JPH07500565A - 免疫抑制ムチンを生成する腺がんの能動的特異免疫療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫抑制ムチンを生成する腺がんの能動的特異免疫療法　・関連出願への言及 ここでは１９８８年７月２２日出願の米国特許出願第０７／２２２．３９０号の 細胞性免疫応答の促進と題するＢ、Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒと Ｃａｒｉｎａ　Ｈｅｎｎｊｎｇｓｓｏｎによる関連出願につき言及し、その記載 をここに組み込む。

発明の背景 能動的特異腫瘍免疫療法は宿主の内在性免疫性を抗原によって刺激する試みであ る。典型的なやり方は、宿主自身の腫瘍、他の患者の腫瘍、あるいは確立した腫 瘍細胞系から得た全細胞ないし抽出物によって宿主を免疫する。免疫感作物質と しては網内細胞系を非特異的に刺激する微生物的あるいは化学的アジュバントが よく用いられる。

連抗原を用いてもよい。これらのものは抗原的に複雑な細胞や細胞溶解産物より も特異的ではあるが、抗原決定基がより少ないことによって免疫応答がよりはつ きりしなくなる可能性がある。腫瘍細胞は不均質で、しかも時間とともに免疫的 に変化するため、介入時に全腫瘍細胞が免疫抗原を放出するかどうかＣよ確かで はない。

体液性免疫はＢ　ＩＪンパ球と呼ばれる特異な細胞群が担ってｌ、Ｎる。

これらの細胞は抗体を作り、これらが血液やリンパ液中を循環する。一方、細胞 介在免疫は免疫系のＴ細胞が担っている。

細胞性免疫はとくに真菌、寄生体、細胞内ウィルス感染、がん細胞および異物に 対して効果があるのに対して、体液性応答は主として細菌性やウィルス性感染の 細胞外相に対して防御する。

抗原侵入位置でのそれの封じ込めは局在性炎症による壁囲いによって行われる。

急性炎症の特徴は血漿タンパク質と多核白血球の流入である。一方、慢性炎症の 特徴はＴリンパ球とマクロファージの浸潤である。皮膚内で急性（抗体誘起の） および慢性（Ｔ細胞誘起の）炎症が起きた場合、それらはそれぞれ速時型過敏反 応（ＩＴＨ）および遅延型過敏反応（ＤＴＨ）と呼ばれる。

ＩＴＨのピークは２４時間であり、４８時間以内におさまるのに対してＤＴＨは ２４−４８時間内に現れて４８−７２時間にピークがある。ＤＴＦＩ反応に関わ るＴ細胞のサブセントをここではＤＴＨ−工７エクター細胞と呼びそれらはＣＤ ４　’表現型をもっている。

Ｔリンパ球は細胞毒活性を有するＴ細胞のサブセンｈに分化することもできる。

これらのＴ細胞は標的細胞を直接に、あるいは細胞毒因子の分泌を通じて間接に 殺すことができる。ある研究者達はもう一つのＴ細胞ザブセントが抑制的ないし 制御内股にを果たしているど信じている（勿論これらはＴ細胞の同じサブセント であるが異なる形に活性化されたものである）。大部分の細胞毒性Ｔ細胞とサブ レンサーＴ細胞はＣＤ８　”″の表現型を有する。サブレ７ンヨン（抑制）は抗 原特異的と思われ、細胞性免疫、体液性免疫のいずれが、あるいは両免疫系に影 響すると考えられる。

ムチンは補乳動物の粘膜由来の分子で、分子量は１５万ダルトン以上、炭水化物 含量が７０％以上で、水と化学結合を作って粘着性ないし潤滑性の体液になって いるという特徴をもっている。

エビグルカニンのように、いくっがのムチンは腺がんと関係があるとされている 。

ムチンは能動的特異腫瘍免疫療法に用いるために精製されることもあるだろうが 、もう一つの用途として合成抗原を作るのに用いられる。すなわち、適合キャリ アー分子を有する種々の腫瘍関連炭水化物ハブテン分子の複合体である。

エピグリカニン（以下、ｒｅｐｉＪと略すことがある）は乳腺がん移植細胞系Ｔ Ａ３Ｈａが作り出す主要細胞表面糖タンパク質（５０万ダルトン）である。Ｆｒ ｉｂｅｒｇ、　Ｊｒ、、Ｊ、Ｎ、Ｃ，］、、４８：１４６３（１９７２）；Ｃｏ ｄｉｎｇｉｏｎ、ｅｔ　ａｌ、、Ｃａｎｃ、Ｒｅｓ、、４３：４３７３（１９８ ３）、ＴＡ３Ｈａは他に対して非常に有害で致死的であることに注意すべきであ る。マウスに移植後の生存日数は通常僅かに１５〜２０日である。さらに、ＴＡ ３Ｉ（ａは免疫抵抗性をもつことが報告されている。

ＴＡ３Ｈａがん細胞は主としてエビグリカニンからなるムヂン様グリコ力すノク スで覆われている。ＣｏｄｉｎｇＬｏｎ、ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｎ、Ｃ，１，。

６０：８］１（１９７８）；Ｍｉｌｌｅｒ、　ｅｃ　ａｌ、、　Ｊ、Ｎ、Ｃ，１ ，，６８：９８］（１９８２）、−’−ピグリカニンは多くのヒｌ−Ｉｌｌ瘍関 連ムチンに類似している。Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｌａｂ 、　Ｍｅｄ、、１６：５５６（１９８５）−エピグリヵニンと交叉反応する抗原 はヒト乳がん、結腸かんおよび卵巣かんで見出されている。Ｃｏｄ　ｉｎｇｔｏ ｎ　、　ＪＮＣ！　、　７３　：　１０２９（１９８４）　。

Ｅｐｉの主組成分は炭水化物であり（７５〜８０％）、多種Ｔ及び丁ｎ決定基を 発現する。ＴとＴｎは一般かん腫自己抗原である。Ｓｐ　ｒｉｎｇｅｒ、５ｃｉ ｅｎｃｅ、２２４１１９８（１９８４）、ＴＦ（Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅ ｎｒｅｉｃｈ）抗原としても知られているＴ−α抗原はヒト血液グループＭＮ抗 原の直前前駆体である。通常、Ｔ−α抗原はシアル酸でマスクされているために ヒト免疫系には利用できない。Ｆｒ１ｅｄｅｎｒｅｉｃｈは赤血球細胞をノイロ ミダーゼで処理することによってＴ−α抗原を露出させ、その後Ｔ−σ抗原をヒ ト血清の抗−Ｔ抗体と結合させた。

