JPH08283157A - アミロイドβ蛋白産生・分泌阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規アミロイドβ蛋白産生・分泌阻害剤の提
供。 【解決手段】 式（Ｉ）： 【化１】 [式中、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
はＯＲ¹、 【化２】 またはＳＲ¹（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は、同一または
異なって、それぞれ、水素原子および置換されていても
よい炭化水素基から選ばれるか、またはＲ²およびＲ
³は、隣接する窒素原子と一緒になって、置換されてい
てもよい含窒素複素環を形成している。）を、Ｙは置換
されていてもよいアルキル基を示す。]で表される化合
物またはその薬理学的に許容しうる塩、および、所望に
より、薬理学的に許容しうる賦形剤、担体または希釈剤
を含有するアミロイドβ蛋白産生・分泌阻害剤、特に、
アルツハイマー病の予防・治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬、特に老年性
痴呆、アルツハイマー病、ダウン症等における神経退行
性疾患、アミロイドアンジオパシー、脳血管障害時のア
ミロイドβ蛋白による神経細胞障害などの治療に有効な
アミロイド蛋白産生・分泌阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】アルツハイマー病は、神経細胞変性・脱
落と共に、老人斑の形成および神経原線維変化を特徴と
する神経変性疾患である。最も特徴的な老人斑は、βア
ミロイド前駆蛋白質（β amyloid precursor protein、
以下、βＡＰＰと略すこともある）に由来するアミロイ
ドβ蛋白（以下、Ａβと略すこともある）を主成分とし
て（Biochem. Biophys. Res. Commum.，１２２, １１３
１（１９８４））、アポリポタンパクＥ（Brain Res.，
５４１，１６３（１９９１））やヘパラン硫酸プロテオ
グリカン（Am. J. Pathol.，１３３, ４５６（１９８
８））などの生体成分が沈着したものである。

【０００３】アミノ酸４０あるいは４２個からなるＡβ
は、神経細胞に対して毒性を示すこと（Science，２５
０, ２７９（１９９０））、神経原線維変化を惹起する
こと（Proc. Natl. Acad. Sci.，９０, ７７８９（１９
９３））、また、家族性アルツハイマー病患者において
はβＡＰＰ遺伝子に変異が認められ（Lancet，３３７,
９７８（１９９１）; Nature，３４９, ７０４（１９９
１）; Science，２５４, ９７（１９９１）; Nature，
３５３, ８４４（１９９１））、それらの変異遺伝子を
導入した細胞ではＡβの産生・分泌量の増加が指摘され
ている（Nature，３６０, ６７２（１９９２）; Scienc
e，２５９，５１４（１９９３）; Science，２６４, １
３３６（１９９４））。

【０００４】さらに、脳病理学的にアルツハイマー病と
同様な変化の認められるダウン症患者（Proc. Natl. Ac
ad. Sci.，８２, ４２４５（１９８５））においては、
βＡＰＰ遺伝子の存在する染色体２１番が３個存在する
トリソミー（trisomy）であり、脳内でのβＡＰＰ遺伝
子およびβＡＰＰ蛋白の発現増加が報告されている（Sc
ience，２３５, ８８０（１９８７）; N. Engl. J. Me
d.，３２０, １４４６（１９８９））。これらの知見か
ら、アルツハイマー病発症へのＡβ産生・分泌異常の関
与が極めて重要視されている。

【０００５】βＡＰＰはα−およびβ−セクレターゼ
（secretase）と名付けられた蛋白分解酵素によって二
経路に代謝されると考えられている（Science，２４８,
４９２（１９９０）；Science，２４８, １１２２（１
９９０）；Science，２５５,７２６（１９９２）; Scie
nce，２５５, ７２８（１９９２）; Nature，３５７,５
００（１９９２））。α−セクレターゼによって代謝さ
れた場合にはＡβの１６番目で切断され、Ａβは生成さ
れず、βＡＰＰのＮ端側が分泌型βＡＰＰとして細胞外
へ遊離し、神経栄養因子として働く（Neuron，１０, ２
４３−２５４（１９９３））。一方、β−セクレターゼ
で切断された場合には、Ａβを含むβＡＰＰのＣ端部分
が生成される。しかし、このＣ端部分あるいはＡβが細
胞内のどの部位で生成されるのか、また、どのようにＡ
βが細胞外へ分泌されるのか、不明な点が多い。さら
に、α−およびβ−セクレターゼにしても、それらの候
補酵素は報告されているが（J. Biol. Chem.，２６８,
１６６９９（１９９３）; Biochemistry，３３, １９２
（１９９４））、まだ、決定されていない。

