JPH074219B2 - Cell fusion chamber - Google Patents
Cell fusion chamberInfo
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- JPH074219B2 JPH074219B2 JP62248808A JP24880887A JPH074219B2 JP H074219 B2 JPH074219 B2 JP H074219B2 JP 62248808 A JP62248808 A JP 62248808A JP 24880887 A JP24880887 A JP 24880887A JP H074219 B2 JPH074219 B2 JP H074219B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ 本発明は、電気細胞融合を行うための細胞融合チャンバ
に関し、特に、例えば簡単な自動制御が可能なマイクロ
マニピュレータと併用するのに適した細胞融合チャンバ
に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cell fusion chamber for performing electric cell fusion, and particularly to a cell suitable for use in combination with a micromanipulator capable of simple automatic control, for example. Regarding the fusion chamber.
＜従来の技術＞ 電気細胞融合は、一般に、培液中の細胞に高周波電圧を
加えて細胞を接触させた後、直流パルスを加えることに
よって接触している細胞を融合させるが、このような処
理は、従来、一定の間隔をあけて対向する電極間に細胞
を培液とともに収容するスペースを備えてなるチャンバ
を用いて行われている。<Prior Art> In general, electric cell fusion is performed by applying a high-frequency voltage to cells in a culture medium to bring the cells into contact with each other, and then applying a DC pulse to fuse the cells in contact with each other. Conventionally, this is performed using a chamber having a space for accommodating cells together with a culture medium between electrodes facing each other with a certain distance.
＜発明が解決しようとする問題点＞ 上述のような従来のチャンバを用いて行う電気細胞融合
では、融合した細胞を取出すのにピペット等を用いて、
別途用意したシャーレ等の容器に移す必要がある。この
作業は、融合していない細胞等も存在するなかで、融合
した細胞を選別して取出して別の容器の１個づつ移しか
えねばならず、極めて困難である。<Problems to be Solved by the Invention> In the electric cell fusion performed using the conventional chamber as described above, a pipette or the like is used to take out the fused cells,
It is necessary to transfer to a container such as a petri dish prepared separately. This work is extremely difficult because, in the presence of unfused cells and the like, the fused cells have to be selected and taken out and transferred individually to another container.
＜問題点を解決するための手段＞ 本発明は融合後の細胞の取出し作業を簡素化すべくなさ
れたもので、特に、簡単な自動制御が可能なマイクロマ
ニピュレータとの併用により、簡単、迅速に融合細胞を
選別して取出すことのできる、細胞融合チャンバの提供
を目的としている。<Means for Solving Problems> The present invention has been made to simplify the operation of taking out cells after fusion, and in particular, the combination with a micromanipulator capable of simple automatic control facilitates quick and easy fusion. The purpose of the present invention is to provide a cell fusion chamber capable of selecting and extracting cells.
この目的を達成するための構成を、実施例に対応する第
１図を参照しつつ説明すると、本発明の細胞融合チャン
バは、透明平板１上に設けられた互いに平行に対向する
一対の電極2a,2b間に形成され、融合させるべき細胞を
収容するための細胞融合スペース３と、透明平板１上
に、細胞融合スペース３に対して電極2a,2bの対向方向
と直交るす方向に所定の距離Δを隔てて形成され、融合
後の細胞を収容するための細胞格納スペース４を備えた
ことによって、特徴づけられる。A structure for achieving this object will be described with reference to FIG. 1 corresponding to an embodiment. The cell fusion chamber of the present invention comprises a pair of electrodes 2a provided on a transparent flat plate 1 and facing each other in parallel. , 2b between the cell fusion space 3 for accommodating cells to be fused and the transparent flat plate 1, and a predetermined direction in the direction orthogonal to the facing direction of the electrodes 2a, 2b with respect to the cell fusion space 3. It is characterized by having a cell storage space 4 for accommodating cells after fusion formed at a distance Δ.
