JPH08217670A - 脳機能改善剤 - Google Patents
脳機能改善剤Info
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- JPH08217670A JPH08217670A JP2496595A JP2496595A JPH08217670A JP H08217670 A JPH08217670 A JP H08217670A JP 2496595 A JP2496595 A JP 2496595A JP 2496595 A JP2496595 A JP 2496595A JP H08217670 A JPH08217670 A JP H08217670A
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- JP
- Japan
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- formula
- cells
- spermine
- nerve cells
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 下記の一般式（１）で示されるポリアミンを
有効成分として含有する脳機能改善剤。 【化１】 ［式（１）中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、はそれぞれ独立し
て水素原子または基 【化２】 （ただし、Ｒ5、Ｒ6はそれぞれ独立して水素原子または
炭素数１〜４の枝分れしてもよいアルキル基を表し、ｎ
は０〜４の整数を表す。）を表す。］ 【効果】 上記化合物は損傷を受けた脳神経細胞の修復
促進作用を有し、脳機能改善剤として有用である。
有効成分として含有する脳機能改善剤。 【化１】 ［式（１）中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、はそれぞれ独立し
て水素原子または基 【化２】 （ただし、Ｒ5、Ｒ6はそれぞれ独立して水素原子または
炭素数１〜４の枝分れしてもよいアルキル基を表し、ｎ
は０〜４の整数を表す。）を表す。］ 【効果】 上記化合物は損傷を受けた脳神経細胞の修復
促進作用を有し、脳機能改善剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は神経細胞の再生を促進す
る物質および用途に関するものであり、その用途とし
て、脳機能障害の予防および治療剤を提供せんとするも
のである。
る物質および用途に関するものであり、その用途とし
て、脳機能障害の予防および治療剤を提供せんとするも
のである。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】近
年、老令人口の増加に伴い、老人性痴呆症を始めとする
高次脳機能障害の予防・治療剤の開発は、社会的にも学
術的にも重要な課題となっている。
年、老令人口の増加に伴い、老人性痴呆症を始めとする
高次脳機能障害の予防・治療剤の開発は、社会的にも学
術的にも重要な課題となっている。
【０００３】成人期以降に見られる高次脳機能障害は、
後天的、知的適応障害であり、その中心は記憶・学習・
情緒障害である。
後天的、知的適応障害であり、その中心は記憶・学習・
情緒障害である。
【０００４】記憶・学習・情緒等の機構は全くと云って
よいほど解明されていないが、これらの発現は、脳にお
ける神経回路網を介して行われており、障害は回路網を
構成している神経細胞群のどこかの神経細胞の機能低下
または、神経細胞の死に起因していると考えられる。
よいほど解明されていないが、これらの発現は、脳にお
ける神経回路網を介して行われており、障害は回路網を
構成している神経細胞群のどこかの神経細胞の機能低下
または、神経細胞の死に起因していると考えられる。
【０００５】神経細胞の機能低下による障害は機能を正
常化することで治療が可能であるが、神経細胞死による
障害は、残存している神経細胞や移植した神経細胞の代
償効果に期待がかかっているが、治療は現在不可能であ
る。
常化することで治療が可能であるが、神経細胞死による
障害は、残存している神経細胞や移植した神経細胞の代
償効果に期待がかかっているが、治療は現在不可能であ
る。
【０００６】神経細胞は、一般細胞と異なり、成熟する
と細胞分裂による再生はできない。従って、これらの障
害に対し治療のみで対応するのではなく、予防面からの
対応がより重要と考えられる。
と細胞分裂による再生はできない。従って、これらの障
害に対し治療のみで対応するのではなく、予防面からの
対応がより重要と考えられる。
【０００７】すなわち、神経細胞の生存を高め、再生を
促進し、また機能を高める薬物が高次脳機能障害の予防
・治療薬となり得る可能性がある。
促進し、また機能を高める薬物が高次脳機能障害の予防
・治療薬となり得る可能性がある。
【０００８】変性した神経細胞自身の再生、神経突起の
発芽、標的細胞への突起伸展、分岐形成、シナプス形成
および可塑性を促進させることにより神経回路とその機
能を再生させる薬剤が求められているが、このような薬
剤はまだない。
発芽、標的細胞への突起伸展、分岐形成、シナプス形成
および可塑性を促進させることにより神経回路とその機
能を再生させる薬剤が求められているが、このような薬
剤はまだない。
【０００９】これまでに、塩基性線維芽細胞成長因子
（ｂＦＧＦ）、インターロイキン２、トランスホーミン
グ グロスファクターβなどのサイトカインが、培養神
経細胞、長期増強ならびにｉｎ ｖｉｖｏ実験系などの
薬物評価系によって、神経細胞の生存・再生・機能維持
に重要な役割を果していることが知られている。
（ｂＦＧＦ）、インターロイキン２、トランスホーミン
グ グロスファクターβなどのサイトカインが、培養神
経細胞、長期増強ならびにｉｎ ｖｉｖｏ実験系などの
薬物評価系によって、神経細胞の生存・再生・機能維持
に重要な役割を果していることが知られている。
【００１０】その他の生体物質として、ポリアミン、
３，５，３′−トリヨードチロニン、非生体内物質とし
て、合成ポリアミンアナローグ（ＢＥＳＰＭ）、薬用人
参サポニン、カロチノイド色素、ビタミンＥ、ビタミン
Ｃなどにも効果が認められている。
３，５，３′−トリヨードチロニン、非生体内物質とし
て、合成ポリアミンアナローグ（ＢＥＳＰＭ）、薬用人
参サポニン、カロチノイド色素、ビタミンＥ、ビタミン
Ｃなどにも効果が認められている。
【００１１】ポリアミンは、３個以上のアミノ基を持つ
非蛋白性の脂肪族アミンで、核酸、蛋白合成を介して各
種細胞の増殖分化に重要な役割を果していることが知ら
れている。しかし、脳神経細胞に対する作用はほとんど
知られていなかった。
非蛋白性の脂肪族アミンで、核酸、蛋白合成を介して各
種細胞の増殖分化に重要な役割を果していることが知ら
れている。しかし、脳神経細胞に対する作用はほとんど
知られていなかった。
【００１２】最近、スペルミン、スペルミジン、プトレ
シンなどのポリアミンが、ラット培養海馬神経細胞の軸
索突起の伸展を促進する作用のあることが知られた
（Ｐ．Ｊ．Ｃｈｕ他，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，１９（１９９４）１５５〜１６０）。