【０００６】そこで、各種細胞を用いて、分泌型βＡＰ
Ｐを増加させ、Ａβ産生・分泌を抑制する方策が試み始
められている。例えば、ホルボールエステル（Proc. Na
tl.Acad. Sci.，８９, ３０５５（１９９２））やＭ１
ムスカリニックリセプターアゴニスト、カルバコールに
よる分泌型βＡＰＰへの誘導が報告されている（Scienc
e，２５８, ３０２（１９９２））。しかし、これらの
化合物は作用強度や安全性などの点から、まだ満足すべ
きものではない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、このよ
うな観点から、Ａβ産生・分泌阻害剤を発掘すべく、鋭
意研究を行い、ビンポセチン（vinpocetine, Calan^TM）
およびその誘導体がＡβ産生・分泌阻害作用を有するこ
とを見出した。ビンポセチンおよびその誘導体は、特公
昭５１−３２６４０号および特公平２−２７３５２号に
開示される公知化合物であるが、脳血管拡張作用、全身
血管拡張作用および血圧低下作用を有する化合物として
開示されており、Ａβ産生・分泌阻害作用については開
示も、示唆もない。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、式（Ｉ）：

【化５】 [式中、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
はＯＲ¹、

【化６】 またはＳＲ¹（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は、同一または
異なって、それぞれ、水素原子および置換されていても
よい炭化水素基から選ばれるか、またはＲ²およびＲ
³は、隣接する窒素原子と一緒になって、置換されてい
てもよい含窒素複素環を形成している。）を、Ｙは置換
されていてもよいアルキル基を示す。]で表される化合
物またはその薬理学的に許容しうる塩、および、所望に
より、薬理学的に許容しうる賦形剤、担体または希釈剤
を含有するアミロイドβ蛋白産生・分泌阻害剤、特に、
アルツハイマー病の予防・治療剤を提供するものであ
る。

【０００９】

【発明の実施の形態】上記式中、Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で
示される「置換されていてもよい炭化水素基」の「炭化
水素基」としては、例えば、それぞれ炭素数１ないし１
６の脂肪族炭化水素基、単環性飽和炭化水素基、芳香族
炭化水素基などが挙げられる。このうち、好ましくは、
アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアル
キル基、アリール基などが、より好ましくは、アルキル
基またはシクロアルキル基が挙げられる。該アルキル基
としては、好ましくは、低級アルキル基、例えばメチ
ル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブ
チル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシ
ルなどのＣ_1-6アルキル基が挙げられる。このうち、メ
チル、エチル、プロピルまたはイソプロピル、特にメチ
ルまたはエチルが好ましい。該アルケニル基としては、
好ましくは、低級アルケニル基、例えばビニル、１−プ
ロペニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、イソブ
テニルなどのＣ_2-6アルケニル基が挙げられる。このう
ち、ビニルが好ましい。該アルキニル基としては、好ま
しくは、低級アルキニル基、例えばエチニル、１−プロ
ピニルなどのＣ_2-6アルキニル基が挙げられる。このう
ち、エチニルが好ましい。該シクロアルキル基として
は、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ_3-6シクロアルキ
ル基が挙げられる。このうち、シクロプロピルが好まし
い。該アリール基としては、好ましくは、フェニル、キ
シリル、１−ナフチル、２−ナフチル、ビフェニリル、
２−インデニル、２−アントリルなどのＣ_6-14アリール
基が挙げられる。このうち、フェニルが好ましい。

【００１０】上記Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示される「置換
されていてもよい炭化水素基」の「炭化水素基」が有し
ていてもよい置換基としては、例えば、ハロゲン原子
（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、ニトロ基、シア
ノ基、水酸基、ハロゲン化されていてもよいＣ_1-6アル
キル基（例、メチル、クロロメチル、ジフルオロメチ
ル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、エチル、
２−ブロモエチル、２,２,２−トリフルオロエチル、ペ
ンタフルオロエチル、プロピル、３,３,３−トリフルオ
ロプロピル、イソプロピル、ブチル、４,４,４−トリフ
ルオロブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert−ブチ
ル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、５,５,５
-トリフルオリペンチル、ヘキシル、６,６,６−トリフ
ルオロヘキシル）、低級アルコキシ基（例、メトキシ、
エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イ
ソブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシなどのＣ
_1-6アルコキシ基）、アミノ基、モノ低級アルキルアミ
ノ基（例、メチルアミノ、エチルアミノなどのモノＣ
_1-6アルキルアミノ基）、ジ低級アルキルアミノ基
（例、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどのジＣ_1-6
アルキルアミノ基）、カルボキシル基、低級アルキルカ
ルボニル基（例、アセチル、プロピオニルなどのＣ_1-6
アルキル−カルボニル基）、低級アルコキシカルボニル
基（例、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プ
ロポキシカルボニル、ブトキシカルボニルなどのＣ_1-6
アルコキシ−カルボニル基）、カルバモイル基、モノ−
低級アルキル−カルバモイル基（例、メチルカルバモイ
ル、エチルカルバモイルなどのモノ−Ｃ_1-6アルキルカ
ルバモイル基）、ジ−低級アルキルカルバモイル基
（例、ジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイルな
どのジ−Ｃ_1-6アルキルカルバモイル基）、アリールカ
ルバモイル基（例、フェニルカルバモイル、ナフチルカ
ルバモイルなどのＣ_6-10アリールカルバモイル基）、ア
リール基（例、フェニル、ナフチルなどのＣ_6-10アリー
ル基）、アリールオキシ基（例、フェニルオキシ、ナフ
チルオキシなどのＣ_6-10アリールオキシ基）、ハロゲン
化されていてもよい低級アルキルカルボニルアミノ基
（例、アセチルアミノ、トリフルオロアセチルアミノな
どのハロゲン化されていてもよいＣ_1-6アルキル−カル
ボニルアミノ基）などが挙げられる。このうち、ハロゲ
ン原子（例、フッ素）が好ましい。該「置換されていて
もよい炭化水素基」の「炭化水素基」は、１〜５個、好
ましくは１〜３個のこれらの置換基を有していてもよ
い。置換基が２個以上の場合、それらは同一であっても
異なっていてもよい。

