JPH0689030B2

JPH0689030B2 - ポリペプチド

Info

Publication number: JPH0689030B2
Application number: JP59171068A
Authority: JP
Inventors: 政彦藤野; 千恵子北田; 昭憲鈴木
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1984-08-16
Filing date: 1984-08-16
Publication date: 1994-11-09
Anticipated expiration: 2009-11-09
Also published as: JPS6150997A

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明はストレプトコッカス・フエカリス（Streptococ
cus faecalis）の細胞間でのプラスミド接合伝達を促す
新規なポリペプチドに関するものであり、抗生物質耐性
菌の耐性発現機構解明のための試薬、あるいは遺伝子工
学的研究や分子生物学的研究用の試薬等として利用しう
る。

従来の技術 Streptococcus faecalisにはプラスミドを持つ細胞とそ
れを持っていない細胞があり、持っていない方の細胞の
分泌する物質が、細胞間の凝集を引きおこし、その時に
プラスミド接合伝達が行なわれることが知られており
〔Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75,3479（1978）〕、このよ
うな物質が個々のプラスミドに対応して存在する〔PLAS
MID ２,454（1979）〕。

発明が解決しようとする問題点本発明者らは上記のようなStreptococcus faecalisのプ
ラスミドpPD1接合伝達に関与する物質が各種の試薬とし
て有用であることを知り、この物質およびその類縁物質
を提供しようとするものである。

問題点を解決するための手段本発明者らはStreptococcus faecalisの有するプラスミ
ドpPD1の接合伝達に関与する物質cPD1を単離、構造決定
を行なった。cPDIはＨ−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu
−Ser−Gly−OHであらわされるポリペプチドである。

さらに本発明者らはcPD1の化学的合成に成功すると共に
同様な作用を有するポリペプチドの合成にも成功した。

すなわち、本発明はアミノ酸配列Ｘ−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly（Ｉ）（式中、Ｘは水素、アミノ基保護基Phe、Arg、His、Le
u、Tyr、Glu又はSerを示す）を有する新規なポリペプチ
ドに関するものである。

本明細書においてアミノ酸もしくはその残基、ペプチ
ド、保護基、使用試薬等はIUPAC−IUBの命名委員会で採
用された略号または当該分野において慣用されている略
号が用いられることがあり、かかる略号としてはたとえ
ば下記の略号があげられる。

Phe:フェニルアラニン Leu:ロイシン Val:バリン Met:メチオニン Ser:セリン Gly:グリシン Arg:アルギニン His:ヒスチジン Tyr:チロシン Glu:グルタミン酸 Boc:t−ブトキシカルボニル Bzl:ベンジル DCC:N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド HONB:N−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−2,3−ジカル
ボキシイミド HOBt:1−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール ONB:N−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−2,3−ジカルボ
キシイミドエステル TFA:トリフルオロ酢酸 TEA:トリエチルアミン DMF:N,N−ジメチルホルムアミド Tos:トシルなお、上記各アミノ酸の略号は対応するアミノ酸残基の
表示にもそのまま用いられ、アミノ酸又はその残基を上
記略号で表示する場合、グリシン以外はＬ−体を意味す
るものとする。

本発明の化合物は抽出や精製条件により酸との塩（例、
酢酸塩など）、塩基との塩（例、ナトリウム塩など）と
して存在することもあるがこれらの塩も本発明に含まれ
るものである。

式中、Ｘであらわされるα−アミノ酸残基はPhe、Arg、
His、Leu、Tyr、Glu又はSerである。これらα−アミノ
酸残基はＤ−体、Ｌ−体のいずれでもよく（但し、Gly
を除く）、また後述に例示されるα−アミノ基保護基で
保護されていてもよい。

式中Ｘにおけるα−アミノ基保護基としては、ペプチド
縮合反応において用いられるアミノ基の保護基たとえ
ば、ｔ−ブトキシカルボニル，ベンジルオキシカルボニ
ル,t−アミルオキシカルボニル，イソボルニルオキシカ
ルボニル，アダマンチルオキシカルボニル,O−ニトロフ
ェニルチオ，ジフェニルホスフイノチオイル，ジメチル
ホスフイノチオイル，クロロもしくはニトロ置換ベンジ
ルオキシカルボニル基などが挙げられる。

本発明の化合物（Ｉ）を化学的に製造するには、目的化
合物（Ｉ）のポリペプチドを構成しうる部分アミノ酸ま
たはそのペプチドとその残部を構成しうる化合物をペプ
チド合成手段により縮合させることにより行なう。該ペ
プチド合成手段は、任意の公知の方法に従えばよく、例
えばボダンスキー及びオンデチ著，ペプチド・シンセシ
ス，インターサイエンス刊,1966年；フイン及びホフマ
ン著，ザ・プロテインズ，第２巻，アカデミックプレ
ス刊,1976年；泉屋信夫他著“ペプチド合成”丸善
（株）,1975年などに記載された方法、たとえばアジド
法、クロライド法，酸無水物法，混酸無水物法,DCC法，
活性エステル法，ウッドワード試薬Ｋを用いる方法，カ
ルボジイミダゾール法，酸化還元法,DCC/HONB法などが
挙げられる。場合によっては、NCA法（Ｎ−カルボキシ
アンハイドライド；保護基を使用せずにアミノ酸に対応
する分子内環状カルボニル化合物を使用する方法）を適
用してもよい。

本縮合反応を行なう前に、それ自体公知の手段により原
料の反応に関与しないカルボキシル基，アミノ基を保護
したり、また反応に関与するカルボキシル基，アミノ基
を活性化させてもよい。

原料のカルボキシル基は、たとえば金属塩（例、ナトリ
ウム，カリウム塩等）,t−アルキルアミド塩（例、トリ
エチルアミン,N−メチルモルホリン等）あるいはエステ
ル（例、メチル，エチル，ベンジル,p−ニトロベンジ
ル,t−ブチル,t−アミル等のエステル）の形で保護する
こともできる。原料のアミノ基の保護基としては、たと
えば前述したようなベンジルオキシカルボニル基,t−ブ
トキシカルボニル基，アミルオキシカルボニル基，イソ
ボルニルオキシカルボニル基等があげられる。

Serの側鎖は無保護でもよく、保護基を用いるならば４
−クロロベンジル，ベンジル,t−ブチル等が例示され
る。

ペプチド縮合反応は通常用いられる溶媒中で適宜行うこ
とができ、かかる溶媒としては、たとえば無水または含
水のジメチルホルムアミド，ジメチルスルホキシド，ピ
リジン，クロロホルム，ジオキサン，ジクロルメタン，
テトラヒドロフラン，酢酸エチルあるいはこれらの適宜
の混合物が使用される。反応は一般に−20℃〜＋60℃程
度の範囲の温度で行われる。また本発明における原料化
合物はいわゆる固相合成法によっても容易に製造するこ
とができる。

これらの方法により得られる一般式（II） X¹−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（R²）−Gly−R¹
（II）〔式中、R¹は保護基を、R²は水素または保護基を、X¹は
保護基又は保護されたα−アミノ酸残基を表わす〕で表
わされるペプチドのR¹およびR²の保護基を、また所望に
よりX¹の保護基を脱離して式（Ｉ）のポリペプチドを得
ることができる。

上記一般式（II）中、X¹で使用される保護基としては、
前述の式（Ｉ）のＸにおけると同様の保護基が用いられ
る。

R¹で表わされる保護基としてはペプチド縮合反応におい
て用いられるカルボキシル基の保護基たとえば、メチ
ル，エチル,t−ブチル，べンジル，クロロもしくはニト
ロ置換ベンジル,sec−ブチル，シクロペンチル，シクロ
ヘキシル，ジフェニルメチル（エステル体として）など
が挙げられる。

R²で表わされる保護基としては４−クロロベンジル，ベ
ンジル,t−ブチルなどが挙げられる。

保護基の脱離には、たとえばフッ化水素，メタンスルホ
ン酸，トリフルオロメタンスルホン酸，トリフルオロ酢
酸−チオアニソール等による酸分解反応による方法や接
触還元が実施できる。これらの反応は必要に応じアニソ
ールの存在下約−20℃から＋40℃程度の温度で行われ
る。このようにして製造されたペプチドは、自体公知の
分離精製手段（例、分配，抽出，再沈殿，カラムクロマ
トグラフィー）によって採取される。これらのペプチド
は有機酸，無機酸などと常法により塩を形成したものと
して得ることが出来るが、該酸としては、一般的には、
酢酸，クエン酸，酒石酸，塩酸，硫酸などが好ましい。

実施例次に、参考例、実験例とともに実施例をあげて本発明を
さらに具体的に説明する。以下の記載において、薄層ク
ロマトグラフィーはシリカゲル60F₂₅₄（メルク社製）プ
レートを用い下記の条件で使用した。

