JPH08140666A - New microorganism and degradation of polyester with the same - Google Patents

New microorganism and degradation of polyester with the same

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JPH08140666A
JPH08140666A JP28637494A JP28637494A JPH08140666A JP H08140666 A JPH08140666 A JP H08140666A JP 28637494 A JP28637494 A JP 28637494A JP 28637494 A JP28637494 A JP 28637494A JP H08140666 A JPH08140666 A JP H08140666A
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sphingomonas
decomposing
polyester
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富佐子 河合
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香織 利久
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卓二 中野
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Abstract

PURPOSE: To provide a method for degrading polyester, capable of degrading an aliphatic and aromatic polyester containing polyethylene glycol and utilizing the degradation products by allowing a specific microorganism mixture to act on the polyester. CONSTITUTION: The symbiotic system consisting of (A) Comamonas acidovorance, e.g. Comamonas acidovorance PAO-N2 (FERM P-14541), having an ability for degrading the aliphatic and aromatic polyester and utilizing the produced phthalic acid and (B) a microorganism belonging to the genus Sphingomonas having an ability for assimilating polyethylene glycol (PEG), e.g. Sphingomonas PAO-K1 (FERM P-14542) capable of assimilating the PEG having an average mol.wt. of <=4000 or a Sphingomonas PAO-N6 (FERM P-14543) capable of assimilating the PEG having an average mol.wt. of <=20000, is prepared and subsequently allowed to act on the polyester. The symbiotic system can degrade the PEG phthalate polyester, can perfectly utilize the degradation products, and is useful for bioreactors, waste water treatments, protein engineering, etc.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、一般に、優れたポリエ
ステル分解能を有した新規微生物、優れたポリエチレン
グリコール(以下、「PEG」と称する)分解能を有し
た新規微生物、および当該新規微生物の共生系を用いた
ポリエステル、特に、芳香族ポリエステルの分解方法に
関する。 具体的には、本発明による新規微生物は、フ
タル酸エステル、フタル酸あるいはPEG、およびその
誘導体を分解する能力を利用した、これら化合物の分
解、ならびにこれら化合物の分解を通じた有用成分の取
得に関する。
FIELD OF THE INVENTION The present invention generally relates to a novel microorganism having an excellent polyester decomposing ability, a novel microorganism having an excellent polyethylene glycol (hereinafter referred to as "PEG") decomposing ability, and a symbiotic system of the novel microorganism. To a method for decomposing a polyester, particularly an aromatic polyester. Specifically, the novel microorganism according to the present invention relates to the decomposition of these compounds by utilizing the ability to decompose phthalic acid ester, phthalic acid or PEG, and derivatives thereof, and the acquisition of useful components through the decomposition of these compounds.

【0002】[0002]

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】従来
より、脂肪族ポリエステルの分解についてはもはや周知
の域に達しているものの、芳香族ポリエステルの分解に
ついては困難とされてきた〔「生分解性高分子材料」、
pp.263-276 (1990) 、工業調査会、東京〕。 また、高
分子PEGの分解に関して、好気的共生系細菌または嫌
気的細菌による分解が報告されているが〔F. Kawai, CR
C Ctit. Rev. Biotechnol., 6, 273-307 (1987) 〕、ス
フィンゴモナス属に属する細菌については、スフィンゴ
モナス・マクロゴルタビダスならびにスフィンゴモナス
・テラエが、それぞれPEG4000とPEG2000(商品
名:PEGシリーズ(第一工業製薬株式会社))を資化で
きる菌であることが報告されているに過ぎない〔M. Tak
euchi, et al., System. Appl. Microbiol., 16,227-23
8 (1993)〕。 また、スフィンゴモナス・テラエは、リ
ゾビウム属に属する細菌との共存下でしか、PEGを資
化できないという条件上の制約がある。
BACKGROUND OF THE INVENTION Although the decomposition of aliphatic polyesters has hitherto been well known, it has been difficult to decompose aromatic polyesters [Biodegradability]. Polymeric material ",
pp.263-276 (1990), Industrial Research Committee, Tokyo]. Regarding the degradation of high molecular weight PEG, degradation by aerobic symbiotic bacteria or anaerobic bacteria has been reported [F. Kawai, CR
C Ctit. Rev. Biotechnol., 6, 273-307 (1987)]. It has only been reported that it is a bacterium that can assimilate the series (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.) [M. Tak
euchi, et al., System. Appl. Microbiol., 16,227-23
8 (1993)]. Further, Sphingomonas terrae has a restriction on the condition that it can assimilate PEG only in the coexistence with a bacterium belonging to the genus Rhizobium.

【0003】同様に、フタール酸エステル資化菌につい
ての報告もあるが〔倉根隆一郎、「バイオサイエンスと
インダストリー」、46、5、pp.3173-3177 (1988);「微
生物工学技術ハンドブック」、pp.477-490 (1990) 、朝
倉書店、東京〕、ポリエステルを特異的に分解する細菌
に係る報告は、未だされていない。
Similarly, there are reports on phthalate-utilizing bacteria [Ryuichiro Kurane, "Bioscience and Industry", 46, 5, pp.3173-3177 (1988); "Microbial Engineering Handbook", pp.477-490 (1990), Asakura Shoten, Tokyo], no report has yet been made regarding bacteria specifically degrading polyester.

【0004】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述した
従来技術の背景に鑑みて、フタール酸エステル分解能な
らびにPEG分解能双方を備えた微生物を検索すべく鋭
意検討を重ねた結果、本願出願人の四日市工場敷地内の
土壌から分離した混合培養試料、および大阪市住吉区内
の畑の土壌から分離した混合培養試料から、所望の特性
を有した細菌の単離に至り、本願発明を完成ならしめた
のである。
In view of the background of the above-mentioned prior art, the present inventors have made earnest studies to search for a microorganism having both phthalic acid ester decomposing ability and PEG decomposing ability. As a result, the present application Completed the present invention by isolating bacteria with desired characteristics from mixed culture samples isolated from soil on the site of human Yokkaichi factory and mixed culture samples isolated from soil from fields in Sumiyoshi Ward, Osaka City It was done.

【0005】すなわち、本願発明の要旨とするところ
は: (1) 脂肪族および芳香族ポリエステルを分解し、かつフ
タール酸資化能を有するコマモナス・アシドヴォラン
ス; (2) ポリエチレングリコール資化能を有するスフィンゴ
モナス属に属する新規微生物; (3) 前記微生物(1) および(2) の混合体〔共生系〕を調
製し、そして脂肪族および芳香族ポリエステルに作用さ
せる工程を含む、ポリエチレングリコールを含んだ脂肪
族および芳香族ポリエステルの分解方法; (4) 前記微生物(1) を、フタル酸エステルおよび/また
はフタル酸に作用させる工程を含む、フタル酸エステル
またはフタル酸の分解方法;および (5) 前記微生物(2) を、ポリエチレングリコールおよび
/またはポリエチレングリコール誘導体に作用させる工
程を含む、ポリエチレングリコールおよび/またはポリ
エチレングリコール誘導体の分解方法である。
That is, the gist of the present invention is: (1) Comamonas acidvolans, which decomposes aliphatic and aromatic polyesters and has the ability to assimilate phthalic acid; (2) the ability to assimilate polyethylene glycol. A novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas; (3) comprising polyethylene glycol, comprising a step of preparing a mixture (symbiotic system) of the microorganisms (1) and (2) and allowing it to act on aliphatic and aromatic polyesters (4) A method for decomposing an aliphatic or aromatic polyester; (4) A method for decomposing a phthalate or phthalic acid, which comprises a step of allowing the microorganism (1) to act on a phthalate and / or phthalic acid; and (5) A polyethylene comprising a step of allowing the microorganism (2) to act on polyethylene glycol and / or a polyethylene glycol derivative. A recall and / or decomposition process of a polyethylene glycol derivative.

