JPH08220100A - Rheumatoid factor measuring reagent - Google Patents
Rheumatoid factor measuring reagentInfo
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- JPH08220100A JPH08220100A JP2572795A JP2572795A JPH08220100A JP H08220100 A JPH08220100 A JP H08220100A JP 2572795 A JP2572795 A JP 2572795A JP 2572795 A JP2572795 A JP 2572795A JP H08220100 A JPH08220100 A JP H08220100A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】ヒト免疫グロブリンＧ（IgG)の F
c 部分（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) を用いるリウマチ
因子測定試薬に関し、医薬の分野で利用される。[Industrial field] Human immunoglobulin G (IgG) F
A rheumatoid factor assay reagent that uses a single-chain portion (Fc / 2) of the c portion (IgGFc) is used in the field of medicine.
【０００２】[0002]
【従来の技術】慢性関節リウマチは多発性の慢性関節炎
を特徴とする疾患で、我が国では数百万人の患者がいる
とされているがその原因は特定されていない。リウマチ
因子は IgGFc部分に対する自己抗体としてリウマチ患者
の血清中に高頻度に出現し、リウマチ診断基準のひとつ
として測定されている。このリウマチ因子には、免疫グ
ロブリンの各クラスに属するものが知られているが、現
在臨床的に測定されているのは IgG, IgM クラスのリウ
マチ因子であり、スクリ−ニング試薬として汎用されて
いるものは、その測定手技上主に IgMクラスのリウマチ
因子を検出している。また IgGクラスのリウマチ因子は
リウマチの活動性を判断する指標としてその測定意義が
重要視されつつある。このように現在では、クラス別リ
ウマチ因子測定意義が研究されつつあり、クラス別リウ
マチ因子測定を可能にする方法も報告されている（特許
公報 平 5-47781号）。リウマチ因子は IgGの Fc 部分
に対する自己抗体ではあるが、未変性 IgGよりも変性 I
gGに対して強く反応することから、凝集法によるリウマ
チ因子測定試薬において、変性 IgGをリウマチ因子捕捉
用抗原として用いるのが一般的である。しかしながら、
変性後のIgG は不均一な性状をとることから、試薬ごと
の測定値の変動および施設間差が大きいことが問題とな
っている（臨床化学 第23巻補冊２号−第34回日本臨床
化学会年会要旨集−64b 頁、1994年）。また、変性 IgG
の代わりに IgGFc部分をリウマ因子捕捉用抗原として用
いた、サンドイッチ法による測定試薬の場合においても
同じ問題が生じている。たとえ標準リウマチ因子陽性血
清が用意されているとはいえ、臨床検査の場において試
薬ロット間の変動のない安定な試薬の供給が望まれてい
る。BACKGROUND OF THE INVENTION Rheumatoid arthritis is a disease characterized by multiple chronic arthritis, and it is said that there are millions of patients in Japan, but the cause has not been identified. Rheumatoid factor frequently appears in the serum of patients with rheumatism as an autoantibody against the IgGFc portion, and is measured as one of the diagnostic criteria for rheumatism. Among these rheumatoid factors, those belonging to each class of immunoglobulins are known, but those currently clinically measured are IgG and IgM class rheumatoid factors, which are widely used as screening reagents. Primarily, IgM class rheumatoid factors are detected in the measurement procedure. In addition, the significance of measurement of IgG class rheumatoid factors is becoming important as an index for judging the activity of rheumatism. Thus, at present, the significance of class-specific rheumatoid factor measurement is being studied, and a method that enables class-specific rheumatoid factor measurement has also been reported (Patent Publication No. 5-47781). Rheumatoid factor is an autoantibody to the Fc part of IgG, but denatured I
Since it reacts strongly with gG, denatured IgG is generally used as an antigen for capturing rheumatoid factors in a reagent for measuring rheumatoid factors by the agglutination method. However,
Since denatured IgG has a heterogeneous property, it has been a problem that there are large fluctuations in measured values for each reagent and large differences among facilities (Clinical Chemistry, Vol. 23, Supplement No. 2-34th Japanese clinical practice). Proceedings of the Annual Meeting of the Chemistry Society, p. 64b, 1994). Also, denatured IgG