シンなどのポリアミンが、ラット培養海馬神経細胞の軸
索突起の伸展を促進する作用のあることが知られた
（Ｐ．Ｊ．Ｃｈｕ他，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，１９（１９９４）１５５〜１６０）。
【００１３】また、スペルミンが、ラット胎児初代培養
海馬神経細胞の生存を高める作用があるのに対して、ス
ペルミジンやＰｕｔｒｅｓｃｉｎｅなど他のポリアミン
にはこのような神経細胞の生存を高める作用のない（神
経細胞の生存に影響を及ぼさない）ことが最近知られた
（Ｋ．Ａｂｅ他，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６０
５（１９９３），３２２〜３２６）。
海馬神経細胞の生存を高める作用があるのに対して、ス
ペルミジンやＰｕｔｒｅｓｃｉｎｅなど他のポリアミン
にはこのような神経細胞の生存を高める作用のない（神
経細胞の生存に影響を及ぼさない）ことが最近知られた
（Ｋ．Ａｂｅ他，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６０
５（１９９３），３２２〜３２６）。
【００１４】これらのことから、ポリアミンの作用点は
複数存在し、ポリアミンにより、神経細胞等に対する作
用点をそれぞれ異にすることが考えられるが、その作用
様式や作用本態あるいはそれらの活性と化学構造との関
連性についてはまったく未知であった。
複数存在し、ポリアミンにより、神経細胞等に対する作
用点をそれぞれ異にすることが考えられるが、その作用
様式や作用本態あるいはそれらの活性と化学構造との関
連性についてはまったく未知であった。
【００１５】アルツハイマー病やパーキンソン病などの
脳機能障害はそのほとんど全てが神経細胞の変性・脱落
に起因するものと考えられる。
脳機能障害はそのほとんど全てが神経細胞の変性・脱落
に起因するものと考えられる。
【００１６】一般に脳が障害を受けたり虚血状態になる
と神経細胞は突起の損傷、切断などにより逆行性に軸索
変性の状態に至る。神経細胞は一般的細胞と異なり、成
熟すると細胞分裂という形で再生することができない。
と神経細胞は突起の損傷、切断などにより逆行性に軸索
変性の状態に至る。神経細胞は一般的細胞と異なり、成
熟すると細胞分裂という形で再生することができない。
【００１７】従って、このような神経疾患の治療法とし
ては、変性した神経細胞自身の再生、神経突起の発芽、
標的細胞への突起伸展およびシナプスの形成など神経回
路網の再生を促すことが必要であると考えられる。
ては、変性した神経細胞自身の再生、神経突起の発芽、
標的細胞への突起伸展およびシナプスの形成など神経回
路網の再生を促すことが必要であると考えられる。
【００１８】このような脳機能修復改善に関係すると考
えられる、損傷を受け機能の低下した脳神経細胞に対す
るポリアミンの修復・再生作用の有無については、これ
までまったく知られていなかった。また、その作用を的
確にかつ能率的に検定する方法論も確立していなかっ
た。
えられる、損傷を受け機能の低下した脳神経細胞に対す
るポリアミンの修復・再生作用の有無については、これ
までまったく知られていなかった。また、その作用を的
確にかつ能率的に検定する方法論も確立していなかっ
た。
【００１９】
【問題を解決するための手段】本発明者は、薬物の、傷
ついた神経細胞の修復作用を評価するための独得の手法
を開発し研究を進めた結果、本発明のポリアミンが、お
どろくべきことに、突起損傷後の神経細胞からの突起の
再伸展を促進する作用のあること、すなわち、傷ついた
神経細胞の修復作用のあることを初めて見出した。
ついた神経細胞の修復作用を評価するための独得の手法
を開発し研究を進めた結果、本発明のポリアミンが、お
どろくべきことに、突起損傷後の神経細胞からの突起の
再伸展を促進する作用のあること、すなわち、傷ついた
神経細胞の修復作用のあることを初めて見出した。
【００２０】例えば、既存の神経栄養因子であるｂＦＧ
Ｆ（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒ）は、神経細胞の樹状突起の伸展（分枝
形成や樹状突起の伸長）を促進はするが、神経細胞の軸
索の再伸展を促す効果はない。
Ｆ（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒ）は、神経細胞の樹状突起の伸展（分枝
形成や樹状突起の伸長）を促進はするが、神経細胞の軸
索の再伸展を促す効果はない。
【００２１】これに対して、本発明のポリアミンは、分
枝形成や樹状突起の伸展には影響を及ぼさないが、損傷
部位からの軸索の再伸展を特異的に促進する。従って、
本発明のポリアミンと既存の神経栄養因子、例えば、ｂ
ＦＧＦとを併用することにより、損傷部位からの再伸展
と分枝形成の両方が促進されたうえ、再生された軸索に
おける分枝数に関し相乗的な併用効果もあることが示さ
れた。
枝形成や樹状突起の伸展には影響を及ぼさないが、損傷
部位からの軸索の再伸展を特異的に促進する。従って、
本発明のポリアミンと既存の神経栄養因子、例えば、ｂ
ＦＧＦとを併用することにより、損傷部位からの再伸展
と分枝形成の両方が促進されたうえ、再生された軸索に
おける分枝数に関し相乗的な併用効果もあることが示さ
れた。
【００２２】このことは、軸索の再伸展と分岐形成がそ
れぞれ独立したメカニズムにより調節されていることを
示唆するものである。 すなわち、本発明のポリアミン
が他の、作用機序の異なる脳機能改善剤と併用した場合
にも有効であろうとの示唆を与えるものである。
れぞれ独立したメカニズムにより調節されていることを
示唆するものである。 すなわち、本発明のポリアミン
が他の、作用機序の異なる脳機能改善剤と併用した場合
にも有効であろうとの示唆を与えるものである。
【００２３】本発明者はまた、この作用を有するために
必要とされる化学構造要求性、すなわち構造活性相関に
関しても検討を進めた結果、図７に示したように特定の
部分化学構造が損傷後の神経細胞の修復増強作用発現に
必須であることを見出した（図７）。
必要とされる化学構造要求性、すなわち構造活性相関に
関しても検討を進めた結果、図７に示したように特定の
部分化学構造が損傷後の神経細胞の修復増強作用発現に
必須であることを見出した（図７）。
【００２４】さらには、本発明のポリアミンの中でも、
スペルミンは多彩な作用、すなわち、脳神経細胞の生存
を高める作用、突起損傷後の突起の再伸展を促進する作
用、腹側中脳神経細胞のドパミン取込みを増強する作用
（抗パーキンソン病作用）などの作用を有することを見
出した。
スペルミンは多彩な作用、すなわち、脳神経細胞の生存
を高める作用、突起損傷後の突起の再伸展を促進する作
用、腹側中脳神経細胞のドパミン取込みを増強する作用
（抗パーキンソン病作用）などの作用を有することを見
出した。
【００２５】以上の如くして、本発明は以下の式（１）
【化３】 〔式（１）中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 はそれぞれ独立
して水素原子または基