【0006】本願発明によって取得された三つの代表的
な新規微生物〔それぞれ、「N2」、「K1」、「N
6」と命名した〕の生物学的特徴を決定するために、こ
れら新規微生物が有する菌学的性質、すなわち、形態的
性質、培地における生育状態、および生理学的性質に関
して検定を行った。
Three representative novel microorganisms obtained by the present invention [“N2”, “K1”, and “N”, respectively]
6) was determined to determine the biological characteristics of these novel microorganisms with respect to their bacteriological properties, ie, morphological properties, growth state in culture medium, and physiological properties.

【0007】なお、分類学上の諸性質は、以下の文献を
参照して決定した。
The taxonomic properties were determined with reference to the following documents.

【0008】I 「微生物の分類と同定」(長谷川武
治、編著)、学会出版センター、(1975) II 「微生物の化学分類実験法」(駒形和男、編)、学
会出版センター、(1982) III Barrow G.I. and Feltham R.K.A., "Cowan and St
eel's Manual for theIdentification of Medical Bact
eria", 3rd edition (1993), CambridgeUniversity Pre
ss. IV Board R.G., Jones D. and Skinner F.A., "Identi
fication Methods inApplied and Environmental Micro
biology", (1992) Society for AppliedBacteriology T
echnical Series 29. Blackwell Scientific. 検定の結果を、以下に列挙する。
I "Classification and Identification of Microorganisms" (Takeharu Hasegawa, ed.), Academic Society Publishing Center, (1975) II "Chemical Classification Experimental Method for Microorganisms" (Kazuo Komagata, ed.), Academic Publishing Center, (1982) III Barrow GI and Feltham RKA, "Cowan and St
eel's Manual for the Identification of Medical Bact
eria ", 3rd edition (1993), CambridgeUniversity Pre
ss. IV Board RG, Jones D. and Skinner FA, "Identi
fication Methods in Applied and Environmental Micro
biology ", (1992) Society for Applied Bacteriology T
echnical Series 29. Blackwell Scientific. The results of the test are listed below.

【0009】N2の菌学的性質 Mycological properties of N2

【0010】[0010]

【表5】 [Table 5]

【0011】[0011]

【表6】 [Table 6]

【0012】K1の菌学的性質 Mycological properties of K1

【0013】[0013]

【表7】 [Table 7]

【0014】N6の菌学的性質 Mycological properties of N6

【0015】[0015]

【表8】 [Table 8]

【0016】なお、上記したK1およびN6は、細胞壁
脂肪酸組成ならびにキノン組成が、従前のスフィンゴモ
ナス・マクロゴルタビダスならびにスフィンゴモナス・
テラエとは全く異なり、特に、N6は、この細菌単独で
も、PEGを特異的に資化できる特徴を有していた。
The above-mentioned K1 and N6 have the same cell wall fatty acid composition and quinone composition as those of the conventional Sphingomonas macrogoltabidas and Sphingomonas.
In contrast to Terae, N6 had a feature that PEG could be specifically assimilated even by this bacterium alone.

【0017】上記した各新規微生物の諸性質について、
バージェイのマニュアル〔Bergey'sManual of Systemat
ic Bacteriology, Vols. 1-4〕と対照させて検索したと
ころ、N2は、コマモナス・アシドヴォランスが有する
諸性質とよく対応したので、コマモナス・アシドヴォラ
ンス PAO-N2 と命名した。 一方で、K1とN6は、共
にコリネ型細菌であるものの、同マニュアルにおいて該
当する種は検索されなかったが、M. Takeuchi らのスフ
ィンゴモナス属細菌の同定に関する報告〔M.Takeuchi,
et al., System. Appl. Microbiol., 16, 227-238 (199
3)〕ならびに同文献にて参考文献として挙げられている
文献の開示から、スフィンゴモナス属に属するものと判
断し、スフィンゴモナス PAO-K1 およびスフィンゴモナ
ス PAO-N6 とそれぞれ命名した。 しかしながら、前述
したように、本願発明のK1とN6は、細胞壁脂肪酸組
成、キノン組成、ならびにPEG資化能が独特であるこ
とから、これら参考文献に開示されたスフィンゴモナス
属細菌とは別異のものであると考えられる。
Regarding the properties of each of the above novel microorganisms,
Bergey's Manual of Systemat
ic Bacteriology, Vols. 1-4] and N2 corresponded well with various properties of Comamonas acidovorans, and thus was named Comamonas acidovorans PAO-N2. On the other hand, although K1 and N6 are both coryneform bacteria, no corresponding species was searched for in the manual, but a report on the identification of Sphingomonas spp. By M. Takeuchi et al. [M. Takeuchi,
et al., System. Appl. Microbiol., 16, 227-238 (199
3)] and the disclosure of the document cited as a reference in the same document, it was determined to belong to the genus Sphingomonas and named Sphingomonas PAO-K1 and Sphingomonas PAO-N6, respectively. However, as described above, since K1 and N6 of the present invention are unique in cell wall fatty acid composition, quinone composition, and PEG assimilation ability, they are different from the sphingomonas bacteria disclosed in these references. Considered to be a thing.

【0018】なお、本願発明にて得られた、これらコマ
モナス・アシドヴォランス PAO-N2、スフィンゴモナス
PAO-K1 およびスフィンゴモナス PAO-N6 は、平成6年
9月19日に、茨城県つくば市東町1丁目1番3号に所在
の通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所にて寄託
され、そして、〔PAO-N2の名称で〕受託番号 FERM P-14
541 ;〔PAO-K1の名称で〕受託番号 FERM P-14542 ;
〔PAO-N6の名称で〕受託番号 FERM P-14543 が付与され
ており、本願発明は、これら寄託微生物自体はもちろ
ん、前述した能力を有するその変異体および子孫まで意
図するものである。
The Comamonas acidvolans PAO-N2 and the sphingomonas obtained in the present invention
PAO-K1 and Sphingomonas PAO-N6 were deposited on September 19th, 1994 at the Institute for Microbial Engineering, Ministry of International Trade and Industry, Ministry of International Trade and Industry, 1-3-3 Higashimachi, Tsukuba, Ibaraki. And [under the name of PAO-N2] accession number FERM P-14
541; [under the name of PAO-K1] accession number FERM P-14542;
Accession number FERM P-14543 is given [under the name of PAO-N6], and the present invention contemplates not only these deposited microorganisms but also mutants and progeny thereof having the above-mentioned ability.