Rf¹＝クロロホルム：メタノール（95:5） Rf²＝クロロホルム：メタノール：酢酸（9:1:0.5） Rf³＝ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（4:1:1:2）参考例１ Boc−Ser（Bzl）−Gly−OBzlの製造： Boc−Ser（Bzl）OH 8.2g,H−Gly−OBzl. パラトルエンスルホン酸塩10.1gをDMF 200mlに溶解し、
TEA 4.5mlとHONB 6.5gを加え、氷冷下にDCC 6.8gを加え
４時間攪拌、さらに室温で４時間攪拌する。析出物をろ
去し、溶媒を留去した残留物を酢酸エチル300mlに溶解
し、５％−NaHCO₃水,0.2N−塩酸で洗い、水洗後無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去し、残留物（油状）
を得る。

収量12.0g（97.7％） Rf¹0.81,Rf²0.88 参考例２ Boc−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzlの製造： Boc−Ser（Bzl）−Gly−OBzl 10gをTFA50mlに溶解し、
室温で15分放置ののちTFAを減圧留去する。残留物を酢
酸エチル100mlに溶解し、TEA3.4mlで中和し、これにBoc
−Leu−OH6.5gとHONB6.05g,DCC6.35gより合成したBoc−
Leu−ONBの酢酸エチル溶液100mlを加え１晩攪拌する。
反応液に酢酸エチル200mlを加えたのち全体を５％−NaH
CO₃水,0.2N−塩酸で洗浄，水洗ののち無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥する。溶媒を留去ののち析出してくる結晶をエ
ーテルと石油ベンジンの1:1混合溶媒でろ取する。

収量7.4g（59.0％），融点84−85℃▲〔α〕²⁵ _D▼−7.7
°（ｃ＝0.30,DMF）， Rf¹0.58,Rf²0.76 元素分析C₃₀H₄₁N₃O₇として計算値（％）:C,64.85;H,7.44;N,7.56 実測値（％）:C,64.98;H,7.43;N,7.66 参考例３ Boc−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzlの製造： Boc−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzl 12.3gをTFA60mlに溶
解し室温で15分放置ののち減圧留去し、アセトニトリル
100mlに溶解し、TEA3.0mlを加え中和する。これにBoc−
Phe−OH5.3g,HONB4.32g,DCC4.54gより合成したBoc−Phe
−ONBの酢酸エチル−ジオキサン混合液（1:1）100mlを
加え攪拌する。１晩後、全溶媒を留去し、残留物を酢酸
エチル300mlに溶解し、５％−NaHCO₃水,0.2N−塩酸で洗
浄、水洗ののち無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を
留去し、残留物に少量のアセトニトリルを加え結晶化
し、これをエーテルでろ取する。

収量11.0g（78.8％）融点140−142℃ ▲〔α〕²⁵ _Ｄ▼−4.7°（ｃ＝0.30,DMF） Rf¹0.47,Rf²0.71 元素分析C₃₉H₅₀N₄O₈として計算値（％）:C,66.65;H,7.17;N,7.97 実測値（％）:C,66.79;H,7.23;N,8.16 参考例４ Boc−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzlの製造： Boc−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzl 4.57gをTFA50m
lに溶解し、室温で15分間放置後、TFAを減圧留去する。
残留物にエーテルを加え粉末をろ取し乾燥したのちDMF5
0mlに溶解する。これにTEA0.98mlを加え中和したのちBo
c−Met−ONB（Boc−Met−OH1.78g,HONB1.54g,DCC1.62g
より合成）を加え一晩攪拌する。溶媒を留去し、残留物
にアセトニトリルを加え結晶化し、ろ取する。

収量5.4g（99.6％）融点182−185℃ ▲〔α〕²⁵ _D▼−11.5°（ｃ＝0.43,DMF） Rf¹0.32,Rf²0.64 元素分析C₄₄H₅₉N₅O₉Sとして計算値（％）C,63.36;H,7.13;N,8.40;S.3.84 実測値（％）C,62.46;H,7.19;N,8.33;S.3.74 参考例５ Boc−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzlの製
造： Boc−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzl 4.2gをTFA40mlに溶解し室温で10分放置ののちTFAを減圧
留去し、残留物にエーテルを加えろ取し乾燥する。これ
をDMF40mlに溶解し、TEA0.75mlを加え中和したのちBoc
−Val−OH 1.09g,HONB1.08g,DCC1.13gより合成したBoc
−Val−ONBの酢酸エチル−ジオキサン混合溶液（1:1）6
0mlを加え一晩攪拌する。溶媒を留去したのち残留物に
アセトニトリル50mlを加え加熱し冷却後ろ取する。