The same problem occurs in the case of a measuring reagent by the sandwich method, which uses the IgGFc portion as an antigen for capturing a rheumatoid factor instead of. Although standard rheumatoid factor-positive sera are prepared, stable supply of reagents without variation between reagent lots is desired in clinical testing.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】試薬ロット間の変動の
ない安定な、さらに高感度なリウマチ因子測定試薬を提
供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a stable and highly sensitive reagent for measuring rheumatoid factor that does not vary between reagent lots.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者等は、安定なリ
ウマチ因子測定試薬の開発のために鋭意研究の結果、リ
ウマチ因子捕捉用抗原に原因があることをつきとめた。
サンドイッチ法による測定試薬において、捕捉用抗原と
して通常用いられる IgGFcは IgGをパパインで酵素分解
した後、CMおよび DEAE イオン交換カラムクロマトグラ
フィ−で精製することによって得られる疎水性蛋白質で
ある。これを SDS-PAGE で分析したところ、インタクト
な IgGFcの分子量である 50,000の成分と 25,000 の成
分の二つが検出された。 IgGFcは S-S結合による二本鎖
構造を有しているが、この 25,000 の成分は S-S結合解
裂に基づく一本鎖（Fc/2)であり、この一本鎖成分だけ
でも IgGFcの抗原性を有すること、いわゆるリウマチ因
子と結合性を有することを本発明者らが初めて確認し
た。そこでこの二つの成分について、保存性、リウマチ
因子との反応性について比較検討したところ、分子量 5
0,000 の成分（IgGFc)は凍結融解により白濁沈殿を生
じ、保存前後でリウマチ因子との反応性が大きく異なる
ことが認められた。これに対し、25,000の成分（Fc/2)
は凍結融解によって白濁沈殿は生じず、リウマチ因子と
の反応性に差が認められなかった。さらに IgGFcの代わ
りに Fc/2 をリウマチ因子測定系に使用すると試薬の安
定化とともに感度も上昇することが確認され、本発明を
完成するに至った。Means for Solving the Problems The inventors of the present invention, as a result of earnest research for the development of a stable reagent for measuring rheumatoid factor, have determined that the antigen for capturing the rheumatoid factor has a cause.
In the assay reagent by the sandwich method, IgGFc usually used as a capture antigen is a hydrophobic protein obtained by enzymatically degrading IgG with papain and then purifying by CM and DEAE ion exchange column chromatography. When analyzed by SDS-PAGE, two components, the molecular weight of intact IgGFc of 50,000 and 25,000, were detected. IgGFc has a double-stranded structure due to SS binding, but this 25,000 component is a single chain (Fc / 2) based on SS bond cleavage, and this single-stranded component alone shows IgGFc antigenicity. The present inventors have for the first time confirmed that they have, that is, have a binding property with a so-called rheumatoid factor. Therefore, when these two components were compared and evaluated for storage stability and reactivity with rheumatoid factor, the molecular weight was 5
It was confirmed that the component of 0,000 (IgGFc) was clouded and precipitated by freeze-thawing, and that the reactivity with rheumatoid factor was significantly different before and after storage. In contrast, 25,000 components (Fc / 2)
No cloudiness precipitation occurred due to freeze-thawing, and there was no difference in reactivity with rheumatoid factor. Furthermore, it was confirmed that the use of Fc / 2 instead of IgGFc in the rheumatoid factor assay system stabilizes the reagent and increases the sensitivity, thus completing the present invention.
