JPH06510981A

JPH06510981A - ４６キロダルトンｈｍｆｇ分化抗原結合特異性と第５及び第８凝固因子軽鎖ホモロジーとを有するポリペプチド

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Publication number: JPH06510981A
Application number: JP4502207A
Authority: JP
Inventors: セリアーニ、ロバート　エル．; ピーターソン、ジェリィ　アーサー; ララッカ、デイヴィッド　ジェイムズ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1990-11-01
Filing date: 1991-09-16
Publication date: 1994-12-08
Also published as: AU9057091A; WO1992007939A3; CA2095330A1; US5455031A; WO1992007939A2; EP0555397A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】４６キロダルトンＨＭＦＧ分化抗原結合特異性と第Ｖ及び第■凝固因子軽鎖ホモロジーとを有するポリペプチド技術分野本発明は、４６キロダルトン（ｋＤ）のＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性を有するポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド及びポリリボヌクレオチド、抗ポリペプチド抗体、このポリペプチドとこれをコードするＤＮＡ及びＲＮＡとを検出する方法、このポリペプチドを発現する細胞を画像化する方法、このポリペプチドに抗体が結合することによる生物流体中のポリペプチドの存在を検出する方法、このポリペプチドを発現する標的細胞への治療剤の生体内及び生体外（ｅｘ　ｖｉｖｏ）供給（ｄｅｒｉｖｅｒｙ）方法、このポリペプチドと少なくとも１つの他のポリペプチドとの融合タンパク質、このポリペプチドをコードする標識化ポリヌクレオチド及びポリリボヌクレオチド並びに相補的ＤＮＡシークエンス、標識化プローブとのハイブリダイゼーションによるＲＮＡ及びＤＮＡの検出方法、このポリペプチドによる予防接種方法、並びに、アンチセンスＤＮＡによる乳癌の治療方法に関する。

技術背景ヒト母乳脂肪球（ＨＭＦＧ）は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体の調製に用いられる抗原物質の供給源として広く使用されており、これは、乳房上皮細胞表面及びその抗原成分のプロセッシングの研究と同様に、乳癌の診断において、広範囲の使用が認められてきた。

非乳房組織による適当な吸収の後に、ヒト乳房上皮細胞の表面抗原（ＩＭＥ−Ａｇｓ）を同定することが発見されていたポリクローナル抗血清が、最初に調製された。この抗血清（抗ＨＭＥ）は、正常乳房上皮細胞及び乳癌に対して高い特異性を有した。主としてヒト母乳脂肪球の３成分が同定され、それは、各々１５０ｋＤ、７０ｋ　Ｄ、４６ｋＤの分子量を有していた。

モノクローナル抗体は、１９８０年にまず、ＨＭＦＧに対して作成された。高分子量ムチン様糖タンパク質てあり、非浸透性糖タンパク質（ｎｏｎ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　；　Ｎ　Ｐ　Ｇ　Ｐ　）ど称される、乳房上皮細胞表面のそれまで未知の成分を同定するために、これらの抗体は適用されていた。この後者の成分は、マウスにおいて特に抗原性を示した。乳房腫瘍と同様にＨＭＦＧに対して調製されたモノクローナル抗体の大部分は、このムチン複合体の異なるエピトープに対して特異性を有することか発見された。より少数では、モノクローナル抗体が、ＨＭＧＦの７０ｋ　Ｄ及び４６ｋＤに対して調製された。

ＮＰＧＰの高い免疫原性の理由は、ムチンに対するポリクローナル及びモノクローナル抗体を共に用いたｋｇｔｌｌ乳房細胞ライブラリーから選択されたｃＤＮＡクローンの特性決定により、最近、解明されてきている。これらのｃ　ＤＮＡクローンは、高い保存性を有する６０ｂｐ　（塩基対）の縦列反復の長い配列からなる。

２０アミノ酸反復の結果物は、いくつかの抗ムチン抗体に対するエピトープを含んでいる。

この反復は、ジェノミックレベルでは見かけ上、不安定である。これは、この高分子量ムチンにおける遺伝子、ＲＮＡ及びタンパク質レベルで見受けられる、観察された冬型性によって説明され得る。ムチン生成物のｃＤＮＡクローニングの関する初期の報告は、コアタンパク質が約６８ｋ　Ｄの分子量を有することを示唆した。しかし、ｍＲＮＡは約１７０ｋＤから２３０ｋ　Ｄのタンパク質を十分コードする長さであることが発見された。より最近では、よりゆるやかなデグリコシル化（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）法を用いて、コアタンパク質は約２００ｋ　Ｄの分子量を有することが同定された。

注目は、主としてその高い免疫原性のために、ＮＰＧＰムチン複合体の研究及び使用にも向けられている。従って、モノクローナル抗体の多くは、それに対して調製された。しかし、ＨＭＦＧのより小さい成分も、また、乳房上皮細胞の表面において重要な分子であると思われる。それらは、抗ＨＭＥ抗体によって証明されるような乳房特異性を有している。

４６ｋＤ及び７０ｋＤのＨＭＥ抗原は、乳癌患者の血清において認められ、従って、血清アッセイにおける乳癌のマーカーとして使用することができる。更に、この７０ｋＤ成分は、無傷（ｉｎｔａｃｔ）のムチン複合体と共に精製されることが見出され、ジスルフィド結合によってＮＰＧＰムチン複合体と結合していることが報告されており、この表面ムチン複合体のリンカ−となり得るタンパク質にさせている。

この系のより小さい成分に対するモノクローナル抗体は殆ど調製されていない。

ムチン分子は内部の反復構造のために、見かけ上、より抗原性である。ＨＭＦＧのこの４６ｋ　Ｄ成分は、乳癌患者の血清中に認められる。この４６ｋＤ抗原に対するモノクローナル抗体を用いて、循環性免疫複合体が乳癌患者において発見され、この循環性４６ｋＤ抗原における増加は、腫瘍負荷の増加と関連していると認められた。ムチン糖タンパク質の構造は、最近ｃＤＮＡクローニングによって同定され、部分的シーフェンスが７０ｋ　Ｄ抗原について報告されている。

しかし、４６ｋＤ抗原の構造及びその機能については、正常上皮細胞膜、乳汁形成及び乳房腫瘍発生において、他の膜成分と共に、ごくわずかしか知られていない。現在までに、約４６ｋＤポリペプチド成分についてのシーフェンスも、それをコートするＤＮＡ及びＲＮＡについても、知られていない。

発明の開示本発明は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチドに関する。

本発明は、また、融合タンパク質に関し、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド：及びこれに結合する二次抗原ポリペプチド、を含む。

更に本発明の一部は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片に対して、特異性を有する抗体である。

また、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片の、生物試料における存在を検出する方法が、ここで提供され、これは、このポリペプチドを含むと思われる生物試料を提供すること、抗体−ポリペプチド複合体を形成するために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片に対して特異性を有する抗体を、ポリペプチドの結合に有効な量で、これに添加すること、及びこれらの間で形成された、如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む。

また、本発明の一部は、上皮細胞の生物試料における存在を判定する方法であり、これは、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を運ぶ上皮起源の細胞を含むと思われる、生物試料を提供すること。

抗体−細胞ポリベブチト複合体を形成するために有効な条件下で、上述したポリペプチドに対する特異性を有する抗体を、ポリペプチドの結合に有効な量で、ニオ１に添加すること、及び、これらの間で形成された、如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む。

また、被検者において、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現する細胞を、生体内にて画像化する方法が、ここで提供され、この方法は、抗体−細胞ポリペプチト複合体を形成するために、このポリペプチド又はこれの機能的断片を発現している細胞を有すると思われる被検者の体内領域へ、供給するために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する抗体を、ポリペプチド又はこれの機能的断片の結合に有効な量で、被検者に投与すること。

このポリペプチドに対する結合部位よりも他の部位でこの抗体に結合することができる検出可能な標識を、その被検者に投与すること：及び形成された如何なる複合体とも付随した標識の被検者の身体における存在を検また本発明の一部は、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片によって、被検者に生体内にて予防接種する方法であり、この方法は、ポリペプチド、これの機能的断片又はこのポリペプチド又はこれの機能的断片を運ぶ細胞に対して、被検者に予防接種するために効果的な量及び条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を、被検者に対して投与することを含む。

更に他の方法は、生物試料において、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原に対して特異性を有する抗体の存在を検出するために、ここに提供され、これは、この抗体を含むと思われる試料を提供すること：抗体−ボリベプチト複合体を形成するために効果的な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩ［ｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を、抗体の結合に有効な量で、これに添加すること：及びこれらの間で形成された如何なる複合体の存在をも判定することを含む。

本発明は、また、生物試料において、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原に対して特異性を有する抗体の存在を検出する第２の方法に関し、これは、この抗体を含むと思われる試料を提供すること：抗体−融合タンバク質複合体を形成するために有効な条件下で、本発明の融合タンパク質を、抗体の結合に有効な量で、これに添加すること：抗体−融合タンバク質−抗体複合体を形成するために有効な条件下で、抗二次ポリペプチド抗体を、二次ポリペプチドの結合に有効な量で、これに添加すること　及びこれらの間で形成された、如何なる抗体−融合タンパク質−抗体複合体の存在をも判定することを含む。

また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ１１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を発現している、患者の標的細胞へ、治療剤を生体内にて供給する方法がここで提供され、この方法は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片に対して特異性を有する抗体に、そのポリペプチドの結合部位よりも他の部位で、治療剤を結合すること；及びこの細胞の周囲に到達するために有効な条件下で、抗体結合化治療剤を、治療的に有効な量で、標的細胞を運ぶと思われる被検者に投与すること：及び細胞のポリペプチドに結合するため、抗体に治療剤を運ばせることを含む。

更に、本発明の一部は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を発現する標的細胞へ、治療剤を生体外にて供給する方法であり、この方法は、被検者から標的細胞を含むと思われる生物試料を得ること：そのポリペプチドの結合部位よりも他の部位で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片に対して特異性を有する抗体に、治療剤を結合すること：抗体−細胞ポリペブチト複合体の形成を促進させるために有効な条件下で、試料に、抗体結合化治療剤を添加すること、及び被検者にこの試料を戻すことを含む。

本発明は、また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコートするポリヌクレオチドに関する。

また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするポリリボヌクレオチドも、ここで提供される。

また、本発明の一部は、本発明の融合タンパク質又はこれの機能的断片に結合する抗体をコードする、ポリヌクレオチド及びポリリボヌクレオチドである。

本発明は、また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はこれの機能的断片に相補的なりＮＡシークエンスに関する。

