JPH07501878A - 干渉物質の存在下における三環系抗鬱薬の定量 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、１種以−１−の分析的にＴ渉する物質をも含有するテストサンプル中 の被分析物の定量に係る。特に、本発明は１種し′↓上の干渉物質の存在下で被 分析物を分析的に定にするため、特に三環系抗欝薬を定量するための、テストサ ンプルの前処理に係る。

光−明！ど昆摩− 被分析物の定量は生化学的調査、環境及び工業用試験、特に医療診断のような種 々の分野で非常に有用になってきている。血清、ｌ’ｌｌｌ漿、全面、尿等のよ うな生物学的流体中の治療薬レベル及び他の被分析物の監視は、患昔の管理に役 立つ情報を医師に提供するために非常に有用になってきている。このような薬物 レベルを監視することにより、最適治療効果に到達するように患者への投与量を 調節することができ、治療以下又は毒性レベルを避けるのに役立つ。

テストサンプルは、所望の着目被分析物に実質的に類似するか又はｊｌＪ、する 可能性があり、従って、被分析物から区別てきない化学的構造Ｐ有する１種以上 の検出可能な化合物を含有し得る。例えば、治療薬のレベルを監視することが重 要な医Ｗ誇断分野では、実質的に類似する化学的構造を有する多数のｉＴｈを患 者に投与するので、このような患者から採取したテストサンプルは検出可能なレ ベルの多数の薬物を含有し得る。

このような場合、所望の被分析物の分析的定量は着目被分析物の化学的構造に実 質的に類似する化学的構造を有するこのような１種以上の付加物質の存在により 干渉され得、こうして矛盾した不正確な結果を生じる。特に、着目被分析物に結 合することが可能な抗体を使用するイムノアッセイ法が分析的定量に必要な場合 には、このような抗体は実質的に類似する化Ｔ的構造を有するこのような他の物 質と結合又は公差反応し得る。また、高圧液体クロマトクラフィー法又は３膜ク ロマトクラフイー法が分析的定量に必要な場合には、着目被分析物の溶離プロフ ィルは、実質的に類似する化学的構造を有するこのような他の物質の溶離プロフ ィルから区別できない場合がある。

本発明は、本発明の前処理試薬を使用することにより、１種以上の着目化合物に 実質的に類似しており、他の方法では着目化合物から分析的に区別することか困 難な化学的構造を有する１種以上の化合物をも含有するテストサンプル中に存在 する１種以」二の着目化合物の定量のための分析システムを著しく改善てきると いう発見に係る。特に、前処理試薬は、このような着目化合物の化学的構造を著 しく変えることなく１種以上の干渉物質の化Ｔ的構造を選択的に修飾することが 可能である。本発明によると、テストサンプルを前処理試薬と接触させ、テスト サンプル中に存在するこのような干渉物質を修飾し、所望の化合物の化学的構造 に実質的に相違する化学的構造を有する物質を生成し、このような化合物を相互 に実質的に区別てきるようにし、例えばイムノアッセイ、高圧液体クロマ１−グ ラフィー又は３膜クロマトグラフイー法によりこのような化合物を分析的に定量 できるようにする。従って、本発明により記載するような化合物の１種を化学的 に修飾することにより、着目被分析物の検出に干渉する他の物質の存在下で着目 被分析物を選択的に検出するために従来必要であった方法はもはや不要である。

本発明の好適態様によると前処理試薬は、デスｌ−サンプル中に存在し得る硫黄 含有化合物の誘導体化のため、特にフェノチアジンの存在下て環系系抗欝薬の蛍 １１Ｎ光イムノアンセイ定鼠のために有用な酸化的試薬である。当業者に理解さ れるように、フェノチアジンは環系系抗欝薬て治療中の患者に同時処方されるこ とが多く、従ってこのような患者からのテストサンプルは両方の薬物を含有する 。このような好適暦様によると、このようなテストサンプルを酸化的試薬、好ま しくはクロラミン′「（Ｎ−クロロ−４−メチルベンゼンスルホンアミドのナト ソウ１１塩）又はクロラミンＢ　（Ｎ−クロロヘンゼンスルホンアミドのすｌ〜 リウム塩）と接触させ、フェノチアジンの化学的ｔｔｑ造を選択的に修飾し、テ ストサンプル中に存在するフェノチアジンを選択的に酸化させ、その対応するス ルホキシド又はスルホンを生成する。テストサンプルカこのような前９３　ｆ’ ｌ！　後、例えば当業者に公知のイノ、ノアノセイ法、好ましくは蛍光偏光（Ａ ノア・ｌセイ法及び工ンザイムイムノアッセイ法により環系系抗−薬を定員する ことができ、修飾されたフェッチアシ゛ンと環系系抗Ｐｆｆｉに対する抗体との 公差反応は実質的に減少する。

