JPH0671436B2 - Biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol - Google Patents
Biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenolInfo
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- JPH0671436B2 JPH0671436B2 JP16955585A JP16955585A JPH0671436B2 JP H0671436 B2 JPH0671436 B2 JP H0671436B2 JP 16955585 A JP16955585 A JP 16955585A JP 16955585 A JP16955585 A JP 16955585A JP H0671436 B2 JPH0671436 B2 JP H0671436B2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、光学活性１−エチニル−２−メチル−２−ペ
ンテノールの生化学的製法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol.
従来技術および問題点 １−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールは、合成
ピレスロイドと呼ばれる優れた殺虫活性を有する一群の
エステル化合物のアルコール成分として知られている
（特許公昭55−42045）。この１−エチニル−２−メチ
ル−２−ペンテノールは、１位に不斉炭素を有している
ことから、２種の光学異性体が存在し、これをエステル
とした場合の殺虫効力は（Ｓ）−体アルコールの方が対
応する（Ｒ）−体に比し遥かに優れている〔Pestic. Sc
i.,11,202（1980）〕。Prior Art and Problems 1-Ethynyl-2-methyl-2-pentenol is known as an alcohol component of a group of ester compounds having excellent insecticidal activity called synthetic pyrethroid (Patent Publication No. 55-42045). Since this 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol has an asymmetric carbon at the 1-position, there are two types of optical isomers, and the insecticidal efficacy when this is an ester is ( (S) -body alcohol is far superior to the corresponding (R) -body [Pestic. Sc
i., 11, 202 (1980)].
このため、化学合成法により製造した（R,S）−１−エ
チニル−２−メチル−２−ペンテノールを工業的に有利
な方法で光学分割し、（Ｓ）−体を取得する技術の開発
が望まれている。Therefore, development of a technique for optically resolving (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol produced by a chemical synthesis method by an industrially advantageous method to obtain a (S) -form Is desired.
（R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノー
ルの光学分割方としては、微生物酵素による分割法が知
られている〔Agric. Biol.Chem.,46（10）,2579〜2585
（1982）〕。この方法は、バチルス・サチルス・バール
・ニガーの培養物を用いて（R,S）−１−エチニル−２
−メチル−２−ペンテノールの酢酸エステルを不斉加水
分解し、（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペン
テノールの酢酸エステルと（Ｒ）−１−エチニル−２−
メチル−２−ペンテノールに分割し、前者を脱アシル化
して（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノ
ールを取得するものである。この微生物酵素を用いる光
学分割法は高価な試薬や複雑な工程を必要としない点で
優れた方法であるが、 不斉加水分解操作における基
質濃度が低いこと 遊離してくる（Ｒ）−２−エチ
ニル−２−メチル−２−ペンテノールの光学純度が低い
こと、即ち、加水分解反応の光学選択性が低いこと、
得られる（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペ
ンテノールの収率および光学純度が低いことなどの点で
必ずしも満足できるものではない。As a method of optical resolution of (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, a resolution method using a microbial enzyme is known [Agric. Biol. Chem., 46 (10), 2579- 2585
(1982)]. This method uses (R, S) -1-ethynyl-2 in cultures of Bacillus subtilis var niger.
Asymmetric hydrolysis of acetic acid ester of -methyl-2-pentenol to give acetic acid ester of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and (R) -1-ethynyl-2-
It is divided into methyl-2-pentenol and the former is deacylated to obtain (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol. This optical resolution method using a microbial enzyme is an excellent method in that it does not require expensive reagents or complicated steps, but it is liberated due to the low substrate concentration in the asymmetric hydrolysis operation (R) -2- Low optical purity of ethynyl-2-methyl-2-pentenol, that is, low optical selectivity of hydrolysis reaction,
The obtained (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is not always satisfactory in yield and optical purity.