本発明は、また、試料中において、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするポリヌクレオチドシーフェンスの存在を検出する方法に関し、この方法は、ポリヌクレオチドを含むと思われる試料を提供すること；この試料中に存在する二本鎖ポリヌクレオチドを融解すること：試料中に存在し、少なくとも１５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるポリヌクレオチドともハイブリダイゼーションするために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ１１１固因子の少なくとも１つの軽鎖又はこれの機能的断片に対してホモロジーを有するポリペプチドをコートするポリヌクレオチドに対して相補的であり、ハイブリダイゼーションに有効な量のＤＮＡシークエンスを、標識化形態において、これに添加すること；及びこのＤＮＡ−相補的ポリヌクレオチドハイブリッドの存在を検出することを含む。

試料中において、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするＲＮＡシークエンスの存在を検出する方法もまた、本発明により提供され、この方法は、このＲＮＡを含むと思われる試料を提供すること：試料中に存在し、少なくとも１５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるＲＮＡともハイブリダイゼーションするために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［Ｉ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコートするポリヌクレオチドを、標識形態において、ハイブリダイゼーションに有効な量で、これに添加すること；及びこのポリヌクレオチド−ＲＮＡハイブリッドの存在を検出することを含む。

試料中において、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び＊ＶＩ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするＲＮＡシークエンスの存在を検出する方法も、また包含され、この方法は、このＲＮＡを含むと思われる試料を提供すること：少なくとも１５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるＲＮＡともハイブリダイゼーションするために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［Ｉ＋凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするポリリボヌクレオチドに相補的なポリリボヌクレオチドを、標識形態において、ハイブリダイゼーションするために有効な量で、これに添加すること；及びこの相補的ポリリボヌクレオチド−ＲＮＡハイブリッドの存在を検出することを含む。

試料中において、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコードするＤＮＡシークエンスの存在を検出する方法も、またここで提供され、この方法は、このＤＮＡを含むと思われる試料を提供すること：試料中において、二本鎖ポリヌクレオチドを融解すること：試料中に存在し、少なくとも１５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるＤＮＡともハイブリダイゼーションするために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［Ｉ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片をコートするＲＮＡシークエンスを、標識形態において、ハイブリダイゼーションするために有効な量で、これに添加すること：及び試料中において、このＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドの存在を検出することを含む。

更に、本発明の一部は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコードする約■５から２０００塩基のポリヌクレオチド又はこれの機能的断片に対する、アンチセンスシーフェンスを含むＤＮＡセグメントである。

そのうえ、乳癌の治療を必要とする患者において、治療する方法であり、この方法は、上述のアンチセンスＤＮＡを治療的に有効な量で含む配合物を、この患者に投与することを含む。

本発明は、また、免疫アッセイキットに関し、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチド又はこれの機能的断片に対して特異性を育するモノクローナル抗体：及び抗−抗体免疫グロブリン、を別々の容器に含む。

更に、本発明の一部は、抗体検出キットであり、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩ［ｒ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチド又はこれの機能的断片；及び抗−抗体免疫グロブリン、を別々の容器に含む。

融合タンパク質キットも、またここで提供され、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片と、これに結合されるこれの二次抗体的ポリペプチド又は断片とを含む融合タンパク質。

抗二次ポリペブチトボリクローナル又はモノクローナル抗体：及び抗−抗体免疫グロブリン、を別々の容器に含む。

また、抗乳癌治療キットも、本発明により包含され、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩｌ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有し提供されたポリペプチドに対して、特異性を有するモノクローナル抗体、及び免疫毒素及び放射性核種からなる群より選ばれた抗癌治療剤、を別々の容器中に含む。

本発明のより完全な理解及びこれの意図された多くの利点は、添付の図と関連して考慮した場合に、後述の詳細な説明を参照してより理解され、たやすく認められるであろう。

図面の簡単な説明図は、ヒト癌細胞株におけるＢＡ４６−．１特異的ｍＲＮＡの発現を示している。

全ＲＮＡ　（２０μｇ／レーン）は、　１．４％アガロースゲルに流し、プロットしてＢＡ４６−１ｃＤＮＡクローンから作成された２ｔｐ標識化ＲＮＡとハイブリダイゼーションした。他のレーンにおける試料の内容は、次の通りである：ａ）Ａ５４９（肺）ｌ　ｂ）ＢＴ２０　（乳房）；　ｃ）ＥＬＬＧ　（乳房）；ｄ）Ｒａｊｉ（リンパ細胞）＋　ｅ）ＳＫＢＲ３（乳房）：　ｆ）ＳＫＯＶ３　（卵巣）；ｇ）ＭＤＡ−ＭＢ−３６１（乳房）；　ｈ）ＭＤＡ−ＭＢ−３３１（乳房）；　１）ＨｅＬａ　（子宮類）＋　ｊ）Ｈ３５７８Ｔ　（乳房）；ｋ）ＨＴ２９（結腸）；　Ｉ）ＰａｎＣ１（膵１１）：ｍ）〜ｆＣＦ７（乳房）。露光は、増感紙を用いて１６時間であった。

その他、現発明の利点及び特色は、後述の考察により当業者には明らかとなるであろう。

ｉ＆善の発明実施態様本発明は、乳癌の検出、診断及び治療に有用な技術の改良を希求することから生した。

本研究は、ＨＭＦＧ系における約４６ｋＤのポリペプチド成分の一部分をコードするｃＤＮＡクローン（ＢＡ４６−１）の単離、及びこのＨＭＦＧ系における約４６ｋＤ成分と結合するモノクローナル抗体を必要とする。β−ガラクトシダーゼをも含む融合タンパク質の部分をコードし、ＢＡ４６−１　ラムダ／ｇｔｌｌ　クローンから作成された、ＢＡ４６−１　ｃＤＮＡに対して、これらのモノクローナル抗体は特異性を有し、これと結合する。

ＢＡ４６−１　ｃＤＮＡのヌクレオチド及びこれから推定されたアミノ酸シークエンスは、下記実施例７の表１に示される。この部分的シーフェンスは、約２５ｋ　Ｄの理論的分子量を有する約２１７アミノ酸の長さであり、完全なタンパク質のＣ末端を表している。このシーフェンスでは、Ｎ一連結グリコシル化反応が可能な部位が４個存在する。このシーフェンスは、アスパラギン及びロイシンに富む。Ｃ末端から始まり、このヌクレオチドシーフェンスは、切断とポリアデニル化のためのポリ（Ａ）に先行するＡＡＴＡＴＡコンセンサスシークエンスを含むｍＲＮＡの３′末端まで伸びている。

ＦＳＴＮＳＣＡＮ　（ＰＣＧＥＮＥ）を用いたＥＭＢＬデータベースにおけるシーフェンスとこのヌクレオチドシーフェンスとの比較は、ヒト血清第Ｖ及び第Ｖｌ１１因子並びにプロティンＣとの広範なホモロジーをもっことを明らかにした。しかし、推定されたタンパク質シークエンスは第Ｖ及び第Ｖｌ１１因子とのみ同一性を共有し、ヌクレオチドルベルのホモロジーは介在シーフェンスにあるものであったため、プロティンＣとは同一性を共存していなかった（表２参照）。

ＢＡ４６は第Ｖ因子と約４３％の同一性を、第Ｖ［ＩＩ因子とは約３８％の同一性を有する。表２に示した第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ因子領域は約４７％の同一性を共有する。

約４６ｋ　Ｄのタンパク質の推定されるアミノ酸シークエンスの分析結果は、グリコリル化タンパク質のものと一致した。しかしこのタンパク質の機能は不明のままである。この凝固因子とのホモロジーは、第Ｖｌ１１因子の軽鎖のＣＩ、Ｃ２領域に認められ得る。第Ｖ［１１因子の軽鎖のこの領域に結合するヒトの抗体は、リン脂質どの相互反応を妨げることによってこの因子を抑制する。第ＶＩＩ［因子のこの領域はり゛／脂賀の結合に関係しているので、約４６ｋＤのタンパク質の相同領域が同様な役割を果を二し得るということは十分にあり得る。

また他の異なるタンパク質における共有ドメインの出現は、エクソンシ？ツフリングによるものかもしわない。このＣ末端は、約４６ｋＤのタンパク質の新規な ′ア′／カー′シークエンスとして機能し得、また、成長する母乳脂肪滴表面に見いだされるリン脂質へのムチン及び／又は細胞膜の結合に関係し得る。あるいは１、−の相同なンークエンスは、形質膜表面でのムチン複合体のアッセンブリに関係し得る。

本明細書で提供される一重鎖ＲＮＡプローブは、ｃＤＮＡ挿入部に見いだされるＯＲＦと相補的である。すなわち、ラムダ／ｇｔ１１ベクター中のβ−ガラクトシダーゼＤＮＡシークエンスとインフレームである。相補鎖プローブのみが、上皮細胞株の特異的な２．２ｋｂ（キロ塩基）ｍＲＮＡに結合するので、このことは、このＯＲＦがＢＡ４６−１遺伝子のセンス鎖を表していること示す。

ラムダ／ｇｔｌｌ　クローンにより発現されるＢＡ４６−１のβ−ガラクトシダーゼ融合タンパク質は、乳癌患者から得られる血清において、約４６ｋＤのＨＭＦＧポリペプチド成分又はその断片の存在をアッセイするために有用である。この融合タンパク質は、また、二次生成モノクローナル及びポリクローナル抗体生成のための免疫原としても有用である。これらの抗体は、他の出願では、この抗原の組織分布を及びそのｍＲＮＡの合成とどのように関連しているかを更に研究するために、改良免疫アッセイを提供するために、並びに、約４６ｋＤの抗原ポリペプチドを精製し、性状を調べるために用いられ得る。

約４６ｋＤのタンパク質に対して生成されたいくつかのモノクローナル抗体は、ＨＭＦＣ膜及び乳癌膜物質における放射性免疫結合アッセイによって、この分子に存在する各エピトープを検出することができる。これらのモノクローナル抗体は、正常な乳房組織も、他の正常な試験された組織も免疫組織学的に染色しない。

しかし、それらのいくつかは、４９の乳癌のうち２４を弱く染め、試験された他のすへての癌では陰性である。いくつかの乳癌が、約４６ｋＤの抗原成分に対する非常に高いレベルのｍＲＮＡをもつので、融合タンパク質に対して作成された抗体は、約４６ｋ　Ｄの抗原成分を免疫組織病理学的に検出することに対して、異なった及びおそらくは改良さねた特異性を有することが可能であろう。