して水素原子または基
【化４】 （ただし、Ｒ5 、Ｒ6 はそれぞれ独立して水素原子また
は炭素数１〜４の枝分れしてもよいアルキル基を表し、
ｎは０〜４の整数を表す。）を表す。〕で示される化合
物を有効成分として含んでなる脳機能改善剤を提供せん
とするものであり、以上にその概要を述べた新しい知見
に基づいてなされたものである。
は炭素数１〜４の枝分れしてもよいアルキル基を表し、
ｎは０〜４の整数を表す。）を表す。〕で示される化合
物を有効成分として含んでなる脳機能改善剤を提供せん
とするものであり、以上にその概要を述べた新しい知見
に基づいてなされたものである。
【００２６】本発明の化合物は抗痴呆薬をはじめとする
脳機能改善薬として有用な医薬となり得るものである。
適用疾患の例としては、多発梗塞性痴呆、アミロイド
アンギオパチー性痴呆などの脳血管性痴呆、アルツハイ
マー型痴呆、ビック病などの脳実質性痴呆、脳機能障害
による痴呆、以上の痴呆に随伴する症候などが挙げられ
る。
脳機能改善薬として有用な医薬となり得るものである。
適用疾患の例としては、多発梗塞性痴呆、アミロイド
アンギオパチー性痴呆などの脳血管性痴呆、アルツハイ
マー型痴呆、ビック病などの脳実質性痴呆、脳機能障害
による痴呆、以上の痴呆に随伴する症候などが挙げられ
る。
【００２７】さらに、スペルミンは、そのドパミン取込
み促進作用より、パーキンソン病などの神経細胞シナプ
スにおけるドパミンの放出や取込みの減弱、ドパミンニ
ューロンの欠失、ドパミン作動神経のドパミン感受性の
減弱などに関連した疾病の治療ないし予防薬としても有
用である。
み促進作用より、パーキンソン病などの神経細胞シナプ
スにおけるドパミンの放出や取込みの減弱、ドパミンニ
ューロンの欠失、ドパミン作動神経のドパミン感受性の
減弱などに関連した疾病の治療ないし予防薬としても有
用である。
【００２８】本発明の化合物を製剤化するためには、製
剤の技術分野における通常の方法を用いて製剤化するこ
とができる。
剤の技術分野における通常の方法を用いて製剤化するこ
とができる。
【００２９】投与量は、剤形によっても異なるが、経口
投与の場合、一般に成人一日当りの投与量は０．１〜２
０ｇ程度であり、注射剤の場合は、一般に成人一日当た
りの投与量は０．０１〜２ｇ程度である。
投与の場合、一般に成人一日当りの投与量は０．１〜２
０ｇ程度であり、注射剤の場合は、一般に成人一日当た
りの投与量は０．０１〜２ｇ程度である。
【００３０】経口投与の剤型は、特に限定されるもので
はないが、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤と
することができるが、必要に応じて、主薬の他に賦形
剤、結合剤、崩解剤、滑沢剤、着色剤などを加えて、常
法により、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
などとすることができる。
はないが、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤と
することができるが、必要に応じて、主薬の他に賦形
剤、結合剤、崩解剤、滑沢剤、着色剤などを加えて、常
法により、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
などとすることができる。
【００３１】また、本発明の薬剤は非経口的にも投与で
き、その場合は、薬物は溶液または懸濁液の状態で注射
剤として投与することができる。
き、その場合は、薬物は溶液または懸濁液の状態で注射
剤として投与することができる。
【００３２】製剤とする場合、有機酸または無機酸との
薬理学的に許容される塩の形で用いられてもよい。
薬理学的に許容される塩の形で用いられてもよい。
【００３３】この場合に用いられる酸は、通常塩基性薬
物を製剤上好ましい形の酸との塩を形成させるために用
いられる各種の有機酸や無機酸が用いられ、塩形成の技
術も通常のアミン塩の製造技術により行なうことができ
る。
物を製剤上好ましい形の酸との塩を形成させるために用
いられる各種の有機酸や無機酸が用いられ、塩形成の技
術も通常のアミン塩の製造技術により行なうことができ
る。
【００３４】本発明の化合物は、哺乳動物に対する毒性
が低く安全性の高い化合物である。
が低く安全性の高い化合物である。
【００３５】
【実施例】 実施例１ 傷ついた神経細胞に対するポリアミンの効果
【００３６】〔方法〕培養液と試薬 神経細胞の培養には２種の培地を用いた。細胞単離操作
中と単離後培養プレートに細胞を接着させるまでのイン
キュベーション中は、グルコースを増量し血清を添加し
た修正Ｅａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（培地Ａ）を用いた。し
かし、血清を含む培地は薬物効果の検討を複雑にするの
で、薬物投与時は、ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ、ｉｎｓｕ
ｌｉｎ、ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅを加えた無血清の修
正Ｅａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（培地Ｂ）を用いた。これら
培地の具体的な組成は次の通りである。
中と単離後培養プレートに細胞を接着させるまでのイン
キュベーション中は、グルコースを増量し血清を添加し
た修正Ｅａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（培地Ａ）を用いた。し
かし、血清を含む培地は薬物効果の検討を複雑にするの
で、薬物投与時は、ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ、ｉｎｓｕ
ｌｉｎ、ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅを加えた無血清の修
正Ｅａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（培地Ｂ）を用いた。これら
培地の具体的な組成は次の通りである。
【００３７】 培地Ａ（血清入り） Eagle's MEM Nissui ７．２４ｍｇ／ｍｌ glucose ８．２０ｍｇ／ｍｌ Ｌ−glutamine ０．２９ｍｇ／ｍｌ NaHCO3 １．７０ｍｇ／ｍｌ sodium pyruvate ９９．００ｍｇ／ｍｌ penicillin G ８７．００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ streptomycin ９０．００μｇ／ｍｌ fetal bovine serum １０％（ｖ／ｖ） 培地Ｂ（無血清） Eagle's MEM Nissui ７．２４ｍｇ／ｍｌ glucose ８．２０ｍｇ／ｍｌ Ｌ−glutamine ０．２９ｍｇ／ｍｌ NaHCO3 １．７０ｍｇ／ｍｌ sodium pyruvate ９９．００ｍｇ／ｍｌ penicillin G ８７．００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ streptomycin ９０．００μｇ／ｍｌ human transferrin ５．００μｇ／ｍｌ bovine insulin ５．００μｇ／ｍｌ progesterone ２０．００ｎＭ