発明の構成 本発明者らは、これらの諸問題点を解決し、工業的に有
利な（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノ
ールの製造法を見出すべく研究を重ねた結果、アルスロ
バクター属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、
クロモバクテリウム属、フミコラ属（サーモミセス属）
或いはシュードモナス属に属する微生物が生産するエス
テラーゼがラセミ体、即ち（R,S）−１−エチニル−２
−メチル−２−ペンテノールの有機カルボン酸エステル
に作用して、これらを不斉加水分解し、（Ｓ）−１−エ
チニル−２−メチル−２−ペンテノールの有機カルボン
酸エステルと（Ｒ）−１−エチニル−２−メチル−２−
ペンテノールに効率良く分割できることを見出し、これ
に種々の検討を加え本発明を完成した。Structure of the Invention The present inventors have conducted research to solve these problems and find an industrially advantageous method for producing (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol. , Arthrobacter, Alcaligenes, Achromobacter,
Chromobacterium, Humicola (Thermomyces)
Alternatively, an esterase produced by a microorganism belonging to the genus Pseudomonas is racemic, that is, (R, S) -1-ethynyl-2.
-Acting on an organic carboxylic acid ester of methyl-2-pentenol and asymmetrically hydrolyzing them, an organic carboxylic acid ester of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and (R) -1-ethynyl-2-methyl-2-
The inventors have found that it can be efficiently divided into pentenol, and have made various studies on it to complete the present invention.
即ち、本発明は、アルスロバクター属、アルカリゲネス
属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、フミ
コラ属（サーモミセス属）或いはシュードモナス属に属
する微生物が生産するエステラーゼを一般式（Ｉ）： 〔式中、Ｒは水素原子、炭素数１ないし18のアルキル
基、炭素数２ないし18のアルケニル基もしくは炭素数２
ないし18のアルキニル基を表す〕で示される（R,S）−
１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの有機カ
ルボン酸エステルに作用させて、これを（Ｓ）−１−エ
チニル−２−メチル−２−ペンテノールの有機カルボン
酸エステルと（Ｒ）−１−エチニル−２−メチル−２−
ペンテノールにに不斉加水分解し、これらを分離回収し
た後、（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテ
ノールを有機カルボン酸エステルを脱アシル化し（Ｓ）
−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールを得る
ことを特徴とする（Ｓ）及び（Ｒ）−１−エチニル−２
−メチル−２−ペンテノールの製造方法を提供する。That is, the present invention provides an esterase produced by a microorganism belonging to the genus Arthrobacter, Alcaligenes, Achromobacter, Chromobacterium, Humicola (Pseudomonas) or Pseudomonas, represented by the general formula (I): [In the formula, R represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 18 carbon atoms, an alkenyl group having 2 to 18 carbon atoms, or 2 carbon atoms.
Represents an alkynyl group of 18 to 18] (R, S)-
It is allowed to act on an organic carboxylic acid ester of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, which is combined with an organic carboxylic acid ester of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and (R)-. 1-ethynyl-2-methyl-2-
After asymmetric hydrolysis to pentenol and separating and recovering these, (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is deacylated to an organic carboxylic acid ester (S).
-1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is obtained (S) and (R) -1-ethynyl-2
-Providing a method for producing methyl-2-pentenol.
本発明において、使用する（R,S）−１−エチニル−２
−メチル−２−ペンテノールを有機カルボン酸エステル
は公知であり、一般のエステル製造の通常の方法、例え
ば（R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノ
ールに有機カルボン酸の無水物あるいは有機カルボン酸
ハライドを反応させることにより容易に製造することが
できる。(R, S) -1-ethynyl-2 used in the present invention
-Methyl-2-pentenol is known as an organic carboxylic acid ester, and a general method for producing a general ester, for example, (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is used. It can be easily produced by reacting an anhydride or an organic carboxylic acid halide.