図１１ｎ１冒創ｌ」（朋□ 図１は、本発明のフェノチアジンの化学的構造の修飾前［図１（ａ）］及び修飾 後［図１（ｂ）］における三環系抗を薬（デシプラミン及びイミブラミン〉及び フェッチアシ゛ン（デスメチルクロ！レフ゛ロマジン）のン容離プロフィｌしを 示すクロマトグラムである。

図２は、本発明のフェノチアジンの化学的構造の修飾前［図２　（ａ）　］及び 修飾後［図２（ｂ）］における三環系抗轡薬［アミトリブチリン（ＡＭＩ）、１ ０−ヒドロキシアミトリブチリン（１０−ＯＨＡＭＩ）及びノルトリブチリン（ ＮＯＲ）］及びフェノチアジン［デスメチルクロルプロマジン（ＤＭ−ＣＰＺ） 及びクロルプロマジン（ＣＰＺ）］の１容離プロフィルを示すクロマトグラムで ある。

光ＩＬ川用１ＳＷ朋一 本発明は、着目被分析物に実質的に類似する化学的構造又は類似し得る化学的構 造を有する１種以上の干渉物質をも含有するテストサンプル中に存在する着目被 分析物の定量に特に有用である。着目被分析物とこのような干渉物質は実質的に 相違１−得るが、同時に相互に類似する配座特徴を有し得ると理解されるべきで ある。

特に、着目被分析物と干渉物質の非限定的な例としては、環系系抗を薬（例えば アミトリブチリン、ノルトリブチリン、イミブラミン、デシプラミン、プロトリ ブチリン、ドキセピン、クロミプラミン、デスドキセピン等）、フェノチアジン （例えばクロルプロマジン、デスメチルクロルプロマジン、チオリブジン、デス メチルチオリタジン、スルホリブジン、メンリブジン等）、ペンツジアゼピン（ 例えばジアゼパム等）、チオキサンチン（チオチキセン等）が挙げられる。

本発明によると、前処理試薬はデス１〜サンプル中に存在する１種以上の被分析 物又は干渉物質の１以上の位置の化学的構造に対して特異的てあり且つ該構造を 選択的に修飾することか可能である。干渉物質の化学的構造の修飾が好ましいが 、本発明の教示の範囲内て着目被分析物の化学的桶）点もＩＧ飾てきろことか理 解されよう。着目ｗ１分析物又は干渉物質のいずれかの化学的ｎ４造を本発明に 従って修飾すると、一方又は他方を分析的に定量できることも理解されよう。更 に本発明によると、着目被分析物又は干渉物質のいずれかの化学的ｌ′Ｍ造を実 質的に修飾することが可能な種々の試薬から前処理試薬を選択することがてきる 。このような試薬の非限定的な例としては、酸化的試薬、持にＮ−７０ロスルポ ンアミト（例えはクロラミン゛「、タロラミンＢ等）、次亜塩素酸塩（例えば次 亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸等）、次亜臭素＃（例えば次亜臭素酸ナトリウ ム、次亜臭素酸等）、過酸化物（例えばナトリウムヒドロペルオキシド等）、過 ｅＩｉ（例えば過セレン酸、３−クロロ過安息香酸等）、及び酸化的酵素（例え ばカタラーゼ、ペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等）が挙げられる。

他のべ黄禽有物Ｗ（例えはフェノチアジン）の存在下で環系系抗１１Ｉ！薬を定 量する場合、前処理試薬は好ましくは次亜塩素酸ナトリウム、カタラーゼ及び過 セレン酸から構成される群から選択される酸化的試薬、より好ましくはクロラミ ンＴである。

以Ｆの説明から当業苦により理解され、以下の特定の態様及び実施例により更に ３￥４１１Ｉに説明するように、特定の前処理試薬の選択は、着目被分析物の化 学的構造及びテストサンプル中に存在し得る干渉物質の化学的構造に依存する。

外部源からデスｌ−サンプルにｆ４加又は導入する以外に、酸化的試薬は過酸化 水素の発生のように発生させることもできるし、又は別の方法で現場て形成する こともてきる。例えば、着目被分析物、本明細書に記載するような干渉物質、二 酸化セレン及びグルコースオキシダーゼを含有する分析系の場合、グルコースを 添加すると、過酸化水素が現場て形成される。これは試薬の包装に特に有用てあ り、本発明で使用される酸化的試薬を現場て形成することが可能な試薬を提供す ることにより強酸化剤の包装及び輸送が不要になる。更に、前処理試薬は液体試 薬でも乾燥試薬てもよく、又は１噺りに公知の方法に（Ｊ′（つて固体支持体材 料に固定してもよい。

