JPH07209399A - リガンド・レセプター反応測定用プラスチックス容器 - Google Patents

リガンド・レセプター反応測定用プラスチックス容器

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JPH07209399A
JPH07209399A JP651094A JP651094A JPH07209399A JP H07209399 A JPH07209399 A JP H07209399A JP 651094 A JP651094 A JP 651094A JP 651094 A JP651094 A JP 651094A JP H07209399 A JPH07209399 A JP H07209399A
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JP
Japan
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ligand
container
reaction
ecr
receptor
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Application number
JP651094A
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English (en)
Inventor
Sueyoshi Shiomi
季良 潮見
Hiroaki Uematsu
宏彰 植松
Hisashi Uhara
寿 鵜原
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Toyobo Co Ltd
Original Assignee
Toyobo Co Ltd
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  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】正確で迅速な核酸等のリガンドの測定を行うこ
とができる、発光法または蛍光法による、検出効率の優
れたリガンド・レセプター反応測定用プラスチックス容
器を提供する。 【構成】少なくとも1つの有底試料穴を有するプラスチ
ックス容器の該底部を磁場中の電子のサイクロトロン共
鳴を利用した指向性のあるイオンビームを照射して均一
で、かつ微細な凹凸を有する表面とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、核酸、蛋白質等のリガ
ンドを標識物を利用するリガンド・レセプター反応によ
り検出する方法において、標識物を発光、蛍光などを利
用して測定するために使用するプラスチックス容器に関
するものである。
【0002】
【従来の技術】リガンド・レセプター反応には、免疫学
測定における抗原−抗体反応、核酸の相補性によるハイ
ブリダイゼーション反応、ホルモンとその受容体、酵素
−基質、ビオジン−アビジン等の生理活性物質とその受
容体など様々な特異的結合を利用する反応が含まれる。
これらのリガンド・レセプター反応のうち、免疫反応を
利用した測定方法としては、蛍光抗体法、酵素免疫測定
法など数々の方法がある。この中でも抗原、抗体などを
固相上に固定して測定を行う手法を固相測定免疫法とい
い、多くの免疫測定法の中でも最も感度高く、定量でき
る方法である。この測定法は、あらかじめ固相上に抗原
もしくは抗体を固定し、ラジオアイソトープ、蛍光性物
質、もしくは酵素などの標識物を結合させた抗体、もし
くは抗原と、抗原−抗体反応を行わせる。反応物と未反
応物の分離は洗浄によって容易に行うことができ、固相
表面に抗原−抗体反応によって固定された抗原もしくは
抗体は、標識物を測定する事により測定できる。
【0003】同様にハイブリダイゼーション反応を利用
した核酸測定でも、合成した核酸、又は標的核酸を固相
に固定して、ラジオアイソトープ、蛍光性物質、もしく
は酵素などの標識物を結合させた核酸(標識プローブ)
とハイブリダイゼーションを行なわせ測定を行う方法が
ある。これらの測定法では、抗原、抗体、もしくは核酸
を固相へ多量に、かつ安定性良く吸着固定することが重
要であるが、従来、容器上に固定される抗原、抗体もし
くは核酸の量は少なく満足のいくものではなかった。
【0004】そこで、容器の表面に何らかの処理を加え
ることによって、抗原、抗体、もしくは核酸が吸着、固
定され易くするための研究が行われてきた。これまで
に、手法としては、酸、アルカリ、過酸化物等の薬品に
よる化学的処理や、物理的処理であるコロナ放電処理、
低温プラズマ処理、電子線照射、ガンマ線照射等が知ら
れている。しかしながら、酸、アルカリ等の薬品による