【００１１】Ｒ²およびＲ³が隣接する窒素原子と一緒に
なって形成する「含窒素複素環」としては、例えば、最
低１個の窒素原子を持ち、さらに炭素原子以外に酸素原
子、硫黄原子などを１ないし３個（好ましくは１ないし
２個）環構成原子として含有していてもよい４ないし８
員環あるいはそのベンツ縮合基が挙げられる。例えば、
１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−インドリル、１
−ピラゾリル、２−イソインドリル、１−インダゾリル
などの芳香族複素環基；モルホリノ、ピペリジノ、４位
窒素原子上に置換基を有していてもよい１−ピペラジニ
ル、１−ピロリジニル、１−ピラゾリジニル、１−アゼ
ピニルなどの環状アミノ基あるいはそのベンゾ縮合基
（例えば１−インドリニル、２−イソインドリニル、
１,２,３,４−テトラヒドロキノリン−１−イル、１,
２,３,４−テトラハイドロイソキノリン−２−イル、３
−ベンズアゼピン−３−イル）、フタルイミド、スクシ
ンイミド、２−ピロリドン−１−イル、２−ピリドン−
１−イル、２−キノロン−１−イルなどのラクタムある
いはイミド基などが挙げられる。

【００１２】Ｒ²およびＲ³が隣接する窒素原子と一緒に
なって形成する「含窒素複素環」は、上記炭化水素基が
有していてもよい置換基と同様の置換基を有していても
よく、また、ベンゾ縮合基の場合にはそのベンゼン環上
の任意の位置にハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、
臭素、ヨウ素など）、低級アルキレンジオキシ基（例え
ば、メチレンジオキシ、エチレンジオキシなどのＣ_1-3
アルキレンジオキシ基）、ニトロ基、シアノ基、ハロゲ
ン化されていてもよい低級アルキル基（例、クロロメチ
ル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、トリフルオ
ロメチル、エチル、２−ブロモエチル、２,２,２−トリ
フルオロエチル、ペンタフルオロエチル、プロピル、
３,３,３−トリフルオロプロピル、イソプロピル、ブチ
ル、４,４,４−トリフルオロブチル、イソブチル、sec-
ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオ
ペンチル、５,５,５-トリフルオリペンチル、ヘキシ
ル、６,６,６−トリフルオロヘキシルなどのハロゲン化
されていてもよいＣ_1-6アルキル基）、ハロゲン化され
ていてもよい低級アルコキシ基（例、クロロメトキシ、
ジフルオロメトキシ、トリクロロメトキシ、トリフルオ
ロメトキシ、エトキシ、２−ブロモエトキシ、２,２,２
−トリフルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ、プ
ロポキシ、３,３,３−トリフルオロプロポキシ、イソプ
ロポキシ、ブトキシ、４,４,４−トリフルオロブトキ
シ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert−ブトキシ、ペ
ンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキ
シ、５,５,５-トリフルオリペンチルオキシ、ヘキシル
オキシ、６,６,６−トリフルオロヘキシルオキシなどの
ハロゲン化されていてもよいＣ_1-6アルコキシ基）、ハ
ロゲン化されていてもよい低級アルキルチオ基（例、ク
ロロメチルチオ、ジフルオロメチルチオ、トリクロロメ
チルチオ、トリフルオロメチルチオ、エチルチオ、２−
ブロモエチルチオ、２,２,２−トリフルオロエチルチ
オ、ペンタフルオロエチルチオ、プロピルチオ、３,３,
３−トリフルオロプロピルチオ、イソプロピルチオ、ブ
チルチオ、４,４,４−トリフルオロブチルチオ、イソブ
チルチオ、sec-ブチルチオ、tert−ブチルチオ、ペンチ
ルチオ、イソペンチルチオ、ネオペンチルチオ、５,５,
５-トリフルオリペンチルチオ、ヘキシルチオ、６,６,
６−トリフルオロヘキシルチオなどのハロゲン化されて
いてもよいＣ_1-6アルキルチオ基）、ヒドロキシル基、
アミノ基、モノ−低級アルキルアミノ基（例えば、メチ
ルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピ
ルアミノ、ブチルアミノなどのモノ−Ｃ_1-6アルキルア
ミノ基）、ジ−低級アルキルアミノ基（例えば、ジメチ
ルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチ
ルアミノなどのジＣ_1-6アルキルアミノ基）、カルボキ
シル基、低級アルコキシカルボニル基（例えば、メトキ
シカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボ
ニル、ブトキシカルボニルなどのＣ_1-6アルコキシカル
ボニル基）、カルバモイル基から選ばれた１ないし複数
個の置換基を有していてもよい。