【０００５】すなわち本発明は、ヒト体液中のリウマチ
因子を測定する試薬及び方法であって、ヒト免疫グロブ
リンＧ（IgG)の Fc(IgGFc)部分の一本鎖部分（Fc/2) ま
たはその誘導体を補足用抗原として用いることを特徴と
するリウマチ因子測定試薬および測定方法に関する。Fc
/2とは、IgG をパパイン分解により得られるIgGFc 部分
をジチオスレイト−ルなど還元剤で処理することによっ
て S-S結合を切断することにより得られる一本鎖を意味
する。該一本鎖はそのままでも使用できるが、フリ−の
SH 基を例えばアルキル化処理などにより保護されたも
のが好ましい。さらに Fc/2 は、パパイン分解により得
られるIgGFc 部分の還元処理による一本鎖に限らず、た
とえばヒンジ領域を含まない一本鎖部分などその部分構
造を有する断片でリウマチ因子と反応性を有するものも
本発明に含まれる。Fc/2の誘導体とは、SH基のアルキル
化を含めて、該一本鎖あるいはその部分構造を有する断
片のいずれの部位であれ、有機物質または無機物質を付
加した誘導体でリウマチ因子と反応性を有するものすべ
てが含まれる。通常の調製法により調製したIgGFc は、
酵素濃度、反応時間などの調製条件により多かれ少なか
れFc/2が混在している。リウマチ因子捕捉用抗原とし
て、本発明の Fc/2 を 100％用いるのが好ましいが、従
来用いられている IgGまたは IgGFcの中に約50％程度Fc
/2が含まれればある程度の目的は達成することができ
る。 Fc/2 の割合が60％、70％と増加するほど好結果を
与えることになる。本発明の安定試薬、高感度試薬を目
的として、IgGFc の調製法を改変してFc/2の割合の多い
IgGFc を使用すること、またはFc/2を添加して使用する
ことなども本発明に含まれる。即ち本発明は、リウマチ
因子捕捉用抗原として、Fc/2，その部分構造を有する断
片またはそれらの誘導体を使用すること、すなわち一本
鎖を使用することを特徴とするリウマチ因子測定試薬お
よび方法である。That is, the present invention relates to a reagent and method for measuring rheumatoid factor in human body fluid, which comprises a single chain portion (Fc / 2) or a derivative thereof of the Fc (IgGFc) portion of human immunoglobulin G (IgG). The present invention relates to a rheumatoid factor measuring reagent and a measuring method, wherein: Fc
"/ 2" means a single chain obtained by cleaving the SS bond by treating the IgG Fc portion obtained by degrading papain with IgG with a reducing agent such as dithiothreitol. The single strand can be used as it is, but
Those in which the SH group is protected by, for example, an alkylation treatment are preferred. Furthermore, Fc / 2 is not limited to a single chain obtained by the reduction treatment of the IgGFc portion obtained by papain degradation, and for example, a fragment having a partial structure such as a single chain portion that does not include a hinge region and having reactivity with rheumatoid factor Also included in the present invention. The Fc / 2 derivative is a derivative having an organic substance or an inorganic substance added thereto, which is reactive with rheumatoid factor, at any site of the fragment having the single chain or a partial structure thereof, including the alkylation of the SH group. Anything that has IgGFc prepared by the usual preparation method is
More or less Fc / 2 is mixed depending on the preparation conditions such as enzyme concentration and reaction time. As the antigen for capturing the rheumatoid factor, it is preferable to use 100% of the Fc / 2 of the present invention. However, about 50% of the IgG or IgGFc conventionally used is used.
Some objectives can be achieved if / 2 is included. The more the Fc / 2 ratio increases to 60% and 70%, the better the result will be. For the stable reagent and high-sensitivity reagent of the present invention, the preparation method of IgGFc was modified to increase the ratio of Fc / 2.
The present invention also includes the use of IgGFc or the addition of Fc / 2. That is, the present invention provides a rheumatoid factor assay reagent and method characterized by using Fc / 2, a fragment having a partial structure thereof, or a derivative thereof as an antigen for capturing rheumatoid factor, that is, using a single chain. is there.