化学的処理は、プラスチックスの材質により効果が異な
り、試薬の選択が必要である。さらにドライプロセスで
はないため、容器が汚染されることが懸念されため、逆
に抗原、抗体、もしくは核酸の吸着、固定を阻害するこ
ともあり、必ずしも著しい効果が見られなかった。ま
た、物理的処理方法では、微細な凹凸を発生させること
で、表面積を増大させ、抗原、抗体、もしくは核酸の吸
着、固定する領域を拡大することを狙っているが、これ
らの処理法では、熱が発生するため容器がダメージを強
く受けてしまい、変形してしまうという重大な欠陥が有
った。そのため、吸着、固定される抗原、抗体、もしく
は核酸の量は、十分なものとは言えなかった。また処理
方法や条件によっても効果が異なるため、吸着、固定さ
れる抗原、抗体、もしくは核酸の量をさらに向上させ、
安定化させることが求められている。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、正確
で迅速な核酸等のリガンドの測定が行うことができる発
光、蛍光を利用する、検出効率の優れた、リガンド・レ
セプター反応測定用プラスチックス容器を提供すること
である。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するべく鋭意研究を重ねた結果、容器上への抗
原、抗体、もしくは核酸の吸着、固定化の効率を上昇さ
せるためには、熱ダメージを受けないで、均一であっ
て、かつ微細な凹凸を発生させることで、表面積を増大
させること、さらに、抗原、抗体、もしくは核酸は、容
器の側部への吸着を避け、容器の底部のみに吸着させる
ために、容器の底部のみに、均一であって、かつ微細な
凹凸を発生させることが、定量性良く抗原、抗体、もし
くは、核酸を検出することができる手法であることを見
いだした。
【0007】すなわち本発明は、少なくとも1つの有底
試料穴を有し、それぞれの試料穴の底部の形状は平面で
あり、材質はプラスチックからなる容器であって、該容
器底部は、磁場中の電子のサイクロトロン共鳴(Electr
on Cyclotron Resonance:ECR) を利用した指向性のある
イオンビームを照射して形成された、均一であって、か
つ微細な凹凸を有する表面を有することを特徴とするリ
ガンド・レセプター反応測定用プラスチックス容器であ
る。
【0008】本発明のリガンド・レセプター反応測定用
プラスチックス容器を構成する、プラスチックスとして
は、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリ
塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポリカーボネ
ート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリメチルペン
テン、ナイロン−6、ナイロン−66、ABS樹脂等を
使用することができるが、特に限定されるものではな
い。
【0009】本発明の容器の形状は、少なくとも1つ以
上の有底試料穴を有し、それぞれの試料穴の底部の形状
は平面であり、材質はプラスチックからなる容器であっ
て、容器内で試料の混合、反応などが行える(図2〜3
参照)。上記プラスチック容器は、使用目的により透明
な物、黒、又は白色を使用し、色付のため酸化チタン、
アルミナなどの白色系顔料、カーボンブラックなどの着
色性材料を配合した物などが使用される。
【0010】本発明の容器底部は、磁場中の電子のサイ
クロトロン共鳴(Electron Cyclotron Resonance:ECR)
を利用した指向性のあるイオンビームを照射して形成さ
れた、均一であって、かつ微細な凹凸を有する表面を有
する。使用するイオンビームは、磁場中の電子のサイク
ロトロン共鳴(Electron Cyclotron Resonance:ECR) を
利用したECRイオン銃を搭載した装置から、得られ
る。エリオニクス製の小型ECRイオンシャーワ装置
(EIS−200ER)などを使用する。イオン化ガス
として、酸素ガス、窒素ガス、アルゴンガスなどを使用
する。
【0011】このとき引き出されるイオンビームは、非
常に平行性が良く、しかも、無電極放電のため均一で、
長時間安定した状態が得られる。さらに、低加速電圧
で、高い電流密度が得られるため、熱ダメージを受けな
いで、容器を加工することが可能である。この点が従来
の処理法と決定的に異なる点である。本発明では上記処
理により熱ダメージを受けない表面を有する容器が得ら
れる。
【0012】本発明の有底穴を有する容器の一例を図面
にて説明する。図4において、1は容器、2は有底試料
穴、3は容器底部、4は側部、5は化学発光液を示す。
本発明の容器はその形状が少なくとも1つの有底試料穴
を有し、それぞれの試料穴の底部の形状は平面であり、