【００１３】Ｙで示される「置換されていてもよいアル
キル基」の「アルキル基」としては、例えば、メチル、
エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチ
ル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペン
チル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、
ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、
テトラデシル、ペンタデシルなどのＣ_1-15アルキル基な
どが挙げられる。このうち好ましい具体例としては、メ
チル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソ
ブチル、sec−ブチル、tert−ブチルなどの低級
（Ｃ_1-6）アルキル基が挙げられる。該アルキル基は、
例えば上記「炭化水素基」が有していてもよい１ないし
３個の置換基を有していてもよい。

【００１４】環Ａで示される「置換されていてもよいベ
ンゼン環」は、置換可能な位置に１ないし３個の置換基
を有していてもよいベンゼン環を意味する。該置換基
は、例えば、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、
ヨウ素）、置換されていてもよい炭化水素基、置換され
ていてもよい水酸基（好ましくは、メトキシ、エトキシ
プロポキシ、イソプロポキシなどの置換されていてもよ
い低級（Ｃ_1-6）アルコキシ基）、置換されていてもよ
いアミノ基、アミド基（例、アセトアミドなどのＣ_1-6
アシルアミノ基）、低級アルキレンジオキシ基（例、メ
チレンジオキシ、エチレンジオキシなどのＣ_1-6アルキ
レンジオキシ基）などから選ばれる。

【００１５】環Ａで示されるベンゼン環の置換基として
の置換されていてもよい炭化水素基としては、上記
Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示される「置換されていてもよい
炭化水素基」と同様のものが挙げられる。置換基の数が
２個以上の場合、それらは同一または異なっていてもよ
い。環Ａで示されるベンゼン環の置換基としての置換さ
れていてもよい水酸基は、水酸基の水素原子が上記
Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示される「置換されていてもよい
炭化水素基」で置換されていてもよい水酸基を意味す
る。置換されている水酸基の好ましい具体例としては、
低級アルキル基で置換されている水酸基が挙げられる。
該低級アルキル基としては、例えば、メチル、エチル、
プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−
ブチル、tert−ブチルなどのＣ_1-6アルキル基が挙げら
れる。該低級アルキル基が有していてもよい置換基とし
ては、例えば、上記Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示される「炭
化水素基」が有していてもよい置換基と同様のものが同
様の個数挙げられる。環Ａで示されるベンゼン環の置換
基としての置換されていてもよいアミノ基は、置換基と
して例えば１ないし２個の上記Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示
される「置換されていてもよい炭化水素基」を有してい
てもよいアミノ基を意味する。該アミノ基が有していて
もよい置換基の好ましい具体例としては、置換されてい
てもよいＣ_1-6アルキル基、置換されていてもよいＣ
_6-10アリール基などが挙げられる。該Ｃ_1-6アルキルま
たはＣ_6-10アリール基の置換基としては、例えば、上記
Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³で示される「炭化水素基」が有して
いてもよい置換基と同様のものが同様の個数が挙げられ
る。

【００１６】環Ａの好ましい具体例としては、非置換の
ベンゼン環のほか、置換基として、ハロゲン原子（例、
フッ素、塩素）、Ｃ_1-6アルキル基（例、メチル、エチ
ル）、Ｃ_6-10アリール基を有するＣ_1-6アルコキシ基
（例、メトキシ、エトキシ）、水酸基およびモノ−Ｃ
_1-6アルキルアミノ基から選ばれる１ないし３個の置換
基を有するベンゼン環、特に、例えば１個のＣ_1-6アル
コキシ基（例、メトキシ）で置換されているベンゼン環
が挙げられる。なかでも、環Ａとしては、非置換のベン
ゼン環、または１ないし３個のハロゲン原子（例、フッ
素、塩素）で置換されているベンゼン環が好ましく、ベ
ンゼン環が特に好ましい。

【００１７】Ｒは、好ましくは、ＯＲ¹（ここでＲ¹はア
ルキル基、好ましくはエチル）である。

【００１８】Ｙは、好ましくは、低級（Ｃ_1-6）アルキ
ル基（例、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、
ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル）、
より好ましくはエチルである。

【００１９】式（Ｉ）で表される化合物の好ましい具体
例としては、式（ＩＩ）：

【００２０】

【化７】

【００２１】[式中、Ｘは水素原子またはハロゲン原子
を、Ｒ⁴はアルキル基を示す。]で表される化合物が挙げ
られる。式（ＩＩ）におけるＸで示されるハロゲンとし
ては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などが挙げられる。
Ｒ⁴で示されるアルキルとしては、例えばメチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、t
−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどの炭素数１〜６のも
のが挙げられるが、メチル、エチルが好ましい。特に、
Ｘが水素、Ｒ⁴がエチルであるビンポセチンが好まし
い。