本発明において使用する微生物は、アルスロバクター
属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバ
クテリウム属、フミコラ属（サーモミセス属）或いはシ
ュードモナス属に属する微生物であって、リパーゼを含
む広義のエステラーゼを生産する微生物である。この微
生物の具体例としては、例えば、 アルスロバクター・シンプレックス IFO−12069 アルカリゲネス・フェーカリス IFO−13111 クロモバクテリウム，イオディウム IFO−3558 シュードモナス・フルオレッセンス IFO−3903等が挙
げられる。これらの微生物は、いずれも大阪市の財団法
人醗酵研究所（IFO）から入手することができる。Microorganisms used in the present invention are Arthrobacter, Alcaligenes, Achromobacter, Chromobacterium, Humicola (Thermomyces) or Pseudomonas, which are microorganisms belonging to the genus Pseudomonas and include a broad sense esterase including lipase. It is a producing microorganism. Specific examples of this microorganism include Arthrobacter simplex IFO-12069 Alcaligenes faecalis IFO-13111 Chromobacterium, Iodium IFO-3558 Pseudomonas fluorescens IFO-3903 and the like. All of these microorganisms can be obtained from the Fermentation Research Institute (IFO) of Osaka City.
上記の微生物の培養は、醗酵学の分野で公知の通常の方
法に従い行うことができる。例えば、滅菌した液体培地
〔かび類、酵母類用には麦芽エキス・酵母エキス培地
（水１にペプトン5.0g、グルコース10.0g、麦芽エキ
ス3.0g、酵母エキス3.0gを溶解し、pH6.5とする）、細
菌類用には加糖ブイヨン培地（水１にグルコース10.0
g、ペプトン5.0g.肉エキス5.0gを溶解し、pH7.2とす
る）〕に微生物を接種し、通常20℃ないし40℃で、１な
いし３日間、往復振盪培養を行う。また、必要に応じて
固体培養を行ってもよい。また、これらの微生物起源の
エステラーゼの中には市販のものがあり、容易に入手す
ることが可能である。Cultivation of the above-mentioned microorganism can be carried out according to a usual method known in the field of fermentation. For example, sterilized liquid medium [malt extract / yeast extract medium for molds and yeasts (5.0 g of peptone, 10.0 g of glucose, 3.0 g of malt extract, 3.0 g of yeast extract are dissolved in 1 water, and pH is adjusted to 6.5). For bacterium, broth with broth containing sugar (10.0 parts glucose in water)
g, peptone 5.0 g. meat extract 5.0 g is dissolved to have a pH of 7.2)], and a reciprocal shaking culture is usually carried out at 20 ° C. to 40 ° C. for 1 to 3 days. In addition, solid culture may be performed if necessary. In addition, there are commercially available esterases derived from these microorganisms, which can be easily obtained.
市販のエステラーゼの具体例としては、シュードモナス
属のリパーゼ（天野製薬）、フミコラ属のリパーゼ（リ
パーゼCE;天野製薬）、アルカリゲネス属のリパーゼ
（リパーゼPL;名糖産業）、アクロモバクター属のリパ
ーゼ（リパーゼAL;名糖産業）、アルスロバクター属の
リパーゼ（新日本化学製）、クロモバクテリウム属のリ
パーゼ（リパーゼLP:東洋醸造製）などがあげられる。Specific examples of commercially available esterases include Pseudomonas lipase (Amano Pharmaceutical), Humicola lipase (Lipase CE; Amano Pharmaceuticals), Alcaligenes lipase (Lipase PL; Meito Sangyo), Achromobacter lipase ( Lipase AL; Meito Sangyo), lipase of Arthrobacter genus (manufactured by Shin Nihon Kagaku), lipase of chromobacterium genus (lipase LP: manufactured by Toyo Brewing Co., Ltd.) and the like.