収量4.125g（88.4％）融点232℃（分解） ▲〔α〕²⁵ _D▼−16.4°（ｃ＝0.29,DMF） Rf¹0.29,Rf²0.61 元素分析C₄₉H₆₈N₆O₁₀Sとして計算値（％）C,63.07;H,7.34;N,9.01;S.3.44 実測値（％）C,62.86;H,7.43;N,8.94;S.3.08 参考例６ Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
lの製造： Boc−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBzl 2.8gをTFA25mlに溶解し室温で15分放置したのちTFAを減
圧留去し、残留物にエーテルを加え粉末をろ取し乾燥す
る。これをDMF50mlに溶解し、TEA0.45mlで中和したの
ち、Boc−Leu−ONBのDMF溶液（Boc−Leu−OH763mg,HONB
713mg,DCC749mgより合成）を加え一晩攪拌する。溶媒を
留去し残留物にアセトニトリルを加え粉末としてろ取す
る。

収量2.27g（72.3％）融点265−268℃（分解） ▲〔α〕²⁵ _D▼−16.5°（ｃ＝0.29,DMF） Rf¹0.28,Rf²0.60 元素分析C₅₅H₇₉N₇O₁₁Sとして計算値（％）C,63.14;H,7.61;N,9.37;S.3.06 実測値（％）C,63.40;H,7.78;N,9.35;S.3.15 参考例７ Boc−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly
−OBzlの製造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 1.57gをTFA20mlに溶解し室温で15分放置したのち減圧
留去する。残留物にエーテルを加え粉末をろ取し乾燥す
る。これをDMF50mlに溶解し、TEA0.23mlで中和したの
ち、Boc−Phe−ONB（Boc−Phe−OH400mg,HONB324mg,DCC
340mgより合成）を加え一晩攪拌する。溶媒を留去し残
留物にアセトニトリルを加え粉末としてろ取する。

収量1.5g（83.8％）融点300℃＞ ▲〔α〕²⁵ _D▼−16.9°（ｃ＝0.36,DMF） Rf¹0.30,Rf²0.60 元素分析C₆₄H₈₈N₈O₁₂Sとして計算値（％）C,64.41;H,7.43;N,9.39;S.2.69 実測値（％）C,64.37;H,7.46;N,9.36;S.2.63 実施例１Ｈ−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OH の製造： Boc−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly
−OBzl 597mgをアニソール1.5mlと共にHF10ml中で０℃4
5分間処理したのちHFを減圧留去する。残留物に5N−酢
酸を加えよく洗いろ取、乾燥する。これをTFA−水より
再沈澱精製し、目的物を得る。

収量151mg（33.1％）融点300℃＞アミノ酸分析値Ser0.91（１）,Gly1.0（１）， Val0.93（１）,Met0.54（１）,Leu1.86（２）， Phe1.81（２）平均回収率74.8％実施例２Ｈ−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 350mlをTFA5mlに溶解し室温で30分放置したのちTFAを
減圧留去する。残留物にエーテルを加え粉末としてろ取
し乾燥する。収量360mg。この粉末260mgをアニソール0.
7mlと共にHF10mlで０℃50分間反応しHFを減圧留去す
る。残留物に水を加え、ゲル状物をろ取しＮ−酢酸水で
洗い乾燥する。TFA−水より再沈澱し目的物を得る。

収量160mg（86.5％）融点300℃＞アミノ酸分析値Ser0.96（１）,Gly1.03（１）， Val 1.0（１）,Met0.87（１）,Leu2.0（２）， Phe1.01（１）平均回収率75.8％実施例３Ｈ−Arg−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 110mgをTFA3mlに溶解し室温で15分放置したのちTFAを
減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取、乾燥する。
これをDMF2mlに溶解しTFA0.016mlで中和ののちBoc−Arg
（Tos）−OH54mg,HONB26mgを加え氷冷する。DCC26mgを
加え０℃４時間室温で８時間攪拌する。不溶物をろ去し
溶媒を留去したのち残留物にエーテルと酢酸エチル（1:
1）の混合溶媒を加えろ取する。収量134mg（93.7％）この粉末101mgをアニソール0.35mlと共にHF15ml中で０
℃60分間処理したのち減圧留去し残留物を酢酸エチルで
洗ったのち、酢酸水に溶解しイオン交換後、凍結乾燥す
る。これを5N−酢酸に溶解し、同じ溶媒で充填したセフ
ァデックスLH−20のカラム（２×80cm）に付し同じ溶媒
で溶出する。58mlから76mlの区分を集め凍結乾燥し目的
物を得る。