＜作用＞ 細胞融合スペース３内の細胞は透明平板１を介して倒立
顕微鏡で視認できる。融合／非融合の細胞選別は第２図
に示すように、ターゲットとする細胞が顕微鏡視野の中
央にくるよう、透明平板１をずらすことによって行うこ
とができ、このとき細胞格納スペース４も同時に移動す
るから、例えば指令によって一定距離だけ平行移動し得
る機能を持ったマイクロマニピュレータ20に細胞吸引用
の器具23を装着して、選別した細胞を吸引後、一定距離
を移動させて吐出することによって、選別された融合細
胞の全てを細胞格納スペース４内に収容することができ
る。<Operation> The cells in the cell fusion space 3 can be visually recognized by the inverted microscope through the transparent plate 1. Fused / non-fused cell selection can be performed by shifting the transparent plate 1 so that the target cells are in the center of the microscope field as shown in FIG. Therefore, for example, by attaching a device 23 for cell aspiration to the micromanipulator 20 having a function capable of translating a fixed distance by a command, after sucking the selected cells, by moving a fixed distance and discharging. All the selected fused cells can be accommodated in the cell storage space 4.
＜実施例＞ 本発明の実施例は、以下、図面に基づいて説明する。<Examples> Examples of the present invention will be described below with reference to the drawings.
第１図は本発明実施例の構成を示す図で、（ａ）は平面
図、（ｂ）はその左側面図、（ｃ）はｃ−ｃ断面図であ
る。FIG. 1 is a diagram showing a configuration of an embodiment of the present invention, (a) is a plan view, (b) is a left side view thereof, and (c) is a sectional view taken along line cc.
スライドグラス等のガラス製の透明平板１を基板とし、
その上面に一対の細胞融合用電極2aと2bが互いに対向し
て平行に埋め込まれて固着されている。この電極2aと2b
の間には、透明平板１の上表面から電極2a,2bの埋め込
み量と等しい深さの長方形状の凹部が形成されており、
この凹部が細胞融合スペース３を形成している。Using the glass transparent flat plate 1 such as a slide glass as a substrate,
A pair of cell fusion electrodes 2a and 2b are embedded and fixed in parallel with each other so as to face each other. This electrode 2a and 2b
Between them, a rectangular recess having a depth equal to the embedded amount of the electrodes 2a and 2b is formed from the upper surface of the transparent flat plate 1,
This recess forms the cell fusion space 3.
透明平板１上には、また、細胞融合スペース３に隣接し
て、その長手方向に距離Δを隔てて、同様に長方形状の
凹部が形成されており、この凹部は細胞格納スペース４
を形成している。On the transparent flat plate 1 is also formed a rectangular recess adjacent to the cell fusion space 3 with a distance Δ in the longitudinal direction thereof.
Is formed.
細胞格納スペース４の長さＬおよび幅Ｂは、細胞融合ス
ペース３の長さｌおよび幅ｂに対してそれぞれ同等以上
の寸法に設定されている。また、細胞融合スペース３と
細胞格納スペース４の幅方向の中心線はほぼ一致してい
る。The length L and the width B of the cell storage space 4 are set to be equal to or larger than the length 1 and the width b of the cell fusion space 3, respectively. Further, the center lines in the width direction of the cell fusion space 3 and the cell storage space 4 are substantially coincident with each other.
次に使用方法を説明する。Next, the usage method will be described.
第２図は本発明実施例の使用方法の説明図で、全体を鉛
直上方から俯瞰して示す図である。FIG. 2 is an explanatory view of a method of using the embodiment of the present invention, and is a view showing the whole as viewed from above vertically.
透明平板１は倒立顕微鏡（図示せず）のステージ上に載
せられ、電極2a,2bはそれぞれ細胞融合装置10に接続さ
れる。The transparent plate 1 is placed on the stage of an inverted microscope (not shown), and the electrodes 2a and 2b are connected to the cell fusion device 10, respectively.
また、パルスモータ等をアクチュエータとして内蔵する
駆動部21と、その駆動部21を少くとも一方向（ｘ方向）
にあらかじめ設定された一定距離だけ駆動させるための
信号を出力し得る制御部22を備えたマイクロマニピュレ
ータ20を用意し、その駆動部21には細胞を吸引・吐出し
得るマイクロピペット23等を装着しておく。In addition, the drive unit 21 that incorporates a pulse motor or the like as an actuator, and the drive unit 21 in at least one direction (x direction)
Prepare a micromanipulator 20 equipped with a control unit 22 that can output a signal for driving a predetermined distance set in advance, and attach a micropipette 23 or the like that can aspirate and discharge cells to the drive unit 21. Keep it.
まず、融合させるべき細胞を細胞融合スペース３内に培
液とともに収容する。次に細胞融合装置10を操作して、
電極2a,2b間に高周波電圧を加えて細胞融合スペース３
内の細胞を接触させた後、これらを融合させるための直
流パルスを加える。この過程は透明平板１を介して倒立
顕微鏡により観察できる。First, the cells to be fused are stored in the cell fusion space 3 together with the culture medium. Next, operate the cell fusion device 10,
Cell fusion space 3 by applying high-frequency voltage between electrodes 2a and 2b
After contacting the cells within, a DC pulse is applied to fuse them. This process can be observed by an inverted microscope through the transparent flat plate 1.