【０００６】捕捉用抗原は操作の簡便性の観点から固相
化されていることが好ましく、固相体は通常用いられて
いるマイクロプレ−ト、プラスチック粒子、磁気粒子、
赤血球などいずれの固相体も利用することができ、本発
明は固相体の種は問わない。粒子系の固相体を選択した
場合、いわゆる凝集法によるリウマチ因子測定試薬とし
て用いることができる。酵素免疫測定法などサンドイッ
チ法を用いる場合、通常、Fc/2は固相化し検体中リウマ
チ因子との第一反応物質として使用されるが、第二反応
物質（場合により標識化）として使用することも可能で
あり、補足用抗原とは第一反応物質として用いることに
限定されない。本発明の Fc/2 を使用してリウマチ因子
を測定する方法は、例えば基本的には以下のようにして
行えばよい。凝集法の場合、固相体粒子にFc/2を固定し
て検体試料と反応させ、凝集の度合いを判定すれば良
い。酵素免疫測定法などサンドイッチ法の場合、まずに
固相に Fc/2 を固定し、ここに生体試料を加えて反応さ
せ洗浄後、酵素標識羊抗ヒト免疫グロブリン抗体のF(a
b')2 と反応させ洗浄後、酵素基質を添加し、基質の分
解量によりリウマチ因子の量を定量すればよい。このサ
ンドイッチ法に基づく本発明試薬は、Fc/2を必須の構成
要素とし、固相体、標準抗原、羊抗ヒト免疫グロブリン
抗体のF(ab')2 （酵素標識）、酵素基質よりなる組み合
わせたセットである。測定の実施の便益のために適当な
抗原希釈液、反応希釈液、基質溶解液、反応停止液など
がセット中に添付されることは自由である。なお、この
サンドイッチ法による測定系において、第二反応物質と
して羊抗ヒト免疫グロブリン抗体を含めリウマチ因子と
反応性を有する物質であればいずれも使用することがで
き、とくに限定されない。また第二反応物質を標識して
使用する場合、標識物質として酵素、色素、金属、発光
物質などいずれも使用することができ、本発明を限定す
るものではない。また本発明はヒトに限らず各種動物の
場合にも応用することができる。[0006] The capturing antigen is preferably solid-phased from the viewpoint of easy operation, and the solid-phase body is a commonly used microplate, plastic particle, magnetic particle,
Any solid phase body such as red blood cells can be used, and any kind of solid phase body can be used in the present invention. When a particle-type solid phase body is selected, it can be used as a rheumatoid factor assay reagent by the so-called agglutination method. When using the sandwich method such as enzyme immunoassay, Fc / 2 is usually immobilized and used as the first reaction substance with the rheumatoid factor in the sample, but it should be used as the second reaction substance (labeled in some cases). It is also possible and the supplementary antigen is not limited to being used as the first reaction substance. The method of measuring the rheumatoid factor using Fc / 2 of the present invention may be carried out basically as follows, for example. In the case of the agglutination method, Fc / 2 may be immobilized on solid phase particles and reacted with a sample to determine the degree of agglutination. In the case of the sandwich method such as enzyme immunoassay, Fc / 2 is first immobilized on the solid phase, a biological sample is added to it and the reaction is performed, and after washing, the enzyme-labeled sheep anti-human immunoglobulin antibody F (a
After reacting with b ') 2 and washing, an enzyme substrate may be added, and the amount of rheumatoid factor may be quantified by the amount of decomposition of the substrate. The reagent of the present invention based on this sandwich method is a combination of Fc / 2 as an essential component, a solid phase, a standard antigen, F (ab ') 2 (enzyme label) of sheep anti-human immunoglobulin antibody, and an enzyme substrate. It is a set. For the convenience of carrying out the measurement, an appropriate antigen diluent, reaction diluent, substrate solution, reaction stop solution, etc. may be freely attached to the set. In the assay system by the sandwich method, any substance can be used as long as it is a substance that has reactivity with rheumatoid factors, including sheep anti-human immunoglobulin antibody, and is not particularly limited. When the second reactive substance is used as a label, any of an enzyme, a dye, a metal, a luminescent substance or the like can be used as the labeling substance, and the present invention is not limited thereto. The present invention can be applied not only to humans but also to various animals.