【００３８】本発明で用いたポリアミンＳｐｅｒｍｉｎ
ｅ、Ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ、Ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ（Ｓ
ＩＧＭＡ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）は、すべてｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅに溶
かし、１０-2Ｍ溶液を調製し、これをｓｔｏｃｋ溶液と
して分注し、−２０℃で保存した。それぞれ、使用直前
に培地Ｂで適当に希釈して用いた。
ｅ、Ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ、Ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ（Ｓ
ＩＧＭＡ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）は、すべてｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅに溶
かし、１０-2Ｍ溶液を調製し、これをｓｔｏｃｋ溶液と
して分注し、−２０℃で保存した。それぞれ、使用直前
に培地Ｂで適当に希釈して用いた。
【００３９】スペルミンとの作用比較および併用効果の
実験で用いたｂＦＧＦは、武田薬品工業株式会社より提
供された組み換え型ヒトｂＦＧＦのｍｕｔｅｉｎのひと
つＣＳ２３である。ＣＳ２３は構造変化による活性低下
を防ぐために天然型ヒトｂＦＧＦ分子中の７０と８８番
目の２つのシステイン残基をセリン残基に変えた修飾タ
ンパクである（天然型ヒトｂＦＧＦ分子は２６、７０、
８８、９３番目の位置に４つのシステイン残基をもって
いる）。ＣＳ２３の生物活性については天然型ヒトｂＦ
ＧＦとほとんど同じであることが確認されている。ｂＦ
ＧＦの凍結乾燥品を１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを
添加したｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ−ｓａ
ｌｉｎｅに溶解し１０μｇ／ｍｌ溶液を調製し、これを
ｓｔｏｃｋ溶液として分注し−２０℃で保存した。使用
直前に培地Ｂで適当な濃度に希釈して用いた。
実験で用いたｂＦＧＦは、武田薬品工業株式会社より提
供された組み換え型ヒトｂＦＧＦのｍｕｔｅｉｎのひと
つＣＳ２３である。ＣＳ２３は構造変化による活性低下
を防ぐために天然型ヒトｂＦＧＦ分子中の７０と８８番
目の２つのシステイン残基をセリン残基に変えた修飾タ
ンパクである（天然型ヒトｂＦＧＦ分子は２６、７０、
８８、９３番目の位置に４つのシステイン残基をもって
いる）。ＣＳ２３の生物活性については天然型ヒトｂＦ
ＧＦとほとんど同じであることが確認されている。ｂＦ
ＧＦの凍結乾燥品を１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを
添加したｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ−ｓａ
ｌｉｎｅに溶解し１０μｇ／ｍｌ溶液を調製し、これを
ｓｔｏｃｋ溶液として分注し−２０℃で保存した。使用
直前に培地Ｂで適当な濃度に希釈して用いた。
【００４０】培養基質 神経突起伸展の実験では、ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ
コートした３５ｍｍディシュ（Ｆａｌｃｏｎ，Ｉ０ｃｍ
2 ／ｄｉｓｈ）、神経突起再生の実験では、レーザー光
のエネルギーを熱に変換する特殊フィルムをコートした
スライドガラス（メリディアン）を、３５ｍｍディシュ
にシリコングリースで貼ったものを用いた。
コートした３５ｍｍディシュ（Ｆａｌｃｏｎ，Ｉ０ｃｍ
2 ／ｄｉｓｈ）、神経突起再生の実験では、レーザー光
のエネルギーを熱に変換する特殊フィルムをコートした
スライドガラス（メリディアン）を、３５ｍｍディシュ
にシリコングリースで貼ったものを用いた。
【００４１】脳神経細胞の単離と培養 実験には胎生１８日齢のＷｉｓｔａｒ系ラットを用い
た。エーテル麻酔下、無菌的に胎児より全脳を取り出し
これより切り出した海馬をメスで細切した後、０．２５
％トリプシンを含むＭａｇｎｅｓｉｕｍ，Ｃａｌｃｉｕ
ｍ ｆｒｅｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ
ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ（−））中で、２０分間インキ
ュベートしたこの酵素処理を２回行なった後、酵素液と
等量の馬血清を加えてトリプシンを失活させ、１２００
ｒｐｍ、５分間の遠心操作で組織片を分離した。上清を
捨て、１０％牛胎児血清を含む培地Ａ４ｍｌを加えて、
ピペットマン用１ｍｌチップを先端につけたプラスチッ
クメスピペットで泡立てないように２０回ピペッティン
グを行ない、次第に組織片より細胞を単離した。さらに
滅菌したナイロンメッシュ（４３μｍ）２枚で細胞液を
濾過して、分散されずに残った細胞塊を取り除いて、単
離細胞分散液を得た後、０．３％ｎｉｇｒｏｓｉｎｅ染
色により生存細胞数を記測した。単離細胞は培地Ａ（血
清入り）で細胞濃度を２５００ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製
した。ここに得られた細胞分散液をそれぞれｐｏｌｙ−
Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコートした３５ｍｍディシュおよびス
ライドガラス（メリディアン）を貼ったものに２５００
ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2 でまき、培地Ａ中で２４時間培養し
た後、培地Ｂに交換してさらに２４時間培養した。
た。エーテル麻酔下、無菌的に胎児より全脳を取り出し
これより切り出した海馬をメスで細切した後、０．２５
％トリプシンを含むＭａｇｎｅｓｉｕｍ，Ｃａｌｃｉｕ
ｍ ｆｒｅｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ
ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ（−））中で、２０分間インキ
ュベートしたこの酵素処理を２回行なった後、酵素液と
等量の馬血清を加えてトリプシンを失活させ、１２００
ｒｐｍ、５分間の遠心操作で組織片を分離した。上清を
捨て、１０％牛胎児血清を含む培地Ａ４ｍｌを加えて、
ピペットマン用１ｍｌチップを先端につけたプラスチッ
クメスピペットで泡立てないように２０回ピペッティン
グを行ない、次第に組織片より細胞を単離した。さらに
滅菌したナイロンメッシュ（４３μｍ）２枚で細胞液を