【００２２】式（Ｉ）の化合物の薬理学的に許容しうる
塩としては、例えば塩酸，臭化水素酸，硝酸，硫酸，リ
ン酸などの無機酸との塩、例えばギ酸，酢酸，トリフル
オロ酢酸，フマール酸，シュウ酸，酒石酸，マレイン
酸，クエン酸，コハク酸，リンゴ酸，メタンスルホン
酸，ベンゼンスルホン酸，p−トルエンスルホン酸など
の有機酸との塩が挙げられる。式（Ｉ）の化合物および
その薬理学的に許容しうる塩は、例えば、上記の特公昭
５１−３２６４０号[対応ドイツ特許２,２５３,７５０
号、アメリカ合衆国特許４,０３５,３７０号]または上
記の特公平２−２７３５２号[対応アメリカ合衆国特許
４,４００,５１４号]に記載の方法など公知方法により
製造することができる。

【００２３】かくして、本発明により、式（Ｉ）の化合
物またはその薬理学的に許容しうる塩を上記したような
Ａβ産生・分泌阻害剤、特に、アルツハイマー病予防・
治療剤として用いるにあたっては、自体公知の方法に従
って、例えば、錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、注
射剤、坐剤など、種々の剤型で、哺乳動物（例、マウ
ス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、
ヒツジ、サル、ヒト）に経口的もしくは非経口的に投与
しうる。具体的には、錠剤の製造法は、医薬品をそのま
ま、賦形剤、結合剤、崩壊剤もしくはそのほかの適当な
添加剤を加えて均等に混和したものを、適当な方法で顆
粒とした後、滑沢剤などを加え、圧縮成型するかまた
は、医薬品をそのまま、または賦形剤、結合剤、崩壊剤
もしくはそのほかの適当な添加剤を加えて均等に混和し
たものを、直接圧縮成型して製するか、またはあらかじ
め製した顆粒にそのまま、もしくは適当な添加剤を加え
て均等に混合した後、圧縮成型しても製造することもで
きる。また、本剤は、必要に応じて着色剤、矯味剤など
を加えることができる。さらに、本剤は、適当なコーテ
ィング剤で剤皮を施すこともできる。注射剤の製造法
は、医薬品の一定量を、水性溶剤の場合は注射用水、生
理食塩水、リンゲル液など、非水性溶剤の場合は通常植
物油などに溶解、懸濁もしくは乳化して一定量とする
か、または医薬品の一定量をとり注射用の容器に密封し
て製することができる。経口用製剤担体としては、例え
ばデンプン、マンニット、結晶セルロース、カルボキシ
メチルセルロースナトリウムなどの製剤分野において常
用されている物質が用いられる。注射用担体としては、
例えば蒸留水、生理食塩水、グルコース溶液、輸液剤な
どが用いられる。その他、製剤一般に用いられる添加剤
を適宜添加することもできる。投与量は対象疾患の種
類、投与ルート、症状などにより差異はあるが、成人に
対して１日につき、０.１mg〜５００mg、好ましくは１m
g〜１００mg、より好ましくは１mg〜２０mgである。な
お、ビンポセチンは既に医薬と使用されており、医薬と
して毒性に問題はなく、安全に投与される。

【００２４】本発明のＡβ産生・分泌阻害剤は人を含む
哺乳動物の脳機能障害の治療および予防に有用であり、
その対象疾患としては、例えば、老人性痴呆症、アルツ
ハイマー病、脳血管性痴呆症、アミロイドアンジオパシ
ー、ダウン症などがあげられる。

【００２５】

【実施例】以下、実験例および実施例を挙げて、本発明
をさらに詳しく説明する。 実験例１ ヒト・ニューロブラストーマＩＭＲ−３２細胞における
Ａβ産生・分泌阻害作用 １）実験材料および方法 ヒト由来の神経細胞およびグリア細胞でのＡβ産生・分
泌に関する研究は、アルツハイマー型痴呆症との関連で
極めて興味深い問題である。しかし、ヒトの初代培養神
経細胞およびグリア細胞は、実験材料としては通常の場
合、用いることができない。そこで、ヒト由来のニュー
ロブラストーマ細胞であり、かつ、培養上清中にＡβを
産生・分泌するＩＭＲ−３２細胞（神経化学 ３３, ２
３２（１９９４））を用いた。一方、鈴木伸宏博士ら
（Science，２６４, １３３６（１９９４））は、Ａβ
のアミノ酸数４０個（Ａβ（１−４０））およびアミノ
酸４２個（Ａβ（１−４２））を区別して測定可能な酵
素免疫測定法を開発した。本方法を用いて被検化合物に
よるＡβ産生・分泌阻害作用を測定した。