ＫＩｍと０ｈｌｅｎｂｒｕｃｋはＴ抗原の免疫支配部位か三糖β−１’）−Ｇａ ｌ−（１−３）−ａ−Ｄ−ＧａｌＮａｃであると決定した。Ｚ、　Ｉｍｍｕｎ− Ｆｏｒｓｈ、　１３０：８８−８９（１９６６）。その後、鯉常絹織と反対にあ る種の腺がんが活性でマスクされない形でＴ−αおよびＴｎ決定基をもつことを はっきりさせた。Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、ｅｔ　ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ、４５＋２９ ４９−５４（１９８０）、ＴＦとＴｎ決定基両者はヒト腺かんの約９０％に見出 されている。Ｓｐｒ　ｉｎｇｅｒ、５ｃｉｅｎｃｅ、２２４：１１９８（１９８ ４）。

このＴ−α決定基は合成的に作られてきている。Ｒａｔｃｌｉｖｔｅ、ｅｔａｌ 、、ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅｓ、、９３：３５−４］（１９８］）；Ｌ ｅｍｉｅｕｘ、ＥＰ　Ｐａｔｅｎｔ４４、、］８８．上記引用文献のうち後者の 例）１は、遅延型過敏応答を検知するためにＨ３Ａ担体（Ｈ５Ａ分子あたり７． Ｉ２．Ｉ４および２２ハプテンの取り込み）上の下−σハプテンの使用について 記述している。抗−Ｔ−αモノクローナル抗体の生成におけるこのようなハブテ ンの使用については言及していない。合成Ｔ−σノ＼ブテンについてはＫｏｌａ ｒ、Ｕ、Ｓ、４，４４２．２８２によっても述べられている。

ＲａｈｍａｎとＬｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ、Ｊ、１ｍｍｕｎｏ１．１２９：２０２ １−２０２４（１９８２）はモノクローナル抗体を生成するのにＴ−α抗原（ノ イロミダーゼー処理赤血球）の天然型を用いたが、これらの細胞へのモノクロー ナル抗体の結合は合成Ｔ−σハプテンで競争的に阻害された。こうして、合成Ｔ −αハプテンを使用することによって特定の抗体を識別できる。

Ｇａ１（β−１３）ＧａｌＮａｃ（βｌ−４）Ｇａｌ（βｌ−４）Ｇｌｃ（β１ −１）セラマイトの構造をもつガングリオテトラオンルセラマイド、すなわち八 −ｓｉａｌｏ−ＧＭＩはガングリオシドＧＭＩの一部として脳組織中に見出され る。この分子の免疫支配部位（末端三糖）は、ＴＦのそれに対してσ結合の代わ りにβ結合（下線部位）で置き換えられた点が異なっており、そのためここでは Ｔ−βと呼ばれる（Ｔ−σと区別するため）　、　Ｌｅｍｉｅｕｘ、Ｕ、Ｓ、４ ．Ｉ３７．４０１はβ−Ｄ−アメメリックグリコンド結合により架橋アームとア ルドースに結合させるための反応条件を明らかにしている。合成Ｔ−βハブテン はいくつかの免疫的研究に用いられてきている。Ｈｏｐｐｎｅｒ、ｅｒ　ａｌ、 、Ｖｏｘ−５ａｎｇ、、４８：２４６−５３（１９８５）；Ｒａｈｍａｎ　ａｎ ｄ　Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ、５ｕｐｒａ；Ｌｏｎｇ−ｅｎｅｃｋｅｒ、ｅｔ　 ａｌ、、Ｊｎｔ、Ｊ　、Ｃａｎｃｅｒ、３３：１２３−１２９（１９８４）−合 成Ｔ〜σ、Ｔ−βおよびＴｎ抗原は抗かんＴ細胞免疫を刺激するのに用いられて さた。Ｉｉｅｎｎｌｎｇｓｓｏｎ、ｅｔａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ　１ｍｍｕｎｏｌ 。

１ｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、　、２５：２３１４］（１９８７）を引用してここに取 り入れる。

サイクロフォスフアミド（Ｎ、Ｎ−ｂｉｓＣ２−ｃｈｏｌｏ−ｅｔｈｙｌ］−ｔ ｅｔｒａｈ−ｙｄｒｏ−２Ｈ−！　＊　３　、２−ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｒ 　ｉ　ｎｅ−２−ａｍ　ｉ　ｎｅ−２−ｏｘ　１ｄｅ）はナイトロジェンマスタ ードの誘導体であるが、これはＤＮＡのクロスリンクを起こす細胞毒物質である 。これは早く分裂する細胞に対して最も効果的であり、したがってがん化学療法 に用いられている。それはリンパ球細胞も殺してしまうので、免疫抑制剤として も有用であり、知られている最強の免疫抑制物質の一つである。

大部分の化学療法剤は宿主免疫を抑制するけれども、ある種の化学療法剤は特別 の条件下では宿主の抗腫瘍免疫を増強することができる。Ｂｅｒｄ　ａｎｄ　Ｍ ａｓｔｒａｎｇｅｌｏ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４８：１６７１７５（１９８ ８）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ、ｅｔ　ａｌ、、ｓｅｍｉｎａｒｓ　ｉｎ　Ｏｎ ｃｏｌｏｇｙ、１３：１８６−９４（１９８６）、Ｃａｍｐｂｅｌｌ、ｅｔ　ａ ｌ−、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、Ｉ４１：３２２７（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　ｌ。

１９８８）らは、サイクロ７オスミドがマウスＢ細胞リンパ腫を植えたマウスに おける腫瘍負荷を減少させ、それによって抗イデオタイプの抗体ワクチンによる 能動的特異免疫療法によりよく適応するようになることを報告した。イデオタイ プがリンパ腫のなんらかの炭水化物エピトープに似ていることを示唆するものは 論文中には何もない。どんな免疫抑制ムチンもリンパ腫と関連しないことがわか っている。Ｒｅｉｓｓｍａｎ、ｅＬ　ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　 、　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐ　−、２８：　１７９−８４（１９８９ＸＬｅｕ ｋｅｍ　１ａｓ）　。

Ｍｉｔｃｈｅｌｌ、ｅｔ　ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４８：５８８３（ Ｏｃｔｏｂｅｒ　１５．１９８８）はメラノーマの患者にサイクロ７オスフアミ ドを投与し、数日後にマラノーマ細胞溶解物質で免疫した。サイクロ７オス７ア ミドの有用性は不明である。サイクロ７オスフアミドは循環する細胞溶解性リン パ球前駆体を増加させるのに有利のようにみえるが、コンカナバリンＡで誘起さ れるサプレッサーＴ細胞濃度には影響を与えず、“ここでサイクロ７オス７アミ ドを与えられた患者は細胞溶解物質混合体だけを与えられた患者に比べてより良 い臨床応答が数多くみられることはなかった”。いずれにせよ、免疫抑制ムチン はメラノーマとは関連はないことがわかった。

あるがんでは、腫瘍それ自身が免疫抑制因子を放出しているようにみえる。この 現象の最も著しい例はホジキン病であり、そこでは単一リンパ節中の小腫瘍が全 体の細胞介在免疫系に対して強力な影響を有する免疫抑制因子を放出し、あるい はその放出を誘起する。ホジキン病の患者は遅延型過敏応答は弱く、結核菌やヘ ルペスウィルス感染のような細胞内寄生体感染には異常に敏感である。Ｊｅｓｓ ｕｐ、ｅｔ　ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４８：１６８９（１９８８）は 結腸直腸がん腫の患者からのリンパ球をがん胎児抗原（ＣＥＡ）とインキュベー トすると、免疫応答を阻害する一つの因子が分泌されると述べている。しかしな がら、腫瘍免疫抑制活性がムチンによって媒介されるということはいままで認め られていない。従来はＴＡ３Ｈａ細胞が免疫抵抗性であることが報告されている が、これは免疫抑制と同じものではない。

発明の要約 腺がんのエピグリカニンとラン下顎ムチンを含むムチン類が、効果を有すること を見出した。当発明は腺がん腫瘍関連ムチンを用い、腫瘍関連ムチンの免疫抑制 効果を阻害する物質を前投与することよって能動的特異腺がん腫瘍免疫療法への 免疫応答を増進させることと関連する。好ましい物質はサイクロフォスフアミド である。

区画の簡単な説明 図１．この図はサイクロ７オスフアミドとＴＦσを有するＲ４ｂｉアジュバント 中の天然ないし合成抗原との組合わせ療法の結果として以前にＴＡ３Ｈａを移植 したにもかかわらず生き長らえている４群のマウスに２回目のＴＡ３Ｈａｌｌ！ 瘍のチャレンジを行った結果を示す。縦軸は生存百分率であり、横軸はチャレン ジ後の日数である。各群は次の通りである。（３）サイクロ７オスフアミド＋Ｅ ｐｉ−Ｒｉｂｉ　（皮下注射による４回の免疫）；（４）ＴＦσ／ＫＬＨ−Ｒｉ ｂｉ　（４回の皮下注射）；　（５）サイクロ７オスフアミドー１−ＴＦσ／　 ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ　（４回の皮下注射）；（Ｃ）対照マウス。

叉２．この図は投与のセントを増やして互いに比較したものである。各群はつぎ の通り。（１）ＣＹなし、かつ免疫せず（例えば対照）：（２）ＣＹのみ（第１ 日）；（３）ＣＹ（第１日）＋ＴＦσ／ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ　（第２日）＋ＣＹ（ ８５日）＋ＴＦα／ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ　（第６、第１０．第１７日）；（５）Ｃ Ｙ（第１日）＋ＴＦα／ＫＬＨ−Ｒｉｂ（第２、第６．第１０．第１７０）；（ ７）ＣＹのみ（第５日）；（８）ＣＹ（第５ヨ）　、ＴＦ（１／ＫＬＨ−Ｒｉｂ ｉ　（第６．第１０．第１４．第２１日）（９）ＣＹ（第１日）Ｊ−ＣＹ（第５ 日） 叉３．この図はサイクロ７オスフアミドとＴＦα含有抗原による療法のおかげで 、ＴＡ３Ｈａ移植後生存しているマウスのリンパ節細胞の、ＴＡ３Ｈａ腫瘍増殖 を阻害する能力を養子免疫的に他のマウスに移す能力を、局所Ｗｉｎｎ検定では かった結果を示す。腫瘍増殖は以下の印しをつけた線で示す：印　ドナー　リシ ビエント 黒い丸　ＣＹ＋ＴＦα／　ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ　食塩水白い九　同上　ＣＹ 黒い三角　ＣＹ（第５日月）　食塩水 白い三角　同上　ＣＹ 黒い四角　通常　食塩水 白い四角　同上　ＣＹ 好ましい実施例の詳細な記述 Ｔ−σハプテンを通常の担体タンパク質の合成複合体、通常のアジュバント中に 乳濁化したキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）　、ｌ−レバロールシ ミクロエートおよびモノ７オスホリルリビドＡ　（Ｍｐｔ、）　（組み合わせ型 Ｒ４ｂｉ　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　Ｉｎｃ、　、Ｈａｍｉ 　Ｉｔｏｎ、Ｍｏｎｔａｎａとして入手可能であり、ここでは“Ｒｉ−ｂｉ”と 呼ぶことにする）をＴ−σエピトープを発現している腫瘍をもつ宿主に投与する と生存期間を２５％延長することを我々は見出した。この複合体の投与の前にサ イクロフォス７アミドを与えると、腫瘍を５日間樹立した宿主では５０％生存が 、また腫瘍を僅か２日間樹立した宿主では９０％生存がみられた。

さらに、サイクロ７オス７アミドとＴ−α−ＫＬＨ−Ｒｉｂｉで処置し、この能 動的特異腫瘍免疫療法に生き残ったマウスから得たリンパ節細胞は、完全に陣痛 増殖を阻止することがＷｉｎｎ−型検定でわかった。

当発明はなんらか特定のアジュバントの使用に身定されるものではない。ＣＦ＾ 、５ＡＦ−ｉ、ＭＤＰ、ＢＣＧ、リポソームおよび百日咳菌毒素のような化学的 、細菌学的アジュバントをＲｉｂｉの代わりに用いることもできる。腫瘍関連ハ プテン（ま破傷風毒素やジフテリア毒素のような他の担体タンパク質あるいはレ トロウィルスペプチド（たとえばＶＰ６ウイルスペプチド）との方がＫＬＨとよ りも結合を作るかもしれず、そしてハプテン／分子対担体分子置換比は変えても よい。また、免疫抑制ムチンど交叉反応する天然あるいは合成抗原のどちらを用 いてもよい。

実験例はマウスモデルにおける乳腺かんの治療と関連しているが、当発明の治療 法はヒトを含む他の補乳動物にも、そしてまた乳以外の他の腺かんにも適用でき る。合成腫瘍関連糖タンパク（Ｓ−ＴＡＧＳ）と他の炭水化物抗原か人工的に知 られており、なんらか便利な方法で調整できるかもしれない、、ＴとＴｎ抗原が 好ましい。合成法については以下の文献参照、、Ｋａｉｆｕ　ａｎｄ　０ｓａｖ ａ、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　ｌｉ’ｅｓ、、５８：２３５（１９７７）；Ｒａｔ ｃｌｉｆｆｅ、ｅｔ　ａｌ、、］ｄ、、９３：３５（１９８１）；Ｐａｕｌｓｅ ｎ、　ｅ［ａｌ、、Ｉｄ、、１０４：１９５（１９８２）；Ｂｅｕｃｏｍｏ　ａ ｎｄ　５ｉ−ｎａｙ、　ｌ＋１．ｌｉ６：６９（１９８３）。

より好ましい抗原はＴ−α三糖エビトー／を与えるけれども、その代わりにＴ− βあるいはＴｎエピトープを与えるかもしれない。また、他の血液群抗原や前駆 体の免疫支配炭本化物エピトープが現れるかもしれない。さらに、合成ないし天 然抗原の代わりに抗イデイオ型抗体を用いてもよい・サイクロ７オスフアミドの 投与と合成＠瘍関連糖複合体の投与の間の時間間隔は固定しておらず、それはザ ブレッサーＴ細胞活性に対するサイクロ７オス７アミドの阻害効果の始まりの時 間と作用の持続、あるいは腫瘍発現ムチンによるこのような活性の誘起に依存す る。

サイクロ７オス７アミドの代わりに、他のオキサザ７オスフオリン、シメチジン あるいは抗−（ザブレンサー細胞）あるいは抗−（サブレ７サー因子）モノクロ ーナル抗体のようなもう一方の免疫抑制の拮抗体を用いてもよいだろう。これら 二つの型の抗体の市販の申出かなされている（Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ　Ｄｉｒｅ ｃｔｏｒｙｏｆ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ 　Ｒｅａｇｅｎｔｓ、　Ｐ、ＩＯ，５ｔｈ　ｅｄ、。

１９８８−８９を参照）。

当発明はサイクロフォスフアミドあるいは類似の物質が免疫増強作用を発揮する というメカニズムについての現在の解釈を基礎にするという制限をうけるべきで はない。ある物質がｌｌＩ瘍関連ムチンの免疫抑制作用に拮抗するのは、それが ムチンやＴ細胞と相互作用し、それによってムチンはもはやサプレッサーＴ細胞 の活咋を活性化しなくなるが、あるいはその物質がＴ細胞と相互作用して活性化 するか、あるいはサプレッサー因子と反応していま問題にしているムチンで誘起 されたサプレッサー活性を減少させるか、あるいはその物質が細胞免疫系の他の 成分と相互作用して、それらの成分がいま問題にしているムチンで活性化された す／レッサーＴ！胞やこれらの細胞から遊離されるサプレッサー因子に対する抵 抗力を高めるなどの場合である。

もう一方の実施例、すなわち腫瘍関連のエピトープに対して特異的なモノクロー ナル抗体中で、免疫抑制ムチンはイムノツルベンｊ・を形成するように適当な支 持体に結合している。イムノソルベントにより認識される循環ｌｌ！！！瘍関連 免疫抑制ムチンは、血漿瀉血により患者の血流から取り除がれる。腫瘍に対する 免疫応答は、能動的特異腫瘍免疫療法によって免疫系をさらに刺激してもしなく ても増強される（抗体の代わりにレクチンあるいは他の結合物質を用いてもよい ）。

第三の統合体中では、このようなモノクローナル抗体を患者に投与し、それか循 環ムチンと複合体を作り、それによってモノクローナル抗体か細胞免疫系に対し て有害作用を及ばすのを妨げる。

材料と方法 動物　実験期間！、Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙがら購入した１０週 令のＣＡＦ’ｌ／Ｊ雌マウスを用いた。

腫瘍細胞系、もとのＴＡ３−Ｈａ腫瘍細胞系はＤｒ、Ｊ、Ｆ、Ｃｏｄｉｎｇｔｏ ｎ（Ｍａｓｓ、Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏ５ｐｉｔａ１．Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍａｓｓ ）がら提供をうけｆ−、腫瘍細胞はＣＡＦＩ／Ｊマウス山でｉｎ　ｖｉｖｏで週 １回継代（腹腔内）増殖させた。

合成腫瘍関連糖コンジュゲート（Ｓ−ＴＡＧ）と対照抗原：Ｂｉｏｍ−ｉｒａ、 　Ｉｎｃ、　、Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、Ａｌｂｅｒｔａで合成されたＴａ−ＫＬＨと ｒａ−ＩＳＡの５−ＴＡＧｓ（βＧａ１−＞３ＧａｌＮＡｃ　ａ−５ｅｒ−Ｇｌ ｙ−担体）。ＫＬＨはＣａ１−Ｂｉ。

ｃｈｅｍから、Ｈ５＾はＳｉｇｍａ、ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから購入した。ハ ゲテン置換比ハＨ３Ａ’ｔ’１Ｏ−３５：ｌテア’）、ＫＬＨＴ＋１８００−３ ．０００：ｌ−１１’あツタ。

サイクロ７オス７アミｃ　（ＣＹ）投与：　Ｓｉｇｍａから購入したサイクロフ ォスフアミドを無菌食塩水に溶解して、マウスには１匹あたり１００ｍｇ／ｋｇ の濃度のｃＹを静脈内注射した。