本発明の方法を実施するに際し、（R,S）−１−エチニ
ル−２−メチル−２−ペンテノールのカルボン酸エステ
ルの不斉加水分解は、上記微生物を培養した培養液、培
養液から分離した菌体、エステラーゼを含有する培養瀘
液、或いは各種酵素分離法によって菌体または培養瀘液
から分離した粗製エステラーゼ、精製エステラーゼおよ
びエステラーゼ含有抽出液または濃縮液を含有する水溶
液と（R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテ
ノールの有機カルボン酸エステルを混合し、撹拌または
浸盪することにより行われる。また、固定化菌体あるい
は固定化エステラーゼも使用することができる。（R,
S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの
有機カルボン酸エステルの不斉加水分解を行う条件とし
ては、反応温度は10〜70℃が適当であり、好熱菌の培養
液または好熱菌の培養により得られた耐熱性エステラー
ゼでは50〜65℃、中温菌の培養液または耐熱性を有しな
いエステラーゼでは20〜50℃が好ましい。反応時間は通
常３〜48時間であるが、反応温度を高めたり酵素量を増
加させるなどにより反応時間の短縮も可能である。In carrying out the method of the present invention, the asymmetric hydrolysis of the carboxylic acid ester of (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is separated from the culture solution in which the above-mentioned microorganism is cultured, or the culture solution. Microbial cells, a culture filtrate containing esterase, or an aqueous solution containing a crude esterase, a purified esterase and an esterase-containing extract or concentrate separated from the bacterial cells or culture filtrate by various enzyme separation methods (R, S) It is carried out by mixing an organic carboxylic acid ester of -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and stirring or stirring. Also, immobilized cells or immobilized esterase can be used. (R,
(S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, the conditions for carrying out the asymmetric hydrolysis of the organic carboxylic acid ester, the reaction temperature is suitable 10 ~ 70 ° C. A thermostable esterase obtained by culturing a thermophilic bacterium is preferably at 50 to 65 ° C, and a culture solution of a mesophilic bacterium or an esterase having no thermostability is preferably at 20 to 50 ° C. The reaction time is usually 3 to 48 hours, but the reaction time can be shortened by increasing the reaction temperature or increasing the amount of enzyme.
反応中のpHは好アルカリ性菌の培養液やアルカリ性エス
テラーゼではpH8〜11、好アルカリ性でない微生物の培
養液や耐アルカリ性を有しないエステラーゼではpH5〜
８が好ましい。また、加水分解によって生成する有機カ
ルボン酸を中和し、反応中のpHを一定に保つために緩衝
液の使用が好ましく、燐酸ナトリウム、燐酸カリウムな
どの無機酸塩の緩衝液、酢酸ナトリウム、クエン酸ナト
リウムなどの有機酸塩の緩衝液を使用することができ
る。The pH during the reaction is 8 to 11 for the culture solution of alkalophilic bacteria and alkaline esterase, and 5 to 5 for the culture solution of non-alkalophilic microorganisms and esterase that does not have alkali tolerance.
8 is preferable. In addition, it is preferable to use a buffer solution to neutralize the organic carboxylic acid generated by hydrolysis and keep the pH constant during the reaction, such as a buffer solution of an inorganic acid salt such as sodium phosphate and potassium phosphate, sodium acetate, citrate. A buffer of an organic acid salt such as sodium acid salt can be used.
基質である（R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−
ペンテノールを有機カルボン酸エステルの使用濃度は反
応液にたいし１〜50重量％であり、好ましくは５〜25重
量％である。Substrate (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-
The concentration of the pentenol and the organic carboxylic acid ester used is 1 to 50% by weight, preferably 5 to 25% by weight, based on the reaction solution.
使用するエステラーゼの濃度は、基質の重量に対して0.
1〜20重量％である。The concentration of esterase used is 0, based on the weight of the substrate.
It is 1 to 20% by weight.