濾過して、分散されずに残った細胞塊を取り除いて、単
離細胞分散液を得た後、０．３％ｎｉｇｒｏｓｉｎｅ染
色により生存細胞数を記測した。単離細胞は培地Ａ（血
清入り）で細胞濃度を２５００ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製
した。ここに得られた細胞分散液をそれぞれｐｏｌｙ−
Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコートした３５ｍｍディシュおよびス
ライドガラス（メリディアン）を貼ったものに２５００
ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2 でまき、培地Ａ中で２４時間培養し
た後、培地Ｂに交換してさらに２４時間培養した。
【００４２】ＡＣＡＳ(adherent cell analysis syste
m) 470 Work Station ＡＣＡＳはコンピュータ、顕微鏡、レーザーシステムの
３つの部位から構成されている。ステージドライブモジ
ュールを介して、コンピュータにより顕微鏡のステージ
の位置を制御、記憶し、目的とする視野を正確に呼び出
すことができる。レーザーシステムはアルゴンイオンレ
ーザー（４８８ｎｍ）を搭載、レーザー強度はレーザー
の出力およびａｃｏｕｓｔ−ｏｐｕｃ−ｍｏｄｕｌａｔ
ｏ−（ＡＯＭ）により決定し、この両者はコンピュータ
により制御される。
m) 470 Work Station ＡＣＡＳはコンピュータ、顕微鏡、レーザーシステムの
３つの部位から構成されている。ステージドライブモジ
ュールを介して、コンピュータにより顕微鏡のステージ
の位置を制御、記憶し、目的とする視野を正確に呼び出
すことができる。レーザーシステムはアルゴンイオンレ
ーザー（４８８ｎｍ）を搭載、レーザー強度はレーザー
の出力およびａｃｏｕｓｔ−ｏｐｕｃ−ｍｏｄｕｌａｔ
ｏ−（ＡＯＭ）により決定し、この両者はコンピュータ
により制御される。
【００４３】神経突起伸展の評価法 培地Ｂに交換してさらに２４時間培養した後、ＡＣＡＳ
Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎを用いて突起を形成した細
胞を選び、その位置をコンピュータに記憶させた。薬物
を添加し、添加直前、２４および４８時間後の同一細胞
の写真を撮影し、デジタイザーを用いて各種形態パラメ
ーターを測定した。細胞は各群２５〜３０細胞を選択
し、４８時間後に生存していた細胞のみを測定対象とし
た。
Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎを用いて突起を形成した細
胞を選び、その位置をコンピュータに記憶させた。薬物
を添加し、添加直前、２４および４８時間後の同一細胞
の写真を撮影し、デジタイザーを用いて各種形態パラメ
ーターを測定した。細胞は各群２５〜３０細胞を選択
し、４８時間後に生存していた細胞のみを測定対象とし
た。
【００４４】神経突起伸展の形態的パラメータ 本実験において測定した神経細胞の形態的パラメータは
以下の５つである。１）細胞あたりの突起数、２）軸索
の長さ、３）樹状突起の長さ、４）軸索における分岐
数、５）軸索における分岐の長さである。
以下の５つである。１）細胞あたりの突起数、２）軸索
の長さ、３）樹状突起の長さ、４）軸索における分岐
数、５）軸索における分岐の長さである。
【００４５】神経突起再生の評価法 神経突起伸展と同様に、培地Ｂに交換後２４時間で細胞
を選択し、写真撮影後、神経突起の成長円錐の基部にレ
ーザー光を照射し、突起の切断を行った。レーザー強度
は４０ｍＷ、ＡＯＭ３５％とした。切断直後に薬物を添
加し、２４および４８時間後の同一細胞の写真を撮影
し、デジタイザーを用いて各種形態パラメーターを測定
した。本実験でも４８時間後まで生存しなかった細胞は
測定対象から除外した。
を選択し、写真撮影後、神経突起の成長円錐の基部にレ
ーザー光を照射し、突起の切断を行った。レーザー強度
は４０ｍＷ、ＡＯＭ３５％とした。切断直後に薬物を添
加し、２４および４８時間後の同一細胞の写真を撮影
し、デジタイザーを用いて各種形態パラメーターを測定
した。本実験でも４８時間後まで生存しなかった細胞は
測定対象から除外した。
【００４６】神経突起再生の形態的パラメータ 本実験においてのパラメータは８つである。１）細胞体
からレーザー切断点までの軸索の長さ、２）レーザー切
断点から再生した軸索の長さ、３）再生した部分にある
分岐数、４）分岐を含む再生した軸索の長さ、５）レー
ザー切断点より細胞体に近い部分の分岐数、６）レーザ
ー切断点より細胞体に近い部分の分岐の長さ、７）細胞
体あたりの数、８）細胞体あたりの突起の長さである。
からレーザー切断点までの軸索の長さ、２）レーザー切
断点から再生した軸索の長さ、３）再生した部分にある
分岐数、４）分岐を含む再生した軸索の長さ、５）レー
ザー切断点より細胞体に近い部分の分岐数、６）レーザ
ー切断点より細胞体に近い部分の分岐の長さ、７）細胞
体あたりの数、８）細胞体あたりの突起の長さである。
【００４７】［結果］まずコントロール条件下での海馬
神経細胞の形態に対するレーザーの影響を図１に示す。
図の左のカラムはＩｎｔａｃｔ(無処置)群で、右のカラ
ムはレーザー照射群である。海馬神経細胞の軸索の成長
円錐にレーザー照射を行った場合、軸索の伸展が停止し
た。他は、何ら神経細胞の形態に変化は認められなかっ
た。
神経細胞の形態に対するレーザーの影響を図１に示す。
図の左のカラムはＩｎｔａｃｔ(無処置)群で、右のカラ
ムはレーザー照射群である。海馬神経細胞の軸索の成長
円錐にレーザー照射を行った場合、軸索の伸展が停止し
た。他は、何ら神経細胞の形態に変化は認められなかっ
た。
【００４８】次に、図２に、神経細胞損傷後の軸索の再
伸展に対するポリアミン効果を示す。スペルミン、スペ
ルミジン、プトレシン共、１０-8Ｍの濃度で、損傷後の
軸索の再伸展を強く促進した。また３種のポリアミンの
用量依存性および最大効果の大きさも類似していた。
伸展に対するポリアミン効果を示す。スペルミン、スペ
ルミジン、プトレシン共、１０-8Ｍの濃度で、損傷後の
軸索の再伸展を強く促進した。また３種のポリアミンの
用量依存性および最大効果の大きさも類似していた。
【００４９】図３に、再生した軸索における分岐数に対
するポリアミンの効果を示す。スペルミン、プトレシン
に促進作用が見られた。
するポリアミンの効果を示す。スペルミン、プトレシン
に促進作用が見られた。
【００５０】図４に、レーザー切断点から再生した部分
を含む総突起長に対するポリアミンの効果を示す。３種
のポリアミンはいずれも顕著な促進効果が認められた。
を含む総突起長に対するポリアミンの効果を示す。３種
のポリアミンはいずれも顕著な促進効果が認められた。
【００５１】以上、３つのポリアミンはいずれも単独で
突起再伸展促進効果を示したが、スペルミンとスペルミ
ジンまたはスペルミンとプトレシンを併用した場合は単
独添加と同程度の効果が認められ、併用による相加効果
は観察されなかった。
突起再伸展促進効果を示したが、スペルミンとスペルミ
ジンまたはスペルミンとプトレシンを併用した場合は単