以上の操作を終了した後、細胞融合スペース３内で融合
している細胞のみをピックアップするが、このとき、顕
微鏡ステージを移動させる等によって透明平板１を顕微
鏡光軸に対して適宜に移動させることにより、選別の対
称となる細胞を顕微鏡視野中心に持ってくる。顕微鏡を
介しての視認により、融合した細胞が見つかれば、マイ
クロマニピュレータ20を操作してマイクロピペット23を
その中心軸が電極2a,2bと平行となる状態で顕微鏡視野
中心近傍にまで変位させ、その細胞を吸引する。なお、
このとき、第３図に示すように、細胞Ｗを培液CLととも
にマイクロピペット23内に吸引することが望ましい。After the above operation is completed, only the cells fused in the cell fusion space 3 are picked up. At this time, the transparent plate 1 is appropriately moved with respect to the optical axis of the microscope by moving the microscope stage or the like. This brings to the center of the visual field of the microscope the cells that are the symmetry of the selection. When the fused cells are found by visual inspection through a microscope, the micromanipulator 20 is operated to displace the micropipette 23 to the vicinity of the center of the microscope visual field with its central axis parallel to the electrodes 2a and 2b. Aspirate the cells. In addition,
At this time, as shown in FIG. 3, it is desirable to aspirated into the micropipette 23 cells W with培液C L.
次に、マイクロマニピュレータ20に指令を与えて、ｘ方
向、細胞格納スペース４側に一定距離だけ自動的に駆動
させる。この一定距離Ｄは、あらかじめ次の距離に設定
しておく。Next, a command is given to the micromanipulator 20 to automatically drive the micromanipulator 20 toward the cell storage space 4 side by a predetermined distance. This fixed distance D is set to the next distance in advance.
Ｄ＝ｌ＋Δ＋α ただし、０＜α＜Ｌ−ｌ この駆動により、細胞融合スペース３内のどの位置で細
胞を吸引しても、マイクロピペット23の先端は必らず細
胞格納スペース４上にくる。従って、この駆動後に細胞
を吐出すれば、選別された細胞は細胞格納スペース４内
に収容される。以上の操作を繰り返すことにより、細胞
格納スペース４内には融合した細胞のみが集められる。
目的とする全ての選別を終了後、細胞格納スペース４内
の細胞をピペット等によって培地にかえして全処理を終
了する。D = l + Δ + α However, 0 <α <L-l by this drive, the tip of the micropipette 23 always comes to the cell storage space 4 no matter which position in the cell fusion space 3 the cells are sucked. Therefore, if the cells are ejected after this driving, the sorted cells are stored in the cell storage space 4. By repeating the above operation, only the fused cells are collected in the cell storage space 4.
After completing all the targeted selection, the cells in the cell storage space 4 are returned to the medium by a pipette or the like, and the whole process is completed.
なお、細胞格納スペース４の長さＬおよび幅Ｂの寸法
は、細胞融合スペース３の長さｌおよび幅ｂの寸法より
必ずしも大きくする必要はないが、細胞融合スペース３
内の任意の位置で吸引した細胞をマイクロマニピュレー
タ20によって自動的に細胞格納スペース４内に移動させ
る場合、移動距離を一定とすることできない関係上、や
や複雑な移動制御が必要となる。The length L and the width B of the cell storage space 4 need not necessarily be larger than the length 1 and the width b of the cell fusion space 3, but the cell fusion space 3 is not necessary.
When the cells aspirated at an arbitrary position therein are automatically moved into the cell storage space 4 by the micromanipulator 20, a slightly complicated movement control is necessary because the movement distance cannot be constant.
また、以上の実施例では、細胞格納スペース４を透明平
板１の表面に凹部を設けて形成した例を示したが、本発
明はこれに限定されることなく、透明平板１の表面に低
い壁体を設けて、この壁体で囲まれた内部を細胞格納ス
ペースとすることもできる。Further, in the above embodiments, an example in which the cell storage space 4 is formed by providing a concave portion on the surface of the transparent flat plate 1 is shown, but the present invention is not limited to this, and a low wall is formed on the surface of the transparent flat plate 1. A body can be provided and the inside surrounded by this wall can be used as a cell storage space.