Ｉ！ｌ瘍ワクヂンの処方と能動的特異免疫療法、　実験第１日にマウスに約７０ ０個のＴＡ３−Ｈａ腫瘍細胞をまず腹腔内注射した。マウスを一群８匹のいくつ かの群Ｉこ分け、ついで腫瘍ワクチン処方を投与した。１群：対照マウスにｃＹ を投与し免疫は行わない７２群のマウスは実験第１日にだけＣＹを投与；３群： 実験第１Ｂ１．ｍＣＹｔ［与Ｌ、ツイテ第２．６．　ＩＯ＃　ヨＵ　１７　ａ　 ｊ：　Ｔ　ａ　−ＫＬＨ４ｉｂｉ乳濁液で皮下免疫；４群・実験第２．６．１０ および１７日にＴａ−ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ乳濁液で皮下免疫を行う。別の実験では 、上の実験群にさらに二つの群を加えて実験をくり返した。５群：第５日にｃＹ を投与し、ついで第６．　ｔｏ、　１４および２１日にＴＡ−ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ 乳濁液で皮下免疫した。６群：実験５ＦＥにだけｃＹを投与し、以後−切の免疫 を行わない。

実験の対照として腫瘍を注射したマウス（ここでも一群８匹）の群を作った。１ 群：実験第１日にＣＹを投与し、ひきつづいて第２．６．ＩＯおよび１７日にＫ ＬＨ−Ｒｉｂｉ乳濁液で皮下免疫した；２群：第１日にＣＹ投与し、ひきつづい て第２．６．ＩＯおよび１７日にＲｉｂｉ化合物だけで皮下免疫した。全動物を ６０日かそれ以上にわたって生存状況を毎日モニターした。ｃｙは０．２ｍｌの 容量で静脈内投与しｔ；。Ｔａ−ＫＬＨをＲｉｂｉ化合物２．０＋ｎｌ甲に乳状 化し、それの０．２ｍｌを上腹部の２箇所の皮下と尾の基底部の１箇所に等分に 分布させた（実験第２日の免疫のみ）、。

ＥＬＩＳ人＝　生存マウスの血清中の抗−ＴＦσ（ＩｇＧとＩｇＭ）の濃度はＥ ＬＩＳＡ甲で最初の腫瘍移植後約７週に測定した。方法を簡単に記すと、実験お よび対照の血清を０．２５μｇ／ｗｅ　Ｉ　ｌの濃度でＴＦα−ＩＳＡでコート したマイクロタイターのウェル中で順次希釈した。結合した抗−ＴＦσＩｇＧと ＩｇＭ抗体を西洋ワサビパーオキシダーゼ−結合ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体とＩｇ Ｍ抗体でそれぞれ検出し！こ　。

ＤＴＨ応答についての７７トバンド検定：　ＤＴＩ（は最初の腫瘍移植後５４日 に７ツトバノド（足裏）において、Ｔａ−ＩＳＡ（５０μｇ）糖コンジュゲート でマウスを検査して評価した。マウスの右（実験群）あるいは左（対照群）足裏 に実験群では無菌食塩水中３０〜５０μｌの抗原を、対照群では無菌食塩水だけ を注射した。

注射直ｆｉＴと注射後４８時間に、フットバンドの厚みをバーニア測径器で測定 した。無菌食塩水中の糖コンジュゲートを投与したのち２４〜４８時間慢の７７ トバンドの厚みから、同じ時間での無菌食塩水だけを与えたときのフットバンド の厚みを引いたものをフットバンド厚みの増加として計算した。

生存マウスに対する丁Ａ３−Ｈａ−暉瘍の第２のチャレンジ；　７・ｌトパン１ テスにの４’Ｅ？＆？に、生存マウスにさらにｌＸｌ０’丁Ａ３−Ｈａ＠瘍細胞 を腹腔内投与した。マウスは少なくとも６０日間にわたって生存を毎日モニター した。

がん患者におけるイムノコンビテンス／イムノサプレッシブ（免疫抑制）の測定 についてのイムノア７セイ：ＤＴＨ応答はテスト抗原を皮肉注射あるいは局所塗 布ののちに発現するところの免疫的特異細胞介在応答である。がん患者を、（ｉ ）合成腫瘍関連糖コンジュゲート、たとえばＴａＨ５Ａの形の自己腫瘍抗原や、 （ｉｉ）　２．４−ジニトロクロロベンゼン（ＤＮＣＢ）のようなネオ抗原に対 してＤＴＨ反応性に関してテストすることができる。もしその患者が以前に抗原 で感作されていれば、硬結を特徴とする炎症反応が２４＝４８時間後に起こるだ ろう。これらの抗原に対して応答しないのは、その患者で免疫抑制状態にあるこ とを示している。

リンパ球トランス７オーメーンヨンは細胞性イムノコンビーテンスを測定するの に用いる特にポピユラーなｉｎ　ｖｉｔｒｏ技法である。小休止りンバ球をマイ トジェン（フィトヘマグルチンやコンカナバリンＡのような）に曝露して大リン パ芽球細胞にトランス７オームさせる。マイトジェンに曝露することによるリン パ増殖を検定する最も簡単な方法はトリチウムで標識したチミジン（：３ＨＦチ ミジン）の取り込みである。これは細胞の一定標準数に関してＤＮＡ内へのトリ チウム標識チミジンの取り込みの１分間あたりのカウント（ｃｐｍ）を測定する ものである。

前に述べたマイトジェンのほかに、丁σＨ５Ａの合成腫瘍関連糖コンジュゲート をこの検定における免疫刺激物として用いることができる。有意に低い刺激指数 （正味のｃｐｍ／非刺激ｃｐｍ）は免疫抑制が活性なしるしである。

リンパ金側集江に界する表面マーカーの同定と、これらマーカーに対する特異モ ノクローナル抗体の生成によって、がん患者における特異リンパ法則集団（Ｔ− ’＼ルバー（ＯＫＴ４）やＴサプレッサー（ＯＫＴ８）のＪうな）を検出すると 同時に定量することが可能になる。サプレッサーＴりンパ金側集団により誘起さ れた能動的免疫抑制は患者のＴ４とＴ８リンパ球副集団金側定することによって 示すことができる。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞はりンバ球のように見える。それらの細胞毒性能 は以前の感作には依存しない。ＮＫ細胞活性の測定は通常タｏミウム放出検定法 を用いてなされ、その場合ＮＫ活性をテストすべき細胞をクロミウム標識し／Ｊ ５６２細胞とインキュベーにする。３〜４時間後、各テストウェルからの上澄液 を集め、その口に放ヒされたクロミウムの量を測定する。ＴＦ抗原を有するかん 挿に対する細胞毒性Ｔリンパ球活性もまた上に述べたクロミウム放出検定法でテ ストすることかできる。