このようにして不斉加水分解反応を行った後、遊離した
（Ｒ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノール
と未反応の対掌体エステルを分離回収する。この分離回
収に際し水蒸気蒸留、溶媒抽出、分別蒸留、カラムクロ
マトグラフィーなどの操作を適宜採用することができ
る。例えば、反応液を水蒸気蒸留し留出物をエーテル抽
出するかあるいは直接反応液をエーテル、酢酸エチル、
ベンゼンなどの有機溶媒で抽出し、この抽出物を分別蒸
留し、（Ｒ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテ
ノールとその対掌体のエステルを分離取得する。または
抽出物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにか
け、例えば、ヘキサン−酢酸エチル（5:1）溶液で溶出
することにより、先ず、（Ｓ）−１−エチニル−２−メ
チル−２−ペンテノールの有機カルボン酸エステルが分
離され、次いでヘサン−酢酸エチル（2:1）溶液で溶出
を行うことによりその対掌体の遊離の（Ｒ）−１−エチ
ニル−２−メチル−２−ペンテノールが分離される。ま
た以上のようにして分離された（Ｓ）−１−エチニル−
２−メチル−２−ペンテノールのエステルは、さらに脱
アシル化することにより容易に（Ｓ）−１−エチニル−
２−メチル−２−ペンテノールに導くことができる。After carrying out the asymmetric hydrolysis reaction in this manner, the released (R) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and the unreacted enantiomer ester are separated and recovered. In this separation and recovery, operations such as steam distillation, solvent extraction, fractional distillation, column chromatography and the like can be appropriately adopted. For example, the reaction solution is steam distilled and the distillate is extracted with ether, or the reaction solution is directly converted into ether, ethyl acetate,
It is extracted with an organic solvent such as benzene, and this extract is fractionally distilled to separate and obtain (R) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and its antipodal ester. Alternatively, by subjecting the extract to column chromatography on silica gel and eluting with, for example, a hexane-ethyl acetate (5: 1) solution, first, an organic carvone of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is obtained. The acid ester is separated and then the free (R) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol of its enantiomer is separated by elution with a solution of hesan-ethyl acetate (2: 1). . Further, (S) -1-ethynyl-isolated as described above
The ester of 2-methyl-2-pentenol can be easily deacylated to give (S) -1-ethynyl-
It can lead to 2-methyl-2-pentenol.
脱アシル化は、通常の公知方法で行なうことができる。
例えば、１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノール
の有機カルボン酸エステルに水及び当量の炭酸ナトリウ
ムを加え、次いで、10％塩酸水を加え、pH5に調製した
後、８時間撹拌下に還流を行うと容易に１−エチニル−
２−メチル−２−ペンテノールが分離される。Deacylation can be carried out by a commonly known method.
For example, water and an equivalent amount of sodium carbonate are added to an organic carboxylic acid ester of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, then 10% hydrochloric acid water is added to adjust the pH to 5, and then refluxed under stirring for 8 hours. 1-ethynyl-
2-Methyl-2-pentenol is isolated.
発明の効果 本発明方法による（R,S）−１−エチニル−２−メチル
−２−ペンテノールの光学分割法は、従来知られている
有機合成化学的光学分割法に比べ工程が簡略であり、ま
た高価な光学活性試薬を必要としないので経済的にも有
利である。さらに得られる（Ｓ）−１−エチニル−２−
メチル−２−ペンテノールの収率、光学純度が高く工業
的に極めて有利である。EFFECTS OF THE INVENTION The optical resolution method of (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol according to the method of the present invention is simpler in process than the conventionally known organic synthetic chemical optical resolution method. Moreover, it is economically advantageous because an expensive optically active reagent is not required. Further obtained (S) -1-ethynyl-2-
The yield of methyl-2-pentenol and its optical purity are high, which is extremely advantageous industrially.
次に本発明を実施例により更に詳細に説明する。しか
し、本発明はこれによって限定されるのもではない。Next, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, the present invention is not limited thereby.
実施例１〜６ （R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノー
ルの酢酸エステル2.0gと表１に記載した各エステラーゼ
200mgをpH8.0の0.1MKH2PO4−K2HPO4緩衝液20mlに加え、
35℃で撹拌子を用いて1000r.p.m.で撹拌しつつ反応させ
た。22時間反応を行った後、反応物を酢酸エチルで抽出
した。抽出液をガスクロマトグラフィー（10％FFAP 2.6
m 140℃）で分析し、１−エチニル−２−メチル−２−
ペンテノールの酢酸エステルと、１−エチニル−２−メ
チル−２−ペンテノールのピーク面積比よりアルコール