【0019】次に、このようにして得られた細菌の混合
培養系でのポリエステルの分解方法〔実験室規模〕の概
略を述べると、まず、ポリエステルを構成するPEGの
分子量に対応できるよう、コマモナス・アシドヴォラン
ス PAO-N2 と、スフィンゴモナス PAO-K1 あるいはスフ
ィンゴモナス PAO-N6 を、選択・準備する。 そして、
培地として、下記表9に記載の培地組成に従って調製し
た基本培地を用いた。
Next, an outline of the method for degrading polyester (laboratory scale) in the thus obtained mixed culture system of bacteria will be described. First, in order to correspond to the molecular weight of PEG constituting the polyester, Comamonas・ Choose and prepare Asidovorans PAO-N2 and Sphingomonas PAO-K1 or Sphingomonas PAO-N6. And
As the medium, a basal medium prepared according to the medium composition shown in Table 9 below was used.

【0020】[0020]

【表9】 [Table 9]

【0021】この基本培地に、適当なポリエステルを加
えて滅菌した後に、コマモナス・アシドヴォランス PAO
-N2 と、スフィンゴモナス PAO-K1 あるいはスフィンゴ
モナス PAO-N6 を植菌して、振とうする。 振とう培養
した後、培養物から菌体を遠心分離で除去し、上澄液中
の未分解物の残存量および分解生成物を、ゲル浸透クロ
マトグラフィー(以下、「GPC」と称する)に適用し
て分析する。
After sterilization by adding an appropriate polyester to this basal medium, Comamonas acidovorans PAO
-Inoculate N2 with Sphingomonas PAO-K1 or Sphingomonas PAO-N6 and shake. After shaking culture, the bacterial cells were removed from the culture by centrifugation, and the remaining amount of undegraded substances in the supernatant and degradation products were applied to gel permeation chromatography (hereinafter referred to as "GPC"). And analyze.

【0022】この培養条件は、使用する微生物の生育温
度範囲、好ましくは最適生育温度の範囲に設定すべきで
あるが、この範囲は、培地の組成、pHその他の条件によ
っても変化するので一律に規定できないが、通常は、10
〜30℃、好ましくは、20〜30℃と設定し、また、pHは中
性付近(6.0〜7.5)に設定するのが、良好な分析条件を整
える上で好ましい。
The culture conditions should be set within the growth temperature range of the microorganism to be used, preferably within the optimum growth temperature range. However, this range varies depending on the composition of the medium, pH and other conditions. Not specified but usually 10
It is preferable to set the temperature to -30 ° C, preferably 20 to 30 ° C, and to set the pH in the vicinity of neutrality (6.0 to 7.5) in order to prepare good analysis conditions.

【0023】培養条件は、通常好気的条件が、微生物の
良好な生育をもたらす上で好ましく、例えば、振とう培
養法または通気撹拌培養法などが利用できる。 培養時
間としては、ポリエステルおよび分解生成物であるPE
Gが十分に分解できるまで行えばよく、通常、5〜7日
間〔PEG4000ポリエステルおよびPEG6000ポリエス
テル〕あるいは7〜10日間〔PEG20000 ポリエステル
(商品名:PAOGEN PP-15(第一工業製薬株式会社)〕で
あるが、一般的には、好ましくは、それぞれ7日以上お
よび14日以上である。 培養の際には、混合培養系に、
微生物の生育に十分な栄養物を補給する必要があり、通
常、無機塩、窒素源等が加えられる。
The culture conditions are preferably aerobic conditions in order to bring about good growth of the microorganisms, and, for example, a shaking culture method or an aeration-agitation culture method can be used. As the culture time, polyester and PE which is a decomposition product are used.
It may be carried out until G is sufficiently decomposed, and usually 5 to 7 days [PEG4000 polyester and PEG6000 polyester] or 7 to 10 days [PEG20000 polyester (trade name: PAOGEN PP-15 (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.)] However, in general, it is preferably 7 days or longer and 14 days or longer, respectively.
It is necessary to supplement nutrients sufficient for the growth of microorganisms, and inorganic salts, nitrogen sources, etc. are usually added.

【0024】この無機塩としては、燐酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩等が、また、窒素源としては、混合
培養系にて資化されるものであればよく、例えば、硫酸
アンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
硝酸アンモニウム、および硝酸塩等が該当し、これらの
1種以上を任意に選択して使用することができる。 さ
らに、混合培養系での微生物の成長促進のための栄養源
として、適量のビタミン、酵母エキスなどを添加でき
る。 本発明では、使用する微生物が資化できるPEG
またはジアルキルフタル酸エステルを含む培養液で予め
培養して得られる菌体を、上述した基本培地と同様の組
成を有する液体に添加して、反応を行うこともできる。
The inorganic salt may be a phosphate, a magnesium salt, a calcium salt or the like, and the nitrogen source may be one that is assimilated in a mixed culture system, such as ammonium sulfate, ammonium phosphate and chloride. Ammonium,
Ammonium nitrate, nitrate and the like are applicable, and one or more of these can be arbitrarily selected and used. Furthermore, an appropriate amount of vitamins, yeast extract or the like can be added as a nutrient source for promoting the growth of microorganisms in the mixed culture system. In the present invention, PEG that can be assimilated by the microorganism used
Alternatively, the reaction can be carried out by adding cells obtained by culturing in advance in a culture solution containing a dialkyl phthalate ester to a liquid having the same composition as the above-mentioned basal medium.

【0025】また、本発明では、炭素源としてのPEG
または非イオン性界面活性剤等のPEG誘導体を含ん
だ、上述した基本培地と同様の組成からなる培地を滅菌
し、これに、スフィンゴモナス PAO-K1 あるいはスフィ
ンゴモナス PAO-N6 を植菌して、振とう培養する態様も
含む。
Further, in the present invention, PEG as a carbon source is used.
Or containing a PEG derivative such as a nonionic surfactant, sterilize a medium having the same composition as the above-mentioned basic medium, inoculate it with Sphingomonas PAO-K1 or Sphingomonas PAO-N6, It also includes a mode of shaking culture.

【0026】また、本発明では、スフィンゴモナス PAO
-K1 あるいはスフィンゴモナス PAO-N6 が資化できるP
EGあるいはその誘導体を含む培地であらかじめ培養し
て得られる菌体を、上述した基本培地と同様の組成から
なる液体に添加して、反応を行うこともできる。
In the present invention, Sphingomonas PAO is also used.
P that can be assimilated by -K1 or Sphingomonas PAO-N6
The reaction can also be carried out by adding cells obtained by pre-culturing in a medium containing EG or a derivative thereof to a liquid having the same composition as that of the basal medium described above.