ナ］１：ムチンの免疫抑制の観察 りなくとも、エビグリカニンとウシ下顎ムチンの二つのムチンか１）ＴＨエフ　 エフター細胞（ＣＤ４　”　’）を抑制することができる。

以マの表１に結果を示すところの実験に当たっては、マウスｌこまず種々の量の エピグリカニンを注射し、対照としては等量の食塩水を注射する。６己から７日 ののち、完全フレンドアジュバント−に乳濁化した５０μｇのエビグリカニンで すべてのマウスを免疫する。免疫後７日目にフントパッドテストを実施し、２４ 時間と４８時間に正味の７・７トバツド腫脹を測定した。エピグリカニンの前投 与によりフットバンド腫脹（ＤＴＨ応答の古典的測音）の程度を７０〜９５％減 少させた。

我々はこの免疫抑制効果が養子免疫的にトランスファーできることを示すことも できた（下の表ＩＡを参照）。細胞のトランスファー後直ちに５０μｇのエビグ リカニンーＣＦＡを皮下注射して免疫し、７日後に３０μｇの免疫抗原で７ント ／＜ｙトチストを行った。フットバンド腫脹が８３％減少するのが観察されｔこ 。

表１ マウスにおけるＤＴＨ応答の エピグリカニンによる免疫抑制効果 正味の７ブトバッド腫脹＊本 実験　投与　免疫感作０２４時間　４８時間　減少割合％１Ｑ、４ｍｌ　５０μ ｇの　０．３５　０．３３　−２　食塩ｙ％　ｅｐｉ−ＣＦＡ　Ｏ，２９（１１ ８−３静脈内　６〜７日後　０．２６　０．２１　−１！００μｇ　５０μ＆の 　０．０６　０．００　８１．１２　のｅｐｉ　ｅｐｉ−ＣＦＡ　ＮＤ　ＮＤ　 −３静脈内　６〜７日後　０．１４　０．０１　７０．６１２００μｇ　５０μ ｇの　０．０１　０．０５　９０．５２　のｅｐｉ　ｅｐｉ−ＣＦＡ　Ｏ，０３ ０，００９４，３３静脈内　６〜７０後　０．１５　０．００　７１．２注二＊ ＊は３〜５匹のマウスの平均値 ＠は種々の場所への皮下注射 表ＩＡ マウスにＪずけるＤＴＨ応答ｌこ対するエピグリカニンの免疫抑制効果 正味のフントバッド睡Ｉｌｌ　＊本＊ 投与　トランスファー　２４時間　４８時間２４時間後のした細胞　減少割合％ ０．４ｍｌの　６−４　Ｘ　！０’　０．３７　０．３５　−食塩水？　肺細胞 静脈内注射 ０．４ｍｌの　６．４　Ｘ　！Ｏ’　０．０５　０．０７　８３．０食塩べ甲　 肺細胞 ２００Ｌｇのｅｐｉ を静脈内注射 注：＊＊＊はマウス５四の平均値 ウシ下顎ムチン（ＢＳＭ）の抑制活性の測定に関しては、対照としてまずマウス に２００Ｌｇの無菌食塩水を皮下注射した。

６日後、マウスをいくつかの群に分け、完全な７０インドアジユバントかＲｉｂ ｉ化合物中かで乳濁化した５０μｇのＢＳＭで免疫した。

すべてのマウスについてＢＳＭで免疫後７日目にＤＴＨ応答性についてフットバ ッドテスＩ・を行った。下の表２に示すように、正味の腫瘍が８５〜９５％抑制 された。

表２ 投与　５０μｇの 免疫　ＢＳＭ−Ｒｉｂｉまたは　０時間　２４時間　正味ＣＦＡ（皮下）で免疫 　右　左　右　左　腫脹１、ＢＳＭ−ＣＦＡ　Ｏ，２ｍ１食塩水を　２．１０　 ２．１０　２．１０　２．１０　０．００２、ＢＳＭ−ＣＦＡ　７７トバ７ド投 与　２．０５　２．１０　２．＋０　２．１０　０．０５３、ＢＳＭ−ＣＦＡ　 ＢＳ）Ｊ（５０μｇ）投与　２．００　２．０５　２．０５　２．０５　０．０ ５＝８５％　、３３土、０２９ １、ＢＳＭ−Ｒｉｂｉ　２００μｇＢＳＭを　２．０５　２．１０　２．１５　 ２．１０　０．１０２、ＢＳＭ−Ｒｉｂｉ　７ツトバンド投与　２．０５　２． ０５　２．１０　２．１０　０．００３、ＢＳＭ−１？ｉｂｉ　ＢＳＭ（５０μ ｇ）投与　２，１０　２．１０　２．３０　２．］０　０．００−９５％　、０ ３３土、０６６ １−ＢＳＭ−ＣＦＡ　２μｇのＢＳＭを　２．０５　２．０５　２．３５　２． ００　０．３０２、ＢＳＭ−ＣＦＡ　７ントパツド投与　２．０５　２．０５　 ２．３５　２．１０　０．２５３、ＢＳＭ−ＣＦＡ　ＢＳＭ（５０ｇｇ）投与　 ２．１５　２−１５　２．３０　２．１０　０．２５．２３土、０７６ １、ＢｓＭ−Ｒｉｂｉ　Ｏ，２ｍ１食塩水を　２．０５　２．０５　２．５５　 ２．００　０．５０２−ＢＳＭ−Ｒｉｂｉ　ｙットパンド投与　２．０５　２． ０５　２．６０　２．０５　０．５５３、ＢＳＭ−Ｒｉｂｉ　ＢＳＩＪ（５０μ ｇ）投与　２．０５　２．００　３．００　２．００　０．９５．６７±、２５ 例２：ムチンの免疫抑制効果に対するサイクロ７オスフアミドの阻害 マウスに０．４ｍ１（２００Ｌｇあるいは１００μｇのエビグリカニンを含む） のエビグリカニンあるいは無菌食塩水を皮下注射した。最初の注射の６Ｅｌ後に マウスにＣＹ　（１００ｍｌ／ｋｇ）を静脈内注射し、対照として無菌食塩水を 同じく静脈内注射した。２４時間後に完全な７０インドアジユバントの等量中に 乳濁化した５０μｇのエビグリカニンで免疫した。免疫後７日目に、５０μｇの エピグリカニンで７ツトパンドテストを行った。表３に示すように、サイクロ７ オス７アミド前投与により、前もって免疫抑制量を与えたマウスで（まエビグリ カニンに対する免疫応答が強められた。