材質はプラスチックからなる。該容器底部3は、磁場中
の電子のサイクロトロン共鳴(Electron Cyclotron Res
onance: ECR)を利用した指向性のあるイオンビームを照
射して形成された、均一であって、かつ微細な凹凸を有
する表面を有する。
【0013】本発明の容器を使用してリガンド・レセプ
ター反応を行うには、通常リガンドを含む溶液を試料穴
に注入し、ある一定時間放置することによりリガンドを
本発明で処理した平底に固定する。注入した溶液を排出
した後、ブロック溶液を加え上記反応でリガンドが固定
されている以外のスペースをブロック剤で埋め尽くす。
ブロック溶液を排出後、標識物で標識されたレセプター
を含む溶液を注入し容器内でリガンド・レセプター反応
を行う。
【0014】本発明の容器を使用してリガンドを検出す
る例としては、容器にリガンドと特異的に反応するレセ
プター(例えば捕捉プローブ)を含む溶液を分注しイン
キュベートした後、ブロック溶液でブロック化し、次い
で検出対象であるリガンド(例えば遺伝子断片)を加え
インキュベートした後、さらに標識レセプター(例えば
標識プローブ)を分注し、必要により洗浄処理後に標識
を発光または蛍光反応させて、容器中からの発光強度ま
たは蛍光強度を測定する方法がある。また別な例として
は容器に検出試料(例えば遺伝子断片)を含む溶液を加
え、ブロック溶液でブロック化処理し、次いで標識レセ
プター(例えば標識プローブ)とリガンド・レセプター
反応を行い、必要により洗浄処理後に標識を発光または
蛍光反応させて、その発生量を測定する方法がある。
【0015】標識物としては、発光性標識または蛍光性
標識がある。発光性標識としては発光性物質または発光
を誘導する物質があり、発光性物質にはアクリジニウム
エステルまたはその誘導体、アクリジニウムスルホンア
ミドまたはその誘導体、ルミノール、イソルミノールま
たはアントラセン誘導体が挙げられ、発光を誘導する物
質としては、アルカルホスファターゼなどの酵素、1,
2−ジオキセタン類などの発光基質または蛍光物質など
が挙げられる。最終検出は標識物を発光あるいは蛍光反
応させてその発生量を定量することにより行う。
【0016】
【発明の効果】本発明で得られた容器は、抗原、抗体、
もしくは核酸を容器へ多量に、かつ安定性良く吸着固定
することが可能となる。また正確で高感度な核酸等のリ
ガンドの測定が行うことができる発光法または蛍光法に
おいて、検出効率の優れた、リガンド・レセプター反応
測定用プラスチックス容器を提供することができる。本
発明の容器は従来の酸、アルカリ、過酸化物等の薬品に
よる化学的処理のものに比べて、ドライプロセスである
ため、容器への汚染が全くないという点で優れる。ま
た、従来の物理的処理であるコロナ放電処理、低温プラ
ズマ処理、電子線照射、ガンマ線照射等により処理され
た容器に比べて、発生する熱によるダメージがほとんど
ないため、容器が変形しない、という点で優れる。
【0017】
【実施例】以下に実施例を挙げることにより、本発明を
詳細に説明する。 実施例1 ポリスチレン製の円筒状容器をエリオニクス製の小型E
CRイオンシャーワ装置(EIS−200ER)を用い
て、磁場中の電子のサイクロトロン共鳴(Electron Cyc
lotron Resonance: ECR)を利用した指向性のあるイオン
ビームを照射した。イオン化ガスとして、酸素ガスを毎
分1ml導入し、875 ガウスの磁場と、周波数が 2.45 G
HZ のマイクロ波との相互作用により、得られる酸素イ
オンビームを2分間照射して成形した。得られた容器の
表面は、均一であって、かつ微細な凹凸を有する表面を
有していた(図1参照)。
【0018】参考例1 実施例1で得られたポリスチレン製の容器(試料1)を
用意し、市販ELISA 用で何らの処理も施さない容器試料
(試料2)を用意した。これらの試料(1)〜(2)に
ついて、核酸の吸着性の評価を次のようにして行った。 (i) 腸炎ビブリオ検出用捕捉プローブ、標識プローブの
合成をDNA合成機を用いて合成する。標識プローブは
で標識物としてアルカリホスファターゼを結合した物を
用いた。 (ii)上記2種類の容器にそれぞれ (i)で準備した捕捉プ
ローブを含む溶液を100μl ずつ分注し室温で一夜イン
キュベートした。次に捕捉プローブ溶液をアスピレータ
で除き、ブロックバッファを各容器に150 μl ずつ分注
し、室温で2時間放置しブロックした。 (iii) ブロック溶液をアスピレータで除き、(i) で準備
した標識プローブ溶液を100μl 分注し50℃で30分
ハイブリダイゼーション反応を行わせた。 (iv)標識プローブ溶液を排出後、洗浄液1を 200μl 加
え50℃で10分間洗浄した。 (v) 洗浄液1を排出後、洗浄液2を 200μl 加え室温で