独添加と同程度の効果が認められ、併用による相加効果
は観察されなかった。
【００５２】培養海馬神経細胞の突起再伸展に対するポ
リアミン、ｂＦＧＦの併用効果 図５にそれぞれ最大効果を示す濃度のｂＦＧＦ（１ｎｇ
／ｍｌ）とスペルミン（１０-8Ｍ）を併用した場合の８
つのパラメータを示している。図６にはスペルミン、ｂ
ＦＧＦおよび両者の併用時の作用パターンを模式化して
示している。ｂＦＧＦはスペルミンと異なり損傷部位か
らの再伸展の長さおよび分岐を含む総突起長について
は、まったく影響がなかったが、新しく形成された分岐
数とその伸展を顕著に促進した。またスペルミンとｂＦ
ＧＦを同時に添加すると、再生した軸索における分岐数
での相乗効果が認められた。
リアミン、ｂＦＧＦの併用効果 図５にそれぞれ最大効果を示す濃度のｂＦＧＦ（１ｎｇ
／ｍｌ）とスペルミン（１０-8Ｍ）を併用した場合の８
つのパラメータを示している。図６にはスペルミン、ｂ
ＦＧＦおよび両者の併用時の作用パターンを模式化して
示している。ｂＦＧＦはスペルミンと異なり損傷部位か
らの再伸展の長さおよび分岐を含む総突起長について
は、まったく影響がなかったが、新しく形成された分岐
数とその伸展を顕著に促進した。またスペルミンとｂＦ
ＧＦを同時に添加すると、再生した軸索における分岐数
での相乗効果が認められた。
【００５３】構造活性相関 図７に突起再伸展促進作用の構造要求性を示す。末端の
アミノ基が１級アミンで活性が強まること、また、中央
の２つの窒素原子にはさまれた炭素数（窒素原子間の距
離）が、再伸展促進作用を決定していると考えられる。
アミノ基が１級アミンで活性が強まること、また、中央
の２つの窒素原子にはさまれた炭素数（窒素原子間の距
離）が、再伸展促進作用を決定していると考えられる。
【００５４】実施例２ 神経細胞へのドパミン（ＤＡ）
の取込みに対するスペルミンの効果 〔方法〕培養液 細胞単離操作中と単離後培養プレートに細胞を接着させ
るまでのインキュベーション中は、グルコースを増量し
血清を添加した修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ａ）を使用し
た。薬物を添加する際には、血清を含まない完全合成培
地として、ＤＦ培地にｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ，ｉｎｓ
ｕｌｉｎ，ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ（ＴＩＰ）など神
経細胞の生存維持に有効とされる添加物を加えたＤＦ／
ＴＩＰ培地（ｂ）を使用した。
の取込みに対するスペルミンの効果 〔方法〕培養液 細胞単離操作中と単離後培養プレートに細胞を接着させ
るまでのインキュベーション中は、グルコースを増量し
血清を添加した修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ａ）を使用し
た。薬物を添加する際には、血清を含まない完全合成培
地として、ＤＦ培地にｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ，ｉｎｓ
ｕｌｉｎ，ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ（ＴＩＰ）など神
経細胞の生存維持に有効とされる添加物を加えたＤＦ／
ＴＩＰ培地（ｂ）を使用した。
【００５５】 （ａ）修正Ｅａｇｌｅ's培地（血清添加） Eagle's ＭＥＭ 粉末（Nissui） ７．４２ｍｇ／ｍｌ glucose ８．２ ｍｇ／ｍｌ Ｌ−glutamine ０．２９ｍｇ／ｍｌ NaHCO3 １．７ｍｇ／ｍｌ penicillin G ８７ ｕｎｉｔｓ／ｍｌ streptomycin ９０ μｇ／ｍｌ ウシ胎児血清 １０％（ｖ／ｖ）
【００５６】（ｂ）ＤＦ／ＴＩＰ培地（無血清） Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌ
ｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）とＨａｍ’ｓ ｎ
ｕｔｒｉｅｎｔ ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ−１２（Ｇｉｂｃ
ｏ）の等量混合液に以下のものを添加。 NaHCO3 １．８５ｍｇ／ｍｌ Na2SeO3 ３０ ｎＭ HEPES-NaOH buffer(pH 7.4) １５ ｍＭ penicillin Ｇ ５０ units/ml streptomycin sulfate １００ μｇ／ｍｌ human transferrin ５ μｇ／ｍｌ bovine insulin ５ μｇ／ｍｌ progesterone ２０ ｎＭ
ｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）とＨａｍ’ｓ ｎ
ｕｔｒｉｅｎｔ ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ−１２（Ｇｉｂｃ
ｏ）の等量混合液に以下のものを添加。 NaHCO3 １．８５ｍｇ／ｍｌ Na2SeO3 ３０ ｎＭ HEPES-NaOH buffer(pH 7.4) １５ ｍＭ penicillin Ｇ ５０ units/ml streptomycin sulfate １００ μｇ／ｍｌ human transferrin ５ μｇ／ｍｌ bovine insulin ５ μｇ／ｍｌ progesterone ２０ ｎＭ
【００５７】培養基質 あらかじめ、ポリスチレン製の培養プレートに０．１ｍ
ｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ・ＨＣｌ水溶液
を各培養ウェル中にいれて２４時間放置した後、蒸留水
でよく洗い、乾燥させて細胞が接着しやすいようにして
使用した。
ｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ・ＨＣｌ水溶液
を各培養ウェル中にいれて２４時間放置した後、蒸留水
でよく洗い、乾燥させて細胞が接着しやすいようにして
使用した。
【００５８】脳神経細胞の単離と培養 Ｗｉｓｔａｒ系ラット１８日齢（ＤＡの取り込み実験で
は１６日齢）胎児より無菌的に全脳を取り出し、海馬ｈ
ｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ、小脳ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ、中
隔野ｓｅｐｔｕｍ、腹側中脳ｖｅｎｔｒａｌ ｍｉｄｂ
ｒａｉｎといった各実験の目的部位を切り分けた。各組
織をメスで細切りして、０．２５％ ｔｒｙｐｓｉｎ、
０．０１％ ＤＮａｓｅ Ｉ、０．５％ ｇｌｕｃｏｓ
ｅを含むｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａ
ｌｉｎｅ（ＰＢＳ）中、３７℃で２０分間インキュベー
トし、酵素処理した。十分量の馬血清を添加して酵素反
応を停止させた後、１，２００ｒｐｍで５分間遠心して
組織片を分離した。上澄みを捨て、１０％ウシ胎児血清