前処理試薬は上述のことき種々の分析系に使用することがてきるが、本発明の前 処理試薬は特にイｌ＼ノアンセイ系に有効である。例えば競合タンパク質結合ま たはイノ＼ノアソセイにおいては、一般にはりガントと称される測定する物質は 、一般には１−レーザと称される検出可能な部分に結きされた近縁類似構造の物 質と、類似構造を有するリガント及びトレーサのかかる抗体を産生するのに使用 される免疫原と共通の１力所以上の部分に特異的な抗体上の限定数の結合部位を 競きする。蛍光（扁光イムノア・・ｌセイ（Ｆ　Ｐ　Ｉ　Ａ　）においては、ト レーサの検出可能な部分成分は、フルオレセイン、アミン−フルオレセイン、力 ｌレボキシフルオレセイン、フルオレセインアミンなどからなる群から選択され る蛍光物質である。

本発明による特に好ましいこのようなＦＰＩΔフォーマ・ントにおいては、抗体 に結合するトレーサの酸は、試験試料または標準較正溶液中に存在するリガント の量に予想通りに反比例する。リガンド及びトレーサの抗体結合部位への相対結 合親和性、つまり特性結合親和性はアッセイ系の重要なパラメータである。特に ＦＰＩＡ法は、蛍光トレーサが、特性波長の平面偏光によ−）で励起されると、 入射刺激光に対する偏光度か斯学の媒質中でトレーサの回転速度に反比例する別 の特性波長（即ち蛍光）の光を発するという原理に基づいている。この特性の結 果、粘性溶液相中であったりまたは回転速度が比較的小さい別の溶液成分に結合 したような回転が制限されたトレーサ物質は、自由溶液中よりも放ｉｔ光の偏光 度が比較的大きい。従って、リガンド及びトレーサが抗体への結合を競合する時 間枠内で、トレーサ及びリガンドの結合速度は、選択性、感度及び精度のような 重要な動作パラメータを保存しつつも、自由トレーサ及び結きトレーサを適当な 割合で与える。

例えばイミブラミンのＦＰＩＡ測定においては、試験試料を本発明の前処理試薬 と接触させ、イミブラミン抗血清の存在に対して検出可能な蛍光偏光応答を与え 得る適当に選択されたフルオレセイン誘導体の存在下にイミプラミン抗血清と接 触させる。平面偏光を溶液に通し、蛍光偏光応答を得る。応答は、天然化合物が ら′Ａ製した標準較正液の応答と比較したときの、試験試料中に存在するイミブ ラミンの量の測定値として検出される。

本明細書に記載するように、問題の分析物質と他の干渉物質とを含む試験試ｔ） は、天然または人工の液体であり得、限定的ではないが、全面、血清、血漿、尿 、便、唾液、脳を髄液、脳組織などの生物学的試験試料や、土壌、下水、上水、 車両廃棄物、ｆヒ石燃ｔ１などの工業的及び環境的試験試料を挙げることができ る。更に試験試料は、試＠試ｉｔの抽出物またはその任意の誘導体でもよい。例 えば試験試料はクロマトグラフィー分画化を実施するものてあり、この場合には 上述の酸化的前処理は、かかる分画化の前、最中、または後に、任意のまたは全 ての分画に実施する。

本発明の範囲は、木明ｌ１ｌＩ書に記載の分析方法に制限されることはなく、ま た、本発明の方法は、かかる測定を行なうために本明細書に記載のごとき２種Ｕ 上の成分間の特性を区別する必要のある種々の分析方法に使用し得ることが理解 される。

本発明の試験キットは、上述のごとき前処理試薬と、本明細書に記載のごとき所 望の分析測定を実施するのに必要となる全ての必須試薬とを含む。試験キットは 、必要な試薬を含む１つ以上の容器の組合せとして、また試薬の適合性によって 許容されるならば組成物または混合物として、市販の包装形態でりえられる。特 に好ましいのは、本発明の適当な前処理試薬と、適当な蛍光トレーサ化合物と、 上述のごとき適当な抗体物質とを含む、環系抗うっ剤の蛍光偏光イムノアッセイ 測定のための試験キットである。試験キットは勿論、緩衝剤、希釈剤、標準剤（ ｓｔａｎｄａｒｄｓ）などの、一般使用者の見地から望ましいと言える当分野に おいて公知の他の物質を含むこともできる。

以下、実施例によって本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に制限され ることはない。

大」１倒」− イミプラミン及びデシプラミン用蛍光偏光イムノアッセイイミプラミン（１８１ ＞又はデシプラミン（ＤＭＩ）用＾ｂｂｏｔｔＴＤｘ　（登録商標）分析システ ムを使用する蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩ＾）では、フェノチアジンく例え ばクロルプロマジン）はＩＮ＋及びＤＭＩの測定を妨げ得る。特に１Ｍ口こ対す る抗体は、クロルプロマジン又はデスメチルクロルプロマジンとイミプラミンと が患者の試料中に存在すると、これらを認識し得る。生しる定量誤差を避けるた めに、試料をクロラミン−Ｔｒ％理して、クロルプロマジン又はデスメチルクロ ルプロマジンの構造を、この抗圧環系免疫血清によってほとんど認識されない形 態に酸化的に変える。

イミアラミンの測定のために、０．１００ｍＬの０．２５Ｍ　ＮａＯＨを加えて 試料（０，１００ＭＬ）を塩基性にし、０．０２５ｍ１．のイソアミルアルコー ルを加えて血清タンパク質がら解離した。混合物を５０分間放置し、その（４０ ，５０ｍＬのデカンを加えて、試料を１０分間激しく撹拌した。次いで、試料７ ／デカンの二相混合物を５０分間遠心分離して、これらの相を透明にした。イミ ブラミンの場合、２０ｍｉｃｒｏｇｒａｍ／ｍ１．のりＩ７ラミンーＴＯ，０１ ０Ｍ１．を加えた酸性緩衝液ｐＨ３を０．１００＋＊Ｌ含んでいる管にＯ、１０ ０ｍＬのデカン上相を移動した。この量のクロラミン−Ｔは、元の試料中の１． Ｏｍｉｃｒｏｇｒａ−までのクロルプロマジンを完全に変性させることができる 。クロラミ〉・−Ｔの量を変えて、試ｔ）中に存在すると予想される異なる濃度 のフェノチアジンに対処１−でもよい。以下の表Ｉは、このＰ４キは３００ｎｇ ／＋＊Ｌのクロルプロマジンと１２８　ｎ　（３７ｍ　Ｌのイミプラミンとを含 んでいる試料の＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘ分析システムによる分析を比較して得られ た結果の典型例を示している。クロルプロマジンは、イミプラミン用ＦＰＩ＾て 使用した抗体と交差反応する。この酸のクロルプロマジンでは、試ｔＩ中に実際 に存在するイミブラミンの量ががなり過剰に評価されたく１７１％）。試料抽出 物をクロラミン−Ｔで処理すると、クロルプロマジンの構造が変化して、もはや アッセイの干渉物質ではなくなった。クロラミン　Ｔでの処理を行うことによっ てこの過剰評価が完全に排除された。

宍上 イミグラミン用ＦＰｌ＾でのクロルプロマジン干渉物質の除去筬拌　邑ｉ　貢ｌ ＩＭＩ　なし　１２８Ｂ／ｍｌ。

１Ｍし３００ｎｇＣ１”Ｚ　なし　２１９ｎｇ／ｍｌ。

ＩＭＩ＋３００ｎｇ　ＣＰＺ　クロラミン−Ｔ　１３０ｎｇ／＋ｎＬフェノチア ジンの存在下でデシブラミンを分析するために前述した方法を実施して、本明細 書で説明するように干渉物質を除去することができた。

別色−匹λ イミプラミン及びデシプラミンの高圧液体クロマ■・グラフィーの測定 環系系抗うつ薬（例えばイミブラミン及びデシプラミン）の）ｌ　Ｐ　ｔ、Ｃ分 析では、フェノチアジン（例えばクロルプロマジン又はその代謝物、デスメチル クロルプロマジン）が環系系抗うつ薬又はその代謝物の一種の分析を妨げ得る。

内部標準物質を加えた試料１．０ＮＩに０．２００ｍ１の１．ＯＭ　Ｎａ０ｔｌ を加えて塩基性にし、次いで０．２００１ＩＬのイソアミルアルコールを加えて 被分析物ｗ、／タンパク質の相互作用を阻害した１次いでｌ０ＮＩ、のヘプタン を加え、二相混合物を１０時間撹拌し、次いで約２０００ｘ　ｇで３０分間遠心 分離した。次いで、１００ｗ＋ｉｃｒｏｇｒａｍｓ／ｍｌ−のクロラミン−ＴＯ ，１００＋＋ｔ、を加えた酸性ｔＲＩｌｒ　Ｄ　ｐＨ３を１．０！ＩＬ含んでい る試験管にヘプタン相を完全に移した。次いで０．２００彌Ｉ、の］　ＨＮ　ａ 　ＯＨ及び０．１０（ｈＬのイソアミルアルコールを加えて酸性［１！ｉ液を塩 基性にした。この溶液に５．０ｗ＋１．のペンタンを加え、二相混合物を３０分 間撹拌し、次いて約２０００Ｘ　ｇて遠心分離した。ペンタンをピペットて小型 バイアルに移し、窒素流で乾燥し、ＨＰ　Ｌ　Ｃ移動相で再構成した９次いで、 分光光度紫外線検出器を使用してＨＰＬＣによってアリコートを分析した。２５ ４ｎ悄での観測によって、この場合の重要化合物を定量した。

多くの異なる移動相を用いてＩｔ　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析を実施してもよい。

図１に示す実施性様のグラフは、６　ｍｍ　ｘ　１５　ｃｍのカラムで３ミクロ ンのシリカ固定相を使用していた。移動相は８０部の２５１ＭＮａＨ２ＰＯ＋、 ＤＨ３，０と、２０部のアセ■−二トリルとの混合物からなり、　２１ｍＭロー ノニルアミンでドーピングしｆＳ６製造業者の使用した試験システ１８ては、カ ラ１８は約１５０．０００７′−の理論プレートを示していた。ＩＥＮＩは、り １フルブロマジシの代謝物であるデスメチルクロルプロマジンが、被分析物質及 び内部標準物質が溶離するクロマトグラムの領域て溶離することを示している。

クロラミン−Ｔで処理すると、モ渉ｋＷとしてのデスメチルクロルプロマジンが 完全に除去された。

大−施−例−３− フェノチアジンの存在ｒに於ける全ドキセピンの蛍光偏光イム／アッセイ 本実施例は、クロルプロマジン（ＣＰＺ）がドキセピン及びデスドキセビ〉（全 ＤＯＸ）のイムノアッセイに於いてがなり検出され、全ＤＯＸ（表■）を定量す るには不正確な読取値を与えることを示している。これらのデータは、本方法に 於いてクロラミン−■を含むと、全ＤＯＸのイムノアッセイに於いてＣＰＺを識 別しないことも示している。

全［）ＯＸ及びＣＰＺを含む０．２５ｍＬｉ容？ｌに、ヘフ″タン　イソアミル アルコール（３５：１．Ｖ／Ｖ）溶液０．９０＋＊Ｌ及び炭酸ナトリウム溶液０ ．１００ＮＩを添加した。６０秒間掻き混ぜ、３０秒間遠心分離した後、上相（ ヘプタン：イソアミルアルコール相）０．５０ＴＩＬを清浄な試験管に移した。

次に、）ｌｃｆ（０，０５Ｎ＞０．１００ＮＩ及び蒸留水または蒸留水中のクロ ラミ７−Ｔ＜０．０４０ｘｇ／ｍＬ＞０．０４０ＮＩ。

を添加した。３０秒間掻き混ぜ、１２０秒待ってがら３ｏ秒間遠心分離した後、 下相＜ＨＣｌと、クロラミン−Ｔを含むがまたは含まない水の水相）０．０８５ ＮＩを、＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘ分析システムを使用する全ＤＯＸのイムノアッセ イで定量するために移した。

全ＤＯに１１００ｎ／ｎＬ及びＣＰＺ　１０００ｎｔｔ／ａＬを含むサンプルに 於いて、クロラミン〜Ｔを添加しながったイムノアッセイでの濃度は２３２ｎｇ ／ｍＬで、即ち以下の表Ｈに示されるように閾値以上の誤差であった。タロラミ ン−■を添加すると、全ＤＯＸのイムノアッセイによるＣＰＺを検出せず、９５ Ｂ／ｍ１．という値が得られた。この方法により、ＣＰｚを含むサンプル中でも イムノアッセイにより全ＤＯＸの定量ができる。

＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘ全ＣＯＸ　Ｆｌ”ｌ＾に於けるクロルプロマジン干渉物質 の排除０　’１．００Ｑ　１４３　７ ５（１１０００＋８１　４９ ＋００　０　１０４　１０１ １５（）　１．０００　２７４　１５５［全濃度は、ｎｙ／＋ｗして表される］ 大Ｊ１例コＬ アミトリブチリン及びノルトリアチリンの蛍光偏光イム／アッセイ クロルプロマジン（ｃｐｚ＞は、アミトリブチリン（＾Ｍ＋）及びノルドリブ千 りン（ＮＯｌ’ｔ　）のＦｅ］＾泗定で使用する抗体と交差反応し、５ＮＩ及び ＮＯＲレヘルの過剰刺激をがなり起こす。試験サンプルを本発明のクロラミン− ■で処理すると、どのイム／アッセイでももはや交差反応しないようにクロルプ ロマジンの構造を酸化して変形する。