【０００７】IgGFc は、ポ−タ−の原法（Porter, R.,
Biochem. J., 73, 119, 1959) に準じて、IgG を中性 p
H においてパパイン限定分解を行う常法により調製する
ことができる。例えば、IgG を2-メルカプトエタノ−ル
含有リン酸緩衝液中（pH 7.5, EDTA含有）Ｎ2 通気下パ
パインにて分解した後、ＣＭ−セルロ−スクロマトグラ
フィ−および DEAE-セルロ−スクロマトグラフィ−によ
り調製することができる（医化学実験法講座４巻 p100
,特公平5-47781 号）。またヒト IgGFcは試薬として購
入することもできる（オルガノンテクニカ社）。 Fc/2
は、IgGFc の S-S結合をジチオスレイト−ルなどの還元
剤による通常の切断法により調製することができる。SH
基のアルキル化はたとえばヨ−ドアセトアミドなどを用
いる常法により調製することができる。誘導体として、
たとえば固相との結合性を高めるために、リジンアミノ
酸、ペプチドを付加することができる。ヒンジ領域を含
まないFc/2は内海らの方法により調製することができる
（ Utumi,S., Biochem.J.,112, 343, 1969 )。第二反応
試薬として羊抗ヒト IgGFd（Fab のＨ鎖部分）抗体の F
(ab')2（アルカリホスファタ−ゼ標識）を用いて、リウ
マチ因子捕捉用抗原の種類を変えてリウマチ因子測定系
を検討した結果、IgGFc よりもFc/2を用いた場合の方が
希釈直線性に優れ、リウマチ因子の変動を鋭敏に捕らえ
ることが判明した。 Fc/2 は凍結融解により、リウマチ
因子との反応性にまったく変化が認められないことか
ら、安定な状態で長期保存が可能となり、性能の均一な
捕捉用抗原（Fc/2) の供給ができ、試薬の安定性、定量
性の向上をもたらしたものである。IgGFc is an original method of porter (Porter, R.,
Biochem. J., 73 , 119, 1959).
It can be prepared by a conventional method in which papain limited decomposition is carried out in H 2. For example, IgG was decomposed with papain under aeration of N 2 in a phosphate buffer containing 2-mercaptoethanol (pH 7.5, containing EDTA), and then subjected to CM-cellulose chromatography and DEAE-cellulose chromatography. Can be prepared (Medical Chemistry Laboratory Course Volume 4 p100
, Japanese Patent Publication No. 5-47781). Human IgGFc can also be purchased as a reagent (Organon Technica). Fc / 2
Can be prepared by a conventional cleavage method using a reducing agent such as dithiothreitol for the SS bond of IgGFc. SH
Alkylation of the group can be prepared by a conventional method using, for example, iodoacetamide. As a derivative,
For example, lysine amino acids and peptides can be added to enhance the binding property to the solid phase. Fc / 2 containing no hinge region can be prepared by the method of Utsumi et al. (Utumi, S., Biochem. J., 112 , 343, 1969). F of sheep anti-human IgG Fd (H chain part of Fab) antibody as the second reaction reagent
Using (ab ') 2 (labeled with alkaline phosphatase), we investigated the rheumatoid factor assay system by changing the type of antigen for capturing rheumatoid factors.As a result, we found that Fc / 2 was diluted more than IgGFc It was found that it has excellent linearity and can sensitively detect fluctuations in rheumatoid factors. Fc / 2 does not show any change in reactivity with rheumatoid factors due to freeze-thawing, which enables stable long-term storage and enables the supply of capture antigen (Fc / 2) with uniform performance. , And improved the stability and quantitativeness of the reagent.
【０００８】[0008]
【実施例】以下の実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されない。The present invention will be described in detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.