本研究において、ｅＤＮＡを用いたノザンプロットは、この抗原のｍＲＮＡが、調へた９の乳癌細胞株のうち８に、及び非乳癌の癌細胞株のいくつかに存在することを明瞭に示した。しかし、この抗原のＲＮＡは、リンパ系細胞株（Ｒａｊｉ）においてはるかに低いレベルで存在する。癌細胞株において検出される約２．２ｋｂのＲＮＡの発現量には１著な違いが観察される。肺細胞（Ａ５４９）　、卵巣細胞（ＳＫＯＶ３）及び２つの乳房細胞株（Ｅｌｌ−Ｇ及びＨ３５７８Ｔ）は、他ノ癌細胞株よりもこの転写物をはるかに大量に蓄積させている。特定の遺伝子、例えば乳癌及び他の癌におけるＨｅｒ　２／ｎｅｕ及びＥＧＦレセプターの過剰発現は予後と相関性がある。癌における約４６ｋＤタンパク質の過剰発現は、発症と非常によい相関性を示すかもしれない。約４６ｋＤの抗原成分は、従って、上皮特異性を示す。しかしこれは、この分子の特定のエピトープが、より強い乳房特異性を有しないだろうという、ことを示すものではない。のみならず、悪性度に関連する多くの細胞抗原の発現調節逸脱が、しばしば存在することが知られているので、非乳房の癌におけるこの抗原のｍＲＮＡの発現は、この抗原が、実際に発現されること、又はこれらの上皮性腫瘍の細胞に対する相当物である正常上皮細胞において、この抗原が見いだされることを、意味するものではない。

この分子のｃＤＮＡの一部分をクローニングすることは、そのコード化ポリペプチドシークエンスを更に推定することを可能とした。更にまた、既知のアミノ酸シークエンスからの組み換えタンパク質又は合成ペプチドの合成も、このポリペプチドの特異的エピトープに対する新生成モノクローナル抗体の調製も可能となった。より強い乳房特異性をもつように選択し得る融合タンパク質に対して、ポリクローナル及びモノクローナル抗体を更に調製することが、また、本発明の融合ＤＮＡ及び融合タンパク質によって可能である。実際、ＨＭＦＧ膜系は、正常乳房上皮細胞の頂端表面の精製部分を正確に表している。従って、ＨＭＦＣ膜の主要な分子種である約４６ｋＤ成分は、また、正常乳房上皮細胞の頂端表面の主要な及び、おそらくは重要な成分を表している。

ＨＭＦＣ系の約４６ｋＤポリペプチド成分のｃＤＮＡクローンは、その対応するポリペプチドのアミノ酸シークエンスの推定を可能にした。これらｃＤＮＡクローンは、また、新規生成モノクローナル抗体の調製も可能にした。この抗体は、乳癌の免疫療法に使用するために十分な特異性、特異性の組織学的検査並びに診断及び予後判定能のための免疫組織病理学上の十分な染色性能、更に乳癌診断用及び乳癌初期検出のためのスクリーニング用血清検査の構築だめの乳癌患者血清における、約４６ｋＤのＨＭＦＣ；ペプチド成分又はその機能的断片の同定能を有している。

従って、本発明は、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＣ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及びＶｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを存するポリペプチドを提供する。ある好ましい具体例では、このポリペプチドは、約４６ｋＤのＨＭ　Ｆ　Ｇ抗原分子の生物活性を有し、更により好ましくは、このペプチドは、４６ｋＤのＨＭＦＣ分化抗原又はこれの抗体結合機能的断片を含む。

本発明のポリペプチドは、約９０から５００アミノ酸の長さで、好ましくは約２０から４５０アミノ酸の長さて、更により好ましくは、約２２０から４２０アミノ酸の長さとし得る。

他の好ましい具体例では、このポリペプチドは、表２に示すアミノ酸シークエンス又はこれの抗体結合機能的断片を有し、好ましくは約５から１００アミノ酸の長さて、より好ましくは１５から５０アミノ酸の長さである。特に好ましいものは、抗４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原抗体によって認識される特異的エピトープに対応するアミノ酸シークエンスである。

また本明細書において、医薬組成物が提供され、これは、抗体の結合に有効な量の上記のポリペプチド：及び医薬的に許容できる担体を含む。

この医薬組成物は、ヒトを含む動物に投与することを目的とするものである。

好ましい用量は、好ましくは約０．１からｉｏｏｏｍ　ｇ、より好ましくは１０から５００ｍ　ｇのポリペプチドを含む。医薬的に許容できるいずれの担体も、この組成物の調製に用いることができる。適切な担体及び他の添加剤の例は、特に、香料、保存剤、着色剤、食塩水のような塩類溶液、油類又は固形物である。

しかし、このポリペプチドを加水分解しない如何なる液体又は固体の担体もまた好適である。この医薬組成物は、ポリペプチドそれ自体と同様に、冷蔵及び／又は冷凍下で最もよく保存できる。ポリペプチド及び医薬組成物は、目的場所への輸送のために真空乾燥し、滅菌容器に詰めることもできる。組成物は、約０．０１−９９．９９重量％、好ましくは約０．１−１０重量％のポリペプチドを含み、残りは担体であってもよい。

また本明細書において、融合タンパク質が提供され、これは、上記のポリペプチド：及び本発明のポリペプチドに作用的に連結若しくは結合された二次抗原ポリペプチド又はその抗体結合機能的断片を含んでいる。

融合タンパク質は、一般には、二次抗原ポリペプチドの抗体結合機能的断片に結合された、本発明のポリペプチドの抗体結合機能的断片から構成される。この本発明のポリペプチド断片及びこの二次ポリペプチド断片は、それぞれ、約６から７００アミノ酸の長さ及びＩＯから１５００アミノ酸の長さで、好ましくは、それぞれ約１５から１００アミノ酸の長さ及び２００から４００アミノ酸の長さである。しかし、それらの抗体結合機能が保存されている限り、これより大きい又は小さい、他のサイズのポリペプチド及び／又はその断片も用いることができる。

当業界で既知の哺乳類による抗体形成を誘発する抗原として機能する限り、如何なるポリペプチドも二次抗原ポリペプチドとして好適である。二次抗原ポリペプチドは、同定に有用及び／又は融合タンパク質に有用である、その他の特性に基づいて更に選択され得る。例としては、二次抗原ポリペプチドは、例えばβ−ガラクトシダーゼ又はその機能的断片のようなタンパク質とし得る。しかし、他の如何なる二次抗原ポリペプチドも、それに対する抗体が得られ得る限り用いられ得る。例えば、バクチリオフ了−ジＴ７の遺伝子ｌＯも用いることができる。

本発明のポリペプチド及び融合タンパク質は共に、当業界で既知の方法によって調製され得る。例えば、ポリペプチドは合成により調製することができ、またそれをコードし且つベクターにクローニングすることができ、発現可能な宿主に挿入することができるＤＮＡフラグメントを、発現させることによって生成することもてきる（マルストン（Ｍａｒｓｔｏｎ）、　Ｆ、　Ａ、　、ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｐｒｅｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、プローブｙ　−（Ｇｌｏｖｅｒ）、　Ｐ編、ＩＲＬブレス社刊、ロンドン、３巻、５９−８８（＋９８７）　）。融合タンパク質は、２つのポリペプチドのアミノ酸シークエンスをコートするシーフェンスを含む組み換えＤＮＡを提供することによって調製され得る。このＤＮＡはベクターにクローニングして、宿主中で発現させ得る。

また、本発明の一部は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体との結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドに対して特異性を有する抗体である。

抗体を得る方法は当業界で既知であり、ここに記載する必要はない。特に好ましいものは、モノクローナル抗体である。特異的なポリペプチドに対するモノクローナル抗体の調製方法もまた、当業界で既知であり、ここに詳細に記載する必要はない。

生物学的に純粋なポリペプチド又はその断片に対して得られた抗体は、このポリペプチドに対する親和性及び／又は特異性が増強されている。典型的には、親和性は約１０−８から１０−５で、ある場合には１０−８よりも高い。

本発明の特に好ましい具体例では、この抗体は、第ＶＩＩ［凝固因子（軽鎖）のＣ１及び／又はＣ２領域に対する親和性もまた有する。また別の好ましい具体例は、本発明の抗体がそのＦａｂフラグメントである場合であり、その保存された結合能力を有する。更に、好ましいものは、抗体の単−鎖又は上記の機能をもっＦａｂフラグメント及びその機能的断片である。

また本明細書は医薬組成物が提供され、これは、約４６ｋＤの分化抗原の抗体結合特異性及び／又はＨＭＦＧ系の第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを育する、提供されたポリペプチドに対して、約１０ −１０から１０−５の親和性を有する、ポリペプチドの結合に有効な量の抗体：及び医薬的に許容できる担体を含む。

典型的には、抗体は、約０．００１から１０．０００ｍ　ｇ　、より好ましくは１０から５００ｍ　ｇの量で提供される。上記に示したように、医薬的に許容できる如何なる担体も用いることができる。更に、他の成分、例えば、特に放射性核種、化学療法剤、インターフェロン、例えばリシンのＡ鎖、アブリンのＡ鎖のような毒物、食塩水、保存料、香料、着色剤並びに緩衝剤を、当業界で知られているように、この組成物に含むことができる。医薬組成物の調製は、加水分解の生じない条件下で、ポリペプチド又は抗体を医薬的に許容できる担体と共に混合し、その後真空乾燥して、滅菌容器に詰めるか又は滅菌溶液として提供することによって、当業界で知られているように実施することができる。

また本発明の部分は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するペプチド又はその機能的断片の、生物試料における存在を検出する方法であり、この方法は、ポリペプチドを含むと思われる生物試料を提供すること；抗体−ポリペプチド複合体を形成するために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ１１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドに対して、特異性を有する抗体を、ポリペプチドの結合に有効な量でそれに添加すること：及び形成された如何なる複合体の存在をも判定することを含む。

この方法は、例えば動物細胞、細胞抽出物又は体液のような生物試料において、このポリペプチドの存在を検出するために好適である。典型的には、如何なる体液もこの中に含まれる。例えば、血清、血漿、尿、膨水、組織生検、注射針吸入物である。

試料は、例えば、金属、非特異的タンパク質、脂肪、核酸及び同様物の干渉を避けるため、予め処理しておいてもよい。

また生物試料は、ポリペプチド濃度が約０．０００１から１０ｍｇ／ｍ１、より好ましくは、約０．００１からＯ，Ｉｍｇ／ｍｌの範囲にあるように希釈してもよい。抗体は、試料に対して約０．０００１から１．Ｏｍｇ／ｍｌの量で、より好ましくは、試料に対して約０００１からＯ，Ｉ　ｍｇ／ｍＩの量で、当業界で知られたように添加され得る。

アッセイについての他の条件は以下のようにすることができる。試料を均質化し、粒子状物質及び脂肪性物質を除去するために遠心してもよい。ディタージ工ントは、膜を溶解し、脂肪性物質を可溶化し、バックグランドを下げるために添加され得る。更に、抗体の非特異的結合を減少させるために、例えばウシ血清アルブミンのようなキャリアタンパク質を、更に干渉性二価金属イオンを除去するためにキレート剤を加えてもよい。

抗体とポリペプチドとの間で形成される如何なる複合体の存在の判定は、当業界で既知の種々の方法によって行われ得る。例示すれば、標識された抗体−ポリペプチド二重複合体を形成するための、標識化抗−抗体免疫グロブリンの追添加である。標識は放射性標識、蛍光標識、酵素標識又は、後でアビジン、ストレプトアビジン若しくは磁気ビーズの結合体として検出されるようにビオチンでもよい。このステップの後、複合体に結合した標識量を、当業界で既知の方法によって算出することができる。