試験サンプル（０，２００ｍ１）を、ＩＮ　ＮａＯＨを０．０５０ＮＩ添加して 塩基性とし、　０．０５０識Ｌイソアミルアルコールを添加して血漬蛋白質と分 離した。この混合物をしばらくの問混合し、少なくと６５．０分放置し、その後 ｎ−へブタン０．５００ｍ１を添加し、サンプルを３０秒間激しく掻き混ぜた。

サンプル／Ｔ１−ヘブタンニ相混合物を、１０，０ＯＯＸ［＋で１分間遠心分離 して相を透明にした。上（ｎ−へブタン）相の正確なアリコート０．４００納Ｌ を、　０．１Ｍグリシル−グリシン＆Ｗ衝液（ｐＨ３）０．４００ｍ１゜を含む 新しい試験管に移し、３０秒間激しく掻き混ぜた。クロラミン−Ｔ４溶液（１０ ０μｇ／ｍＬ）の４０μＮ（０，０４０納Ｌ）を二相混合物（表■に記載のクロ ラミン−■処理物）に添加した。対照条件（処理無し）下ては、抽出＆［液０． ０４０ｍＬをクロラミン−■の代わりに添加した。サンプルを１０．ＯＯＯｘｇ で１分間遠心分離し、底（グリシル−グリシン）相を分析用に採取した。処理及 び未処理サンプルを＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘ分析システムで二回に実施し、濃度を ＾旧またはＮＯＨのいずれかに関する貯蔵検員線を使用して決定した。

宍■ ＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘアミノトリブチリン及びノルトリブチリンＦ円＾に於ける クロルプロマジン干渉物質の排除 丈ンスル　処一種　濃一度 ＡＭＩ　なし　７５　ｎｇ／５Ｌ ＡＮｌ＋ＣＰＺ　なし　３００　ｎｙ／ｗ＋ＬＡＭＩ　＋ＣＰＺ　クロラミン− Ｔ　７８　ｎｙ／ｍＬｍ　なし　６５　ｎｙ／糺 ＮＯＲ＋ＣＰＺ　なし　１０１　ｎｇ／曽ＬＮＯＲ＋ＣＰＺ　クロラミン−Ｔ　 ７３　ｎｇ／ｍＬ。

［ＣＰＺ濃度＝１，０００　ｎｙ／糺］従って、クロラミン−Ｔて処理すると、 クロルプロマジンが高濃度で存在しても＾Ｍｌ及びＮＯＲレベルを正しく測定す ることができる。

及１九晃 アミノトリブチリン及びノルトリブチリンの高圧液体クロマトグラフィー測定 環系系抗−うつ剤（例えば、アミノトリブチリン及びノルトリブチリン）の１（ ＰＬＣ分析に於いて、フェノチアジン剤（例えば、クロルプロマジンまたはその 代謝物質デスメチルクロルプロマジン）は、これらの抗−うつ剤またはそのヒド ロキシル化代謝物質の分析を干渉する。ノルトリブチリン、１０−ヒトロキシア ミノトリプチリン、アミノトリブチリン、デスメチルクロルプロマジン及びクロ ルプロマジンを含む各０．４００＋＊Ｌアリコートを、クロラミン−Ｔ溶液０． ０４０納Ｌ（１００μｙｚ’＠Ｌ）または水０．０４０ｍＬのいずれかで処理し たく図２）、各場合に於いて、全サンプル（０，４４０納Ｌ）をＩＮ水酸化ナト リウム０．０５０＊Ｌを添加して塩基性とし、次いでｎ−ペンタン１．ＯｗＬを 添加した。二相混合物を１分間激しく掻き混ぜ、１０．０ＯＯＸ［＋で１分間遠 心分離した。ペンタン層をコニカル試験管に移し、窒素流で蒸発乾個させて、Ｈ ＰＬＣ移動相で再構築した。アリコートを、２５４０−に於ける分光光度計紫外 検出を使用する）ＩＰＬＣにより分析した。このＩＩＰＬｃ分析方法の固相及び 移動相構成成分は、上記実施例２に記載通りである。