３＋　ＣＦＡ　２．００　２．００　２．０５　２＋００　０．０５　２．０５ ２．ＯＯＯ，０５４，２，００２，００２，０５１，９５、Ｑ、Ｑｌ　２．００ ２＋ＯＯム匹（−８２，１４ｔ）会　、０コ土、０２５　．０１２５土、０２５ ２、ＣＹ　２＋００　２．００　２＋０５　２＋００　０．０５　２＋０５２． ＯＯＩＬ＋０５３、５０μｇＥｐｉ　２．００　２．００　２．３０　２．００ 　０．３０　２＋２０２．ＯＯＯ，２０１、食塩水　（０，４ｍ１）　２．００ 　２．０５　２．１０　２．００　０．１０　２＋０５２．０５　０．０５２、 ５０ｐｇＥｐｉ　２＋００　２＋００　２．３０　２．００　０．３０　２．２ ５２＋ＯＯＯ，２！１３、ＣＦＡ　２．００　２．００　２．２５　２．００　 ０．２５　２．１５　２．００　０＋１５４、　２．００　２．０５　２．２０ 　２．０５　、Ｑ、７Ｊ１２．：ｔ５２．ｏｏ　９．２１土−０８５、：Ｌ５土 、０８ クローン １．２００μｇＥｐｉ　２．００　２．００　２．０５　２．’ＯＯＯ，０５２ ，００２，ＯＯＯ，００２、食塩水　２．００　２．００　２．００　２＋００ 　０．００　２．００２．ＯＯＯ，００コ、５０ｐｇＥｐｉ　２．Ｏｏ　２．０ ０　２．０５　２．００　０−０５　２＋０５２．ＯＯＯ，０５４、ＣＦＡ　２ ．１０　２．０５　２．１５　２．００　２．ｍ　２−１０　２−００　ＱＪＱ （−８２，ｌｔ）★、０３７．ｌｔ、　０２５Ｌ　２００　μｇＥｐｉ　２．０ ５　２．００　２．３５　２．００　０．３５　２−２５２．００　０．２０２ 、食塩水　２．１５　２．１０　２．２０　２．１０　０．０５　２．１０２． １０　０．００３．５０μｑＥｐｉ　２．１０　２．０５　２．５５　２．００ 　０．４５　２．４０２．ＯＯＯ，３０４、ＣＦＡ　２．０５　２．０５　２． ５０　２．００　ＪＯ２，３０２，ＯＯｄ（＋４７．６亀）會會　＋３１土＋１ ７９Ｌ　２００μｇＥｐｉ　２．Ｏｏ　２＋００　２．２０　２．００　０．２ ０　２．１０２＋ＯＯＯ，１０２、食塩水　２．００　２．０５　２．２５　２ ．００　Ｑ、２５　２．１５２．ＯＯＯ，１５３−５０、ｕｇ　Ｅｐｉ　２．０ ５　２．００　２−３０　２．００　０．２５　２−２０　２．００　０．１５ 例３：サイク口７才ス７アミドとＴ−σ糖コンジュゲートの組合せ投与の治療効 果 サイクロ７オス７アミドとＴ−σエピトープを有する合成糖コンジュゲートを順 次投与すると、エビグリカニンを出すＴＡ３−Ｈａマウス乳腺がん細胞を移植し たマウスの生存を改善した（表３）。

表３ ＣＡＦＩ／ＪマウスにおけるＴＡ３−Ｈａ腫瘍の増殖に対するサイクロ７オス７ アミドと５−ＴＡＧとの組合せ投与の効果群　投与　乎均生存　腫瘍なしマウス 数時間（日）／マウス総数 １　なし　１７−１９　０／１６ ２　ＣＹ（第１日）のみ　１８−２１　０／１６３　ＣＹ（第５日）のみ　２３ 　２／９４　ＣＹ（第１．５日）のみ　２６　１　／９５　ＣＹ（第１日）　＋ 　ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ　１７　０／８６　ＣＹ（第１日）　＋　Ｈ５Ａ−Ｒｉｂｉ 　２０　０／８７　ＣＹ（第１日）　＋　Ｒｉｂｉ　２０　０／８８　ＣＹ（第 １日）　＋　ＴｇＫＬＭ−Ｒｉｂｉ　＞　１００　１４／１７９　ＣＹ（第５日 ）　＋　ＴｙＫＬＭ−Ｒｉｂｉ　３５　４／８１０　ＣＹ（第１５日）＋　Ｔｓ ＫＬＭ−Ｒｉｂｉ　４６　４／８ＩＩ　ＴｇＫＬＭ−Ｒｉｂｉのみ　２０−２２ 　４／１６１２　ＴｓＫＬＭ−Ｒｉｂｉ　＋　ＣＹ（第５日）　２３　１／８７ ツトパツドテストの４日後、能動的特異免疫療法に生残ったマウスに対して、さ らにＩ　Ｘ　１０４ＴＡ３−Ｈａ腫瘍細胞を腹腔内注射した（この投与量はＬＤ ５０を大きく上回る）。マウスの生存に関して６０日間ないしそれ以上モニター した。

結果を図１に示す。最もよく生存したのはサイクロフォスフアミドとＲ４ｂｉア ジュバント中のＴ−σ／ＫＬＨの両方を与えた群であることがわかるであろう。

より複雑な実験的比較を図２に示す。サイクロフォス７アミドだけの投与は生存 に対してエフェメラル効果のみを示したことがわかるであろう。最良の結果（５ 群）は、まずはじめにサイクロフォスフアミドを投与してのち、Ｒ４ｂｉアジュ バント中のＴ−σ／ＫＬＨをくり返し投与することによって得られた。

例４：　能動的特異免疫療法の長期生存マウスからの腫瘍抵抗性の養子移入 能動的特異免疫療法実験から長期間生き延びたマウスを、それらの免疫牌細胞お よびリンパ節細胞がｉｎ　ｖｉｖｏで腫瘍増殖を阻害できるかどうかをテストす るためにＷｉｎｎ検定に使用した。