【0027】さらに、本発明では、フタル酸またはその
エステルを炭素源とし、上述した基本培地と同様の組成
からなる培地を滅菌した後、これにコマモナス・アシド
ヴォランス PAO-N2 を植菌して、振とう培養する態様も
包含され、加えて、前述のスフィンゴモナス PAO-K1 あ
るいは PAO-N6 と同様に、このコマモナス・アシドヴォ
ランス PAO-N2 が資化できる炭素源を含む培地で予め培
養して得られる菌体を、上述した基本培地と同様の組成
からなる液体培地に添加し、反応を行うこともできる。
Further, in the present invention, a medium having the same composition as the above-mentioned basal medium is sterilized using phthalic acid or its ester as a carbon source, and then this is inoculated with Comamonas acidvolans PAO-N2. In the same manner as the above-mentioned Sphingomonas PAO-K1 or PAO-N6, it is pre-cultured in a medium containing a carbon source which can be assimilated by this Comamonas acidovorans PAO-N2. The cells thus obtained can be added to a liquid medium having the same composition as the basal medium to carry out the reaction.

【0028】本発明のその他の態様および利点は、以下
に例示的に示した実施例の開示から明らかである。
Other aspects and advantages of the present invention will be apparent from the disclosure of the exemplary embodiments shown below.

【0029】[0029]

【実施例】実施例1:菌株の単離 前出の基本培地の単一炭素源として、PEG4000〔商品
名:PEGシリーズ(第一工業製薬株式会社)〕フター
ル酸ポリエステルあるいはPEG6000〔商品名:PEG
シリーズ(第一工業製薬株式会社)〕フタール酸ポリエ
ステルを含む、前出の組成を有する基本培地に、前述し
た本願出願人の四日市工場敷地内の土壌から分離した混
合培養試料、および大阪市住吉区内の畑の土壌から分離
した混合培養試料を含めた、日本国内各地から収集した
268種の土壌試料の水懸濁上澄液、および下水処理場か
ら入手した4種の活性汚泥試料を馴養させて得た上澄液
を、前記培地に接種した。
Examples Example 1: Isolation of strain As a single carbon source of the above-mentioned basic medium, PEG4000 [trade name: PEG series (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.)] phthalic acid polyester or PEG6000 [trade name: PEG]
Series (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.)] A mixed culture sample separated from the soil on the premises of the applicant's Yokkaichi plant as described above in a basic medium having the above-mentioned composition containing polyester phthalate, and Sumiyoshi-ku, Osaka Collected from all over Japan, including mixed culture samples separated from the soil of the fields in
The above-mentioned culture medium was inoculated with a water suspension supernatant of 268 soil samples and a supernatant obtained by acclimatizing 4 types of activated sludge samples obtained from a sewage treatment plant.

【0030】そして、細菌の生育に伴う培地の濁りが認
められた試料を常法(前出の「微生物工学技術ハンドブ
ック」の開示)により、集積培養を、数回繰り返した。
その結果、15種の土壌試料について良好な生育が認め
られた。 さらに、最終的に最も優れた生育を示した細
菌として、PEG4000フタール酸ポリエステルを用いた
培地から1種(混合培養系K)、そして、PEG6000フ
タール酸ポリエステルを用いた培地から1種(混合培養
系N)を、それぞれ選択した。 それぞれの培養系か
ら、ポリエステルの分解資化に関与する細菌を純粋分離
することで、培養系Kには、コマモナス・アシドヴォラ
ンス PAO-N2 とスフィンゴモナス PAO-K1が、また、培
養系Nには、コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2 と
スフィンゴモナス PAO-N6 が含まれていることを、前出
の菌学的性質に関する分析結果から判明した。
[0030] and, by the turbidity of the medium due to the growth of the bacteria was observed sample a conventional method (disclosure of "microbial engineering technology Handbook", supra), an integrated culture, it was repeated several times.
As a result, good growth was observed for 15 soil samples. Furthermore, as the bacteria which finally showed the best growth, one kind from the medium using PEG4000 phthalate polyester (mixed culture system K) and one kind from the medium using PEG6000 phthalate polyester (mixed culture system K) N) were selected respectively. By purely separating the bacteria involved in the degradation and assimilation of polyester from each culture system, in culture system K, Comamonas acidovorans PAO-N2 and Sphingomonas PAO-K1 were added to culture system N. Found that Comamonas acidovorans PAO-N2 and Sphingomonas PAO-N6 are contained in the mycological analysis results.

【0031】実施例2:ポリエステル分解能〔ポリエス
テル濃度依存性〕の検定 前出の基本培地の単一炭素源として、PEG4000を含む
培地 100mlを、 500mlの坂口フラスコ〔振とうフ
ラスコ 4070 FK−500:岩城硝子〕に入れ
た。 そして、この培地を、 120℃で、15分間、オート
クレープ〔オートクレープ S-90-N :トミー精工〕で加
熱殺菌した後、数白金耳のスフィンゴモナス PAO-K1 を
この培地に接種し、30℃で、3〜4日間、往復振盪培養
機〔往復式振盪培養機 RLR-3:いわしや生物科学株式会
社〕にて振とう(105 往復/分)培養した〔前培養
1〕。 また、コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2
を、ジブチルフタール酸(0.2%:DBP)培地でスフィ
ンゴモナス PAO-K1 の場合と同様にして培養を行った
〔前培養2〕。 一方、前培養1および2に代わって、
スフィンゴモナス PAO-K1とコマモナス・アシドヴォラ
ンス PAO-N2 を、基本培地の単一炭素源としてPEG40
00フタル酸ポリエステル培地に、それぞれ数白金耳ず
つ、混合接種したものを、上述した方法に従って培養を
行い、これを前培養とした〔前培養3〕。
Example 2: Polyester resolution [Polyester ]
As a single carbon source of the basic medium described above, 100 ml of a medium containing PEG4000 was placed in a 500 ml Sakaguchi flask (shaking flask 4070 FK-500: Iwaki glass). Then, this medium was sterilized by heating in an autoclave [Autoclave S-90-N: Tommy Seiko] for 15 minutes at 120 ° C, and then several platinum loops of Sphingomonas PAO-K1 were inoculated into this medium, The culture was performed with shaking (105 reciprocations / min) in a reciprocating shake cultivator [reciprocating shake cultivator RLR-3: Iwashiya Biological Science Co., Ltd.] at 3 ° C. for 3 to 4 days [Preculture 1]. Also, Comamonas acidovorans PAO-N2
Were cultured in a dibutylphthalic acid (0.2%: DBP) medium in the same manner as in the case of Sphingomonas PAO-K1 [preculture 2]. On the other hand, instead of pre-culture 1 and 2,
Sphingomonas PAO-K1 and Comamonas acidovorans PAO-N2 were used as the sole carbon source of basal medium for PEG40.
A mixture of 00 phthalate polyester medium and several platinum loops was mixed and inoculated, and the mixture was cultured according to the method described above, and this was used as preculture [Preculture 3].