更に本発明では、上皮細胞の生物試料中における存在を判定する方法が提供され、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はこれの機能的断片を運ぶ上皮起源の細胞を含むと思われる生物試料を提供すること。

抗体−細胞ポリペプチド複合体を形成するために有効な条件下で、約４６ｋＤ分化抗原の抗体結合特異性及び／又はＨＭＦＧ系の第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを存するポリペプチドに対して、特異性を有する抗体を、ポリペプチドの結合に有効な量で、これに添加すること：及び形成された如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む。

この方法は、例えば骨髄試料のような生物試料に対して特に好適である。しかし、その他の起源の試料についても実施し得る。このステップは、一般には、上記に記載したように実施でき、上皮細胞の存在の判定は、既に記載したように抗体と共に形成された如何なる複合体の、定性的又は定量的のいずれかの同定によって行うことができる。

またこの検出は、約４６ｋＤのタンパク質をコードするリボ核酸（ＲＮＡ）の存在を、表１に示したようなシーフェンスに基づいた核酸プローブと、ＰＣＲとして知られている当業界で既知の方法（エーリッヒ（Ｅｒｌｉｃｈ）、Ｈ，Ａ、　ＰＣＲｔｅｃｈｎ。

１ｏｇｙ：　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ＤＮＡ　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　１９８９．　Xトックトンプレス（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ）社刊）とを用いてアッセイすることによって行うこともできる。

またここで提供されるものは、被検者において、ＨＭＦＧ系の約４６ｋＤ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを存するポリペプチドを発現している細胞を、生体内にて画像化する方法であり、この方法は、抗体−細胞ポリペプチド複合体を形成するために、このポリペプチドを発現している細胞を有すると思われる被験者の体内領域へ、供給するために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドに対して特異性を有する抗体を、ポリペプチドの結合に有効な量で、被検者に投与すること：このポリペプチドの結合部位よりも他の部位で抗体と結合することができる検出可能な標識を、その被験者に投与すること：及び被験者の体内に形成された、如何なる複合体にも付随する標識の存在を検出す抗体の投与は、約０．５から５０ｍｇ／ｍ１．より好ましくは約５から２０ｍｇ／ｍｌの濃度で実施することができる。総量が約ｌＯから５０ｍ１の抗体組成物は、如何なる一時にも投与され得る。投薬方法は単回投与でもよく、また、被験者の細胞中のポリペプチド又はその機能的断片の存在を継続的に抑制するために、継続して抗体を投与することもできる。従って、抗体組成物の反復投与もまた考慮される。

抗体は、上記に記載したように医薬組成物として、又は適切と思われるその他の如何なる形懇においても投与することができる。抗体の投与は、特に静脈内、腹腔内、洞内、リンパ管内、腫瘍内及び筋肉内投与により実施され得る。適切なその他のルートも、この抗体のペプチド結合を加水分解しないものであれば用いられ得る。

検出可能な標識の投与は、標識された抗−抗体免疫グロブリン又はそれの結合機能的断片を提供し、その後、この複合体に結合した標識の量をめることによって実施さね得る。これらの手技は当業界で既知であり、ここで更に詳細に記載する必要はない。

更に本明細書で提供されるものは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原に対する親和性を有する抗体の、生物試料における存在を検出する方法であり、この方法は、抗体を含むと思われる試料を提供すること：抗体−細胞ポリペプチド複合体が形成されるために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを、抗体の結合に有効な量で、これに添加すること；及び形成された如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む。

上記に記載した方法は、哺乳類の体内にそのようなポリペプチドが存在する結果として、生成された哺乳類における抗体の存在を検出するために、本発明のポリペプチドを利用する。試料は、試料の他のタンパク質及び／又は成分の干渉を除外するために、上記に記載したように処理することができる。血液の場合は、まず血清を得、それから、以下のように血清を処理する。

非特異反応を抑制するために、正常ヒト又はウシ血清は添加されてもよく、及び／又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が用いられ得る。

ポリペプチドは、試料当たり約ｏ、ｏｏｏｏｔから１．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０００１から０．Ｉｍｇ／ｍｌの量で試料に添加される。しかしこの量販外でも適切である限り用いることができる。試料における抗体の量は希釈によって調節することができる。試料における抗体の至適範囲は、約０．００００１から０．１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０００１から０．０Ｉｍｇ／ｍ＋である。しかし他の量も用いられ得る。この方法のステップは、上述のように実施され、抗体−ポリペプチド複合体の存在の判定が含まれる。アッセイ条件、例えばｐＨ１温度などは、一般に当業界で知られているようなものである。

試料において約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原に対する親和性を有する抗体の、存在を検出する方法も、また提供され、この方法は、抗体を含むと思われる試料を提供する：抗体−融合タンバク質複合体が形成されるために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［Ｉ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はそれの機能的断片と、二次抗原ポリペプチド又はそれの抗体結合機能的断片とを互いに結合して含む融合タンパク質を、抗体の結合に有効な量で、これに添加すること；抗体−融合タンパク質−抗体複合体が形成されるために有効な条件下で、抗二次ポリペプチド抗体を、二次ポリペプチドの結合に有効な量で、これに添加すること：及び如何なる抗体−融合タンパク質−抗体複合体の存在をも判定すること、を含む。

先に記載した方法の場合のように、この方法も、好ましくはモノクローナル抗体を用いて実施される。試料に添加される抗体の量は、好ましくは試料当たりｏ、ｏｏｏｏｔからＯ，１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくはｏ、ｏｏｔから０．０１ｍｇ／ｍｌである。

しかし他の量も用られ得る。先の例のように、試料は、融合タンパク質の添加の前に処理し得る。１例としては、試料を希釈して、干渉成分を除去することである。これらのステップは、当業界で知られているように実施され、ここで更に詳細に記載する必要はない。

またここで提供されるものは、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片で、被験者に生体内にて予防接種する方法であり、この方法は、予防接種される被験者に、上述の４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片を、このポリペプチド、その機能的断片、又はこのポリペプチド若しくはその機能的断片を運ぶ細胞に対して、被験者に予防接種させるために有効な量及び条件下で投与することを含む。この生体内での方法は、上述の特性をもつポリペプチド又はそれを運ぶ細胞に対して、癌患者に予防接種するために用いられ得る。このようにして、このポリペプチド又はこのポリペプチドを運ぶ細胞に対する免疫反応の惹起を患者に誘発させる。

予防接種用ポリペプチドは、約０．１から１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約２から５０ｍｇ／ｍ＋の量で被験者に投与され得る。典型的には、いずれの用量も約０゜１から５０ｍ１、より好ましくは２から１０ｍ１の予防接種用ポリペプチドから成るであろう。予防接種剤は、約６カ月まで、時には１年を越える期間、継続的に投与することができる。より長い期間も、本発明の予防接種に含まれる。

また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している、患者体内の標的細胞に、治療用薬剤を生体内にて供給する方法が、ここで提供され、この方法は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩ［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチドに対して特異性を有するモノクローナル抗体に、ポリペプチド結合部位よりも他の部位で治療剤を結合させること：この細胞の周囲にこの薬剤を供給するために有効な条件下で、抗体結合化治療薬剤を治療的に有効な量で、標的細胞を運ぶと思われる被験者に、投与すること、及びこの治療薬を運ぶ抗体に、この細胞に薬剤の効果を及ぼさせるため、細胞のポリペプチドと結合させること、を含む。

この生体内での方法は、上皮細胞の癌、例えば乳癌に罹患している癌患者の治療に用いられ得る。

この治療剤は、当業界で既知のいずれの抗癌剤でもよい。治療薬剤の例は、放射性核種、化学療法剤、例えばリシンのＡ鎖、アブリンのＡｉＪＩのような毒物等である。しかし、他のものも用いることができる。治療剤は、当業界で既知の方法で抗体に結合させることができる。より具体的には、＋３１１のような放射性核種か、チロシンのようなアミノ酸の酸化によって、又はキレート剤を介して付加された０Ｙによって抗体に結合され、この結合物は、ヒト乳癌をもつヒトに静注又は腹腔内注射により投与され、従ってこの腫瘍の増殖は抑制される（例えばマウスについては・セリア−＝（Ｃｅｒｉａｎｉ）ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　（１９８８）　４８．４６６４−４６７２）。

抗体結合化治療剤は、約１から１００ｍｇ組成物／ｍ＋、より好ましくは約２から２０ｍｇ組成物／ｍｌの量で被験者に投与され得る。典型的には、いずれの用量も、抗体結合化治療剤含有組成物の約１から５０ｍ１、より好ましくは約２から１０ｍ１から成るものであろう。治療剤は、単回投与の抗体結合薬剤として投与することもでき、又は、約６カ月までの期間、及び時には１年を越える期間にわたって継続的に投与することもできる。より長い期間も本発明の治療に含まれる。

また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ｖｏｉ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している標的細胞に、治療剤を生体外にて供給させる方法も、ここで提供され、この方法は、標的細胞を含むと思われる生物試料を被験者から得ること；約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ｖｒｔ＋凝固因子の少な（とも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチドに対して、特異性を有するモノクローナル抗体に、ポリペプチド結合部位よりも他の部位で治療剤を結合させること：抗体−細胞ポリペプチド複合体の形成を促進させるために有効な条件下で、抗体結合化治療剤を、試料に添加すること；この細胞に薬剤の効果を及ぼさせること：及びこの被験者にこの試料を戻すこと、を含む。

被験者に試料を戻す前に、非結合抗体も、細胞溶解を惹起する補体の存在下で試料に添加されてもよい。

一般に、この方法のステップは、特に生物学的試料の調製、抗体への治療薬剤の結合と同様、試料への抗体結合化治療剤の添加については、上記に記載したように実施することができる。被験者に試料を戻すことに関しては、当業界で既知の方法によって行うことができる。例えば、既に処理を施した試料は、静脈内、洞内、腹腔内、腫瘍内ルートにより無菌的形態で被験者に戻すことができる。しかし、当業界で既知の他のルートもまた用いられ得る。

また、本発明の約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその結合機能的断片をコードするポリヌクレオチドも、ここで提供される。このポリヌクレオチドは、このポリヌクレオチドのコード鎖を含む二本鎖ＤＮＡ又は−木繊ＤＮＡのいずれかとして提供される。このポリヌクレオチドの断片は、約１５から２０００塩基、より好ましくは約３０から３００塩基からなる。

また、上述のポリヌクレオチドのコード鎖に相補的なりＮＡシークエンスも、ここで提供される。

上述の二本鎖及び−木繊のＤＮＡは、共に標識された形態でも提供される。標識化は放射性元素、例えば′！Ｐ、１４Ｃ，”Ｈ等を用いて、当業界で知られた通りに実施され得る。しかし他の放射性核種も用いられ得る。