5分間洗浄した。 (vi)洗浄液2を排出後、アルカリホスファターゼの基質
であるルミホス480(1,2-ジオキセタン類、和光純薬
社)を 100μl 加え、37℃で暗所で15分間発光反応
を行った。 発光量は、マイクロライト1000(ダイナテ
ック社)で測定した。その結果を表1に示す。
【0019】
【表1】
【0020】市販ELISA 用容器はポリスチレンを使用し
ており、表面に何らかの処理をしている為、試料2でも
若干捕捉プローブは固定されている。表1より本発明の
処理を施した試料の捕捉プローブの結合量は、市販ELIS
A 用容器、試料2の5倍以上であった。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の容器の有底試料穴の処理表面(SEM
倍率1万倍)を示す。
【図2】本発明の有底試料穴を有する容器の一例を示
す。
【図3】本発明の有底試料穴を有する容器の一例を示
す。
【図4】本発明の有底試料穴を有する容器の一例の断面
図を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 G01N 33/543 521 593 33/58 A

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 その形状が少なくとも1つの有底試料穴
    を有し、それぞれの試料穴の底部の形状は平面であり、
    材質はプラスチックからなる容器であって、該容器底部
    は、磁場中の電子のサイクロトロン共鳴(Electron Cyc
    lotron Resonance: ECR)を利用した指向性のあるイオン
    ビームを照射して形成された、均一であって、かつ微細
    な凹凸を有する表面を有することを特徴とするリガンド
    ・レセプター反応測定用プラスチックス容器。
  2. 【請求項2】 使用するイオンビームは、磁場中の電子
    のサイクロトロン共鳴(Electron Cyclotron Resonanc
    e:ECR) を利用したECRイオン銃を搭載した装置か
    ら、得られることを特徴とする請求項1記載のリガンド
    ・レセプター反応測定用プラスチックス容器。
  3. 【請求項3】 イオン化ガスとして、酸素ガス、窒素ガ
    スまたはアルゴンガスを使用することを特徴とする請求
    項1記載のリガンド・レセプター反応測定用プラスチッ
    クス容器。
  4. 【請求項4】 磁場中の電子のサイクロトロン共鳴(El
    ectron Cyclotron Resonance:ECR) を利用したECRイ
    オン銃を搭載した装置が、エリオニクス製の小型ECR
    イオンシャーワ装置(EIS−200ER)であること
    を特徴とする請求項2記載のリガンド・レセプター反応
    測定用プラスチックス容器。
  5. 【請求項5】 リガンド・レセプター反応が、免疫学測
    定における抗原−抗体反応または核酸の相補性によるハ
    イブリダイゼーション反応であり、標識として発光性標
    識または蛍光性標識を使用することを特徴とする請求項
    1記載のリガンド・レセプター反応測定用プラスチック
    ス容器。
  6. 【請求項6】 プラスチックスがポリエチレンテレフタ
    レート、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリメチルメ
    タクリレート、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリ
    プロピレン、ポリメチルペンテン、ナイロン−6、ナイ
    ロン−66、またはABS樹脂であることを特徴とする
    請求項1記載のリガンド・レセプター反応測定用プラス
    チックス容器。
JP651094A 1994-01-25 1994-01-25 リガンド・レセプター反応測定用プラスチックス容器 Pending JPH07209399A (ja)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011017707A (ja) * 2000-04-27 2011-01-27 Bioref Gmbh 生物学的サンプル材料のアーカイブ及び臨床分析用のバイオチップ

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP2011017707A (ja) * 2000-04-27 2011-01-27 Bioref Gmbh 生物学的サンプル材料のアーカイブ及び臨床分析用のバイオチップ

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