【００２６】ａ）実験材料 ヒト・ニューロブラストーマＩＭＲ−３２細胞は、アメ
リカン・タイプ・カルチャー・センター（ＡＴＣＣ)よ
り購入した。ダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco's
modified Eagle's medium： ＤＭＥＭ）は日水製薬、
牛胎児血清（Fetal calf serum：ＦＣＳと略すこともあ
る）およびペニシリン（５０００Ｕ／ml)／ストレプト
マイシン（５mg／ml）混液はバイオホワイタッカー社、
リン酸／生理食塩水緩衝液（phosphate buffered salin
e：ＰＢＳ）はフローラボラトリーズ社より、ブロック
エース（Block Ace）は大日本製薬より、牛血清アルブ
ミン（bovine serum albumin：ＢＳＡ）はシグマ社より
購入した。培養用フラスコおよび４８穴マルチウェルプ
レートは各々ファルコン社製およびコースター社製を用
いた。Ａβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）の標準
品はバッケム社より購入した。他の試薬は市販の特級品
を用いた。

【００２７】ｂ）実験方法 ＩＭＲ−３２細胞の培養 ＩＭＲ−３２細胞は１０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭ培養液を用
いて、１０％二酸化炭素／９０％空気中 、３７℃で培
養した。フラスコ（Falcon,７５０ml）でコンフルエン
ト状態（満杯状態）になるまで培養後、２．５×１０⁵
細胞／ウェルとなるように、４８穴マルチウェルプレー
トに播種し、５日間培養した。培養液を吸引除去後、薬
物を溶解したＤＭＥＭ／０．５％ＢＳＡ ０．５ml（Ａ
β（１−４０）測定用）あるいは０．２５ml（Ａβ（１
−４２）測定用） を添加して、２４時間さらに培養し
た。上清を採取してＡβ測定用に−２０℃以下で保存し
た。

【００２８】Ａβの酵素免疫測定法（ＥＩＡ） Ａβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）測定時の抗体
の組み合わせを図１に示した。一次抗体には、いずれの
場合もＡβ（１−４０）のＮ端部を認識するＢＡＮ−５
０抗体を用いた。ＢＡ−２７はＡβ（１−４０）を抗原
に作製された抗体であるが、Ａβ（１−４０）のＣ末端
部を認識する。一方、ＢＣ−０５ 抗体はＡβ（３５−
４３）を抗原に作製された抗体であり、Ａβ（１−４
２）のＣ末端部を認識するが、Ａβ（１−４０）は認識
しない。したがって、ＢＡＮ−５０抗体とＢＡ−２７抗
体の組み合わせでＡβ（１−４０）を、また、ＢＡＮ−
５０抗体とＢＣ−０５抗体の組み合わせでＡβ（１−４
２）を測定することが出来る。

【００２９】０．１Ｍ炭酸緩衝液（pH９．６）に１５μ
g／mlの濃度で溶解したＢＡＮ−５０抗体をポリエチレ
ンマイクロタイタープレートに１００μlずつ添加し、
４℃で一晩放置した。ＰＢＳで３回洗浄後、ブロック液
（２５％ブロックエース／０．１％アジ化ナトリウム／
ＰＢＳ）２００μl を添加した。この状態で使用時ま
で、４℃で保存した。ＰＢＳにて３回洗浄後、一次反応
用緩衝液（２０mＭ リン酸緩衝液、pＨ７．０；４００m
Ｍ ＮaＣl；２mＭ ＥＤＴＡ；１０％ブロックエース；
０．２％ＢＳＡ；０．０５％アジ化ナトリウム）５０μ
l を添加した。さらに、培養上清あるいは一次反応用緩
衝液に希釈した標準品（１０００、２００、４０および
８pg／ml）１００μlを添加し、４℃ で一晩放置した。
吸引除去後、ＰＢＳにて３回洗浄し、二次反応用緩衝液
（２０mＭ リン酸緩衝液、pＨ７．０；４００mＭ ＮaＣ
l；２mＭ ＥＤＴＡ；１％ＢＳＡ）に溶解した西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ（horseradish peroxidase：ＨＲ
Ｐ）標識二次抗体（ＢＡ−２７あるいはＢＣ−０５抗
体）１００μlを添加した。６時間室温にて反応させた
後、７回洗浄し、着色反応液（ＴＭＢ Peroxidase Subs
trate, Kirkegaard & Perry Lab.）１００μl を加え
た。室温で、８〜１０分反応後、１Ｍリン酸溶液１００
μlで反応を止め、プレ−トリ−ダ−（コロナ社、ＭＴ
Ｐ−３２マイクロプレートリーダー）にて比色定量（測
定波長、４５０nm）した。