【0032】次に、PEG4000ポリエステルの濃度を変
えて調製した前記基本培地を、同様に、 120℃で、5分
間、オートクレープ〔オートクレープ S-90-N :トミー
精工〕で加熱殺菌し、前培養3で得られた培養物の5ml
を、この培地に接種し、30℃で、3日間、振とう(105
往復/分)培養を行った。
Next, the basal medium prepared by changing the concentration of PEG4000 polyester was sterilized by heating in an autoclave [Autoclape S-90-N: Tommy Seiko] for 5 minutes at 120 ° C. 5 ml of the culture obtained in culture 3
Was inoculated into this medium and shaken at 30 ° C for 3 days (105
(Round trip / min) Culture was performed.

【0033】得られた培養液を、9000rpm で、20分間、
遠心分離〔高速冷却遠心分離機20PR-52 :日立工機〕
し、その上澄液を、GPCに適用し、分析を行った。
なお、GPCを用いた測定条件は、以下の通りである。
The obtained culture broth was subjected to 9000 rpm for 20 minutes.
Centrifuge [High-speed cooling centrifuge 20PR-52: Hitachi Koki]
Then, the supernatant was applied to GPC and analyzed.
The measurement conditions using GPC are as follows.

【0034】 使用機器:東ソー高速GPC装置 HLC
-8020 カラム: Tosoh TSHGEL G5000PWXL-G4000PWXL-G30
00PWXL-G2500PWXL(内径:7.8mm 、長さ:30cm) 溶媒: 0.1M 塩化ナトリウム(流速:0.7ml/min.、
温度:40℃) 検出器:RI(示差屈折率)検出 その分析結果を、下記表10に示した。
Equipment used: Tosoh high-speed GPC device HLC
-8020 Column: Tosoh TSHGEL G5000PW XL -G4000PW XL -G30
00PW XL -G2500PW XL (inner diameter: 7.8 mm, length: 30 cm) Solvent: 0.1 M sodium chloride (flow rate: 0.7 ml / min.,
(Temperature: 40 ° C.) Detector: RI (differential refractive index) detection The analysis results are shown in Table 10 below.

【0035】[0035]

【表10】 [Table 10]

【0036】実施例3:ポリエステル分解能〔培養日数
依存性〕の検定 実施例2と同様にして調製した、PEG4000ポリエステ
ル濃度を0.5 %とした培地 100mlを、 500mlの坂口フラ
スコに入れ、オートクレープ殺菌した。 そして、実施
例2と同様にして前培養した、前培養3で得られた培養
物の5mlをこの培地に接種して、30℃で、振とう(105
往復/分)培養を行った。
Example 3: Polyester resolution [cultivation days
Dependency] 100 ml of a medium prepared in the same manner as in Example 2 and having a PEG4000 polyester concentration of 0.5% was placed in a 500 ml Sakaguchi flask and sterilized by autoclaving. Then, 5 ml of the culture obtained in Preculture 3 precultured in the same manner as in Example 2 was inoculated into this medium and shaken at 30 ° C. (105
(Round trip / min) Culture was performed.

【0037】この培養によって増殖した細菌の生育度は
λ=610nm での吸光度で、また、炭素源分解率を、実施
例2でのGPC測定条件と同一の測定条件下で、GPC
にて分析し、その結果を、下記表11に示した。
The growth rate of the bacteria grown by this culture is the absorbance at λ = 610 nm, and the carbon source decomposition rate is the same as the GPC measurement conditions in Example 2 under the same GPC measurement conditions.
The results are shown in Table 11 below.

【0038】[0038]

【表11】 [Table 11]

【0039】実施例4:ポリエステル分解能〔ポリエス
テル濃度依存性〕の検定 前出の基本培地の単一炭素源として、PEG6000を用い
た以外は、実施例2に記載の方法に準じて、スフィンゴ
モナス PAO-K1 の前培養〔前培養4〕、コマモナス・ア
シドヴォランス PAO-N2 の前培養〔前培養5〕、およ
び、スフィンゴモナス PAO-K1 とコマモナス・アシドヴ
ォランス PAO-N2 の混合培養〔前培養6〕を行った。
Example 4: Polyester resolution [Polyes]
Tell Concentration Dependence] Preculture of Sphingomonas PAO-K1 [Preculture 4] according to the method described in Example 2 except that PEG6000 was used as the single carbon source of the basic medium described above. , Preculture of Comamonas acidovorans PAO-N2 [preculture 5] and mixed culture of Sphingomonas PAO-K1 and Comamonas acidovorans PAO-N2 [preculture 6] were performed.

【0040】次に、PEG6000ポリエステルの濃度を変
えて調製した前記基本培地を、実施例2の場合と同様に
して、 120℃で、5分間、オートクレープ〔オートクレ
ープS-90-N :トミー精工〕で加熱殺菌し、前培養6で
得られた培養物の5mlを、この培地に接種し、30℃で、
7日間、振とう(105往復/分)培養を行った。 得られ
た培養液を、9000rpm で、20分間、遠心分離〔高速冷却
遠心分離機20PR-52 :日立工機〕し、その上澄液を、G
PCに適用し、分析を行った。 なお、GPCの測定条
件は、実施例2と同一条件とした。 その分析結果を、
下記表12に示した。
Next, the basal medium prepared by changing the concentration of the PEG6000 polyester was autoclaved at 120 ° C. for 5 minutes in the same manner as in Example 2 (autoclave S-90-N: Tommy Seiko). ] Was sterilized by heating, and 5 ml of the culture obtained in Preculture 6 was inoculated into this medium, and at 30 ° C,
Shaking (105 reciprocations / min) culture was performed for 7 days. The obtained culture solution was centrifuged at 9000 rpm for 20 minutes [high-speed cooling centrifuge 20PR-52: Hitachi Koki Co., Ltd.]
It was applied to PC and analyzed. The GPC measurement conditions were the same as in Example 2. The analysis result
The results are shown in Table 12 below.

【0041】[0041]

【表12】 [Table 12]

【0042】実施例5:ポリエステル分解能〔培養日数
依存性〕の検定 実施例4と同様にして調製した、PEG6000ポリエステ
ル濃度を0.5 %とした培地 100mlを、 500mlの坂口フラ
スコに入れ、オートクレープ殺菌した。 そして、実施
例4と同様にして前培養した、前培養6で得られた培養
物の5mlをこの培地に接種して、30℃で振とう(105 往
復/分)培養を行った。 この培養によって増殖した細
菌の生育度はλ=610nm での吸光度で、また、炭素源分
解率を、GPCによって分析し、その結果を、下記表13
に示した。 なお、GPCの測定条件は、実施例2と同
一条件とした。
Example 5: Polyester resolution [number of culture days
Dependency] 100 ml of a medium prepared in the same manner as in Example 4 and having a PEG6000 polyester concentration of 0.5% was placed in a 500 ml Sakaguchi flask and autoclaved. Then, 5 ml of the culture obtained in Preculture 6 precultured in the same manner as in Example 4 was inoculated into this medium, and cultivated with shaking (105 reciprocations / minute) at 30 ° C. The growth rate of the bacteria grown by this culture was the absorbance at λ = 610 nm, and the carbon source decomposition rate was analyzed by GPC. The results are shown in Table 13 below.
It was shown to. The GPC measurement conditions were the same as in Example 2.