特に好ましいものは、本明細書の表１に示したＤＮＡシークエンスを有するポリヌクレオチド、又はその断片若しくはＤＮＡシークエンスであって、約９から２０００塩基、より好ましくは約１８から２００塩基を含むものである。しかし他のサイズの断片も用いられ得、また本明細書の範囲に含まれる。

また本発明の一部をなすものは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び＠Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードするポリリボヌクレオチドである。

これは、このポリペプチドに対するコードＲＮＡである。

このポリリボヌクレオチドシーフェンスは、約９から３０００塩基のサイズ、より好ましくは約１８から３００塩基の長さの断片であり得る。しかし他の断片サイズもこの中に含まれる。

また別に本発明の部分をなすものは、上記のポリリボヌクレオチドのシーフェンスに対して相補的なシーフェンスを有するポリリボヌクレオチドの非コード鎖である。このポリリボヌクレオチドシーフェンスは、コード鎖ＲＮＡ又は対応するＤＮＡの非コード鎖とハイブリダイゼーションすることができる。特に好ましい具体例では、該ポリリボヌクレオチドは標識された形態で提供される。

本発明のまた別の部分は、互いに結合された、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーをもつポリペプチドと、二次抗原ポリペプチド又はその抗体結合機能的断片と、を含も融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドである。

このポリヌクレオチドは約４００から４０００塩基の長さで、より好ましくは約５００から１４００塩基の長さとし得る。しかし他のサイズのポリヌクレオチドも、ここに含まれる。

またここで提供されるものは、互いに結合した、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩｌ［Ｉ固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドと、二次抗原ポリペプチド又はその抗体結合機能的断片と、を含む融合タンパク質をコードするポリリボヌクレオチドである。また、この融合タンパク質をコードするＲＮＡのシーフェンスと相補的であるポリリボヌクレオチドも提供される。

融合タンパク質をコードするこのポリリボヌクレオチドは、約４００から４０００塩基、より好ましくは約５００から１４００塩基の長さである。その断片は、約９から１００、より好ましくは約１５から７０塩基の長さである。

また本発明の別の部分は、約１５から４０００塩基、より好ましくは約５０から１８００塩基の長さの、本発明の融合タンパク質又はその機能的断片をコードするポリヌクレオチドである。融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、二本ｌＤＮＡ又は一本ＭＤＮＡとして提供され、これは融合タンパク質のコード鎖と、非コードＤＮＡ鎖に対応するシーフェンスを包含する二次ポリヌクレオチド又はこれの断片とを包含するうここで提供される後者のポリヌクレオチドは、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに対して、相補的なりＮＡシークエンスを含むポリヌクレオチドである。この融合タンパク質をコードするＤＮＡ及びＲＮＡンークエンスは共に、標識形態で提供され得る。特に有用な標識は、ｔｔｐ及び当業界で既知の池のｆｆｆｌである。ＤＮＡ及びＲＮＡは、当業界で既知の方法により標識化される。

また、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子−の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコートするポリヌクレオチドシーフェンスの、試料における存在を検出する方法も、ここて提供され、この方法は、このポリヌクレオチ１−を含むと思われる試料を提供すること：試す１中に存在する二本鎖ＤＮＡを融解すること：／ｊ７なくとも１５塩基の相補的シークエンスを有する如何なるポリヌクレオチドもハイブリダイズさせるために有効な条件下で、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード鎖に相補的な標識ＤＮＡシークエンスを、標識形態において、ハイブリダイゼーションに有効な量で添加すること：及び＃ｋＤＮＡ−相補的ポリヌクレオチドハイブリッドの存在を検出すること、を含む。

二の方法に付される試料は、生物試料とすることもてき、また検査室で生成した試料でもよい。ポリヌクレオチドが局在する細胞を含んでいる試料の場合は、細胞を溶解する必要があり、場合によって、残余物質からＤＮＡを単離する必要がある。これは、当業界で既知の方法で実施される。

試￥１は、その中に存在する二本鎖ポリヌクレオチドシーフェンスを融解するために、更に希釈及び／又はｔＩＩＩ２され得る。融解ステップは、当業界で既知の方法で実施される。一般には、試料は、タンパク質を変性させ、ＲＮＡ５ｅ（リボヌクレアーゼ）活性を阻害するために、４Ｍのグアニジニウムイソチオシアネート中で細胞を溶解させることによって調製される。抽出物を塩化セシウム濃度勾配遠も・法に付し、ＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質はそれらの相対密度に従い分離さｔ１乞ＤＮＡ及びＲＮＡは、有機溶媒で抽出され、７０％エタノールで沈殿させて４ｔｌすることによって、更に精製される（サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、第二Ｎ　（＋９８９）　、：＋−ルドスブ審Ｊングハーバー研究所出版、ニューヨーク州）。融解は、試料の温度を、このＤＮＡのＴｍより杓２０°Ｃ上昇させることにより、又はｐＨ１２より高（することによって達成さｉする。

約４６ｋＤのＨＭ　Ｆ　Ｇ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子、の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード鎖に相補的な標識化ＤＮＡが、ハイブリッドゼ−７・ヨンに有効な員で、融解されたＤＮＡに添加される。ＤＮＡ−ＤＮＡセグメントのハイブリダイゼーションに適した条件は、当業界で既知である。厳しさの度合いは、ハイブリダイゼーションを所望する相補的シーフェンスの数により決定される。より厳しい条件が用いられる場合には、一般に、プローブとのより高い相補性をもつＤＮＡシークエンスで、ハイプリダイ懺−ションが生じるであろう。

従って、低い相補性をもつシーフェンスを検出するために緩やかな条件を所望するときは、条件をそれにつれて変更することができる。一般に、この条件は以下の通りである。

全般的な条件は変更可能であるが、一般的には以下の通りである。ナトリウムイオン濃度は約ＩＭ、ｐＨは約５−９、温度は約６５℃又はブローブシークエンスとその相補鎖とのデユーブレックスＤＮＡの融解温度より、２０℃低い温度である（ブリラテン（Ｂｒｅｔｔｅｎ）、　Ｒ，ら、（１９７４）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｚｙ、　２９．３６３　；サムブロックら、前掲書）。

ＤＮＡ−相補的ポリヌクレオチド標識化ハイブリッドは、当業界で既知の方法で検出できる。典型的には、二本鎖ＤＮＡを制限酵素で処理し、異なるサイズの鎖に分離するためゲル電気泳動にかける。ゲルは特別に調製したフィルターにプロットされ、ハイブリダイズされ、その後このフィルターは、これの画像を得るために十分な時間、感光プレートに露光される。このプレートは現像され、種々の断片が分析される。二重鎖標識化ハイブリッドの存在をより定性的に検出するためには、制限酵素未処理のＤＮＡはフィルター上にプロットされ得、ハイブリダイズして感光プレートにされ得る。このプレートを現像して放射性標識の存在を検出する。

またここで提供されるものは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードする、試料中におけるＲＮＡンークエンスの存在を検出する方法であり、これは、このＲＮＡを含むと思われる試料を提供すること：少なくとも約１５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるＲＮＡをもハイブリダイズさせるために有効な条件下で、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコードする標識化ポリヌクレオチドのコード鎖を、−木繊の形懸において、ハイブリダイゼーションに有効な量で、これに添加すること：及び該ポリヌクレオチド−ＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む。

本質的には、上記の方法は、先に述べたＤＮＡシークエンスの存在の検出方法と同様な手法で実施できるが、試料中に含まれるＲＮＡが実質的に分解されないことを、確信できるように注意する必要がある。一般的にＲＮＡを検出する場合には、下記の処置が更に必要である。

ＲＮＡ５ｅインヒビターの使用及び実験器具のジエチルピロカーボネートによる前処置は、如何なる夾雑ＲＮＡ５ｅをも不活性化する。一般に、ＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドはＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドよりも安定であるので、ハイブリダイゼーションはより厳格に実施される。例えば、ハイブリダイゼーションは５０％ホルムアミドにおいて、６５℃で実施され得る。ＤＮＡデユーブレックスのＴｍは、添加されたホルムアミド１％当たり、約０．７２℃低下する（サムブロックら、前掲書、カセイ（Ｃａｓｅｙ）、　Ｊ、及びダヴイッドソン（Ｄａｖｉｄｓｏｎ）、Ｎ、　（１９７７）　Ｎｕｃｌ。

Ａｃ１ｄｓ、　Ｒｅｓ、　、　４．１５３９−１５５２　参照）。

ＲＮＡが細胞内に含まれる場合は、細胞はリボ核酸を露出するために溶解されなければならない。これはディタージェント溶解のような当業界で既知の方法によって実施され、この場合はその後プロテアーゼで処理することもできる。

また本発明の別の部分は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ［Ｉ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードする、ＲＮＡシークエンスの試料における存在を検出する方法であり、この方法は、ＲＮＡを含むと思われる試料を提供すること：少なくとも約１５塩基の相補的シーフェンスを有するＲＮＡとハイブリダイズさせるために有効な条件下で、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドシーフェンスの少なくとも一部に対して相補的な標識化オリゴヌクレオチドを、ハイブリダイゼーションに有効な量で、これに添加すること：及び該ポリリボヌクレオチド−ＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む。

この方法は、一般的には、先に述べた２つの方法と同様な方法で実施されるが、ただしこの場合は試料及びプローブに存在するＲＮＡシークエンスの如何なる分解も生じないように、注意をする必要がある。ＲＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーションの条件は当業界で既知である。一般的に、用いられる条件は、温度が約６５°Ｃで、更にホルムアミドは約５０％である（上記の通り）。

ＲＮＡが細胞内に含まれる場合は、細胞を溶解してＲＮＡを露出させなければならない。

また本発明の一部は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［Ｉ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチドの、試料における存在を検出する方法であり、この方法は、このポリヌクレオチドを含むと思われる試料を提供すること：この試料に存在する二本鎖ポリヌクレオチドを融解すること：少なくとも！５塩基の相補的シーフェンスを有する如何なるポリヌクレオチドと抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ［［［凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを存するポリペプチドをコードする標識化ＲＮＡシークエンスを、ハイブリダイゼーションに有効な量で、これに添加すること；及び該ＲＮＡ−相補的ポリヌクレオチドハイブリッドの存在を検出すること、を含む。

ポリヌクレオチドが細胞内にある場合は、細胞を溶解してＤＮＡを露出させ得る。

本発明のまた別の一部は、約４６ｋ　ＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード鎖に対するアンチセンスシーフェンスを含む約２００から３０００ヌクレオチドのＤＮＡセグメントである。