【００３０】細胞毒性の評価 ＭＴＴ法 培養上清を採取後、１．２mＭ ＭＴＴ｛３−（４，５−
ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２
Ｈ−テトラゾリウムブロマイド｝を含むＤＭＥＭ培養液
５００μlを添加した。１時間、３７ ℃で反応させた
後、同量の１０％ドデシル硫酸ナトリウム 溶液を添加
した。１晩穏やかに撹拌し、生成したホルマザンを溶解
させた後、プレ−トリ−ダ−にて比色定量（測定波長、
５５０nm）した。 乳酸脱水素酵素（lactate dehydrogenase；ＬＤＨ）
法 Ａβ（１−４０）測定後の培養上清１０μlをとり、細
胞から流出したＬＤＨ量をＬＤＨアッセイキット（和光
純薬製、ＬＤＨ Ｃ−ＩＩ）を用いて測定した。 統計処理 薬物１用量につき、４ウェルを用い、デ−タは対照群に
対する割合（％）で表した。統計処理にはダンネットｔ
テスト（Dunnett's t test）を用いた。

【００３１】２）結果 ａ）Ａβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）の標準曲
線 Ａβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）に対するＥＩ
Ａ系の標準曲線を図２に示す。測定は８pg／mlから１０
００pg／mlの範囲で行った。この範囲内で吸光度はＡβ
（１−４０）およびＡβ（１−４２）の濃度に比例して
増加した。本法の検出限界は約１０pg／mlであった。

【００３２】ｂ）ＩＭＲ−３２細胞からのＡβ（１−４
０）およびＡβ（１−４２）産生・分泌に及ぼす式
（Ｉ）の化合物の効果 ＭＲ−３２細胞は、恒常的にＡβを産生・分泌してお
り、その培養上清中のＡβ量を測定すると、今回用いた
培養条件下では５００pg／ml 以上のＡβ（１−４０）
を、また、その１／１０以下のＡβ（１−４２）の産生
・分泌が確認された。したがって、化合物添加後の上清
中のＡβ量を測定することにより、産生・分泌に対する
作用を調べることが出来た。ビンポセチンのＡβ産生・
分泌阻害作用を図３に示す。ビンポセチン ３×１
０^-6、１×１０^-5、３×１０^-5および１×１０^-4Ｍで各
々対照群の１０、３０、４５および４５％抑制した。Ａ
β（１−４２）産生・分泌は、３×１０^-6および１×１
０^-5Ｍで対照群に比べ減少する傾向は見られたが、有意
な変化ではなかった。このことは、一部はＡβ（１−４
２）産生・分泌量が低いこと、またウェル間のバラツキ
が大きかったことに帰因していると思われた。この時、
細胞毒性の指標としてＭＴＴからのホルマザン生成量お
よび培養上清中のＬＤＨ活性測定してみると、使用した
最高濃度の１×１０^-4Ｍで、軽度の細胞毒性が認められ
たのみであった。

【００３３】実験例２ モルモット初代培養神経細胞におけるＡβ産生・分泌阻
害作用 １）実験材料および方法 神経細胞の培養 妊娠２８日目のモルモット（SLC-Hartley）より胎仔脳
を採取した。実体顕微鏡下に大脳皮質および海馬を取り
出した。髄膜を取り除いた後、０．２５％トリプシン／
０．０１％ＤＮase Iを含むハンクス平衡塩類溶液（Han
k's Balanced Salt Solution）２０ml中で１０分間処理
した。ＦＣＳを添加して反応を止め、遠心した。インス
リン５μg／ml、トランスフェリン１００μg／ml、プロ
ジェステロン２０nＭ、プトレッシン１００μＭ、 亜セ
レン酸ナトリウム３０nＭを含むＤＭＥＭ培養液（ＤＭ
ＥＭ／Ｎ２培養液)中で細胞を分散させた。二重のレン
ズペーパーで濾過後遠心して細胞を集めた。ＤＭＥＭ／
Ｎ２培養液に分散後２４ウェルプレートに１×１０⁶細
胞／ウェルとなるように播いた。培養２日目、サイトシ
ンアラビノシド（cytosine arabinoside）１μＭを含有
するＤＭＥＭ／Ｎ２培養液に交換した。３日間処理後、
ＤＭＥＭ／Ｎ２培養液に交換し、以後、２〜３日おきに
交換した。培養１２日目にビンポセチンを含有するＤＭ
ＥＭ／Ｎ２培養液を添加し、２４時間後の培養上清を採
取してＡβ量測定用に−２０℃以下で保存した。

【００３４】Ａβの酵素免疫測定法（ＥＩＡ） 培養上清中のＡβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）
の測定は実験例１の測定法に従った。 細胞毒性の評価 培養上清を採取後、１．２mＭ ＭＴＴを含有するＤＭ
ＥＭ培養液３００μlを添加した。１時間３７℃反応さ
せた後、同量の１０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を添
加した。以後、実験例１の方法に従った。 ２）結果 図４にビンポセチンの神経細胞におけるＡβ（１−４
０）産生・分泌阻害作用の結果を示す。ビンポセチンは
３×１０^-5Ｍの濃度でＡβ（１−４０）産生・分泌量を
細胞毒性なしに抑制した。なお、Ａβ（１−４２）の産
生・分泌量は少なく、化合物の作用の検討はできなかっ
た。