【0043】[0043]

【表13】 [Table 13]

【0044】実施例6:ポリエステル分解能〔培養日数
依存性〕の検定 前培養2で得られた培養物の10mlを、PEG 20000ポリ
エステル 0.5%を含む100ml の前出の基本培地にて、30
℃で、1日間、振とう(105 往復/分)培養を行い、こ
の培養懸濁液を、9000rpm で、20分間、遠心分離で菌体
を除去した後に、得られた培養上澄を濾過滅菌した。
そして、培養ろ液の基質とPEGの生成量に関して、実
施例2と同一条件にてGPC分析を行ったところ、ポリ
エステルはすべてPEG 20000に分解されていたことが
判明した(データ示さず)。 一方で、前出の基本培地
の単一炭素源として、PEG 20000を用いた以外は、実
施例2に記載の方法に準じて、スフィンゴモナス PAO-N
6 の前培養〔前培養7〕を行った。 そして、前記濾過
滅菌した培養上澄に、前培養7で得られた培養物の10ml
を植菌し、30℃で、15日間、振とう(105 往復/分)培
養を行った。 そして、培養開始後の8日目と15日目に
培養液を採取し、この培養により増殖した細菌の生育度
をλ=610nm の吸光度で、また、菌体を除去した上澄液
中のPEGの量の変化を、実施例2と同一条件にて、G
PCによって分析を行い、その結果を、下記表14に示し
た。 なお、8日目の分析後に、1N水酸化ナトリウム
にて反応液のpHを、7.0 に補正した。
Example 6: Polyester resolution [number of culture days
Dependency] assay 10 ml of the culture obtained in Preculture 2 was added to 100 ml of the above basal medium containing 0.5% of PEG 20000 polyester for 30
After culturing with shaking (105 reciprocations / minute) for 1 day at ℃, this culture suspension was centrifuged at 9000 rpm for 20 minutes to remove the cells, and the resulting culture supernatant was sterilized by filtration. did.
Then, GPC analysis was performed on the substrate and the amount of PEG produced in the culture filtrate under the same conditions as in Example 2, and it was found that all of the polyester had been decomposed into PEG 20000 (data not shown). On the other hand, Sphingomonas PAO-N was prepared according to the method described in Example 2 except that PEG 20000 was used as the single carbon source of the basal medium.
6 precultures [preculture 7] were performed. Then, 10 ml of the culture obtained in Preculture 7 was added to the culture supernatant sterilized by filtration.
Were inoculated and cultured at 30 ° C. for 15 days with shaking (105 reciprocations / minute). Then, the culture solution was collected on the 8th and 15th days after the start of the culture, and the growth rate of the bacteria propagated by this culture was measured by the absorbance at λ = 610 nm, and the PEG in the supernatant solution from which the bacterial cells had been removed was obtained. Under the same conditions as in Example 2, G
Analysis was performed by PC, and the results are shown in Table 14 below. After the analysis on the 8th day, the pH of the reaction solution was adjusted to 7.0 with 1N sodium hydroxide.

【0045】[0045]

【表14】 [Table 14]

【0046】実施例7:ポリエステル分解能〔ポリエス
テル種依存性〕の検定 0.2 %のジブチルフタール酸(DBP)を含む基本培地
にて、3日間、生育させたコマモナス・アシドヴォラン
ス PAO-N2 の培養液を、9000rpm で、20分間、遠心分離
して得た上澄液あるいは菌体に、 0.5%濃度のPEG40
00とフタル酸からなるポリエステル、PEG4000とイソ
フタル酸からなるポリエステル、あるいはPEG4000と
テレフタル酸からなるポリエステルのいずれか、およ
び、反応液の最終濃度が0.05Mになるように燐酸緩衝液
(pH 7.0)を加えて、30℃で、反応を進行せしめた。 こ
の反応を開始して後、1日目および3日目における基質
の分解につき、実施例2と同一条件にてGPCにて分析
を行い、その結果を、下記表15に示した。
Example 7: Polyester resolution [Polyes]
Ter Species Dependence] Comamonas acidovorans PAO-N2 culture grown for 3 days in a basic medium containing 0.2% dibutylphthalic acid (DBP) was centrifuged at 9000 rpm for 20 minutes. Add 0.5% PEG40 to the supernatant or cells obtained by separation.
00 or phthalic acid polyester, PEG4000 and isophthalic acid polyester, or PEG4000 and terephthalic acid polyester, and a phosphate buffer solution so that the final concentration of the reaction solution is 0.05M.
(pH 7.0) was added and the reaction was allowed to proceed at 30 ° C. After starting this reaction, the degradation of the substrate on the first and third days was analyzed by GPC under the same conditions as in Example 2, and the results are shown in Table 15 below.

【0047】[0047]

【表15】 [Table 15]

【0048】実施例8:ポリエステル分解能〔ポリエス
テル種依存性〕の検定 0.2 %のジブチルフタール酸(DBP)を含む基本培地
にて、3日間、生育させたコマモナス・アシドヴォラン
ス PAO-N2 の培養液を、9000rpm で、20分間、遠心分離
して得た上澄液に、PEG4000とフタル酸からなるポリ
エステル(DMPPAO)、 0.5%濃度のPEG4000と
イソフタル酸からなるポリエステル(DMIPAO)、
あるいはPEG4000とテレフタル酸からなるポリエステ
ル(DMTPAO)のいずれかを反応基質とした。 そ
して、これら基質に作用させる酵素として、コマモナス
・アシドヴォランス PAO-N2 の培養上澄液に加え、エス
テラーゼ(100U)〔Pseudomonas sp. 由来:A. Sugihara
et al., Biosci. Biotech.Biochem. 58, 752-755 (199
4)に開示されたもの〕、リパーゼ (7000U)〔Candida cy
lindracea 由来:名糖産業株式会社〕、リパーゼ (11U)
Fusariumsp. 由来:Y. Shimada et al., J. Ferment.
Bioeng., 75, 349-352 (1993)に開示されたもの〕、お
よびリパーゼ (500U) 〔Rhizopus arrhizus 由来:Sigm
aChemical社、セントルイス、米国〕を用意した。 そ
して、反応液の最終濃度が0.05Mになるように燐酸緩衝
液(pH 7.0)を加えて反応を進行せしめた。 この反応
を、30℃で、3日間進行せしめた後、基質の分解につ
き、実施例2と同一条件にてGPCで分析を行い、その
結果を、下記表16に示した。
Example 8: Polyester resolution [Polyester ]
Ter Species Dependence] Comamonas acidovorans PAO-N2 culture grown for 3 days in a basic medium containing 0.2% dibutylphthalic acid (DBP) was centrifuged at 9000 rpm for 20 minutes. In the supernatant obtained by separation, a polyester composed of PEG4000 and phthalic acid (DMPPAO), a polyester composed of PEG4000 and isophthalic acid at a concentration of 0.5% (DMIPAO),
Alternatively, one of polyesters (DMTPAO) composed of PEG4000 and terephthalic acid was used as a reaction substrate. Then, as enzymes acting on these substrates, in addition to the culture supernatant of Comamonas acidovorans PAO-N2, esterase (100U) [ Pseudomonas sp. Origin: A. Sugihara
et al., Biosci. Biotech. Biochem. 58 , 752-755 (199
4)], lipase (7000U) [ Candida cy
lindracea origin: Meito Sangyo Co., Ltd.], lipase (11U)
(Derived from Fusarium sp . : Y. Shimada et al., J. Ferment.
Bioeng., 75 , 349-352 (1993)], and lipase (500U) [from Rhizopus arrhizus : Sigm
aChemical, St. Louis, USA] was prepared. Then, a phosphate buffer solution (pH 7.0) was added so that the final concentration of the reaction solution was 0.05 M, and the reaction was allowed to proceed. After this reaction was allowed to proceed at 30 ° C. for 3 days, the decomposition of the substrate was analyzed by GPC under the same conditions as in Example 2, and the results are shown in Table 16 below.