生成率を算出し、表１の結果を得た。抽出液を濃縮し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、ヘキサ
ン：酢酸エチル（5:1）溶液で溶出を行い、未反応の１
−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの酢酸エス
テルを分離取得し、更にヘキサン：酢酸エチル（2:1）
で溶出し、生成した１−エチニル−２−メチル−２−ペ
ンテノールを回収した。ここで得られた生成１−エチニ
ル−２−メチル−２−ペンテノール10mgにフェニルイソ
シアナート50μｌおよび脱水ピリジン50μｌを加えて反
応させ、１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノール
のカーバメイト誘導体とした後、これを高速液体クロマ
トグラフィー〔カラム OA−2100カラム（4mmφx0.5m
住化分析センター（株）製）キャリアー：ヘキサン／ジ
クロロメタン／イソプロピルアルコール／アセトニトリ
ル（500/5/2/1）〕により分析した。（Ｓ）−１−エチ
ニル−２−メチル−２−ペンテノール誘導体のピークと
（Ｒ）体アルコール誘導体のピークとの面積比により光
学異性体比を求めた。一方、分離取得した未反応の１−
エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの酢酸エステ
ルは、５％NaOH/メタノール溶液を混合し、60℃に加温
し、加水分解反応を行い、遊離した１−エチニル−２−
メチル−２−ペンテノールをジクロルメタンにて抽出し
た。ここに得られた１−エチニル−２−メチル−２−ペ
ンテノールについても同様にして光学異性体型分析を行
った。Examples 1-6 2.0 g of (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol acetate and each esterase listed in Table 1
Add 200 mg to 20 ml of 0.1 M KH 2 PO 4 -K 2 HPO 4 buffer at pH 8.0,
The reaction was carried out at 35 ° C. with stirring using a stirring bar at 1000 rpm. After reacting for 22 hours, the reaction product was extracted with ethyl acetate. The extract was gas chromatographed (10% FFAP 2.6
1-ethynyl-2-methyl-2-
The alcohol production rate was calculated from the peak area ratio of the pentenoyl acetate and 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, and the results in Table 1 were obtained. Concentrate the extract,
Apply silica gel column chromatography and elute with hexane: ethyl acetate (5: 1) solution.
-Ethynyl-2-methyl-2-pentenol acetate ester was separated and obtained, and further hexane: ethyl acetate (2: 1)
The resulting 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol was recovered. 50 mg of phenylisocyanate and 50 μl of dehydrated pyridine were added to 10 mg of the product 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol thus obtained, and reacted to give a carbamate derivative of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol. After that, perform high performance liquid chromatography (column OA-2100 column (4 mmφ x 0.5 m
Sumika Chemical Analysis Service Co., Ltd. carrier: hexane / dichloromethane / isopropyl alcohol / acetonitrile (500/5/2/1)]. The optical isomer ratio was determined by the area ratio of the peak of the (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol derivative and the peak of the (R) alcohol derivative. On the other hand, the unreacted 1-
Acetate ester of ethynyl-2-methyl-2-pentenol was mixed with 5% NaOH / methanol solution, heated to 60 ° C, and subjected to hydrolysis reaction to release 1-ethynyl-2-
Methyl-2-pentenol was extracted with dichloromethane. The 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol obtained here was also subjected to optical isomer type analysis in the same manner.
実施例７〜９ （R,S）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノー
ルのカプロン酸エステル20gと表２に記載した各エステ
ラーゼ1gを0.1MKH2PO4−K2HPO4緩衝液（pH8.0）50mlに
加え、40℃で撹拌しつつ反応させた。 Examples 7-9 20 g of (R, S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol caproate and 1 g of each esterase described in Table 2 were added to 0.1 M KH 2 PO 4 —K 2 HPO 4 buffer solution. (PH 8.0) was added to 50 ml and reacted at 40 ° C. with stirring.
24時間反応を行った後、反応物を酢酸エチルで抽出し
た。以後、実施例１〜６と同様にして未反応の１−エチ
ニル−２−メチル−２−ペンテノールのカプロン酸エス
テルと生成した１−エチニル−２−メチル−２−ペンテ
ノールを分離回収した。更に、実施例１〜６と同様の操
作を行い表２に記載した結果を得た。After reacting for 24 hours, the reaction product was extracted with ethyl acetate. Thereafter, the unreacted caproic acid ester of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and the produced 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol were separated and recovered in the same manner as in Examples 1 to 6. Further, the same operation as in Examples 1 to 6 was performed and the results shown in Table 2 were obtained.
実施例10〜13 500mlエルレンマイヤーフラスコに液体培地〔水１に
酵母エキス5.0g、ペプトン5.0g、可溶性デンプン10.0g
を溶解し、pH6.8とする。〕100mlを入れて滅菌した後、
表３に記載した各微生物を斜面培養から１白金耳接種
し、30℃で24時間往復振盪培養した。次いで、（R,S）
−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの酢酸
エステル0.5gを添加し、30℃で撹拌しつつ24時間反応さ
せた。以後、実施例１〜６と同様にして反応物の分離を
行い生成した１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノ
ールの光学異性体型比と加水分解を測定した。 Examples 10-13 Liquid medium in 500 ml Erlenmeyer flask [5.0 g yeast extract in water 1 5.0 g peptone, 10.0 g soluble starch]
To pH 6.8. ] After putting 100 ml and sterilizing,
Each of the microorganisms listed in Table 3 was inoculated with 1 platinum loop from a slant culture, and cultured at 30 ° C. for 24 hours with reciprocal shaking. Then (R, S)
0.5 g of acetic acid ester of -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol was added, and the mixture was reacted at 30 ° C for 24 hours with stirring. Thereafter, the reaction products were separated in the same manner as in Examples 1 to 6 and the optical isomer type ratio and hydrolysis of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol produced were measured.
結果を表３に示す。The results are shown in Table 3.
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:025） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:38） Continuation of the front page (51) Int.Cl. 5 Identification number Office reference number FI Technical display location C12R 1:05) (C12P 41/00 C12R 1: 025) (C12P 41/00 C12R 1:01) (C12P 41 / 00 C12R 1:38)
Claims (1)
アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、フミコラ
属（サーモミセス属）或いはシュードモナス属に属する
微生物が生産するエステラーゼを一般式 〔式中、Ｒは水素原子、炭素数１ないし18のアルキル
基、炭素数２ないし18のアルケニル基もしくは炭素数２
ないし18のアルキニル基を表す〕で示される（R,S）−
１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールの有機カ
ルボン酸エステルに作用させて、これを（Ｓ）−１−エ
チニル−２−メチル−２−ペンテノールの有機カルボン
酸エステルと（Ｒ）−１−エチニル−２−メチル−２−
ペンテノールに不斉加水分解し、これらを分離回収した
後、（Ｓ）−１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノ
ールの有機カルボン酸エステルを脱アシル化し（Ｓ）−
１−エチニル−２−メチル−２−ペンテノールを得るこ
とを特徴とする（Ｓ）及び（Ｒ）−１−エチニル−２−
メチル−２−ペンテノールの製造方法1. A genus Arthrobacter, a genus Alcaligenes,
The general formula for esterases produced by microorganisms belonging to the genus Achromobacter, chromobacterium, Humicola (Thermomyces) or Pseudomonas [In the formula, R represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 18 carbon atoms, an alkenyl group having 2 to 18 carbon atoms, or 2 carbon atoms.
Represents an alkynyl group of 18 to 18] (R, S)-
It is allowed to act on an organic carboxylic acid ester of 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol, which is combined with an organic carboxylic acid ester of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol and (R)-. 1-ethynyl-2-methyl-2-
After asymmetric hydrolysis to pentenol and separating and recovering them, the organic carboxylic acid ester of (S) -1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol is deacylated and (S)-
(S) and (R) -1-ethynyl-2-, characterized by obtaining 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol
Method for producing methyl-2-pentenol
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16955585A JPH0671436B2 (en) | 1985-07-30 | 1985-07-30 | Biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16955585A JPH0671436B2 (en) | 1985-07-30 | 1985-07-30 | Biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6229993A JPS6229993A (en) | 1987-02-07 |
| JPH0671436B2 true JPH0671436B2 (en) | 1994-09-14 |
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ID=15888633
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| JP16955585A Expired - Fee Related JPH0671436B2 (en) | 1985-07-30 | 1985-07-30 | Biochemical production method of optically active 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenol |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0671436B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0726338U (en) * | 1993-10-22 | 1995-05-16 | 株式会社あくと | Transparent container for storing products |
-
1985
- 1985-07-30 JP JP16955585A patent/JPH0671436B2/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0726338U (en) * | 1993-10-22 | 1995-05-16 | 株式会社あくと | Transparent container for storing products |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6229993A (en) | 1987-02-07 |
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