＜発明の効果＞ 以上説明したように、本発明によれば、１枚の透明平板
上に、互いに対向する一対の電極で挟まれてなる細胞融
合スペースと、この細胞融合スペースに対して電極の対
向方向と直交する方向に所定距離を隔てて形成された細
胞格納スペースとを設けたから、細胞融合スペース内の
融合細胞を倒立顕微鏡の視野中央で選別して、マイクロ
マニピュレータ等によって容易に細胞格納スペース内に
収容することができる。また、他のシャーレ等の容器を
必要とせず、両スペースをコンパクトにまとめることが
できる。<Effects of the Invention> As described above, according to the present invention, a cell fusion space formed by sandwiching a pair of electrodes facing each other on one transparent flat plate, and an electrode for the cell fusion space. Since the cell storage space formed at a predetermined distance in the direction orthogonal to the facing direction is provided, the fused cells in the cell fusion space are selected in the center of the visual field of the inverted microscope, and the cell storage space can be easily stored by a micromanipulator or the like. Can be housed inside. Further, both spaces can be compactly assembled without the need for another container such as a petri dish.
更に、細胞格納スペースの長さおよび幅寸法を、細胞融
合スペースの長さおよび幅寸法と同等以上にしておけ
ば、選別後の細胞を細胞格納スペースにまで移送するに
当り、マイクロマニピュレータを一定距離だけ動かせば
よく、その移動制御が極めて容易である。Furthermore, if the length and width of the cell storage space are set equal to or greater than the length and width of the cell fusion space, the micromanipulator will move a fixed distance when transferring the sorted cells to the cell storage space. The movement control is extremely easy.
第１図は本発明実施例の構成を示す図で、 （ａ）は平面図、 （ｂ）はその左側面図、 （ｃ）はそのｃ−ｃ断面図である。 第２図および第３図は本発明実施例の使用方法の説明図
である。 １……透明平板 2a,2b……電極 ３……細胞融合スペース ４……細胞格納スペース 10……細胞融合装置 20……マイクロマニピュレータ 21……駆動部 22……制御部 23……マイクロピペットFIG. 1 is a diagram showing a configuration of an embodiment of the present invention, (a) is a plan view, (b) is a left side view thereof, and (c) is a sectional view taken along the line cc. 2 and 3 are explanatory views of a method of using the embodiment of the present invention. 1 …… Transparent plate 2a, 2b …… Electrode 3 …… Cell fusion space 4 …… Cell storage space 10 …… Cell fusion device 20 …… Micromanipulator 21 …… Drive unit 22 …… Control unit 23 …… Micropipette
Claims (2)
する一対の電極間に形成され、融合させるべき細胞を収
容するための細胞融合スペースと、上記透明平板上に、
上記細胞融合スペースに対して上記電極の対向方向に直
交する方向に所定の距離を隔てて形成され、融合後の細
胞を収容するための細胞格納スペースを備えてなる、細
胞融合チャンバ。1. A cell fusion space for accommodating cells to be fused, which is formed between a pair of electrodes provided on a transparent flat plate and facing each other in parallel, and the transparent flat plate,
A cell fusion chamber, comprising a cell storage space formed at a predetermined distance from the cell fusion space in a direction orthogonal to the facing direction of the electrodes, and containing a cell after fusion.
矩形をなし、その長さおよび幅寸法が上記細胞融合スペ
ースの長さおよび幅寸法と同等以上であることを特徴と
する、特許請求の範囲第１項記載の細胞融合チャンバ。2. The cell storage space has a rectangular shape on the transparent plate, and its length and width dimensions are equal to or greater than the length and width dimensions of the cell fusion space. A cell fusion chamber according to claim 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62248808A JPH074219B2 (en) | 1987-10-01 | 1987-10-01 | Cell fusion chamber |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62248808A JPH074219B2 (en) | 1987-10-01 | 1987-10-01 | Cell fusion chamber |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0191767A JPH0191767A (en) | 1989-04-11 |
| JPH074219B2 true JPH074219B2 (en) | 1995-01-25 |
Family
ID=17183714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62248808A Expired - Fee Related JPH074219B2 (en) | 1987-10-01 | 1987-10-01 | Cell fusion chamber |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH074219B2 (en) |
-
1987
- 1987-10-01 JP JP62248808A patent/JPH074219B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0191767A (en) | 1989-04-11 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |