JPH07110297A - 電気泳動分析方法 - Google Patents
電気泳動分析方法Info
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- JPH07110297A JPH07110297A JP4200706A JP20070692A JPH07110297A JP H07110297 A JPH07110297 A JP H07110297A JP 4200706 A JP4200706 A JP 4200706A JP 20070692 A JP20070692 A JP 20070692A JP H07110297 A JPH07110297 A JP H07110297A
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Abstract
電気泳動により分離し、検出位置で半導体レーザからの
励起光を試料に照射して励起し試料からの蛍光を検出す
る分析方法において、螢光物質として深赤色域に吸収を
有し、アミノ基と結合する置換基を有する色素、例えば
ピロニンスクシンイミドエステルを用いる。
Description
ら臨床検査などの応用に及ぶ生化学物質の超微量分析に
用いるのに適する電気泳動分析方法に関するものであ
る。
各種の色素を用いて目的物質を標識した後、高速液体ク
ロマトグラフィーなどの分離手段により分離し、検出位
置で吸光検出する方法がよく用いられている。最近で
は、高速液体クロマトグラフィーの代りに高速液体クロ
マトグラフィーよりも分離性能の優れたキャピラリー電
気泳動法が用いられることもある。キャピラリー電気泳
動法では注入する試料の量が1nl程度と小さいため、
高感度検出器が必要となる。そのため、試料を螢光物質
で標識した後、キセノンランプなどを光源に用いる蛍光
検出器を利用することが多い。最近では高輝度レーザを
光源とする蛍光検出器も研究レベルでは使用されてい
る。しかし、レーザを用いる方法は、レーザの価格が高
く、また維持や保守等にも問題があり、ほとんど実用化
されるには至っていない。
ャピラリー電気泳動法により分離した後、670nmで
発振する半導体レーザを光源とする蛍光法により検出す
る方法を提案している(Anal. Chem., 64, 711 (1992)
参照)。蛍光法の励起光源として半導体レーザを用いる
利点は、検出器を小型にすることができ、また耐久性も
優れているので1年以上に渡ってメンテナンスフリーが
達成できるなど、実用的な点にある。
達成するには至らなかった。それは、標識色素の反応効
率及び高純度化が不十分であり、標識効率が低かったか
らである。そこで、本発明は半導体レーザの深赤色域に
吸収をもつ螢光物質を標識として利用し、電気泳動法に
より超微量分析を可能にすることを目的とするものであ
る。
螢光物質で標識された試料を電気泳動により分離し、検
出位置で半導体レーザからの励起光を試料に照射して励
起し試料からの蛍光を検出する分析方法において、螢光
物質として深赤色域に吸収を有し、アミノ基と結合する
置換基を有する色素を用いる。
670nm、780nm、820nmなど、深赤色域の
波長で発振するものを用いることができる。励起光源と
しての半導体レーザは、半導体レーザの他に、半導体レ
ーザ励起YAGレーザ、半導体レーザをポンピング光源
とするレーザなども含んでいる。電気泳動法にはキャピ
ラリー電気泳動の他、動電クロマトグラフィーなども含
まれる。
吸収をもつ螢光物質を基本骨格とし、アミノ基と結合す
る活性置換基を備えた色素である。アミノ基と結合する
活性置換基はスクシンイミドやイソチオシアネートなど
である。具体的な螢光物質としては、ピロニンスクシン
イミドエステルを挙げることができる。
るために、スルホン酸などの置換基をもっていてもよ
い。生化学物質のアミノ基以外の置換基、例えばフェニ
ール基やチオニル基などと結合する螢光物質を標識試薬
としてもよい。本発明で分析する対象は、アミノ基を有
する生化学物質であり、アミノ酸、核酸、核酸由来の生
化学物質、蛋白質などである。本発明はまた、DNAの
シーケンス決定にも利用することができる。
例えばスクシンイミド基を有するピロニン化合物を化学
結合させて蛍光標識する。これをキャピラリー電気泳動
により泳動させながら分離し、キャピラリーの出口の検
出器で例えば670nmの半導体レーザ光を照射する。
蛍光標識された試料がその検出部に到達するとレーザ光
で励起されて蛍光を発する。その蛍光を光電子増倍管な
どの検出器で検出する。
ピラリー電気泳動装置を示したものである。内径が約5
0μmのキャピラリー2の一端(図では右端)にピロニ
ンスクシンイミドエステルで標識された試料が注入さ
れ、その試料注入端がリザーバ3のバッファ液に浸され
る。キャピラリー2の他端にはシースフローセル6が設
けられ、キャピラリー2を泳動し分離されて流出してき
た試料は、ポンプ8により送られる純水などのキャリア
でシースフローとなってリザーバ12へ流される。キャ
ピラリー2の両端間には高電圧電源4によって泳動電圧
が印加される。
出口近傍に励起光として発振波長670nmの半導体レ
ーザ14からの光がフィルタ16及びレンズ18を経て
集光されて照射される。半導体レーザ光で励起されて試
料から発生する蛍光を取り出すために、励起光入射方向
と直交する方向に集光レンズ20が配置され、レンズ2