【0049】[0049]

【表16】 [Table 16]

【0050】実施例9:ポリエステル分解能〔ポリエス
テル種依存性〕の検定 0.2 %のジブチルフタール酸(DBP)を含む基本培地
にて、3日間、生育させたコマモナス・アシドヴォラン
ス PAO-N2 の培養液を、9000rpm で、20分間、遠心分離
して得た上澄液あるいは菌体に、 0.5%濃度の(1) PEG4
000 とフタル酸からなるポリエステル、(2) PEG6000 と
フタル酸からなるポリエステル、(3)PEG20000とフタル
酸からなるポリエステル〔商品名:PAOGEN PP-15(第一
工業製薬株式会社)〕、(4) PEG9000-PEG2000-PEG9000
とフタル酸からなるポリエステル〔商品名:PAOGEN EP-
15(第一工業製薬株式会社)〕、および(5) PEG20000と
セバシン酸〔脂肪酸〕からなるポリエステルのいずれか
を加え、反応液の最終濃度が0.05Mになるように燐酸緩
衝液(pH 7.0)を加えて反応を進行せしめた。 30℃に
て、3日間反応を進め、その際の基質の分解につき、実
施例2と同一条件にてGPCにて分析を行い、その結果
を、下記表17に示した。
Example 9: Polyester resolution [Polyes]
Ter Species Dependence] Comamonas acidovorans PAO-N2 culture grown for 3 days in a basic medium containing 0.2% dibutylphthalic acid (DBP) was centrifuged at 9000 rpm for 20 minutes. The supernatant or cells obtained by the separation were added with 0.5% concentration of (1) PEG4.
000 and phthalic acid polyester, (2) PEG6000 and phthalic acid polyester, (3) PEG20000 and phthalic acid polyester [Product name: PAOGEN PP-15 (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.)], (4) PEG9000-PEG2000-PEG9000
Polyester consisting of and phthalic acid [Product name: PAOGEN EP-
15 (Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.)] and (5) PEG 20000 and a polyester composed of sebacic acid [fatty acid] are added, and a phosphate buffer solution (pH 7.0) is added so that the final concentration of the reaction solution becomes 0.05M. Was added to allow the reaction to proceed. The reaction was allowed to proceed at 30 ° C. for 3 days, and the decomposition of the substrate at that time was analyzed by GPC under the same conditions as in Example 2. The results are shown in Table 17 below.

【0051】[0051]

【表17】 [Table 17]

【0052】[0052]

【発明の効果】本発明により、フタル酸エステル、イソ
フタル酸エステルおよびテレフタル酸エステルを特異的
に分解する上に、分解物たるフタル酸をも資化できる、
コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2 ;そして、PE
Gあるいはその誘導体を資化できるスフィンゴモナス P
AO-K1 ならびにスフィンゴモナス PAO-N6 の、各新規微
生物が提供されるのである。
INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, in addition to specifically decomposing phthalic acid ester, isophthalic acid ester and terephthalic acid ester, phthalic acid, which is a decomposition product, can be utilized
Comamonas acidovorans PAO-N2; and PE
Sphingomonas P that can utilize G or its derivatives
New microorganisms of AO-K1 and Sphingomonas PAO-N6 are provided.

【0053】すなわち、本発明によって提供されたこれ
ら新規微生物は、上記したポリエステルやPEGを炭素
源として含む増殖培地にて、それらポリエステルを分解
し、PEGを資化分解できるのみならず、これらの新規
微生物を混合培養することで、PEGフタル酸ポリエス
テルを効率よく分解し、かつ分解産物を完全に資化分解
することができるなどの効果を奏する。 また、本願発
明のこれら作用効果を加味すれば、バイオリアクター、
廃水処理、プロテインエンジニアリング等の分野での広
範な応用も、当然期待できるものである。
That is, these novel microorganisms provided by the present invention can not only decompose the polyester and assimilate PEG in a growth medium containing the above-mentioned polyester and PEG as a carbon source, By mixing and culturing the microorganisms, the PEG phthalate polyester can be efficiently decomposed, and the decomposition products can be completely assimilated and decomposed. In addition, considering these effects of the present invention, a bioreactor,
A wide range of applications in the fields of wastewater treatment, protein engineering, etc. are of course promising.