収量30mg（43.7％）アミノ酸分析値Arg1.02（１）,Ser0.91（１）， Gly1.0（２）,Val0.98（１）,Met0.70（１）， Leu1.93（２）,Phe1.0（１）平均回収率76.2％ Rf³0.46 実施例４Ｈ−His−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 209mgをTFA3mlに溶解し室温で15分放置したのち溶媒
を減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取し、乾燥す
る。これをTEA0.03mlとともにDMF2mlに溶解し、Boc−Hi
s（Tos）−ONB（Boc−His（Tos）−OH90mg,HONB48mg,DC
C50mgより合成）のDMF溶液1mlを加え一晩攪拌する。溶
媒を留去し残留物にアセトニトリルを加えろ取乾燥す
る。収量230mg（86.0％）この粉末86mgをアニソール0.3mlとともにHF6mlで０℃55
分間処理し減圧留去する。残留物を酢酸エチルで洗い、
酢酸水に溶解しイオン交換したのち凍結乾燥する。これ
を80％酢酸に溶解し、5N−酢酸で充填したセファデック
スLH−20のカラム（２×96cm）に付し5N−酢酸で溶出す
る。94〜108mlの溶出区分を集め凍結乾燥し目的物を得
る。

収量24mg（41.4％）アミノ酸分析His0.82（１）,Ser0.92（１）， Gly1.0（１）,Val 1.02（１）,Met0.36（１）， Leu1.98（２）,Phe1.06（１）平均回収率80.0％ Rf³0.45 実施例５Ｈ−Leu−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Ler−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 105mlをTFA2mlに溶解し室温で15分放置したのちTFAを
減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取し、乾燥す
る。これをDMF2mlに溶解し、TEA0.015mlで中和し、Boc
−Leu−ONB（Boc−Leu−OH 30mg,HONB26mg,DCC27mgより
合成）のDMF溶液1mlを加え一晩攪拌する。溶媒を留去し
残留物にアセトニトリルを加え、ろ取、乾燥する。収量
107mg（92.2％）この粉末95mgをアニソール0.3mlと共にHF5ml中で０℃５
分間処理したのち減圧留去し、残留物を酢酸5mlに溶解
し凍結乾燥する。

収量50mg（69.4％）アミノ酸分析値Ser0.93（１）,Gly1.0（１）， Val0.97（１）,Met0.82（１）,Leu3.0（３）， Phe1.08（１）平均回収率82.4％ Rf³0.77 実施例６Ｈ−Tyr−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 105mgをTFA2mlに溶解し室温で15分放置したのちTFAを
減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取攪拌する。こ
れをDMF3mlに溶解し、TEA0.015mlで中和したのちBoc−T
yr−ONB80mgを加え一晩撹拌する。溶媒を留去し、残留
物にアセトニトリルを加え、ろ取乾燥する。

収量109mg（90.1％）この粉末90mgをアニソール0.3mlと共にHF5ml中で０℃55
分間処理したのち減圧留去し、残留物を酢酸5mlに溶解
し凍結乾燥する。これを80％酢酸水に溶解し20分間沸騰
水中で加熱したのち再び凍結乾燥する。

収量51mg（73.8％）アミノ酸分析値Ser0.90（１）,Gly1.1（１）， Val0.91（１）,Met0.87（１）,Leu1.98（２）， Tyr0.92（１）,Phe1.02（１）平均回収率79.5％ Rf³0.73 実施例７Ｈ−Glu−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 105mgをTFA2mlに溶解し室温で15分放置したのちTF5を
減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取、乾燥する。
これをDMF2mlに溶解し、Boc−Glu（OBzl）−ONB（Boc−
Glu（OBzl）−OH 40mg,HONB26mg,DCC27mgより合成）のD
MF溶液1mlを加え一晩攪拌する。溶媒を留去し残留物に
アセトニトリルを加え、ろ取乾燥する。