支１１更 過酸化水素存在下に於ける二酸化セレンによるクロルプロマジン干渉物質の排除 イミプラミンを含む試験サンプル（０，１００納Ｌ）を、０．２５ＭＮａＯＨを ０．１００納Ｌ添加して塩基性とし、イソアミルアルコール０．０２５納Ｌを添 加して血清蛋白質を除去した。混合物を５．０分放置し、その後ノナン０．５０ ＊Ｌを添加し、サンプルを１．０分間掻き混ぜた。混合物を５．０分間約２００ ０ｘｇで遠心分離し、相を透明にした。ノナン上相の０．１００納Ｌアリコート を、二酸化セレン（ＳｅＯｚ）１００μＩＦ／！ＩＬを含む酸性ＩＩ衝液０　、 １００輸Ｌ（’）　入ッた試験管に移した。この二相混合物に１（２０２の３ｏ ｚ水溶液２０μｌを添加し、混合物を掻き混ぜ、下の水相９０μｔ’（０，０９ ０納Ｌ）をサンプルウェルに移して、＾ｂｂｏｔｔ　ＴＤｘ分析システムにより 分析した（表■）。サンプル抽出物を二酸化セレン及び過酸化水素と処理するこ とにより、過酸化水素の非−存在下でも二酸化セレンがクロルプロマジンを硫酸 クロルプロマジンまたはクロルプロマジンスルホンに転化させなかったことから 、もはやアッセイ干渉物質でないようにクロルプロマジンの化学構造を改質した 。

献 イミブラミンｆｆ円＾に於けるクロルプロマジン干渉物質の除去サンプル　処理 　測定量 １８１　なし　１５　ｎｇ／ｍＬ １Ｍ１　＋３１２ｎｙＣＰＺ　なし　９８　ｎｙ／ｍＬ１Ｎ＋　＋３１２ｎｆＣ ＰＺ　５ｅ０２＋Ｈ２Ｏ２１４，７ｎｆ／ｓＬ本明細書中に説明したように、本 発明の趣旨及び範囲を逸脱せずに本発明の多くの変形及び変更が可能であり、従 ってこのような範囲は、付記請求項によってのみ限定されるものとする。

す樽侵ｙ１矢（ 図１ 十偽へ理ｔ（ 図　２ 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　フィッシュポウ、ジエフリー・アールアメリカ合衆国、イリノ イ・６０６５７、シカゴ、リンカーン・アベニュー・ナンバー・２・エフ・３０ ４ （７２）発明者　バリントン、チャールズ・エイアメリカ合衆国、イリノイ・６ ００４６、レイク・ビラ、ショショーニ・５０１ （７２）発明者　バーター、ダリル・イーアメリカ合衆国、イリノイ・６００６ ０、マンダリン、サウスポート・ロード・２２５

Claims (39)