より好ましくは、このＤＮＡセグメントは約１００がら１０００ヌクレオチドを持ち得る。

アンチセンスシーフェンスの概念は当業界で既知である。標的タンパク質をコートするメツセンジャーＲＮＡに相補的である合成オリゴヌクレオチドは調製され得る。このオリゴヌクレオチド又は化学的に修飾されたその同等物が細胞に添加される。オリゴヌクレオチドは標的ｍＲＮＡに結合し、従って標的タンパク質の翻訳を抑制する（マーカスーセクラ（Ｍａｒｋｕｓ−３ｅｋｕｒａ）、　Ｃ，Ｊ、　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒｕｓｉｎｇ　Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　ｔｏ　５ｔｕｄｙ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、　（１９８W）　ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　、　１７２．２８９−２９５　）。

また別にアンチセンスＲＮＡはセンスＲＮＡの翻訳の阻止に用いられる。アンチセンスＲＮＡは、対象遺伝子が翻訳方向に関して逆向きにある標的遺伝子のコピーを有する、ウィルス又はプラスミドＤＮＡベクターから生成される。この逆方向遺伝子を標的細胞ゲノムに導入するための担体として、ウィルスが用いられ得る（アイザント（Ｉｚａｎｔ）、Ｊ、Ｇ　及びワインドマツプ（Ｗｅｉｎｔｍｕｂ）、Ｈ，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９．３４５−３５２）。

アンチセンスＤＮＡセグメントの断片もまたここで提供され、それらは約１５から１００塩基、より好ましくは３０から５０塩基を含み得る。アンチセンスシーフェンスは、当業界で既知の方法、例えば以下のようにして得ることができる。

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生物学的有効期間を延長するため、細胞内・＼の透過性を増強するため及び標的への結合を強めるために、それらのリン酸部分を修飾して作成される。例えば、オリゴメチルホスホネート（ミラー（Ｍｉ　Ｉ　１ｅｒ）。

Ｐ、Ｓ、、ラブ４　（Ｒｅｄｄｙ）、　Ｍ、Ｐ、　、ムラカミ、Ａ、ブレイク（Ｂｌａｋｅ）、に、Ｒ，、リン（ｍｉｎ）、Ｓ、Ｂ、、アゲリス（Ａｇｒｉｓ）、　Ｃ，Ｈ，、（＋９８６）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５．５０９２−５０９７）又はオリゴホスホロチオネート（ラブランンエ（Ｌａｐｌａｎｃｈｅ）、Ｌ、　Ａ、、ジェームス（Ｊａｍｅｓ）、Ｔ、Ｌ、、バラエル（Ｐｏｗｅｉｌ）、　Ｃ，、ウィルソン（Ｗｉｌｓｏｎ）、　Ｗ、　Ｄ、、ウズナシスキ（Ｉｌｚｎａｎｓｋｉ）、　Ｂ、、ステック（Ｓｔｅｃ）、Ｗ、Ｊ、、サマーズ（Ｓｕｍｍｅｒｓ）、　Ｍ、Ｆ　。

及びシン（Ｚｏｎ）、　Ｇ、　（１９８６）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、１４．９０８１−９０９３）である。あるいは、標的遺伝子は、ウィルスベースの真核細胞系発現ベクターに逆方向で挿入され、哺乳類細胞に導入され得る（Ｊ、サムブロックら、前掲書参照）。

また本発明の部分は医薬組成物であって、約４６ｋＤのｌ（ＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性もつポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチドのコード鎖に対する、治療的に有効な量のアンチセンスＤＮＡシーフェンスと、医薬的に許容できる担体と、を含むものである。

この組成物は、種々の量で提供され得る。典型的に、アンチセンスＤＮＡは、約０．０１から９９．９９重量％、より好ましくは約０．１から２０重量％の量で提供され得、残りは担体及び／又は他の既知の添加物とし得る。医薬的に許容できる担体は、ＤＮＡを分解しない、如何なる担体でもよい。担体及び他の添加物の例は、緩衝食塩溶液、ヒト血清アルブミン及び同様物とし得る。しかし他のものもまた用いることができる。この医薬組成物は、当業界で知られているように、アンチセンスＤＮＡを担体と混合することによって調製され、凍結乾燥して滅菌容器に詰められ得る。組成物は冷蔵及び／又は冷凍して保存してもよい。

乳癌治療を必要としている被験者のこのような治療方法も、本発明により提供される。この方法は、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性もつポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチドのコード鎖に対するアンチセンスＤＮＡシーフェンスを治療的に有効な量で含む組成物を被験者に投与することを含む。

この方法は、医薬組成物において、約５から８００ｍｇのアンチセンスＤＮＡ、より好ましくは、２０から２００ｍｇのアンチセンスＤＮＡを投与することによって実施され得る。この組成物は、非経口的、静脈内又は胸腔内ルートによって投与され得る。しかし他の投与経路もまた用いることができる。

また本発明の部分は、免疫アッセイキットであり、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第Ｖｌ１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する、提供されたポリペプチドに対して特異性を有するモノクローナル抗体と、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む。

二の免疫アッセイキットは、ここで提供された種々の方法の実施に用いられ得る。モノクローナル抗体及び抗−抗体免疫グロブリンは、約０．００１ｍ　ｇから１００ｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇからＩｇの量で提供され得る。抗− 抗体免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン、プロティンＡ若しくはプロティンＧ又はそれの機能的断片でもよく、それは使用前に当業界で既知の方法で標識されていてもよい。

またこの中で提供されるものは、抗体検出キットで、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ｖ１１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドと、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む。

この抗−抗体免疫グロブリンは使用前に標識されていてもよい。

またこの中で提供されるものは、融合タンパク質キットで、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ｖ１１１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドと、二次抗原ポリペプチド又はその抗体結合機能的断片とが、互いに結合した融合タンパク質と、抗−二次ポリペプチドモノクローナル抗体と、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む。

融合タンパク質は、約０．００１ｍ　ｇから１００ｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇからＩｇの量て無菌形態で提供され得る。また、抗−二次ポリペプチドモノクローナル抗体は、約０．　ＯＯＩｍ　ｇから１００ｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇからＩｇの量で無菌形態で提供され得る。抗−抗体免疫グロブリンは、約０．００１ｍ　ｇから１００ｇ、より好ましくは、約０．ＯＩｍｇからＩｇの量で、別の容器にて提供され得る。キット全体は輸送及び保存のために包装され得る。

またここで提供されるものは、抗乳癌治療キットで、これは、約４６ｋＤのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第Ｖ１］１凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有する提供されたポリペプチドに対して特異性を有するモノクリ−ナル抗体λ、免疫毒素及び放射性核種からなる群より選ばれる抗癌治療薬ど、を別々の容器に含む。

このモノクローナル抗体は、約１から２０ｇ、より好ましくは、約２から１０ｇの量で無菌形態で提供される。抗体は凍結乾燥し、包装され得る。この治療剤は、如何なる既知の抗癌治療剤でもよい。例えば、特にこの薬削は、アブリンのＡＭ、リンノのＡ鎖、免疫毒素、化学療法剤並びにＩＩＩ　■及び１６Ｙ放射性核種であり得る。

本発明をこれまて一般的に説明してきたが、これらは、特定の実施例を参照して、よりよく理解されるであろう。本明細書に含まれるそのような実施例は説明のためのものであって、特に断らない限り、本発明又はその具体化を制限することを意図するものではない。

実施例ヒト乳房ｃＤＮＡライブラリーはクローンチック（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ　：Ｐａ１ｏ　Ａｔｒｏ、　カリフォルニア州）から入手した。妊＠８カ月の期間に、十分に分化した組織と乳汁分泌能力を示し、乳房切除中で切除された成人乳房組織から抽出されたＲＮＡから、このライブラリーは調製された。この組織からの、オリゴ−ｄＴで用意されたｃＤＮＡは、ラムダ／ｇｔｌｌのＥｃｏＲ１部位に挿入された。ブレーティング及びモノクローナル抗体によるライブラリーのスクリーニングは、基本的には、ヤング及びデーヴイスにより記載されたように（ヤング、　Ｒ，Ａ、及びデーヴイス、Ｒ，Ｗ、　（＋９８３）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ’１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、ＵＳＡ、、８０．１１９４−１１９８）行った。このライブラリーは、モノクローナル抗体であるＭｃ３、Ｍｃ８Ｍｃ１５及びＭｅ２Ｏ（ピーダーリン（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ）、Ｊ、　Ａ、ら、（１９９０）、　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　９．２２１−２３５）のカクテルてスクリーニングされ、これらの全てがヒト母乳脂肪球の４６ｋＤ成分に結細胞株は、後期対数期まで増殖し、全細胞ＲＮＡは、チャーウィン（Ｃｈｉ　ｒｇｗｉ　ｎ）らの方法（チャーウィン、Ｊ、Ｍ、、プルライビラ（ＰｒＺｙｂｙｌａ）、Ａ、Ｅ、　、？クトナルト、Ｒ，Ｊ　及びルッター（Ｒｕｔｔｅｒ）、　Ｗ、Ｊ、　（１９７９）　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１８゜５２９４−５２９９）により調製した。ＲＮＡは、グリオキシル化され、電気泳動され、トーマス（トーマス、Ｐ、ニトロセルロースに転移された、変性ＲＮＡと小ＤＮＡ断片のハイブリダイゼーション。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｏｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　ＵＳＡ、　、　７７、５２０１−５２０５）に従ってプロットされ、ＲＮＡはＵＶ照射を用いてナイロン（バイオダイン（Ｂｉｏ−ｄｙｎｅ））フィルターに結合した。

１本鎖ＲＮＡプローブは、製造業者（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ））に従って、ＳＦ３とＴ７ＲＮＡポリメラーゼを用いて試験官内で作成され、８００　Ｃｉ／ｍｍｏｌの（”Ｐ）ＵＴＰ　（アマジャム）の取込みにより標識化された。ＲＮＡプロットへのＲＮＡプローブのハイブリダイゼーションは、７０°Ｃ１０，Ｉ　Ｘ５ＳＣ１０，１％ＳＤＳにおいて行った。プロットは、増感紙を用いて、− ８０°ＣてＸ線フィルム（コダックＸ−ＡＲ）に露光した。

実施例３．ＤＮＡ配列決定大量バクテリオファージＤＮＡ調製は、ファージ溶解物から作成され、Ｅｃｏ　ＲＩ消化ｃＤＮＡ介在部は、−膜性（サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、Ｊ、　、フリップ（Ｆｒｉｔｓｃｈ）　、Ｄ、及びマニアティス、　Ｔ、　（１９９０）　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ／５ｅｃｏｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ、コールドスプリングハーバ−研究所出版、コールドスプリングハーバ−、ニューヨーク州）に従って、ｐＧＥＭ３　（プロメガ、マジソン、ウィスコンシン州）にサブクローニングした。

ｐＧＥＭａ中の介在部のジデオキシ配列決定は、製造業者（ＵＳＢ、クリーブランド、オハイオ州）のプロトコールに従い、Ｔ７又はＳＰ６プロモーターシークエンス・プライマー（プロメガ）を用いて、直接、プラスミドＤＮＡ上で、修飾Ｔ７ＤＮＡポリメラーゼ（シークエナーゼ）により行った。このシーフェンスは、介在部の両鎖の配列決定により確認された。