【０００９】実施例１． ヒト IgGFcの還元およびアル
キル化 Fc/2 の調製 ヒト IgGをパパイン分解して得られる IgGFcは試薬とし
て購入した（オルガノンテクニカ社）。IgGFc を 50mM
Tris-HCl-0.15M NaCl-2mM EDTAに溶解し、モル比で30倍
量のジチオスレイト−ルを加えて、37℃で一時間還元処
理した。アルキル化 Fc/2 は、還元処理液に直接、終濃
度が40mMになるようにヨ−ドアセトアミドを加え、遮光
下、室温で20分間処理し、還元処理により生じた遊離の
SH基を保護した。ヨ−ドアセトアミド処理した溶液は、
精製水で10倍希釈した後遮光下４℃で精製水に対して透
析した。このようにして調製された還元アルキル化Fc/2
をSDS PAGE で分析したところ、分子量 25,000 の位置
に目的とする蛋白質が泳動された。Embodiment 1. Reduction of human IgGFc and preparation of alkylated Fc / 2 IgGFc obtained by papain degradation of human IgG was purchased as a reagent (Organon Technica). IgGFc 50 mM
It was dissolved in Tris-HCl-0.15M NaCl-2mM EDTA, 30 times amount of dithiothreitol in molar ratio was added, and reduction treatment was carried out at 37 ° C for 1 hour. For alkylated Fc / 2, iodoacetamide was added directly to the reduction treatment solution so that the final concentration was 40 mM, and the mixture was treated at room temperature for 20 minutes in the dark, and free radicals produced by the reduction treatment were added.
The SH group was protected. The solution treated with iodoacetamide,
After diluting 10 times with purified water, it was dialyzed against purified water at 4 ° C. in the dark. Reductively alkylated Fc / 2 thus prepared
When analyzed by SDS PAGE, the target protein was electrophoresed at the position of molecular weight 25,000.
【００１０】実施例２．凍結融解前後のIgGFc とFc/2の
反応性の比較 凍結融解前後のIgGFc またはFc/2をマイクロプレ−トに
固相化し、リウマチ患者血清を検体試料としてこれに添
加反応させ洗浄後、羊抗ヒト IgGFd抗体の F(ab')2（ア
ルカリホスファタ−ゼ標識）を反応させた。洗浄後、酵
素基質P-ニトロフェノ−ルフォスフェ−トを添加し37℃
30分反応後、405nm の吸光度を測定した。その結果図１
及び２に示されるごとく、アルキル化Fc/2では凍結融解
前後で反応性に差が認められず（図１、相関性 r=0.94
）、一方IgGFc はかなりの反応性の変化が認められた
（図２、相関性 r= 0.62）。Embodiment 2. Comparison of the reactivity of IgGFc and Fc / 2 before and after freeze-thawing Immobilize IgGFc or Fc / 2 before and after freeze-thawing on a microplate, and add and react with rheumatoid patient serum as a sample sample to wash it Human IgGFd antibody F (ab ') 2 (alkaline phosphatase labeled) was reacted. After washing, add the enzyme substrate P-nitrophenol phosphate and add 37 ° C.
After reacting for 30 minutes, the absorbance at 405 nm was measured. As a result,
2 and 2, the alkylated Fc / 2 showed no difference in reactivity before and after freeze-thawing (Fig. 1, correlation r = 0.94).
), On the other hand, IgGFc showed a considerable change in reactivity (Fig. 2, correlation r = 0.62).
【００１１】実施例３． IgGFcと Fc/2 のリウマチ因子
定量性の比較 系列希釈したリウマチ患者血清を検体として、 IgGFcと
アルキル化 Fc/2 に対する反応性を実施例２と同じ方法
で比較した。その結果、図３に示されるように、 IgGFc
と比較してアルキル化 Fc/2 は直線性に優れ、精度の高
い測定を可能とした。Embodiment 3. Comparison of Rheumatoid Factor Quantitative Properties of IgGFc and Fc / 2 Using the serially diluted rheumatoid patient serum as a sample, the reactivity to IgGFc and alkylated Fc / 2 was compared by the same method as in Example 2. As a result, as shown in FIG. 3, IgGFc
Compared with, alkylated Fc / 2 has excellent linearity and enables highly accurate measurement.