【特許請求の範囲】
1. １． 問題の化合物と更に該化合物と実質的に類似した化学構造を有する干渉化 合物を少なくとも１つ含むテストサンプル中の問題の化合物を分析測定する方法 であって、（ａ）テストサンプルを、 ｉ）問題の化合物と干渉化合物とが相互に実質的に区別され得るように、問題の 化合物の化学構造を実質的に変化させることなく干渉化合物の化学構造を変化さ せることにより変化させた干渉化合物の化学的構造を問題の化合物の化学構造と 実質的に相違させ得る試薬、またはｉｉ）問題の化合物と干渉化合物とが相互に 実質的に区別され得るように、少なくとも１つの干渉化合物の化学構造を実質的 に変化させることなく問題の化合物の化学構造を変化させることにより変化させ た問題の化合物の化学的構造を干渉化合物の化学構造と実質的に相違させ得る試 薬、と接触させる工程、および （ｂ）テストサンプル中の問題の化合物または少なくとも１つの干渉化合物の存 在もしくは量を測定する工程を含むことを特徴とする前記方法。
2. ２．テストサンプルが生物学的テストサンプルである請求項１に記載の方法。
3. ３．　生物学的テストサンプルが全血、尿、血清、血漿、髓液および唾液から成 るグループから選択される請求項２に記載の方法。
4. ４．試薬が酸化試薬である請求項１に記載の方法。
5. ５．酸化試薬がその場で生成される請求項４に記載の方法。
6. ６．酸化試薬がＮ−クロロスルホンアミド、次亜塩素酸塩、次亜臭素酸塩、過酸 化物、過酸および酸化酵素から成るグループから選択される請求項４に記載の方 法。
7. ７．試薬が固体支持材料に固定されている請求項１に記載の方法。
8. ８．試薬が乾燥試薬である請求項１に記載の方法。
9. ９．試薬が液体試薬である請求項１に記載の方法。
10. １０．問題の化合物が含硫黄分析物である請求項１に記載の方法。
11. １１．問題の化合物が３環式抗うつ薬である請求項１に記載の方法。
12. １２．干渉化合物が含硫黄物質である請求項１に記載の方法。
13. １３．含硫黄物質がフェノチアジンである請求項１２に記載の方法。
14. １４．化合物をイムノアッセイにより測定する請求項１に記載の方法。
15. １５．化合物をクロマトグラフィー法により測定する請求項１に記載の方法。
16. １６．化合物を高速液体クロマトグラフィーにより測定する請求項１に記載の方 法。
17. １７．化合物を薄層クロマトグラフィーにより測定する請求項１に記載の方法。
18. １８．３環式抗うつ薬と該３環式抗うつ薬と実質的に類似した化学構造を有する 含硫黄化合物を含む生物学的テストサンプル中の３環式抗うつ薬を定量するため のイムノアッセイ方法であって、 （ａ）テストサンプルを、３環式抗うつ薬の化学構造を実質的に変化させること なく含硫黄化合物を選択的に酸化させることにより変化させた含硫黄化合物に対 する３環式抗うつ薬の抗体の結合を実質的に減少させ得る酸化試薬と接触させる ことにより予備処理溶液を作成する工程、 （ｂ）予備処理溶液を、蛍光物質をラベルした３環式抗うつ薬もしくはその誘導 体を含み抗体の存在に応答して検出可能な蛍光偏光を発生し得る標識試薬および 該標識試薬とテストサンプル由来の３環式抗うつ薬に結合し得る抗体と接触させ ることにより反応溶液を形成する工程、および （ｃ）反応溶液に応答した蛍光偏光を、テストサンプル中に存在する３環式抗う つ薬の量の関数として検出する工程を含むことを特徴とする前記方法。
19. １９．テストサンプルが全血、尿、血清、血漿、髓液および唾液から成るグルー プから選択される請求項１８に記載の方法。
20. ２０．酸化試薬がその場で生成される請求項１８に記載の方法。
21. ２１．酸化試薬がＮ−ク０口スルホンアミド、次亜塩素酸塩、次亜臭素酸塩、過 酸化物、過酸および酸化酵素から成るグループから選択される請求項１８に記載 の方法。
22. ２２．酸化試薬がＮ−ク０口−４−メチルベンゼンスルホンアミドのナトリウム 塩である請求項１８に記載の方法。
23. ２３．３環式抗うつ薬がアミトリプチリン、ノルトリプチリン、イミプラミン、 デシプラミン、プロトリプチリン、ドキセピン、デスドキセピンおよびクロミプ ラミンから成るグループから選択される請求項１８に記載の方法。
24. ２４．含硫黄化合物が、クロルプロマジン、テ゜スメチルクロルプロマジン、チ オリダジン、デスメチルチオリダジン、スルホリダジンおよびメソリダジンから 成るグループから選択されるフェノチアジンである請求項１８に記載の方法。
25. ２５．問題の化合物と更に該化合物と実質的に類似した化学構造を有する干渉化 合物を少なくとも１つ含むテストサンプル中の問題の化合物を分析測定するため に使用されるテストキットであって、 ｉ）問題の化合物と干渉化合物とが相互に実質的に区別され得るように、問題の 化合物の化学構造を実質的に変化させることなく干渉化合物の化学構造を変化さ せることにより変化させた干渉化合物の化学的構造を問題の化合物の化学構造と 実質的に相違させ得る試薬、または ｉｉ）問題の化合物と干渉化合物とが相互に実質的に区別され得るように、少な くとも１つの干渉化合物の化学構造を実質的に変化させることなく問題の化合物 の化学構造を変化させることにより変化させた問題の化合物の化学的構造を干渉 化合物の化学構造と実質的に相違させ得る試薬、 を含むことを特徴とする前記テストキット。
26. ２６．試薬が酸化試薬である請求項２５に記載のテストキット。
27. ２７．酸化試薬がその場で生成される請求項２６に記載のテストキット。
28. ２８．酸化試薬がＮ−クロロスルホンアミド、次亜塩素酸塩、次亜臭素酸塩、過 酸化物、過酸および酸化酵素から成るグループから選択される請求項２６に記載 のテストキット。
29. ２９．試薬が固体支持材料に固定されている請求項２５に記載のテストキット。
30. ３０．試薬が乾燥試薬である請求項２５に記載のテストキット。
31. ３１．試薬が液体試薬である請求項２５に記載のテストキット。
32. ３２．問題の化合物が含硫黄分析物である請求項２５に記載のテストキット。
33. ３３．問題の化合物が３環式抗うつ薬である請求項２５に記載のテストキット。
34. ３４．干渉化合物が含硫黄物質である請求項２５に記載のテストキット。
35. ３５．含硫黄物質がフェノチアジンである請求項３４に記載のテストキット。
36. ３６．化合物をイムノアッセイにより測定する際に使用される請求項２５に記載 のテストキット。
37. ３７．化合物をクロマトグラフィー法により測定する際に使用される請求項２５ に記載のテストキット。
38. ３８．化合物を高速液体クロマトグラフィーにより測定する際に使用される請求 項２５に記載のテストキット。
39. ３９．化合物を薄層クロマトグラフィーにより測定する際に使用される請求項２ ５に記載のテストキット。