を含む修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地を加えて再び組織を分散
させ、先端径１ｍｍのプラスチック製チップをつけたピ
ペットで分散液を吸い上げて吐き出すことを２０回繰り
返して、次第に組織片より細胞を単離した。この細胞分
散液を３５〜４０μｍ目のナイロン網（２枚重ね）を通
して残存する組織片を除いて単離細胞分散液を得た。細
胞分散液の一部を０．３％ ｎｉｇｒｏｓｉｎｅ溶液を
混合して、血算盤を用いて分散液中に含まれる生存細胞
密度を算出した。この計数結果をもとに、１０％ウシ胎
児血清を含む修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地を加えて細胞分散
液をさらに希釈して、一定密度（生存評価時には２×１
０5 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＣｈＡＴ活性測定時には１．６
×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＤＡ取り込み測定時には２
×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の生存細胞を含む分散液を
調整した。ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅでｃｏａｔｉｎｇした
培養プレートに、１ウェル（底面積１ｃｍ2 ＜ＤＡの取
り込み実験では２ｃｍ2 ＞）あたり５００μｌずつ細胞
分散液をまいた。培養プレートを湿った５％ ＣＯ2 −
９５％空気を循環させた培養インキュベータに静置し
た。２４時間後に、培養液を血清を含まないＤＦ／ＴＩ
Ｐ培地に交換した。薬物はこの培地交換と同時に添加し
た。その後、培養インキュベータ中でさらに３日間培養
した。
は１６日齢）胎児より無菌的に全脳を取り出し、海馬ｈ
ｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ、小脳ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ、中
隔野ｓｅｐｔｕｍ、腹側中脳ｖｅｎｔｒａｌ ｍｉｄｂ
ｒａｉｎといった各実験の目的部位を切り分けた。各組
織をメスで細切りして、０．２５％ ｔｒｙｐｓｉｎ、
０．０１％ ＤＮａｓｅ Ｉ、０．５％ ｇｌｕｃｏｓ
ｅを含むｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａ
ｌｉｎｅ（ＰＢＳ）中、３７℃で２０分間インキュベー
トし、酵素処理した。十分量の馬血清を添加して酵素反
応を停止させた後、１，２００ｒｐｍで５分間遠心して
組織片を分離した。上澄みを捨て、１０％ウシ胎児血清
を含む修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地を加えて再び組織を分散
させ、先端径１ｍｍのプラスチック製チップをつけたピ
ペットで分散液を吸い上げて吐き出すことを２０回繰り
返して、次第に組織片より細胞を単離した。この細胞分
散液を３５〜４０μｍ目のナイロン網（２枚重ね）を通
して残存する組織片を除いて単離細胞分散液を得た。細
胞分散液の一部を０．３％ ｎｉｇｒｏｓｉｎｅ溶液を
混合して、血算盤を用いて分散液中に含まれる生存細胞
密度を算出した。この計数結果をもとに、１０％ウシ胎
児血清を含む修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地を加えて細胞分散
液をさらに希釈して、一定密度（生存評価時には２×１
０5 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＣｈＡＴ活性測定時には１．６
×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＤＡ取り込み測定時には２
×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の生存細胞を含む分散液を
調整した。ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅでｃｏａｔｉｎｇした
培養プレートに、１ウェル（底面積１ｃｍ2 ＜ＤＡの取
り込み実験では２ｃｍ2 ＞）あたり５００μｌずつ細胞
分散液をまいた。培養プレートを湿った５％ ＣＯ2 −
９５％空気を循環させた培養インキュベータに静置し
た。２４時間後に、培養液を血清を含まないＤＦ／ＴＩ
Ｐ培地に交換した。薬物はこの培地交換と同時に添加し
た。その後、培養インキュベータ中でさらに３日間培養
した。
【００５９】培養腹側中脳神経細胞のＤＡ取り込みの測
定 培養終了に当たり、培養液を除いてＰＢＳで１度洗い、
各ｗｅｌｌ ０．５ｍｌずつＰＢＳを加えて３７℃の温
浴上でプレインキュベーションを行った。各ｗｅｌｌに
3ＨでラベルしたＤＡ（０．９ＫＢｑ／μｌ）を１０．
５μｌ添加し３７℃で２０分間インキュベートした。プ
レートごと氷浴上に移し、氷冷したＰＢＳで洗って取り
込みを止めた。０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を
各ｗｅｌｌ ０．３ｍｌ添加し、ホモジナイザーを用い
て細胞を粉砕した。各ｗｅｌｌ ６００μｌずつバイヤ
ルに移し、Ａｑｕａｓｏｌ ５ｍｌを加えて液体シンチ
レーションカウンターを用いて放射活性を測定した。残
ったホモジナイザーを用いて、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によ
りタンパク量を測定してタンパク量当りの放射活性を求
めた。
定 培養終了に当たり、培養液を除いてＰＢＳで１度洗い、
各ｗｅｌｌ ０．５ｍｌずつＰＢＳを加えて３７℃の温
浴上でプレインキュベーションを行った。各ｗｅｌｌに
3ＨでラベルしたＤＡ（０．９ＫＢｑ／μｌ）を１０．
５μｌ添加し３７℃で２０分間インキュベートした。プ
レートごと氷浴上に移し、氷冷したＰＢＳで洗って取り
込みを止めた。０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を
各ｗｅｌｌ ０．３ｍｌ添加し、ホモジナイザーを用い
て細胞を粉砕した。各ｗｅｌｌ ６００μｌずつバイヤ
ルに移し、Ａｑｕａｓｏｌ ５ｍｌを加えて液体シンチ
レーションカウンターを用いて放射活性を測定した。残
ったホモジナイザーを用いて、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によ
りタンパク量を測定してタンパク量当りの放射活性を求
めた。
【００６０】［結果］培養腹側中脳神経細胞のＤＡ取り込みに対するｓｐｅｒ
ｍｉｎｅの効果 ｓｐｅｒｍｉｎｅは図８に示されるように、１ｎＭ〜１
００ｎＭの濃度範囲において濃度依存的にＤＡ取り込み
を増殖させ、１００ｎＭでは無添加群にくらべて有意な
増強作用を示した。
ｍｉｎｅの効果 ｓｐｅｒｍｉｎｅは図８に示されるように、１ｎＭ〜１
００ｎＭの濃度範囲において濃度依存的にＤＡ取り込み
を増殖させ、１００ｎＭでは無添加群にくらべて有意な
増強作用を示した。
【図１】 コントロール条件下での神経細胞の形態に対
するレーザー照射の影響を示す。
するレーザー照射の影響を示す。
【図２】 再生した軸索の長さに対するポリアミンの効
果を示す。
果を示す。
【図３】 再生した部分にある分岐数に対するポリアミ
ンの効果を示す。
ンの効果を示す。
【図４】 分岐を含む再生した軸索の長さに対するポリ
アミンの効果を示す。
アミンの効果を示す。
【図５】 神経突起再伸展におけるポリアミンとｂＦＧ
Ｆとの併用効果を示す。
Ｆとの併用効果を示す。
【図６】 スペルミンとｂＦＧＦとの併用効果パターン
の模式図である。
の模式図である。
【図７】 突起再伸展促進作用の構造要求性を示す。
【図８】 スペルミンのドパミンの取り込みに対する影
響を示す。
響を示す。
Claims (9)
- 【請求項１】 下記の式（１） 【化１】 〔式（１）中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 はそれぞれ独立
して水素原子または基 【化２】 （ただし、Ｒ5 、Ｒ6 はそれぞれ独立して水素原子また
は炭素数１〜４の枝分れしてもよいアルキル基を表し、
ｎは０〜４の整数を表す。）を表す。〕で示される化合
物を有効成分として含んでなる脳機能改善剤。 - 【請求項２】 式（１）中のＲ1 、Ｒ3 が共に水素原子
である請求項１記載の脳機能改善剤。 - 【請求項３】 式（１）中のＲ1 、Ｒ2 が共に水素原子
であり、ｎが３である請求項１記載の脳機能改善剤。 - 【請求項４】 式（１）中のＲ1 、Ｒ3 、Ｒ5 が共に水
素原子であり、ｎが３である請求項１記載の脳機能改善
剤。 - 【請求項５】 式（１）の化合物がスペルミン、スペル
ミジン、プトレシンまたはＮ，Ｎ′−ビス〔３−（エチ
ルアミノ）−ｎ−プロピル〕−１，４−ブタンジアミン
である請求項１記載の脳機能改善剤。 - 【請求項６】 式（１）の化合物がスペルミンである請
求項１記載の脳機能改善剤。 - 【請求項７】 請求項１記載の化合物を有効成分とする
損傷神経細胞の修復促進剤。 - 【請求項８】 請求項５記載の化合物を有効成分とする
損傷神経細胞の修復促進剤。 - 【請求項９】 スペルミンを有効成分とするパーキンソ
ン病治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2496595A JPH08217670A (ja) | 1995-02-14 | 1995-02-14 | 脳機能改善剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2496595A JPH08217670A (ja) | 1995-02-14 | 1995-02-14 | 脳機能改善剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08217670A true JPH08217670A (ja) | 1996-08-27 |
Family
ID=12152695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2496595A Pending JPH08217670A (ja) | 1995-02-14 | 1995-02-14 | 脳機能改善剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08217670A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003043616A3 (en) * | 2001-11-16 | 2003-10-16 | Als Therapy Dev Foundation Inc | Treatment of neurodegenerative disorders through the modulation of the polyamine pathway |
| US7087648B1 (en) | 1997-10-27 | 2006-08-08 | The Regents Of The University Of California | Methods for modulating macrophage proliferation using polyamine analogs |
| AU2002343609B2 (en) * | 2001-11-16 | 2008-12-11 | Als Therapy Development Foundation, Inc. | Treatment of neurodegenerative disorders through the modulation of the polyamine pathway |
| JP2013184956A (ja) * | 2012-03-09 | 2013-09-19 | Kyodo Milk Industry Co Ltd | 学習・記憶能力を増強するための食品 |
-
1995
- 1995-02-14 JP JP2496595A patent/JPH08217670A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7087648B1 (en) | 1997-10-27 | 2006-08-08 | The Regents Of The University Of California | Methods for modulating macrophage proliferation using polyamine analogs |
| US8008353B2 (en) | 1997-10-27 | 2011-08-30 | The Regents Of The University Of California | Methods for modulating macrophage proliferation using polyamine analogs |
| WO2003043616A3 (en) * | 2001-11-16 | 2003-10-16 | Als Therapy Dev Foundation Inc | Treatment of neurodegenerative disorders through the modulation of the polyamine pathway |
| AU2002343609B2 (en) * | 2001-11-16 | 2008-12-11 | Als Therapy Development Foundation, Inc. | Treatment of neurodegenerative disorders through the modulation of the polyamine pathway |
| JP2013184956A (ja) * | 2012-03-09 | 2013-09-19 | Kyodo Milk Industry Co Ltd | 学習・記憶能力を増強するための食品 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060131 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060613 |