実施例４：　結果ラムダ／ｇｔ１１の乳汁分泌乳房ｃＤＮＡライブラリーからの約ｌＸｌ０＠プラークのスクリーニング後、１５の陽性プラークが選択された。最も長いｃＤＮＡであるＢＡ４６−１は、１２７１ｂｐの長さであった。第２のｃＤＮＡクローンは、１３８４ｂｐに及ぶ３′末端シークエンスデータを示し、ポリアデニル化部位を含んでいた。

一連の陽性ラムダ／ｇｔｏクローンは、Ｙ１０８９を温厚するために用いられ、誘導された細胞抽出物中に含まれた融合タンパク質の結果物は、スクリーニングカクテル中に含まれる各モノクローナル抗体との反応性をドツトプロットによって解析された。

Ｍｃ８、Ｍｃ１５及びＭｅ２Ｏは、全ての陽性ラムダ／ｇｔｌｌ温厚抽出物に結合したが、対照ラムダ／ｇｔｌｌ抽出物には結合しない（図示されていない）ことが認められた。しかし、Ｍｃ３はどの溶解物にも結合せず、このエピトープは、グリコジル化、二次構造を必要とするか又はこのライブラリーに存在しないＢＡ４６−１　ｃＤＮＡ介在部の各鎖を示す１本鎖ＲＮＡプローブは、Ｇｅｍ３にサブクローニングして、Ｔ７又はＳＰ６ボリメラーゼにより試験官内で転写することによって調製された。

いくつかの癌細胞株がＢΔ４６−１特異的ＲＮＡのために研究され、これには５つの乳房株及びリンパ細胞株が含まれた。本特許に添付している図に示されるように、２．２ｋｂの１本鎖ＲＮＡは、試験された殆どの癌細胞株において、容易に検出された。このＲＮＡは、またＲａ　ｊ　ｔ、５ＫＢＲ３及びＰＡＮＣＩにおいても検出されたが、図に示すにはより長く露光を必要とする程、より低しルベルで癌細胞株において検出された２、２ｋｂの一本鎖ＲＮＡの観察された発現レベルにおいて考慮すべき変動がみられた。肺（Ａ５４８Ｔ）　、卵巣（ＳＫＯＶ３）及び２つの乳房（Ｅｌｌ−Ｇ及びＨＳ５７８Ｔ）細胞株は、他の癌細胞株よりも、１０−５０倍多くこの転写物が蓄積した。乳房及び他の癌において、Ｈｅｒ　２／ｎｅｕ及びＥＧＦレセプターのような、特定の遺伝子の過剰発現が、それ以前に予後と相関していること（スラモン（Ｓｌａｍｏｎ）、　Ｄ、　Ｊ、　、ゴールドフィン、Ｗｌ、ジコーンズ、Ｊ、　Ａ、　、ホールト、Ｊ、Ａ、　、ウォン、Ｓ、　Ｇ、　、キース、Ｄ。

Ｅｌ、レーヴイン、　Ｗ、Ｊ、、スチュアート、Ｓ、Ｇ、、１−ドヴ（Ｕｄｏｖｅ）、　Ｊ　、、ユーリッヒ（Ｕ！１ｒｉｃｈｉ）　、　Ａ、及びプレス、　Ｍ、　Ｆ、　（１９８９）　５ｃｉｅｎｃｅ、２４４．７０７−７１２）　（ディッキンソ：／、Ｒ，Ｂ、　、ベイッ（Ｂａｔｅｓ）、Ｓ、Ｅ、　、ｖクマナウエイＱｌｃＭａｎａｗａｙ）　、Ｍ、Ｅ、及びリップマン（Ｌｉｐｐｍａｎ）　、　Ｍ、Ｅ、　（１９８６）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、。

４６、１７０７−１７１３）が注目されるべきである。

実施例６．　特異性研究ｃＤＮＡを選択するために使用された抗体が乳癌に特異性を有していても（ピータ−フン、Ｊ、Ａ、ら、（１９９０）　ｌ（ｙｂｒｉｄｏｍａ　９．２２１−２３５）　、約４６ｋＤのタンパク質をコートしている約２．２ｋｂのＲＮＡフラグメントの発現が、多くの異なる癌細胞株において起こる。認められた乳房特異性の欠失は、正常組織においてではなく、癌におけるこの遺伝子の膜制御＆０（ｄｅ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）に起因し得る。あるいは、正常上皮組織が約４６ｋＤのタンパク質を発現し得るが、例えば糖付加における変異によって、このタンパク質の乳房細胞型中で、さらされるエピトープをブロックするように加工されるかもしれない。

ＨＭＦ　Ｇの高分子量ムチン様タンパク質は、また、非乳癌において発現しているが、例えば膵臓における変性プロセッシングは、乳房においてよりも異なる抗原性部位にさらすようにする（ラン化ａｎ）　、　Ｍ、Ｓ、　、ホーリンワース（Ｈｏｌ　ｌ　ｉｎｇｗｏｒｔｈ）、　Ｍ、　Ａ、及びメツツガ−（Ｍｅｔｚｇａｒ）　、　Ｔ、Ｓ、　（１９９０）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、５０゜２９９７−３００１）。

実施例７；ＤＮＡシークエンスの研究ヌクレオチドとＢＡ４６−１及びＢＡ４６−２ｃＤＮＡの誘導されるアミノ酸混成シークエンスは、下記の表１に示されている。

表１・ＢＡ４６−１　ｃＤＮＡのＤＮＡシークエンス及び誘導されるアミノ酸シークエンスｎ一連結グリコリル化可能部位は下線を付しである。

部分的シーフェンスは、２１７アミノ酸の長さてあり、約２４ｋ　Ｄの理論的分子量に合成され、これは完全なタンパク質のＣ末端を表す。ここには、４ケ所のｎ一連結グリコシル化可能部位がある。このシーフェンスは、アスパラギン及びロイＦＳＴＮＳＣＡＮ　（ＰＣＧＥＮＥ）を用いたＥＭＢＬデータベースに対して、ヌクレオチドシーフェンスの対比は、ヒト血清第Ｖ及び第ＶＩｒ［因子とプロティンＣとに広域ホモロジーを示した。

しかし、ヌクレオチドレベルのホモロジーが介在シーフェンスにおいてであったので、誘導されるタンパク質シークエンスは、下記の表２に示すように、プロティンＣてはなく、第Ｖ及び第ＶＩｒ［因子にのみ同一性を共育した。

表２＝誘導されるＢＡ４６−１アミノ酸シークエンスとＣ末端ヒト血清第Ｖ及び第Ｖｌ１１因子との比較矢印はＣ１及び０２反復部の結合を示す。

因子Ｖに対して約４３９６、及び因子■１１１に対して約３８９６の同一性が、ＢΔ４６にあった。表２にお（ｌる第Ｖ及び第Ｖ１１１因子の領域は、約４７９６の同一性を共有する。

”ＪＱ９ユ　アミノ酸シークエンスの研究約４６ｋＤタンパク質の誘導されるアミノ酸シークエンスの解析は、グリコジル化タンパク質としての説明と一致する。しかし、このタンパク質の機能は知られていないつ、二の約４６ｋＤタンパク質が第Ｖ及び第Ｖｌｌｌ因子の両方にホモロジーを有するので、これらの血清凝固因子と共通の先祖タンパク質があるかもじれない。

ホモロジーは、因子Ｖｌｌ＋の軽鎖のＣＩ、Ｃ２領域（７９４１Ｍ１．スキヤンデラ（Ｓｃａｎｄｅｌｌａ）、　Ｄ　及びホイヤー（ｌｌｏｙｅｒ）、　Ｌ、　Ｍ、　（＋９８９）　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、８３．P９７８− １９８４）にある。

アライらは、因子Ｖｌｌｌで処理した血友病者からの、この軽鎖のこの領域に結合するヒトの抗体は、リン脂質と因子■１１１との相互作用を妨げることにより因子ｖ１１１を阻害することを示した。この領域がリン脂質の結合に密接な関係を持っているので、約４６ｋＤＩタンパク質における同様の役割を果たずらしい。

従って、このＣ末端タンパク質は、この４６ｋＤタンパク質に対する新しい゛アンカー”シーフェンスとして振る舞い得るか、又は成長している乳汁脂肪滴の表面上におけるリン脂質へのムチン／膜の結合に関連する可能性もあるだろう（ロング（Ｌｏｎｇ）、Ｃ，Ａ、及びパラトン（Ｐａｔｔｏｎ）　、Ｓ、　（＋９７８）　Ｊ、Ｄａｉｒｙ　Ｓｃｉ、、６１゜１３９２−１３９９）、多分、形ｖ！膜表面でのムチン複合体のアッセンブリに関連する。

本発明がここで十分に説明されたので、本明細書中に記載されたように、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、ここに多くの変換及び修正が行われ得ることは、一般的な当業者にとって明らかであろう。