Claims (20)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 脂肪族および芳香族ポリエステルを分解
し、かつフタール酸資化能を有することを特徴とするコ
マモナス・アシドヴォランス。
1. A Comamonas acidvolans, which is capable of decomposing aliphatic and aromatic polyesters and having an ability to assimilate phthalic acid.
【請求項2】 前記ポリエステルが、フタール酸、イソ
フタール酸、テレフタール酸、およびこれらの組み合わ
せからなるグループから選択されるポリエステルを含む
請求項1に記載のコマモナス・アシドヴォランス。
2. The Comamonas acidovorans of claim 1, wherein the polyester comprises a polyester selected from the group consisting of phthalic acid, isophthalic acid, terephthalic acid, and combinations thereof.
【請求項3】 前記コマモナス・アシドヴォランスが、
以下の菌学的性質、すなわち; 【表1】 【表2】 の菌学的性質を有する請求項1もしくは2に記載のコマ
モナス・アシドヴォランス。
3. The Comamonas acidovorans
The following mycological properties, namely; [Table 2] The Comamonas acidovorans according to claim 1 or 2, which has the mycological properties of:
【請求項4】 前記コマモナス・アシドヴォランスが、
コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2 (PAO-N2: FERM
P-14541)である請求項3に記載のコマモナス・アシド
ヴォランス。
4. The Comamonas acidovorans is
Comamonas acidovorans PAO-N2 (PAO-N2: FERM
P-14541), The Comamonas acidovorans according to claim 3.
【請求項5】 スフィンゴモナス属に属する新規微生物
であって、ポリエチレングリコール資化能を有すること
を特徴とするスフィンゴモナス属に属する新規微生物。
5. A novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas, which is characterized by having an ability to assimilate polyethylene glycol.
【請求項6】 前記ポリエチレングリコールが、平均分
子量 4,000以下のポリエチレングリコールである請求項
5に記載のスフィンゴモナス属に属する新規微生物。
6. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 5, wherein the polyethylene glycol is a polyethylene glycol having an average molecular weight of 4,000 or less.
【請求項7】 前記スフィンゴモナス属に属する新規微
生物が、以下の菌学的性質、すなわち; 【表3】 の菌学的性質を有する請求項6に記載のスフィンゴモナ
ス属に属する新規微生物。
7. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas has the following mycological properties: The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 6, which has the mycological properties of.
【請求項8】 前記スフィンゴモナス属に属する新規微
生物が、スフィンゴモナス PAO-K1 (PAO-K1: FERM P-1
4542)である請求項7に記載のスフィンゴモナス属に属
する新規微生物。
8. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-K1 (PAO-K1: FERM P-1
4542), which is a novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 7.
【請求項9】 前記ポリエチレングリコールが、平均分
子量20,000以下のポリエチレングリコールである請求項
5に記載のスフィンゴモナス属に属する新規微生物。
9. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 5, wherein the polyethylene glycol is polyethylene glycol having an average molecular weight of 20,000 or less.
【請求項10】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、以下の菌学的性質、すなわち; 【表4】 の菌学的性質を有する請求項9に記載のスフィンゴモナ
ス属に属する新規微生物。
10. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas has the following mycological properties: The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 9, which has the mycological properties of.
【請求項11】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、スフィンゴモナス PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543)である請求項10に記載のスフィンゴモナス属に
属する新規微生物。
11. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543), the novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas according to claim 10.
【請求項12】 ポリエチレングリコールを含む脂肪族
および芳香族ポリエステルの分解方法であって、下記工
程、すなわち;脂肪族および芳香族ポリエステルを分解
し、かつフタール酸資化能を有するコマモナス・アシド
ヴォランスと、ポリエチレングリコール資化能を有する
スフィンゴモナス属に属する新規微生物の混合体を調製
し、および脂肪族および芳香族ポリエステルに、前記混
合体を作用させる、 工程を含むことを特徴とする、ポリエチレングリコール
を含む脂肪族および芳香族ポリエステルの分解方法。
12. A method for decomposing aliphatic and aromatic polyesters containing polyethylene glycol, which comprises the following steps: Decomposing aliphatic and aromatic polyesters and having phthalic acid assimilation ability. And a mixture of novel microorganisms belonging to the genus Sphingomonas capable of assimilating polyethylene glycol, and allowing the mixture to act on aliphatic and aromatic polyesters, polyethylene glycol Method for decomposing aliphatic and aromatic polyesters containing.
【請求項13】 前記コマモナス・アシドヴォランス
が、コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2 (PAO-N2:
FERM P-14541)である請求項12に記載のポリエチレング
リコールを含む脂肪族および芳香族ポリエステルの分解
方法。
13. The Comamonas acidovorans PAO-N2 (PAO-N2:
FERM P-1454 1) The method for decomposing aliphatic and aromatic polyesters containing polyethylene glycol according to claim 12.
【請求項14】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、スフィンゴモナス PAO-K1 (PAO-K1: FERM P
-14542)である請求項12に記載のポリエチレングリコー
ルを含む脂肪族および芳香族ポリエステルの分解方法。
14. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-K1 (PAO-K1: FERM P
-14542), The method for decomposing aliphatic and aromatic polyesters containing polyethylene glycol according to claim 12.
【請求項15】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、スフィンゴモナス PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543)である請求項12に記載のポリエチレングリコー
ルを含む脂肪族および芳香族ポリエステルの分解方法。
15. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543), The method for decomposing aliphatic and aromatic polyesters containing polyethylene glycol according to claim 12.
【請求項16】 フタル酸エステルおよび/またはフタ
ル酸の分解方法であって、下記工程、すなわち;フタル
酸エステルおよび/またはフタル酸を、脂肪族および芳
香族ポリエステルを分解し、かつフタール酸資化能を有
するコマモナス・アシドヴォランスに作用させる、 工程を含むことを特徴とする、フタル酸エステルまたは
フタル酸の分解方法。
16. A method for decomposing a phthalic acid ester and / or a phthalic acid, which comprises the following steps: decomposing an aliphatic and aromatic polyester with a phthalic acid ester and / or phthalic acid and assimilating phthalic acid. A method for decomposing phthalic acid ester or phthalic acid, which comprises the step of acting on comamonas acidvolans having ability.
【請求項17】 前記コマモナス・アシドヴォランス
が、コマモナス・アシドヴォランス PAO-N2 (PAO-N2:
FERM P-14541)である請求項16に記載のフタル酸エステ
ルまたはフタル酸の分解方法。
17. The comamonas acidvolans PAO-N2 (PAO-N2:
FERM P-1454 1) The method for decomposing phthalic acid ester or phthalic acid according to claim 16.
【請求項18】 ポリエチレングリコールおよび/また
はポリエチレングリコール誘導体の分解方法であって下
記工程、すなわち;ポリエチレングリコールおよび/ま
たはポリエチレングリコール誘導体を、ポリエチレング
リコール資化能を有するスフィンゴモナス属に属する新
規微生物に作用させる、 工程を含むことを特徴とする、ポリエチレングリコール
および/またはポリエチレングリコール誘導体の分解方
法。
18. A method for decomposing polyethylene glycol and / or a polyethylene glycol derivative, which comprises the following steps; ie, applying the polyethylene glycol and / or the polyethylene glycol derivative to a novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas having an ability to utilize polyethylene glycol. A method for decomposing polyethylene glycol and / or a polyethylene glycol derivative, which comprises the step of:
【請求項19】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、スフィンゴモナス PAO-K1 (PAO-K1: FERM P
-14542)である請求項18に記載のポリエチレングリコー
ルおよび/またはポリエチレングリコール誘導体の分解
方法。
19. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-K1 (PAO-K1: FERM P
-14542) The method for decomposing polyethylene glycol and / or polyethylene glycol derivative according to claim 18.
【請求項20】 前記スフィンゴモナス属に属する新規
微生物が、スフィンゴモナス PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543)である請求項18に記載のポリエチレングリコー
ルおよび/またはポリエチレングリコール誘導体の分解
方法。
20. The novel microorganism belonging to the genus Sphingomonas is Sphingomonas PAO-N6 (PAO-N6: FERM P
-14543), The method for decomposing polyethylene glycol and / or polyethylene glycol derivative according to claim 18.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2005118693A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Method to accelerate biodegradation of aliphatic-aromatic co-polyesters by enzymatic treatment
JP2008199957A (en) * 2007-02-20 2008-09-04 Kyoto Institute Of Technology Aromatic polyester-degrading bacterium and method for degrading aromatic polyester using the same
JP2015033331A (en) * 2013-08-07 2015-02-19 積水アクアシステム株式会社 Microorganism, and method of effluent treatment
WO2022123421A1 (en) * 2020-12-09 2022-06-16 Innovazione E Sviluppo Sostenibile S.r.l. Plastic-degrading solution

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