0で集光された光の光路上には蛍光成分を取り出すため
に、例えば700nmより長波長側に透過特性をもつフ
ィルタ24が配置され、フィルタ24を透過した蛍光を
受光するために蛍光光路上にはピンホール26を経て光
電子増倍管28が配置されている。30は光電子増倍管
28の負高圧電源、31は光電子増倍管28の検出信号
を記録する記録計である。
ドエステルで標識したアミノ酸を分析した結果を図2に
示す。横軸は溶出時間、縦軸は蛍光強度を表わしてい
る。ピークの記号Argはアルギニン、Blankはブランク、
Alaはアラニン、Glyはグリシン、Gluはグルタミン酸、A
spはアスパラギン酸である。この測定で、グリシンにつ
いて検討したところ800zmol(zmol=10-21mol)
の検出限界が得られ、本発明方法により超微量分析が可
能であることが確認された。実施例は本発明を高感度分
析の一例としての蛍光分析法に適用しているが、半導体
レーザを用いる他の分光分析法、例えば熱レンズ吸光分
析法などに本発明を適用してもよい。
を用いるので、検出器を小型化でき、耐久性が優れて1
年以上のメンテナンスフリーが達成でき、実用的な分析
方法となる。またレーザ光の集光性を利用して極微小・
超高感度分析が可能になる。半導体レーザの深赤色域で
は蛍光性の物質が少なく、分析に妨害を与える成分が少
ない。試料を標識する蛍光物質としてピロニンスクシン
イミドエステルを用いると、標識効率が高く、超微量分
析が可能になる。キャピラリー電気泳動や動電クロマト
グラフィーの利点を活かして多数の成分を高い分離効率
で分析することができる。
電気泳動装置を示す概略構成図である。
ある。
達成するには至らなかった。それは、標識色素の反応効
率及び高純度化が不十分であり、標識効率が低かったか
らである。そこで、本発明は半導体レーザの深赤色域に
吸収をもつ螢光物質を標識試薬として利用し、電気泳動
法により超微量分析を可能にすることを目的とするもの
である。
域に吸収をもつ螢光物質を基本骨格とし、アミノ基と結
合する活性置換基を備えた色素である。アミノ基と結合
する活性置換基はスクシンイミドやイソチオシアネート
などである。具体的な螢光物質としては、ピロニンスク
シンイミドエステルを挙げることができる。
Claims (1)
- 【請求項1】 アミノ基を有し螢光物質で標識された試
料を電気泳動により分離し、検出位置で半導体レーザか
らの励起光を試料に照射して励起し試料からの蛍光を検
出する分析方法において、前記螢光物質として深赤色域
に吸収を有し、アミノ基と結合する置換基を有する色素
を用いることを特徴とする電気泳動分析方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP20070692A JP3216247B2 (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 電気泳動分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP20070692A JP3216247B2 (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 電気泳動分析方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH07110297A true JPH07110297A (ja) | 1995-04-25 |
JP3216247B2 JP3216247B2 (ja) | 2001-10-09 |
Family
ID=16428878
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP20070692A Expired - Fee Related JP3216247B2 (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 電気泳動分析方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3216247B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106568754A (zh) * | 2016-11-06 | 2017-04-19 | 浙江大学 | 一种用于测量液体样本多光子荧光光谱的光学系统 |
-
1992
- 1992-07-03 JP JP20070692A patent/JP3216247B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106568754A (zh) * | 2016-11-06 | 2017-04-19 | 浙江大学 | 一种用于测量液体样本多光子荧光光谱的光学系统 |
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Publication number | Publication date |
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JP3216247B2 (ja) | 2001-10-09 |
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