ｊＳ− ｒＩＧＵ！伍　１補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成５年５月６日

Claims

【特許請求の範囲】

１．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の１つの軽鎖の少なくとも一部に対するホモロジーを有するポリペプチド。
２．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原又はその抗体結合機能的断片である、請求の範囲１に記載のポリペプチド。
３．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ抗原の生物活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の１つの軽鎖の少なくとも一部に対するホモロジーを有する、請求の範囲１に記載のポリペプチド。
４．表２に示したアミノ酸シークエンス又はその抗体結合機能的断片を有する、５から５０アミノ酸である、請求の範囲１に記載のポリペプチド。
５．抗体の結合に有効な量の請求の範囲１に記載のポリペプチドと、医薬的に許容できる担体と、を含む医薬組成物。
６．請求の範囲１に記載のポリペプチドと、それに結合した二次抗原ポリペプチド又はその抗体結合機能的断片と、を含む融合タンパク質。
７．該二次抗原ポリペプチドが、β−ガラクトシダーゼの抗体結合活性又はその機能的断片を有する、請求の範囲６に記載の融合タンパク質。
８．請求の範囲１に記載のポリペプチド又はその機能的断片に対して特異性を有する抗体。
９．モノクローナル抗体である、請求の範囲８に記載の抗体。
１０．その単一鎖を含む請求の範囲８に記載の抗体。
１１．そのＦａｂフラグメント又はその単一鎖を含む、請求の範囲８に記載の抗体。
１２．ポリペプチドの結合に有効な量の、請求の範囲８に記載の抗体と、医薬的に許容できる担体と、を含む医薬組成物。
１３．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片の、生物試料における存在を検出する方法であって、該ポリペプチドを含むと思われる生物試料を提供すること；抗体一ポリペプチド複合体を形成するために有効な条件下で、請求の範囲８に記載の抗体を、ポリペプチドとの結合に有効な量で、それに添加すること；及びそれらの間で形成された如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む、当該ペプチド検出方法。
１４．該試料が動物細胞、細胞抽出物又は体液を含む、請求の範囲１３に記載の方法。
１５．上皮細胞の生物試料における存在を判定する方法であって、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片を運ぶ上皮起源の細胞を含むと思われる生物試料を提供すること；抗体 −細胞ポリペプチド複合体形成に有効な条件下で、請求の範囲８の抗体をポリペプチドとの結合に有効な量で、それに添加すること；及びそれらの間で形成された如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む、当該上皮細胞判定方法。
１６．該生物試料が骨髄試料を含む、請求の範囲１４に記載の方法。
１７．上皮細胞の生物試料における存在を判定する方法であって、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片を運ぶ上皮起源の細胞を含むと思われる生物試料を提供すること；それからＲＮＡを露出させるために、該試料に含まれる如何なる細胞をも溶解すること；それに対して少なくとも約１５塩基の相補的シークエンスを有する如何なるＲＮＡをもハイブリダイズさせるために有効な条件下で、一本鎖の形態における請求の範囲２８に記載のポリヌクレオチドのコード鎖を、ハイブリダイゼーションに有効な量で、それに添加すること；及び該ポリヌクレオチドーＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該上皮細胞判定方法。
１８．上皮細胞の生物試料における存在を判定する方法であって、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその機能的断片を運ぶ上皮起源の細胞を含むと思われる生物試料を提供すること；それらからＲＮＡを露出させるために、該試料に含まれる如何なる細胞をも溶解すること；少なくとも約１５塩基の相補的シークエンスを有するＲＮＡをそれに対してハイブリダイズさせるために有効な条件下で、請求の範囲３１に記載のポリリボヌクレオチドシークエンスの少なくとも一部に相補的なオリゴリボヌクレオチドを、ハイブリダイゼーションに有効な量で、それに添加すること；及び該ポリリボヌクレオチドーＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該上皮細胞判定方法。
１９．被験者において、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している細胞を、生体内にて画像化する方法であって、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している細胞を有すると思われる被験者の体内領域に、それを有効に供給させる条件下で、抗体一細胞ポリペプチド複合体を形成させるために、ポリペプチドとの結合に有効な量で、請求の範囲８の抗体を被験者に投与すること；該ポリペプチドに対する結合部位よりも他の部位で該抗体と結合し得る、検出可能な標識を該被験者に投与すること；及び該被験者の体内に形成された如何なる複合体に付随する標識の存在をも検出すること、を含む、当該生体内細胞画像化方法。
２０．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又は該ポリペプチドを運ぶ細胞に対して、被検者に生体内にて予防接種する方法であって、該ポリペプチド、その結合機能的断片又は該ポリペプチド若しくはその機能的断片を運ぶ細胞に対して、被検者に予防接種するために有効な量及び条件で、請求の範囲４に記載のポリペプチドを、被験者に投与することを含む、当該生体内予防接種方法。
２１．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原に対する親和性を有する抗体の生物試料における存在を検出する方法であって、該抗体を含むと思われる試料を提供すること；抗体−ポリペプチド複合体を形成するために有効な条件下で、請求の範囲１に記載のポリペプチドを抗体結合に有効な量で、それに添加すること；及びそれの間で形成された如何なる複合体の存在をも判定すること、を含む、当該抗体検出方法。
２２．試料において約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原に対する、親和性を有する抗体の存在を検出する方法であって、該抗体を含むと思われる試料を提供すること：抗体−融合タンパク質複合体を形成するために有効な条件下で、請求の範囲６に記載の融合タンパク質を、抗体結合に有効な量で、それに添加すること；抗体−融合タンパク質−抗体複合体を形成するために有効な条件下で、抗二次ポリペプチド抗体を、二次ポリペプチドとの結合に有効な量で、それに添加すること；及び形成された如何なる抗体−融合タンパク質−抗体複合体の存在をも判定すること、を含む、当該抗体検出方法。
２３．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している、標的細胞へ治療剤を生体内にて供給する方法であって、治療剤を、該ポリペプチドの結合部位よりも他の部位において、請求の範囲８記載の抗体に結合させること；該標的細胞を運ぶる思われる被検者に、該細胞の周囲へ該薬剤を供給するために有効な条件下で、治療的に有効な量の抗体結合化治療剤を投与すること；及び該治療剤を運ぶ抗体に、細胞に該治療剤の効果を及ぼさせるために、該細胞のポリペプチドと結合させること、を含む、当該治療剤生体内供給方法。
２４．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドを発現している、標的細胞に治療剤を生体外にて供給させる方法であって、標的細胞を含むと思われる生物試料を被検者から得ること；治療薬剤を、該ポリペプチドの結合部位よりも他の部位において、請求の範囲８に記載の抗体に結合させること；抗体−細胞ポリペプチド複合体の形成の促進に有効な条件下で、該抗体結合化治療剤を該サンプルに添加すること；該細胞に該薬剤の効果を及ぼさせること；及び該試料を該被検者に戻すこと、を含む、当該治療剤生体外供給方法。
２５．請求の範囲１に記載のポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチド
２６．請求の範囲２５に記載のポリヌクレオチドのコード鎖に対して相補的であるＤＮＡシークエンス。
２７．表２に示したＤＮＡシークエンス又はその断片を有する請求の範囲２５に記載のポリヌクレオチド。
２８．標識された形態にある請求の範囲２５に記載のポリヌクレオチド。
２９．標識された形態にある請求の範囲２６に記載のＤＮＡシークエンス。
３０．請求の範囲１に記載のポリペプチド又はその断片をコードするポリリボヌクレオチド。
３１．標識された形態にある請求の範囲３０に記載のポリリボヌクレオチド。
３２．請求の範囲３０に記載のポリリボヌクレオチドのシークエンスに対して相補的なシークエンスを有するポリリボヌクレオチド。
３３．標識された形態にある請求の範囲３２に記載のポリリボヌクレオチド。
３４．請求の範囲６に記載の融合タンパク質をコードするポリデオキシリボヌクレオチド。
３５．請求の範囲６に記載の融合タンパク質をコードするポリリボヌクレオチド。
３６．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対してホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドシークエンスの、試料における存在を検出する方法であって、該ポリヌクレオチドを含むと思われる試料を提供すること；該試料中に存在する二本鎖ポリヌクレオチドを融解すること；それに対して少なくとも１５塩基の相補的シークエンスを有する如何なるポリヌクレオチドをもハイプリダイズさせるために有効な条件下で、請求の範囲２９に記載のＤＮＡシークエンスを、ハイブリダイゼーシヨンに有効な量でそれに添加すること；及び該ＤＮＡ−相補的ポリヌクレオチドハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該ポリヌクレオチドシークエンス検出方法。
３７．該ポリヌクレオチドが細胞内に含まれる場合に、細胞からポリヌクレオチドを露出させるために、細胞を溶解することを更に含む、請求の範囲３６に記載の方法。
３８．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードする、試料におけるＲＮＡシークエンスの存在を検出する方法であって、該ＲＮＡを含むと思われるサンプルを提供すること；それ対して少なくとも約１５塩基の相補的シークエンスを有する如何なるＲＮＡをもハイブリダイズさせるために有効な条件下で、一本鎖形態における、請求の範囲２８に記載のポリヌクレオチドシークエンスのコード鎖を、ハイブリダイゼーションに有効な量でそれに添加すること；及び該ポリヌクレオチドーＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該ＲＮＡシークエンス検出方法。
３９．該ＲＮＡが細胞内に含まれる場合に、細胞からＲＮＡを露出させるために、細胞を溶解することを更に含む、請求の範囲３８に記載の方法。
４０．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードするＲＮＡシークエンスの、試料における存在を検出する方法であって、該ＲＮＡを含むと思われる試料を提供すること；少なくとも約１５塩基の相補的シークエンスを有するＲＮＡをそれに対してハイブリダイズさせるために有効な条件下で、請求の範囲３１に記載のポリリボヌクレオチドシークエンスの少なくとも一部に対して相補的なオリゴリボヌクレオチドを、ハイブリダイゼーションに有効な量でそれに添加すること；及び該ポリリボヌクレオチドーＲＮＡハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該ＲＮＡシークエンス検出方法。
４１．該ＲＮＡが細胞内に含まれる場合に、細胞からＲＮＡを露出させるために、細胞を溶解することを更に含む、請求の範囲４０に記載の方法。
４２．約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合活性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチドシークエンスの、試料における存在を検出する方法であって、該ポリヌクレオチドを含むと思われる試料を提供すること；該試料に存在する二本鎖ポリヌクレオチドを融解すること：少なくとも１５塩基の相補的シークエンスを有する如何なるポリヌクレオチドをもそれに対してハイブリダイズさせるために有効な条件下で、請求の範囲３１に記載のＲＮＡシークエンスを、ハイブリダイゼーシヨンに有効な量でそれに添加すること；及び該ＲＮＡ−相補的ポリヌクレオチドハイブリッドの存在を検出すること、を含む、当該ポリヌクレオチドシークエンス検出方法。
４３．該ポリヌクレオチドが細胞内に含まれる場合に、細胞からポリヌクレオチドを露出させるために、細胞を溶解することを更に含む、請求の範囲４２に記載の方法。
４４．約１５から２０００ヌクレオチドである請求の範囲２５に記載のポリヌクレオチドのコード鎖に対するアンチセンスシークエンスを含む、ＤＮＡセグメント。
４５．治療的に有効な量の請求の範囲４４に記載のアンチセンスＤＮＡシークエンスと、医薬的に許容できる担体と、を含む医薬組成物。
４６．請求の範囲４４に記載のアンチセンスＤＮＡセグメントを治療的に有効な量で含む組成物を、被検者に投与することを含む、乳癌治療を必要とする被検者の乳癌の治療方法。
４７．該組成物が、非経口的、静脈内及び胸腔内経路から成る群より選ばれる経路によって投与される、請求の範囲４６に記載の方法。
４８．請求の範囲９に記載のモノクローナル抗体と、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む免疫アッセイキット。
４９．請求の範囲１に記載のポリペプチドと、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む抗体検出キット。
５０．請求の範囲６に記載の融合タンパク質と、約４６キロダルトンのＨＭＦＧ分化抗原の抗体結合特異性及び／又は第Ｖ及び第ＶＩＩＩ凝固因子の少なくとも１つの軽鎖に対するホモロジーを有するポリペプチドに対して特異性を有するモノクローナル抗体と、抗−第二ポリペプチドモノクローナル抗体と、抗−抗体免疫グロブリンと、を別々の容器に含む融合タンパク質キット。
５１．請求の範囲９に記載のモノクローナル抗体と、免疫毒素及び放射性核種から成る群から選ばれる抗癌治療剤と、を別々の容器に含む抗乳癌治療キット。