収量118mg（93.3％）この粉末89mgをアニソール0.3mlと共にHF5ml中で０℃60
分間処理したのち減圧留去し、残留物を酢酸エチルで洗
ったのち酢酸5mlに溶解し凍結乾燥する。これを80％酢
酸2mlに溶解し20分間沸騰水中で加熱し、室温にまで冷
却後、5N−酢酸で充填したセファデックスLH−20のカラ
ム（1.8×48cm）に付し、同じ溶媒で溶出し45〜60mlの
区分を集め凍結乾燥する。

収量17mg（27.0％）アミノ酸分析値Ser0.94（１）,Glu1.02（１）， Gly1.0（１）,Val0.91（１）,Met0.90（１）， Leu1.92（２）,Phe1.01（１）平均回収率75.4％ Rf³0.73 実施例８Ｈ−Ser−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの製
造： Boc−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser（Bzl）−Gly−OBz
l 105mgをTFA2mlに溶解し室温で15分放置したのちTFAを
減圧留去し、残留物にエーテルを加えろ取乾燥する。こ
れをDMF3mlに溶解し、TEA0.015mlで中和したのちBoc−S
er（Bzl）−ONB（Boc−Ser（Bzl）OH35mg,HONB26mg,DCC
27mgより合成）のDMF溶液1mlを加え一晩攪拌する。溶媒
を留去し、残留物にアセトニトリルを加えろ取乾燥す
る。

収量97mg（79.5％）この粉末71mgをアニソール0.3mlと共にHF5ml中で０℃60
分間処理したのち減圧留去し、残留物を酢酸エチルで洗
ったのち酢酸5mlに溶解し、凍結乾燥する。これを80％
酢酸水3mlに溶解し沸騰水中で20分間加熱したのち再び
凍結乾燥する。

収量31mg（62.6％）アミノ酸分析値Ser1.81（２）,Gly1.0（１）， Val0.89（１）,Met0.88（１）,Leu1.92（２）， Phe1.02（１）平均回収率75.4％ Rf³0.77 実施例９ Boc−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OHの
製造：Ｈ−Phe−Leu−Val−Met−Phe−Leu−Ser−Gly−OH 10m
gを10％含水DMF1mlに溶解し、TEA0.003mlとジ−ｔ−ブ
チルジカルボネート3mgを加え１晩かくはんする。溶媒
を留去し残留物にＮ−酢酸を加えろ取したのち氷酢酸に
溶解し凍結乾燥する。

収量7mg（63.6％）アミノ酸分析値Ser0.90（１）,Gly1.0（１）， Val0.95（１）,Met0.70（１）,Leu1.80（２）， Phe1.80（２）平均回収率70.2％実験例 Plasmid２,454（1979）に記載の方法によりプラズミドp
PD1を持つ細胞（39×5Sα）の培養液（約５×10⁸個/m
l）0.2mlを新しい培養液で10倍希釈しこれに実施例１で
得たポリペプチド（cPD1）を加え37℃45分間培養した。
この培養液0.2mlを、プラスミドpPD1を持たない細胞（J
H2−２）の培養液（約５×10⁸個/ml）を新しい培養液で
８倍希釈したもの1.8mlと混合し、37℃で10分間培養し
た。これをリファンピシン（25μg/ml）およびテトラサ
イクリン（５μg/ml）を含む培地で培養し、39−5Sα細
胞あたりのJH2−２の接合頻度を求めた。cPD1作用物質
を４×10^-11Ｍの濃度で加えた場合の頻度は3.6×10
^-4で、cPD1物質を加えない場合の頻度は3.4×10^-7以下
であった。

発明の効果本発明のペプチドは、Streptococcus faecalisに対し４
×10^-11Ｍ程度の濃度で細胞間の凝集を誘導し、プラス
ミドの接合伝達を顕著に促進する。したがって本化合物
は遺伝子工学や分子生物学分野での重要な試薬となりう
るものであり、しかも取り扱いが容易でかつ人体に安全
なものである。さらに、本発明のペプチドは、抗生物質
耐性菌の耐性発現機構の解明のための試薬、プラスミド
伝達機構解明のための試薬、あるいは分子生物学的研究
用の試薬として利用しうる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アミノ酸配列 X-Leu-Val-Met-Phe-Leu-Ser-Gly （式中、Ｘは水素、アミノ基保護基、Phe、Arg、His、L
eu、Tyr、Glu又はSerを示す）を有するポリペプチド
【請求項２】ポリペプチドが式 H-Phe-Leu-Val-Met-Phe-Leu-Ser-Gly-OHで表わされる又
はその塩である特許請求の範囲第１項記載のポリペプチ
ド