【００３５】実施例１ （１）ビンポセチン ５.０ｇ （２）乳糖 ８２.５ｇ （３）ヒドロキシプロピルセルロース ２.８ｇ （４）ステアリン酸マグネシウム ０.４ｇ （５）ヒドロキシプロピル メチルセルロース２９１０ ２.９９４ｇ （６）トウモロコシデンプン １９.３ｇ （７）マクロゴール６０００ ０.６ｇ （８）酸化チタン ０.４ｇ （９）二三酸化鉄 ０.００６ｇ （１）〜（６）の成分を混合して剤型形成機で１錠当り
ビンポセチン５mgを含有する直径６.５mmの素剤を１０
００錠作製した。これを、（７）〜（９）の成分で被覆
し、直径６.６mmのフィルムコーティング錠とした。

【００３６】実施例２ （１）ビンポセチン ５ｇ （２）乳糖・結晶セルロース（粒） ３３０ｇ （３）Ｄーマンニトール ２９ｇ （４）低置換度ヒドロキシ プロピルセルロース ２０ｇ （５）タルク ２５ｇ （６）ヒドロキシプロピルセルロース ５０ｇ （７）アスパルテーム ３ｇ （８）グリチルリチン酸二カリウム ３ｇ （９）ヒドロキシプロピル メチルセルロース２９１０ ３０ｇ （１０）酸化チタン ３.５ｇ （１１）黄色三二酸化鉄 ０.５ｇ （１２）軽質無水ケイ酸 １ｇ （１）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）およ
び（８）の成分を自体公知の方法に従い精製水に懸濁あ
るいは溶解し、（２）の核粒にコーティングし素細粒を
作製した。この素細粒上に（９）〜（１１）の成分をコ
ーティングし、コーティング細粒を作り、（１２）の成
分と混合してビンポセチン細粒１％、５００ｇを作製し
た。これを５００mgずつ分包した。

【００３７】

【発明の効果】本発明のアミロイドβ蛋白産生・分泌阻
害剤は、毒性が低く、安全である。有用な対象疾患名と
しては、例えば老年性痴呆症、アルツハイマー病、ダウ
ン症などがあげられ、これらの疾病の予防または治療に
用いることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＥＩＡ系で用いられた抗体の組み合わせを示
す模式図。

【図２】 Ａβ（１−４０）およびＡβ（１−４２）に
対するＥＩＡ系の標準曲線。

【図３】 ビンポセチンのヒト・ニューロブラストーマ
ＩＭＲ−３２細胞におけるＡβ産生・分泌阻害作用の結
果を示すグラフ。

【図４】 ビンポセチンのモルモット初代培養神経細胞
におけるＡβ産生・分泌阻害作用の結果を示すグラフ。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 [式中、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
   はＯＲ¹、 【化２】 またはＳＲ¹（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は、同一または
   異なって、それぞれ、水素原子および置換されていても
   よい炭化水素基から選ばれるか、またはＲ²およびＲ
   ³は、隣接する窒素原子と一緒になって、置換されてい
   てもよい含窒素複素環を形成している。）を、Ｙは置換
   されていてもよいアルキル基を示す。]で表される化合
   物またはその薬理学的に許容しうる塩、および、所望に
   より、薬理学的に許容しうる賦形剤、担体または希釈剤
   を含有するアミロイドβ蛋白産生・分泌阻害剤。
2. 【請求項２】 環Ａが、ハロゲンから選ばれる１ないし
   ３個の置換基を有していてもよいベンゼン環、ＲがＯＲ
   ¹（式中、Ｒ¹はアルキル基を示す。）、およびＹがエチ
   ルである請求項１記載のアミロイドβ蛋白産生・分泌阻
   害剤。
3. 【請求項３】 環Ａがベンゼン環、およびＲ¹がエチル
   である請求項２記載のアミロイドβ蛋白産生・分泌阻害
   剤。
4. 【請求項４】 式（Ｉ）： 【化３】 [式中、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
   はＯＲ¹、 【化４】 またはＳＲ¹（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は、同一または
   異なって、それぞれ、水素原子および置換されていても
   よい炭化水素基から選ばれるか、またはＲ²およびＲ
   ³は、隣接する窒素原子と一緒になって、置換されてい
   てもよい含窒素複素環を形成している。）を、Ｙは置換
   されていてもよいアルキル基を示す。]で表される化合
   物またはその薬理学的に許容しうる塩、および、所望に
   より、薬理学的に許容しうる賦形剤、担体または希釈剤
   を含有するアルツハイマー病の予防・治療剤。
5. 【請求項５】 環Ａが、ハロゲンから選ばれる１ないし
   ３個の置換基を有していてもよいベンゼン環、ＲがＯＲ
   ¹（式中、Ｒ¹はアルキル基を示す。）、およびＹがエチ
   ルである請求項４記載のアルツハイマー病の予防・治療
   剤。
6. 【請求項６】 環Ａがベンゼン環、およびＲ¹がエチル
   である請求項５記載のアルツハイマー病の予防・治療
   剤。