, TSP, and HIV-related neurological disease. Selected,   The bystander antigens are myelin basic protein, proteolividan Protein, HTLV-I antigen, HIV antigen, fragments thereof, and any of these 9. The invention as claimed in claim 8, characterized in that it is selected from the group consisting of two combinations of Method of terms. 11. Effective for treating the above diseases in combination with the above bystander antigens A dose of synergist to the mammal. Scope of the method of claim 8 12. The bystander antigen is administered in a drug inhalation dosage form,   The form comprises a bystander antigen in an amount effective to treat the above diseases, Pharmaceutically acceptable carrier or diluent,   The above-mentioned antigen is a transforming growth factor β (TG F-β) is induced and the TGF-β is involved in the tissue damage characteristic of the disease. 2. The method according to claim 1, which comprises suppressing T cells that act. 13. The bystander antigen is specific to nerve tissue damaged during the disease 13. A method according to claim 12, characterized in that the method is general. 14. The disease is from the group consisting of HAM, TSP, and HIV-related neurological disease. Selected,   The bystander antigens are myelin basic protein, proteolipid tan Is it a group consisting of protein, its fragments, and a combination of any two of these? 13. The method of claim 12 selected from the group consisting of: 15. Effective for treating the above diseases in combination with the above bystander antigens A dose of synergist to the mammal. The method of claim 12 of the claim.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001507360A (en) * 1997-01-02 2001-06-05 トマス・ジエフアーソン・ユニバーシテイ Methods of modulating the immune response in infected mammals by transmucosal administration of modulators

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2189990A1 (en) * 1994-05-10 1995-11-16 Di-Hwei Hsu Compositions and treatment for multiple sclerosis
HUT77047A (en) * 1994-10-25 1998-03-02 Immulogic Pharmaceutical Corporation Compositions and treatment for multiple sclerosis
EP1837017A3 (en) * 1997-01-22 2009-12-23 Eisai Inc. Microparticles for delivery of nucleic acid
PT1286686E (en) 2000-05-24 2007-11-07 Us Health E-selectin for treating or preventing stroke

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5190750A (en) * 1990-03-09 1993-03-02 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Methods for the treatment of demyelinating disease, uveitis, or graft-versus-host disease using tnf

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001507360A (en) * 1997-01-02 2001-06-05 トマス・ジエフアーソン・ユニバーシテイ Methods of modulating the immune response in infected mammals by transmucosal administration of modulators

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