【００１２】[0012]
【図１】凍結融解前後のFc/2とリウマチ因子との反応性Fig. 1 Reactivity of Fc / 2 with rheumatoid factor before and after freeze-thawing
【図２】凍結融解前後のIgGFc とリウマチ因子との反応
性[Fig. 2] Reactivity between IgGFc and rheumatoid factor before and after freeze-thawing
【図３】 IgGFcとアルキル化 Fc/2 のリウマチ因子定量
性Fig. 3: Quantitative determination of rheumatoid factor between IgGFc and alkylated Fc / 2
Claims (7)
（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) またはその誘導体をリウ
マチ因子捕捉用抗原として用いることを特徴とするリウ
マチ因子測定試薬。1. A rheumatoid factor assay reagent, which comprises using a single-chain portion (Fc / 2) of Fc portion (IgGFc) of human immunoglobulin G (IgG) or a derivative thereof as an antigen for capturing rheumatoid factor.
（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) またはその誘導体を、リ
ウマチ因子捕捉用抗原として５０％以上含むものを用い
ることを特徴とするリウマチ因子測定試薬。2. A human immunoglobulin G (IgG) Fc portion (IgGFc) single chain portion (Fc / 2) or a derivative thereof is used as an antigen for capturing rheumatoid factor in an amount of 50% or more. Rheumatoid factor assay reagent.
（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) が IgGFcを還元化処理す
ることにより得られる一本鎖部分である、請求項１また
は２記載のリウマチ因子測定試薬。3. The single chain portion (Fc / 2) of the Fc portion (IgGFc) of human immunoglobulin G (IgG) is the single chain portion obtained by reducing IgGFc. 2. The rheumatoid factor assay reagent according to 2.
（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) が IgGFcを還元化処理す
ることにより得られる一本鎖部分の部分構造を有しリウ
マチ因子と結合性を有する一本鎖である、請求項１また
は２記載のリウマチ因子測定試薬。4. A rheumatism having a partial structure of a single chain portion (Fc / 2) of a human immunoglobulin G (IgG) Fc portion (IgGFc) obtained by reducing IgGFc. The rheumatoid factor assay reagent according to claim 1 or 2, which is a single chain having a factor-binding property.
（IgGFc)の一本鎖部分（Fc/2) が IgGFcを還元アルキル
化処理することにより得られる一本鎖部分である、請求
項１または２記載のリウマチ因子測定試薬。5. The single-chain portion (Fc / 2) of the Fc portion (IgGFc) of human immunoglobulin G (IgG) is a single-chain portion obtained by subjecting IgGFc to reductive alkylation treatment. Alternatively, the rheumatoid factor assay reagent according to 2.
ていることを特徴とする、請求項１または２記載のリウ
マチ因子測定試薬。6. The rheumatoid factor assay reagent according to claim 1, wherein the rheumatoid factor-capturing antigen is bound to a solid phase.
て、ヒト免疫グロブリンＧ（IgG)の Fc 部分（IgGFc)の
一本鎖部分（Fc/2) またはその誘導体を固相体に固定
し、これと検体試料を反応させリウマチ因子を捕捉した
後、リウマチ因子結合性物質または標識化リウマチ因子
結合性物質と反応させ、リウマチ因子結合性物質の量を
定量することに基づくリウマチ因子測定方法。7. A method for sandwich determination of rheumatoid factor, which comprises immobilizing a single chain portion (Fc / 2) of human immunoglobulin G (IgG) Fc portion (IgGFc) or a derivative thereof on a solid phase body. A method for measuring a rheumatoid factor, which comprises reacting a rheumatoid factor with an analyte sample to capture a rheumatoid factor, and then reacting the substance with a rheumatoid factor-binding substance or a labeled rheumatoid factor-binding substance to quantify the amount of the rheumatoid factor-binding substance.
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999041286A1 (en) * | 1998-02-16 | 1999-08-19 | University College London | DERIVATISED ANTIBODIES WITH EXPOSED CARBOHYDRATE CHAINS CAPABLE OF BINDING TO IMMOBILISED IgG |
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1995
- 1995-02-14 JP JP02572795A patent/JP3501381B2/en not_active Expired - Fee Related
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| WO1999041286A1 (en) * | 1998-02-16 | 1999-08-19 | University College London | DERIVATISED ANTIBODIES WITH EXPOSED CARBOHYDRATE CHAINS CAPABLE OF BINDING TO IMMOBILISED IgG |
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| JP3501381B2 (en) | 2004-03-02 |
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