種々の投与群のマウスからとった牌細胞とリンパ節細胞をエフェクター：標的細 胞の割合を１００：１にして生存ＴＡ３−Ｈａ腫瘍細胞と混合シ、サイクロ７オ スフアミド（１００ｍｇ−ｋｇ静脈内）中か、あるいは同じようにして食塩水中 で前処理したレシピエントマその後は２日間隔でフットパッド腫脹を測定した。

フットパッドの腫瘍の大きさはフットパッド厚み（ｍｍ）の正味の腫脹として表 わした。

生き残ったマウス（ＣＹとＴＡ−ＫＬＨ−Ｒｉｂｉ免疫）からとったリンパ節細 胞はＷｉｎｎ型検定で腫瘍増殖を完全に阻止した。他方、牌細胞は免疫性をトラ ンスファーしない。

当発明は、ここで述べた組み合わせ抗−免疫抑制、すなわち能動的特異免疫療法 にうまく応答する対象から得たリンパ節細胞によって、免疫抑制ムチンを出して いる腺がんに対する細胞介在性免疫の養子移入にその適用が拡張される。養子免 疫療法に関する一般プロトコルについてはＲｏｓｅｎｂｅｒｇ、Ｕ、Ｓ、４，６ ９０．９１５と前に引用したＬｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒと）ｌｅｎｎ　ｉｎｇｓｓ ｏｎの適用を参照のこと。

腺がんと関連した免疫抑制活性を有するムチンと免疫的に交叉反応するところの 、サイクロフォスフアミドおよび／または炭水化物エピトープを有する抗原は、 腺がんの治療に用いる組成物の製造に利用されるだろうことが予想される。さら に、免疫抑制活性を有する循環腫瘍関連ムチンに対して特異的な抗体あるいはレ クチンは、７エレシアによって血流から循環ムチンを除去することによって腫瘍 の治療のための吸収構成物を製造するのに利用されるだろうことが予想される。

これらの治療様式は能動的特異免疫療法あるいはドナーリンパ節細胞とともに免 疫を養子移入することによってさらに補強されるだろう。

国際調査報告 フロントベージの続き （７２）発明者　ロンジエネッカー、ビイ、逅ツチェルカナダ、ティ６ジイ　１ テイ３　アルバータ州、エドモントン、１１８ス　ストリート

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）被験者に対して免疫応答能力を与える量のサイクロフォスフファミド を投与すること、（ｂ）腺がん腫瘍と関連した免疫抑制活性を有するムチンと免 疫的に交叉反応する炭水化物エピトープを有する抗原を、免疫的に効果のある量 だけ被験者に投与することからなる、免疫抑制活性を有するムチンに関連した、 ヒトあるいは動物の腺がん腫瘍の増殖を阻害する方法。
2. ２．抗原を合成糖コンジュゲートとする請求項１の方法。
3. ３．抗原をエピグリカニンとする請求項１の方法。
4. ４．腫瘍関連ムチンと抗原の両者をＴあるいはＴｎ決定基で特性づける請求項１ の方法。
5. ５．合成糖コンジュゲートがＴ−ａハプテンと製剤学的に受容できる免疫的タン パク担体とのコンジュゲートである請求項１の方法。
6. ６．腫瘍が乳腺がんである請求項１の方法。
7. ７．腫瘍が免疫抑制活性を有する循環ムチンと関連するとき、（ａ）被験体から 血液を取り除く、（ｂ）その血液からムチンを取り除いた血液を得るため、その ムチンに特異性をもつ吸収体と血液をインキュベートする、（ｃ）ムチンを取り 除いた血液分画を患者の循環系に戻すことにより、ヒトあるいは動物被験体の能 動的特異腫瘍免疫療法に対する応答性を高める方法。
8. ８．吸収体がそのムチンと優先的に結合する固定化抗体である請求項７の方法。
9. ９．腫瘍が免疫抑制活性を有する循環ムチンと関連しており、そのムチンが請求 項７の方法により、免疫的手段で対照に対する腫瘍の感受性を高める役目をし、 該腫瘍と免疫的に交叉反応する抗原を含むワクチンで能動的特異免疫療法を行う ことにより腫瘍を治療するヒトあるいは動物における腺がんの治療方法。
10. １０．腫瘍が免疫抑制活性を有するムチンと関連しており、被験体に対して（ａ ）該免疫抑制活性に拮抗する物質を免疫応答能力を発現する量だけ与える、（ｂ ）ムチンと免疫的に交叉反応する炭水化物エピトープ含有抗原の免疫的効果量を 与えることにより、ヒトあるいは動物被験体における腺がん腫瘍の増殖を阻害す る方法。
11. １１．抗原が血液グループ抗原かそれの前駆体であり、あるいは血液グループ抗 原かそれの前駆体の免疫支配炭水化物エピトープを含有する合成糖コンジュゲー トである請求項１の方法。
12. １２．請求項１の方法により腺がん腫瘍か阻害されたヒトまたは動物被験体をド ナーとして、そのドナーのリンパ節細胞を供給することから成り、このリンパ節 細胞を養子免疫移入に適した条件下でレシピエントに投与する、ヒトあるいは動 物レシピエントにおける腺がん腫瘍の増殖を阻害する方法。
13. １３．ヒトあるいは動物被験体における腺がんの治療のための構成物の製造にお けるサイクロフォスファミドの使用。
14. １４．腺がんが免疫抑制ムチンと関連する、請求項１３におけると同様の使用。
15. １５．ヒトあるいは動物被験体における腺がんの治療のたりの構成物の製造にお いて、腺がん腫瘍と関連し、かつ免疫抑制活性を有するムチンと免疫的に交叉反 応する炭水化物エピトープ含有抗原の使用。
16. １６．ヒトあるいは動物被験体に免疫応答能力をもつ量のサイクロフォスファミ ドが前投与されている、請求項１５におけると同様の使用。
17. １７．ヒトあるいは動物被験体における腺がん腫瘍の治療のための構成物の製造 において、腺がん腫瘍と関連し、かつ免疫抑制活性を有するムチンと免疫的に交 叉反応する炭水化物エピトープ含有抗原ならびにサイクロフォスファミドの使用 。